KR20160050191A

KR20160050191A - 신규 네오리그난 화합물

Info

Publication number: KR20160050191A
Application number: KR1020140147681A
Authority: KR
Inventors: 엄영란; 목소연; 조병헌; 신재혁; 김슬기; 정주리; 김상백; 조홍구; 조용백
Original assignee: 한국콜마주식회사
Priority date: 2014-10-28
Filing date: 2014-10-28
Publication date: 2016-05-11

Abstract

본 발명은 혈당 조절, 혈압 강하, 항균, 항염, 진통 또는 면역조절 등에 효과가 있는 신규 네오리그난 화합물에 관한 것이다.

Description

신규 네오리그난 화합물 {A NOVEL NEOLIGNAN COMPOUND}

제 1 본 발명은 신규 네오리그난 화합물 또는 그의 염에 관한 것이다. 제 2 본 발명은 신규 네오리그난 화합물 또는 그의 염의 용도에 관한 것이다. 제 3 본 발명은 신규 네오리그난 화합물의 분리 방법에 관한 것이다.

리그난 (lignan) 이란 두 분자의 n-페닐프로판이 n-프로필 곁사슬의 β 자리에서 결합한 β,γ-디벤질부탄 골격을 갖는 물질을 말한다. 이는 R.D.Haworth 가 명명한 2 개의 C₆-C₃ 단위로 된 기본골격을 갖는 물질로서, 방향고리는 수산기, 메톡실기, 메틸렌디옥시기 등으로 치환될 수 있고, 곁사슬은 흔히 고리모양구조를 취하고 있다. 리그난은 현화식물에 널리 분포하며, 배당체 또는 유리 상태로 나무껍질, 과일, 목재, 잎, 뿌리 또는 수지삼출액 속 등에 존재하고 있는 것으로 알려져 있고, 대부분 무색의 고체이며, 광학적으로 활성이다.

최근에는 비록 동물실험이기는 하나 리그난 성분 중에 육종을 파괴하고 치료하는 작용이 있다는 것이 판명되어 암 치료에 있어서 중요한 시사를 준 이후로, 천연재료로부터 신규 리그난 화합물을 분리하여 그 용도를 연구하는 실험 및 결과가 몇몇 진행되어 왔다. 구체적으로, 대한민국 공개특허공보 제 10-2013-0092367 호에는 흑노호의 에탄올 추출물로부터 분리해낸 신규 리그난 화합물에 피부 미백 효과가 있음이 보고되어 있고, 대한약학회에서 발행한 Archives of Pharmacal Research 제28권 제1호에는 벽오동 줄기의 n-부탄올 추출물로부터 분리해낸 신규 네오리그난 화합물에 항정신병 치료 효과가 있음이 보고되어 있으며, 대한민국 등록특허공보 제 10-0836189 호에는 어성초의 에탄올 추출물로부터 분리해낸 리그난 화합물에 콜레스테릴 에스테르의 합성 및 축적으로 유발되는 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화 또는 심근경색증 등과 같은 심장순환계 질환의 예방 또는 치료에 효과가 있음이 보고되어 있다.

대한민국 공개특허공보 제 10-2013-0092367 호 대한민국 등록특허공보 제 10-0836189 호

Archives of Pharmacal Research 제28권 제1호

본 발명은 혈당 조절, 혈압 강하, 항균, 항염, 진통 또는 면역조절 등에 효과가 있는 신규 네오리그난 화합물의 제공을 과제로 한 것이다.

본 발명은 다음의 수단을 통해 전술한 과제를 해결한다.

(1) 아래 화학식 1 로 표시되는 네오리그난 화합물 또는 그의 염.

[화학식 1]

(2) 상기 (1) 에 있어서, 네오리그난 화합물 또는 그의 염은 지골피 유래인 것을 특징으로 하는 네오리그난 화합물 또는 그의 염.

(3) 상기 (1) 또는 (2) 에 따른 네오리그난 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 혈당 조절, 혈압 강하, 항균, 항염, 진통 또는 면역조절용 약학 조성물.

(4) 지골피를 물 또는 유기 용매로 추출하는 단계 (A);

(A) 단계에서 수득한 지골피 추출물을 극성 용매로 분획하는 단계 (B); 및

(B) 단계에서 수득한 용매 분획물을 알코올과 물을 포함하는 혼합 용매로 크로마토그래피를 이용하여 분리하는 단계 (C) 를 포함하는 상기 (1) 또는 (2) 의 네오리그난 화합물의 수득 방법.

본 발명에 따른 네오리그난 화합물 또는 그의 염은 혈당 조절, 혈압 강하, 항균, 항염, 진통 또는 면역조절 등에 효과가 있다.

도 1 은 본 발명의 신규 화합물의 주요 HMBC 연관 도면이다.
도 2 는 본 발명의 신규 화합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 것이다.
도 3 은 본 발명의 신규 화합물의 1H-NMR 스펙트럼을 나타낸 것이다.
도 4 는 본 발명의 신규 화합물의 13C-NMR 스펙트럼을 나타낸 것이다.
도 5 는 본 발명의 신규 화합물의 DEPT-135 NMR 스펙트럼을 나타낸 것이다.
도 6 은 본 발명의 신규 화합물의 COSY NMR 스펙트럼을 나타낸 것이다.
도 7 은 본 발명의 신규 화합물의 HSQC-DEPT 스펙트럼을 나타낸 것이다.
도 8 은 본 발명의 신규 화합물의 HMBC NMR 스펙트럼을 나타낸 것이다.

제 1 본 발명은 아래의 화학식 1 로 표시되는 네오리그난 화합물 또는 그의 염이다.

[화학식 1]

위 네오리그난 화합물의 염은 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

여기서 “약학적으로 허용 가능” 이라 함은 통상의 의약적 복용량으로 동물에게 투여할 때 독성 효과가 덜함으로써, 동물, 더 구체적으로는 인간에게 약으로서 사용할 수 있다는 정부 또는 이에 준하는 규제 기구의 승인을 받을 수 있거나 또는 받은 것을 말한다. 또한, “약학적으로 허용 가능한 염” 이라 함은 약학적으로 허용 가능하고 모 화합물의 바람직한 약리 활성을 갖는 제 1 본 발명의 일측면에 따른 염을 말한다.

위 약학적으로 허용 가능한 염은 무기산 또는 유기산과 같은 적절한 음이온의 주합에 의해 유도된 것들을 포함한다. 특히, 안정한 염을 형성하는데 충분한 산도를 갖는 것이 바람직하며, 저독성의 산인 것이 좋다. 그 비제한적인 예로는 HF, HCl, HBr, HI, H₂SO₄, H₃PO₄, 유기황산 또는 유기 카르복실산을 들 수 있으며, 염기 중심 일반적으로는 아민으로부터도 염을 형성할 수 있다. 또한, 위 유기황산의 예로는 페닐, a-나프틸, b-나프틸, (S)-캠포, 메틸, 에틸, n-프로필, I-프로필, n-부틸, s-부틸, I-부틸, t-부틸, 펜틸 및 헥실 술폰산과 같은 C_6-16 아릴 술폰산, C_6-16 헤테로아릴 술폰산 및 C_1-16 알킬 술폰산을 들 수 있다. 또한, 위 유기 카르복실산의 예로는 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루빅산, 말론산, 글루타르산, 타르타르산, 시트르산, 푸마르산, 석신산, 말산, 말레산, 히드록시말레산, 벤조산, 히드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산 및 2-페녹시벤조산과 같은 C_1-16 알킬, C_6-16 아릴 카르복실산 및 C_4-16 헤테로아릴 카르복실산을 들 수 있다.

위 약학적으로 허용 가능한 염은 또한 한가지 이상의 아미노산과 함께 제 1 본 발명에 따른 화합물의 염을 포함한다. 특히, 단백질 성분으로 밝혀진 자연-발생적인 아미노산이 적합하다.

위 약학적으로 허용 가능한 염은 결정성 또는 비결정성일 수 있다.

제 2 본 발명은 제 1 본 발명에 따른 신규 네오리그난 화합물 또는 그의 염의 용도이다. 제 1 본 발명에 따른 화합물 또는 그의 염은 혈당 조절, 혈압 강하, 항균, 항염, 진통 또는 면역조절 등에 효과가 있다.

제 1 본 발명에 따른 신규 화합물 또는 그의 염은 위 치료하고자 하는 증상에 적합한 어떠한 경로로도 투여가능하며, 적합한 경로의 비제한적인 예로는 경구, 직장, 코, 국소 (눈, 볼 및 설하 포함), 질 및 비경구 (피하, 근육내, 정맥내, 피내, 인트라쎄칼 및 경막 포함) 를 들 수 있다. 일반적으로는 구강으로 투여할 수 있지만, 경구로 투여했을 때 충분히 생체이용가능하지 못할 경우에는 상기한 그 외의 경로로 투여할 수 있다.

제 1 본 발명에 따른 활성 성분은 순수한 화합물로도 투여 가능하지만, 약학적 제제 형태로 가공하여 투여하는 것이 보다 바람직할 수 있다. 위 약학적 제제는 한가지 이상의 허용가능한 담체 및 임의의 기타 치료 성분을 함유할 수 있는데, 여기서 담체는 조성물의 기타 성분과 혼용가능하다는 의미에서 허용가능하여야 하며, 환자에게 유해한 것은 제외된다.

약학적 제제 형태로 제공할 때 제 1 본 발명에 따른 활성 성분의 함량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.0001 내지 80 중량 %, 구체적으로 0.01 내지 50 중량%, 더 구체적으로 0.1 내지 10 중량% 인 것이 바람직하다. 본 함량 범위는 본 발명이 의도하는 혈당 조절, 혈압 강하, 항균, 항염, 진통 또는 면역조절 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 적절할 수 있다.

투여될 제 1 본 발명에 따른 활성 성분의 투여 주기 및 투여량 결정은 통상의 기술자의 수준 내에서 적절하게 결정할 수 있으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태 또는 합병증 등의 다양한 요인에 따라 다르게 선택할 수 있다.

위 약학적 제제 형태는 단위 투여 형태이며, 제약 분야에서 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 비제한적인 예로서, 경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 캅셀제, 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 세립제, 액제, 유탁제 또는 펠렛제일 수 있는데, 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제 (예컨대, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 또는 글리신), 활택제 (예컨대, 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 폴리에틸렌 글리콜), 또는 결합제 (예컨대, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리비닐피롤리돈) 를 함유할 수 있다. 경우에 따라서 위 제형은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제 또는 감미제 등의 약제학적 첨가제를 추가로 함유할 수 있다. 또한, 비제한적인 예로서, 비경구 투여를 위한 제형은 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제, 패치 또는 분무제일 수 있다.

제 1 본 발명에 따른 활성 성분은 식품 형태로도 투여될 수 있다. 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 겔 또는 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 통상의 기술자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수도 있다. 각 성분의 배합량, 투여주기 및 투여량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 통상의 기술자가 용이하게 선정 가능하다.

제 3 본 발명은 제 1 본 발명에 따른 신규 네오리그난 화합물의 분리 방법이다. 제 1 본 발명에 따른 화합물은 지골피를 물 또는 유기 용매로 추출하는 단계 (A); 상기 추출 단계에서 수득한 지골피 추출물을 극성 용매로 분획하는 단계 (B); 및 상기 분획 단계에서 수득한 용매 분획물을 알코올과 물을 포함하는 혼합 용매로 크로마토그래피를 이용하여 분리하는 단계 (C) 를 거쳐 수득할 수 있다.

즉, 제 1 본 발명에 따른 신규 네오리그난 화합물은 지골피로부터 유래된 것을 특징으로 하는데, 지골피란 구기자나무 뿌리의 껍질을 말한다. 구기자나무는 우리나라 각처의 인가 부근이나 길가에 심는 낙엽관목으로서, 키가 1 ~ 4 m 정도이며, 햇가지는 자라서 1 m 이상이 되는 식물이다. 가지 끝은 늘어지고, 짧은 가지는 흔히 가시로 변형이 되고, 잎은 난상 피침형 또는 난형으로 가장자리에 톱니가 없고, 긴가지의 잎은 호생하나 짧은 가지에서는 몇 잎씩 총생하며, 꽃은 자주색으로, 종모양이며, 상부는 5 갈래이고, 수술 5, 암술 1 이며, 열매는 장과로 긴 난형이며, 길이는 1.5 ~ 2 cm 정도이고, 붉게 익는다. 개화기는 8 ~ 10 월이며, 결실기는 10 ~ 11 월이다. 지골피는 원통모양, 반 원통모양 또는 조각이며, 길이는 3 ~ 10 cm 이고, 너비는 5 ~ 15 mm 이며, 두께는 1 ~ 3 mm 로서, 바깥 면은 회황색 또는 등황색으로 거칠며 불규칙하게 세로로 찢어진 무늬가 있고, 주피는 비늘 모양으로 벗겨지기 쉽다. 안쪽 면은 황백색 또는 회황색이고, 비교적 평탄하며, 가는 세로 무늬가 있다. 몸체는 가볍고, 질은 취약하여 꺾이기 쉽다. 꺾인 면은 회백색 또는 황갈색을 띠고, 섬유성은 아니며, 질은 가볍고 거칠다. 지골피의 횡단면을 현미경으로 보면 바깥층에는 낙피층이 있다. 낙피층은 2 ~ 3 줄의 코르크 조직 층의 띠로 되었고, 가장 안쪽의 1 층은 온전하고 가지런한 고리 띠를 이루고 있으며, 사부의 깊은 곳에서 발생하고 있다. 낙피층 조직 중에는 퇴폐된 사관 및 수선 세포를 볼 수 있다. 사부는 근피 두께의 반을 차지하고 수선은 1 열의 세포로 되었으며, 유세포에는 옥살산칼슘 사정과 전분립이 들어있다. 섬유 및 석세포가 흩어져있는 것을 볼 수 있다. 섬유는 낱개 또는 묶음을 이루어 존재하고, 세포벽은 목화되었거나 약간 목화되어 있다.

참고로, 지골피로부터는 몇 가지의 성분이 이미 분리 보고된 바 있는데, 베타인 (betaine), 쿠코아민 A, B (kukoamine A, B), 라이슈민 A, B(lyciumine A, B) 등의 알칼로이드 성분과 루테올린 (luteolin), 퀘르세틴 (quercetin), 스코폴레틴 (scopoletin), 스코폴린 (scopolin) 등의 플라보노이드, 쿠마린 계열의 성분 및 신남산 (cinnamic acid), 리놀렌산 (linoleic acid), 바닐린산 (vanilic acid) 등의 유기산이 이에 해당한다.

지골피는 재배한 것 또는 시판되는 것 제한 없이 사용할 수 있다. 위 (A) 단계에서 추출하기 전에 지골피는 세척 및 건조하여 건조 생약인 상태로 사용할 수 있는데, 필요에 따라서는 건조 생약을 추가로 분쇄기로 분쇄한 분쇄 생약 상태로 사용할 수도 있다. 위 (A) 단계는 추출 대상의 약 1 내지 20 배, 바람직하게는 약 5 내지 10 배 분량의 추출 용매로 약 50 내지 150 °C 에서 약 1 내지 3 시간 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출 방법으로 1 내지 5 회 추출하여 감압여과하고 동결 건조하여 진행할 수 있다. 추출 용매로는 물 또는 유기용매의 단독 또는 혼합 용매를 사용할 수 있으며, 유기 용매로는 C_1-5 의 저급 알코올을 사용할 수 있다. 이 때, C_1-5 의 저급 알코올의 비제한적인 예로는 메탄올, 에탄올, 이소프로필알코올, n-프로필알코올, n-부탄올 또는 이소부탄올이 있다.

위 (B) 단계는 (A) 단계에서 수득한 지골피 추출물을 극성 용매로 분획하는 과정이다. 극성 용매의 비제한적인 예로는 10 % 메탄올을 들 수 있다.

위 (C) 단계는 (B) 단계에서 분획한 분획물로부터 제 1 본 발명에 따른 화합물을 분리하는 과정이다. 예컨대, 실리카겔을 이용한 여과 (filtration), 액체 컬럼 크로마토그래피를 이용한 크기배제 (size-exclusion) 크로마토그래피, 이온교환 (ion-exchange) 크로마토그래피, 분배 크로마토그래피, 친화 (affinity) 크로마토그래피 또는 이들 크로마토그래피의 조합을 이용하여 분리 정제할 수 있다.

이하에서는 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 다만, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위를 이들만으로 한정하려는 것은 아니다.

[실시예 1] - 지골피 추출물로부터의 화합물의 분리

지골피 분쇄물 2.0 kg 을 물에 넣은 다음 100 °C 에서 2 시간 가열한 뒤 여과하여 감압 건조함으로써 추출물 105 g 을 얻었다. 그리고 나서, 이 추출물 (20 g) 을 10 % MeOH 에 현탁시킨 후 HP 20 컬럼 크로마토그래피 (10 → 100 % MeOH, 그레디언트 시스템) 을 실시하여 5 개의 분획으로 나누었다. 그 중 분획 3 (700 mg) 을 HP 20 컬럼 크로마토그래피 (10 → 100 % MeOH, 그레디언트 시스템) 와 C 18 컬럼 (20 X 250 mm, 7 ㎛) 을 이용한 예비 HPLC (preparative HPLC) 를 수행하여 도 2 와 같은 단일 화합물 (10.6 mg) 을 얻었다.

[실시예 2] - 분리한 단일 화합물의 구조 동정

상기 실시예 1 을 통해 지골피로부터 분리한 물질의 구조를 밝히기 위하여 ¹H NMR, ¹³C NMR 및 2D NMR 스펙트럼을 이용하여 그 구조를 동정하였다 (DMSO, ¹H NMR-700Mhz, ¹³C NMR-176MHz). 그 결과는 아래의 표 1 및 도 3 내지 8 과 같았다.

포지션	13C	1H (multi, J=Hz)	HMBC
1	135.3
2	110.1	6.96 (1H, d, J = 2.1)	C-7, C-1, C-3, C-4
3	148.8
3-OCH3	55.5	3.74 (3H, s)	C-3
4	146.0
5	115.1	7.07 (1H, dd, J = 8.4)	C-1, C-3
6	117.8	6.85 (1H, dd, J = 8.4, 2.1)	C-4
7	86.5	5.48 (1H, d, J = 6.3)	C-1, C-4, C-8, C-9, C-5'
8	53.3	3.42 (1H, m)	C-1, C-7, C-4'
9	63.0	3.62 (1H, m) 3.72 (1H, dd, J = 15.4, 4.9)	C-7, C-8
1'	136.6
2'	115.0	6.80 (1H, brs)	C-3', C-4', C-6'
3'	142.9
3'-OCH3	55.6	3.77 (3H, s)	C-3'
4'	146.1
5'	128.1
6'	110.8	6.86 (1H, brs)	C-2', C-4'
7'	72.7	4.44 (1H, t, J = 4.9)	C-2', C-6'
8'	75.7	3.46 (1H, m)	C-9'
9'	62.4	3.18 (1H, m) 3.36 (1H, m)	C-7', C-8'
1''	99.9	4.88 (1H, d, J=7.7)	C-4
2''	73.0	3.24 (1H, m)
3''	76.7	3.26 (1H, m)
4''	69.5	3.14 (1H, m)
5''	76.9	3.28 (1H, m)
6''	60.5	3.44 (1H, m) 3.66 (1H, dd, J = 5.6, 2.2)

상기 실시예 1 을 통해 분리해낸 화합물은 HR-ESI-MS 스펙트럼의 m/z 결과가 577.1894 [M + Na]⁺ 이었다 (C₂₆H₂₄O₁₃ 으로 계산됨).

상기 실시예 1 을 통해 분리해낸 물질의 1H NMR 및 13C NMR 데이터 (상기 표 1) 를 분석해보면, 5 개의 방향족 프로톤 [δ_H6.96 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-2), 7.07 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5), 6.85 (1H, d, J = 8.4, 2.1 Hz, H-6), 6.80 (1H, brs, H-2') 및 6.86 (1H, brs, H-6')] 과 12 개의 탄소 [δ_C 110.1, 110.8, 115.0, 115.1, 117.8, 128.1, 135.3, 136.6, 142.9, 146.0, 146.1 및 148.8] 신호로부터 2 개의 벤젠 고리가 존재함을 확인할 수 있었다. 특히, 그 중 4 개의 산소화된 탄소 [δ_C148.8 (C-3), 146.0 (C-4), 142.9 (C-3') 및 146.1 (C-4')] 는 2 개의 벤젠 고리 안에서 오르쏘-산소화된 형태로 존재함을 확인할 수 있었다.

또한, 6 개의 글루코실 탄소 [δ_C99.9 (C-1''), 73.0 (C-2''), 76.7 (C-3''), 69.5 (C-4''), 76.9 (C-5''), 60.5 (C-6'')] 와 1 개의 아노머형 프로톤 [δ_H4.88 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-1'')] 신호로부터 이 화합물은 1 개의 글루코스를 가진 화합물이라는 것을 확인할 수 있었다. 그리고, HMBC NMR 데이터 분석결과로부터 H-1'' 은 산소화된 방향족 탄소 (δ146.0, C-4) 에 연결되어 있다는 것을 확인하였다.

아울러, COSY 와 HMBC NMR 스펙트럼의 분석을 통해 이 화합물에는 2 개의 메틴-메틴-메틸렌 그룹 (그룹 1: C-7, C-8 및 C-9, 그룹 2: C-7', C-8' 및 C-9') 이 존재함을 확인하였고, 그룹 1 은 H-7 과 C-1, H-8 과 C-4' 의 연결을 통해 2 개의 방향족 고리에 연결되어 있으며, 그룹 2 는 H-7' 와 C-2', 6'의 연결을 통해 1 개의 방향족 고리에 연결되어 있음을 알 수 있었다.

이상의 분광학적 데이터에 의하면 본 발명의 화합물은 도 1 및 아래 화학식 1 로 표시되는 4-O-글루코실-7R,8S-7'8'-에리스로-시심브리폴린(4-O-글루코실-7R,8S-7',8'-에리스로-시심브리폴린)이다.

[화학식 1]

Claims

아래 화학식 1 로 표시되는 네오리그난 화합물 또는 그의 염.
[화학식 1]
제 1 항에 있어서, 네오리그난 화합물 또는 그의 염은 지골피 유래인 것을 특징으로 하는 네오리그난 화합물 또는 그의 염.
제 1 항 또는 제 2 항에 따른 네오리그난 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 혈당 조절, 혈압 강하, 항균, 항염, 진통 또는 면역조절용 약학 조성물.
지골피를 물 또는 유기 용매로 추출하는 단계 (A);
(A) 단계에서 수득한 지골피 추출물을 극성 용매로 분획하는 단계 (B); 및
(B) 단계에서 수득한 용매 분획물을 알코올과 물을 포함하는 혼합 용매로 크로마토그래피를 이용하여 분리하는 단계 (C) 를 포함하는 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 네오리그난 화합물의 수득 방법.