KR20160091611A - Method for preparing fermented extract of Oyster Shell by using of microorganism - Google Patents

Method for preparing fermented extract of Oyster Shell by using of microorganism Download PDF

Info

Publication number
KR20160091611A
KR20160091611A KR1020150011923A KR20150011923A KR20160091611A KR 20160091611 A KR20160091611 A KR 20160091611A KR 1020150011923 A KR1020150011923 A KR 1020150011923A KR 20150011923 A KR20150011923 A KR 20150011923A KR 20160091611 A KR20160091611 A KR 20160091611A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
fermentation
product
microorganism
produce
fermented product
Prior art date
Application number
KR1020150011923A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
최재홍
Original Assignee
최재홍
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 최재홍 filed Critical 최재홍
Priority to KR1020150011923A priority Critical patent/KR20160091611A/en
Publication of KR20160091611A publication Critical patent/KR20160091611A/en

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23BPRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B4/00General methods for preserving meat, sausages, fish or fish products
    • A23B4/14Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12
    • A23B4/18Preserving with chemicals not covered by groups A23B4/02 or A23B4/12 in the form of liquids or solids
    • A23B4/20Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23B4/22Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
    • A23L1/33
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L17/00Food-from-the-sea products; Fish products; Fish meal; Fish-egg substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L17/40Shell-fish

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

The present invention relates to a method for producing a fermented product of oystershells using microbes. To this end, the method comprises the following steps: a first step of washing oystershells and drying the same thereafter; a second step of processing the dried oystershells into powder by pulverization and then sterilizing the same; a third step of producing fermentation microbes using a bioreactor; a fourth step of mixing the powder in the second step with the fermentation mibrobes and adding a nitrogen source so as to produce a primary fermented product; a fifth step of sterilizing and drying the primary fermented product; a sixth step of mixing the primary fermented product in the fifth step with the fermentation microbe and adding the nitrogen source so as to produce a secondary fermented product; a seventh steps of sterilizing and drying the secondary fermented product in the sixth step; an eighth step of mixing the secondary fermented product in the seventh step with fermentation microbe and adding the nitrogen source so as to produce a tertiary fermented product; ninth step of sterilizing and drying the fermentation microbe and the tertiary fermented product in the eighth step; and a tenth step of producing a fermented product by pulverizing the fermented product in the ninth step.

Description

미생물을 이용한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법{Method for preparing fermented extract of Oyster Shell by using of microorganism}FIELD OF THE INVENTION [0001] The present invention relates to a fermented oyster shell fermented by using microorganisms,

본 발명은 미생물을 이용하여 다중 발효 생물공정을 통해 굴패각 발효산물을 제조하는 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 굴패각을 발효미생물을 이용하여 1ㆍ2ㆍ3차에 걸친 다중발효를 통한 생물공정을 거쳐 발효산물을 취득하여 제형의 어려운 부분을 개선함에 따라, 가축 사료 첨가제를 비롯하여 농업용 발효 유기질비료 원료 등 다양한 제형 변화가 가능하고, 저비용으로 고부가성이 부여된 발효산물을 대량으로 양산 가능한 미생물을 이용한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing oyster shell fermentation products through a multiple fermentation bioprocess using microorganisms, and more particularly, to a method for producing oyster shell fermentation products using a fermentation microorganism, Fermentation products obtained through fermentation can be modified to various forms such as feed additives for livestock, raw materials for fermentation organic fertilizer for agriculture including fermented feed additives, and microorganisms capable of mass production of high-cost fermented products at low cost The present invention relates to a method for producing an oyster shell fermentation product.

통상, 굴패각은 남해안 일대 굴양식 산업으로부터 매년 약 50만 톤이 생산되고 있으나, 그 용도가 한정되어 굴패각은 해안에 대량 야적 또는 매립하는 방법으로 처리되고 있는 실정이다. 야적의 경우 연안 오염, 자연 경관의 훼손문제 등 여러 가지 환경문제를 유발시키고, 매립의 경우 매립장 부지의 확보 내지는 침출수의 의한 토지와 해양 오염으로 이러지는 2차 환경오염이 문제화되고 있다. 따라서 정부에서 굴패각 폐기물을 재활용하는 방향으로 정책을 유도하고 있는 실정이며 이에 많은 연구자들이 패화석의 재활용에 대한 연구를 광범위하게 하고 있다.Usually, about 500,000 tons of oyster shells are produced annually from the oyster farming industry in the south coast, but their use is limited, and the oyster shells are being processed in a way that they are buried on the shore or buried in the sea. In the case of landfill, it causes various environmental problems such as coastal pollution and damage to natural scenery. Secondary environmental pollution caused by landfill and marine pollution by securing landfill site or leachate is becoming a problem in landfilling. Therefore, the government has been promoting policies to recycle oyster shell waste, and many researchers have been conducting extensive research on the recycling of fossil fuels.

한편, 굴패각에 함유된 칼슘은 가축에게 필요한 무기염류중 하나이며 99%는 가축의 뼈ㆍ이 등에 함유되어 있으며, 1%는 가축의 생리작용에 관여한다. 칼슘이 부족하게 되면 뼈의 성장 속도가 늦어지고 약해진다. 이러한 소량의 배합으로 필수영양소를 완전공급하며 특정한 기능을 함으로써 생산성을 향상시키는 칼슘성분의 패각 재활용 사료가 있다.On the other hand, calcium contained in the oyster shell is one of the inorganic salts necessary for livestock, 99% is contained in the bones of the livestock, and 1% is involved in the physiology of the livestock. Lack of calcium slows and weakens the bone growth rate. There is a calcium-based shell recycle feed that improves productivity by providing a full complement of essential nutrients with a small amount of this formulation.

이와 관련된 선행기술로, 한국 공개특허공보 제10-2010-0037296호의 "패각류를 이용한 고순도칼슘분말의 제조방법 및 제조장치", 한국 등록특허공보 제10-0993223호의 "패각 재활용 사료의 제조방법", 한국 등록특허공보 제10-1328671호의 "맥섬석과 패각을 포함하며, 칼슘이 보강된 가축사료 첨가제의 제조방법 및 그로부터 수득되는 칼슘이 보강된 가축사료 첨가제 및 이를 포함하는 가축사료" 등이 알려져 있다. As a prior art related thereto, Korean Patent Laid-Open No. 10-2010-0037296 entitled " Method and Apparatus for Producing High-purity Calcium Powder Using Shellfish ", Korean Patent Registration No. 10-0993223 " , Korean Patent Registration No. 10-1328671 entitled " Method for producing a calcium-reinforced livestock feed additive including crustacean and shell, and calcium-supplemented livestock feed additive obtained therefrom, and livestock feed containing the same " .

그러나 상기한 선행기술문헌은 굴패각에 발효미생물을 이용하여 발효과정을 거쳐 굴패각 발효산물 및 미생물 2차대사산물 조성물에 대한 특허등록 및 공개중인 문서는 존재하지 않을 뿐만 아니라, 특히 패각을 비료로 재활용하는 경우 패각에 잔존하는 염분으로 인하여 가축이 섭취하면 소화장애를 유발하므로 흡수력이 저하되면서 성장발육이 부진하게 되는 결과를 초래하여 가축의 품질이 저하되므로 이를 축사농가에서 활용하는데 있어 그 한계성을 보이고 있다.However, the above-mentioned prior art document does not disclose that there is no patent registration and publication document on the oyster shell fermentation product and the microbial secondary metabolite composition after the fermentation process using the fermentation microorganism on the oyster shell, and in particular, In case of ingestion of livestock due to salt remaining in the shell, digestive disturbance is caused, so absorption power is lowered, resulting in poor growth and development, and the quality of livestock is lowered.

한국 공개특허공보 제10-2010-0037296호 "패각류를 이용한 고순도칼슘분말의 제조방법 및 제조장치"(공개일자: 2010. 04. 09)Korean Patent Laid-Open No. 10-2010-0037296 "Method and apparatus for manufacturing high-purity calcium powder using shellfish" (Published date: Apr. 09, 2010) 한국 등록특허공보 제10-0993223호 "패각 재활용 사료의 제조방법"(등록일자: 2010. 11. 03)Korean Registered Patent No. 10-0993223 entitled " Method for manufacturing shell recycled feed "(registered on Nov. 03, 2010) 한국 등록특허공보 제10-1328671호 "맥섬석과 패각을 포함하며, 칼슘이 보강된 가축사료 첨가제의 제조방법 및 그로부터 수득되는 칼슘이 보강된 가축사료 첨가제 및 이를 포함하는 가축사료"(등록일자: 2013. 11. 06)Korean Patent Registration No. 10-1328671 entitled " Method for producing calcium-fortified livestock feed additive including crustacean and shell, and calcium-supplemented livestock feed additive obtained therefrom and livestock feed containing the same " 11. 06)

상기와 같은 종래의 문제점들을 근본적으로 개선하기 위한 본 발명의 목적은, 굴패각을 발효미생물을 이용하여 1ㆍ2ㆍ3차에 걸친 다중발효를 통한 생물공정을 거쳐 발효산물을 취득하고, 제형의 어려운 부분을 개선함에 따라, 가축 사료 첨가제를 비롯하여 농업용 유기질비료 원료 등 다양한 원료로 제형 변화가 가능하고 저비용으로 부가성이 부여된 물질을 대량으로 양산 가능한 미생물을 이용한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법을 제공하려는데 있다.The object of the present invention to fundamentally improve the above problems is to obtain a fermented product through a bioprocess through multiple fermentation over 1, 2, and 3 stages using an oyster shell by using a fermenting microorganism, The present invention provides a method for producing an oyster shell fermentation product using a microorganism capable of mass production of a substance capable of changing formulations from a variety of raw materials including agricultural animal organic fertilizer raw materials including livestock feed additives, have.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 굴패각을 원료로 하여 세척한 다음 건조하는 제1단계; 상기 제1단계의 건조물을 파쇄하여 분말로 생성하고, 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 잡균을 멸균하는 제2단계; 상기 제2단계에서 생물반응기를 이용하여 발효미생물을 배양하여 제조하는 제3단계; 상기 제2단계의 분말을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 1차 생물반응을 거쳐 1차 발효물을 생성하는 제4단계; 상기 제4단계의 1차 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균 건조하는 제5단계; 상기 제5단계의 1차 발효물을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 2차 생물반응을 거쳐 2차 발효물을 생성하는 제6단계; 상기 제6단계의 2차 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균 건조하는 제7단계; 상기 제7단계의 2차 발효물을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 3차 생물반응을 거쳐 3차 발효물을 생성하는 제8단계; 상기 제8단계의 3차 발효물을 건조기를 이용하여 수분율 18%로 건조하는 제9단계; 및 상기 제9단계의 발효물을 분쇄기를 이용하여 60~80메쉬의 분말로 분쇄하여 발효산물을 생성하는 제10단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.In order to accomplish the above object, the present invention provides a method for treating oysters, comprising: a first step of washing and drying oyster shells as a raw material; A second step of crushing the dried material of the first step to produce powder, and sterilizing the bacterium using a rapid sterilization apparatus (Autoclave); A third step of culturing the fermentation microorganism using the bioreactor in the second step; A fourth step of mixing the powder of the second step with a fermenting microorganism using an incubator, adding a nitrogen source necessary for fermentation to produce a first fermentation product through a first biological reaction; A fifth step of sterilizing and drying the fermenting microorganism using a rapid sterilization apparatus (Autoclave) in the fourth step of fermentation; A sixth step of mixing the primary fermentation product with the fermentation microorganism using an incubator and adding a nitrogen source necessary for fermentation to produce a secondary fermentation product through a secondary biological reaction; A seventh step of sterilizing and drying the fermentation microorganism using a rapid sterilization apparatus (Autoclave) in the sixth fermentation step; An eighth step of mixing the secondary fermentation product of step 7 with a fermenting microorganism using an incubator, adding a nitrogen source necessary for fermentation to produce a tertiary fermentation product through a tertiary bioreaction; A ninth step of drying the third fermentation product of step 8 at a moisture content of 18% using a drier; And a 10th step of pulverizing the fermented product of step 9 with a powder of 60 to 80 mesh using a pulverizer to produce a fermented product.

이때, 본 발명에 따르면 상기 제2단계는 굴패각 건조물을 파쇄기로 0.5~1cm의 분말로 생성하고, 급속멸균장치를 이용하여 100~130℃의 온도로 15~25분간 잡균을 멸균하는 것을 특징으로 한다.According to the present invention, in the second step, the oyster shell dried product is formed into a powder having a size of 0.5 to 1 cm with a crusher, and sterilized by using a rapid sterilization apparatus at a temperature of 100 to 130 ° C for 15 to 25 minutes .

또한, 본 발명에 따르면 상기 제3단계는 발효미생물인 Saccharomyces cerevisias, Bacillus natto, Aspergillus oryzea, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus , Trametes versicolor를 배양액 ml당 개체수가 10+1∼10+7의 개체수가 되도록 배양하여 단일 또는 혼합하여 제조하는 것을 특징으로 한다.In addition, according to the present invention, the third step is a step wherein the fermenting microorganisms Saccharomyces cerevisias, Bacillus natto, Aspergillus oryzea, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus , Trametes versicolor is cultivated so that the number of populations per ml of culture is 10 + 1 to 10 + 7 , singly or mixed.

또한, 본 발명에 따르면 상기 제4단계, 제6단계, 8단계는 발효미생물을 혼합하고, 질소원인 미강 30~70중량%를 혼합하여 인큐베이터의 온도 25~40℃와, 습도 50~80%를 유지하는 조건 하에서 2~8일간 발효하여 각각의 발효물을 생성하는 것을 특징으로 한다.According to the present invention, the fermentation microorganisms are mixed in the fourth, sixth, and eighth steps, and 30 to 70% by weight of the nitrogen source is mixed with the incubator at a temperature of 25 to 40 DEG C and a humidity of 50 to 80% And fermenting the fermented product for 2 to 8 days under the condition of keeping the fermented product.

또한, 본 발명에 따르면 상기 제5단계, 제7단계는 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 120℃~130℃의 온도로 15~30분간 생물반응시 투입된 발효미생물을 멸균하는 것을 특징으로 한다.According to the present invention, in the fifth and seventh steps, the fermented material is sterilized using a rapid autoclave at a temperature of 120 ° C. to 130 ° C. for 15 to 30 minutes during the biological reaction, .

한편, 이에 앞서 본 명세서 및 특허청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.It should be understood, however, that the terminology or words of the present specification and claims should not be construed in an ordinary sense or in a dictionary, and that the inventors shall not be limited to the concept of a term It should be construed in accordance with the meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention based on the principle that it can be properly defined. Therefore, the embodiments described in the present specification and the configurations shown in the drawings are merely the most preferred embodiments of the present invention, and not all of the technical ideas of the present invention are described. Therefore, It is to be understood that equivalents and modifications are possible.

이상의 구성 및 작용에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의한 제조방법을 통해 얻어진 굴패각 발효산물은 굴패각을 발효미생물을 이용하여 1ㆍ2ㆍ3차에 걸친 다중발효를 통한 생물공정을 거쳐 발효산물을 취득하고, 제형의 어려운 부분을 개선함에 따라, 가축 사료 첨가제를 비롯하여 농업용 유기질비료 원료 등 다양한 원료로 제형 변화가 가능하고 저비용으로 부가성이 부여된 물질을 대량으로 양산 가능한 효과를 제공한다.As described in the above constitution and operation, the oyster shell fermentation product obtained through the manufacturing method according to the present invention can obtain the fermentation product through the bioprocessing through the multiple fermentation over 1, 2, and 3 stages using the oyster shell by using the fermenting microorganism , It is possible to mass-produce mass-produced substances which can be formulated into various raw materials such as feed additives for livestock, raw materials for organic fertilizer for agriculture, and additives at low cost.

도 1은 본 발명에 따른 미생물 발효를 통한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법을 순차적으로 나타내는 블록도.FIG. 1 is a block diagram sequentially showing a method for producing an oyster shell fermentation product by microbial fermentation according to the present invention. FIG.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 상세하게 설명한다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

본 발명은 굴패각을 원료로 이용하여 굴패각 발효산물을 제조하는 방법에 관련되며, 이를 간략하게 설명하면 세척, 건조, 파쇄, 멸균, 발효미생물 배양, 1차 발효, 멸균, 2차 발효, 멸균, 3차 발효, 건조, 분쇄단계를 거쳐 발효산물을 제조한다.The present invention relates to a method for producing an oyster shell fermentation product using an oyster shell as a raw material and briefly describes washing, drying, crushing, sterilization, fermenting microorganism culture, primary fermentation, sterilization, secondary fermentation, sterilization, The fermentation product is prepared through the fermentation, drying and pulverization steps.

본 발명의 제1단계는 굴패각을 원료로 하여 세척한 다음 건조한다. 제1단계는 원료를 세척 및 건조하는 단계로, 굴패각을 원료로 하여 세척 및 건조한다. 이는 굴패각을 물에 깨끗이 세척하고, 세척시 상온에서 잔존하는 수분을 건조하며, 품질 안정과 생산성 향상을 위한 자동화 장치를 도입한다. 여기서, 이러한 제1단계에서 건조과정은 세척된 굴패각의 겉의 물기가 마를 수 있도록 제공한다.In the first step of the present invention, the oyster shell is washed with a raw material and dried. The first step is a step of washing and drying the raw material, washing and drying the oyster shell as a raw material. It cleans the oyster shells in water, dries the remaining water at room temperature during washing, and introduces an automatic device to improve quality stability and productivity. Here, in this first step, the drying process provides the surface moisture of the washed oyster shell to dry.

본 발명의 제2단계는 상기 제1단계의 건조물을 파쇄하여 분말로 생성하고, 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 잡균을 멸균한다. 제2단계는 세척 및 건조단계를 거친 원료(굴패각)를 파쇄 및 멸균하는 단계로, 특히 원료를 파쇄하여 분말로 생성함에 있어서 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다.In the second step of the present invention, the dried material of the first step is crushed to produce powder, and the bacteria are sterilized by using a rapid autoclave. The second step is a step of crushing and sterilizing the raw material (oyster shell) which has been subjected to the washing and drying steps. In particular, it is preferable to introduce a dedicated automation facility to improve the productivity in crushing the raw material to produce powder.

이때, 본 발명에 의한 상기 제2단계는 굴패각 건조물을 파쇄기로 0.5~1cm의 분말로 생성하고, 급속멸균장치를 이용하여 100~130℃의 온도로 15~25분간 잡균을 멸균한다. 이는 건조된 원료, 즉 굴패각을 파쇄기를 이용하여 0.5~1cm의 분말로 생성한다. 이어서, 분말에 함유되어 있는 미생물들의 멸균을 위해 원활한 생물공정을 위해 고압멸균장치인 오토크레버(Autoclave)를 이용하여 100~130℃의 온도로 15~25분 동안 멸균하여 잡균을 제거한다.At this time, in the second step according to the present invention, the oyster shell dried material is produced as a powder of 0.5-1 cm with a crusher, and sterilized by using a rapid sterilization apparatus at a temperature of 100-130 ° C for 15-25 minutes. This produces dried material, that is, oyster shells, as a powder of 0.5 to 1 cm using a crusher. Next, for sterilization of the microorganisms contained in the powder, sterilization is carried out at a temperature of 100 to 130 ° C for 15 to 25 minutes using an autoclave, which is a high-pressure sterilization apparatus, to remove the germs.

본 발명의 제3단계는 생물반응기를 이용하여 발효미생물을 배양하여 제조한다. 제3단계는 생물반응에 필요한 발효미생물을 제조하는 단계로, 특히 발효미생물을 배양하기 위해서는 품질 안정과 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다.The third step of the present invention is produced by culturing a fermenting microorganism using a bioreactor. The third step is the step of producing the fermenting microorganisms necessary for the biological reaction. In order to cultivate the fermenting microorganisms, it is preferable to introduce the dedicated automatic facilities to improve the quality stability and productivity.

이때, 본 발명에 의한 상기 제3단계는 발효미생물인 Saccharomyces cerevisias, Bacillus natto, Aspergillus oryzea, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus , Trametes versicolor를 배양액 ml당 개체수가 10+1∼10+7의 개체수가 되도록 배양하여 단일 또는 혼합하여 제조한다. 이는, 급속 멸균된 굴패각의 분말을 발효하기 위해 발효미생물 중 유용성이 입증된 토양미생물, 버섯균주, 유산균, 진균류를 생물반응기(bioreactor)상에 ml당 개체수가 10+1∼10+7의 개체수가 되도록 대량으로 배양한 다음, 단일 또는 혼합하여 발효미생물을 제조한다.At this time, the third step according to the present invention is characterized in that the fermenting microorganisms Saccharomyces cerevisiae, Bacillus natto, Aspergillus oryzea, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus , Trametes versicolor is cultured to a population of 10 +1 to 10 +7 per ml of culture, and these are cultured singly or mixed. In order to ferment the rapidly sterilized oyster shell powder, soil microorganisms, mushroom strains, lactic acid bacteria, and fungi, which have proven useful among the fermenting microorganisms, are collected on a bioreactor in a population of 10 +1 to 10 +7 per ml on a bioreactor Cultivated in large quantities as much as possible, and then fermented microorganisms are produced singly or in combination.

한편, 본 발명에 사용하고자 하는 발효미생물 중 효모균인 Saccharomyces cerevisias(사카로마이세스 세레비시애), 토양미생물인 Bacillus natto(바실러스 나토)와 Aspergillus oryzea(누룩곰팡이), 유산균인 Lactobacillus acidophilus(락토바실러스 아시도필루스)와 Lactobacillus bulgaricus(락토바실러스 불가리쿠스)는 특히 2차 대사산물에 있어서 화학구조의 다양성과 종의 풍부함으로 인하여 산업적으로 가장 중요한 미생물로 인식되어 있다. 물질대사산물은 1차 대사산물, 2차대사산물로 나뉘며, 1차대사산물이란 동, 식물, 미생물에 보편적으로 들어 있는 가공 아미노산, 당질, 지질, 핵산 등 생체유지에 기본적인 역할을 하는 물질을 말하며, 2차대사산물은 주로 식물, 미생물에서 나타나는 알칼로이드, 테르펜, 플라보노이드, 항생물질 등의 다양한 화합물로 이들은 약용, 향료, 향장원료, 기능성 식품의 원료 등에 유용한 물질로 부각되고 있다. 앞으로도 토양미생물은 새로운 균주의 분리, 유전자 기능 등을 통하여 생물소재 산업의 중요한 위치를 차지하고 있다.Among the fermenting microorganisms to be used in the present invention, Saccharomyces cerevisias ( Saccharomyces cerevisiae ), Bacillus natto ( Bacillus natto ), Aspergillus oryzea (koji mold) and Lactobacillus acidophilus ( Lactobacillus acidophilus ) And Lactobacillus bulgaricus (Lactobacillus bulgaricus ) are recognized as the most important microbes in industry, especially due to the variety of chemical structures and abundance of species in secondary metabolites. Metabolites are classified into primary metabolites and secondary metabolites. Primary metabolites are substances that play a fundamental role in living organisms such as processed amino acids, saccharides, lipids, and nucleic acids that are commonly found in plants, plants, and microorganisms , Secondary metabolites are various compounds such as alkaloids, terpenes, flavonoids and antibiotics, which are mainly found in plants and microorganisms, and they are becoming useful as medicines, fragrances, raw materials for flavor and functional foods and the like. In the future, soil microorganisms occupy an important position in the biomaterial industry through separation of new strains and gene functions.

그리고 발효미생물로 사용되는 버섯균주가 생성하는 2차대사산물에는 다른 균류에는 볼 수 없는 특징을 가지고 있다. 즉, 발효미생물인 Lentinula edodes(표고버섯), Phellinus linteus(상황버섯), Cordyceps militaris(동충화초), Pleurotus ostreatus(느타리버섯), Trametes versicolor(구름버섯)는 많은 대사산물을 가지고 있다. 이는 1차대사산물은 생물의 생존에 필수적인 물질로서 생리적 의의는 밝혀져 있으나 2차 대사산물의 의의는 아직 불명확하다. 외적에 대한 방어물질로서 항생물질로 연구가 되고 있으며, 생리활성에 대한 산물로 항 종양성 다당류, 항바이러스 물질, 항균성 물질, 효소저해제, 핵산관련물질, 아미노산 관련물질, 유기산, 식물 호르몬류, 그 외의 생리활성 물질로 펩타이드나 단백질계의 생리활성 물질들로 곤충, 선충, 점균 등에 작용하는 물질, 식물 생육저해물질, 비타민 B1 파쇄물질, 약리활성 물질 등 아직도 밝혀지지 않는 많은 부분들이라고 볼 수 있다. The secondary metabolites produced by the mushroom strain used as a fermenting microorganism have characteristics not found in other fungi. That is, the fermenting microorganisms Lentinula edodes , Phellinus linteus , Cordyceps militaris , Pleurotus ostreatus and Trametes versicolor have many metabolites. This means that the first metabolite is essential for the survival of the organism, but the significance of the second metabolite is still unclear. Antimicrobials, antimicrobials, enzymatic inhibitors, nucleic acid-related substances, amino acid-related substances, organic acids, phytohormones, and the like. Other physiologically active substances are peptides and protein-based physiologically active substances, which are still unknown, such as substances acting on insects, nematodes, germs, plant growth inhibitors, vitamin B1 breakdown substances and pharmacologically active substances .

본 발명의 제4단계는 상기 제2단계의 분말을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 1차 생물반응을 거쳐 1차 발효물을 생성한다. 제4단계는 인큐베이터 상에서 굴패각 분말과 발효미생물 및 발효에 필요한 질소원을 투입하여 1차 발효하는 단계로, 품질 안정을 위해 해당 공정을 자동화한다. 여기서, 말하는 인큐베이터는 무균시스템으로 되어 있고, 온습도가 자동으로 조정되어 굴패각 분말과 발효미생물, 발효에 필요한 질소원들이 미생물의 증식과 발효가 동시에 이루어지는 인큐베이터를 말한다.In the fourth step of the present invention, the powder of the second step is mixed with a fermenting microorganism using an incubator, and a nitrogen source necessary for fermentation is added to produce a primary fermentation through a first biological reaction. In the fourth step, oyster shell powder, fermentation microorganism and nitrogen source necessary for fermentation are put on the incubator for the first fermentation, and the process is automated to stabilize the quality. The incubator referred to here is an aseptic system, and the temperature and humidity are automatically adjusted so that the oyster shell powder, the fermenting microorganism, and the nitrogen source necessary for fermentation are the incubator in which the proliferation and fermentation of the microorganism are simultaneously carried out.

이때, 본 발명에 의한 상기 제4단계는 발효미생물을 혼합하고, 질소원인 미강 30~70중량%를 혼합하여 인큐베이터의 온도 25~40℃와, 습도 50~80%를 유지하는 조건 하에서 2~8일간 발효하여 발효물을 생성한다. 이는 제1차 발효물을 생성하기 위해 인큐베이터에 굴패각 분말과 발효미생물, 질소원 30~70중량%를 추가하여 고루 잘 섞어주어 혼합물을 생성한 다음, 온도 25~40℃와, 습도 50~80%가 자동으로 유지되는 조건 하에서 2~8일간 원활한 1차 생물반응을 거치면서 유용물질이 생성할 수 있도록 1차 발효물을 생성한다.At this time, in the fourth step according to the present invention, the fermenting microorganisms are mixed, and 30 to 70% by weight of nitrogen causing microorganisms are mixed and heated to a temperature of 25 to 40 ° C and a humidity of 50 to 80% Day fermentation to produce a fermented product. In order to produce the first fermentation product, the oyster shell powder, the fermentation microorganism and the nitrogen source were added to the incubator in an amount of 30 to 70% by weight to prepare an admixture. The mixture was then incubated at a temperature of 25 to 40 ° C and a humidity of 50 to 80% Under a condition that is maintained automatically, a primary fermentation product is produced so that a useful substance can be produced through a smooth primary biological reaction for 2 to 8 days.

본 발명의 제5단계는 상기 제4단계의 1차 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균 건조한다. 제5단계는 1차 발효물을 멸균 및 건조하는 단계로, 특히 1차 발효물을 멸균함에 있어 품질 안정과 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다. In the fifth step of the present invention, the fermentation microorganism is sterilized and dried using the autoclave of the first fermentation product of the fourth step. The fifth step is a step of sterilizing and drying the primary fermentation product. In order to sterilize the primary fermentation product, it is desirable to introduce a dedicated automatic facility to improve quality stability and productivity.

이때, 본 발명에 의한 상기 제5단계는 1차 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 120℃~130℃의 온도로 15~30분간 생물반응시 투입된 발효미생물을 멸균 건조한다. 이는 1차 생물반응을 거친 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)로 120℃~130℃의 온도로 15~30분간 생물반응시 투입된 발효미생물, Saccharomyces cerevisias, Bacillus natto, Aspergillus oryzea, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus, Trametes versicolor를 멸균 건조한다.At this time, in the fifth step according to the present invention, the primary fermentation product is sterilized and dried using a rapid autoclave at a temperature of 120 ° C. to 130 ° C. for 15 to 30 minutes during the biological reaction. The fermentation broth which has undergone the first bioreaction is reacted with a fermenting microorganism , Bacillus cereus, Bacillus natto, Aspergillus oryzae, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus , Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus and Trametes versicolor .

한편, 상기의 발효단계에서 발효산물에 내포되어 있는 발효미생물을 제거하기 위하여 급속멸균장치(Autoclave)를 통해 급속 멸균 건조처리 하게 된다. 발효미생물을 멸균하지 않고 계속하여 발효 과정을 거치게 되면 발효 특유의 냄새를 통해 제품의 질이 하락하고 동시에 부가성이 하락하게 되어 이를 방지하기 위한 것이다. Meanwhile, in order to remove the fermenting microorganisms contained in the fermentation product in the fermentation step, the microorganism is rapidly sterilized and dried through an autoclave. If the fermentation microorganism is continuously fermented without sterilization, the quality of the product is lowered due to the characteristic odor of fermentation and at the same time the addition property is lowered.

그리고 통상적으로 급속 멸균이라 하면 121℃에서 10~30분간, 132℃에서 10~30분이 사용되고 있으나, 본 발명에서는 이보다 처리 온도가 120~130℃의 온도에서 20분 동안 처리하여 효과적으로 발효미생물을 멸균 건조하게 된다.In the case of rapid sterilization, it is generally used at 121 ° C for 10 to 30 minutes and at 132 ° C for 10 to 30 minutes. In the present invention, however, the fermentation microorganisms are effectively sterilized by drying at a treatment temperature of 120 to 130 ° C for 20 minutes .

본 발명의 제6단계는 상기 제5단계의 1차 발효물을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 2차 생물반응을 거쳐 2차 발효물을 생성한다. 제6단계는 인큐베이터 상에서 1차 발효물과 발효미생물 및 발효에 필요한 질소원을 투입하여 2차 발효하는 단계로, 품질 안정을 위해 해당 공정을 자동화한다. 여기서, 말하는 인큐베이터는 무균시스템으로 되어 있고, 온습도가 자동으로 조정되어 1차 발효물과 발효미생물, 발효에 필요한 질소원들이 미생물의 증식과 발효가 동시에 이루어지는 인큐베이터를 말한다.In a sixth step of the present invention, the primary fermentation product of the fifth step is mixed with a fermenting microorganism using an incubator, and a nitrogen source necessary for fermentation is added to produce a secondary fermentation product through a secondary biological reaction. In the sixth step, the primary fermentation product, the fermentation microorganism, and the nitrogen source necessary for fermentation are put on the incubator to perform secondary fermentation, and the process is automated to stabilize the quality. The incubator referred to herein is an aseptic system, and refers to an incubator in which temperature and humidity are automatically adjusted so that primary fermentation products, fermenting microorganisms, and nitrogen sources necessary for fermentation simultaneously perform microbial growth and fermentation.

이때, 본 발명에 의한 상기 제6단계는 발효미생물을 혼합하고, 질소원인 미강 30~70중량%를 혼합하여 인큐베이터의 온도 25~40℃와, 습도 50~80%를 유지하는 조건 하에서 2~8일간 발효하여 발효물을 생성한다. 이는 상기 제4단계와 동일한 작업을 수행하는 바, 즉 제2차 발효물을 생성하기 위해 인큐베이터에 1차 발효물과 발효미생물, 질소원 30~70중량%를 추가하여 고루 잘 섞어주어 혼합물을 생성한 다음, 온도 25~40℃와, 습도 50~80%가 자동으로 유지되는 조건 하에서 2~8일간 원활한 2차 생물반응을 거치면서 유용물질이 생성할 수 있도록 2차 발효물을 생성한다.At this time, in the sixth step according to the present invention, the fermenting microorganisms are mixed and 30 to 70% by weight of nitrogen is caused to mix, and the mixture is stirred at a temperature of 25 to 40 ° C and a humidity of 50 to 80% Day fermentation to produce a fermented product. This is the same as the fourth step. That is, 30 to 70% by weight of the primary fermentation product, the fermentation microorganism and the nitrogen source were added to the incubator so as to produce the second fermentation product, Next, a secondary fermentation product is produced so that a useful substance can be produced while undergoing a smooth secondary biological reaction for 2 to 8 days at a temperature of 25 to 40 ° C and a humidity of 50 to 80% automatically maintained.

본 발명의 제7단계는 상기 제6단계의 2차 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균 건조한다. 제7단계는 상기 5단계와 동일한 작업을 수행하는 바, 즉 2차 발효물을 멸균 및 건조하는 단계로, 특히 2차 발효물을 멸균함에 있어 품질 안정과 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다. In the seventh step of the present invention, the fermentation microorganism is sterilized and dried using a rapid sterilization apparatus (Autoclave) in the sixth step. The seventh step is to perform the same operation as in step 5, that is, to sterilize and dry the secondary fermentation product. In particular, in order to sterilize the secondary fermentation product, a dedicated automatic facility is introduced It is good to do.

이때, 본 발명에 의한 상기 제7단계는 2차 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 120℃~130℃의 온도로 15~30분간 생물반응시 투입된 발효미생물을 멸균 건조한다. 이는 2차 생물반응을 거친 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)로 120℃~130℃의 온도로 15~30분간 생물반응시 투입된 발효미생물, Saccharomyces cerevisias, Bacillus natto, Aspergillus oryzea, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus, Trametes versicolor를 멸균 건조한다.At this time, the seventh step according to the present invention sterilize and dry the fermenting microorganisms which are added during the biological reaction for 15 to 30 minutes at a temperature of 120 ° C to 130 ° C by using a autoclave. This is because the fermentation product subjected to the secondary bioreaction is reacted with a fermenting microorganism which has been put into a bioreactor at a temperature of 120 ° C to 130 ° C for 15-30 minutes in a rapid autoclave, Saccharomyces cerevisias, Bacillus natto, Aspergillus oryzae, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus , Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus and Trametes versicolor .

본 발명의 제8단계는 상기 제7단계의 2차 발효물을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 3차 생물반응을 거쳐 3차 발효물을 생성한다. 제8단계는 인큐베이터 상에서 2차 발효물과 발효미생물 및 발효에 필요한 질소원을 투입하여 3차 발효하는 단계로, 품질 안정을 위해 해당 공정을 자동화한다. 여기서, 말하는 인큐베이터는 무균시스템으로 되어 있고, 온습도가 자동으로 조정되어 2차 발효물과 발효미생물, 발효에 필요한 질소원들이 미생물의 증식과 발효가 동시에 이루어지는 인큐베이터를 말한다.In the eighth step of the present invention, the secondary fermentation product of the seventh step is mixed with the fermentation microorganism using an incubator, and a nitrogen source necessary for fermentation is added to the fermentation product to produce a tertiary fermentation product through a tertiary bioreaction. The eighth step is a third fermentation step in which the secondary fermentation product, fermentation microorganism and nitrogen source necessary for fermentation are put on the incubator, thereby automating the process for quality stabilization. The incubator referred to here is an aseptic system, and the temperature and humidity are automatically adjusted to refer to an incubator in which secondary fermentation products, fermentation microorganisms, and nitrogen sources necessary for fermentation simultaneously perform microbial growth and fermentation.

이때, 본 발명에 의한 상기 제8단계는 발효미생물을 혼합하고, 질소원인 미강 30~70중량%를 혼합하여 인큐베이터의 온도 25~40℃와, 습도 50~80%를 유지하는 조건 하에서 2~8일간 발효하여 발효물을 생성한다. 이는 상기 제4, 6단계와 동일한 작업을 수행하는 바, 즉 제3차 발효물을 생성하기 위해 인큐베이터에 2차 발효물과 발효미생물, 질소원 30~70중량%를 추가하여 고루 잘 섞어주어 혼합물을 생성한 다음, 온도 25~40℃와, 습도 50~80%가 자동으로 유지되는 조건 하에서 2~8일간 원활한 3차 생물반응을 거치면서 유용물질이 생성할 수 있도록 3차 발효물을 생성한다.The fermentation microorganisms are mixed and 30 to 70% by weight of nitrogen sources are mixed. The fermentation microorganisms are mixed at a temperature of 25 to 40 ° C and a humidity of 50 to 80% Day fermentation to produce a fermented product. This is the same as steps 4 and 6 above. That is, 30 to 70% by weight of a secondary fermentation product, a fermentation microorganism and a nitrogen source are added to an incubator to produce a third fermentation product. , And then a third fermentation product is produced so that a useful substance can be produced while undergoing a smooth third biological reaction for 2 to 8 days at a temperature of 25 to 40 ° C and a humidity of 50 to 80% automatically maintained.

본 발명의 제9단계는 상기 제8단계의 3차 발효물을 건조기를 이용하여 수분율 18%로 건조한다. 제9단계는 1차, 2차, 3차 생물반응을 거친 발효물을 건조하는 단계로, 발효물을 건조함에 있어서 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다. 이는 발효된 발효물을 건조기를 이용하여 수분율 18%로 건조하여 액체부피를 줄여 가용성 성분의 농도를 높여 응용범위를 높이고, 넓혀 용도를 다양화시키고 저장성을 향상시키기 위함이다.In the ninth step of the present invention, the tertiary fermentation product of the eighth step is dried at a moisture content of 18% by using a drier. Step 9 is a step of drying the fermented product subjected to the primary, secondary, and tertiary bioreaction. It is preferable to introduce a dedicated automatic facility to improve the productivity in drying the fermented product. The fermented fermented product is dried at a moisture content of 18% by using a dryer to increase the concentration of the soluble component by reducing the volume of the liquid, thereby increasing the application range and widening the application range and improving the storage stability.

본 발명의 마지막 단계인 제10단계는 상기 제9단계의 발효물을 분쇄기를 이용하여 60~80메쉬의 분말로 분쇄하여 발효산물을 생성한다. 제10단계는 1차, 2차, 3차 생물반응을 거친 발효산물을 분쇄하는 단계로, 발효산물을 분쇄함에 있어서 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다. 이는 1차, 2차, 3차 생물반응을 거쳐 완성된 발효산물을 분쇄기를 이용하여 60~80메쉬의 분말을 생성한다. 이렇게 분말화된 굴패각 발효산물을 농축 발효산물을 저장, 포장, 수송 등의 경비를 절감하고 응용범위를 넓히고, 용도를 다양화시키고 저장성을 향상시키기 위해 분말로 제조한다. Step 10, which is the final step of the present invention, is a step of pulverizing the fermented product of step 9 with a powder of 60 to 80 mesh using a pulverizer to produce a fermented product. Step 10 is a step of pulverizing the fermentation product that has undergone the first, second and third bio-reactions. It is preferable to introduce a dedicated automated facility for improving the productivity in pulverizing fermentation products. This is accomplished by primary, secondary, and tertiary bioreactors, and the finished fermentation products are pulverized to produce 60 to 80 mesh powders. Powdered oyster shell fermentation products are prepared as powders to reduce the cost of storage, packaging and transportation of concentrated fermentation products, to widen the application range, to diversify applications, and to improve storage stability.

이와 같이, 본 발명의 제조방법을 통해 제조된 굴패각 발효산물은 용도에 있어서, 1, 2, 3차에 걸친 생물반응, 즉 발효를 거듭함에 따라 굴패각에 함유된 유효 물질의 분자의 사슬을 적은 단위로 끊어서 유효 성분이 더욱 효과적으로 흡수를 제공 가능하고, 다중 발효 생물공정을 거쳐 유산균과 효모, 칼슘이 다량 함유된 굴패각 발효산물을 이용한 가축 사료 첨가제를 비롯하여 농업용 유기질비료 원료 등 다양한 원료로 활용함에 있어 제형 변화가 가능하여 저비용으로 고부가성 물질을 대량으로 양산 가능하다.As described above, the omentophilic fermented product produced by the production method of the present invention has the effect of suppressing the chain of molecules of the effective substance contained in the oyster shell to a small unit , The active ingredient can be more effectively absorbed, and it can be used as a raw material for a variety of raw materials such as agricultural fertilizer raw materials including livestock bacteria, yeast, livestock feed additives using oyster shell fermentation products containing a large amount of calcium, etc. through multi- It is possible to mass-produce high-value-added materials in a large amount at low cost.

이하, 굴패각 발효산물의 기능성 성분, 즉 생균수 실험 및 효소 실험, 일반성분 분석, 무기질 분석, 아미노산 분석, 아플라톡신 분석을 하여 본 발명의 효과를 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the effect of the present invention will be described by examining functional components of the oyster shell fermentation product, that is, the number of viable cells and an enzyme experiment, a general component analysis, an inorganic analysis, an amino acid analysis and an aflatoxin analysis. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

[실험 및 결과치 1] 굴패각 발효산물의 생균수 실험[Experiments and results 1] Experiments on the number of live bacteria in oyster shell fermented products

Hemocytometer를 이용한 세포수 산정방법은 아래와 같이 시행하였다.Cell counting using a hemocytometer was performed as follows.

1. 검사 원리1. Inspection Principle

- 일정량의 세포 부유액이 들어갈 수 있는 공간을 갖는 Hemocytometer를 이용하여 세포수를 현미경으로 측정하여 단위 부피당 세포수를 계산한다.- Calculate the number of cells per unit volume by measuring the number of cells with a microscope using a hemocytometer with a space for a certain amount of cell suspension.

2. 기구 및 장비2. Appliances and equipment

1) Hemocytometer1) Hemocytometer

2) CoverGlass2) CoverGlass

3) Pasteur pipette3) Pasteur pipette

4) 위상차 현미경4) Phase contrast microscope

3. 검사방법3. Inspection method

1) 깨끗하고 건조된 hemocytometer에 커버글라스를 덮는다.1) Cover the cover glass with a clean, dry hemocytometer.

2) 세척이 끝난 세포액을 Pasteur 피펫으로 취하여 chamber에 넣고 약 3분간 놓아둔다. 이때 눈금 부위는 모두 채우되 넘치지는 않도록 한다.2) Take the washed cell solution with a Pasteur pipette and place in the chamber for about 3 minutes. At this time, all graduation areas are filled and not overflowed.

3) Chamber를 현미경 위에 놓고 × 100배 저배율로 촛점을 맞추고 1㎟의 큰 square 4개(WBC산정 square)를 각각 세어서 평균치(X)를 얻는다. 이때 1㎟ square당 세포수가 50-100개면 적당하고 100개 이상인 경우 세포액을 더 희석하여 검사하는 것이 정확하다.3) Place the chamber on a microscope and focus on X100 magnification at low magnification, and calculate the average value (X) by counting 4 large squares of 1 mm2 (WBC square). If the number of cells per square millimeter is 50-100, it is appropriate to dilute the cell solution more than 100 cells.

WBC No.( /㎣) = X(세포수 / ㎟)×0WBC No. (/ ㎣) = X (number of cells / mm 2) × 0

WBC No.( /mL) = X(세포수 / ㎟)×10×000WBC No. (/ mL) = X (number of cells / mm 2) × 10 × 000

(예 : X 가 100 → 1000/ ㎣ = 1 × 106 / mL)(For example, X is 100 → 1000 / ㎣ = 1 × 10 6 / mL)

* 또는 RBC 산정 square에서 × 400배로 세포수를 산정한다.* Or calculate the number of cells at × 400 times in RBC calculation square.

위와 같은 산정방법을 통하여 굴패각 분말을 Hemocytometer를 이용한 세포수 산정방법으로 분석하여 아래와 같은 결과가 도출됐다.Through the above calculation method, oyster shell powder was analyzed by cell counting method using hemocytometer, and the following results were obtained.

Figure pat00001
Figure pat00001

[실험 및 결과치 2] 굴패각 발효산물의 효소 실험[Experiments and results 2] Enzyme experiments on oyster shell fermented products

식품의약품안전처 기준에 준하여 분석하여 아래와 같은 결과가 도출됐다.According to the Korea Food and Drug Administration, the following results were obtained.

Figure pat00002
Figure pat00002

[실험 및 결과치 3] 굴패각 발효산물의 일반 성분 분석 [Experiments and results 3] Analysis of general components of oyster shell fermentation products

일반성분 분석은 Association of Official Analytical Chemists (AOAC)의 방법에 준하여 실시하였다. 수분은 105℃ 상압 가열건조법, 조단백은 Kjeldahl법, 조회분은 550℃ 회화법으로 분석하였다.General component analysis was performed according to the method of Association of Official Analytical Chemists (AOAC). Moisture was analyzed by 105 ℃ atmospheric heating drying method, crude protein was analyzed by Kjeldahl method, and questioned by 550 ℃.

Figure pat00003
Figure pat00003

[실험 및 결과치 4] 굴패각 발효산물의 무기질 분석[Experiments and results 4] Mineral analysis of oyster shell fermentation products

칼슘, 인은 시료 10g에 질산을 가하고 실온에서 12시간 이상 방치 후 100℃에서 24시간 이상 가열하여 노란색의 맑은 용액이 될 때까지 반응시켰다. 반응액에 질산을 첨가한 후 산이 완전히 증발할 때까지 반응시켜 유기질을 제거하였다. 이후 시료액에 0.2 N 질산 20mL를 가하여 24시간 용출시킨 후 0.45 um membrane filter로 여과하여 ICP(Inductively Coupled Plasma, Varian 720-ES, Varian medical systems, Inc., USA)로 분석하였다.Calcium and phosphorus were added to 10 g of the sample and allowed to stand at room temperature for 12 hours or more. The mixture was heated at 100 ° C. for 24 hours or more until the solution became a clear yellow solution. Nitric acid was added to the reaction solution and the reaction was continued until the acid completely evaporated to remove the organic matter. Thereafter, 20 mL of 0.2 N nitric acid was added to the sample solution, and the solution was eluted for 24 hours. The solution was filtered with a 0.45 μm membrane filter, and analyzed by ICP (Inductively Coupled Plasma, Varian 720-ES, Varian Medical Systems, Inc., USA).

Figure pat00004
Figure pat00004

[실험 및 결과치 5] 굴패각 발효산물의 아미노산 분석[Experiments and results 5] Amino acid analysis of oyster shell fermentation products

아미노산 성분검사는 시료 1g 정도를 취해 시험관에 넣고 6NHCl 용액을 15mL 가하여 감압 밀봉한 후 110℃의 dry oven에서 24시간동안 산가수 분해시켰다. 가수 분해시킨 분해액을 Glass filter로 여과하고 염산과 물을 완전히 증발시키기 위해 얻은 여액을 55℃에서 감압 농축하였다. 농축된 시료를 sodium citrate buffer (pH 2.2)로 정용하여 0.45μm membrane filter로 여과한 후, 아미노산 자동분석기(Biochrom 20, Pharmacia Biotech. Ltd, U.K)를 이용하여 구성 아미노산 함량을 구하였다.Amino acid components were sampled at 1 g, placed in a test tube, 15 mL of 6N HCl solution was added, and the mixture was subjected to acid hydrolysis in a dry oven at 110 ° C for 24 hours. The hydrolyzed lysate was filtered with a glass filter and the filtrate obtained for complete evaporation of hydrochloric acid and water was concentrated under reduced pressure at 55 ° C. Concentrated samples were filtered with a 0.45 μm membrane filter using sodium citrate buffer (pH 2.2), and the constituent amino acid content was determined using an amino acid automatic analyzer (Biochrom 20, Pharmacia Biotech., Ltd., U.K.).

Figure pat00005
Figure pat00005

[실험 및 결과치 6] 굴패각 발효산물의 아플라톡신 분석[Experiments and results 6] Aflatoxin analysis of oyster shell fermented products

곰팡이 독소인 아플라톡신은 ELISA 분석법을 사용하여 분석하였다.Aflatoxin, a fungal toxin, was analyzed using an ELISA assay.

Figure pat00006
Figure pat00006

본 발명은 기재된 실시예에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양하게 수정 및 변형할 수 있음은 이 기술의 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명하다. 따라서 그러한 변형예 또는 수정예들은 본 발명의 특허청구범위에 속한다 해야 할 것이다.It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the present invention without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. It is therefore intended that such variations and modifications fall within the scope of the appended claims.

Claims (5)

굴패각을 원료로 하여 세척한 다음 건조하는 제1단계;
상기 제1단계의 건조물을 파쇄하여 분말로 생성하고, 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 잡균을 멸균하는 제2단계;
상기 제2단계에서 생물반응기를 이용하여 발효미생물을 배양하여 제조하는 제3단계;
상기 제2단계의 분말을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 1차 생물반응을 거쳐 1차 발효물을 생성하는 제4단계;
상기 제4단계의 1차 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균 건조하는 제5단계;
상기 제5단계의 1차 발효물을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 2차 생물반응을 거쳐 2차 발효물을 생성하는 제6단계;
상기 제6단계의 2차 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균 건조하는 제7단계;
상기 제7단계의 2차 발효물을 인큐베이터를 이용하여 발효미생물과 혼합하고, 발효에 필요한 질소원을 추가하여 3차 생물반응을 거쳐 3차 발효물을 생성하는 제8단계;
상기 제8단계의 3차 발효물을 건조기를 이용하여 수분율 18%로 건조하는 제9단계; 및
상기 제9단계의 발효물을 분쇄기를 이용하여 60~80메쉬의 분말로 분쇄하여 발효산물을 생성하는 제10단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법.
A first step of washing with oyster shell as a raw material and then drying;
A second step of crushing the dried material of the first step to produce powder, and sterilizing the bacterium using a rapid sterilization apparatus (Autoclave);
A third step of culturing the fermentation microorganism using the bioreactor in the second step;
A fourth step of mixing the powder of the second step with a fermenting microorganism using an incubator, adding a nitrogen source necessary for fermentation to produce a first fermentation product through a first biological reaction;
A fifth step of sterilizing and drying the fermenting microorganism using a rapid sterilization apparatus (Autoclave) in the fourth step of fermentation;
A sixth step of mixing the primary fermentation product with the fermentation microorganism using an incubator and adding a nitrogen source necessary for fermentation to produce a secondary fermentation product through a secondary biological reaction;
A seventh step of sterilizing and drying the fermentation microorganism using a rapid sterilization apparatus (Autoclave) in the sixth fermentation step;
An eighth step of mixing the secondary fermentation product of step 7 with a fermenting microorganism using an incubator, adding a nitrogen source necessary for fermentation to produce a tertiary fermentation product through a tertiary bioreaction;
A ninth step of drying the third fermentation product of step 8 at a moisture content of 18% using a drier; And
The method of claim 10, wherein the fermented product is pulverized using a pulverizer to a size of 60 to 80 mesh to produce a fermented product.
제1항에 있어서,
상기 제2단계는 굴패각 건조물을 파쇄기로 0.5~1cm의 분말로 생성하고, 급속멸균장치를 이용하여 100~130℃의 온도로 15~25분간 잡균을 멸균하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법.
The method according to claim 1,
Wherein the second step is to produce oyster shell dried material as a powder of 0.5 to 1 cm with a crusher and sterilize the microorganism at a temperature of 100 to 130 ° C for 15 to 25 minutes using a rapid sterilization apparatus. ≪ / RTI >
제1항에 있어서,
상기 제3단계는 발효미생물인 Saccharomyces cerevisias, Bacillus natto, Aspergillus oryzea, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus, Trametes versicolor를 배양액 ml당 개체수가 10+1∼10+7의 개체수가 되도록 배양하여 단일 또는 혼합하여 제조하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법.
The method according to claim 1,
Wherein the third step is a step of isolating the fermenting microorganisms Saccharomyces cerevisis, Bacillus natto, Aspergillus oryzae, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lentinula edodes, Phellinus linteus, Cordyceps militaris, Pleurotus ostreatus, Trametes versicolor is cultured to a population of 10 + 1 to 10 + 7 per ml of the culture medium, and the mixture is prepared singly or as a mixture, thereby producing a fermented oyster product using the microorganism.
제1항에 있어서,
상기 제4단계, 제6단계, 8단계는 발효미생물을 혼합하고, 질소원인 미강 30~70중량%를 혼합하여 인큐베이터의 온도 25~40℃와, 습도 50~80%를 유지하는 조건 하에서 2~8일간 발효하여 각각의 발효물을 생성하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법.
The method according to claim 1,
The fermentation microorganisms are mixed with 30 to 70% by weight of nitrogen sources and incubated at a temperature of 25 to 40 ° C and a humidity of 50 to 80% And fermenting the fermented product for 8 days to produce each fermented product.
제1항에 있어서,
상기 제5단계, 제7단계는 발효물을 급속멸균장치(Autoclave)를 이용하여 120℃~130℃의 온도로 15~30분간 생물반응시 투입된 발효미생물을 멸균 건조하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 굴패각 발효산물을 제조하는 방법.
The method according to claim 1,
Wherein the fermentation product is sterilized and dried using a rapid autoclave at a temperature of 120 ° C. to 130 ° C. for 15 to 30 minutes during the biological reaction. A method for producing an oyster shell fermentation product.
KR1020150011923A 2015-01-26 2015-01-26 Method for preparing fermented extract of Oyster Shell by using of microorganism KR20160091611A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150011923A KR20160091611A (en) 2015-01-26 2015-01-26 Method for preparing fermented extract of Oyster Shell by using of microorganism

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020150011923A KR20160091611A (en) 2015-01-26 2015-01-26 Method for preparing fermented extract of Oyster Shell by using of microorganism

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20160091611A true KR20160091611A (en) 2016-08-03

Family

ID=56708532

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020150011923A KR20160091611A (en) 2015-01-26 2015-01-26 Method for preparing fermented extract of Oyster Shell by using of microorganism

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20160091611A (en)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101939556B1 (en) * 2018-06-12 2019-01-17 주식회사 백광 Feed composition with fermented shell
KR20200095021A (en) * 2019-01-31 2020-08-10 주식회사 슈퍼바이오 Method for preparing calcium-fortified heat-resistant feed additive and feed additive prepared thereby
KR102202243B1 (en) 2020-09-02 2021-01-12 윤해용 Method for recycling of oyster-shells using effective microorganism
KR102235334B1 (en) * 2020-05-27 2021-04-02 최정엽 Method for manufacturing calcium powder using abalone, oyster shell, calcium powder prepared thereby, and food, cosmetic, pharmaceutical products containing the same
CN112891508A (en) * 2021-01-26 2021-06-04 中国海洋大学 Oyster peptide fermentation product with antithrombotic and blood pressure lowering composite effects and preparation method and application thereof
KR20210074480A (en) * 2019-12-12 2021-06-22 경북대학교 산학협력단 Fermented feedstuffs of seashells using lactic acid bacteria and their preparation method
KR20220155795A (en) * 2021-05-17 2022-11-24 재단법인 전남바이오산업진흥원 Novel Serratia marcescens SM01, which decomposes fossils, and fertilizer composition with soil improvement and crop growth promotion effect including the same, and use of the same

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100037296A (en) 2008-10-01 2010-04-09 경상대학교산학협력단 Manufacturing methods and devices of high purity calcium powder with the shell
KR100993223B1 (en) 2010-03-03 2010-11-09 양옥순 Method for producing of feed recycling shell
KR101328671B1 (en) 2013-07-09 2013-11-14 맥섬석 지.엠. 주식회사 Manufacturing method of calcium fortifying feedstuff additive comprising macsumsuk and shell and feedstuff comprising the calcium fortifying feedstuff additive obtained from above manufacturing method

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100037296A (en) 2008-10-01 2010-04-09 경상대학교산학협력단 Manufacturing methods and devices of high purity calcium powder with the shell
KR100993223B1 (en) 2010-03-03 2010-11-09 양옥순 Method for producing of feed recycling shell
KR101328671B1 (en) 2013-07-09 2013-11-14 맥섬석 지.엠. 주식회사 Manufacturing method of calcium fortifying feedstuff additive comprising macsumsuk and shell and feedstuff comprising the calcium fortifying feedstuff additive obtained from above manufacturing method

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101939556B1 (en) * 2018-06-12 2019-01-17 주식회사 백광 Feed composition with fermented shell
KR20200095021A (en) * 2019-01-31 2020-08-10 주식회사 슈퍼바이오 Method for preparing calcium-fortified heat-resistant feed additive and feed additive prepared thereby
KR20210074480A (en) * 2019-12-12 2021-06-22 경북대학교 산학협력단 Fermented feedstuffs of seashells using lactic acid bacteria and their preparation method
KR102235334B1 (en) * 2020-05-27 2021-04-02 최정엽 Method for manufacturing calcium powder using abalone, oyster shell, calcium powder prepared thereby, and food, cosmetic, pharmaceutical products containing the same
KR102202243B1 (en) 2020-09-02 2021-01-12 윤해용 Method for recycling of oyster-shells using effective microorganism
CN112891508A (en) * 2021-01-26 2021-06-04 中国海洋大学 Oyster peptide fermentation product with antithrombotic and blood pressure lowering composite effects and preparation method and application thereof
KR20220155795A (en) * 2021-05-17 2022-11-24 재단법인 전남바이오산업진흥원 Novel Serratia marcescens SM01, which decomposes fossils, and fertilizer composition with soil improvement and crop growth promotion effect including the same, and use of the same

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20160091611A (en) Method for preparing fermented extract of Oyster Shell by using of microorganism
CN102051335B (en) Method for producing microbial ecological agent by using kitchen garbage
CN106479927A (en) Method and its application using Bacillus licheniformis biosynthesiss nanometer selenium
CN1229440A (en) Production and use of compositions comprising high concentrations of vitamin B12 activity
CN109402015A (en) One plant of heat bites bacillus amyloliquefaciens and its application
Khan et al. Production of single cell protein from Saccharomyces cerevisiae by utilizing fruit wastes
CN107384811A (en) A kind of Irpex lacteus and its application
Markou et al. Cultivation and safety aspects of Arthrospira platensis (Spirulina) grown with struvite recovered from anaerobic digestion plant as phosphorus source
Haddish Production of single cell protein from fruit of Beles (Opuntia Ficus-Indica L.) peels using Saccharomyces cerevisiae
CN104031862A (en) High-yield gamma-aminobutyric acid (GABA) strain and application thereof
Kasmi et al. Novel approach for the use of dairy industry wastes for bacterial growth media production
TW201925453A (en) Methods and products for biodegradation of waste
Yin et al. Economic production of probiotics from kitchen waste
KR20140007640A (en) Process for cultivation of culture materials disintegrable organic sludge and culture materials
CN110982711B (en) Method for open production of trichoderma solid strain
KR20190081204A (en) Method for producing organic fertilizer using blood of animal by-product
Munir et al. Effective microbes (EM) and their potential on mushroom commercialization in Malaysia
Barakova et al. Fungicidal activity of ultradisperse humic sapropel suspensions.
KR101004539B1 (en) Fermentation composition using jellyfish. and the manufacturing method thereof
CN103849575B (en) A kind of production method of single cell protein
KR101045011B1 (en) Method for preparing composition comprising fermented by using of hippophae rhamnoides l
KR101677410B1 (en) Solid and liquid phase fermentation method of mushrooms using useful microorganism
Zul et al. Production of liquid fertilizer from chicken feather waste by using subcritical water treatment for plant and algal growth
KR101760174B1 (en) Method for preparing fermented extract of Arctium lappa L by using of mushroom strains
CN107500884A (en) Compound formulation for fermented livestock excrement production biological organic fertilizer

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal