KR20160016280A - Composition for immune enhancement comprising taheebo extract or ginseng leaf extract - Google Patents

Composition for immune enhancement comprising taheebo extract or ginseng leaf extract Download PDF

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KR20160016280A KR1020140100017A KR20140100017A KR20160016280A KR 20160016280 A KR20160016280 A KR 20160016280A KR 1020140100017 A KR1020140100017 A KR 1020140100017A KR 20140100017 A KR20140100017 A KR 20140100017A KR 20160016280 A KR20160016280 A KR 20160016280A
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허성일
권동주
박기면
김선영
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재단법인 홍천메디칼허브연구소
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Abstract

Disclosed in the present invention is a composition comprising at least one of a Taheebo extract and a ginseng leaf extract as an active ingredient. The composition disclosed in the present invention enables to activate iNOS or COX-2 by comprising at least one of the Taheebo extract and the ginseng leaf extract, to activate NF-κB or MAPKs, and to promote the generation of cytokine such as TNF-α, IL-6, and IL-1β. Accordingly, the composition of the present invention due to the effects is capable of exhibiting effects in enhancing immunity or effects in activating macrophage, and being broadly used in a pharmaceutical or food industry as a composition for enhancing the immunity of an individual. Particularly, the composition of the present invention can be used as a feed composition.

Description

타히보 추출물 또는 인삼잎 추출물을 포함하는 면역 증강용 조성물{COMPOSITION FOR IMMUNE ENHANCEMENT COMPRISING TAHEEBO EXTRACT OR GINSENG LEAF EXTRACT}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to a composition for enhancing immunity, which comprises TAHIBO extract or ginseng leaf extract. BACKGROUND ART [0002]

본 명세서는 타히보 추출물 또는 인삼잎 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. The present disclosure relates to a composition comprising a Tahibo extract or a ginseng leaf extract.

인간 또는 동물의 병원체 감염에 대한 저항성 즉, 면역능은 동물 체내에 있는 각종 면역세포의 활성과 특정 병원체에 대한 면역 상태에 따라 좌우된다. 면역세포 중에서 호중구, 대식구, 수지상세포 등의 탐식세포들은 외부에서 침입하는 병원체를 비특이적으로 탐식, 제거하는 면역의 1차 방어선 역할을 하며, T 세포, B 세포 등은 체액성 면역 반응과 세포성 면역 반응인 특이면역반응을 담당하면서 1차방어선에서 저지하지 못한 병원체를 면역반응을 통하여 제어하는 면역의 2차방어선을 담당한다. 따라서, 비특이적인 면역을 담당하는 탐식세포와 특이면역을 담당하는 림프구 등이 면역의 중추적인 역할을 하게 되며 이들이 최적의 조화를 이룰 때 개체의 건강도 최상으로 유지하게 된다.Resistance to human or animal pathogenic infections, ie, immunity, depends on the activity of various immune cells in the animal's body and the immune status of the particular pathogen. Among the immune cells, phagocytes such as neutrophils, macrophages, and dendritic cells act as the primary defense line of immunity that nonspecifically ingests and exterminates exogenous pathogens, while T cells and B cells act as humoral immune responses and cellular immunity Responsible for the second line of defense of the immunity that controls the immune response of a pathogen that is responsible for the specific immune response of the reaction while it is not blocked by the first line of defense. Thus, non-specific immunocompetent cells that play a role in the immune response to the immune system and lymphocytes to play a pivotal role, and when the optimal harmony of the individual to maintain the best health.

현재 병원체를 사멸시키기 위해 의지하고 있는 항생물질은, 바이러스에는 듣지 않고 내성균을 생성시킨다고 하는 문제를 안고 있다. 또한 아나필락시스(anaphylaxis)를 일으킨다고 하는 부작용도 있다. 스테로이드 등의 호르몬제나 면역억제제는 면역의 약체화(弱體化)를 통하여 병원균이나 기회감염균(opportunistic pathogen)에 감염이라고 하는 위험을 증대시키지만, 그 사용으로 인간을 포함하는 생명체를 정상화시킬 수 없다. 또한 인히비터(inhibitor)에 의한 치료도, 생체의 정상의 시스템을 저해하는 것에 의한 폐해가 강하게 지적되고 있다. 근치(根治)하지 못하는 약제를 계속해서 사용하는 것은 의료비의 증대에도 영향을 끼치고 있다. 이러한 문제를 해결하고자 하는 관점으로부터도, 안전하고 우수한 면역 증강용 조성물이 요구되고 있다. Currently, antibiotics, which are dependent on killing the pathogens, have the problem of producing resistant bacteria without listening to viruses. There is also the side effect of causing anaphylaxis. Hormones and immunosuppressants such as steroids increase the risk of infection by pathogens or opportunistic pathogens through the weakening of immunity, but they can not normalize living things including humans. In addition, treatment by inhibitors has been strongly pointed out to be caused by inhibiting the normal system of the living body. Continued use of drugs that can not be curative affects the increase in medical expenses. From the viewpoint of solving such a problem, there is a demand for a safe and excellent composition for enhancing immunity.

KR10-2009-0025497 AKR10-2009-0025497A KR10-2011-0118724 AKR10-2011-0118724A

상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 본 명세서는 안전하고 우수한 면역 증강용 조성물을 제공하고자 한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a safe and excellent composition for enhancing immunity.

본 명세서는 상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 측면으로서 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 포함하는 면역 증강용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.In order to accomplish the above object, one aspect of the present invention is to provide an immunoconjugate composition comprising at least one of a Tahibo extract and a ginseng leaf extract.

본 명세서의 타히보(Taheebo) 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 조성물은 iNOS 또는 COX-2를 활성화시키고 NF-κB 또는 MAPKs 를 활성화시키며 TNF-α, IL-6, IL-1β와 같은 사이토카인의 생성을 촉진할 수 있다. 이러한 특성으로 인해 본 명세서의 조성물은 면역 증강 효과 또는 대식세포 활성화 효과를 나타낼 수 있으며, 개체의 면역 증강용 조성물로서 약학 또는 식품 분야에서 널리 사용될 수 있다. 특히 본 명세서의 조성물은 사료 조성물로서도 사용될 수 있다.The composition comprising at least one of the Taheebo extract and the ginseng leaf extract of the present invention as an active ingredient activates iNOS or COX-2, activates NF-κB or MAPKs, and inhibits TNF-α, IL-6, IL-1β Can promote the production of cytokines such as < RTI ID = 0.0 > Due to these characteristics, the composition of the present specification can exhibit an immunopotentiating effect or macrophage activation effect, and can be widely used in pharmaceutical or food fields as a composition for immunizing an individual. In particular, the compositions herein can also be used as feed compositions.

도 1은 타히보 에탄올 추출물의 지표물질을 분석한 결과이다.
도 2는 타히보 추출물에 포함된 TA4 및 TA5의 구조를 규명한 것이다.
도 3은 타히보 추출물에서 TA4 와 TA5의 피크(peak) 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 명세서의 타히보(T, 이하 도면에서도 동일) 및 인삼잎 추출물(GL, 이하 도면에서도 동일)의 처리에 따른 세포생존력(cell viability)을 나타낸 그래프이다.
도5는 본 명세서의 타히보 및 인삼잎 추출물의 NO생성 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6는 본 명세서의 타히보 및 인삼잎 추출물이 iNOS 및 COX-2 단백질 발현에 미치는 영향을 나타낸 그림이다.
도 7은 시간 및 농도에 따른 타히보 및 인삼잎 추출물의 NF-κB 활성화 결과를 나타낸 그림이다.
도 8은 시간 및 농도에 따른 타히보 및 인삼잎 추출물의 MAPKs 활성화 결과를 나타낸 그림이다.
도 9은 타히보 및 인삼잎 추출물이 iNOS 및 COS-2의 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 10은 타히보 및 인삼잎 추출물이 여러 사이토카인의 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 11는 타히보 및 인삼잎 추출물이 IL-1β의 생성 촉진에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 12는 타히보 및 인삼잎 추출물이 IL-6 의 생성 촉진에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 13는 타히보 및 인삼잎 추출물이 TNF-α의 생성 촉진에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
Fig. 1 shows the results of analysis of the indicator substances of the ethanol extract of Tahibo.
Fig. 2 shows the structure of TA4 and TA5 contained in the Tahibo extract.
FIG. 3 is a graph showing the peak results of TA4 and TA5 in the Tahibo extract. FIG.
FIG. 4 is a graph showing cell viability according to treatment of Tahibo (T, hereinafter the same) and ginseng leaf extract (GL, the same applies to the following drawings) of the present specification.
5 is a graph showing the NO production results of the Tahibo and Ginseng Leaf Extracts of the present specification.
FIG. 6 is a graph showing the effect of the Tahibo and Ginseng leaf extracts of the present invention on iNOS and COX-2 protein expression.
FIG. 7 shows the results of NF-κB activation of the Tahibo and Ginseng leaf extracts according to time and concentration.
FIG. 8 is a graph showing the activation of MAPKs of Tahibo and Ginseng Leaf Extracts according to time and concentration.
FIG. 9 is a graph showing the effect of Tahibo and Ginseng Leaf Extract on mRNA expression of iNOS and COS-2.
10 is a graph showing the effect of Tahibo and Ginseng Leaf Extract on mRNA expression of various cytokines.
11 is a graph showing the effect of Tahibo and Ginseng Leaf Extract on the stimulation of IL-1? Production.
12 is a graph showing the effect of Tahibo and Ginseng Leaf Extract on the stimulation of IL-6 production.
13 is a graph showing the effect of Tahibo and Ginseng Leaf Extract on the promotion of TNF-? Production.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보(Taheebo)(Tabebuia Avellanedae) 추출물 및 인삼잎(Ginseng leaf)(Panax ginseng C. A. Meyer) 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물에 관한 것일 수 있다.In one aspect, the present invention may relate to an immunomodulating composition comprising at least one of Taheebo ( Tabebuia Avellanedae ) extract and Ginseng leaf (Panax ginseng CA Meyer) extract as an active ingredient.

본 발명은 일 측면에 있어서, 면역 증강이 필요한 개체에 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로서 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 면역 증강 방법에 관한 것일 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 투여는 본 명세서에 개시된 투여방법 또는 투여량에 따르거나 통상의 기술자가 용이하게 적용할 수 있는 투여에 따르는 것일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 상기 면역 증강이 필요한 개체는 동물일 수 있다. In one aspect, the present invention may relate to an immunomodulating method comprising administering to a subject in need of immunity a composition comprising at least one of a Tahibo extract and a ginseng leaf extract as an active ingredient. Specifically, in one aspect of the present invention, the administration may be according to the administration method or dosage as disclosed herein, or may be according to administration which can be readily applied by a person skilled in the art. In one aspect of the present invention, the subject in need of the immunological enhancement may be an animal.

본 발명의 일 측면에 있어서, 동물은 개, 고양이, 침팬지 등을 포함하는 포유류일 수 있으며, 구체적으로 동물은 애견일 수 있고, 더 구체적으로 동물은 5세 이상의 노견일 수 있다.In one aspect of the invention, the animal can be a mammal, including a dog, a cat, a chimpanzee, etc. Specifically, the animal can be a dog, more specifically the animal can be a dog less than 5 years old.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로서 포함하는 조성물의 면역 증강 용도에 관한 것일 수 있다. In one aspect, the present invention may relate to the use of a composition comprising at least one of Tahibo extract and ginseng leaf extract as an active ingredient for immunization enhancement.

본 발명은 일 측면에 있어서, 면역을 증강시키는데 사용하기 위한 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로서 포함하는 조성물에 관한 것일 수 있다. In one aspect, the present invention may relate to a composition comprising as an active ingredient at least one of a Tahibo extract and a ginseng leaf extract for use in enhancing immunity.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 세포 내 아질산염(nitrite) 생성 촉진용 조성물에 관한 것일 수 있다.In one aspect, the present invention relates to a composition for promoting intracellular nitrite production comprising at least one of Tahibo extract and ginseng leaf extract as an active ingredient.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 대식세포 활성화용 조성물에 관한 것일 수 있다.In one aspect, the present invention may relate to a composition for activating macrophages comprising at least one of a Tahibo extract and a ginseng leaf extract as an active ingredient.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 iNOS 또는 COX-2 단백질 또는 mRNA 발현 촉진용 조성물에 관한 것일 수 있다. In one aspect, the present invention relates to a composition for promoting iNOS or COX-2 protein or mRNA expression, which comprises at least one of a Tahibo extract and a ginseng leaf extract as an active ingredient.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 NF-κB 활성화용 조성물에 관한 것일 수 있다.In one aspect, the present invention may relate to a composition for activating NF-κB comprising at least one of a Tahibo extract and a ginseng leaf extract as an active ingredient.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 NF-κB 활성화 경로 촉진용 조성물에 관한 것일 수 있다. In one aspect, the present invention relates to a composition for promoting NF-κB activation pathway comprising at least one of Tahibo extract and ginseng leaf extract as an active ingredient.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 p65 인산화용 또는 IκBα 분해용 조성물에 관한 것일 수 있다.In one aspect, the present invention may relate to a composition for p65 phosphorylation or IκBα degradation comprising at least one of a Tahibo extract and a ginseng leaf extract as an active ingredient.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 MAPKs 활성화용 조성물에 관한 것일 수 있다. In one aspect, the present invention may relate to a composition for activating MAPKs comprising at least one of Tahibo extract and ginseng leaf extract as an active ingredient.

본 발명은 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 TNF-α, IL-6, IL-1β와 같은 사이토카인 생성 촉진용 조성물에 관한 것일 수 있다. In one aspect, the present invention may relate to a composition for promoting the production of cytokines such as TNF-α, IL-6, and IL-1β comprising at least one of a Tahibo extract and a ginseng leaf extract as an active ingredient.

구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물일 수 있다. 더 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 : 인삼잎 추출물의 중량비는 1:0.1 내지 1:10 일 수 있으며, 구체적으로 중량비는 1:0.1 이상, 1:0.2 이상, 1:0.3 이상, 1:0.5 이상, 1:0.7 이상, 1:0.8 이상, 1:0.9 이상, 1:1 이상, 1:1.1 이상, 1:1.2 이상, 1:1.5 이상, 1:1.7 이상, 1:2 이상, 1:5 이상, 또는 1:10 이상일 수 있으며, 1:10 이하, 1:9 이하, 1:5 이하, 1:3 이하, 1:2 이하, 1:1.7 이하, 1:1.5 이하, 1:1.2 이하, 1:1.1 이하, 1:1 이하, 1:0.9 이하, 1:0.8 이하, 1:0.7 이하, 1:0.5 이하, 1:0.3 이하, 1:0.2 이하, 또는 1:0.1 이하일 수 있다. Specifically, in one aspect of the present invention, the composition may be a composition comprising a Tahibo extract and a ginseng leaf extract as an active ingredient. More specifically, in one aspect of the present invention, the weight ratio of the Tahibo extract: ginseng leaf extract may be 1: 0.1 to 1:10, and more specifically, the weight ratio is 1: 0.1 or more, 1: 0.2 or more, 1 or more, 1 or more, 1 or more, 1 or more, 1 or more, 1 or more, 1 or more, 1 or more, 1 or more, 1: 5 or less, 1: 3 or less, 1: 2 or less, 1: 1.7 or less, 1: 1.5 or less, 1: 1 or less, 1.2 or less, 1: 1.1 or less, 1: 1 or less, 1: 0.9 or less, 1: 0.8 or less, 1: 0.7 or less, 1: 0.5 or less, 1: 0.3 or less, 1: 0.2 or less, .

본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 유효성분을 조성물 전체 부피를 기준으로 1 μg/ml 내지 10g/ml로 포함할 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물에 포함된 유효성분의 농도는 1 μg/ml 이상, 5 μg/ml 이상, 7 μg/ml 이상, 10 μg/ml 이상, 15 μg/ml 이상, 20 μg/ml 이상, 30 μg/ml 이상, 40 μg/ml 이상, 45 μg/ml 이상, 50 μg/ml 이상, 55 μg/ml 이상, 60 μg/ml 이상, 70 μg/ml 이상, 80 μg/ml 이상, 90 μg/ml 이상, 100 μg/ml 이상, 110 μg/ml 이상, 130 μg/ml 이상, 150 μg/ml 이상, 170 μg/ml 이상, 200 μg/ml 이상, 300 μg/ml 이상, 400 μg/ml 이상, 500 μg/ml 이상, 600 μg/ml 이상, 1000 μg/ml 이상, 10 mg/ml 이상, 100 mg/ml 이상, 1 g/ml 이상, 5 g/ml 이상, 또는 10 g/ml 이상일 수 있으며, 10 g/ml이하, 5 g/ml이하, 1 g/ml이하, 100 mg/ml 이하, 10 mg/ml 이하, 1000 μg/ml 이하, 600 μg/ml 이하, 500 μg/ml 이하, 400 μg/ml 이하, 300 μg/ml 이하, 200 μg/ml 이하, 170 μg/ml 이하, 150 μg/ml 이하, 130 μg/ml 이하, 110 μg/ml 이하, 100 μg/ml 이하, 90 μg/ml 이하, 80 μg/ml 이하, 70 μg/ml 이하, 60 μg/ml 이하, 50 μg/ml 이하, 40 μg/ml 이하, 30 μg/ml 이하, 20 μg/ml 이하, 10 μg/ml 이하, 또는 1 μg/ml 이하 일 수 있다. In one aspect of the invention, the composition may comprise from 1 [mu] g / ml to 10 g / ml of the active ingredient, based on the total volume of the composition. Specifically, in one aspect of the present invention, the concentration of the active ingredient in the composition is at least 1 μg / ml, at least 5 μg / ml, at least 7 μg / ml, at least 10 μg / ml, at least 15 μg / more than 30 μg / ml, more than 40 μg / ml, more than 45 μg / ml, more than 50 μg / ml, more than 55 μg / ml, more than 60 μg / ml, more than 70 μg / ml, more than 80 μg / more than 100 μg / ml, more than 110 μg / ml, more than 130 μg / ml, more than 150 μg / ml, more than 170 μg / ml, more than 200 μg / ml, more than 300 μg / ml , More than 500 μg / ml, more than 600 μg / ml, more than 1000 μg / ml, more than 10 mg / ml, more than 100 mg / ml, more than 1 g / ml, more than 5 g / ml 10 g / ml or less, 5 g / ml or less, 1 g / ml or less, 100 mg / ml or less, 10 mg / ml or less, 1000 μg / ml or less, 600 μg / ml or less, No more than 500 μg / ml, no more than 400 μg / ml, no more than 300 μg / ml, no more than 200 μg / ml, no more than 170 μg / ml, no more than 150 μg / ml, no more than 110 μg / / ml, not more than 90 μg / ml, not more than 80 μg / m less than 70 μg / ml, less than 60 μg / ml, less than 50 μg / ml, less than 40 μg / ml, less than 30 μg / ml, less than 20 μg / ml, less than 10 μg / Or less.

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보는 태베부이아 아벨레인데에(Tabebuia Avellanedae)의 내부 수피, 잎, 꽃, 열매, 줄기 및 뿌리로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것일 수 있으며, 구체적으로 타히보는 태베부이아 아벨레인데에의 내부 수피 일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물은 태베부이아 아벨레인데에(Tabebuia Avellanedae)의 내부 수피, 잎, 꽃, 열매, 줄기 및 뿌리 추출물 중 하나 이상일 수 있으며. 이들 추출물의 혼합물일 수 있다. In one aspect of the present invention, the Tahibo may be at least one selected from the group consisting of inner bark, leaves, flowers, fruits, stem and roots of Tabebuia Avellanedae , It may be the inner bark of the buoy abelian. In one aspect of the invention, the Tahibo extract may be at least one of the inner bark, leaf, flower, fruit, stem and root extract of Tabebuia Avellanedae . Or a mixture of these extracts.

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 또는 인삼잎 추출물은 물, 유기용매 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추출물인 것일 수 있다. 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 유기용매는 C1~C6의 저급 알코올, 부틸렌글리콜, 및 프로필렌글리콜로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것일 수 있으며, 더 구체적으로 저급 알코올은 에탄올일 수 있다.In one aspect of the present invention, the Tahibo extract or the ginseng leaf extract may be at least one extract selected from the group consisting of water, an organic solvent, and a mixture thereof. Specifically, in one aspect of the present invention, the organic solvent may be at least one selected from the group consisting of C 1 -C 6 lower alcohols, butylene glycol, and propylene glycol, and more specifically, the lower alcohol may be ethanol .

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물을 포함하는 조성물은 타히보 추출물의 총 중량을 기준으로 10mg/g 내지 60mg/g의 6-O-(3,4-디메톡시-벤조일)-아주골; 또는 10mg/g 내지 200mg/g의 6-O-(4-메톡시-벤조일)-아주골을 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, a composition comprising a Tahibo extract comprises 6- O- (3,4-dimethoxy-benzoyl) -azoic acid in an amount of 10 mg / g to 60 mg / g based on the total weight of the Tahibo extract; Or 10 mg / g to 200 mg / g of 6- O- (4-methoxy-benzoyl) -glycine.

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 또는 이를 포함하는 조성물은 6-O-(3,4-디메톡시-벤조일)-아주골(TH4)을 타히보 추출물의 총 중량을 기준으로 10mg/g 이상, 20mg/g 이상, 22mg/g 이상, 24mg/g 이상, 26mg/g 이상, 28mg/g 이상, 30mg/g 이상, 32mg/g 이상, 34mg/g 이상, 36mg/g 이상, 38mg/g 이상, 40mg/g 이상, 45mg/g 이상, 50mg/g 이상, 또는 60mg/g 이상 포함하거나 60mg/g 이하, 50mg/g 이하, 45mg/g 이하, 40mg/g 이하, 38mg/g 이하, 36mg/g 이하, 34mg/g 이하, 32mg/g 이하, 30mg/g 이하, 28mg/g 이하, 26mg/g 이하, 24mg/g 이하, 22mg/g 이하, 20mg/g 이하, 또는 10mg/g 이하로 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, the Tahibo extract or a composition comprising the same may comprise at least 10 mg / g of 6- O- (3,4-dimethoxy-benzoyl) -azoic acid (TH4) At least 20 mg / g, at least 22 mg / g, at least 24 mg / g, at least 26 mg / g, at least 28 mg / g, at least 30 mg / g, at least 32 mg / g, at least 34 mg / G or more, 45 mg / g or more, 50 mg / g or more, or 60 mg / g or more, or 60 mg / g or less, 50 mg / g or less, 45 mg / G or less, 32 mg / g, 30 mg / g, 28 mg / g, 26 mg / g, 24 mg / g, 22 mg / g, 20 mg / g or 10 mg / g or less .

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 또는 이를 포함하는 조성물은 6-O-(4-메톡시-벤조일)-아주골(TH5)을 타히보 추출물의 총 중량을 기준으로 10mg/g 이상, 20mg/g 이상, 30mg/g 이상, 50mg/g 이상, 60mg/g 이상, 65mg/g 이상, 67mg/g 이상, 69mg/g 이상, 70mg/g 이상, 71mg/g 이상, 73mg/g 이상, 75mg/g 이상, 77mg/g 이상, 79mg/g 이상, 80mg/g 이상, 85mg/g 이상, 90mg/g 이상, 100mg/g 이상, 또는 200mg/g 이상 포함하거나 300mg/g 이하, 200mg/g 이하, 150mg/g 이하, 100mg/g 이하, 90mg/g 이하, 85mg/g 이하, 80mg/g 이하, 79mg/g 이하, 77mg/g 이하, 75mg/g 이하, 73mg/g 이하, 71mg/g 이하, 70mg/g 이하, 69mg/g 이하, 67mg/g 이하, 65mg/g 이하, 63mg/g 이하, 61mg/g 이하, 60mg/g 이하, 50mg/g 이하, 30mg/g 이하, 20mg/g 이하, 또는 10mg/g 이하로 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, a Tahibo extract or a composition comprising the same is characterized in that 6- O- (4-methoxy-benzoyl) -azoic acid (TH5) g, more than 30 mg / g, more than 50 mg / g, more than 60 mg / g, more than 65 mg / g, more than 67 mg / g, more than 69 mg / g or more, 77 mg / g or more, 79 mg / g or more, 80 mg / g or more, 85 mg / g or more, 90 mg / g, 100 mg / g or more, 200 mg / G or less, 100 mg / g, 90 mg / g, 85 mg / g, 80 mg / g, 79 mg / g, 77 mg / g, 75 mg / g, 73 mg / g, 71 mg / Up to 60 mg / g, up to 50 mg / g, up to 30 mg / g, up to 20 mg / g, up to 60 mg / Or 10 mg / g or less.

본 발명의 일 측면에 있어서, 인삼잎 추출물을 포함하는 조성물은 인삼잎 추출물의 총 중량을 기준으로 7 내지 12mg/g의 진세노사이드 Rg1; 0.5 내지 2.0mg/g의 진세노사이드 Rb1; 0.001 내지 0.01mg/g의 진세노사이드 Rg3; 또는 진세노사이드 Rg1, Rb1, 및 Rb3의 합이 8 내지 15mg/g인 진세노사이드들을 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, a composition comprising ginseng leaf extract comprises 7-12 mg / g ginsenoside Rg1 based on the total weight of ginseng leaf extract; 0.5 to 2.0 mg / g of ginsenoside Rb1; 0.001 to 0.01 mg / g of ginsenoside Rg3; Or ginsenosides wherein the sum of ginsenosides Rg1, Rb1, and Rb3 is between 8 and 15 mg / g.

본 발명의 일 측면에 있어서, 인삼잎 추출물 또는 이를 포함하는 조성물은 진세노사이드 Rg1을 인삼잎 추출물의 총 중량을 기준으로 1mg/g 이상, 3mg/g 이상, 5mg/g이상, 7mg/g 이상, 8mg/g이상, 9mg/g이상, 10mg/g이상, 11mg/g이상, 12mg/g이상, 13mg/g이상, 15mg/g이상, 또는 20mg/g이상으로 포함할 수 있으며 20mg/g이하, 15mg/g이하, 13mg/g이하, 12mg/g이하, 11mg/g이하, 10mg/g이하, 9mg/g이하, 8mg/g이하, 7mg/g이하, 5mg/g이하, 3mg/g이하, 1mg/g이하로 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, a ginseng leaf extract or a composition comprising the ginseng leaf extract is characterized in that the ginsenoside Rg1 is at least 1 mg / g, at least 3 mg / g, at least 5 mg / g, at least 7 mg / g G, at least 8 mg / g, at least 9 mg / g, at least 10 mg / g, at least 11 mg / g, at least 12 mg / g, at least 13 mg / g, at least 15 mg / g, or at least 20 mg / Up to 15 mg / g, 13 mg / g, 12 mg / g, 11 mg / g, 10 mg / g, 9 mg / g, 8 mg / g, 7 mg / g, 5 mg / , 1 mg / g or less.

본 발명의 일 측면에 있어서, 인삼잎 추출물 또는 이를 포함하는 조성물은 진세노사이드 Rb1을 인삼잎 추출물의 총 중량을 기준으로 0.1mg/g 이상, 0.3mg/g 이상, 0.5mg/g 이상, 0.6mg/g 이상, 0.7mg/g 이상, 0.8 mg/g 이상, 0.9mg/g 이상, 1.0mg/g 이상, 1.1mg/g 이상, 1.2 mg/g 이상, 1.3mg/g 이상, 1.4mg/g 이상, 1.5mg/g 이상, 1.6mg/g 이상, 1.7mg/g 이상, 1.8mg/g 이상, 1.9mg/g 이상, 2.0mg/g 이상, 3.0mg/g 이상, 4.0mg/g 이상, 또는 5.0mg/g 이상으로 포함할 수 있으며 5.0mg/g 이하, 4.0mg/g 이하, 3.0mg/g 이하, 2.0mg/g 이하, 1.9mg/g 이하, 1.8mg/g 이하, 1.7mg/g 이하, 1.6mg/g 이하, 1.5mg/g 이하, 1.4mg/g 이하, 1.3mg/g 이하, 1.2mg/g 이하, 1.1mg/g 이하, 1.0mg/g 이하, 0.9mg/g 이하, 0.8mg/g 이하, 0.7mg/g 이하, 0.6mg/g 이하, 0.5mg/g 이하, 0.3mg/g 이하, 또는 0.1mg/g 이하로 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, the ginseng leaf extract or the composition containing the ginseng leaf extract has a concentration of ginsenoside Rb1 of 0.1 mg / g or more, 0.3 mg / g or more, 0.5 mg / g or more, 0.6 g or more, 0.7 mg / g or more, 0.8 mg / g or more, 0.9 mg / g or more, 1.0 mg / g or more, 1.1 mg / g or more, 1.5 mg / g or more, 1.6 mg / g, 1.7 mg / g, 1.8 mg / g, 1.9 mg / g, 2.0 mg / g, 3.0 mg / G or less, 4.0 mg / g or less, 3.0 mg / g or less, 2.0 mg / g or less, 1.9 mg / g or less, 1.8 mg / g or less, 1.7 mg or less, 1.6 mg / g, 1.5 mg / g, 1.4 mg / g, 1.3 mg / g, 1.2 mg / g, 1.1 mg / g, 1.0 mg / G or less, 0.7 mg / g or less, 0.6 mg / g or less, 0.5 mg / g or less, 0.3 mg / g or less, or 0.1 mg / g or less.

본 발명의 일 측면에 있어서, 인삼잎 추출물 또는 이를 포함하는 조성물은 진세노사이드 Rg3을 인삼잎 추출물의 총 중량을 기준으로 0.001mg/g 이상, 0.005mg/g 이상, 0.01mg/g 이상, 0.02mg/g 이상, 0.03mg/g 이상, 0.04mg/g 이상, 0.05mg/g 이상, 0.06mg/g 이상, 0.07mg/g 이상, 0.08mg/g 이상, 0.09mg/g 이상, 0.1mg/g 이상, 0.2mg/g 이상, 0.3mg/g 이상, 0.4mg/g 이상, 또는 0.5mg/g 이상으로 포함하거나 0.5mg/g 이하, 0.4mg/g 이하, 0.3mg/g 이하, 0.2mg/g 이하, 0.1mg/g 이하, 0.09mg/g 이하, 0.08mg/g 이하, 0.07mg/g 이하, 0.06mg/g 이하, 0.05mg/g 이하, 0.04mg/g 이하, 0.03mg/g 이하, 0.02mg/g 이하, 0.01mg/g 이하, 또는 0.005mg/g 이하로 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, the ginseng leaf extract or the composition containing the ginseng leaf extract is characterized in that the ginsenoside Rg3 is added in an amount of 0.001 mg / g or more, 0.005 mg / g or more, 0.01 mg / g or more, 0.02 more than 0.04 mg / g, more than 0.04 mg / g, more than 0.05 mg / g, more than 0.06 mg / g, more than 0.07 mg / g or more, 0.2 mg / g or more, 0.3 mg / g, 0.4 mg / g or more, or 0.5 mg / g or more, or 0.4 mg / or less, 0.1 mg / g or less, 0.09 mg / g or less, 0.08 mg / g or less, 0.07 mg / g or less, 0.06 mg / 0.02 mg / g or less, 0.01 mg / g or less, or 0.005 mg / g or less.

본 발명의 일 측면에 있어서, 인삼잎 추출물 또는 이를 포함하는 조성물은 인삼잎 추출물의 총 중량을 기준으로 진세노사이드 Rg1, Rb1, 및 Rb3의 합이 5mg/g 이상, 6mg/g 이상, 7mg/g 이상, 8mg/g 이상, 8.5mg/g 이상, 9mg/g 이상, 9.5mg/g 이상, 10mg/g 이상, 10.5mg/g 이상, 11mg/g 이상, 11.5mg/g 이상, 12mg/g 이상, 12.5mg/g 이상, 13mg/g 이상, 13.5mg/g 이상, 14mg/g 이상, 15mg/g 이상, 20mg/g 이상, 또는 25mg/g 이상이거나 25mg/g 이하, 20mg/g 이하, 15mg/g 이하, 14mg/g 이하, 13.5mg/g 이하, 13mg/g 이하, 12.5mg/g 이하, 12mg/g 이하, 11.5mg/g 이하, 11mg/g 이하, 10.5mg/g 이하, 10mg/g 이하, 9.5mg/g 이하, 9mg/g 이하, 8.5mg/g 이하, 8mg/g 이하, 7.5mg/g 이하, 7mg/g 이하, 6mg/g 이하, 또는 5mg/g 이하인 진세노사이드들을 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, the ginseng leaf extract or the composition comprising the ginseng leaf extract according to the present invention is characterized in that the sum of ginsenosides Rg1, Rb1, and Rb3 is 5mg / g to 6mg / g, g or more, 8 mg / g, 8.5 mg / g, 9 mg / g, 9.5 mg / g, 10 mg / g, 10.5 mg / g, 11 mg / g, 11.5 mg / G or more, 13 mg / g, 13.5 mg / g, 14 mg / g, 15 mg / g, 20 mg / g or 25 mg / g or 25 mg / G, less than or equal to 15 mg / g, less than or equal to 14 mg / g, less than or equal to 13.5 mg / g, less than or equal to 13 mg / g, less than or equal to 12.5 mg / g, less than or equal to 11 mg / g, less than or equal to 11 mg / g or less, 9.5 mg / g or less, 9 mg / g, 8.5 mg / g, 8 mg / g, 7.5 mg / g, 7 mg / g, 6 mg / g or 5 mg / Lt; / RTI >

본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 약학 또는 식품 조성물 일 수 있으며, 구체적으로 식품 조성물은 건강 식품 조성물 또는 동물 사료 조성물 일 수 있다. 더 구체적으로 본 발명의 일 측면에 있어서, 동물 사료는 모든 동물에 대한 사료를 포함하나, 구체적으로 애견용 사료 조성물 일 수 있으며, 특히 5세 이상의 노견용 사료 조성물일 수 있다. 또한, 본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 동물용 조성물 일 수 있다. In one aspect of the invention, the composition may be a pharmaceutical or food composition, and in particular the food composition may be a health food composition or an animal feed composition. More specifically, in one aspect of the present invention, animal feed includes feed for all animals, but may specifically be a feed composition for dogs, particularly a feed composition for a five year old or older. Further, in one aspect of the present invention, the composition may be an animal composition.

본 발명의 일 측면에 있어서, “노견”은 태어난지 5년 이상 된 애완견을 의미한다. In one aspect of the present invention, " pet dogs " means dogs that have been born for at least five years.

본 발명의 일 측면에 있어서, “면역 증강”은 개체의 면역력 또는 면역 시스템을 강화시키는 것을 의미한다. 생체 내에서 병원균 등에 의해 질병이 발생하는 것은 개체의 면역력과 병원균의 병원성의 상관관계에 있어서 개체의 면역력에 비해 병원균의 병원성이 우세하는 것으로 볼 수 있다. 따라서 개체의 면역력 또는 면역 시스템을 강화시키게 되면 생체 내에 병원균등이 침입한 경우에도 질병이 발생하지 않고 면역 시스템에 의해서 병원균 등이 사멸될 수 있을 것이다. 그러므로, 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 개체의 면역을 증강시켜 질병으로부터 개체를 보호하는 효과를 추가적으로 나타낼 수 있다. In one aspect of the invention, " immunological enhancement " means enhancing the immune system or immune system of an individual. Pathogenicity of pathogenic organisms in the body can be attributed to the pathogenicity of the pathogens compared to the immunity of the individual in relation to the immunity of the individual and the pathogenicity of the pathogens. Therefore, if the immune system or the immune system of an individual is intensified, even if a pathogen enters the living body, the disease will not occur and the immune system may kill the pathogen. Therefore, the composition according to one aspect of the present invention can additionally show the effect of protecting the individual from disease by enhancing immunity of the individual.

본 발명의 일 측면에 있어서,“추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 또한 천연물의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이며, 구체적으로 상기 가공 또는 처리는 추출물을 추가적으로 발효, 또는 효소처리 하는 것일 수 있다. 따라서 본 명세서에서 추출물은 발효물, 농축물, 건조물을 포함하는 광범위한 개념이며, 구체적으로 본 명세서에서 추출물은 발효물일 수 있다.In one aspect of the present invention, the term " extract "includes all substances obtained by extracting components of natural products, regardless of the extraction method, extraction solvent, extracted component or extract form, The present invention is a broad concept that includes all substances that can be obtained by extracting a substance and then processing or treating it by another method. Specifically, the processing or treatment may be an additional fermentation or enzymatic treatment of the extract. A fermentation product, a concentrate, and a dried product. Specifically, the extract may be a fermentation product in this specification.

본 발명의 일 측면에 있어서,“타히보 추출물” 또는 “인삼잎 추출물”은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 타히보 또는 인삼잎의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 그 성분을 뽑아내는 과정에서 열, 산(acid), 염기(base), 효소 등으로 처리하는 공정을 포함하는 추출 방법을 통해 얻어진 물질을 포함하며 또한 타히보 또는 인삼잎의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다. 구체적으로 상기 가공 또는 처리는 타히보 또는 인삼잎 추출물을 추가적으로 발효 또는 효소처리 등을 하는 것일 수 있다. 따라서, 본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 또는 인삼잎추출물은 발효물 일 수 있다. In one aspect of the present invention, " Tahibo extract " or " ginseng leaf extract " includes all substances obtained by extracting components of Tahibo or Ginseng leaves, regardless of the extraction method, extraction solvent, Which contains substances obtained through an extraction method including a step of treating with heat, acids, bases, enzymes, etc. in the process of extracting the components, and also extracting components of Tahibo or ginseng leaves It is a broad concept that includes all substances that can be obtained by extracting the material and then processing or treating it in other ways. Specifically, the processing or treatment may be a step of further subjecting the Tahibo or ginseng leaf extract to fermentation or enzymatic treatment. Accordingly, in one aspect of the present invention, the Tahibo or Ginseng Leaf Extract may be a fermented product.

본 발명의 일 측면에 있어서, “타히보” 또는 “인삼잎”는 추출물의 형태이거나, 생(生) 타히보 또는 인삼잎, 생약 자체의 분쇄물, 생약의 건조물, 생약의 건조 분쇄물, 타히보 또는 인삼잎의 발효물 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 본 명세서에서 사용되는 타히보 또는 인삼잎은 그 입수 방법에 제한이 없으며, 재배하여 사용하거나 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있으며, 타히보의 경우 타베부이아 아벨레인데에(Tabebuia Avellanedae)의 지상부 또는 뿌리부의 일부 또는 전부를 사용할 수 있으며 인삼잎의 경우 인삼의 지상부로서 잎을 사용할 수 있다. 더 구체적으로 타히보는 타베부이아 아벨레인데에(Tabebuia Avellanedae)의 내부 수피, 잎, 꽃, 열매, 줄기 및 뿌리로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상이 사용될 수 있으며, 더욱 구체적으로 내부 수피가 사용될 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 또는 인삼잎의 경우 반드시 건조를 통해서 제조되는 것은 아니며 타히보 또는 인삼잎의 유효 성분을 추출하기에 적절한 형태의 원료라면 제한되지 않는다.In one aspect of the present invention, " Tahibo " or " ginseng leaf " is in the form of an extract or in the form of an extract of raw horseradish or ginseng leaves, a pulverized product of herbal medicine, a dried product of herbal medicine, But may be, but not limited to, fermented leaves. The leaf of Tahibo or ginseng used in the present invention is not limited to the method of obtaining the leaf, and may be cultivated or purchased commercially. In the case of Tahibo, the top part or the root of Tabebuia Avellanedae Part or all of the ginseng leaf may be used. In the case of ginseng leaf, the leaf may be used as a top part of ginseng. More specifically, one or more selected from the group consisting of inner bark, leaf, flower, fruit, stem and root of Tabebuia Avellanedae may be used, more specifically, inner bark may be used . In one aspect of the present invention, Tahibo or ginseng leaves are not necessarily prepared by drying, but are not limited to, if they are raw materials suitable for extracting active ingredients of Tahibo or Ginseng leaves.

본 발명에서 이용되는 타히보(Taheebo)는 능소화과의 수목(Tabebuia Avellanedae)으로 아마존의 일부 지역에서만 자생하고, 고대 잉카제국시대에 원주민들이 “신의 은총을 받은 약목”이라는 뜻에서 타히보라고 불리어 왔으며, 고대 잉카 제국의 인디오들은 건강유지를 위해 이 수목차를 즐겨 마셨다고 한다. 타히보의 역사는 1500년 전 고대 잉카제국 원주민들이 타히보 약목에 버섯과 곰팡이가 번식하지 못할 정도로 탁월한 살균력이 있어 해충이 접근을 못하는 데에서 힌트를 얻어 껍질을 벗겨 내부수피를 차로 끓여 애음하여 각종 질병의 토속치료제로 사용해왔다. 때로는 주변국가와 금으로 물물교환을 했을 정도로 귀중품으로 취급되었다고 전해지고 있다. 타베뷔아속은 남아메리카에 100 종류 이상 자생하지만, 그 중에서도 특히 남미 브라질 일부 지역에만 자생하며 빨강 보라색의 꽃이 피는 높이 30m, 줄기 직경 50cm ~ 1.5m 정도의 거대 수목인 태베부이아 아벨레인데에만 타히보의 원료가 된다. The Taheebo used in the present invention is a tree of the jasper (Tabebuia Avellanedae), native to some parts of the Amazon, and is called Taibo in the ancient times of the Inca Empire in the sense that the Aborigines were "the grace of God" Indians of the empire said that they enjoyed this table of contents in order to maintain their health. The history of Tahibo is about 1,500 years ago, when the ancient Inca Empire natives were able to sterilize mushrooms and fungi on Tahibo's drugstore so that they could not get access to pests. It has been used as a treatment for local diseases. Sometimes it has been said that it has been deemed valuable as it has been bartered with gold from neighboring countries. Tabebuia is native to South America, but it grows only in some parts of South America and Brazil. It is a large tree with a height of 30m and a diameter of 50cm ~ 1.5m, which is a red-violet flower. .

본 발명의 일 측면에 있어서, 물은 증류수 또는 정제수를 포함하고, 유기 용매는 C1~C5의 저급 알코올을 예로 들 수 있는 알코올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메틸케톤 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one aspect of the invention, the water comprises distilled or purified water and the organic solvent is selected from the group consisting of alcohols such as C 1 - C 5 lower alcohols, acetone, ether, ethyl acetate, diethyl ether, Chloroform, and the like, but are not limited thereto.

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 또는 인삼잎 추출물은 타히보-C1~C6 알코올 추출물 또는 인삼잎-C1~C6 알코올 추출물을 포함할 수 있고, 구체적으로 상기 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다.In one aspect of the present invention, the Tahibo extract or the ginseng leaf extract may contain a Tahibo-C 1 -C 6 alcohol extract or a ginseng leaf-C 1 -C 6 alcohol extract. Specifically, the alcohol may be methanol or ethanol .

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 또는 인삼잎 추출물은 타히보 또는 인삼잎을 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합물로 추출하는 단계를 포함하는 제조 방법에 의해 수득될 수 있다. In one aspect of the present invention, the Tahibo extract or the ginseng leaf extract can be obtained by a manufacturing method comprising extracting Tahibo or ginseng leaves with water, an organic solvent, or a mixture thereof.

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 또는 인삼잎 추출물은 물, 유기용매, 및 이들이 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 용매의 조추출물일 수 있다. 상기 유기용매는 C1-C6 알코올일 수 있으며, 구체적으로 C1-C6 알콜은 메탄올 또는 에탄올 일 수 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 또는 인삼잎을 용매로 추출 시, 타히보 또는 인삼잎의 약 5 내지 15배 정도에 해당하는 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하며, 구체적으로 약 10 배의 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. In one aspect of the invention, the Tahibo extract or ginseng leaf extract may be a crude extract of a solvent selected from the group consisting of water, organic solvents, and combinations thereof. The organic solvent may be a C 1 -C 6 alcohol, specifically, the C 1 -C 6 alcohol may be methanol or ethanol. In one aspect of the present invention, when extracting Tahibo extract or ginseng leaf with a solvent, it is preferable to extract by adding about 5 to 15 times of a solvent of Tahibo or Ginseng leaves, and specifically about 10 times as much solvent But the present invention is not limited thereto.

본 발명의 일 측면에 있어서, 추출은 열수 추출, 에탄올 추출, 가열 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 환류냉각 추출, 또는 초음파 추출 등이 이용될 수 있으며, 당업자에게 자명한 추출법이라면 제한이 없으며, 구체적으로 추출은 열수추출 또는 에탄올 추출 일 수 있다. In one aspect of the present invention, extraction may be performed by hot water extraction, ethanol extraction, heat extraction, cold extraction, reflux extraction, reflux cooling extraction, ultrasonic extraction, etc. Any extraction method obvious to a person skilled in the art is not limited, The extraction may be hot water extraction or ethanol extraction.

본 발명의 일 측면에 있어서, 추출은 실온에서 수행할 수도 있으나, 보다 효율적인 추출을 위해서는 가온 조건 하에서 수행할 수 있으며, 바람직하게는 약 40 내지 100℃, 더욱 바람직하게는 약 80℃의 온도에서 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출시간은 약 2 내지 약 14시간, 구체적으로는 8시간 내지 14시간, 더욱 구체적으로는 11시간 내지 13시간, 가장 구체적으로는 12시간 동안 수행할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 추출 용매 및 추출 온도 등의 조건에 따라 달라질 수 있다. 상기 추출은 활성성분을 보다 다량 수득하기 위해 1 회 이상 여러 번 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 5회, 더욱 바람직하게는 3회 연속추출하여 합한 추출액을 이용할 수 있다.In one aspect of the present invention, the extraction may be performed at room temperature, but may be carried out under heating conditions for more efficient extraction, and preferably at a temperature of about 40 to 100 DEG C, more preferably about 80 DEG C But is not limited thereto. The extraction time may be from about 2 to about 14 hours, specifically from 8 to 14 hours, more specifically from 11 to 13 hours, most particularly 12 hours, but not limited to, extraction solvent and extraction Temperature, and the like. The extraction may be carried out one or more times several times to obtain a larger amount of the active ingredient, preferably 1 to 5 times, more preferably 3 times of continuous extraction.

본 발명의 일 측면에 있어서, 타히보 추출물 또는 인삼잎 추출물은 상기와 같이 타히보 또는 인삼잎의 조추출물을 포함할 수 있고, 상기 조추출물을 극성이 낮은 유기 용매로 더욱 추출하여 얻어진 유기 용매의 가용성 분획물로서 포함할 수도 있다. 본 발명의 일 측면에 있어서, 유기 용매로는 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸 아세테이트, n-부탄올 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기의 방법으로 추출한 추출물 또는 그 추출물의 가용성 분획물은 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축하여 엑기스 형태로 사용할 수 있으며, 농축 후 건조하여 건조물의 형태로서 사용할 수 있다. In one aspect of the present invention, the Tahibo extract or the ginseng leaf extract may contain a crude extract of Tahibo or Ginseng leaf as described above, and the extract fraction of the organic solvent obtained by further extracting the crude extract with an organic solvent having a low polarity As shown in FIG. In one aspect of the present invention, examples of the organic solvent include but are not limited to hexane, methylene chloride, ethyl acetate, n-butanol, and the like. The extract or the soluble fraction of the extract extracted by the above method may be used as it is, or may be used as an extract form by concentration after filtration, and may be used as a form of dried product after concentration and drying.

본 발명의 일 측면에 있어서, 건조는 증발 건조, 분무 건조, 동결 건조일 수 있으며, 구체적으로 동결 건조시에는 -50 내지 -70℃ 에서 3~4일 동안 동결 건조를 수행할 수 있다.
In one aspect of the present invention, the drying may be evaporation drying, spray drying, or freeze-drying. Specifically, freeze-drying may be performed at -50 to -70 ° C for 3 to 4 days.

본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition according to one aspect of the present invention may be various oral or parenteral formulations. In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, soft or hard capsules, etc. These solid preparations may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, Or lactose, gelatin, and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc, and the like are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, syrups and the like. Various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like may be included in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used. have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used as the non-aqueous solvent and suspension agent. Examples of the suppository base include witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerogelatin and the like.

본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용되는 것이면 특별히 한정되지 않으며, 예를 들어 염산, 황산, 질산, 인산, 불화수소산, 브롬화수소산, 포름산 아세트산, 타르타르산, 젖산, 시트르산, 푸마르산, 말레산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 톨루엔술폰산, 나프탈렌술폰산 등을 사용할 수 있다. In one aspect of the invention, the pharmaceutical dosage forms of the compositions may be used in the form of their pharmaceutically acceptable salts, and may be used alone or in combination with other pharmaceutically active compounds, as well as in a suitable set. The salt is not particularly limited as long as it is pharmaceutically acceptable so long as it is pharmaceutically acceptable and includes, for example, hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, hydrofluoric acid, hydrobromic acid, formic acid acetic acid, tartaric acid, lactic acid, citric acid, fumaric acid, , Benzenesulfonic acid, toluenesulfonic acid, and naphthalenesulfonic acid.

본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 0.1~500 ㎎, 바람직하게는 1~100 ㎎의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.In one aspect of the present invention, the composition may be administered parenterally or orally, as desired, and may be administered in an amount of 0.1 to 500 mg, preferably 1 to 100 mg, per 1 kg of body weight per day, . ≪ / RTI > The dosage for a particular patient may vary depending on the patient's body weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, administration method, excretion rate, severity of disease, and the like.

본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 피부 외용제, 좌제, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 주사제 또는 피부 외용제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. The pharmaceutical composition according to one aspect of the present invention can be administered orally or parenterally in the form of powders, granules, tablets, soft or hard capsules, oral preparations such as suspensions, emulsions, syrups and aerosols, Suppositories, injections, sterile injectable solutions, and the like, and may be formulated in any form suitable for pharmaceutical preparations, preferably in the form of injections or external preparations for skin.

본 발명의 일 측면에 따른 조성물은, 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 경피(trandermally), 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. The composition according to one aspect of the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans, and the like by various routes such as parenteral, oral, etc. All the ways of administration can be expected, May be administered by oral, transdermal, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intramural or intracerebroventricular injection.

본 발명의 일 측면에 따른 조성물은, 통상의 기술자가 용이하게 적용할 수 있는 다양한 경로로 투여될 수 있다. 특히 본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은 피부 외용제로서 피부 표면에 도포되는 경로로 투여될 수 있다.
The composition according to one aspect of the present invention may be administered by a variety of routes that are readily applicable to those of ordinary skill in the art. In particular, the pharmaceutical composition according to one aspect of the present invention can be administered by a route applied to the skin surface as an external preparation for skin.

본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.The formulation of the food composition according to one aspect of the present invention is not particularly limited, but may be formulated into, for example, tablets, granules, powders, liquid preparations such as drinks, caramels, gels, bars and the like. The food composition of each formulation can be blended with the ingredients commonly used in the field in addition to the active ingredient without difficulty by those skilled in the art depending on the purpose of formulation or use, and synergistic effect can be obtained when the composition is applied simultaneously with other ingredients.

본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.In the food composition according to one aspect of the present invention, the determination of the dosage of the active ingredient is within the level of those skilled in the art, and its daily dose is, for example, from 0.1 mg / kg / day to 5000 mg / kg / May be 50 mg / kg / day to 500 mg / kg / day, but is not limited thereto, and may vary depending on various factors such as the age, health condition, and complication of the subject.

본 발명의 일 측면에 따른 식품 조성물은, 예를 들어, 츄잉껌, 캐러멜 제품, 캔디류, 빙과류, 과자류 등의 각종 식품류, 청량 음료, 미네랄 워터, 알코올 음료 등의 음료 제품, 비타민이나 미네랄 등을 포함한 건강기능성 식품류일 수 있다.The food composition according to one aspect of the present invention can be used for various foods such as chewing gum, caramel product, candy, ice cream, confectionery, beverage such as soft drink, mineral water, alcoholic beverage, health including vitamins and minerals It may be a functional food.

상기 외에 본 발명의 일 측면에 있어서, 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 일 측면에 있어서, 기능성 식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 일 측면에 있어서, 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 포함되는 것이 일반적이다.
In one aspect of the present invention, the food composition may further include flavors such as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors, colorants and enhancers (such as cheese and chocolate) Salts of alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonating agents used in carbonated beverages and the like. In another aspect of the present invention, the functional food compositions may include natural fruit juice and fruit juice beverages for the manufacture of beverage and vegetable beverages. These components may be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical, but in one aspect of the present invention, it is common to include from 0 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition.

이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 시험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the constitution and effects of the present invention will be described in more detail with reference to examples and test examples. However, these examples and test examples are provided for illustrative purposes only in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited by the following examples.

[실시예 1] 타히보 추출물의 제조
[Example 1] Preparation of Tahibo extract

타베부이아 아벨레인데에의 내부수피를 수확한 뒤 이를 세척 및 열풍건조하고 분쇄하여 분말화 하였다. 얻어진 타히보 분말 1kg에 70% 에탄올 3L를 가하여 상온에서 4시간 동안 환류추출한 다음, 여과한 후 40℃에서 감압 농축하여 타히보 추출물을 수득하였다. 하기 실험에서는 ㈜하티(강원도 홍천군, 대한민국)에서 구입한 타히보 추출물을 사용하였다.
The inner bark was harvested, washed and hot-air dried, pulverized and powdered. To 1 kg of the obtained Tahibo powder, 3 L of 70% ethanol was added and the mixture was refluxed at room temperature for 4 hours. Then, the mixture was filtered and concentrated under reduced pressure at 40 ° C to obtain a Tahibo extract. In the following experiment, Tahibo extract purchased from Harti (Gangwon-do, Hongcheon-gun, Korea) was used.

[실시예 2] 인삼잎 추출물의 제조
[Example 2] Preparation of ginseng leaf extract

인삼잎을 수확한 뒤 이를 세척 및 열풍건조하고 분쇄하여 분말화 하였다. 얻어진 인삼잎 분말 1kg에 70% 에탄올 3L를 가하여 상온에서 4시간 동안 환류추출한 다음, 여과한 후 40℃에서 감압 농축하여 인삼잎 추출물을 수득하였다. 하기 실험에서는 ㈜하티(강원도 홍천군, 대한민국)에서 구입한 인삼잎 추출물을 사용하였다.
After ginseng leaves were harvested, they were washed and dried with hot air and pulverized to powder. To 1 kg of the obtained ginseng leaf powder, 3 L of 70% ethanol was added and the mixture was refluxed at room temperature for 4 hours. Then, the mixture was filtered and concentrated under reduced pressure at 40 ° C to obtain ginseng leaf extract. In the following experiment, ginseng leaf extracts purchased from Harti Co., Ltd. (Hongcheon-gun, Korea) were used.

[실시예 3] 타히보 추출물과 인삼잎 추출물의 혼합물 제조
[Example 3] Preparation of mixture of Tahibo extract and ginseng leaf extract

실시예 1의 타히보 추출물과 실시예 2의 인삼잎 추출물을 각각 1 : 2 의 중량비로 혼합하며 타히보 추출물과 인삼잎 추출물의 혼합물을 제조하였다.
The Tahibo extract of Example 1 and the ginseng leaf extract of Example 2 were mixed at a weight ratio of 1: 2, respectively, to prepare a mixture of Tahibo extract and ginseng leaf extract.

[실험예 1] 타히보 추출물과 인삼잎 추출물 지표물질의 분석
[Experimental Example 1] Analysis of an indicator substance of Tahibo extract and ginseng leaf extract

(1) 타히보 추출물 지표물질의 분리, 구조분석 및 함량 분석
(1) Separation, structure analysis and content analysis of the indicator substances of Tahibo extract

타히보 추출물을 TLC(Thin layer chromatography), column chromatograph, GC 및 HPLC를 수행하여 분리하였다. 분리 결과는 도 1과 같다. The Tahibo extract was separated by TLC (thin layer chromatography), column chromatograph, GC and HPLC. The result of the separation is shown in Fig.

먼저 타히보 추출물을 Si MPLC를 이용하여 9개의 서브프렉션으로 나눈 뒤 이중 5번 프렉션을 다시 R.P prep HPLC을 통해 6개의 물질을 분리하였다.First, the Tahibo extract was divided into 9 subfractions using Si MPLC, and then the 5 fractions were subjected to R.P prep HPLC again to separate 6 substances.

각 조건은 다음과 같다.The conditions are as follows.

Si MPLC , flow : 5mL/minSi MPLC, flow: 5 mL / min

CHCl3 : MeOH = 95 : 5, 4 hours CHCl3 : MeOH = 91 : 9, 4 hoursCHCl3: MeOH = 95: 5, 4 hours CHCl3: MeOH = 91: 9, 4 hours

CHCl3 : MeOH = 90 : 10, 4 hours CHCl3 : MeOH = 80 : 20, 4 hoursCHCl3: MeOH = 90: 10, 4 hours CHCl3: MeOH = 80: 20, 4 hours

CHCl3 : MeOH = 50 : 50, 8 hours
CHCl3: MeOH = 50: 50, 8 hours

R.P prep HPLCR.P prep HPLC

40~55% MeOH for 40min40-55% MeOH for 40 min

55~100% MeOH for 45min55-100% MeOH for 45 min

~100% MeOH for 65min
~ 100% MeOH for 65 min

도 1에서 나타난 지표물질 중 TA4 및 TA5의 구조 분석을 위해 분광학적 분석법 NMR(Nuclear Magnetic Resonance)을 통해 물질의 화학구조를 확인하였다. NMR 기기는 Bruker DPX 400 MHz (9.4T)를 사용하였으며, 1H-NMR은 400 MHz, 13C-NMR은 100 MHz에서 측정하여 화학구조를 규명하였다. 물질의 구조를 분석한 결과는 도 2와 같다. In order to analyze the structure of TA4 and TA5 among the indicator materials shown in FIG. 1, the chemical structure of the substance was confirmed by NMR (nuclear magnetic resonance). Bruker DPX 400 MHz (9.4 T) was used for the NMR apparatus, and the chemical structure was determined by measuring at 400 MHz for 1 H-NMR and 100 MHz for 13 C-NMR. The result of the analysis of the structure of the material is shown in Fig.

이러한 TA4 및 TA5가 타히보 추출물에 얼마나 함유되어 있는 지 확인하기 위하여 HPLC를 수행하였으며, 수행조건은 하기 표 1과 같다. HPLC was performed to confirm the contents of TA4 and TA5 in the Tahibo extract.

ColumnColumn Shim-pack, VP-ODS, 4.6*250 mm, anal. Shim-pack, VP-ODS, 4.6 * 250 mm, anal. HPLC solvent conditionHPLC solvent condition 30~55% MeOH for 40min, gradient
55~100% MeOH for 45min, gradient
~100% MeOH for 65min, isocratic.
30-55% MeOH for 40 min, gradient
55-100% MeOH for 45 min gradient
~ 100% MeOH for 65 min, isocratic.
FlowFlow 1ml/min1 ml / min UVUV 260nm 260nm

HPLC에 따른 결과는 도 3과 같으며, 이를 표로 나타내면 하기 표 2와 같다. The results according to HPLC are shown in FIG. 3, and the results are shown in Table 2 below.

로트(lot)별 지표물질의 함량 분석Analysis of the content of indicator substances by lots   함량 (mg/g)Content (mg / g) 평균 (mg/g)Average (mg / g) 표준편차
(mg/g)
Standard Deviation
(mg / g)
1회1 time 2회Episode 2 3회3rd time TA-4TA-4 32.1532.15 32.1332.13 32.4832.48 32.2532.25 0.1960.196 TA-5TA-5 68.7168.71 69.7469.74 72.2872.28 70.2570.25 1.8371.837

(2) 인삼잎 추출물의 진세노사이드 함량 분석(2) Analysis of ginsenoside content of ginseng leaf extract

  1차 추출농축액Primary extract concentrate 2차 추출농축액Secondary extraction concentrate 평균(mg/g)Average (mg / g) 편차Deviation 평균(mg/g)Average (mg / g) 편차Deviation Rg1Rg1 10.91410.914 0.030.03 10.56810.568 0.6540.654 ReRe 26.45926.459 0.060.06 21.66121.661 1.5641.564 Rb1Rb1 0.8070.807 0.040.04 1.5991.599 0.160.16 RfRf 1.1231.123 0.020.02 1.0111.011 0.0690.069 RcRc 1.0351.035 0.070.07 1.0951.095 0.110.11 Rb2+Rb3Rb2 + Rb3 4.4834.483 0.110.11 4.4154.415 0.3330.333 Rg2Rg2 1.9081.908 0.090.09 1.1511.151 0.1880.188 Rh1Rh1 0.9110.911 0.050.05 0.5180.518 0.1080.108 RdRd 3.8473.847 0.310.31 3.3043.304 0.5330.533 F1F1 2.8342.834 0.100.10 3.0953.095 0.1860.186 Rg3Rg3 0.0670.067 0.020.02 0.0310.031 0.0220.022 CkCk 0.1030.103 0.010.01 0.0530.053 0.0080.008 Rh2Rh2 0.1470.147 0.060.06 0.0360.036 0.0270.027 합계Sum 54.63654.636 0.830.83 48.53748.537 3.5833.583 Rg1+Rb1+Rg3Rg1 + Rb1 + Rg3 11.78711.787 0.030.03 12.19712.197 0.790.79

[실험예 2] 세포배양 및 세포독성시험과 NO 생성량 측정
[Experimental Example 2] Cell culture and cytotoxicity test and determination of NO production amount

(1) 세포배양(1) Cell culture

RAW 264.7 세포(ATCC에서 구입)는 10% 소태아혈청(fetal bovine serum)(FBS) 및 항생제 (100 μg/ml 스트렙토마이신(streptomycin)과 100 U/ml 페니실린(penicillin))가 첨가된 DMEM 배지(Dulbecco's modified eagle's medium)으로 37℃, 7% CO2 배양기에서 100 mm 배양조로 배양하였고 2일에서 3일에 한 번씩 분주함과 동시에 배양액을 갈아주었다.
RAW 264.7 cells (purchased from ATCC) were cultured in DMEM medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and antibiotics (100 μg / ml streptomycin and 100 U / ml penicillin) Dulbecco's modified eagle's medium was cultured in a 100 mM culture medium in a 7% CO2 incubator at 37 ° C, and the culture medium was changed every 2 to 3 days.

(2) 세포독성시험(2) Cytotoxicity test

6 웰 플레이트에 1×106 세포(cells)/ml로 세포를 동일하게 분주하고 24시간 동안 배양한 후 실시예 3에 따른 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물의 혼합물을 0ug/ml, 10ug/ml, 50ug/ml, 100ug/ml, 200ug/ml의 농도로 DMEM(10중량% FBS + 1중량% PS)배지에 희석하여 각 플레이트에 첨가 하였다. 24시간이 지난 후 MTT시약(Sigma사에서 구입)을 넣고 4시간 동안 어두운 곳에서 배양한 후 상등액을 제거하고 형성된 MTT 포르마잔(formazan)을 이소프로판올(isopropanol) 1 ml에 첨가하여 녹였다. 10분 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이러한 결과를 도 4에 나타내었다. The cells were equally divided into 6-well plates at 1 × 10 6 cells / ml and cultured for 24 hours. Then, the mixture of the Tahibo extract and the ginseng leaf extract according to Example 3 was added at a concentration of 0 ug / ml, 10 ug / ml, 50 ug (10% by weight FBS + 1% by weight PS) medium at a concentration of 100 ug / ml, 100 ug / ml and 200 ug / ml and added to each plate. After 24 hours, the MTT reagent (purchased from Sigma) was added and incubated for 4 hours in the dark. The supernatant was removed and MTT formazan formed was dissolved in 1 ml of isopropanol. Absorbance was measured at 540 nm after 10 minutes. These results are shown in Fig.

도 4에 따르면 실시예 3에 따른 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물의 혼합물은 200ug/ml의 농도에서도 0.5ug/ml 농도의 LPS보다 더 높은 세포 생존력을 나타내었으며, 모든 농도에서 세포생존력이 90%이상 유지되는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물의 혼합물은 세포 독성이 없는 것을 확인할 수 있으며, 이는 타히보 추출물과 인삼잎 추출물 각각을 처리한 경우에도 유사하게 나타날 것이다.
According to FIG. 4, the mixture of the Tahibo extract and the ginseng leaf extract according to Example 3 exhibited higher cell viability than the 0.5 ug / ml LPS even at a concentration of 200 ug / ml, and the cell viability was maintained at 90% . Therefore, it can be confirmed that the mixture of Tahibo and Ginseng Leaf Extracts is not cytotoxic, and it will be similar when treated with each of Tahibo and Ginseng Leaf Extracts.

(3) NO 생성량 측정(3) Measurement of NO production amount

RAW 264.7 세포(ATCC)에 실시예 3에 따른 추출물(0ug/ml, 10ug/ml, 100ug/ml, 200ug/ml)과 양성대조군으로서 LPS(0.5ug/ml)를 처리한 후 18시간동안 배양 하였다. 얻어진 세포 배양액으로 그리스 시약 시스템(Griess reagent system)을 이용하여 아질산염(Nitrite)(니트라이트)를 측정하였다. 이러한 결과를 도 5에 나타내었다. The extracts (0 ug / ml, 10 ug / ml, 100 ug / ml, 200 ug / ml) according to Example 3 and LPS (0.5 ug / ml) as a positive control were treated with RAW 264.7 cells (ATCC) . Nitrite (nitrite) was measured using the Griess reagent system as the cell culture solution. These results are shown in Fig.

도 5에 따르면 실시예 3에 따른 추출물의 농도가 높아질수록 아질산염의 생성량이 증가하는 것을 확인할 수 있다. 아질산염은 외부 자극으로부터 각 사이토카인이 활성화 되면 분비되는 인자로서 면역활성에 관여하고 있다. 따라서 아질산염의 양이 증가하게 되면 면역활성을 촉진시킨다는 것을 의미하게 된다. 그러므로, 타히보 추출물과 인삼잎 추출물의 혼합물이 그 농도가 증가할수록 아질산염의 생성량이 증가하는 것으로 보아, 이러한 추출물들은 면역 증강 효과가 있음을 확인할 수 있다.
FIG. 5 shows that the higher the concentration of the extract according to Example 3, the greater the amount of nitrite produced. Nitrite is involved in immune activity as a secreted factor when each cytokine is activated from external stimuli. Therefore, an increase in the amount of nitrite means that the immune activity is promoted. Therefore, as the concentration of the Tahibo extract and the ginseng leaf extract is increased, the amount of nitrite is increased. Therefore, these extracts have immunomodulatory effect.

[실험예 3] 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물의 면역 증강 여부 실험
[Experimental Example 3] Experiments on immunity enhancement of Tahibo extract and ginseng leaf extract

(1) 웨스턴 블롯 분석(1) Western blot analysis

세포내에서 존재하는 단백질들은 분석하기 위하여 웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis)을 이용하였다. 전기영동을 위해 실시예 3에 따른 추출물과 양성대조군으로서 LPS를 첨가한 세포들을 라이시스 버퍼(lysis buffer) (50 mM Tris-HCl pH 7.5, 1% NP-40, 0.25% 소디움 디옥시콜레이트(sodium deoxycholate), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 μg/ml 류펩틴(leupeptin), 1 mM Na3VO4, 1 mM NaF) 에 녹인 후 4℃ 에서 30분 동안 배양(incubation) 하였다. 그 후 소니케이션(sonication) 되어 13,500rpm에서 15분간 원심 분리하여 상층액만 모았다. 동일한 양의 단백질을 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacylamide geel electrophoresis) 로 분리시킨 후, 단백질을 니트로셀룰로오스 막(nitrocellulose membrane)으로 트랜스퍼(transfer)하였다. 이 막을 항체의 비특이적 결합을 차단하기 위해 블로킹 버퍼(blocking buffer) (10% 무지방 분유(non-fat dry milk)와 0.1% Tween 20을 함유한 TBS용액)에서 2시간 동안 반응시켰다. TBST(137mM NaCl, 20mM Tris-HCL, pH7.6, 0.1%(v/v) Tween 20)로 10분씩 3번 세척한 후 iNOS(Rabbit, BD), COX-2(Goat, Santa Cruz), ERK(Rabbit, Cell Signalling), p-ERK(Rabbit, Cell Signalling), p38(Rabbit, Cell Signalling), p-p38(Rabbit, Cell Signalling), JNK(Rabbit, Cell Signalling), p-JNK(Rabbit, Cell Signalling), p-p65(Rabbit, Cell Signalling), IκBα(Rabbit, Cell Signalling), β-actin(Goat, Santa Cruz) 항체(antibody)로 4℃에서 하룻 밤 동안(overnight) 반응시킨 후 TBST로 10분씩 3번 닦은 후 1/10,000으로 희석(dilution)한 퍼옥시다아제-결합 안티-폴리클로날 래빗, 고트 IgG 항체(peroxidase-conjugated anti-polyclonal rabbit, goat IgG antibody)로 다시 2시간 동안 반응시켰다. 항체와 반응하고 있는 항원은 ECL(enhanced chemiluminescence) 기질과 반응시켜 X 선 필름(X-ray film)을 덮어서 감광시켰다. iNOS 및 COX-2에 대한 웨스턴 블롯 결과는 도 6, p65, IκBα, 및 β-actin에 대한 결과는 도 7, 나머지 ERK, p-ERK, p38, p-p38, JNK, 및 p-JNK 에 대한 결과는 도 8에 나타내었다.Western blot analysis was used to analyze the proteins present in the cells. For the electrophoresis, the extract according to Example 3 and the cells to which LPS was added as a positive control were suspended in lysis buffer (50 mM Tris-HCl pH 7.5, 1% NP-40, 0.25% sodium dioxycholate deoxycholate), and incubated (incubation) for 30 min at 4 ℃ was dissolved in 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 μg / ml leupeptin (leupeptin), 1 mM Na3VO 4 , 1 mM NaF). After sonication, the supernatant was collected by centrifugation at 13,500 rpm for 15 minutes. The same amount of protein was separated by SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacylamide geel electrophoresis), and the protein was transferred to a nitrocellulose membrane. The membrane was incubated in a blocking buffer (TBS solution containing 10% non-fat dry milk and 0.1% Tween 20) for 2 hours to block nonspecific binding of the antibody. (Rabbit, BD), COX-2 (Goat, Santa Cruz), and ERK (Invitrogen) were incubated for 10 min with TBST (137 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl, pH 7.6, (Rabbit, Cell Signaling), p-ERK (Rabbit, Cell Signaling), p38 (Rabbit, Cell Signaling), p-p38 (Rabbit, Cell Signaling), JNK Were incubated overnight at 4 ° C with antibodies to p-p65 (Rabbit, Cell Signaling), IκBα (Rabbit, Cell Signaling) and β-actin (Goat, Santa Cruz) And then reacted for 2 hours with peroxidase-conjugated anti-polyclonal rabbit and goat IgG antibody (peroxidase-conjugated anti-polyclonal rabbit) diluted 1 / 10,000. The antigen reacting with the antibody was sensitized by covering the X-ray film with an ECL (enhanced chemiluminescence) substrate. The Western blot results for iNOS and COX-2 show that the results for FIG. 6, p65, IκBα, and β-actin are shown in FIG. 7 for the remaining ERK, p-ERK, p38, p-p38, JNK, and p- The results are shown in Fig.

도 6에 따르면, 실시예 3에 따른 추출물의 농도가 높아질수록 iNOS 및 COX-2의 발현이 증가하는 것을 확인할 수 있으며, 대식세포가 활성화되면 iNOS 와 COX-2의 발현이 증가하게 된다. 따라서, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 대식세포를 활성화시켜 현저한 면역 증강 효과를 나타냄을 확인할 수 있다. FIG. 6 shows that the expression of iNOS and COX-2 is increased as the concentration of the extract according to Example 3 is increased. When the macrophage is activated, the expression of iNOS and COX-2 is increased. Therefore, it can be confirmed that the composition according to one aspect of the present invention activates macrophages and shows a remarkable immunostimulating effect.

도 7에 따르면 실시예 3에 따른 추출물을 15분 동안 처리하는 경우에 NF-κB가 가장 활성화 되는 것을 확인하였으며(A), 농도 의존적으로 p65와 IκBα의 분해가 증가하는 것을 확인할 수 있었다(B). 이러한 결과에 따르면 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 NF-κB 경로를 활성화 시킨다. NF-κB는 염증반응, 면역반응 등 다양한 유전자 발현에 관여하는 전사인자에 해당하며, 이러한 경로를 촉진하면 대식세포를 화성화시키게 되므로 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 현저한 면역 증강 효과 및 대식세포 활성화 효과를 나타냄을 확인할 수 있다.7, it was confirmed that NF-κB was most activated when the extract according to Example 3 was treated for 15 minutes (A), and the decomposition of p65 and IκBα was increased in a concentration-dependent manner (B) . According to these results, the composition according to one aspect of the present invention activates the NF-kB pathway. NF-κB is a transcription factor involved in expression of various genes such as inflammation reaction and immune response. Since promoting such pathway causes the macrophages to be chemically transformed, the composition according to one aspect of the present invention has a remarkable immunostimulating effect and macrophages Indicating the activation effect.

도 8에 따르면 실시예 3에 따른 추출물은 15분 처리하는 경우에 단백질들을 가장 활성화시켰으며(A), 농도 의존적으로 ERK, p38, JNK의 인산화를 증가시키는 것을 확인할 수 있다(B). MAPKs는 ERK, p38, 및 JNK로 이루어져 있으며, 활성화되면 세포 활성, 분화 등을 조절하는 신호전달 단백질에 해당한다. 따라서 상기 결과에 따르면 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 MAPKs 경로를 촉진시키는 것을 확인할 수 있으며 이로 인하여 대식세포를 활성화 시키게 되므로 현저한 면역 증강 효과 및 대식세포 활성화 효과를 나타낸다.
According to FIG. 8, the extract according to Example 3 was most active when proteins were treated for 15 minutes (A), and phosphorylation of ERK, p38 and JNK was increased in a concentration-dependent manner (B). MAPKs are composed of ERK, p38, and JNK, and when activated, correspond to signal transduction proteins that regulate cell activation, differentiation, and the like. Therefore, according to the above results, it can be confirmed that the composition according to one aspect of the present invention promotes the pathway of MAPKs, and thus activates macrophages, thereby exhibiting a remarkable effect of enhancing immunity and macrophages.

(2) 실시간 PCR 분석(2) Real-time PCR analysis

실시예 3에 따른 추출물과 양성대조군으로서 LPS를 첨가한 RAW 264.7 세포(ATCC)에서 트리아졸 시약 키트(Trizol reagent kit)를 이용하여 총 RNA를 추출하였다. 분리 추출된 RNA (2 μg)은 10,000 U 역전사효소(reverse transcriptase)와 0.5g/L 올리고(oligo)-(dT)15 프라이머(primer)로 역전사 과정을 실시한 후 SYBER Green과 iNOS, COX-2, TNF-α, IL-6, IL-1β, β-actin의 프라이머를 이용하여 실시간 PCR을 실시하였다. 실시간 PCR은 초기변성 95℃ 30초, 변성은 95℃ 5초, 어닐링(annealing)은 55℃ 15초, 신장반응은 72℃ 10초로 하여 40 사이클을 진행했다. 용해곡선은 55℃에서 시작하여 95℃를 종말점으로 0.5℃씩 상승시키며 80번을 반응하여 원하는 형광 값을 검출하였다. 프라이머 서열은 하기 표 4와 같다. iNOS, 및 COX-2에 대한 mRNA 발현 측정 결과는 도 9에 나타내었으며, TNF-α, IL-6, IL-1β, β-actin에 대한 결과는 도 10에 나타내었다. Total RNA was extracted from RAW 264.7 cells (ATCC) supplemented with the extract according to Example 3 and LPS as a positive control using a Trizol reagent kit. The extracted RNA (2 μg) was reverse-transcribed with 10,000 U reverse transcriptase and 0.5 g / L oligo- (dT) 15 primer, and SYBER Green and iNOS, COX-2, Real-time PCR was performed using primers of TNF-α, IL-6, IL-1β, and β-actin. Real-time PCR was carried out for 40 cycles with initial denaturation at 95 ° C for 30 seconds, denaturation at 95 ° C for 5 seconds, annealing at 55 ° C for 15 seconds, and elongation at 72 ° C for 10 seconds. The dissolution curve was started at 55 ° C and increased by 0.5 ° C from 95 ° C to the end point. The fluorescence value was detected by reacting at 80 ° C. The primer sequences are shown in Table 4 below. iNOS, and COX-2 were shown in FIG. 9. The results of TNF-α, IL-6, IL-1β, and β-actin are shown in FIG.

iNOS iNOS 정방향 프라이머(Forward primer)Forward primer TTCCAGAATCCCTGGACAAG(SEQ ID NO: 1)TTCCAGAATCCCTGGACAAG (SEQ ID NO: 1) 역방향 프라이머(Reverse primer)Reverse primer TGGTCAAACTCTTGGGGTTC(SEQ ID NO: 2)TGGTCAAACTCTTGGGGTTC (SEQ ID NO: 2) COX-2COX-2 정방향 프라이머Forward primer AGAAGGAAATGGCTGCAGAA(SEQ ID NO: 3)AGAAGGAAATGGCTGCAGAA (SEQ ID NO: 3) 역방향 프라이머Reverse primer GCTCGGCTTCCAGTATTGAG(SEQ ID NO: 4)GCTCGGCTTCCAGTATTGAG (SEQ ID NO: 4) TNF-αTNF-a 정방향 프라이머Forward primer AGCCCCCAGTCTGTATCCTT(SEQ ID NO: 5)AGCCCCCAGTCTGTATCCTT (SEQ ID NO: 5) 역방향 프라이머Reverse primer CATTCGAGGCTCCAGTGAAT(SEQ ID NO: 6)CATTCGAGGCTCCAGTGAAT (SEQ ID NO: 6) IL-6IL-6 정방향 프라이머Forward primer CAAGAAAGACAAAGCCAGAGTCCTT(SEQ ID NO: 7)CAAGAAAGACAAAGCCAGAGTCCTT (SEQ ID NO: 7) 역방향 프라이머Reverse primer TGGATGGTCTTGGTCCTTAGCC(SEQ ID NO: 8)TGGATGGTCTTGGTCCTTAGCC (SEQ ID NO: 8) IL-1βIL-1? 정방향 프라이머Forward primer GGGCCTCAAAGGAAAGAATC(SEQ ID NO: 9)GGGCCTCAAAGGAAAGAATC (SEQ ID NO: 9) 역방향 프라이머Reverse primer TACCAGTTGGGGAACTCTGC(SEQ ID NO: 10)TACCAGTTGGGGAACTCTGC (SEQ ID NO: 10) β-actinβ-actin 정방향 프라이머Forward primer AGTGTGACGTTGACATCCGTAAAGA(SEQ ID NO: 11)AGTGTGACGTTGACATCCGTAAAGA (SEQ ID NO: 11) 역방향 프라이머Reverse primer GGACAGTGAGGCCAGGATGG(SEQ ID NO: 12)GGACAGTGAGGCCAGGATGG (SEQ ID NO: 12)

도 9에 따르면 농도의존적으로 iNOS 및 COX-2의 mRNA 발현량이 증가하는 것을 확인할 수 있으며, 대식세포가 활성화되면 iNOS 와 COX-2의 발현이 증가하게 된다. 따라서, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 대식세포를 활성화시켜 현저한 면역 증강 효과를 나타냄을 확인할 수 있다FIG. 9 shows that mRNA expression levels of iNOS and COX-2 are increased in a concentration-dependent manner. When macrophages are activated, expression of iNOS and COX-2 is increased. Therefore, it can be confirmed that the composition according to one aspect of the present invention activates macrophages and shows a remarkable immunostimulating effect

도 10에 따르면 농도의존적으로 β-actin에 대한 비율로서 TNF-α, IL-6, 및 IL-1β의 발현량이 증가하는 것을 확인할 수 있으며, 대식세포가 활성화되면 TNF-α, IL-6, 및 IL-1β의 발현이 증가하게 된다. 따라서, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 대식세포를 활성화시켜 현저한 면역 증강 효과를 나타냄을 확인할 수 있다. FIG. 10 shows that TNF-α, IL-6, and IL-1β are increased in a concentration dependent manner on β-actin. When macrophages are activated, TNF-α, IL-6, Lt; RTI ID = 0.0 > IL-1. ≪ / RTI > Therefore, it can be confirmed that the composition according to one aspect of the present invention activates macrophages and shows a remarkable immunostimulating effect.

(3) ELISA(3) ELISA

샌드위치(Sandwich) ELISA 를 이용하여 TNF-α, IL-6, IL-1β의 발현을 측정하였다. R&D 시스템을 이용하여 실험을 수행하였다. 먼저 캡쳐 항체(capture antibody)를 96 웰에 2 μg/ml 되게 넣었고 37℃에서 2시간 배양 한 후 PBST로 3회 세척 하였다. 블로킹 용액(Blocking solution) (1% BSA in PBS)을 400 μl씩 넣어준 후 37℃에서 1시간 배양 한 후 양성 대조군으로서 LPS(0.5ug/ml)와 실시예1(50ug/ml, 200ug/ml), 실시예 2(50ug/ml, 200ug/ml), 실시예 3(50ug/ml, 200ug/ml)에 따른 추출물을 첨가한 시료 세포 배양액을 각 웰에 넣어 준 후 37℃에서 2시간 배양하였다. PBST로 3회 세척 한 후, 디텍션 항체(detection antibody)를 각 웰당 100 ng/ml 넣고, 37℃에서 2시간 배양 한 후 PBST 로 3회 세척 하였고 스트렙타아비딘(streptavidin)이 컨쥬게이션(conjugation) 된 HRP(horseradish peroxidase)를 200:1 로 희석하여 각 웰에 50 μl 넣었다. 37℃ 에서 30분간 배양 한 후 PBST 로 3회 세척 하였다. TMB 용액을 50 μl 넣고 상온에서 30분간 배양 한 후 반응 정지 용액(stop solution)을 TMB 용액과 1:1 이 되게 넣어 주었다. 이 후 450 nm에서 흡광도를 ELISA 리더(reader)로 측정하였다. 이러한 결과는 도 11 내지 도 13에 나타내었다.
Expression of TNF-α, IL-6, and IL-1β was measured using a sandwich ELISA. Experiments were conducted using the R & D system. First, capture antibody was added at 2 μg / ml in 96 wells, incubated at 37 ° C for 2 hours, and washed three times with PBST. LPS (0.5 ug / ml) and Example 1 (50 ug / ml, 200 ug / ml) as a positive control group were added to each well after adding 400 μl of blocking solution (1% BSA in PBS) ), Example 2 (50 ug / ml, 200 ug / ml) and Example 3 (50 ug / ml, 200 ug / ml) were added to each well and cultured at 37 ° C for 2 hours . After washing three times with PBST, 100 ng / ml of detection antibody was added to each well, incubated at 37 ° C for 2 hours, washed three times with PBST, and conjugated with streptavidin HRP (horseradish peroxidase) was diluted to 200: 1 and 50 μl was added to each well. After incubation at 37 ° C for 30 minutes, the cells were washed three times with PBST. After adding 50 μl of TMB solution and incubating at room temperature for 30 minutes, the stop solution was added 1: 1 with TMB solution. The absorbance at 450 nm was then measured with an ELISA reader. These results are shown in FIG. 11 to FIG.

도 11에 따르면 본 발명의 일 측면에 따른 조성물로서 타히보 추출물(타, 이하 도면에서 동일), 인삼잎 추출물(잎, 이하 도면에서 동일) 및 타히보 추출물과 인삼잎 추출물의 혼합물(타+잎, 이하 도면에서 동일)의 IL-1β 생성 촉진효과를 확인할 수 있다. 타히보 추출물의 경우 200ug/ml를 처리한 경우 IL-1β 생성 촉진효과를 나타내었으며 인삼잎 추출물의 경우 50ug/ml와 200ug/ml에서 모두 생성 촉진효과를 나타내었다. 특히 타히보와 인삼잎 추출물의 혼합물은 각각의 추출물 보다 뛰어난 IL-1β 생성 촉진 효과를 나타내었으며, 특히 200ug/ml에서는 LPS와 유사한 수준의 촉진효과를 나타내었다. 11, a composition according to one aspect of the present invention is a mixture of Tahibo extract (the same as in the following drawings), ginseng leaf extract (leaves, same in the drawings) and Tahibo extract and ginseng leaf extract The same is true in the figure). In the case of Tahibo extract, IL-1β production was stimulated by treatment with 200 ug / ml. In the case of ginseng leaf extract, both 50 ug / ml and 200 ug / ml stimulated the production. In particular, the mixture of Tahibo and Ginseng Leaf Extracts promoted IL-1β production better than that of each extract. Especially, at 200 ug / ml, the stimulation effect was similar to that of LPS.

도 12에 따르면 본 발명의 일 측면에 따른 조성물들의 IL-6 생성 촉진효과를 확인할 수 있다. 특히 인삼잎 추출물의 경우 50ug/ml 및 200ug/ml에서 LPS와 유사한 수준으로 IL-6의 생성을 촉진하는 효과를 나타내었으며, 타히보 추출물과 인삼잎 추출물의 혼합물은 이보다 더 뛰어난 생성 촉진효과를 나타내었다. FIG. 12 shows the effect of promoting IL-6 production of the compositions according to one aspect of the present invention. In particular, ginseng leaf extract promoted the production of IL-6 at a level similar to that of LPS at 50 ug / ml and 200 ug / ml, and a mixture of Tahibo extract and ginseng leaf extract showed a more effective stimulating effect .

도 13에 따르면 본 발명의 일 측면에 따른 조성물들의 TNF-α생성 촉진효과를 확인할 수 있다. 타히보 추출물의 경우 200ug/ml에서 TNF-α생성 촉진 효과를 나타내었으며, 특히 인삼잎 추출물의 경우 50ug/ml 및 200ug/ml에서 모두 LPS와 비슷하거나 이보다 뛰어난 TNF-α생성 촉진 효과를 나타내었으며 타히보 추출물과 인삼잎 추출물의 혼합물의 경우 그보다 더 뛰어난 효과를 나타내었다.13, the TNF-α production promoting effect of the compositions according to an aspect of the present invention can be confirmed. TNF-α production was stimulated at 200 ug / ml in Tahibo extract. In particular, 50 ug / ml and 200 ug / ml of ginseng leaf extract stimulated TNF-α production similar to or better than LPS, And ginseng leaf extract were more effective than those of Ginseng leaf extract.

따라서, 상기 결과를 살펴보면 본 발명의 일 측면에 따른 타히보 추출물과 인삼잎 추출물 각각은 현저한 면역 증강 효과를 나타낸다는 점을 확인할 수 있으며, 이들의 혼합물은 그보다 더 뛰어난 면역 증강효과를 가진다는 점을 확인할 수 있다.
Accordingly, it can be seen from the above results that each of the Tahibo extract and the Ginseng Leaf extract according to an aspect of the present invention shows a remarkable immunostimulating effect, and that the mixture thereof has a more excellent immunity enhancing effect .

본 발명의 일 측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
Formulation examples of compositions according to one aspect of the present invention are described below, but may be applied to various other formulations, which are not intended to be limiting but merely illustrative of the invention.

[제형예 1] 연질 캡슐[Formulation Example 1] Soft capsule

실시예 3의 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 팜유 2mg, 식물성 경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 9mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 혼합하여 연질 캡슐 충진액을 제조한다. 1 캡슐당 400㎎씩 충진하여 연질 캡슐을 제조한다. 그리고, 상기와 별도로 젤라틴 66 중량부, 글리세린 24 중량부 및 솔비톨액 10 중량부의 비율로 연질 캡슐 시트를 제조하고 상기 충진액을 충진시켜 본 발명의 일 측면에 따른 조성물 400mg이 함유된 연질 캡슐을 제조한다.
The soft capsule filling liquid was prepared by mixing the Tahibo extract of Example 3 and 8 mg of ginseng leaf extract, 9 mg of vitamin E, 9 mg of vitamin C, 2 mg of palm oil, 8 mg of vegetable hardening oil, 4 mg of yellow radish and 9 mg of lecithin and mixing them according to a conventional method . 400 mg per capsule is filled to prepare a soft capsule. Separately from this, a soft capsule sheet was prepared in a ratio of 66 parts by weight of gelatin, 24 parts by weight of glycerin and 10 parts by weight of sorbitol solution, and filled with the filling solution to prepare a soft capsule containing 400 mg of the composition according to one aspect of the present invention do.

[제형예 2] 정제[Formulation Example 2] Tablets

실시예 3의 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 갈락토올리고당 200㎎, 유당 60㎎ 및 맥아당 140㎎을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르(sugar ester) 6㎎을 첨가한다. 이들 조성물 500mg을 통상의 방법으로 타정하여 정제를 제조한다.
The sugar extracts of Example 3 were mixed with 8 mg of ginseng leaf extract, 9 mg of vitamin E, 9 mg of vitamin C, 200 mg of galactooligosaccharide, 60 mg of lactose and 140 mg of maltose, granulated using a fluid bed dryer, 6 mg. 500 mg of these compositions are tabletted by conventional methods to prepare tablets.

[제형예 3] 드링크제[Formulation Example 3] Drinking agent

실시예 3의 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300㎖를 가하여 각 병에 200㎖씩 되도록 충진한다. 병에 충진한 후 130℃에서 4∼5초간 살균하여 드링크제를 제조한다.
After mixing 8 mg of the Tahibo extract of Example 3, 9 mg of vitamin E, 9 mg of vitamin C, 10 g of glucose, 0.6 g of citric acid and 25 g of liquid oligosaccharide, 300 ml of purified water is added and 200 ml of each solution is filled. It is filled in a bottle and sterilized at 130 ° C for 4 to 5 seconds to prepare a drink.

[제형예 4] 과립제[Formulation Example 4]

실시예 3의 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 무수결정 포도당 250㎎ 및 전분 550㎎을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.
Tabiha extract of Example 3, ginseng leaf extract, 8 mg of vitamin E, 9 mg of vitamin C, 250 mg of anhydrous crystalline glucose and 550 mg of starch were mixed and granulated into granules using a fluidized bed granulator, do.

[제형예 5] 주사제[Formulation Example 5]

하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조하였다.Injections were prepared in a conventional manner according to the composition shown in Table 5 below.

배합 성분Compounding ingredient 함량content 실시예 3의 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물The Tahibo extract and the ginseng leaf extract of Example 3 10-50 mg 10-50 mg 주사용 멸균 증류수Sterile sterilized water for injection 적량Suitable amount pH 조절제pH adjusting agent 적량Suitable amount

[제형예 6] 건강기능식품[Formulation Example 6] Health functional food

하기 표 6에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강기능식품을 제조하였다.Health functional foods were prepared according to the compositions shown in Table 6 below in a conventional manner.

배합 성분Compounding ingredient 함량content 실시예 3의 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물The Tahibo extract and the ginseng leaf extract of Example 3 20mg20 mg 비타민 A 아세테이트Vitamin A acetate 70μg70 μg 비타민 EVitamin E 1.0mg1.0 mg 비타민 B1Vitamin B1 0.13mg0.13 mg 비타민 B2Vitamin B2 0.15mg0.15 mg 비타민 B6Vitamin B6 0.5mg0.5 mg 비타민 B12Vitamin B12 0.2μg0.2 μg 비타민 CVitamin C 10mg10 mg 비오틴Biotin 10μg10 μg 니코틴산아미드Nicotinic acid amide 1.7mg1.7 mg 엽산Folic acid 50μg50 μg 판토텐산 칼슘Calcium pantothenate 0.5mg0.5 mg 황산 제1철Ferrous sulfate 1.75mg1.75 mg 산화아연Zinc oxide 0.82mg0.82 mg 탄산마그네슘Magnesium carbonate 25.3mg25.3 mg 제1인산칼륨Potassium monophosphate 15mg15 mg 제2인산칼슘Dicalcium phosphate 55mg55 mg 구연산칼륨Potassium citrate 90mg90 mg 탄산칼슘Calcium carbonate 100mg100 mg 염화마그네슘Magnesium chloride 24.8mg24.8 mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Although the composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is comparatively mixed with a component suitable for a health functional food as a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified.

[제형예 7] 건강 음료[Formulation Example 7] Health drinks

하기 표 7에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강음료를 제조하였다.Health drinks were prepared in a conventional manner according to the composition shown in Table 7 below.

배합 성분Compounding ingredient 함량content 실시예 3의 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물The Tahibo extract and the ginseng leaf extract of Example 3 1000mg1000 mg 구연산Citric acid 1000mg1000 mg 올리고당oligosaccharide 100 g100 g 타우린Taurine 1g1g 정제수Purified water 잔량Balance

통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균한다.
The above components are mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and the mixture is stirred and heated at 85 DEG C for about 1 hour, and then the solution is sterilized by filtration.

[제형예 8] 애견용 사료[Formulation Example 8] Feed for dogs

하기 표 8에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 애견용 사료 조성물을 제조하였다. Feed compositions for dogs were prepared in a conventional manner according to the composition shown in Table 8 below.

배합 성분Compounding ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 3의 타히보 추출물 및 인삼잎 추출물The Tahibo extract and the ginseng leaf extract of Example 3 1One 대두박Soybean meal 1515 rice 55 우육골분Raw meat meal 1515 L-카르니틴L-carnitine 0.050.05 비타민 CVitamin C 0.20.2 식염saline 0.250.25 옥수수분말Corn powder 잔량(사료 조성물이 100중량%가 되도록)The remaining amount (so that the feed composition is 100% by weight)

통상의 애견용 사료 조성물의 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음 익스트루더(Extruder)에 투입하고 압출 후 절단한 다음 건조하여 애견용 사료 조성물을 제조하였다.The above ingredients were mixed according to a conventional method for preparing a dog feed composition, and the mixture was put into an extruder, cut out after extrusion, and dried to prepare a dog feed composition.

<110> Hongcheon Institute of Medicinal Herb <120> COMPOSITION FOR IMMUNE ENHANCEMENT COMPRISING TAHEEBO EXTRACT OR GINSENG LEAF EXTRACT <130> 14p259ind <160> 12 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of iNOS <400> 1 ttccagaatc cctggacaag 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of iNOS <400> 2 tggtcaaact cttggggttc 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of COX-2 <400> 3 agaaggaaat ggctgcagaa 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of COX-2 <400> 4 gctcggcttc cagtattgag 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of TNF-alpha <400> 5 agcccccagt ctgtatcctt 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of TNF-alpha <400> 6 cattcgaggc tccagtgaat 20 <210> 7 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of IL-6 <400> 7 caagaaagac aaagccagag tcctt 25 <210> 8 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of IL-6 <400> 8 tggatggtct tggtccttag cc 22 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of IL-1 beta <400> 9 gggcctcaaa ggaaagaatc 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of IL-1 beta <400> 10 taccagttgg ggaactctgc 20 <210> 11 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of beta-actin <400> 11 agtgtgacgt tgacatccgt aaaga 25 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of beta-actin <400> 12 ggacagtgag gccaggatgg 20 <110> Hongcheon Institute of Medicinal Herb <120> COMPOSITION FOR IMMUNE ENHANCEMENT COMPRISING TAHEEBO EXTRACT OR GINSENG          LEAF EXTRACT <130> 14p259ind <160> 12 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of iNOS <400> 1 ttccagaatc cctggacaag 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of iNOS <400> 2 tggtcaaact cttggggttc 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of COX-2 <400> 3 agaaggaaat ggctgcagaa 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of COX-2 <400> 4 gctcggcttc cagtattgag 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of TNF-alpha <400> 5 agcccccagt ctgtatcctt 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of TNF-alpha <400> 6 cattcgaggc tccagtgaat 20 <210> 7 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of IL-6 <400> 7 caagaaagac aaagccagag tcctt 25 <210> 8 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of IL-6 <400> 8 tggatggtct tggtccttag cc 22 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of IL-1 beta <400> 9 gggcctcaaa ggaaagaatc 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of IL-1 beta <400> 10 taccagttgg ggaactctgc 20 <210> 11 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer of beta-actin <400> 11 agtgtgacgt tgacatccgt aaaga 25 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer of beta-actin <400> 12 ggacagtgag gccaggatgg 20

Claims (15)

타히보(Taheebo) 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 조성물.Wherein the composition comprises at least one of Taheebo extract and Ginseng leaf extract as an active ingredient. 제1항에 있어서, 타히보(Taheebo) 추출물 및 인삼잎 추출물 중 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 대식세포 활성화용 조성물.The composition for activating macrophages according to claim 1, which comprises at least one of Taheebo extract and Ginseng leaf extract as an active ingredient. 제1항 또는 제2항에 있어서,
타히보 추출물 및 인삼잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
A composition comprising the Tahibo extract and the ginseng leaf extract as an active ingredient.
제3항에 있어서,
타히보 추출물 및 인삼잎 추출물의 중량비는 1:0.1 내지 1:10인 조성물.
The method of claim 3,
Wherein the weight ratio of the Tahibo extract and the ginseng leaf extract is 1: 0.1 to 1:10.
제4항에 있어서,
타히보 추출물 및 인삼잎 추출물의 중량비는 1:0.5 내지 1:2인 조성물.
5. The method of claim 4,
Wherein the weight ratio of the Tahibo extract and the ginseng leaf extract is 1: 0.5 to 1: 2.
제1항 또는 제2항에 있어서,
유효성분은 조성물 전체 부피를 기준으로 1 μg/ml 내지 500 μg/ml인 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
Wherein the active ingredient is from 1 [mu] g / ml to 500 [mu] g / ml based on the total volume of the composition.
제1항 또는 제2항에 있어서,
타히보는 태베부이아 아벨레인데에(Tabebuia Avellanedae)의 내부 수피, 잎, 꽃, 열매, 줄기 및 뿌리로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
Wherein Tahibo is at least one selected from the group consisting of inner bark, leaf, flower, fruit, stem and root of Tabebuia Avellanedae .
제7항에 있어서,
타히보는 태베부이아 아벨레인데에의 내부 수피인 조성물.
8. The method of claim 7,
&Lt; RTI ID = 0.0 &gt; Tahibobia &lt; / RTI &gt;
제1항 또는 제2항에 있어서,
타히보 추출물 또는 인삼잎 추출물은 물, 유기용매 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 추출물인 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
Wherein the Tahibo extract or the ginseng leaf extract is at least one extract selected from the group consisting of water, an organic solvent and a mixture thereof.
제1항 또는 제2항에 있어서,
타히보 추출물을 포함하는 조성물은 타히보 추출물의 총 중량을 기준으로
10mg/g 내지 60mg/g의 6-O-(3,4-디메톡시-벤조일)-아주골; 또는
10mg/g 내지 200mg/g의 6-O-(4-메톡시-벤조일)-아주골을 포함하는 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
The composition comprising the Tahibo extract is based on the total weight of the Tahibo extract
10 mg / g to 60 mg / g 6- O- (3,4-dimethoxy-benzoyl) -azachidol; or
A composition comprising 10 mg / g to 200 mg / g of 6- O- (4-methoxy-benzoyl) -succinone.
제1항 또는 제2항에 있어서,
인삼잎 추출물을 포함하는 조성물은 인삼잎 추출물의 총 중량을 기준으로
7 내지 12mg/g의 진세노사이드 Rg1;
0.5 내지 2.0mg/g의 진세노사이드 Rb1;
0.001 내지 0.01mg/g의 진세노사이드 Rg3; 또는
진세노사이드 Rg1, Rb1, 및 Rb3의 합이 8 내지 15mg/g인 진세노사이드들을 포함하는 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
The composition containing the ginseng leaf extract is characterized in that the total weight of the ginseng leaf extract
7 to 12 mg / g of ginsenoside Rg1;
0.5 to 2.0 mg / g of ginsenoside Rb1;
0.001 to 0.01 mg / g of ginsenoside Rg3; or
Wherein the sum of ginsenosides Rg1, Rb1, and Rb3 is from 8 to 15 mg / g.
제1항 또는 제2항에 있어서,
조성물은 약학 또는 식품 조성물인 조성물.
3. The method according to claim 1 or 2,
Wherein the composition is a pharmaceutical or a food composition.
제12항에 있어서,
식품 조성물은 건강 식품 조성물 또는 동물 사료 조성물인 조성물.
13. The method of claim 12,
Wherein the food composition is a health food composition or an animal feed composition.
제13항에 있어서,
동물 사료 조성물은 애견용 사료 조성물인 조성물.
14. The method of claim 13,
Wherein the animal feed composition is a feed composition for dogs.
제14항에 있어서,
애견용 사료 조성물은 5세 이상의 노견용 사료 조성물인 조성물.
15. The method of claim 14,
Wherein the feed composition for dogs is a feed composition for ages 5 years and older.
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018124447A1 (en) * 2016-12-29 2018-07-05 주식회사 뉴트리사이언스 Method for producing taheebo extract
KR20190008002A (en) * 2017-07-14 2019-01-23 (주) 뉴트리바이오텍 Method for producing freezed-dried spirit extract of tabebuia avellanedae
KR102176394B1 (en) * 2020-08-21 2020-11-10 주식회사 노보셀바이오 A composition for immune enhancement comprising taheebo extract
KR20210099260A (en) * 2020-02-04 2021-08-12 주식회사 엔케이타히보 Preparing method of tea drinks containing taheebo extracts

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