KR20160003841A - 어푸코실화된 CD20 항체와 CD79b 항체-약물 접합체의 병용 요법 - Google Patents

어푸코실화된 CD20 항체와 CD79b 항체-약물 접합체의 병용 요법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 암을 치료하기 위한 어푸코실화된 항-CD20 항체와 CD79b 항체-약물 접합체의 병용 요법, 특히 어푸코실화된 인간화된 B-Lyl 항체 및 CD79b 항체-약물 접합체에 의한 CD20 발현 암의 병용 요법에 관한 것이다.

Description

어푸코실화된 CD20 항체와 CD79b 항체-약물 접합체의 병용 요법{COMBINATION THERAPY OF AN AFUCOSYLATED CD20 ANTIBODY WITH A CD79b ANTIBODY-DRUG CONJUGATE}
본 발명은 암을 치료하기 위한 어푸코실화(afucosylating)된 CD20 항체와 CD79b 항체-약물 접합체의 병용 요법에 관한 것이다.
본원은 2013년 5월 2일자 출원된 미국 가출원 제61/818,821호(이의 개시내용은 본원에 참고로 그의 전체가 혼입된다)를 우선권 주장한다.
어푸코실화된 항체
문헌[Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 미국 특허 제6,602,684호에 기재되어 있는 바와 같이 단클론성 항체의 올리고사카라이드 성분을 조작함으로써 단클론성 항체의 세포-매개되는 효과기(effector) 작용을 향상시킬 수 있다. 암 면역요법에 가장 통상적으로 사용되는 항체인 IgG1 유형 항체는 각 CH2 도메인의 Asn297에 보존된 N-연결된 당화 자리를 갖는 당단백질이다. Asn297에 부착된 2개의 복합 바이안테너리(biantennary) 올리고사카라이드는 CH2 도메인 사이에 매립되어, 폴리펩타이드 주쇄와 광범위한 접촉을 형성하고, 이들의 존재는 항체가 항체 의존성 세포독성(ADCC)과 같은 효과기 작용을 매개하는데 필수적이다(문헌[Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822]; 문헌[Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76]; 문헌[Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32]). 문헌[Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 국제 특허출원공개 제99/54342호는, 이분된 올리고사카라이드의 형성을 촉매화하는 글리코실전달효소인 β(1,4)-N-아세틸글루코스아민일전달효소 III("GnTIII")의 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서의 과발현이 항체의 시험관내 ADCC 활성을 상당히 증가시킴을 보여주었다. N297 탄수화물의 조성에서의 변화 또는 그의 제거는 또한 FcγR 및 Clq에 결합하는 Fc로의 결합에도 영향을 끼친다(문헌[Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180]; 문헌[Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294]; 문헌[Mimura, Y., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 45539-45547]; 문헌[Radaev, S., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 16478-16483]; 문헌[Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604]; 문헌[Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740]; 문헌[Simmons, L.C., et al., J. Immunol. Methods 263 (2002) 133-147]).
항-CD20 항체를 포함하는 어푸코실화된 항체 및 푸코실화된 항체의 활성을 논의하는 연구가 보고되어 있다(예를 들어, 문헌[Iida, S., et al., Clin. Cancer Res. 12 (2006) 2879-2887]; 문헌[Natsume, A., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 93-103]; 문헌[Satoh, M., et al., Expert Opin. Biol. Ther. 6 (2006) 1161-1173]; 문헌[Kanda, Y., et al., Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688]; 문헌[Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294]).
CD20 및 항-CD20 항체
CD20 분자(또한, 인간 B-림프구-제한된 분화 항원 또는 Bp35로 지칭됨)는 광범위하게 기재된 프리(pre)-B 및 성숙 B 림프구 상에 위치하는 소수성 막통과 단백질이다(문헌[Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287]; 문헌[Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717]; 문헌[Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212]; 문헌[Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980]; 문헌[Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568]). CD20은 90%를 초과하는 B 세포 비-호지킨(non-Hodgkin) 림프종(NHL)에서 발현되지만(문헌[Anderson, K.C., et al., Blood 63 (1984) 1424-1433]), 조혈모세포, 프로-B 세포, 정상 혈장 세포 또는 다른 정상 조직에서는 발견되지 않는다(문헌[Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 135 (1985) 973-979]).
CD20 결합 방식 및 생물학적 활성 면에서 상당히 상이한 항-CD20 항체의 두가지 상이한 유형이 있다(문헌[Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743]; 및 문헌[Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052]). 예컨대, 리툭시맙(rituximab)(85% 이상의 푸코스 양으로 비-어푸코실화된 항체)과 같은 유형 I 항체는 보체 매개된 세포독성 면에서 강력하다.
예컨대, 토시투모맙(Tositumomab, B1), 11B8, AT80 또는 인간화된 B-Ly1 항체와 같은 유형 II 항체는 동시적 포스파티딜세린 노출과 함께 카스파제-비의존적 아폽토시스(apoptosis)를 통해 표적 세포 사멸을 효과적으로 개시한다.
CD79b 항체-약물 접합체
CD79는 CD79a(Igα, mb-1) 및 CD79b(Igβ, B29)를 포함하는 공유 이종이량체로 구성된 B-세포 수용체의 신호발생 성분이다. CD79a 및 CD79b는 각각 세포외 면역 글로불린(Ig) 도메인, 막통과 도메인, 및 세포내 신호발생 도메인, 면역수용체 티로신-기제 활성화 모티프(motif)(ITAM) 도메인을 포함한다. CD79는 B 세포 상에서 및 비-호지킨 림프종 세포(NHL)에서 발현된다(문헌[Cabezudo et al., Haematologica, 84:413-418 (1999)]; 문헌[D'Arena et al, Am. J. Hematol, 64: 275-281 (2000)]; 문헌[Olejniczak et al, Immunol. Invest., 35: 93-114 (2006)]). CD79의 표면 발현을 위해 CD79a 및 CD79b 및 sIg 모두가 필요하다(문헌[Matsuuchi et al., Curr. Opin. Immunol., 13(3): 270-7]). NHL 상에서의 CD79b의 평균 표면 발현은 정상 B-세포 상에서의 발현과 유사하지만, 더 큰 범위를 갖는다(문헌[Matsuuchi et al., Curr. Opin. Immunol., 13(3): 270-7 (2001)]).
CD79b의 발현이 제공되므로, 환자에게, 특히 만성 치료를 위하여 투여되는 경우 최소한의 항원성을 일으키거나 전혀 일으키기 않는 CD79b 항원에 대한 치료 항체를 생산하는 것이 유리하다. 본 발명은 이러한 요구 및 다른 요구를 만족시킨다. 본 발명은 현행 치료 조성물의 제한점을 극복할 뿐만 아니라, 이후 상세한 설명으로부터 명백해질 추가의 이점을 제공하는 항-CD79b 항체를 제공한다.
암 치료에 있어서 세포독성제 또는 세포정지제, 즉 종양 세포를 사멸시키거나 저해하는 약물의 국소 전달을 위한 항체-약물 접합체(ADC), 즉 면역접합체의 사용(문헌[Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549]; 문헌[Wu et al (2005) Nature Biotechnology 23(9):1137-1146]; 문헌[Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212]; 문헌[Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614]; 문헌[Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drug Del. Rev. 26:151-172]; 미국 특허 제4,975,278호)은 약물 잔기의 종양으로의 표적화된 전달, 및 거기서의 세포내 축적을 허용하고, 이때 이들 접합되지 않은 약물 제제의 전신 투여는 제거하려는 종양 세포뿐만 아니라, 정상 세포에 대해 허용불가능한 수준의 독성을 일으킬 수 있다(문헌[Baldwin et al (1986) Lancet pp. (Mar. 15, 1986):603-05]; 문헌[Thorpe, (1985) "암 요법에서 세포독성제의 항체 담체; 고찰(Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review)", in Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, A. Pinchera et al (ed.s), pp. 475-506]). 치료 지표, 즉 ADC의 최대의 효능 및 최소의 독성을 개선시키기 위한 노력은 다클론성(문헌[Rowland et al (1986) Cancer Immunol. Immunother., 21:183-87]) 및 단클론성 항체(mAb)에 대한 선택성뿐만 아니라, 약물-연결 및 약물-방출 특성(문헌[Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549])에 집중되었다. 항체 약물 접합체에 사용된 약물 부분은 박테리아 단백질 독소, 예컨대 디프테리아(diphtheria) 독소, 식물 독소, 예컨대 리신(ricin), 소 분자, 예컨대 아우리스타틴(auristatin), 겔다나마이신(geldanamycin)(문헌[Mandler et al (2000) J. of the Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581]; 문헌[Mandler et al (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028]; 문헌[Mandler et al (2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791]), 메이탄시노이드(maytansinoid)(유럽 특허 제1391213호; 문헌[Liu et al (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623]), 칼리케아미신(calicheamicin)(문헌[Lode et al (1998) Cancer Res. 58:2928]; 문헌[Hinman et al (1993) Cancer Res. 53:3336-3342]), 다우노마이신(daunomycin), 독소루비신(doxorubicin), 메토트렉세이트(methotrexate), 및 빈데신(vindesine)(상기 문헌[Rowland et al (1986)])이 포함된다. 약물 부분은 투불린(tubulin) 결합, DNA 결합, 또는 토포이소머라아제(topoisomerase) 저해를 비롯한 세포독성 및 세포정지 기작에 영향을 줄 수 있다. 몇몇 세포독성 약물은 큰 항체 또는 단백질 수용체 리간드에 접합될 경우 불활성이거나 덜 활성인 경향이 있다.
돌라스타틴의 합성 유사체인 아우리스타틴 펩타이드, 아우리스타틴 E(AE) 및 모노메틸아우리스타틴(MMAE)(국제 특허출원공개 제02/088172 호)은 약물 부분으로서 다음에 접합된다: (i) 키메라 단클론성 항체 cBR96(암종 상의 루이스(Lewis) Y에 특이적임); (ii) 혈액학적 악성 종양 상의 CD30에 특이적인 cAC1O(문헌[Klussman, et al (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773]; 문헌[Doronina et al (2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784]; 문헌[Francisco et al (2003) Blood 102(4): 1458-1465]; 미국 특허출원공개 제2004/0018194호); (iii) CD20-발현 암 및 면역 질환의 치료를 위한 항-CD20 항체, 예컨대 리툭산(rituxan)(국제 특허출원공개 제04/032828호); (iv) 결장직장 암의 치료를 위한 항-EphB2R 항체 2H9(문헌[Mao, et al (2004) Cancer Research 64(3):781-788]); (v) E-셀렉틴(selectin) 항체(문헌[Bhaskar et al (2003) Cancer Res. 63:6387-6394]); (vi) 트라스투주맙(trastuzumab)(헤르셉틴(HERCEPTIN: 등록상표), 미국 특허출원공개 제2005/0238649호) 및 (vi) 항-CD30 항체(국제 특허출원공개 제03/043583호). 아우리스타틴 E의 변이체는 미국 특허 제5,767,237호 및 미국 특허 제6,124,431호에 개시되어 있다. 단일클론 항체에 접합된 모노메틸 아우리스타틴 E는 문헌[Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, presented March 28, 2004]에 개시되어 있다. 아우리스타틴 유사체 MMAE 및 MMAF는 다양한 항체에 접합되었다(미국 특허출원공개 제2005/0238649호).
약물 부분을 항체로 부착, 즉 공유 결합을 통해 연결시키는 종래의 수단은 일반적으로 분자의 불균일한 혼합물을 유도하고, 이때 약물 부분은 항체 상의 다수의 자리에 부착된다. 예를 들면, 세포독성 약물은 전형적으로 항체의 종종-다수의 라이신 잔기를 통해 항체에 접합되어, 불균일한 항체-약물 접합체 혼합물을 생성한다. 반응 조건에 따라서, 불균일한 혼합물은 전형적으로 0 내지 약 8개 이상의 약물 부분이 부착된 항체의 분포를 포함한다. 또한, 약물 부분 대 항체의 특정 정수 비를 갖는 접합체의 각각의 하위 군은 잠재적으로 불균일한 혼합물이고, 이때 약물 부분은 항체 상에서 다양한 자리에 부착된다. 분석 및 제조 방법은 접합 반응으로부터 생성된 불균일한 혼합물 내에서 항체-약물 접합체 종 분자를 분리하고 특징화하기에 적절하지 않을 수 있다. 항체는 크고, 복합적이며, 구조적으로 다양한 생물분자로서, 종종 많은 반응성 작용기를 갖는다. 연결기 제제 및 약물-연결기 중간체와의 이들의 반응성은, 예컨대 pH, 농도, 염 농도, 및 보조-용매와 같은 인자에 따라 달라진다. 더욱이, 다단계 접합 과정은 반응 조건을 제어하고 반응물 및 중간체를 특징화하기에 어려움을 가지므로 재현이 불가능할 수 있다.
pH 7 부근에서 양자화되고 덜 친핵성인 대부분의 아민과는 달린, 시스테인 티올은 중성 pH에서 반응성이다. 유리 티올(RSH, 설프하이드릴) 기가 비교적 반응성이므로, 시스테인 잔기를 갖는 단백질은 종종 다이설파이드-연결된 올리고머로서 이들의 산화된 형태로 존재하거나 다이설파이드 기를 내재적으로 가교화한다. 세포외 단백질은 일반적으로 유리 티올을 갖지 않는다(문헌[Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London, at page 55]). 항체 시스테인 티올 기는 일반적으로 항체 아민 또는 하이드록실 기에 비해 덜 반응성이고, 즉 친전자성 접합 제제에 대해 더욱 친핵성이다. 시스테인 잔기는 유전자 조작 기법에 의해 단백질내로 도입되어 리간드에 공유 결합을 형성하거나 새로운 분자내 다이설파이드 결합을 형성하였다(문헌[Better et al (1994) J. Biol. Chem. 13:9644-9650]; 문헌[Bernhard et al (1994) Bioconjugate Chem. 5: 126-132]; 문헌[Greenwood et al (1994) Therapeutic Immunology 1:247-255]; 문헌[Tu et al (1999) Proc. Natl. Acad. Sci USA 96:4862-4867]; 문헌[Kanno et al (2000) J. of Biotechnology, 76:207-214]; 문헌[Chmura et al (2001) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 98(15):8480-8484]; 미국 특허 제6,248,564호). 그러나, 단백질의 다양한 아미노산 잔기의 시스테인 아미노산으로의 돌연변이에 의한 시스테인 티올 기에서의 조작은, 쌍을 이루지 않은(유리 Cys) 잔기 또는 반응이나 산화에 비교적 허용가능한 것들의 경우, 잠재적으로 문제가 된다. 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)의 주변세포질에서인지, 배양 상청액에서인지, 또는 부분적으로 또는 완전히 정제된 단백질인지와 무관하게, 단백질의 농축된 용액에서 단백질 표면 상의 쌍을 이루지 않은 Cys 잔기는 쌍을 이루고 산화되어 분자간 다이설파이드를 형성하고, 이에 따라 단백질 이량체 또는 다량체를 형성할 수 있다. 다이설파이드 이량체 형성은 약물, 리간드, 또는 다른 표지에 접합하기 위해 새로운 Cys를 비반응성화시킨다. 더욱이, 단백질이 신규 조작된 Cys 및 기존의 Cys 잔기 사이에 분자내 다이설파이드 결합을 산화적으로 형성한다면, Cys 티올 기 둘 다는 활성 자리 참여 및 상호작용에 이용될 수 없다. 더욱이, 단백질은 잘못 폴딩되거나 3차 구조가 손상되어 비활성되거나 비특이적으로 될 수 있다(문헌[Zhang et al (2002) Anal. Biochem. 311: 1-9]).
시스테인-조작된 항체는 FAB 항체 단편(thioFab)으로 지정되고, 전장의 IgG 단클론성(thioMab) 항체로서 발현되었다(문헌[Junutula, J.R. et al. (2008) J Immunol Methods 332:41-52]; 미국 특허출원공개 제2007/0092940호, 이의 내용은 참고로 혼입됨). ThioFab 및 ThioMab 항체는 새롭게 도입된 시스테인 티올에서 연결기를 통해 티올-반응성 연결기 제제 및 약물-연결기 제제와 접합되어 항체 약물 접합체(Thio ADC)를 제조하였다.
특허출원 및 출판물을 비롯한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 참고로 이들의 전체가 혼입된다.
본 발명자들은 최근 어푸코실화된 항-CD20 항체와 CD79b 항체-약물 접합체의 조합이 상당히 향상된 항증식 효과를 나타냄을 발견하였다.
본 발명의 일 양상은 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체이다.
본 발명의 다른 양상은 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체의 용도이다.
본 발명의 다른 양상은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료할 필요가 있는 환자에게 투여함으로써 암을 앓는 환자를 치료하는 방법이다.
일 양태에서, 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 40% 내지 60%이다. 다른 양태에서, 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 0%이다.
일 양태에서, 어푸코실화된 항-CD20 항체는 IgG1 항체이다. 다른 양태에서, 상기 암은 CD20 발현 암, 바람직하게는 림프종 또는 림프성 백혈병이다. 일 양태에서, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이다. 하나의 특정 양태에서, 항-CD20 항체는 오비누투주맙(obinutuzumab)(권고된 INN, 문헌[WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453])이다. 본원에서 사용되는 경우, 오비누투주맙은 GA101에 대한 동의어이다. 이는 모든 이전의 형태를 대체하고(예를 들어, 문헌[Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76]), 이전에 아푸투주맙(afutuzumab)으로서 공지되었다(권고된 INN, 문헌[WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176;Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124]).
일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체 발명에서 CD79b 항체는 인간화된 항-CD79b 항체이고, 이때 1가 친화력(예를 들어, 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력) 또는 항체의 그의 2가 형태로의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG 단편으로서의 CD79b로의 친화력)은, 도 7(서열번호 26) 및 도 8(서열번호 29)에 도시된 바와 같은 경쇄 및 중쇄 가변성 도메인 서열을 포함하거나, 이로 구성되거나, 본질적으로 이로 구성된 뮤린 항체(예를 들어, 뮤린 항체의 Fab 단편으로서의 또는 IgG 단편으로서의 CD79b로의 친화력) 또는 키메라 항체(예를 들어, 키메라 항체의 Fab 단편으로서의 또는 IgG 단편으로서의 CD79b로의 친화력) 각각의 1가 친화력 또는 2가 형태에서의 친화력과 실질적으로 동일하거나, 더 낮거나 더 높다.
일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체 발명에서 CD79b 항체는, 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.4 nM, 0.2 nM 또는 0.5 nM인 인간화된 항-CD79b 항체이다.
일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는:
(i) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31)인 HVR-L1;
(ii) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(iii) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(iv) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(v) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(vi) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36)인 HVR-H3으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함한다.
일 양상에서, 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b에 결합하는 항체는 1개 이상의 변형 HVR을 포함하고, 이때 변형 HVR 서열은 서열번호 31, 32, 33, 34, 35 또는 36에 도시된 서열의 1개 이상의 잔기의 변형을 포함한다.
일 양상에서, 본 발명은 도 3b에 도시된 HVR1-HC, HVR2-HC 및/또는 HVR3-HC 서열(서열번호 50 내지 52)을 포함하는 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항체를 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 도 3a에 도시된 HVR1-LC, HVR2-LC 및/또는 HVR3-LC 서열(서열번호 47 내지 49)을 포함하는 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항체를 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 도 4b에 도시된 HVR1-HC, HVR2-HC 및/또는 HVR3-HC 서열(서열번호 58 내지 60)을 포함하는 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항체를 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 도 4a에 도시된 HVR1-LC, HVR2-LC 및/또는 HVR3-LC 서열(서열번호 55 내지 57)을 포함하는 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항체를 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 도 5B에 도시된 HVR1-HC, HVR2-HC 및/또는 HVR3-HC 서열(서열번호 66 내지 68)을 포함하는 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항체를 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 도 5a에 도시된 HVR1-LC, HVR2-LC 및/또는 HVR3-LC 서열(서열번호 63 내지 65)을 포함하는 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항체를 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 도 6b에 도시된 HVR1-HC, HVR2-HC 및/또는 HVR3-HC 서열(서열번호 74 내지 76)을 포함하는 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항체를 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 도 6a에 도시된 HVR1-LC, HVR2-LC 및/또는 HVR3-LC 서열(서열번호 71 내지 73)을 포함하는 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항체를 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 서열번호 54, 62, 70 또는 78로부터 선택된 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항-CD79b 항체를 포함한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 서열번호 53, 61, 69 또는 77로부터 선택된 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 항-CD79b 항체를 포함한다.
일 양상에서, 본 발명은 서열번호 83 내지 130으로부터 선택된 서열 및 하나 이상의 유리 시스테인 아미노산을 포함하는 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 시스테인 조작된 항-CD79b 항체를 포함한다. 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 CD79b 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 모 항-CD79b 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 대체함을 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.
일 양상에서, 본 발명은 하나 이상의 유리 시스테인 아미노산을 포함하고, 이때 시스테인 조작된 항-CD79b 항체가 CD79b 폴리펩타이드에 결합하고 모 항-CD79b 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 대체함을 포함하는 방법에 의해 제조되며, 이때 모 항체가 하기로부터 선택된 1개 이상의 HVR 서열을 포함하는, 본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체에서의 시스테인 조작된 항-CD79b 항체를 포함한다:
(i) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31) 또는 KASQSVDYEGDSFLN(서열번호 37)인 HVR-L1;
(ii) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(iii) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(iv) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(v) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(vi) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36) 또는 TRRVPIRLDY(서열번호 38)인 HVR-H3.
일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는 VL-FR1, VL-FR2, VL-FR3, VL-FR4(각각 서열번호 39 내지 42)를 갖는 경쇄 인간 카파 I 컨센서스(consensus) 서열("huKI"로서 표지화됨; 서열번호 25), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 26), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 27), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 53), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 61), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 69) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 77)로 이루어진 군으로부터 선택된 가변성 경쇄 서열을 포함한다.
일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체 발명에서 CD79b 항체는 VH-FR1, VH-FR2, VH-FR3, 및 VH-FR4(서열번호 43 내지 46)를 갖는 중쇄 인간 하위군 III 컨센서스 서열("humIII"으로서 표지화됨; 서열번호 28), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 29), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 30)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 54)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 62)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 70)(71A, 73T 및 78A 포함) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 78)(71A, 73T 및 78A 포함)로 이루어진 군으로부터 선택된 가변성 중쇄 서열을 포함한다.
일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는 하나 이상의 유리 시스테인 아미노산을 포함하는 시스테인 조작된 항-CD79b 항체를 포함하고, 이때 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 CD79b 폴리펩타이드에 결합하고 모 항-CD79b 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 대체함을 포함하는 방법에 의해 제조되고, 이때 모 항체는 하기로부터 선택된 1개 이상의 HVR 서열을 포함한다:
(a) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31) 또는 KASQSVDYEGDSFLN(서열번호 37)인 HVR-L1;
(b) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(c) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(d) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(e) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(f) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36) 또는 TRRVPIRLDY(서열번호 38)인 HVR-H3.
일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 화학식 Ab-(L-D)p(화학식 I)를 갖고, 이때
(a) Ab는 본원에 정의된 바와 같은 CD79b 항체이고;
(b) L은 연결기이고;
(c) D는 약물 부분이다.
따라서, 항체는 약물에 직접적으로 또는 연결기를 통해 접합될 수 있다. 화학식 I에서, p는 항체당 약물 부분의 평균 수이고, 이는, 예를 들어, 항체당 약 1 내지 약 20개 약물 부분의 범위일 수 있고, 특정 양태에서 항체당 1 내지 약 8개 약물 부분의 범위일 수 있다. 본 발명은 항체당 평균 약물 적재량이 약 2 내지 약 5개, 또는 약 3 내지 약 4개인 화학식 I의 항체-약물 화합물의 혼합물을 포함하는 조성물을 포함한다.
화학식 Ab-(L-D)p를 갖는 CD79b 항체-약물 접합체의 일 양태에서, L은 6-말레이미도카프로일(MC), 말레이미도프로파노일(MP), 발린-시트룰린(val-cit), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe), p-아미노벤질옥시카보닐(PAB), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트(SPP), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트(SMCC), 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트(SIAB)로부터 선택된다.
화학식 Ab-(L-D)p를 갖는 CD79b 항체-약물 접합체의 일 양태에서, D는 아우리스타틴, 돌로스탄틴(dolostantin), DM1, DM3, DM4, MMAE 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 양태에서, 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이다. 구체적인 양태에서, 상기 접합체에서 항-CD79b 항체는 huMA79b.v28이다.
일 양태에서, 어푸코실화된 항-CD20 항체는 CD20에 10-8 M 내지 10-13 M의 KD로 결합한다.
본 발명의 일 양태는 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체(일 양태에서, 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체) 및 CD79b 항체-약물 접합체를 포함하는 조성물이다. 본 발명에 따른 조성물의 일 양태에서, 상기 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다.
본 발명에 따른 조성물의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 상기 CD79b 항체는:
(i) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31)인 HVR-L1;
(ii) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(iii) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(iv) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(v) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(vi) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36)인 HVR-H3으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함한다.
본 발명에 따른 조성물의 일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는 VL-FR1, VL-FR2, VL-FR3, VL-FR4(각각 서열번호 39 내지 42)를 갖는 경쇄 인간 카파 I 컨센서스 서열("huKI"로서 표지화됨; 서열번호 25), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 26), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 27), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 53), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 61), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 69) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 77)로 이루어진 군으로부터 선택된 가변성 경쇄 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 조성물의 일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는 VH-FR1, VH-FR2, VH-FR3, 및 VH-FR4(서열번호 43 내지 46)를 갖는 중쇄 인간 하위군 III 컨센서스 서열("humIII"으로서 표지화됨; 서열번호 28), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 29), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 30)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 54)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 62)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 70)(71A, 73T 및 78A 포함) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 78)(71A, 73T 및 78A 포함)로 이루어진 군으로부터 선택된 가변성 중쇄 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 조성물의 일 양태에서, 하나 이상의 추가의 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선이 투여된다.
본 발명에 따른 조성물의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때
(a) Ab는 본원에 정의된 바와 같은 CD79b 항체이고;
(b) L은 연결기이고;
(c) D는 약물 부분이다.
본 발명에 따른 조성물의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 L은 6-말레이미도카프로일(MC), 말레이미도프로파노일(MP), 발린-시트룰린(val-cit), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe), p-아미노벤질옥시카보닐(PAB), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트(SPP), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트(SMCC), 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트(SIAB)로부터 선택된다.
본 발명에 따른 조성물의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 D는 아우리스타틴, 돌로스탄틴, DM1, DM3, DM4, MMAE 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 조성물의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 암을 치료하기 위해 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이다. 구체적인 양태에서, 상기 접합체에서 항-CD79b 항체는 huMA79b.v28이다. Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체는 암을 치료하기 위해 CD79b 항체-약물 접합체와 조합된다.
본 발명의 일 양태는 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료할 필요가 있는 환자에게 투여함으로써 암을 앓는 환자를 치료하는 방법이다.
본 발명에 따른 일 양태에서, 방법은 상기 암이 CD20 발현 암인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 일 양태에서, 방법은 상기 CD20 발현 암이 림프종 또는 림프성 백혈병인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 일 양태에서, 방법은 상기 항-CD20 항체가 인간화된 B-Ly1 항체인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 일 양태에서, 방법은 상기 항-CD20 항체가 오비누투주맙인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 일 양태에서, 방법은 하나 이상의 추가적인 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선이 투여되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 일 양태에서, 방법은 CD79b 항체-약물 접합체에서 상기 CD79b 항체가:
(i) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31)인 HVR-L1;
(ii) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(iii) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(iv) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(v) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(vi) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36)인 HVR-H3으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함한다.
본 발명에 따른 방법의 일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는 VL-FR1, VL-FR2, VL-FR3, VL-FR4(각각 서열번호 39 내지 42)를 갖는 경쇄 인간 카파 I 컨센서스 서열("huKI"로서 표지화됨; 서열번호 25), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 26), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 27), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 53), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 61), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 69) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 77)로 이루어진 군으로부터 선택된 가변성 경쇄 서열을 포함한다
본 발명에 따른 방법의 일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는 VH-FR1, VH-FR2, VH-FR3, 및 VH-FR4(서열번호 43 내지 46)를 갖는 중쇄 인간 하위군 III 컨센서스 서열("humIII"으로서 표지화됨; 서열번호 28), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 29), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 30)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 54)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 62)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 70)(71A, 73T 및 78A 포함) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 78)(71A, 73T 및 78A 포함)로 이루어진 군으로부터 선택된 가변성 중쇄 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 방법의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때
(a) Ab는 본원에 개시된 바와 같은 CD79b 항체이고;
(b) L은 연결기이고;
(c) D는 약물 부분이다.
본 발명에 따른 방법의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 L은 6-말레이미도카프로일(MC), 말레이미도프로파노일(MP), 발린-시트룰린(val-cit), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe), p-아미노벤질옥시카보닐(PAB), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트(SPP), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트(SMCC), 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트(SIAB)로부터 선택된다.
본 발명에 따른 방법의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 D는 아우리스타틴, 돌로스탄틴, DM1, DM3, DM4, MMAE 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 방법의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이다.
본 발명에 따른 방법의 일 양태에서, 상기 CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체는 huMA79b.v28이다.
본 발명에 따른 일 양태는 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체의 용도이다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 상기 암이 CD20 발현 암인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 상기 CD20 발현 암이 림프종 또는 림프성 백혈병인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 상기 항-CD20 항체가 인간화된 B-Ly1 항체인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 상기 항-CD20 항체가 오비누투주맙인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 하나 이상의 추가적인 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선이 투여되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 CD79b 항체-약물 접합체에서 상기 CD79b 항체가:
(i) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31)인 HVR-L1;
(ii) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(iii) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(iv) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(v) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(vi) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36)인 HVR-H3으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는 VL-FR1, VL-FR2, VL-FR3, VL-FR4(각각 서열번호 39 내지 42)를 갖는 경쇄 인간 카파 I 컨센서스 서열("huKI"로서 표지화됨; 서열번호 25), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 26), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 27), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 53), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 61), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 69) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 77)로 이루어진 군으로부터 선택된 가변성 경쇄 서열을 포함한다
본 발명에 따른 용도의 일 양상에서, CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체는 VH-FR1, VH-FR2, VH-FR3, 및 VH-FR4(서열번호 43 내지 46)를 갖는 중쇄 인간 하위군 III 컨센서스 서열("humIII"으로서 표지화됨; 서열번호 28), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 29), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 30)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 54)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 62)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 70)(71A, 73T 및 78A 포함) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 78)(71A, 73T 및 78A 포함)로 이루어진 군으로부터 선택된 가변성 중쇄 서열을 포함한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양상은 CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때
(a) Ab가 본원에 정의된 바와 같은 CD79b 항체이고;
(b) L이 연결기이고;
(c) D가 약물 부분임을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 L이 6-말레이미도카프로일(MC), 말레이미도프로파노일(MP), 발린-시트룰린(val-cit), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe), p-아미노벤질옥시카보닐(PAB), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트(SPP), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트(SMCC), 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트(SIAB)로부터 선택됨을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 D가 아우리스타틴, 돌로스탄틴, DM1, DM3, DM4, MMAE 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택됨을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 CD79b 항체-약물 접합체가 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE임을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 상기 CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체가 huMA79b.v28임을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 용도의 일 양태는 하나 이상의 추가의 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선이 투여됨을 특징으로 한다.
도 1: SCID 베이지 마우스(beige mouse)에서 미만성(disseminated) Z138 맨틀(mantle) 세포 림프종(MCL) 모델에 대한 오비누투주맙(GA101), 리툭시맙, 항-CD79b-ADC 및 CD79b와 GA101 또는 리툭시맙의 조합물의 효과.
도 2: 페어와이즈 윌콕슨(Pairwise Wilcoxon) 및 페어와이즈 로그-랭크(Pairwise Log-Rank) 시험에 의한 도 1에서의 데이터의 통계적 분석.
도 3a( 경쇄 ) 및 3b( 중쇄 )는 본 발명의 항체(huMA79b.v17)의 아미노산 서열을 도시한다. 도 3a(경쇄) 및 3b(중쇄)는 본 발명의 항체(huMA79b.v17)의 일 양태의 골격구조(FR), 초가변성 영역(HVR), 제1 불변성 도메인(CL 또는 CH1) 및 Fc 영역(Fc)의 아미노산 서열을 도시한다(서열번호 131 내지 134, 47 내지 49, 및 135(도 3a) 및 서열번호 136 내지 139, 50 내지 52, 및 140 내지 141(도 3b)). huMA79b.v17의 경쇄 및 중쇄의 전장 아미노산 서열(가변성 및 불변성 영역)이 각각 제시된다(각각 서열번호 176(도 3a) 및 177(도 3b), 불변성 도메인은 밑줄쳐짐. 가변성 도메인의 아미노산 서열이 제시됨: 서열번호 53(경쇄의 경우 도 3a) 및 서열번호 54(중쇄의 경우 도 3b)).
도 4a( 경쇄 ) 및 4b( 중쇄 )는 본 발명의 항체(huMA79b.v18)의 아미노산 서열을 도시한다. 도 4a(경쇄) 및 4b(중쇄)는 본 발명의 항체(huMA79b.v18)의 일 양태의 골격구조(FR), 초가변성 영역(HVR), 제1 불변성 도메인(CL 또는 CH1) 및 Fc 영역(Fc)의 아미노산 서열을 도시한다(서열번호 142 내지 145, 55 내지 57, 및 147(도 4a) 및 서열번호 148 내지 151, 58 내지 60, 및 152 내지 153(도 4b)). huMA79b.v18의 경쇄 및 중쇄의 전장 아미노산 서열(가변성 및 불변성 영역)이 제시된다(각각 서열번호 178(도 4a) 및 179(도 4b), 불변성 도메인은 밑줄쳐짐. 가변성 도메인의 아미노산 서열이 제시됨: 서열번호 61(경쇄의 경우 도 4a) 및 서열번호 62(중쇄의 경우 도 4b)).
도 5a( 경쇄 ) 및 5b( 중쇄 )는 본 발명의 항체(huMA79b.v28)의 아미노산 서열을 도시한다. 도 5a(경쇄) 및 5b(중쇄)는 본 발명의 항체(huMA79b.v28)의 일 양태의 골격구조(FR), 초가변성 영역(HVR), 제1 불변성 도메인(CL 또는 CH1) 및 Fc 영역(Fc)의 아미노산 서열을 도시한다(서열번호 154 내지 157, 63 내지 65, 및 158(도 5a) 및 서열번호 159 내지 162, 66 내지 68, 및 163 내지 164(도 5b)). huMA79b.v28의 경쇄 및 중쇄의 전장 아미노산 서열(가변성 및 불변성 영역)이 제시된다(각각 서열번호 180(도 5a) 및 181(도 5b), 불변성 도메인은 밑줄쳐짐. 가변성 도메인의 아미노산 서열이 제시됨: 서열번호 69(경쇄의 경우 도 7) 및 서열번호 70(중쇄의 경우 도 8)).
도 6a( 경쇄 ) 및 6b( 중쇄 )는 본 발명의 항체(huMA79b.v32)의 아미노산 서열을 도시한다. 도 6a(경쇄) 및 6b(중쇄)는 본 발명의 항체(huMA79b.v32)의 일 양태의 골격구조(FR), 초가변성 영역(HVR), 제1 불변성 도메인(CL 또는 CH1) 및 Fc 영역(Fc)의 아미노산 서열을 도시한다(서열번호 165 내지 168, 71 내지 73, 및 169(도 6a) 및 서열번호 170 내지 173, 74 내지 76, 및 174 내지 175(도 6b)). huMA79b.v32의 경쇄 및 중쇄의 전장 아미노산 서열(가변성 및 불변성 영역)이 제시된다(각각 서열번호 182(도 6a) 및 146(도 6b), 불변성 도메인은 밑줄쳐짐. 가변성 도메인의 아미노산 서열이 제시됨: 서열번호 77(경쇄의 경우 도 6a) 및 서열번호 78(중쇄의 경우 도 6b)).
도 7은 하기를 위한 가변성 경쇄의 서열의 정렬을 도시한다: VL-FR1, VL-FR2, VL-FR3, VL-FR4(각각 서열번호 39 내지 42)를 갖는 경쇄 인간 카파 I 컨센서스 서열("huKI"로서 표지화됨; 서열번호 25), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 26), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 27), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 53), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 61), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 69) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 77). 위치는 카밧(Kabat)에 따라 번호매겨지고, MA79b로부터 가변성 경쇄 카파 I 컨센서스 골격구조로 그라프팅된 초가변성 영역(HVR)은 박스 처리된다.
도 8은 하기를 위한 가변성 중쇄의 서열의 정렬을 도시한다: VH-FR1, VH-FR2, VH-FR3, 및 VH-FR4(서열번호 43 내지 46)를 갖는 중쇄 인간 하위군 III 컨센서스 서열("humIII"으로서 표지화됨; 서열번호 28), 뮤린 항-CD79b 항체("MA79b"로서 표지화됨; 서열번호 29), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체("huMA79b 그라프트"로서 표지화됨; 서열번호 30)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 17("huMA79b.v17"로서 표지화됨; 서열번호 54)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 18("huMA79b.v18"로서 표지화됨; 서열번호 62)(71A, 73T 및 78A 포함), MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 28("huMA79b.v28"로서 표지화됨; 서열번호 70)(71A, 73T 및 78A 포함) 및 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 32("huMA79b.v32"로서 표지화됨; 서열번호 78)(71A, 73T 및 78A 포함). 위치는 카밧에 따라 번호매겨지고, MA79b로부터 가변성 중쇄 하위군 III 컨센서스 골격구조로 그라프팅된 초가변성 영역(HVR)은 박스 처리된다.
본 발명은 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 IgG1 또는 IgG3 이소타입의 어푸코실화된 항-CD20 항체를 포함한다.
본 발명은 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 IgG1 또는 IgG3 이소타입의 어푸코실화된 항-CD20 항체의 용도를 포함한다.
일 양태에서, 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 40% 내지 60%이다.
용어 "항체"는 전체 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 및 단클론성 항체, 키메라 항체 또는 재조합 항체 같은 유전자 조작된 항체뿐만 아니라 본 발명에 따른 특징적인 특성을 보유하는 한 이러한 항체의 단편을 포함하지만 이들로 한정되지는 않는 다양한 형태의 항체를 포괄한다. 본원에서 사용된 용어 "단클론성 항체" 또는 "단클론성 항체 조성물"은 단일 아미노산 조성의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 따라서, 용어 "인간 단클론성 항체"는 인간 생식계열 면역 글로불린 서열로부터 유래되는 가변성 영역 및 불변성 영역을 갖는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 지칭한다. 일 양태에서, 인간 단클론성 항체는 불멸 세포로 융합된 인간 중쇄 이식 유전자 및 인간 경쇄 이식 유전자를 포함하는 게놈을 갖는, 유전자 이식 비-인간 동물(예를 들어, 유전자 이식 마우스)로부터 수득되는 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.
용어 "키메라 항체"는 대체적으로 재조합 DNA 기법에 의해 제조되는, 하나의 공급원 또는 종으로부터의 가변성 영역, 즉 결합 영역, 및 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 불변성 영역의 적어도 일부를 포함하는 단클론성 항체를 지칭한다. 뮤린 가변성 영역 및 인간 불변성 영역을 포함하는 키메라 항체가 특히 바람직하다. 이러한 뮤린/인간 키메라 항체는 뮤린 면역 글로불린 가변성 영역을 코딩하는 DNA 분절 및 인간 면역 글로불린 불변성 영역을 코딩하는 DNA 분절을 포함하는 발현된 면역 글로불린 유전자의 생성물이다. 본 발명에 의해 포괄되는 "키메라 항체"의 다른 형태는 부류 또는 하위부류가 기원 항체로부터 변형 또는 변화된 것이다. 이러한 "키메라" 항체는 또한 "부류-전환된(switched) 항체"라고도 지칭된다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 현재 당업계에 널리 공지되어 있는 종래의 재조합 DNA 및 유전자 형질감염 기법을 포함한다. 예를 들어 문헌[Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855]; 미국 특허 제5,202,238호 및 미국 특허 제5,204,244호를 참조한다.
용어 "인간화된 항체"는 골격구조 영역 또는 "상보성 결정 영역"(CDR)이 모 면역 글로불린과 비교하여 상이한 특이성의 면역 글로불린의 CDR을 포함하도록 변형된 항체를 지칭한다. 바람직한 양태에서, 뮤린 CDR은 인간 항체의 골격구조 영역으로 그라프팅되어 "인간화된 항체"를 제조한다. 예컨대, 문헌[Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327] 및 문헌[Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270]을 참조한다. 특히 바람직한 CDR은 키메라 및 이작용성 항체에 대하여 상기 주지된 항원을 인식하는 서열을 나타내는 것들에 상응한다.
본원에서 사용된 용어 "인간 항체"는 인간 생식계열 면역 글로불린 서열로부터 유래되는 가변성 영역 및 불변성 영역을 갖는 항체를 포함하고자 한다. 인간 항체는 당업계에 널리 공지되어 있다(문헌[van Dijk, M.A., and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-374]). 이러한 기술에 기초하여, 매우 다양한 표적에 대한 인간 항체를 생산할 수 있다. 인간 항체의 예는, 예를 들면 문헌[Kellermann, S.A., et al., Curr. Opin. Biotechnol. 13 (2002) 593-597]에 기재되어 있다.
본원에서 사용된 용어 "재조합 인간 항체"는 NS0 또는 CHO 세포 같은 숙주 세포로부터 또는 인간 면역 글로불린 유전자를 위해 유전자 이식된 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체, 또는 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체 같은 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리되는 모든 인간 항체를 포함하고자 한다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식계열 면역 글로불린 서열로부터 유래되는 가변성 영역 및 불변성 영역을 재배열된 형태로 갖는다. 본 발명에 따른 재조합 인간 항체를 생체내에서 체세포 초돌연변이시켰다. 따라서, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 그에 연관되기는 하지만, 생체내에서 인간 항체 생식계열 목록 내에 자연적으로 존재할 수 없는 서열이다.
본원에서 사용된 용어 "결합" 또는 "특이적으로 결합"은 정제된 야생형 항원을 사용하는 시험관내 검정, 바람직하게는 플라스몬 공명 검정(비아코어(BIAcore), 지이-헬쓰케어(GE-Healthcare), 스웨덴 업살라 소재)에서 종양 항원의 에피토프로의 항체의 결합을 지칭한다. 결합 친화력은 용어 ka(항체/항원 착체로부터의 항원의 회합에 대한 반응 속도 상수), kD(해리 상수) 및 KD(kD/ka)에 의해 정의된다. 결합 또는 특이적인 결합은 10-8 M 이하, 바람직하게는 10-8 M 내지 10-13 M(일 양태에서, 10-9 M 내지 10-13 M)의 결합 친화력(KD)을 의미한다. 따라서, 본 발명에 따른 어푸코실화된 항체는 10-8 몰/ℓ 이하, 바람직하게는 10-8 M 내지 10-13 M(일 양태에서, 10-9 M 내지 10-13 M)의 결합 친화력(KD)으로 종양 항원에 특이적으로 결합한다.
본원에서 사용된 용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함하고자 한다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있으나, 바람직하게는 이중 가닥 DNA이다.
"불변성 도메인"은 항체를 항원에 결합시키는데 직접적으로 관련되지 않고, 효과기 작용(ADCC, 보체 결합 및 CDC)에 관련된다.
본원에 사용된 "가변성 영역"(경쇄의 가변성 영역(VL), 중쇄의 가변성 영역(VH))은 항체를 항원에 결합시키는데 직접적으로 관련되는 각각의 경쇄 및 중쇄 쌍을 말한다. 가변성 인간 경쇄 및 중쇄의 도메인은 동일한 일반적인 구조를 갖고, 각 도메인은 3개의 "초가변성 영역"(또는 상보성 결정 영역, CDR)에 의해 연결된, 그의 서열이 광범위하게 보존된 4개의 골격구조(FR) 영역을 포함한다. 골격구조 영역은 b-시트(sheet) 입체배좌를 채택하고, CDR은 b-시트 구조를 연결하는 루프를 형성할 수 있다. 각 쇄의 CDR은 골격구조 영역에 의해 그의 3차원 구조로 유지되고, 다른 쇄로부터의 CDR과 함께 항원 결합 부위를 형성한다.
본원에서 사용되는 경우 용어 "초가변성 영역" 또는 "항체의 항원-결합 부위"는 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변성 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. "골격구조" 또는 "FR" 영역은 본원에서 정의되는 바와 같은 초가변성 영역 잔기 이외의 가변성 도메인 영역이다. 그러므로, 항체의 경쇄 및 중쇄는 N-말단으로부터 C-말단으로 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 특히, 중쇄의 CDR3은 항원 결합에 가장 기여하는 영역이다. CDR 및 FR 영역은 문헌[Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda MD (1991)]의 표준 정의 및/또는 "초가변성 루프"로부터의 잔기에 따라 결정된다.
용어 "어푸코실화된 항체"는 감소된 수준의 푸코스 잔기를 갖는 Asn297에서 Fc 영역의 변화된 당화 패턴을 갖는 IgG1 또는 IgG3 이소타입(바람직하게는 IgG1 이소타입)의 항체를 지칭한다. 인간 IgG1 또는 IgG3의 당화는 2개 이하의 Gal 잔기로 종결되는 코어 푸코실화된 바이안테너리 복합 올리고사카라이드 당화로서 Asn297에서 일어난다. 이들 구조는 말단 Gal 잔기의 양에 따라 G0, G1(α1,6 또는 α1,3) 또는 G2 글리칸 잔기로서 지정된다(문헌[Raju, T.S., BioProcess Int. 1 (2003) 44-53]). 항체 Fc 부분의 CHO 형 당화는, 예를 들어 문헌[Routier, F.H., Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207]에 기재되어 있다. 당화 변형되지 않은 CHO 숙주 세포에서 재조합 기법으로 발현된 항체는 통상적으로 85% 이상의 양으로 Asn297에서 푸코실화된다. 본원에서 사용된 용어 "어푸코실화된 항체"는 그의 당화 패턴에 푸코스를 갖지 않는 항체를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 항체에서의 전형적인 당화 잔기 위치는 EU 넘버링 시스템에 따라 위치 297의 아스파라긴("Asn297")인 것으로 통상적으로 알려져 있다.
면역 글로불린 중쇄 불변성 영역에서의 잔기를 지칭하는 경우에 "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 색인"이 일반적으로 이용된다(예를 들어, 참고로 본원에 명확히 혼입된 문헌[Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda MD (1991)]에 보고된 EU 색인).
따라서, 본 발명에 따른 어푸코실화된 항체는 푸코스 양이 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하(이는 Asn297에서 Fc 영역의 올리고사카라이드 중 40% 이상이 어푸코실화되었음을 의미함)인 IgG1 또는 IgG3 이소타입(바람직하게는 IgG1 이소타입)의 항체를 의미한다. 일 양태에서, 푸코스 양은 Asn297에서 Fc 영역의 올리고사카라이드의 40% 내지 60%이다. 다른 양태에서, 푸코스 양은 50% 이하이고, 또 다른 양태에서 푸코스 양은 Asn297에서 Fc 영역의 올리고사카라이드의 30% 이하이다. 본 발명에 따라서, "푸코스 양"은 MALDI-TOF 질량 분광분석법에 의해 측정되고 평균 값으로서 계산된, Asn297에 부착된 모든 올리고사카라이드(당)(예를 들어, 복합, 하이브리드 및 고-만노즈 구조)의 합에 관련된, Asn297에서 올리고사카라이드(당) 쇄 내의 상기 올리고사카라이드(푸코스)의 양을 의미한다(푸코스 양을 결정하기 위한 상세한 절차는, 예컨대 국제 특허출원공개 제2008/077546호를 참조함). 뿐만 아니라, 일 양태에서, Fc 영역의 올리고사카라이드는 이분된다. 본 발명에 따른 어푸코실화된 항체는 Fc 영역에서 올리고사카라이드를 부분적으로 푸코실화시키기에 충분한 양으로 GnTIII 활성을 갖는 폴리펩타이드를 코딩하는 하나 이상의 핵산을 발현하도록 조작된 당화 변형 숙주 세포에서 발현될 수 있다. 일 양태에서, GnTIII 활성을 갖는 폴리펩타이드는 융합 폴리펩타이드이다. 다르게는, 미국 특허 제6,946,292호에 따라 숙주 세포의 α1,6-푸코실전달효소 활성을 감소시키거나 제거하여, 당화 변형 숙주 세포를 생산할 수 있다. 예를 들어, 발효 조건(예컨대, 발효 시간)에 의해 또는 상이한 푸코실화량을 갖는 둘 이상의 항체의 조합에 의해 항체 푸코실화의 양을 예정할 수 있다. 이러한 어푸코실화된 항체 및 개별적인 당화 조작 방법은 국제 특허출원공개 제2005/044859호, 국제 특허출원공개 제2004/065540호, 국제 특허출원공개 제2007/031875호, 문헌[Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180], 국제 특허출원공개 제99/154342호, 국제 특허출원공개 제2005/018572호, 국제 특허출원공개 제2006/116260호, 국제 특허출원공개 제2006/114700호, 국제 특허출원공개 제2005/011735호, 국제 특허출원공개 제2005/027966호, 국제 특허출원공개 제97/028267호, 미국 특허출원공개 제2006/0134709호, 미국 특허출원공개 제2005/0054048호, 미국 특허출원공개 제2005/0152894호, 국제 특허출원공개 제2003/035835호, 국제 특허출원공개 제2000/061739호에 기재되어 있다. 이들 당화 조작된 항체는 증가된 ADCC를 갖는다. 본 발명에 따른 어푸코실화된 항체를 수득하는 다른 당화 조작 방법은, 예를 들어 문헌[Niwa, R., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160]; 문헌[Shinkawa, T., et al., J Biol Chem, 278 (2003) 3466-3473]; 국제 특허출원공개 제03/055993호 또는 미국 특허출원공개 제2005/0249722호에 기재되어 있다.
이와 같이, 본 발명의 일 양상은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖고, CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한, CD20에 특이적으로 결합하는 IgG1 또는 IgG3 이소타입(바람직하게는 IgG1 이소타입)의 어푸코실화된 항-CD20 항체이다. 본 발명의 또 다른 양상은 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 CD20에 특이적으로 결합하는 IgG1 또는 IgG3 이소타입(바람직하게는 IgG1 이소타입)의 어푸코실화된 항-CD20 항체의 용도이다. 일 양태에서 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 내지 20%이다. 일 양태에서 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 내지 40%이다. 일 양태에서 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 0%이다.
CD20(또한, B-림프구 항원 CD20, B-림프구 표면 항원 B1, Leu-16, Bp35, BM5 및 LF5로 알려져 있음; 서열은 스위스프롯(SwissProt) 데이터베이스 엔트리 P11836에 의해 특징지어짐)은 프리-B 및 성숙 B 림프구 상에 위치된 약 35 kD의 분자량을 갖는 소수성 막통과 단백질이다(문헌[Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287]; 문헌[Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212]; 문헌[Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980]; 문헌[Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717]; 문헌[Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568]). 상응하는 인간 유전자는 MS4A1로도 알려져 있는 막-스패닝(spanning) 4-도메인, 하위계열 A, 멤버 1이다. 이 유전자는 막-스패닝 4A 유전자 계열의 일원을 코딩한다. 이 발생기 단백질 계열의 일원은 공통적인 구조적 특징 및 유사한 인트론/엑손 스플라이스 경계를 그 특징으로 하고, 조혈모세포 및 비-림프구 조직 사이에서 특유한 발현 패턴을 나타낸다. 이 유전자는 B-세포의 발달 및 형질 세포로의 분화에서 역할을 담당하는 B-림프구 표면 분자를 코딩한다. 이 계열의 일원은 계열 일원의 집단 중에서 11q12로 국한된다. 이 유전자의 다른 스플라이싱은 동일한 단백질을 코딩하는 두 전사체 변이체를 생성한다.
용어 "CD20" 및 "CD20 항원"은 본원에서 호환성 있게 사용되고, 세포에 의해 천연적으로 발현되거나 CD20 유전자로 형질감염된 세포 상에서 발현되는 인간 CD20의 임의의 변이체, 동형 및 종 상동체를 포함한다. 본 발명의 항체를 CD20 항원에 결합시키면 CD20을 불활성화시킴으로써 CD20을 발현하는 세포(예컨대, 종양 세포)의 사멸을 매개한다. CD20을 발현하는 세포의 사멸은 하기 기작 중 하나 이상에 의해 일어날 수 있다: 세포 사멸/아폽토시스 유도, ADCC 및 CDC.
당업계에서 인식되는 바와 같이 CD20의 동의어는 B-림프구 항원 CD20, B-림프구 표면 항원 B1, Leu-16, Bp35, BM5 및 LF5를 포함한다.
본 발명에 따른 용어 "항-CD20 항체"는 CD20 항원에 특이적으로 결합하는 항체이다. 항-CD20 항체의 CD20 항원으로의 결합 특성 및 생물학적 활성에 따라서 항-CD20 항체의 두 유형(유형 I 및 유형 II 항-CD20 항체)은 문헌[Cragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743]; 및 문헌[Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052]에 따라 구분될 수 있다. 표 1을 참조한다.
[표 1]
유형 I 및 유형 II 항-CD20 항체의 특성
Figure pct00001
유형 II 항-CD20 항체의 예는, 예를 들어 인간화된 B-Ly1 항체 IgG1(국제 특허출원공개 제2005/044859호에 개시된 키메라 인간화 IgG1 항체), 11B8 IgG1(국제 특허출원공개 제2004/035607호에 개시됨) 및 AT80 IgG1을 포함한다. 전형적으로, IgG1 이소타입의 유형 II 항-CD20 항체는 특징적인 CDC 특성을 보여준다. 유형 II 항-CD20 항체는 IgG1 이소타입의 유형 I 항체에 비해 감소된 CDC(IgG1 이소타입의 경우)를 갖는다.
유형 I 항-CD20 항체의 예는, 예를 들어 리툭시맙, HI47 IgG3(ECACC, 하이브리도마), 2C6 IgG1(국제 특허출원공개 제2005/103081호에 개시됨), 2F2 IgG1(국제 특허출원공개 제2004/035607호 및 국제 특허출원공개 제2005/103081호에 개시됨) 및 2H7 IgG1(국제 특허출원공개 제2004/056312호에 개시됨)을 포함한다.
본 발명에 따른 어푸코실화된 항-CD20 항체는, 일 양태에서 유형 II 항-CD20 항체이고, 다른 양태에서는 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체이다.
본 발명에 따른 어푸코실화된 항-CD20 항체는 푸코스가 감소되지 않은 항-CD20 항체와는 달리 증가된 항체 의존성 세포독성(ADCC)을 갖는다.
"증가된 항체 의존성 세포독성(ADCC)을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체"는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 의미하는데, 이 용어가 본원에서는 당업계의 숙련가에게 공지되어 있는 임의의 적합한 방법에 의해 결정될 때 증가된 ADCC를 갖는 것으로 정의되기 때문이다. 하나의 인정된 시험관내 ADCC 검정은 다음과 같다:
1) 검정은 항체의 항원-결합 영역에 의해 인식되는 표적 항원을 발현하는 것으로 알려진 표적 세포를 사용하고;
2) 검정은 효과기 세포로서, 무작위적으로 선택된 건강한 공여자의 혈액으로부터 단리된 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용하고;
3) 하기 프로토콜에 따라 검정을 수행하고:
i) 표준 밀도 원심분리 절차를 이용하여 PBMC를 단리하고, RPMI 세포 배양 배지 중에 5 × 106 개 세포/㎖로 현탁함;
ii) 표적 세포를 표준 조직 배양 방법에 의해 생육시키고, 90%보다 높은 생존율로 대수증식기로부터 수확하고, RPMI 세포 배양 배지 중에서 세척하고, 51Cr 100 마이크로큐리(micro-Curie)로 표지화하고, 세포 배양 배지로 2회 세척하고, 105개 세포/㎖의 밀도로 세포 배양 배지에 재현탁시킴;
iii) 상기 최종 표적 세포 현탁액 100 ㎕를 96개-웰 미소적정판의 각 웰에 옮겨넣음;
iv) 항체를 세포 배양 배지 중에서 4000 ng/㎖로부터 0.04 ng/㎖로 연속 희석시키고, 생성되는 항체 용액 50 ㎕를 96개-웰 미소적정판의 표적 세포에 첨가하여, 상기 전체 농도 범위를 포괄하는 다양한 항체 농도를 3회씩 시험함;
v) 최대 방출(MR) 대조군으로서, 표지화된 표적 세포를 함유하는 플레이트의 3개의 추가적인 웰에 항체 용액(상기 iv) 대신 비-이온성 세제(노니뎃(Nonidet), 시그마(Sigma), 미국 세인트루이스 소재)의 2%(VN) 수용액 50 ㎕를 넣음;
vi) 자발적인 방출(SR) 대조군으로서, 표지화된 표적 세포를 함유하는 플레이트의 3개의 추가적인 웰에 항체 용액(상기 iv) 대신 RPMI 세포 배지 50 ㎕를 넣음;
vii) 이어서, 96개-웰 미소적정판을 50 × g에서 1분 동안 원심분리하고, 4℃에서 1시간 동안 배양함;
viii) PBMC 현탁액(상기 i) 50 ㎕를 각 웰에 첨가하여 25:1의 효과기:표적 세포 비를 수득하고, 플레이트를 5% CO2 대기하에 37℃에서 4시간 동안 항온처리기에 넣어둠;
ix) 각 웰로부터 세포가 없는 상청액을 수확하고, 감마 계수기를 이용하여 실험적으로 방출된 방사능(ER)을 정량화함;
x) 수학식 (ER-MR)/(MR-SR) × 100에 따라 각 항체 농도에 대해 특이적인 세포 용해의 백분율을 계산하는데, 이때 ER은 그 항체 농도에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 ix 참조)이고, MR은 MR 대조군(상기 v 참조)에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 ix 참조)이고, SR은 SR 대조군(상기 vi 참조)에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 ix 참조)임;
4) "증가된 ADCC"는 상기 시험된 항체 농도 범위 내에서 관찰되는 특이적인 세포 용해의 최대 백분율의 증가 및/또는 상기 시험된 항체 농도 범위 내에서 관찰된 특이적인 세포 용해의 최대 백분율의 절반을 달성하는데 필요한 항체 농도의 감소로서 정의된다. ADCC의 증가는 상기 검정에 의해 측정되고 동일한 항체에 의해 매개되고 동일한 유형의 숙주 세포에 의해 생성되고 당업계의 숙련가에게 공지되어 있는 동일한 표준 생산, 정제, 제형화 및 저장 방법을 이용하지만, GnTIII을 과발현하도록 조작된 숙주 세포에 의해 생산되지 않은 ADCC에 대한 것이다.
상기 항체의 당화 조작에 의해 상기 "증가된 ADCC"를 수득할 수 있는데, 이는 문헌[Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 미국 특허 제6,602,684호에 기재되어 있는 그들의 올리고사카라이드 성분을 조작함으로써 단클론성 항체의 상기 천연, 세포-매개되는 효과기 작용을 향상시킴을 의미한다.
용어 "보체-의존성 세포독성(CDC)"은 보체의 존재하에서 본 발명에 따른 항체에 의해 인간 종양 표적 세포를 용해시킴을 지칭한다. 바람직하게는 보체의 존재하에 본 발명에 따른 항-CD20 항체로 CD20 발현 세포의 제제를 처리함으로써 CDC를 측정한다. 항체가 4시간 후에 100 nM의 농도에서 종양 세포의 20% 이상의 세포 용해(세포 사멸)를 유도하는 경우 CDC가 발견된다. 바람직하게는 51Cr 또는 Eu 표지화된 종양 세포 및 방출되는 51Cr 또는 Eu의 측정을 이용하여 검정을 수행한다. 대조군은 보체와 함께, 그러나 항체 없이 종양 표적 세포를 항온처리함을 포함한다.
"리툭시맙" 항체(기준 항체; 유형 I 항-CD20 항체의 예)는 인간 CD20 항원을 향해 유도된 단클론성 항체를 함유하는 유전자 조작된 키메라 인간 감마 1 뮤린 불변성 도메인이다. 이 키메라 항체는 인간 감마 1 불변성 도메인을 함유하고, 아이디이씨 파마슈티칼즈 코포레이션(IDEC Pharmaceuticals Corporation)에게 양도된, 1998년 4월 17일자로 허여된 미국 특허 제5,736,137호(앤더슨(Anderson) 등)에서 명칭 "C2B8"로 확인된다. 리툭시맙은 재발되거나 불응성의 저등급 또는 소낭성, CD20 양성, B 세포 비-호지킨 림프종을 앓는 환자의 치료를 위해 승인된다. 시험관내 작용 기작 연구는 리툭시맙이 인간 보체-의존성 세포독성(CDC)을 나타냄을 보여주었다(문헌[Reff, M.E., et al., Blood 83 (1994) 435-445]). 또한, 이는 항체-의존성 세포독성(ADCC)을 측정하는 검정에서 상당한 활성을 나타낸다. 리툭시맙은 어푸코실화되지 않는다.
[표 2]
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용어 "인간화된 B-Ly1 항체"는 IgG1로부터의 인간 불변성 도메인을 사용하여 키메라화시킨 후 인간화시킴으로써(국제 특허출원공개 제2005/044859호 및 국제 특허출원공개 제2007/031875호 참조), 뮤린 단클론성 항-CD20 항체 B-Ly1(뮤린 중쇄의 가변성 영역(VH): 서열번호 1; 뮤린 경쇄의 가변성 영역(VL): 서열번호 2)(문헌[Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139] 참조)로부터 수득된, 국제 특허출원공개 제2005/044859호 및 국제 특허출원공개 제2007/031875호에 개시된 인간화된 B-Ly1 항체를 지칭한다. 이들 "인간화된 B-Ly1 항체"는 국제 특허출원공개 제2005/044859호 및 국제 특허출원공개 제2007/031875호에 상세하게 개시되어 있다.
일 양태에서, "인간화된 B-Ly1 항체"는 서열번호 3 내지 서열번호 19(국제 특허출원공개 제2005/044859호 및 국제 특허출원공개 제2007/031875호의 B-HH2 내지 B-HH9 및 B-HL8 내지 B-HL17)의 군으로부터 선택되는 중쇄의 가변성 영역(VH)을 갖는다. 하나의 특정 양태에서, 상기 가변성 도메인은 서열번호 3, 4, 7, 9, 11, 13 및 15(국제 특허출원공개 제2005/044859호 및 국제 특허출원공개 제2007/031875호의 B-HH2, BHH-3, B-HH6, B-HH8, B-HL8, B-HL11 및 B-HL13)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 특정 양태에서, "인간화된 B-Ly1 항체"는 서열번호 47(국제 특허출원공개 제2005/044859호 및 국제 특허출원공개 제2007/031875호의 B-KV1)의 경쇄의 가변성 영역(VL)을 갖는다. 하나의 특정 양태에서, "인간화된 B-Ly1 항체"는 서열번호 7(국제 특허출원공개 제2005/044859호 및 국제 특허출원공개 제2007/031875호의 B-HH6)의 중쇄의 가변성 영역(VH) 및 서열번호 20(국제 특허출원공개 제2005/044859호 및 국제 특허출원공개 제2007/031875호의 B-KV1)의 경쇄의 가변성 영역(VL)을 갖는다. 또한, 일 양태에서 인간화된 B-Ly1 항체는 IgG1 항체이다. 본 발명에 따라서, 이러한 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체는 국제 특허출원공개 제2005/044859호, 국제 특허출원공개 제2004/065540호, 국제 특허출원공개 제2007/031875호, 문헌[Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 국제 특허출원공개 제99/154342호에 기재되어 있는 절차에 따라 Fc 영역에서 당화-조작된다(GE). 일 양태에서, 어푸코실화된 당화-조작된 인간화된 B-Ly1은 B-HH6-B-KV1 GE이다. 일 양태에서, 항-CD20 항체는 오비누투주맙이다(권고된 INN, 문헌[WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453]). 본원에서 사용되는 경우, 오비누투주맙은 GA101에 대한 동의어이다. 이는 모든 이전 형태를 대체하고(예를 들어, 문헌[Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76]), 이전에 아푸투주맙으로서 공지되었다(권고된 INN, 문헌[WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176;Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124]).
이러한 당화 조작된 인간화된 B-Ly1 항체는 바람직하게는 감소된 수준의 푸코스 잔기를 갖는, Fc 영역에서의 변화된 당화 패턴을 갖는다. 일 양태에서, 푸코스의 양은 Asn297에서 올리고사카라이드의 총량의 60% 이하이다(일 양태에서, 푸코스의 양은 40% 내지 60%이고, 다른 양태에서, 푸코스의 양은 50% 이하이고, 또 다른 양태에서, 푸코스의 양은 30% 이하이다). 다른 양태에서, Fc 영역의 올리고사카라이드는 바람직하게는 이분된다. 이들 당화-조작된 인간화된 B-Ly1 항체는 증가된 ADCC를 갖는다.
용어 "CD79b"는, 본원에 사용될 경우, 달리 지시되지 않는 한, 포유동물, 예컨대 영장류(예를 들어, 인간, 사이노몰구스(cynomolgus) 원숭이(cyno)) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 비롯한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 고유의 CD79b를 지칭한다. 인간 CD79b는 또한 본원에서 "PR036249"(서열번호 22)로서 지칭되고, 또한 "DNA225786"으로서 본원에 지칭되는 뉴클레오타이드 서열(서열번호 21)에 의해 코딩된다. 사이노몰구스 CD79b는 또한 본원에서 "cyno CD79b" 또는 "PR0283627"(서열번호 80)로서 지칭되고, 또한 "DNA548455"로서 본원에 지칭되는 뉴클레오타이드 서열(서열번호 79)에 의해 코딩된다. 용어 "CD79b"는 "전장", 미가공 CD79b뿐만 아니라, 세포에서 가공되어 생성된 임의의 형태의 CD79b를 포괄한다. 이 용어는 또한 CD79b의 천연 발생 변이체, 예를 들어, 스플라이스(splice) 변이체, 대립형질 변이체 및 동형을 포괄한다. 본원에 기재된 CD79b 폴리펩타이드는 다양한 공급원으로부터, 예컨대 인간 조직 유형으로부터 또는 다른 공급원으로부터 단리될 수 있거나, 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. "고유의 서열 CD79b 폴리펩타이드"는 천연으로부터 유래된 상응하는 CD79b 폴리펩타이드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 포함한다. 이러한 고유의 서열 CD79b 폴리펩타이드는 또한 천연으로부터 단리될 수 있거나, 재조합 또는 합성 수단에 의해 생산될 수 있다. 용어 "고유의 서열 CD79b 폴리펩타이드"는 구체적으로 특정 CD79b 폴리펩타이드의 천연-발생의 절단된(truncated) 또는 분비된 형태(예를 들어, 세포외 도메인 서열), 폴리펩타이드의 천연-발생 변이체 형태(예를 들어, 다르게는 스플라이싱된 형태) 및 천연-발생 대립형질 변이체를 포괄한다.
"MA79b" 또는 "뮤린 CD79b 항체" 또는 "뮤린 항-CD79b 항체"는 본원에서 뮤린 항-CD79b 단클론성 항체를 구체적으로 지시하기 위해 사용되고, 이때 뮤린 항-CD79b 단클론성 항체는 서열번호 26의 경쇄 가변성 도메인(도 7) 및 서열번호 29의 중쇄 가변성 도메인(도 8)을 포함한다. 뮤린 항-CD79b 단클론성 항체는 시판원, 예컨대 바이오메다(Biomeda)(항-인간 CD79b 항체; 미국 캘리포니아주 포스터 시티 소재), 비디 바이오사이언스(BD bioscience)(항-인간 CD79b 항체; 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재) 또는 안셀(Ancell)(항-인간 CD79b 항체; 미국 미네소타주 베이포트 소재)로부터 구매되거나 하이브리도마 클론 3A2-2E7 미국 종균협회(ATCC: American Type Culture Collection) 기탁 지정 번호 HB11413(1993년 7월 20일자로 ATCC에 의해 기탁됨)으로부터 생성될 수 있다.
"chMA79b" 또는 "키메라 MA79b 항체"는 본원에서 구체적으로 키메라 항-인간 CD79b 항체(2006년 8월 3일자로 출원된 미국 특허출원 제11/462,336호에 이전에 기재된 바와 같음)를 지칭하기 위해 사용되고, 이때 키메라 항-CD79b 항체는 서열번호 23의 경쇄를 포함한다. 서열번호 23의 경쇄는 추가로 서열번호 26의 가변성 도메인(도 7) 및 인간 IgG1의 경쇄 불변성 도메인을 추가로 포함한다. 키메라 항-CD79b 항체는 서열번호 24의 중쇄를 추가로 포함한다. 서열번호 24의 중쇄는 서열번호 29의 가변성 도메인(도 8) 및 인간 IgG1의 중쇄 불변성 도메인을 추가로 포함한다.
"항-cynoCD79b" 또는 "항-cyno CD79b"는 본원에서 cyno CD79b에 결합하는 항체(2006년 8월 3일자로 출원된 미국 특허출원 제11/462,336호에 이전에 기재된 바와 같음)를 지칭하기 위해 사용된다. "항-cynoCD79b(ch10D10)" 또는 "ch10D10"은 본원에서 키메라 항-cynoCD79b(2006년 8월 3일자로 출원된 미국 특허출원 제11/462,336호에 이전에 기재된 바와 같음)를 지칭하기 위해 사용되고, 이는 cynoCD79b(서열번호 80)에 결합한다. 항-cynoCD79b(chlOD10) 또는 ch10D10은 서열번호 81의 경쇄를 포함하는 키메라 항-cynoCD79b 항체이다. 항-cynoCD79b(chlOD10) 또는 ch10D10은 추가로 서열번호 82의 중쇄를 포함한다.
"MA79b-그라프트" 또는 "MA79b-그라프팅된 '인간화된' 항체" 또는 "huMA79b 그라프트"는 본원에서 뮤린 항-CD79b 항체(MA79b)로부터의 초가변성 영역을 억셉터(acceptor) 인간 컨센서스 VL 카파 I(huKI) 및 인간 하위군 III 컨센서스 VH(huIII)(R71A, N73T 및 L78A를 가짐)에 그라프팅함으로써 생성되는 그라프트를 구체적으로 지칭하기 위해 사용된다(문헌[Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285 (1992)])(서열번호 27(도 7) 및 서열번호 30(도 8) 참조).
용어 "항-CD79b 항체" 또는 "CD79b에 결합하는 항체"는, 그 항체가 CD79b를 표적화하는데 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화력을 갖고 CD79b에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 바람직하게는, 항-CD79b 항체의 관련되지 않은 비-CD79b 단백질로의 결합 정도는, 예를 들어, 방사선면역검정(RIA: radioimmunoprecipitation)으로 측정할 경우, 항체의 CD79b로의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 양태에서, CD79b에 결합하는 항체는 ≤ 1 μΜ, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, 또는 ≤ 0.1 nM의 해리 상수(Kd)를 갖는다. 특정 양태에서, 항-CD79b 항체는 상이한 종으로부터의 CD79b 사이에서 보존되는 CD79b의 에피토프에 결합한다. 용어 "항-CD79b 항체"는 특히 국제 특허출원공개 제2009/099728호(이는 참고로 그의 전체가 혼입됨)에 개시된 바와 같은 임의의 항-CD79b 항체를 지칭한다.
"단리된 항체"는 그의 천연 환경의 하나의 구성성분으로부터 식별 및 분리되고/되거나 회수되는 것이다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 항체를 위한 치료 용도에 간섭할 물질이고, 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 용질일 수 있다. 바람직한 양태에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의해 결정될 경우 항체의 95 중량% 초과로, 가장 바람직하게는 99 중량% 이상으로, (2) 스피닝 컵 배열분석장치(spinning cup sequenator)의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상의 잔기를 수득하기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시(Coomassie) 블루, 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하는 환원 또는 비환원 조건하의 SDS-PAGE에 의해 균일하도록 정제될 것이다. 단리된 항체는, 항체의 천연 환경의 하나 이상의 구성성분이 존재하지 않을 것이므로 재조합 세포내에서 제자리에 항체를 포함한다. 그러나, 보통, 단리된 항체는 하나 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
염기성 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 이종사량체성 당단백질이다(IgM 항체는 J 쇄로 칭해지는 추가의 폴리펩타이드와 함께 5개의 염기성 이종사량체 단위로 구성되고, 따라서 10개의 항원 결합 자리를 포함하지만, 분비된 IgA 항체는 중합되어 J 쇄와 함께 2 내지 5개의 염기성 4-쇄 단위를 포함하는 다가 조립체를 형성할 수 있음). IgG의 경우, 4-쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 쇄는 1개의 공유 다이설파이드 결합에 의해 H에 연결되는 반면, 2개의 H 쇄는 H 쇄 이소타입에 따라서 하나 이상의 다이설파이드 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 및 L 쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄내 다이설파이드 가교를 갖는다. 각각의 H 쇄는 N-말단에서 가변성 도메인(VH)을 갖고, 각각의 α 및 γ 쇄의 경우 3개의 불변성 도메인(CH) 및 μ 및 ε 이소타입의 경우 4개의 CH 도메인이 수반된다. 각각의 L 쇄는 N-말단에 가변성 도메인(VL)을 갖고, 그의 다른 말단에 불변성 도메인(CL)이 수반된다. VL은 VH와 정렬되고 CL은 중쇄의 제1 불변성 도메인(CH1)과 정렬된다. 특별한 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변성 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 믿겨진다. VH 및 VL이 함께 쌍을 형성하여 단일 항원-결합 자리를 형성한다. 항체의 상이한 부류의 구조 및 특성에 대해, 예를 들어, 문헌[Basic and Clinical Immunology, 8th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6]을 참조한다.
임의의 척추동물 종으로부터의 L 쇄는, 이들의 불변성 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파 및 람다로 칭해지는 명확히 별개인 2가지 유형중 하나로 배정될 수 있다. 이들 중쇄(CH)의 불변성 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 면역 글로불린은 상이한 부류 또는 이소타입으로 배정될 수 있다. 5가지의 면역 글로불린이 존재한다: 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 지정된 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM. γ 및 α 부류는 CH 서열 및 작용에 있어서 비교적 부수적인 차이에 기초하여 하위부류로 추가로 분류되고, 인간은 다음의 하위부류를 발현한다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2.
항체의 "가변성 영역" 또는 "가변성 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄의 가변성 도메인은 "VH"로서 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변성 도메인은 "VL"로서 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 항체의 가장 가변성인 부분이고, 항원-결합 자리를 포함한다.
용어 "가변성"은 가변성 도메인의 특정 구획이 항체 간의 서열에 있어서 크게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 도메인은 항원 결합을 매개하고 그의 특별한 항원에 대한 특별한 항체의 특이성을 규정한다. 그러나, 가변성은 가변성 도메인의 110-아미노산 폭에 걸쳐 균일하게 분포되지 않는다. 그 대신, V 영역은, 각각 9 내지 12개 아미노산 길이의 "초가변성 영역"으로 칭해지는 극히 가변성인 더 짧은 영역에 의해 분리되는 15 내지 30개 아미노산의 골격구조 영역(FR)으로 칭해지는 비교적 불변적인 연장부로 구성된다. 고유의 중쇄 및 경쇄의 가변성 도메인은 대부분 β-시이트 입체배좌를 채택하고 3개의 초가변성 영역에 의해 연결되는 4개의 FR을 각각 포함하는데, 이는 루프 연결을 형성하고 몇몇 경우에 β-시이트 구조의 일부를 형성한다. 각각의 쇄에서 초가변성 영역은 FR과 매우 근접하여 함께 유지되고, 다른 쇄로부터의 초가변성 영역과 함께, 항체의 항원-결합 자리의 형성에 기여한다(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)] 참조). 불변성 도메인은 항체를 항원에 결합시키는데 직접적으로 관여되지 않지만, 다양한 효과기 작용, 예컨대 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)에서 항체의 참여를 나타낸다.
"원상태(intact)" 항체는 항원-결합 자리뿐만 아니라, CL 및 적어도 중쇄 불변성 도메인, CH1 , CH2 및 CH3을 포함하는 항체이다. 불변성 도메인은 고유의 서열 불변성 도메인(예를 들어, 인간 고유의 서열 불변성 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 바람직하게는, 원상태 항체는 하나 이상의 효과기 작용을 갖는다.
"네이키드(naked) 항체"는 본원에서 목적을 위해 세포독성 부분 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체이다.
"항체 단편"은 원상태 항체의 일부, 바람직하게는 원상태 항체의 항원 결합 또는 가변성 영역을 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디(diabody); 선형 항체(미국 특허 제5,641,870호, 실시예 2; 문헌[Zapata et al., Protein Eng . 8(10): 1057-1062 [1995]] 참조); 단일-쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체가 포함된다. 일 양태에서, 항체 단편은 원상태 항체의 항원 결합 자리를 포함하고, 따라서 항원에 결합하는 능력을 보유한다.
항체의 파파인(papain) 분해는 2개의 동일힌 항원-결합 단편, 소위 "Fab" 단편, 및 잔여 "Fc" 단편을 생산하고, 쉽게 결정화되는 능력을 반영하는 표시이다. Fab 단편은 H 쇄(VH)의 가변성 영역 도메인, 및 하나의 중쇄의 제1 불변성 도메인(CH1)과 함께 전체 L 쇄를 구성한다. 각각의 Fab 단편은 항원 결합에 대하여 1가이고, 즉 이는 단일 항원-결합 자리를 갖는다. 항체의 펩신 처리로 인해 단일의 거대 F(ab')2 단편이 수득되는데, 이는 2가 항원-결합 활성을 갖는 2개의 다이설파이드 연결된 Fab 단편에 대략 상응하고, 여전히 항원을 가교결합할 수 있다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 카복시 말단에서 추가의 소수의 잔기를 가짐으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 본원에서 Fab'를 위해 지정되고, 이때 불변성 도메인의 시스테인 잔기는 유리 티올 기를 함유한다. F(ab')2 항체 단편은 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 고유적으로 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
Fc 단편은 다이설파이드에 의해 함께 유지되는 양쪽 H 쇄의 카복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 효과기 작용은 Fc 영역중의 서열에 의해 결정되고, 이러한 영역은 또한 세포의 특정 유형에서 발견되는 Fc 수용체(FcR)에 의해 인식되는 부분이다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 -결합 자리를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이러한 단편은 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변성 영역 도메인에 의해 밀착된 비공유적 회합으로 구성된다. 단일-쇄 Fv(scFv) 종에서, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변성 도메인은, 경쇄 및 중쇄가 2개-쇄 Fv 종에서와 유사한 "이량체" 구조로 회합할 수 있도록 가요성 펩타이드 연결기에 의해 공유적으로 연결될 수 있다. 이들 2개의 도메인의 폴딩은 항원 결합을 위한 아미노산 잔기에 기여하고 항체에 대한 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변성 루프(H 및 L 쇄 각각으로부터 3개의 루프)를 발생시킨다. 그러나, 단일 가변성 도메인(또는 항원에 특이적인 단지 3개의 CDR을 포함하는 절반의 Fv) 조차도 전체 결합 자리에 비해 더 낮은 친화력이긴 하지만 항원을 인식하고 이에 결합하는 능력을 갖는다.
또한 "sFv" 또는 "scFv"로서 약자화된 "단일-쇄 Fv"는 단일 폴리펩타이드 쇄로 연결되는 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩타이드는 sFv가 항원 결합을 위해 필요한 구조를 형성할 수 있도록 하는 폴리펩타이드를 VH 및 VL 도메인 사이에 추가로 포함한다. sFv에 대한 검토를 위해, 문헌[Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]; 하기 문헌[Borrebaeck 1995]을 참조한다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 자리를 갖는 항체 단편을 지칭하고, 이러한 단편은 경쇄 가변성 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변성 도메인(VH)을 동일한 폴리펩타이드 쇄(VH-VL)에서 포함한다. 작은 항체 단편은, V 도메인의 쇄간(쇄내가 아님) 쌍형성이 달성되어 2가 단편, 즉 2개의 항원-결합 자리를 갖는 단편을 생성하도록, 짧은 연결기(약 5 내지 10개 잔기)를 갖는 sFv 단편(이전 문단 참조)을 VH 및 VL 도메인 사이에서 작성함으로써 제조된다. 디아바디는 2가이거나 이중특이적일 수 있다. 이중특이적 디아바디는 두 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩타이드 쇄 상에 존재하는 2개의 "크로스오버(crossover)" sFv 단편의 이종이량체이다. 디아바디는, 예를 들면, 유럽 특허 제404,097호; 국제 특허출원공개 제93/11161호; 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9: 129-134 (2003)]; 및 문헌[Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)]에 더욱 자세히 기재되어 있다. 트리아바디(triabody) 및 테트라바디(tetrabody)는 또한 문헌[Hudson et al., Nat. Med. 9: 129-134 (2003)]에 기재되어 있다.
용어 "단클론성 항체"는 본원에 사용될 경우 실질적으로 균일한 항체의 모집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 모집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단클론성 항체는 매우 특이적이고, 단일 항원 자리를 향해 유도된다. 더욱이, 상이한 결정자(에피토프)를 향해 유도되는 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제조물과 대조적으로, 각각의 단클론성 항체는 항원 상의 단일 결정자를 향해 유도된다. 이들의 특이성에 더하여, 단클론성 항체는 이들이 다른 항체에 의해 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. "단클론성"이라는 수식어는 임의의 특별한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지 않는다. 예를 들면, 본 발명에서 유용한 단클론성 항체는 최초로 문헌[Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 세균, 진핵 동물 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참조). "단클론성 항체"는 또한 파아지 항체 라이브러리로부터, 예를 들면 문헌[Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991)] 및 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol, 222:581-597 (1991)]에 기재된 기법을 사용하여 단리될 수 있다.
단클론성 항체는 본원에서 "키메라" 항체를 포함하고, 이때 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특별한 종으로부터 유래되거나 특별한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서의 상응하는 서열에 동일하거나 상동성인 반면, 쇄의 나머지 부분은 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체뿐만 아니라, 이러한 항체의 단편에서의 상응하는 서열에 동일하거나 상동성이다(미국 특허 제4,816,567호; 및 문헌[Morrison et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81:6851-6855 (1984)]). 본원에서 흥미로운 키메라 항체는 비-인간 영장류(예를 들어, 긴 꼬리 원숭이, 유인원 등)로부터 유래된 가변성 도메인 항원-결합 서열, 및 인간 불변성 영역 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.
비-인간(예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 항체로부터 유래된 최소한의 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부부의 경우, 인간화된 항체는 인간 면역 글로불린(수여자 항체)이고, 이때 수여자의 초가변성 영역으로부터의 잔기는 원하는 항체 특이성, 친화력, 및 능력을 갖는 비-인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 초가변성 영역으로부터의 잔기로 대체된다. 몇몇 경우에, 인간 면역 글로불린의 골격구조 영역(FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 더욱이, 인간화된 항체는 수여자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형이 이루어져 항체 성능을 추가로 개선시킨다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변성 도메인 모두를 실질적으로 포함할 것이고, 이때 모든 또는 실질적으로 모든 초가변성 루프는 비-인간 면역 글로불린의 루프에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역 글로불린 서열의 FR이다. 인간화된 항체는 임의적으로 또한 면역 글로불린 불변성 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역 글로불린의 불변성 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가의 세부사항을 위해, 문헌[Jones et al., Nature 321 :522-525 (1986)]; 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)]; 및 문헌[Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다. 또한 하기 논문 및 본원에 인용된 참고문헌을 참조한다: 문헌[Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol., 1: 105-115 (1998)]; 문헌[Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23: 1035-1038 (1995)]; 문헌[Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech., 5:428-433 (1994)].
"thio"는, 항체를 지칭하기 위해 사용될 경우, 시스테인-조작된 항체를 지칭하는 반면, "hu"는, 항체를 지칭하기 위해 사용될 경우, 인간화된 항체를 지칭한다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체, 및/또는 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기법을 사용하여 제조된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 구체적으로 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 배제한다. 인간 항체는 파아지-디스플레이(phage-display) 라이브러리를 비롯하여 당업계에 공지된 다양한 기법을 사용하여 생산될 수 있다(문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991)]; 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]). 또한, 문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)]; 문헌[Boerner et al., J. Immunol., 147(l):86-95 (1991)]에 기재된 방법이 인간 단클론성 항체의 제조에 이용가능하다. 또한, 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)]을 참조한다. 인간 항체는, 이러한 항체를 항원 챌린지(challenge)에 반응하여 생산하도록 변형되었지만 이의 내생성 유전자자리가 불능화된 유전자 이식 동물, 예를 들어, 면역화된 제노마우스(xenomouse)에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다(예를 들어, 제노마우스(XENOMOUSE: 상표) 기술에 관련된 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584 호 참조). 또한, 예를 들면, 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관련된 문헌[Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]을 참조한다.
용어 "초가변성 영역", "HVR", 또는 "HV"는, 본원에 사용될 경우 서열에 있어서 초가변성이고/이거나 구조적으로 한정된 루프를 형성하는 항체 가변성 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 초가변성 영역을 포함한다; VH중 3개(H1, H2, H3), 및 VL중 3개(L1, L2, L3). 다수의 초가변성 영역 설명이 사용되고 본원에 포괄된다. 카밧 상보성 결정 영역(CDR)은 서열 가변성에 기초하고, 가장 흔하게 사용된다(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]). 코티아(Chothia)는 대신 구조적 루프의 위치를 지칭한다(문헌[Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]). 코티아 CDR-H1 루프의 말단은 카밧 넘버링 관습을 사용하여 번호매겨질 경우 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34 사이에서 달라진다(이는 카밧 넘버링 체계가 삽입물을 H35A 및 H35B에 놓기 때문이고; 35A 또는 35B가 존재하지 않을 경우, 루프는 32에서 종결되고; 35A만 존재할 경우, 루프는 33에서 종결되며; 35A 및 35B 둘 다 존재할 경우, 루프는 34에서 종결된다). AbM 초가변성 영역은 카밧 CDR 및 코티아 구조적 루프 사이에 절충을 제시하고, 옥스포드 몰레큘러(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접촉" 초가변성 영역은 이용가능한 복합 결정 구조물의 분석에 기초한다. 이들 각각의 초가변성 영역으로부터의 잔기는 아래에 주지된다.
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초가변성 영역은 다음과 같은 "연장된 초가변성 영역"을 포함할 수 있다: VL중 24 내지 36 또는 24 내지 34(L1), 46 내지 56 또는 50 내지 56(L2) 및 89 내지 97(L3) 및 VH중 26 내지 35B(H1), 50 내지 65, 47 내지 65 또는 49 내지 65(H2) 및 93 내지 102, 94 내지 102 또는 95 내지 102(H3). 가변성 도메인 잔기는 각각의 이들 정의를 위해 상기 문헌[Kabat et al.]에 따라 번호매겨진다.
"골격구조" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 초가변성 영역 잔기 이외의 가변성 도메인 잔기이다.
용어 "카밧에서와 같은 가변성 도메인 잔기 넘버링" 또는 "카밧에서와 같은 아미노산 위치 넘버링", 및 이의 변형어는, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에서 항체 모음의 중쇄 가변성 도메인 또는 경쇄 가변성 도메인을 위해 사용되는 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변성 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 이들로의 삽입에 상응하는 더 적은 또는 추가의 아미노산을 함유한다. 예를 들면, 중쇄 가변성 도메인은 H2의 잔기 52 이후에 단일 아미노산 삽입물(카밧에 따라 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 이후에 삽입된 잔기(예를 들어, 카밧에 따라 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카밧 넘버링은 "표준" 카밧 넘버링된 서열과 항체 서열의 상동성의 영역에서 정렬에 의해 소정의 항체에 대해 결정될 수 있다.
카밧 넘버링 시스템은 일반적으로 가변성 도메인중의 잔기를 지칭할 경우 사용된다(대략 경쇄의 잔기 1 내지 107 및 중쇄의 잔기 1 내지 113)(예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]). 면역 글로불린 중쇄 불변성 영역에서의 잔기를 지칭하는 경우에 "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 색인"이 일반적으로 이용된다(예를 들어, 상기 문헌[Kabat, et al.]에 보고된 EU 색인). "카밧에서와 같은 EU 색인"은 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 본원에 달리 지시되지 않는 한, 항체의 가변성 도메인에서 잔기 번호에 대한 지칭은 카밧 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다. 본원에 달리 지시되지 않는 한, 항체의 불변성 도메인에서 잔기 번호에 대한 지칭은 EU 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다(예를 들어, 미국 가출원 제60/640,323호 참조, EU 넘버링에 대한 이해).
"친화력 성숙된" 항체는 하나 이상의 HVR에서 하나 이상의 변경을 갖고, 이러한 변경으로 인하여 변경되지 않는 모 항체에 비하여 항원에 대한 항체의 친화력이 개선되는 항체를 지칭한다. 바람직한 친화력 성숙된 항체는 타깃 항원에 대하여 나노몰 또는 심지어 피코몰의 친화력을 가질 것이다. 친화력 성숙된 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 생산된다. 문헌[Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH 및 VL 도메인 셔플링(shuffling)에 의한 친화력 성숙을 기재한다. HVR 및/또는 골격구조 잔기의 무작위 돌연변이생성은: 문헌[Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994)]; 문헌[Schier et al. Gene 169: 147-155 (1995)]; 문헌[Yelton et al. J. Immunol. 155: 1994-2004 (1995)]; 문헌[Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)]; 및 문헌[Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 의해 기재되어 있다.
"차단" 항체 또는 "길항물질" 항체는 이것이 결합하는 항원의 생물학적 활성을 저해하거나 감소시키는 항체이다. 바람직한 차단 항체 또는 길항물질 항체는 실질적으로 또는 완전하게 항원의 생물학적 활성을 저해한다.
"작용물질 항체"는, 본원에 사용될 경우, 흥미로운 폴리펩타이드의 작용 활성중 적어도 하나를 모방하는 항체이다.
"종-의존성 항체", 예를 들어, 포유동물 항-인간 IgE 항체는, 이것이 제2 포유동물 종으로부터의 항원의 동족체에 대하여 갖는 친화력에 비해, 제1 포유동물 종으로부터의 항원에 대하여 더 강한 결합 친화력을 갖는 항체이다. 그러나, 정상적으로, 인간 항원에 "특이적으로 결합하는"(즉, 약 1 × 10-7 M 이하, 바람직하게는 약 1 × 10 -8 이하, 가장 바람직하게는 약 1 × 10-9 M 이하의 결합 친화력(Kd) 값을 갖는) 종-의존성 항체는 제2 비-인간 포유동물 종으로부터의 항원의 동족체에 대해 결합 친화력을 갖고, 이는 인간 항원에 대한 그의 결합 친화력에 비해 적어도 약 50 배, 또는 적어도 약 500 배, 또는 적어도 약 1000 배 더 약하다. 종-의존성 항체는 상기 정의된 바와 같은 임의의 다양한 유형의 항체일 수 있지만, 바람직하게는 인간화된 또는 인간 항체이다.
"결합 친화력"은 일반적으로 분자(예를 들어, 항체) 및 그의 결합 파트너(예를 들어, 항원)의 단일 결합 자리 사이에 비공유적 상호작용의 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 지시되지 않는다면, 본원에 사용될 경우, "결합 친화력"은 내재적 결합 친화력을 지칭하고, 이는 결합 쌍의 일원들 사이에 1:1 상호작용을 반영한다(예를 들어, 항체 및 항원). 그의 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화력은 일반적으로 해리 상수(Kd)로 표시될 수 있다. 친화력은 본원에 기재된 방법을 비롯하여 당업계에 공지된 통상의 방법에 의해 측정될 수 있다. 낮은-친화력 항체는 일반적으로 항원에 느리게 결합하고 쉽게 해리하는 경향이 있는 반면, 고-친화력 항체는 일반적으로 항원에 더 빨리 결합하고 결합 상태를 더 오래 유지하는 경향이 있다. 결합 친화력을 측정하는 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 이들중 임의의 방법이 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 특정한 예시적 양태는 아래에 기재된다.
"또는 더 우수한"은 본원에 사용될 경우 분자 및 그의 결합 파트너 사이의 더 강한 결합을 지칭한다. "또는 더 우수한"은 본원에 사용될 경우 더 작은 수치적 Kd 값에 의해 표시되는, 더 강한 결합을 지칭한다. 예를 들면, "0.6 nM 또는 더 우수한" 항원에 대한 친화력을 갖는 항체에서, 항원에 대한 항체의 친화력은 <0.6 nM, 즉 0.59 nM, 0.58 nM, 0.57 nM 등 또는 0.6 nM 미만의 임의의 값이다.
일 양태에서, 본 발명에 따른 "Kd" 또는 "Kd 값"은, 표지화되지 않은 항원의 일련의 적정의 존재하에 (125I)-표지화된 항원의 최소 농도로 Fab를 평형화하고, 이어서 결합된 항원을 항-Fab 항체-코팅된 플레이트로 포획함으로써 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화력을 측정하는 하기 검정에 의해 기재되는 바와 같이, 흥미로운 항체의 Fab 형태 및 그의 항원에 의해 수행되는 방사성표지된 항원 결합 검정(RIA: radiolabeled antigen binding assay)에 의해 측정된다(문헌[Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881]). 검정을 위한 조건을 확립하기 위해, 미소적정판(다이넥스(Dynex))이 50 mM 탄산 나트륨(pH 9.6)중에서 5 ㎍/㎖의 포획 항-Fab 항체(카펠 랩스(Cappel Labs))로 하룻밤 코팅되고, 후속적으로 PBS 중에서 2%(중량/부피) 소 혈청 알부민으로 2 내지 5시간 동안 실온에서 차단된다(약 23℃). 비-흡착성 플레이트(Nunc #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원은 흥미로운 Fab의 일련의 희석물과 혼합된다(예를 들어, 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함; 문헌[Presta et al., (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]). 흥미로운 Fab는 이어서 하룻밤 항온처리되지만; 평형 도달을 확보하기 위해 더 오랜 기간 동안(예를 들어, 약 65시간) 항온처리가 지속될 수 있다. 이후, 혼합물은 항온처리를 위해 실온에서 포획 플레이트로 전달된다(예를 들어, 1시간 동안). 이어서 용액은 제거되고 플레이트는 PBS중 0.1% 트윈(TWEEN)-20으로 8회 세척된다. 플레이트가 건조되면, 150 ㎕/웰의 신틸런트(scintillant)(마이크로신트(MicroScint)-20; 패커드(Packard))가 첨가되고, 플레이트는 10분 동안 탑카운트(Topcount) 감마 계수기(패커드) 상에서 계수된다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 Fab 각각의 농도가 경쟁 결합 검정에 사용하기 위해 선택된다.
또 다른 양태에 따라서, Kd 또는 Kd 값은 약 10 반응 단위(RU: response unit)에서 고정화된 항원 CM5 칩을 갖는 비아코어(BIACORE: 상표)-2000 또는 비아코어(상표)-3000(비아코어 인코포레이티드(BIAcore, Inc.), 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)을 이용하는 표면 플라스몬 공명 검정을 25℃에서 사용하여 결정된다. 간단히, 카복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, 비아코어 인코포레이티드)은 공급업체의 지시에 따라 N-에틸-N'-(3-다이메틸아미노프로필)-카보다이이미드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시석신이미드(NHS)로 활성화된다. 항원은 10 mM 아세트산 나트륨(pH 4.8)으로 5 ㎍/㎖(약 0.2 μΜ)로 희석된 후, 약 10 반응 단위(RU)의 커플링된 단백질을 달성하기 위해 5 ㎕/분의 유속으로 주입된다. 항원을 주입한 후, 1 M 에탄올아민이 주입되어 미반응된 기를 차단한다. 동역학 측정을 위하여, Fab의 2배의 일련의 희석물(0.78 nM 내지 500 nM)이 PBS중에서 0.05% 트윈-20 계면활성제(PBST)와 함께 25℃에서 약 25 ㎕/분의 유속으로 주입된다. 회합 속도(k회합) 및 해리 속도(k해리)는, 회합 및 해리 센서그램을 동시에 정합시킴으로써 단순 일-대-일 랑뮤 결합 모델(simple one-to-one Langmuir binding model)(비아코어(등록상표) 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 계산된다. 평형 해리 상수(Kd)는 k해리/k회합 비로 계산된다. 예를 들어, 문헌[Chen, Y., et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881]을 참조한다. 회합-속도가 상기 표면 플라스몬 공명 검정에 의해 106 M-1s-1을 초과한다면, 회합-속도는 분광기, 예컨대 정지-유동(stop-flow)이 구비된 분광광도기[아비브 인스트루먼츠(Aviv Instruments)] 또는 교반 레드 크벳(stir red cuvette)이 장착된 8000-시리즈 SLM-아민코(Aminco) 분광광도계(써모스펙트로닉(ThermoSpectronic))에서 측정될 경우 증가하는 농도의 항원의 존재하에 PBS(pH 7.2)중에서 20 nM 항-항원 항체(Fab 형태)의 25℃에서의 형광 발광 강도(여기 = 295 nm; 발광 = 340 nm, 16 nm 대역)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 소광(fluorescent quenching) 기법을 사용하여 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 "회합-속도" 또는 "회합의 속도" 또는 "회합 속도" 또는 "k회합"은 또한 상기 기재된 바와 같은 비아코어(상표)-2000 또는 비아코어(상표)-3000(비아코어 인코포레이티드, 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)을 사용하여 상기 기재된 동일한 표면 플라스몬 공명 기법에 의해 결정될 수 있다.
"실질적으로 유사한", 또는 "실질적으로 동일한"이라는 어구는, 본원에 사용될 경우, 두 수치 값(일반적으로 본 발명의 항체와 연관된 하나의 값 및 기준/비교자 항체와 연관된 나머지 값) 사이에 있어서, 당업계의 숙련가라면 두 값 사이의 차이가 상기 값(예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특징에 관하여 생물학적 및/또는 통계학적 차이가 거의 또는 전혀 없는 것으로 고려할 정도로, 충분히 높은 정도의 유사성을 표시한다. 상기 두 값 사이의 차이는 기준/비교자 항체에 대한 값의 함수로서 바람직하게는 약 50% 미만, 바람직하게는 약 40% 미만, 바람직하게는 약 30% 미만, 바람직하게는 약 20% 미만, 바람직하게는 약 10% 미만이다.
"실질적으로 감소된", 또는 "실질적으로 상이한"이라는 어구는, 본원에 사용될 경우, 두 수치 값(일반적으로 본 발명의 항체와 연관된 하나의 값 및 기준/비교자 항체와 연관된 나머지 값) 사이에 있어서, 당업계의 숙련가라면 두 값 사이의 차이가 상기 값(예를 들어, Kd 값, HAMA 반응)들에 의해 측정된 생물학적 특징에 관하여 통계학적 유의성이 있는 것으로 고려할 정도로, 충분히 높은 정도의 차이를 표시한다. 상기 두 값 사이의 차이는 기준/비교자 항체에 대한 값의 함수로서 바람직하게는 약 10% 초과, 바람직하게는 약 20% 초과, 바람직하게는 약 30% 초과, 바람직하게는 약 40% 초과, 바람직하게는 약 50% 초과이다.
"항원"은 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 예정된 항원이다. 타깃 항원은 폴리펩타이드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐(hapten) 또는 다른 천연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 바람직하게는, 타깃 항원은 폴리펩타이드이다.
"억셉터 인간 골격구조"는, 본원에서 목적을 위해, 인간 면역 글로불린 골격구조로부터, 또는 인간 컨센서스 골격구조로부터 유래된 VL 또는 VH 골격구조의 아미노산 서열을 포함하는 골격구조이다. 인간 면역 글로불린 골격구조 또는 인간 컨센서스 골격구조"로부터 유래된" 억셉터 인간 골격구조는 이의 동일한 아미노산 서열을 포함하거나, 기존의 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 기존의 아미노산 변화가 존재하는 경우, 바람직하게는 5개 이하 및 바람직하게는 4개 이하, 또는 3개 이하의 기존의 아미노산 변화가 존재한다. 기존의 아미노산 변화가 VH에 존재하는 경우, 바람직하게는 이들 변화는 단지 위치 71H, 73H 및 78H중 3개, 2개 또는 1개에서 존재하고; 예를 들어, 이들 위치에서의 아미노산 잔기는 71A, 73T 및/또는 78A일 수 있다. 일 양태에서, VL 억셉터 인간 골격구조는 서열면에서 VL 인간 면역 글로불린 골격구조 서열 또는 인간 컨센서스 골격구조 서열과 동일하다.
"인간 컨센서스 골격구조"는 인간 면역 글로불린 VL 또는 VH 골격구조 서열의 선택에 있어서 가장 흔하게 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 골격구조다. 일반적으로, 인간 면역 글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변성 도메인 서열의 하위군으로부터이다. 일반적으로, 서열의 하위군은 카밧 등의 문헌에서와 같은 하위군이다. 일 양태에서, VL의 경우, 하위군은 카밧 등의 문헌에서와 같은 하위군 카파 I이다. 일 양태에서, VH의 경우, 하위군은 카밧 등의 문헌에서와 같은 하위군 III이다.
"VH 하위군 III 컨센서스 골격구조"는 카밧 등의 문헌의 가변성 중쇄 하위군 III에서의 아미노산 서열로부터 수득된 컨센서스 서열을 포함한다. 일 양태에서, VH 하위군 III 컨센서스 골격구조 아미노산 서열은 각각의 하기 서열의 적어도 일부 또는 모두를 포함한다: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(서열번호 43)-H1-WVRQAPGKGLEWV(서열번호 44)-H2-RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(서열번호 45)-H3-WGQGTLVTVSS(서열번호 46).
"VL 하위군 I 컨센서스 골격구조"는 카밧 등의 문헌의 가변성 경쇄 카파 하위군 I에서의 아미노산 서열로부터 수득된 컨센서스 서열을 포함한다. 일 양태에서, VL 하위군 I 컨센서스 골격구조 아미노산 서열은 각각의 하기 서열의 적어도 일부 또는 모두를 포함한다: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(서열번호 39)-L1- WYQQKPGKAPKLLIY(서열번호 40)-L2-GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(서열번호 41)-L3-FGQGTKVEIKR(서열번호 42).
"변형되지 않은 인간 골격구조"는 억셉터 인간 골격구조와 동일한 아미노산 서열을 갖는, 예를 들어 억셉터 인간 골격구조에서 인간 아미노산의 비-인간 아미노산으로의 치환이 결핍된 인간 골격구조이다.
"변경된 초가변성 영역"은, 본원에서 목적을 위해, 하나 이상의(예를 들어, 1 내지 약 16개의) 아미노산 치환을 내부에 포함하는 초가변성 영역이다.
"변형되지 않은 초가변성 영역"은, 본원에서 목적을 위해, 이것이 유래된 비-인간 항체와 동일한 아미노산 서열을 갖는 초가변성 영역, 즉 하나 이상의 아미노산 치환이 내부에 없는 영역이다.
흥미로운 항원, 예를 들어 종양-연결된 폴리펩타이드 항원 표적에 "결합하는" 항체는, 그 항체가 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적화하는데 있어서 치료제로서 유용하도록 충분한 친화력으로 항원에 결합하고, 다른 단백질과 그다지 교차-반응하지 않는 항체이다. 이러한 양태에서, 항체의 "비-표적" 단백질로의 결합 정도는, 형광 활성화된 세포 분류(FACS: fluoresence activated cell sorting) 분석 또는 방사성면역침전(RIA)에 의해 결정될 경우, 항체의 그의 특정 표적 단백질로의 결합의 약 10% 미만일 것이다. 표적 분자로의 항체의 결합에 관하여, 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프"로의 특이적 결합" 또는 "에 특이적으로 결합하는" 또는 "에 대해 특이적"이라는 용어는 비-특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들면, 대조 분자(이는 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자)의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들면, 특이적 결합은 표적과 유사한 대조 분자, 예를 들면 과량의 비-표지화된 표적과 경쟁시킴으로써 결정될 수 있다. 이러한 경우, 표지화된 표적의 탐침자로의 결합이 과량의 비표지화된 표적에 의해 경쟁적으로 저해된다면 특이적 결합이 지시된다. 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프"로의 특이적 결합" 또는 "에 특이적으로 결합하는" 또는 "에 대해 특이적"이라는 용어는, 본원에 사용될 경우, 예를 들면, 약 10-4 M 이상, 다르게는 약 10-5 M 이상, 다르게는 약 10-6 M 이상, 다르게는 약 10-7 M 이상, 다르게는 약 10-8 M 이상, 다르게는 약 10-9 M 이상, 다르게는 약 10-10 M 이상, 다르게는 약 10-11 M 이상, 다르게는 약 10-12 M 이상의 표적에 대한 Kd를 갖는 분자에 의해 표시될 수 있다. 일 양태에서, 용어 "특이적 결합"은 한 분자가 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않으면서 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 상의 에피토프에 결합하는 경우의 결합을 지칭한다.
"CD79b 폴리펩타이드를 발현하는 종양 세포의 성장을 저해하는" 항체 또는 "성장 저해성" 항체는 적절한 CD79b 폴리펩타이드를 발현하거나 과발현하는 암 세포의 측정가능한 성장 저해를 초래하는 항체이다. CD79b 폴리펩타이드는 암 세포의 표면 상에서 발현되는 막통과 폴리펩타이드일 수 있거나, 암 세포에 의해 생산되고 분비되는 폴리펩타이드일 수 있다. 바람직한 성장 저해성 항-CD79b 항체는 적절한 대조군과 비교하여 CD79b-발현 종양 세포의 성장을 20% 초과, 바람직하게는 약 20% 내지 약 50%, 더욱 바람직하게는 50% 초과(예를 들어, 약 50% 내지 약 100%)로 저해하고, 대조군은 전형적으로 시험되는 항체로 치료되지 않는 종양 세포이다. 일 양태에서, 성장 저해는 세포 배양액중 약 0.1 내지 30 ㎍/㎖ 또는 약 0.5 nM 내지 200 nM의 항체 농도로 측정될 수 있고, 이때 성장 저해는 종양 세포가 항체로 노출된지 1 내지 10일째 결정된다. 생체내 종양 세포의 성장 저해는 하기 실험예 부분에 기재된 바와 같이 다양한 방식으로 결정될 수 있다. 항체는, 항-CD79b 항체를 약 1 ㎍/kg 내지 약 100 mg/kg 체중으로 투여하여 종양 크기 또는 종양 세포 증식의 감소를 최초 항체 투여로부터 약 5일 내지 3개월, 바람직하게는 약 5 내지 30일 이내에 초래할 경우, 생체내에서 성장 저해성이다.
"아폽토시스를 유도하는" 항체는 아넥신(annexin) V의 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 소포체의 팽창, 세포 단편화, 및/또는 막 소낭(세포 자가사멸체로 칭해짐)의 형성에 의해 결정될 경우 프로그램화된 세포 사멸을 유도하는 항체이다. 세포는 대체적으로 CD79b 폴리펩타이드를 과발현하는 세포이다. 바람직하게는 세포는 종양 세포, 예를 들어, 조혈 세포, 예컨대 B 세포, T 세포, 호염구, 호산구, 호중구, 단일세포, 혈소판 또는 적혈구이다. 아폽토시스와 연관된 세포 사례를 평가하기 위해 다양한 방법이 이용가능하다. 예를 들면, 포스파티딜 세린(PS) 전좌는 아넥신 결합에 의해 측정될 수 있고; DNA 단편화는 DNA 래더링(laddering)을 통해 평가될 수 있으며; DNA 단편화와 함께 핵/크로마틴(chromatin) 축합은 저이배체(hypodiploid) 세포에서의 임의의 증가에 의해 평가될 수 있다. 바람직하게는, 아폽토시스를 유도하는 항체는 아넥신 결합 검정에서 처리되지 않은 세포에 비해 약 2 내지 50 배, 바람직하게는 약 5 내지 50 배, 및 가장 바람직하게는 약 10 내지 50 배의 아넥신 결합의 유도를 일으키는 항체이다.
"세포 사멸을 유도하는" 항체는 생존가능한 세포를 생존불가능으로 만드는 항체이다. 세포는 CD79b 폴리펩타이드를 발현하는 세포로서, CD79b 폴리펩타이드를 특이적으로 발현하거나 과발현하는 세포 유형이다. 세포는 특별한 세포 유형의 암 세포 또는 정상 세포일 수 있다. CD79b 폴리펩타이드는 암 세포의 표면 상에서 발현되는 막통과 폴리펩타이드일 수 있거나, 암 세포에 의해 생산되고 분비되는 폴리펩타이드일 수 있다. 세포는 암 세포, 예를 들어, B 세포 또는 T 세포일 수 있다. 시험관내 세포 사멸은 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC) 또는 보체 의존성 세포독성(CDC)에 의해 유도된 세포 사멸과 구별하기 위해 보체 및 면역 효과기 세포의 부재하에 결정될 수 있다. 이와 같이, 세포 사멸을 위한 검정은 면역 효과기 세포의 부재하에 열에 의해 불활성화된 혈청을 사용하여(즉, 보체의 부재하에) 수행될 수 있다. 항체가 세포 사멸을 유도할 수 있는지의 여부를 결정하기 위해, 요오드화 프로피디움(PI), 타이판 블루(trypan blue)[문헌[Moore et al. Cytotechnology 17: 1-11 (1995)] 참조) 또는 7AAD의 섭취에 의해 평가될 경우 막 완전성의 소실은 치료되지 않은 세포에 대하여 평가될 수 있다. 바람직한 세포 사멸-유도 항체는 BT474 세포에서의 PI 섭취 검정에서 PI 섭취를 유도하는 항체이다.
항체 "효과기 작용"은 항체의 Fc 영역(고유의 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 지칭하고, 항체 이소타입에 따라 상이하다. 항체 효과기 작용의 예로는: Clq 결합 및 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화가 포함된다.
용어 "Fc 영역"은 본원에서 고유의 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는, 면역 글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 면역 글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계가 다양할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 대체적으로 위치 Cys226에서의 아미노산으로터, 또는 Pro230으로부터 이의 카복시-말단으로 연장되도록 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들면, 항체의 생산 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 원상태 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 모집단, K447 잔기가 전혀 제거되지 않은 항체 모집단, 및 K447 잔기가 존재하는 항체 및 존재하지 않은 항체의 혼합물을 갖는 항체 모집단을 포함할 수 있다.
"작용성 Fc 영역"은 고유의 서열 Fc 영역의 "효과기 작용"을 갖는다. 예시적인 "효과기 작용"으로는 Clq 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등이 포함된다. 이러한 효과기 작용은 일반적으로 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변성 도메인)과 조합되는 Fc 영역을 필요로 하고, 예를 들면, 본원의 정의에서 개시된 바와 같이 다양한 검정을 사용하여 평가될 수 있다.
"고유의 서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 고유의 서열 인간 Fc 영역은 고유의 서열 인간 IgG1 Fc 영역(비-A 및 A 동종이인자형); 고유의 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 고유의 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 고유의 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라, 이의 천연 발생 변이체를 포함한다.
"변이체 Fc 영역"은 하나 이상의 아미노산 변형, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환으로 인해 고유의 서열 Fc 영역의 아미노산 서열과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 고유의 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역과 비교된 하나 이상의 아미노산 치환을, 예를 들어 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 고유의 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역에 갖는다. 본원에서 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 고유의 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역과 약 80% 이상의 상동성, 및 가장 바람직하게는 약 90% 이상의 상동성, 더 바람직하게는 약 95% 이상의 상동성을 가질 것이다.
"항체-의존성 세포-매개된 세포독성" 또는 "ADCC"는, 특정 세포독성 세포(예를 들어, 천연 킬러(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcR) 상으로 결합된 분비된 Ig로 인해 이들 세포독성 효과기 세포가 항원-함유 표적 세포에 특이적으로 결합하고 후속적으로 표적 세포를 세포독성에 의해 사멸시킬 수 있게 되는 세포독성의 형태를 지칭한다. 이 항체는 세포독성 세포를 "파괴하고" 이러한 사멸을 위해 절대적으로 요구된다. ADCC를 매개하기 위한 주요 세포인 NK 세포는 단지 FcγRIII을 발현하는 반면, 단일세포는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991)]의 464 페이지의 표 3에 요약되어 있다. 흥미로운 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 예컨대 미국 특허 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 기재된 것과 같은 시험관내 ADCC 검정이 수행될 수 있다. 이러한 검정을 위해 유용한 효과기 세포로는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 천연 킬러(NK) 세포가 포함된다. 다르게는, 또는 추가적으로, 흥미로운 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어, 예컨대 문헌[Clynes et al. (USA) 95:652-656 (1998)]에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 바람직한 FcR은 고유의 서열 인간 FcR이다. 게다가, 바람직한 FcR은 IgG 항체(감마 수용체)에 결합하고 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위부류(대립형질 변이체 및 다르게는 이들의 스플라이싱된 형태 포함)를 포함하는 것이다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("저해 수용체")를 포함하고, 이는 주로 이의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 면역수용체 티로신-기제 활성화 모티프(ITAM)를 세포질 도메인에 함유한다. 저해 수용체 FcγRIIB는 면역수용체 티로신-기제 저해 모티프(ITIM)를 그의 세포질 도메인에 함유한다(문헌[M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)] 참조). FcR은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]; 문헌[Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994)]; 및 문헌[de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)]에 검토되어 있다. 앞으로 식별될 것들을 비롯하여 다른 FcR은, 본원에서 용어 "FcR"에 의해 포괄된다. 이 용어는 또한 신생 수용체, FcRn을 포함하고, 이는 모 IgG에서 태아로의 전달을 담당한다(문헌[Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)] 및 문헌[Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)]).
생체내 인간 FcRn으로의 결합 및 인간 FcRn 고 친화력 결합 폴리펩타이드의 혈청 반감기는, 예를 들어, 인간 FcRn을 발현하는 유전자 이식 마우스 또는 형질감염된 인간 세포주에서, 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩타이드가 투여된 영장류에서 검정될 수 있다. 국제 특허출원공개 제2000/42072호(프레스타(Presta))는 FcR로의 결합이 개선되거나 감소된 항체 변이체를 기재한다. 또한, 예를 들어, 문헌[Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001)]을 참조한다.
"인간 효과기 세포"는 하나 이상의 FcR을 발현하고 효과기 작용을 수행하는 백혈구이다. 바람직하게는, 세포는 적어도 FcγRIII을 발현하고 ADCC 효과기 작용을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예로는 말초 혈핵 단핵세포(PBMC), 천연 킬러(NK) 세포, 단일세포, 세포독성 T 세포 및 호중구가 포함되고; PBMC 및 NK 세포가 바람직하다. 효과기 세포는 고유의 공급원으로부터, 예를 들어, 혈액으로부터 단리될 수 있다.
"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하에 표적 세포의 용해를 지칭한다. 고전적 보체 경로의 활성화는 보체 시스템(Clq)의 제1 성분의 (적절한 하위부류의) 항체(이는 이들의 동족 항원에 결합함)로의 결합에 의해 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어, 문헌[Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 검정이 수행될 수 있다. 변경된 Fc 영역 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드 변이체(변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩타이드) 및 증가되거나 감소된 Clq 결합 능력은, 예를 들어, 미국 특허 제6,194,551 B1호 및 국제 특허출원공개 제1999/51642호에 기재되어 있다. 또한, 예를 들어, 문헌[Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]을 참조한다.
용어 "Fc 영역-포함 항체"는 Fc 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들면, 항체의 정제 동안, 또는 항체를 코딩하는 핵산을 재조합 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 Fc 영역을 갖는 항체를 포함하는 조성물은 K447 잔기를 갖는 항체, 모든 K447 잔기가 제거된 항체, 또는 K447 잔기가 존재하는 항체 및 존재하지 않은 항체의 혼합물을 포함할 수 있다.
CD79b 폴리펩타이드 "세포외 도메인" 또는 "ECD"는 막통과 및 세포질 도메인이 본질적으로 존재하지 않는 CD79b 폴리펩타이드의 형태를 지칭한다. 보통, CD79b 폴리펩타이드 ECD는 이러한 막통과 및/또는 세포질 도메인을 1% 미만으로 가질 것이고, 바람직하게는, 이러한 도메인을 0.5% 미만으로 가질 것이다. CD79b 폴리펩타이드에 대해 식별된 임의의 막통과 도메인이 소수성 도메인의 유형을 식별하기 위해 당업계에 일상적으로 이용되는 범주에 따라 식별됨을 이해할 것이다. 막통과 도메인의 정확한 경계는 다양할 수 있지만, 아마도 본원에서 초기에 식별된 바와 같은 도메인의 말단에서 약 5개 이하의 아미노산에 의해서이다. 따라서 임의적으로, CD79b 폴리펩타이드의 세포외 도메인은 실시예 및 명세서에서 식별된 바와 같은 막통과 도메인/세포외 도메인 경계의 측면 상에 약 5개 이하의 아미노산을 함유할 수 있고, 연관된 신호 펩타이드를 갖거나 갖지 않는 이러한 폴리펩타이드, 및 이를 코딩하는 핵산이 본 발명에 의해 고려된다.
본원에 개시된 CD79b 폴리펩타이드의 "신호 펩타이드"의 대략적 위치는 본 명세서에 제시될 수 있다. 그러나, 신호 펩타이드의 C-말단 경계가 다양하지만, 아마도 본원에서 초기에 식별된 바와 같은 신호 펩타이드 C- 말단 경계의 측면 상의 약 5개 이하의 아미노산에 의해서이고, 이때 신호 펩타이드의 C-말단 경계가 아미노산 서열 요소의 유형을 식별하기 위해 당업계에 일상적으로 이용되는 범주에 따라 식별될 수 있음을 주지한다(예를 들어, 문헌[Nielsen et al., Prot. Eng. 10: 1-6 (1997)] 및 문헌[von Heinje et al., Nucl. Acids. Res. 14:4683-4690 (1986)]). 게다가, 또한 몇몇 경우에, 분비된 폴리펩타이드로부터의 신호 서열의 분할은 전체적으로 균일하지 않아 하나 보다 많은 분비된 종을 생성하는 것으로 인식된다. 신호 펩타이드가 본원에서 식별된 바와 같은 신호 펩타이드의 C-말단 경계의 측면 상에 약 5개 이하의 아미노산 내에서 분할되는 이들 성숙 폴리펩타이드, 및 이를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드가 본 발명에 의해 고려된다.
약어
연결기 성분:
MC = 6-말레이미도카프로일
Val-Cit 또는 "vc" = 발린-시트룰린(단백질분해효소 분할가능한 연결기에서 예시적인 다이펩타이드)
시트룰린 = 2-아미노-5-우레이도 펜탄산
PAB = p-아미노벤질옥시카보닐("자가 희생적(self-immolative) 연결기 성분의 일예)
Me-Val-Cit = N-메틸-발린-시트룰린(이때 연결기 펩타이드 결합은 카텝신(cathepsin) B에 의한 그의 분할을 방지하기 위해 변형됨)
MC(PEG)6-OH = 말레이미도카프로일-폴리에틸렌 글리콜(항체 시스테인에 부착가능).
세포독성 약물:
MMAE = 모노-메틸 아우리스타틴 E(MW 718)
MMAF = 약물의 C-말단에 페닐알라닌을 갖는 아우리스타틴 E(MMAE)의 변이체(MW 731.5)
MMAF-DMAEA = C-말단 페닐알라닌으로의 아미드 연결에서 DMAEA(다이메틸아미노에틸아민)을 갖는 MMAF(MW 801.5)
MMAF-TEG = 페닐알라닌에 에스테르화된 테트라에틸렌 글리콜을 갖는 MMAF
MMAF-NtBu = MMAF의 C-말단에 아미드로서 부착된 N-t-부틸
DM1 = N(2')-탈아세틸-N(2')-(3-머캅토-1-옥소프로필)-메이탄신
DM3 = N(2')-탈아세틸-N2-(4-머캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신
DM4 = N(2')-탈아세틸-N2-(4-머캅토-4-메틸-1-옥소펜틸)-메이탄신
추가의 약어는 다음과 같다: AE는 아우리스타틴 E이고, Boc는 N-(t-부톡시카보닐)이고, cit는 시트룰린이고, dap는 돌라프로인(dolaproine)이고, DCC는 1,3-다이사이클로헥실카보다이이미드이고, DCM는 다이클로로메탄이고, DEA는 다이에틸아민이고, DEAD는 다이에틸아조다이카복실레이트이고, DEPC는 다이에틸포스포릴시아니데이트이고, DIAD는 다이이소프로필아조다이카복실레이트이고, DIEA는 N,N-다이이소프로필에틸아민이고, dil은 돌라이소류신(dolaisoleucine)이고, DMA는 다이메틸아세트아미드이고, DMAP는 4-다이메틸아미노피리딘이고, DME는 에틸렌글리콜 다이메틸 에테르(또는 1,2-다이메톡시 에탄)이고, DMF는 N,N-다이메틸포름아미드이고, DMSO는 다이메틸설폭사이드이고, doe는 돌라페닌(dolaphenine)이고, dov는 N,N-다이메틸 발린이고, DTNB는 5,5'-다이티오비스(2-니트로벤조산)이고, DTPA는 다이에틸렌트라이아민펜타아세트산이고, DTT는 다이티오트레이톨이고, EDCI는 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드 하이드로클로라이드이고, EEDQ는 2-에톡시-1-에톡시카보닐-1,2-다이하이드로퀴놀린이고, ES-MS는 전자분무 질량 분광분석이고, EtOAc는 에틸 아세테이트이고, Fmoc는 N-(9-플루오레닐메톡시카보닐)이고, gly는 글리신이고, HATU는 O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트이고, HOBt는 1-하이드록시벤조트라이아졸이고, HPLC는 고압 액체 크로마토그래피이고, ile는 이소류신이고, lys는 라이신이고, MeCN(CH3CN)은 아세토니트릴이고, MeOH는 메탄올이고, Mtr은 4-아니실다이페닐메틸(또는 4-메톡시트리틸), 또는 (1S,2R)-(+)-노르에페드린이고, PBS는 포스페이트-완충된 염수(pH 7.4)이고, PEG는 폴리에틸렌 글리콜이고, Ph는 페닐이고, Pnp는 p-니트로페닐이고, MC는 6-말레이미도카프로일이고, phe는 L-페닐알라닌이고, PyBrop는 브로모 트리스-피롤리디노 포스포늄 헥사플루오로포스페이트이고, SEC는 크기-배제 크로마토그래피이고, Su는 석신이미드이고, TFA는 트라이플루오로아세트산이고, TLC는 박층 크로마토그래피이고, UV는 자외선이고, val는 발린이다.
일 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 유리 시스테인 아미노산을 포함하는 본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서의 시스테인 조작된 항-CD79b 항체를 포함하고, 이때 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 CD79b 폴리펩타이드에 결합하고, 모 항-CD79b 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 대체함을 포함하는 방법에 의해 제조되며, 이때 모 항체는 하기로부터 선택된 하나 이상의 HVR 서열을 포함한다:
(a) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31) 또는 KASQSVDYEGDSFLN(서열번호 37)인 HVR-L1;
(b) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(c) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(d) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(e) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(f) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36) 또는 TRRVPIRLDY(서열번호 38)인 HVR-H3.
하나의 특정 양상에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 전장 아미노산 서열을 갖는 시스테인 조작된 항체, 또는 본원에 개시된 바와 같은 신호 펩타이드가 결핍된 시스테인 조작된 항체 아미노산 서열에 적어도 약 80%의 아미노산 서열 동일성, 다르게는 적어도 약 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서의 시스테인 조작된 항-CD79b 항체에 관한 것이다.
역시 추가의 양상에서, 본 발명은 (a) 본원에 개시된 바와 같은 전장 아미노산 서열을 갖는 시스테인 조작된 항체, (b) 본원에 개시된 바와 같은 신호 펩타이드가 결핍된 시스테인 조작된 항체 아미노산 서열, (c) 본원에 개시된 바와 같은, 신호 펩타이드가 존재하거나 존재하지 않는 막통과 시스테인 조작된 항체 단백질의 세포외 도메인, (d) 본원에 개시된 임의의 핵산 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열, 또는 (e) 본원에 개시된 바와 같은 전장 시스테인 조작된 항체 아미노산 서열의 임의의 다른 구체적으로 정의된 단편을 코딩하는 DNA 분자의 보체에 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 포함하는, 본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서의 단리된 시스테인 조작된 항-CD79b 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물에 관한 것이다.
하나의 특정 양상에서, 본 발명은 N-말단 신호 서열이 없고/없거나 개시 메티오닌이 없고 기재된 이러한 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩되는, 본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서의 단리된 시스테인 조작된 항-CD79b 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다. 이의 제조 방법 또한 본원에 기재되고, 이때 이러한 방법은 시스테인 조작된 항체의 발현에 적합한 조건하에 적절한 코딩 핵산 분자를 포함하는 벡터가 함유된 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 시스테인 조작된 항체를 세포 배양액으로부터 회수하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양상은 막통과 도메인-결실되거나 막통과 도메인-불활성화된, 본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서의 단리된 시스테인 조작된 항-CD79b 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다. 이의 제조 방법 또한 본원에 기재되고, 이때 이러한 방법은 시스테인 조작된 항체의 발현에 적합한 조건하에 적절한 코딩 핵산 분자를 포함하는 벡터가 함유된 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 시스테인 조작된 항체를 세포 배양액으로부터 회수하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 불균일한 (비-CD79b) 폴리펩타이드에 융합된 본원에 기재된 임의의 시스테인 조작된 항체를 포함하는, 본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서의 단리된 항-CD79b 키메라 시스테인 조작된 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다. 이러한 키메라 분자의 예는 이종성 폴리펩타이드, 예컨대, 예를 들면, 에피토프 태그 서열 또는 면역 글로불린의 Fc 영역에 융합된 본원에 기재된 임의의 시스테인 조작된 항체를 포함한다.
본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 단클론성 항체, 항체 단편, 키메라 항체, 인간화된 항체, 단일-쇄 항체, 또는 항-CD79b 폴리펩타이드 항체가 그의 개개의 항원 에피토프에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해하는 항체일 수 있다. 본 발명의 항체는 임의적으로 성장 저해제 또는 세포독성제, 예컨대 독소, 예를 들면, 아우리스타틴, 메이탄시노이드, 돌로스타틴 유도체 또는 칼리케아미신, 항생제, 방사성 동위원소, 핵산분해 효소 등에 임의적으로 접합될 수 있다. 본 발명의 항체는 임의적으로 CHO 세포 또는 세균성 세포에서 생산될 수 있고, 바람직하게는 이들이 결합하는 세포의 성장 또는 증식을 저해하거나 이의 사멸을 유도한다. 진단 목적을 위해, 예를 들어, 본 발명의 항체는 검출가능하게 표지화되거나, 고형 지지체에 부착될 수 있다.
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서의 본원에 기재된 임의의 항-CD79b 항체 및 항-CD79b 시스테인 조작된 항체를 코딩하는 DNA를 포함하는 벡터를 제공한다. 임의의 이러한 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 예로서, 숙주 세포는 CHO 세포, 에스케리키아 콜라이 세포 또는 효모 세포이다. 본원에 기재된 임의의 폴리펩타이드를 제조하는 방법이 추가로 제공되고, 원하는 폴리펩타이드를 발현하기에 적합한 조건하에 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 세포 배양액으로부터 원하는 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 포함한다.
조합물 발명의 본 발명에 따른 상기 항체-약물 접합체에서의 시스테인 조작된 항체는 암을 치료하는데 유용할 수 있고, 이는 세포 표면 및 막통과 수용체, 및 종양-연관된 항원(TAA)에 특이적인 항체를 포함한다. 이러한 항체는 네이키드 항체(약물 또는 표지 부분에 접합되지 않음) 또는 항체-약물 접합체(ADC)로서 사용될 수 있다. 본 발명의 시스테인 조작된 항체는 자리-특이적으로 및 효과적으로 티올-반응성 제제와 커플링될 수 있다. 티올-반응성 제제는 다작용성 연결기 제제, 포획 표지 제제, 형광단 제제, 또는 약물-연결기 중간체일 수 있다. 시스테인 조작된 항체는 검출가능한 표지로 표지화되고, 고체 상 지지체 위에 부동화되고/되거나 약물 부분과 접합된다. 티올 반응성은 임의의 항체에 대해 일반화될 수 있고, 이때 반응성 시스테인 아미노산에 의한 아미노산의 치환은: L10 내지 L20, L105 내지 L115, L109 내지 L119, L116 내지 L126, L122 내지 L132, L163 내지 L173, L200 내지 L210의 아미노산 범위로부터 선택된 경쇄에서의 범위내에서; H1 내지 H10, H18 내지 H28, H79 내지 H89, H107 내지 H117, H109 내지 H119, H111 내지 H121의 아미노산 범위로부터 선택된 중쇄에서의 범위내에서, 및 H270 내지 H280, H366 내지 H376, H391 내지 401로부터 선택된 범위내의 Fc 영역에서 이루어질 수 있고, 이때 아미노산 위치의 넘버링은 카밧 넘버링 시스템의 위치 1에서 시작하고(문헌[Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD]), 국제 특허출원공개 제2006/034488호; 미국 특허출원공개 제2007/0092940호에 개시된 바와 같이 이후 순차적으로 지속된다. 티올 반응성은 또한 항체의 특정 도메인, 예컨대 경쇄 불변성 도메인(CL) 및 중쇄 불변성 도메인, CH1, CH2 및 CH3에 대해 일반화될 수 있다. 0.6 이상의 티올 반응성을 일으키는 시스테인 대체는 원상태 항체 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM(IgG 하위부류: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2 포함) 각각의 중쇄 불변성 도메인 α, δ, ε, γ, 및 μ에서 이루어질 수 있다. 이러한 항체 및 이들의 용도는 국제 특허출원공개 제2006/034488호; 미국 특허출원공개 제2007/0092940호에 개시되어 있다.
조합물 발명의 시스테인 조작된 항체는 바람직하게는 이들의 야생형, 모 항체 대응물의 항원 결합 능력을 보유한다. 이와 같이, 시스테인 조작된 항체는 항원에, 바람직하게는 특이적으로, 결합할 수 있다. 이러한 항원으로는, 예를 들면, 종양-연관된 항원(TAA), 세포 표면 수용체 단백질 및 다른 세포 표면 분자, 막통과 단백질, 신호화 단백질, 세포 생존 조절 인자, 세포 증식 조절 인자, 조직 발달 또는 분화와 연관된(예를 들어, 이에 작용적으로 기여하는 것으로 공지되거나 예상되는) 분자, 림포카인(lymphokine), 사이토카인(cytokine), 세포 주기 조절에 관여된 분자, 및 맥관형성에 관여된 분자 및 혈관형성과 연관된(예를 들어, 이에 작용적으로 기여하는 것으로 공지되거나 예상되는) 분자가 포함된다. 종양-연관된 항원은 집단 분화 인자(즉, 제한되지 않지만 CD79b를 비롯한 CD 단백질)일 수 있다. 본 발명의 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 이들의 모 항-CD79b 항체 대응물의 항원 결합 능력을 보유한다. 이와 같이, 본 발명의 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는, 인간 항-CD79b 동형 베타 및/또는 알파를 비롯하여 CD79b 항원에, 바람직하게는 특이적으로 결합할 수 있고, 이러한 항원이 세포의 표면 상에 발현되는 경우, 제한없이 B 세포를 포함한다.
일 양태에서, 조합물 발명의 항체는 반응성 부분, 활성화된 부분, 또는 반응성 시스테인 티올 기를 통해 항체에 공유적으로 부착될 수 있는 임의의 표지 부분과 접합될 수 있다(문헌[Singh et al (2002) Anal. Biochem. 304: 147-15]; 문헌[Harlow E. and Lane, D. (1999) Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; 문헌[Lundblad R.L. (1991) Chemical Reagents for Protein Modification, 2nd ed. CRC Press, Boca Raton, FL]). 부착된 표지는 다음과 같이 작용할 수 있다: (i) 검출가능한 신호를 제공하거나; (ii) 예를 들어 FRET(형광 공명 에너지 전달)를 제공하기 위해, 제1 또는 제2 표지에 의해 제공된 검출가능한 신호를 변형시키도록 제2 표지와 상호작용하거나; (iii) 항원 또는 리간드와의 상호작용을 안정화시키고 이와의 결합 친화력을 증가시키거나; (iv) 전하, 소수성, 형태 또는 다른 물리적 매개변수에 의해 이동성, 예를 들어 전기영동 이동성 또는 세포-투과성에 영향을 주거나; (v) 리간드 친화력, 항체/항원 결합, 또는 이온성 착체 형성을 조절하기 위해 포획 부분을 제공한다.
특정 양태에서, 임의의 상기 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 일 양태에서, 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 제공된다. 일 양태에서, 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 일 양태에서, 숙주 세포는 진핵세포이다. 일 양태에서, 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포이다. 일 양태에서, 항-CD79b 항체를 제조하는 방법이 제공되고, 이때 이 방법은 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 발현하기에 적합한 조건하에 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 항체를 단리하는 단계를 포함한다.
항체-약물 접합체
또 다른 양상에서, 본 발명은 세포독성제, 예컨대 화학요법제, 약물, 성장 저해제, 독소(예를 들어, 세균, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이의 단편), 또는 방사성 동위원소(즉, 방사접합체)에 접합된 항체를 포함하는, 면역접합체, 또는 항체-약물 접합체(ADC)와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 면역접합체를 사용하는 방법을 추가로 제공한다. 일 양태에서, 면역접합체는 세포독성제 또는 검출가능한 제제에 공유적으로 부착된 임의의 상기 항-CD79b 항체를 포함한다.
일 양상에서, 조합물 발명의 CD79b 항체는 또 다른 CD79b 항체에 의해 결합된 CD79b 상의 동일한 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 CD79b 항체는, 1993년 7월 20일자로 HB11413으로서 ATCC에 의해 기탁된 하이브리도마로부터 생성된 단클론성 항체, 서열번호 26(도 7) 및 서열번호 29(도 8)의 가변성 도메인을 포함하는 단클론성 항체, 또는 1993년 7월 20일자로 ATCC에 의해 기탁된 HB11413 하이브리도마로부터 생성된 항체의 가변성 도메인 및 IgG1로부터의 불변성 도메인, 또는 서열번호 26(도 7) 및 서열번호 29(도 8)의 서열을 포함하는 단클론성 항체의 가변성 도메인을 포함하는 키메라 항체의 Fab 단편에 의해 결합된 CD79b 상에서 동일한 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 CD79b 항체는 또 다른 CD79b 항체에 의해 결합된 CD79b 상에서 동일한 에피토프에 결합한다(즉, CB3.1(비디 바이오사이언시즈(BD Biosciences) 카탈로그 #555678; 미국 캘리포니아주 산 호세 소재), AT105-1(에이비디 세로텍(AbD Serotec) 카탈로그 #MCA2208; 미국 노쓰 캐롤라이나주 랄라이 소재), AT107-2(에이비디 세로텍 카탈로그 #MCA2209), 항-인간 CD79b 항체(비디 바이오사이언시즈 카탈로그 #557592; 미국 캘리포니아주 산 호세 소재)).
또 다른 양상에서, 조합물 발명의 CD79b 항체는 또 다른 CD79b 항체에 의해 결합된 에피토프와 별개인 CD79b 상의 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 CD79b 항체는, 1993년 7월 20일자로 ATCC에 의해 기탁된 HB11413 하이브리도마로부터 생성된 단클론성 항체, 서열번호 26(도 7) 및 서열번호 29(도 8)의 가변성 도메인을 포함하는 단클론성 항체, 또는 1993년 7월 20일자로 ATCC에 의해 기탁된 HB11413 하이브리도마로부터 생성된 항체의 가변성 도메인 및 IgG1로부터의 불변성 도메인, 또는 서열번호 26(도 7) 및 서열번호 29(도 8)의 서열을 포함하는 단클론성 항체의 가변성 도메인을 포함하는 키메라 항체의 Fab 단편에 의해 결합된 에피토프와 별개인 CD79b 상의 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 CD79b 항체는 또 다른 CD79b 항체에 의해 결합된 에피토프와 별개인 CD79b 상의 에피토프에 결합한다(즉, CB3.1(비디 바이오사이언시즈 카탈로그 #555678; 미국 캘리포니아주 산 호세 소재), AT105-1(에이비디 세로텍 카탈로그 #MCA2208; 미국 노쓰 캐롤라이나주 랄라이 소재), AT107-2(에이비디 세로텍 카탈로그 #MCA2209), 항-인간 CD79b 항체(비디 바이오사이언시즈 카탈로그 #557592; 미국 캘리포니아주 산 호세 소재)).
또 다른 양상에서, 조합물 발명의 CD79b 항체는, 1993년 7월 20일자로 HB11413으로서 ATCC에 의해 기탁된 하이브리도마로부터 생성된 단클론성 항체, 서열번호 26(도 7) 및 서열번호 29(도 8)의 가변성 도메인을 포함하는 단클론성 항체, 또는 1993년 7월 20일자로 HB11413으로서 ATCC에 의해 기탁된 하이브리도마로부터 생성된 항체의 가변성 도메인 및 IgG1로부터의 불변성 도메인, 또는 서열번호 26(도 7) 및 서열번호 29(도 8)의 서열을 포함하는 단클론성 항체의 가변성 도메인을 포함하는 키메라 항체의 Fab 단편과 별개이다(즉 이러한 단편이 아니다). 또 다른 양태에서, 본 발명의 CD79b 항체는 또 다른 CD79b 항체의 Fab 단편(즉, CB3.1(비디 바이오사이언시즈 카탈로그 #555678; 미국 캘리포니아주 산 호세 소재), AT105-1(에이비디 세로텍 카탈로그 #MCA2208; 미국 노쓰 캐롤라이나주 랄라이 소재), AT107-2(에이비디 세로텍 카탈로그 #MCA2209), 항-인간 CD79b 항체(비디 바이오사이언시즈 카탈로그 #557592; 미국 캘리포니아주 산 호세 소재))와 별개이다(즉 이러한 단편이 아니다).
일 양상에서, 본 발명의 항체는 제1 동물 종의 CD79b에 특이적으로 결합하고, 제2 동물 종의 CD79b에 특이적으로 결합하지 않는다. 일 양태에서, 제1 동물 종은 인간 및/또는 영장류(예를 들어, 사이노몰구스 원숭이)이고, 제2 동물 종은 뮤린(예를 들어, 마우스) 및/또는 개이다. 일 양태에서, 제1 동물 종은 인간이다. 일 양태에서, 제1 동물 종은 영장류, 예를 들면 사이노몰구스 원숭이이다. 일 양태에서, 제2 동물 종은 뮤린, 예를 들면 마우스이다. 일 양태에서, 제2 동물 종은 개이다.
일 양상에서, 세포의 표면 상에서 발현되는 CD79b에 결합하는 항체가 제공된다. 일 양태에서, 이러한 항체는 도메인 1 또는 도메인 2 또는 도메인 1 및 2를 포함하는 인간 또는 마우스 CD79b의 하나의 영역내의 에피토프에 결합한다. 일 양태에서, 세포는 포유동물 세포이다. 일 양태에서, 세포는 인간 세포이다. 일 양태에서, 세포는 암 세포이다. 일 양태에서, 세포는 B 세포이다. 일 양태에서, 암 세포는 B 세포이다.
특정 양태에서, 임의의 상기 항체는 단클론성 항체이다. 일 양태에서, 항체는 Fab, Fab'-SH, Fv, scFv, 또는 (Fab')2 단편으로부터 선택된 항체 단편이다. 일 양태에서, 항체는 인간화된다. 일 양태에서, 항체는 인간이다.
항-CD20 항체와의 본 발명의 조합물에서 항체-약물 접합체의 일부로서의 예시적인 항-CD79b 항체에 대한 상세한 설명은 다음과 같다:
항-CD79b 항체의 구체적인 양태
일 양상에서, 본 발명은, 바람직하게는 상기 또는 하기에 기재된 임의의 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 임의적으로, 항체는 단클론성 항체, 항체 단편, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 디아바디, 단일 도메인 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체, 단일-쇄 항체, 또는 항-CD79b 폴리펩타이드 항체의 그의 개별 항원성 에피토프로의 결합을 경쟁적으로 저해하는 항체이다. 본 발명의 항체는 임의적으로 성장 저해제 또는 세포독성제, 예컨대 독소, 예를 들면, 아우리스타틴, 메이탄시노이드, 돌로스타틴 유도체 또는 칼리케아미신, 항생제, 방사성 동위원소, 핵분해 효소 등에 접합될 수 있다. 본 발명의 항체는 임의적으로 CHO 세포 또는 세균 세포에서 생산될 수 있고, 바람직하게는 이들이 결합하는 세포의 사멸을 유도할 수 있다. 검출 목적을 위해, 본 발명의 항체는 검출가능하게 표지화되고, 고체 지지체 등에 부착될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 1가 친화력(예를 들어, 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력) 또는 항체의 그의 2가 형태로의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG 단편으로서의 CD79b로의 친화력)이, 도 7(서열번호 26) 및 도 8(서열번호 29)에 도시된 경쇄 및 중쇄 가변성 도메인을 포함하거나, 이로 구성되거나 본질적으로 이로 구성된 뮤린 항체(예를 들어, 뮤린 항체의 Fab 단편으로서의 또는 IgG 단편으로서의 CD79b로의 친화력) 또는 키메라 항체(예를 들어, 키메라 항체의 Fab 단편으로서의 또는 IgG 단편으로서의 CD79b로의 친화력) 각각의 1가 친화력 또는 2가 형태에서의 친화력과 실질적으로 동일하거나, 더 낮거나 더 높은, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 CD79b로의 1가 친화력(예를 들어, 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력)이, 도 7(서열번호 26) 및 도 8(서열번호 29)에 도시된 경쇄 및 중쇄 가변성 도메인을 포함하거나, 이로 구성되거나 본질적으로 이로 구성된 뮤린 항체(예를 들어, 뮤린 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력) 또는 키메라 항체(예를 들어, 키메라 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력)의 1가 친화력에 비해, 예를 들면 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 또는 60-배 더 낮은, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 CD79b로의 1가 친화력(예를 들어, 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력)이, 도 7(서열번호 26) 및 도 8(서열번호 29)에 도시된 경쇄 및 중쇄 가변성 도메인을 포함하거나, 이로 구성되거나 본질적으로 이로 구성된 뮤린 항체(예를 들어, 뮤린 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력) 또는 키메라 항체(예를 들어, 키메라 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력)의 1가 친화력에 비해, 예를 들면 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배 더 큰, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다.
일 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 도 7(서열번호 26) 및 도 8(서열번호 29)에 도시된 경쇄 및 중쇄 가변성 도메인을 포함하거나, 이로 구성되거나 본질적으로 이로 구성된 뮤린 항체(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력) 또는 키메라 항체(예를 들어, 키메라 항체의 Fab 단편으로서의 CD79b로의 친화력)의 그의 2가 형태에서의 친화력과 실질적으로 동일한, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이, 도 7(서열번호 26) 및 도 8(서열번호 29)에 도시된 경쇄 및 중쇄 가변성 도메인을 포함하거나, 이로 구성되거나 본질적으로 이로 구성된 뮤린 항체(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력) 또는 키메라 항체(예를 들어, 키메라 항체의 IgG 단편으로서의 CD79b로의 친화력)의 그의 2가 형태에서의 친화력에 비해, 예를 들면 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 또는 60-배 더 낮은, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이, 도 7(서열번호 26) 및 도 8(서열번호 29)에 도시된 경쇄 및 중쇄 가변성 도메인을 포함하거나, 이로 구성되거나 본질적으로 이로 구성된 뮤린 항체(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력) 또는 키메라 항체(예를 들어, 키메라 항체의 IgG 단편으로서의 CD79b로의 친화력)의 그의 2가 형태에서의 친화력에 비해, 예를 들면 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배 더 큰, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.4 nM인, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다. 추가의 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.4 nM +/- 0.04인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.3 nM이거나 더 우수한 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.32 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.36 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.4 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.44 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.48 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.5 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.3 nM 내지 0.5 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.32 nM 내지 0.48 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.36 nM 내지 0.44 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.2 nM인, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다. 추가의 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.2 nM +/- 0.02인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.1 nM이거나 더 우수한 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.12 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.14 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.16 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.18 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.2 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.22 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.24 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.26 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.28 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.30 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.1 nM 내지 0.3 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.12 nM 내지 0.28 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.14 nM 내지 0.26 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.16 nM 내지 0.24 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.18 nM 내지 0.22 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.5 nM인, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다. 추가의 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.5 nM +/- 0.1인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.4 nM이거나 더 우수한, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 인간화된 항-CD79b 항체의 조합물을 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.5 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.6 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.7 nM이거나 더 우수한 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.3 nM 내지 0.7 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.4 nM 내지 0.6 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.5 nM 내지 0.55 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다.
일 양태에서, 뮤린 항체의 CD79b로의 1가 친화력은 서열번호 26(도 7) 및 서열번호 29(도 8)의 가변성 도메인 서열을 포함하는 Fab 단편의 결합 친화력과 실질적으로 동일하다. 또 다른 양상에서, 뮤린 항체의 CD79b로의 1가 친화력은 1993년 7월 20일자로 HB11413으로서 ATCC에 의해 기탁된 하이브리도마로부터 생성된 항체, 또는 1993년 7월 20일자로 HB11413으로서 ATCC에 의해 기탁된 하이브리도마로부터 생성된 항체로부터의 가변성 도메인을 포함하는 키메라 항체의 가변성 도메인 서열을 포함하는 Fab 단편의 결합 친화력과 실질적으로 동일하다.
당업계에 널리 확립된 바와 같이, 리간드의 그의 수용체로의 결합 친화력은 임의의 다양한 검정을 사용하여 결정될 수 있고, 다양한 정량적 값으로 표시될 수 있다. 따라서, 일 양태에서, 결합 친화력은 Kd 값으로서 표시되고 내재적 결합 친화력을 반영한다(예를 들어, 최소화된 결합활성 효과를 가짐). 일반적으로 및 바람직하게는, 결합 친화력은, 세포-부재이거나 세포-연관된 설정인지와 무관하게, 시험관내에서 측정된다. 본원에 더 자세히 기재된 바와 같이, 결합 친화력에 있어서 배수 차이는 인간화된 항체(예를 들어, Fab 형태에서)의 1가 결합 친화력 값 및 기준/비교자 항체(예를 들어, Fab 형태에서)(예를 들어, 공여자 초가변성 영역 서열을 갖는 뮤린 항체)의 1가 결합 친화력 값의 비에 관하여 정량화될 수 있고, 이때 결합 친화력 값은 유사한 검정 조건하에 결정된다. 따라서, 일 양태에서, 결합 친화력에 있어서 배수 차이는 Fab 형태의 인간화된 항체 및 상기 기준/비교자 Fab 항체의 Kd 값의 비로서 결정된다. 예를 들면, 일 양태에서, 본 발명의 항체(A)가 기준 항체(M)의 친화력에 비해 "3-배 더 낮은" 친화력을 갖는다면, A에 대한 Kd 값이 3×인 경우, M의 Kd 값은 1×이고, A의 Kd 대 M의 Kd의 비는 3:1이 될 것이다. 역으로, 일 양태에서, 본 발명의 항체(C)가 기준 항체(R)의 친화력에 비해 "3-배 더 높은" 친화력을 갖는다면, C에 대한 Kd 값이 1×인 경우, R의 Kd 값은 3×이고, C의 Kd 대 R의 Kd의 비는1:3이 될 것이다. 본원에 기재된 검정을 비롯하여 당업계에 공지된 임의의 다수의 검정이 결합 친화력 측정을 수득하기 위해 사용될 수 있고, 예를 들면, 비아코어(Biacore), 방사성면역검정(RIA) 및 ELISA가 포함된다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 항체의 그의 2가 형태에서의 CD79b로의 친화력(예를 들어, 항체의 IgG로서의 CD79b로의 친화력)이 0.4 nM, 0.2 nM 또는 0.5 nM인 인간화된 항-CD79b 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와의 조합을 위해 CD79b에 결합하는 항체가 제공되고, 이때 항체는:
(i) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31)인 HVR-L1;
(ii) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(iii) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(iv) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(v) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(vi) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36)인 HVR-H3으로 이루어진 군으로부터 선택된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함한다.
일 양태에서, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 CD79b에 결합하는 항체의 조합물이 제공되고, 이때 항체는 1개 이상의 변형 HVR을 포함하고, 이때 변형 HVR 서열은 서열번호 31, 32, 33, 34, 35 또는 36에서 서열의 1개 이상의 잔기의 변형을 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 도 3b에 도시된 바와 같은 HVR1-HC, HVR2-HC 및/또는 HVR3-HC 서열(서열번호 50 내지 52)을 포함하는 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 도 3a에 도시된 바와 같은 HVR1-LC, HVR2-LC 및/또는 HVR3-LC 서열(서열번호 47 내지 49)을 포함하는 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 도 4b에 도시된 바와 같은 HVR1-HC, HVR2-HC 및/또는 HVR3-HC 서열(서열번호 58 내지 60)을 포함하는 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 도 4a에 도시된 바와 같은 HVR1-LC, HVR2-LC 및/또는 HVR3-LC 서열(서열번호 55 내지 57)을 포함하는 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 도 5b에 도시된 바와 같은 HVR1-HC, HVR2-HC 및/또는 HVR3-HC 서열(서열번호 66 내지 68)을 포함하는 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 도 5a에 도시된 바와 같은 HVR1-LC, HVR2-LC 및/또는 HVR3-LC 서열(서열번호 63 내지 65)을 포함하는 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 도 6b에 도시된 바와 같은 HVR1-HC, HVR2-HC 및/또는 HVR3-HC 서열(서열번호 74 내지 76)을 포함하는 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 도 6a에 도시된 바와 같은 HVR1-LC, HVR2-LC 및/또는 HVR3-LC 서열(서열번호 71 내지 73)을 포함하는 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 서열번호 54, 62, 70 또는 78로부터 선택된 중쇄 가변성 도메인을 포함하는 항-CD79b 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 포함한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 서열번호 53, 61, 69 또는 77로부터 선택된 경쇄 가변성 도메인을 포함하는 항-CD79b 항체를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 유리 시스테인 아미노산 및 서열번호 83 내지 130으로부터 선택된 서열을 포함하는 시스테인 조작된 항-CD79b 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 포함한다. 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 CD79b 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 모 항-CD79b 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 대체함을 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 유리 시스테인 아미노산을 포함하는 시스테인 조작된 항-CD79b 항체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 포함하고, 이때 시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 CD79b 폴리펩타이드에 결합하고 모 항-CD79b 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기를 시스테인으로 대체함을 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있으며, 이때 모 항체는 하기로부터 선택된 하나 이상의 HVR 서열을 포함한다:
(a) 서열 A1-A15를 포함하고, 이때 A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 31) 또는 KASQSVDYEGDSFLN(서열번호 37)인 HVR-L1;
(b) 서열 B1-B7을 포함하고, 이때 B1-B7이 AASNLES(서열번호 32)인 HVR-L2;
(c) 서열 C1-C9를 포함하고, 이때 C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 33)인 HVR-L3;
(d) 서열 D1-D10을 포함하고, 이때 D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 34)인 HVR-H1;
(e) 서열 E1-E18을 포함하고, 이때 E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 35)인 HVR-H2; 및
(f) 서열 F1-F10을 포함하고, 이때 F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 36) 또는 TRRVPIRLDY(서열번호 38)인 HVR-H3.
시스테인 조작된 항-CD79b 항체는 단클론성 항체, 항체 단편, 키메라 항체, 인간화된 항체, 단일-쇄 항체, 또는 항-CD79b 폴리펩타이드 항체의 그의 개개의 항원성 에피토프로의 결합을 경쟁적으로 저해하는 항체일 수 있다. 본 발명의 항체는 성장 저해제 또는 세포독성제, 예컨대 독소, 예를 들면, 아우리스타틴 또는 메이탄시노이드에 임의적으로 접합될 수 있다. 본 발명의 항체는 임의적으로 CHO 세포 또는 세균 세포에서 생산될 수 있고, 바람직하게는 이들이 결합하는 세포의 성장 또는 증식을 저해하고 이의 사멸을 유도할 수 있다. 검출 목적을 위해, 본 발명의 항체는 검출가능하게 표지화되고, 고체 지지체 등에 부착될 수 있다.
조합물 발명에 따른 용어 "CD79b 항체-약물 접합체("ADC")"는 하기 화학식 I일 수 있고, 이때 항체는 하나 이상의 약물 부분(D)에 임의적 연결기(L)를 통해 접합(즉 공유적으로 결합)된다. ADC는 thioMAb 약물 접합체("TDC")를 포함할 수 있다.
[화학식 I]
Ab-(L-D)p
따라서, 항체는 약물에 직접적으로 또는 연결기를 통해 접합될 수 있다. 화학식 I에서, p는 항체당 약물 부분의 평균 수이고, 이는, 예를 들어, 항체당 약 1 내지 약 20개의 약물 부분의 범위일 수 있고, 특정 양태에서 항체당 1 내지 약 8개의 약물 부분의 범위일 수 있다. 본 발명은 항체당 평균 약물 적재량이 약 2 내지 약 5개, 또는 약 3 내지 약 4개인 화학식 I의 항체-약물 화합물의 혼합물을 포함하는 조성물을 포함한다.
본 발명에 따른 조합물의 일 양태에서, CD79b 항체-약물 접합체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이다.
a. 예시적 연결기
연결기는 하나 이상의 연결기 성분을 포함할 수 있다. 예시적인 연결기 성분으로는 6-말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로파노일("MP"), 발린-시트룰린("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌("ala-phe"), p-아미노벤질옥시카보닐("PAB"), 및 하기 연결기 제제와의 접합으로부터 생성된 것들이 포함된다: N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트("SPP"), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트("SMCC", 또한 본원에 "MCC"로서 지칭됨), 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트("SIAB"). 다양한 연결기 성분은 당업계에 공지되어 있고, 이들중 일부는 아래에 기재된다.
연결기는 세포에서 약물의 방출을 촉진시키는 "분할가능한 연결기"일 수 있다. 예를 들면, 산-불안정성 연결기(예를 들어, 하이드라존), 단백질분해효소-감수성(예를 들어, 펩타이드분해효소-감수성) 연결기, 광불안정성 연결기, 다이메틸 연결기 또는 다이설파이드-함유 연결기(문헌[Chari et al., Cancer Research 52: 127-131 (1992)]; 미국 특허 제5,208,020호)가 사용될 수 있다.
특정 양태에서, 연결기는 하기 화학식 II로 제시되는 바와 같다:
[화학식 II]
-Aa-Ww-Yy-
상기 식에서,
A는 연장부 단위이고, a는 0 내지 1의 정수이고;
W는 아미노산 단위이고, w는 0 내지 12의 정수이고;
Y는 이격자 단위이고, y는 0, 1, 또는 2이고;
Ab, D 및 p는 화학식 I에 대해 상기 정의된 바와 같다.
이러한 연결기의 예시적인 양태는 미국 특허출원공개 제2005-0238649 A1호에 기재되어 있고, 이는 명확히 본원에 참고로 혼입되어 있다.
몇몇 양태에서, 연결기 성분은 또 다른 연결기 성분 또는 약물 부분에 항체를 연결시키는 "연장부 단위"를 포함할 수 있다. 예시적인 연장부 단위는 아래에 제시된다(이때 파선은 항체로의 공유 결합 자리를 지시함):
Figure pct00004
Figure pct00005
몇몇 양태에서, 연결기 성분은 아미노산 단위를 포함할 수 있다. 하나의 이러한 양태에서, 아미노산 단위는 단백질분해효소에 의한 연결기의 분할을 허용하고, 이로써 세포내 단백질분해효소, 예컨대 라이소좀 효소로의 노출시 면역접합체로부터 약물의 방출을 촉진시킨다. 예를 들어, 문헌[Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21 :778-784]을 참조한다. 예시적인 아미노산 단위로는, 제한되지 않지만, 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 테트라펩타이드, 및 펜타펩타이드가 포함된다. 예시적인 다이펩타이드로는: 발린-시트룰린(vc 또는 val-cit), 알라닌-페닐알라닌(af 또는 ala-phe); 페닐알라닌-라이신(fk 또는 phe-lys); 또는 N-메틸-발린-시트룰린(Me-val-cit)이 포함된다. 예시적인 트라이펩타이드로는: 글리신-발린-시트룰린(gly-val-cit) 및 글리신-글리신-글리신(gly-gly-gly)이 포함된다. 아미노산 단위는 천연 발생 아미노산 잔기뿐만 아니라, 소수의 아미노산 및 비-천연 발생 아미노산 유사체, 예컨대 시트룰린을 포함할 수 있다. 아미노산 단위는 특별한 효소, 예를 들면, 종양-연관된 단백질분해효소, 카텝신(cathepsin) B, C 및 D, 또는 플라스민(plasmin) 단백질분해효소에 의한 효소적 분할에 대한 이들의 선택도에 있어서 고안되고 최적화될 수 있다.
몇몇 양태에서, 연결기 성분은 직접적으로 또는 연장부 단위 및/또는 아미노산 단위에 의해 약물 부분에 항체를 연결시키는 "이격자" 단위를 포함할 수 있다. 이격자 단위는 "자가-희생적" 또는 "비-자가-희생적"일 수 있다. "비-자가-희생적" 이격자 단위는 이격자 단위의 일부 또는 전부가 ACD의 효소적(예를 들어, 단백질분해적) 분할시 약물 부분에 결합되어 유지되는 단위이다. 비-자가-희생적 이격자 단위의 예로는, 제한되지 않지만, 글리신 이격자 단위 및 글리신-글리신 이격자 단위가 포함된다. 서열-특이적 효소 분할에 감수성인 펩타이드 이격자의 다른 조합이 또한 고려된다. 예를 들면, 종양-세포 연결된 단백질분해효소에 의한 글리신-글리신 이격자 단위를 함유하는 ADC의 효소 분할은 ADC의 나머지로부터의 글리신-글리신-약물 부분의 방출을 초래할 것이다. 하나의 이러한 양태에서, 이어서 글리신-글리신-약물 부분은 종양 세포에서 별도의 가수분해 단계에 적용되고, 따라서 글리신-글리신 이격자 단위를 약물 부분으로부터 분할한다.
"자가-희생적" 이격자 단위는 별도의 가수분해 단계 없이 약물 부분의 방출을 허용한다. 특정 양태에서, 연결기의 이격자 단위는 p-아미노벤질 단위를 포함한다. 하나의 이러한 양태에서, p-아미노벤질 알코올은 아미노산 단위에 아미드 결합을 통해 부착되고, 카바메이트, 메틸카바메이트, 또는 카보네이트가 벤질 알코올 및 세포독성제 사이에 만들어 진다. 예를 들어, 문헌[Hamann et al. (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15: 1087-1103]을 참조한다. 일 양태에서, 이격자 단위는 p-아미노벤질옥시카보닐(PAB)이다. 특정 양태에서, p-아미노벤질 단위의 페닐렌 부위는 Qm으로 치환되고, 이때 Q는 -C1-C8 알킬, -0-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이다. 자가-희생적 이격자 단위의 예로는 추가로, 제한되지 않지만, p-아미노벤질 알코올에 전자적으로 유사한 방향족 화합물(예를 들어, 미국 특허출원공개 제2005/0256030 A1호 참조), 예컨대 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체(문헌[Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237]) 및 오르토- 또는 파라-아미노벤질아세탈이 포함된다. 아미드 결합 가수분해시 환화되는 이격자가 사용될 수 있고, 예컨대 치환된 및 비치환된 4-아미노부티르산 아미드(문헌[Rodrigues et al, Chemistry Biology, 1995, 2, 223]); 적절히 치환된 바이사이클로[2.2.1] 및 바이사이클로[2.2.2] 고리 시스템(문헌[Storm, et al, J. Amer. Chem. Soc, 1972, 94, 5815]); 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드(문헌[Amsberry, et al., J. Org. Chem., 1990, 55, 5867])이다. 글리신의 a-위치에서 치환된 아민-함유 약물의 제거(문헌[Kingsbury, et al, J. Med. Chem., 1984, 27, 1447])는 또한 ADC에 유용한 자가-희생적 이격자의 예이다.
일 양태에서, 이격자 단위는 다중 약물을 혼입하고 방출하기 위해 사용될 수 있는, 하기 도시된 바와 같은 분지된 비스(하이드록시메틸)스타이렌(BHMS) 단위이다.
Figure pct00006
상기 식에서,
Q는 -C1-C8 알킬, -0-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고;
m은 0 내지 4의 범위의 정수이고;
n은 0 또는 1이고;
p는 1 내지 약 20의 범위이다.
또 다른 양태에서, 연결기 L은 항체로의 분지화 다작용성 연결기 부분을 통해 하나 보다 많은 약물 부분의 공유 결합을 위한 수지상 유형의 연결기일 수 있다(문헌[Sun et al (2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215]; 문헌[Sun et al (2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11: 1761-1768]). 수지상 연결기는 약물 대 항체의 몰 비, 즉 ADC의 효력에 관련된 적재량을 증가시킬 수 있다. 따라서, 시스테인 조작된 항체가 단지 하나의 반응성 시스테인 티올 기를 갖는 경우, 다수의 약물 부분은 수지상 연결기를 통해 부착될 수 있다.
예시적인 연결기 성분 및 이의 조합물은 화학식 II의 ADC에 관하여 아래에 제시된다:
Figure pct00007
연장부, 이격자, 및 아미노산 단위를 비롯한 연결기 성분은 당업계에 공지된 방법, 예컨대 미국 특허출원공개 제2005-0238649 A1호에 기재된 방법에 의해 합성될 수 있다.
b. 예시적인 약물 부분
(1) 메이탄신 및 메이탄시노이드
몇몇 양태에서, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 면역접합체의 조합물은 하나 이상의 메이탄시노이드 분자에 접합된 항체를 포함한다. 메이탄시노이드는 투불린 중합을 저해함으로써 작용하는 유사분열 저해제이다. 메이탄신은 최초로 서아프리카 관목 메이테너스 세라타(Maytenus serrata)로부터 단리되었다(미국 특허 제3,896,111호). 후속적으로, 특정 미생물이 또한 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄시놀(maytansinol) 및 C-3 메이탄시놀 에스테르를 생산하는 것으로 발견되었다(미국 특허 제4,151,042호). 합성 메이탄시놀 및 이의 유도체와 유사체는, 예를 들면, 미국 특허 제4,137,230호; 제4,248,870호; 제4,256,746호; 제4,260,608호; 제4,265,814호; 제4,294,757호; 제4,307,016호; 제4,308,268호; 제4,308,269호; 제4,309,428호; 제4,313,946호; 제4,315,929호; 제4,317,821호; 제4,322,348호; 제4,331,598호; 제4,361,650호; 제4,364,866호; 제4,424,219호; 제4,450,254호; 제4,362,663호; 및 제4,371,533호에 개시되어 있다.
메이탄시노이드 약물 부분은 다음과 같은 이유로 항체 약물 접합체에서 흥미로운 약물 부분이다: (i) 발효 또는 화학적 변형, 발효 생성물의 유도체화에 의해 제조하기가 비교적 용이함, (ii) 항체에 다이설파이드 및 비-다이설파이드 연결기를 통해 접합하기에 적합한 작용기를 갖는 유도체화가 가능함, (iii) 혈장에서 안정함, 및 (iv) 다양한 종양 세포주에 대해 효과적임.
메이탄시노이드 약물 부분으로서 사용하기에 적합한 메이탄신 화합물은 당업계에 공지되어 있고, 공지된 방법에 따라서 천연 공급원으로부터 단리되거나, 유전자 조작 기법을 사용하여 단리될 수 있다(미국 특허 제6,790,952호; 미국 특허출원공개 제2005/0170475호; 문헌[Yu et al (2002) PNAS 99:7968-7973]). 메이탄시놀 및 메이탄시놀 유사체는 또한 공지된 방법에 따라 합성적으로 제조될 수 있다.
예시적인 메이탄시노이드 약물 부분으로는 변형된 방향족 고리를 갖는 것들, 예컨대: C-19-탈클로로(미국 특허 제4,256,746호)(안사마이토신(ansamytocin) P2의 수소화 리튬 알루미늄 환원에 의해 제조됨); C-20-하이드록시(또는 C-20-탈메틸) +/-C-19-탈클로로(미국 특허 제4,361,650호 및 제4,307,016호)(스트렙토마이세스(Streptomyces) 또는 악티오마이세스(Actinomyces)를 사용한 탈메틸화 또는 LAH를 사용한 탈염소화에 의해 제조됨); 및 C-20-탈메톡시, C-20-아실옥시(-OCOR), +/-탈클로로(미국 특허 제4,294,757호)(염화 아실을 사용하는 아실화에 의해 제조됨), 및 다른 위치에서 변형된 것들이 포함된다.
예시적인 메이탄시노이드 약물 부분으로는 또한, 예컨대 다음의 변형을 갖는 것들이 포함된다: C-9-SH(미국 특허 제4,424,219호)(메이탄시놀과 H2S 또는 P2S5의 반응에 의해 제조됨); C-14-알콕시메틸(탈메톡시/CH2OR)(미국 특허 제4,331,598호); C-14-하이드록시메틸 또는 아실옥시메틸(CH2OH 또는 CH2OAc)(미국 특허 제4,450,254호)(노카르디아(Nocardia)로부터 제조됨); C-15-하이드록시/아실옥시(미국 특허 제4,364,866호)(스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 전환에 의해 제조됨); C-15-메톡시(미국 특허 제4,313,946호 및 제4,315,929호)(트레위아 누들플로라(Trewia nudlflora)로부터 단리됨); C-18-N-탈메틸(미국 특허 제4,362,663호 및 제4,322,348호)(스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 탈메틸화에 의해 제조됨); 및 4,5-데옥시(미국 특허 제4,371,533호)(메이탄시놀의 삼염화 티탄/LAH 환원에 의해 제조됨).
메이탄신 화합물 상의 많은 위치는 연결 유형에 따라서 연결 위치로서 유용한 것으로 공지되어 있다. 예를 들면, 에스터 연결을 형성하기 위해, 하이드록실 기를 갖는 C-3 위치, 하이드록시메틸에 의해 변형된 C-14 위치, 하이드록실 기에 의해 변형된 C-15 위치 및 하이드록실 기를 갖는 C-20 위치가 모두 적합하다(미국 특허 제5,208,020호; 미국 특허 제RE39151호; 미국 특허 제6,913,748호; 미국 특허 제7,368,565호; 미국 특허출원공개 제2006/0167245호; 미국 특허출원공개 제2007/0037972호).
메이탄시노이드 약물 부분은 하기 구조를 갖는 부분을 포함한다:
Figure pct00008
이때, 파선은 ADC의 연결기로의 메이탄시노이드 약물 부분의 황 원자의 공유 결합을 지시한다. R은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬일 수 있다. 아미드 기를 황 원자에 부착시키는 알킬렌 쇄는 메탄일, 에탄일, 또는 프로필일 수 있고, 즉, m은 1, 2, 또는 3이다(미국 특허 제6,334,10호; 미국 특허 제5,208,020호; 미국 특허 제7,276,497호; 문헌[Chari et al (1992) Cancer Res . 52: 127-131]; 문헌[Liu et al (1996) Proc . Natl . Acad . Sci USA 93:8618-8623]).
메이탄시노이드 약물 부분의 모든 입체이성체, 즉 D의 키랄성 탄소에서의 R 및 S 입체배좌의 임의의 조합이 본 발명의 화합물에 대해 고려된다. 일 양태에서, 메이탄시노이드 약물 부분은 하기 입체화학성을 가질 것이다:
Figure pct00009
메이탄시노이드 약물 부분의 예시적인 양태로는 하기 구조를 갖는 DM1; DM3; 및 DM4가 포함된다:
Figure pct00010
Figure pct00011
이때, 파선은 항체-약물 접합체의 연결기(L)로의 약물의 황 원자의 공유 결합을 지시한다(국제 특허출원공개 제2005/037992호; 미국 특허출원공개 제2005/0276812 A1호).
다른 예시적인 메이탄시노이드 항체-약물 접합체는 하기 구조 및 약어를 갖는다(이때 Ab는 항체이고 p는 1 내지 약 8임):
Figure pct00012
Figure pct00013
DM1이 BMPEO 연결기를 통해 항체의 티올 기에 연결되는 예시적인 항체-약물 접합체는 하기 구조 및 약어를 갖는다:
Figure pct00014
상기 식에서,
Ab는 항체이고;
n은 0, 1, 또는 2이고;
p는 1, 2, 3, 또는 4이다.
메이탄시노이드를 함유하는 면역접합체, 이의 제조 방법, 및 이의 치료학적 용도는, 예를 들면, 문헌[Erickson, et al (2006) Cancer Res. 66(8):4426-4433]; 미국 특허 제5,208,020호, 제5,416,064호, 미국 특허출원공개 제2005/0276812 A1호, 및 유럽 특허 제0 425 235 B1호(이의 개시내용은 본원에 명확히 참고로 혼입됨)에 개시되어 있다.
조합물 발명에 따른 항체-메이탄시노이드 접합체는 항체 또는 메이탄시노이드 분자의 생물학적 활성을 그다지 감소시키지 않으면서 항체를 메이탄시노이드 분자에 화학적으로 연결시킴으로써 제조된다. 예를 들어, 미국 특허 제5,208,020호(이의 개시내용은 본원에 명확히 참고로 혼입됨)를 참조한다. 메이탄시노이드는 공지된 기법에 의해 합성되고 천연 공급원으로부터 단리될 수 있다. 적합한 메이탄시노이드는, 예를 들면, 미국 특허 제5,208,020호 및 상기 지칭된 다른 특허 및 비특허 출판물에 개시되어 있고, 예컨대 메이탄시놀, 및 메이탄시놀 분자의 방향족 고리 또는 다른 위치에서 변형된 메이탄시놀 유사체, 예컨대 다양한 메이탄시놀 에스테르이다.
항체-메이탄시노이드 접합체를 제조하기 위해 당업계에 공지된 많은 연결기가 존재하고, 예를 들어 미국 특허 제5,208,020호, 또는 유럽 특허 공보 제0 425 235 B1호, 문헌[Chari et al., Cancer Research 52: 127-131 (1992)], 및 미국 특허출원공개 제2005/0169933 A1호에 개시된 것들이 포함되고, 이의 개시내용은 본원에 명확히 참고로 혼입되어 있다. 연결기 성분 SMCC를 포함하는 항체-메이탄시노이드 접합체는 "항체 약물 접합체 및 방법(Antibody Drug Conjugates and Methods)"이라는 명칭의 미국 특허출원공개 제2005/0276812 A1호에 개시된 바와 같이 제조될 수 있다. 연결기는 상기-확인된 특허에 개시된 바와 같은 다이설파이드 기, 티오에테르 기, 산 불안정성 기, 광 불안정성 기, 펩티다아제 불안정성 기, 또는 에스테라아제 불안정성 기를 포함한다. 추가적인 연결기는 본원에 기재되고 예시화된다.
항체 및 메이탄시노이드의 접합체는 다양한 이작용성 단백질 커플링제, 예컨대 N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC), 이미도티올란(IT), 이미도에스테르의 이작용성 유도체(예컨대, 다이메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르(예컨대, 다이석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예컨대, 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예컨대, 비스(p-아지도벤조일) 헥산다이아민), 비스-다이아조늄 유도체(예컨대, 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이이소시아네이트(예컨대, 톨루엔 2,6-다이이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오르 화합물(예컨대, 1,5-다이플루오로-2,4-다이니트로벤젠)을 사용하여 만들어질 수 있다. 특정 양태에서, 커플링제는 다이설파이드 연결을 제공하기 위한 N-석신이미딜-3-(2-피리딜다이티오) 프로피오네이트(SPDP)(문헌[Carlsson et al., Biochem . J. 173:723-737 (1978)]) 및 N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트(SPP)이다.
연결기는 연결 유형에 따라서 메이탄시노이드 분자에 다양한 위치에서 부착될 수 있다. 예를 들면, 에스테르 연결은 종래의 커플링 기법을 사용하여 하이드록실 기와의 반응에 의해 형성될 수 있다. 반응은 하이드록실 기를 갖는 C-3 위치, 하이드록시메틸에 의해 변형된 C-14 위치, 하이드록실 기에 의해 변형된 C-15 위치, 및 하이드록실 기를 갖는 C-20 위치에서 일어날 수 있다. 하나의 바람직한 양태에서, 연결은 메이탄시놀 또는 메이탄시놀 유사체의 C-3 위치에서 형성된다.
(2) 아우리스타틴 및 돌라스타틴
몇몇 양태에서, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 면역접합체의 조합물은 돌라스타틴 또는 돌로스타틴 펩타이드성 유사체 또는 유도체, 예를 들어 아우리스타틴에 접합된 항체를 포함한다(미국 특허 제5,635,483호; 제5,780,588호). 돌라스타틴 및 아우리스타틴은 미세소관 역학, GTP 가수분해, 및 핵 및 세포 분열에 간섭하는 것으로 제시되었고(문헌[Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584]), 항암 활성(미국 특허 제5,663,149호) 및 항곰팡이 활성(문헌[Pettit et al (1998) Antimicrob . Agents Chemother. 42:2961-2965])을 갖는다. 돌라스타틴 또는 아우리스타틴 약물 부분은 펩타이드성 약물 부분의 N(아미노) 말단 또는 C(카복실) 말단을 통해 항체에 부착될 수 있다(국제 특허출원공개 제02/088172호).
예시적인 아우리스타틴 양태는 N-말단 연결된 모노메틸아우리스타틴 약물 부분 DE 및 DF를 포함한다(미국 특허출원공개 제2005/0238649호, 문헌[Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, presented March 28, 2004](이의 개시내용은 명확히 참고로 그의 전체가 혼입됨)에 개시됨).
펩타이드성 약물 부분은 아래의 화학식 DE 및 DF로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00015
Figure pct00016
상기 식에서,
DE 및 DF의 파선은 항체 또는 항체-연결기 성분으로 및 독립적으로 각각의 위치에서의 공유 결합 자리를 지시하고;
R2는 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고;
R3은 H, C1-C8 알킬, C3-C8 탄소환, 아릴, C1-C8 알킬-아릴, C1-C8 알킬-(C3-C8 탄소환), C3-C8 헤테로환 및 C1-C8 알킬-(C3-C8 헤테로환)으로부터 선택되고;
R4는 H, C1-C8 알킬, C3-C8 탄소환, 아릴, C1-C8 알킬-아릴, C1-C8 알킬-(C3-C8 탄소환), C3-C8 헤테로환 및 C1-C8 알킬-(C3-C8 헤테로환)으로부터 선택되고;
R5는 H 및 메틸로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 함께 탄소환식 고리를 형성하고 화학식 -(CRaRb)n-을 갖고, 이때 Ra 및 Rb는 독립적으로 H, C1-C8 알킬 및 C3-C8 탄소환으로부터 선택되고, n은 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택되고;
R6은 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고;
R7은 H, C1-C8 알킬, C3-C8 탄소환, 아릴, C1-C8 알킬-아릴, C1-C8 알킬-(C3-C8 탄소환), C3-C8 헤테로환 및 C1-C8 알킬-(C3-C8 헤테로환)으로부터 선택되고;
R8은 각각 독립적으로 H, OH, C1-C8 알킬, C3-C8 탄소환 및 0-(C1-C8 알킬)로부터 선택되고;
R9는 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고;
R10은 아릴 또는 C3-C8 헤테로환으로부터 선택되고;
Z는 O, S, NH, 또는 NR12이고, 이때 R12는 C1-C8 알킬이고;
R11은 H, C1-C20 알킬, 아릴, C3-C8 헤테로환, -(R130)m-R14, 또는 -(R130)m-CH(R15)2로부터 선택되고;
m은 1 내지 1000의 범위의 정수이고;
R13은 C2-C8 알킬이고;
R14는 H 또는 C1-C8 알킬이고;
R15는 각각의 경우 독립적으로 H, COOH, -(CH2)n-N(R16)2, -(CH2)n-S03H, 또는 -(CH2)n-S03-C1-C8 알킬이고;
R16은 각각의 경우 독립적으로 H, C1-C8 알킬, 또는 -(CH2)n-COOH이고;
R18은 -C(R8)2-C(R8)2-아릴, -C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8 헤테로환), 및 -C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8 탄소환)으로부터 선택되고;
n은 0 내지 6의 범위의 정수이다.
일 양태에서, R3, R4 및 R7은 독립적으로 이소프로필 또는 2급-부틸이고 R5는 -H 또는 메틸이다. 예시적인 양태에서, R3 및 R4는 각각 이소프로필이고, R5는 -H이고, R7은 2급-부틸이다.
역시 또 다른 양태에서, R2 및 R6은 각각 메틸이고, R9는 -H이다.
여전히 또 다른 양태에서, R8은 각 경우 -OCH3이다.
예시적인 양태에서, R3 및 R4는 각각 이소프로필이고, R2 및 R6은 각각 메틸이고, R5는 -H이고, R7은 2급-부틸이고, R8은 각 경우 -OCH3이고, R9는 -H이다.
일 양태에서, Z는 -O- 또는 -NH-이다.
일 양태에서, R10은 아릴이다.
예시적인 양태에서, R10은 -페닐이다.
예시적인 양태에서, Z가 -0-인 경우, R11은 -H, 메틸 또는 t-부틸이다.
일 양태에서, Z가 -NH인 경우, R11은 -CH(R15)2이고, 이때 R15는 (CH2)n-N(R16)2이고, R16은 -C1-C8 알킬 또는 -(CH2)n-COOH이다.
또 다른 양태에서, Z가 -NH인 경우, R11은 -CH(R15)2이고, 이때 R15는 -(CH2)n-S03H이다.
화학식 DE의 예시적인 아우리스타틴 양태는 MMAE이고, 이때 파선은 항체-약물 접합체의 연결기(L)로의 공유 결합을 지시한다:
Figure pct00017
화학식 DF의 예시적인 아우리스타틴 양태는 MMAF이고, 이때 파선은 항체-약물 접합체의 연결기(L)로의 공유 결합을 지시한다(미국 특허출원공개 제2005/0238649호 및 문헌[Doronina et al. (2006) Bioconjugate Chem. 17: 114-124]):
Figure pct00018
다른 예시적인 양태로는 펜타펩타이드 아우리스타틴 약물 부분의 C-말단에서 페닐알라닌 카복시 변형을 갖는 모노메틸발린 화합물(국제 특허출원공개 제2007/008848호) 및 펜타펩타이드 아우리스타틴 약물 부분의 C-말단에서 페닐알라닌 측쇄 변형을 갖는 모노메틸발린 화합물이 포함된다.
다른 약물 부분은 하기 MMAF 유도체를 포함하고, 이때 파선은 항체-약물 접합체의 연결기(L)로의 공유 결합을 지시한다:
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
일 양태에서, 제한되지 않지만, 상기 제시된 바와 같이, 트라이에틸렌 글리콜 에스테르(TEG)를 비롯한 친수성 기는 R11에서 약물 부분에 부착될 수 있다. 임의의 특별한 이론에 얽매이지 않고, 친수성 기는 약물 부분의 내재화 및 비-응집에 도움을 준다.
아우리스타틴/돌라스타틴을 포함하는 화학식 I의 ADC 또는 이의 유도체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물의 예시적인 양태는 미국 특허출원공개 제2005/0238649호 및 문헌[Doronina et al. (2006) Bioconjugate Chem . 17: 114-124](이는 명확히 본원에 참고로 혼입됨)에 기재되어 있다. MMAE 또는 MMAF 및 다양한 연결기 성분을 포함하는 화학식 I의 ADC의 예시적인 양태는 하기 구조 및 약어를 갖는다(이때 "Ab"는 항체이고; p는 1 내지 약 8이고, "Val-Cit" 또는 "vc"는 발린-시트룰린 다이펩타이드이고; "S"는 황 원자이다). 본원에서 황 연결된 ADC에 대한 특정한 구조적 설명에서, 특별한 황 원자가 다수의 연결기-약물 부분을 함유함을 지시하기 위해서가 아니라 단지 황 연결 특징을 지시하기 위해서 항체는 "Ab-S"로 표시됨을 주지할 것이다. 하기 구조의 좌측 삽입구는 또한 Ab 및 S 사이의 황 원자의 좌측에 위치될 수 있고, 이는 본원 전체를 통해 기재된 본 발명의 ADC에 대한 동등한 설명일 것이다.
Figure pct00022
MMAF 및 다양한 연결기를 포함하는 화학식 I의 ADC와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물의 예시적인 양태는 추가로 Ab-MC-PAB-MMAF 및 Ab-PAB-MMAF를 포함한다. 흥미롭게는, 단백질분해로 분할되지 않는 항체에 부착되는 MMAF를 포함하는 면역접합체는 단백질분해로 분할가능한 연결기에 의해 항체에 부착되는 MMAF를 포함하는 면역접합체와 필적할만한 활성을 갖는 것으로 제시되었다. 문헌[Doronina et al. (2006) Bioconjugate Chem. 17: 114-124]을 참조한다. 이러한 경우에, 약물 방출은 세포에서의 항체 분해에 의해 영향받는 것으로 믿겨진다.
전형적으로, 펩타이드-기제 약물 부분은 2개 이상의 아미노산 및/또는 펩타이드 단편 사이에 펩타이드 결합을 형성함으로써 제조될 수 있다. 이러한 펩타이드 결합은, 예를 들면, 펩타이드 화학 분야에 널리 공지된 액상 합성 방법(문헌[E. Schroder and K. Lubke, "The Peptides", volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press])에 따라서 제조될 수 있다. 아우리스타틴/돌라스타틴 약물 부분은 하기 방법에 따라 제조될 수 있다: 미국 특허출원공개 제2005-0238649 A1호; 미국 특허 제5,635,483호; 미국 특허 제5,780,588호; 문헌[Pettit et al (1989) J. Am . Chem. Soc . 111:5463-5465]; 문헌[Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277]; 문헌[Pettit, G.R., et al. Synthesis, 1996, 719-725]; 문헌[Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 5:859-863]; 및 문헌[Doronina (2003) Nat Biotechnol 21(7):778-784].
특히, 화학식 DF의 아우리스타틴/돌라스타틴 약물 부분, 예컨대 MMAF 및 이의 유도체는 미국 특허출원공개 제2005-0238649 A1호 및 문헌[Doronina et al. (2006) Bioconjugate Chem. 17: 114-124]에 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 화학식 DE의 아우리스타틴/돌라스타틴 약물 부분, 예컨대 MMAE 및 이의 유도체는 문헌[Doronina et al. (2003) Nat. Biotech. 21:778-784]에 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 약물-연결기 부분 MC-MMAF, MC-MMAE, MC-vc-PAB-MMAF, 및 MC-vc-PAB-MMAE는 일상적 방법, 예를 들어, 문헌[Doronina et al. (2003) Nat. Biotech. 21:778-784], 및 미국 특허출원공개 제2005/0238649 A1호에 기재된 바와 같은 일상적 방법에 의해 편리하게 합성되고, 이어서 흥미로운 항체에 접합될 수 있다.
(3) 칼리케아미신
다른 양태에서, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 면역접합체의 조합물은 하나 이상의 칼리케아미신 분자에 접합된 항체를 포함한다. 항생제의 칼리케아미신 계열은 서브피코몰(sub-picomolar) 농도로 이중-가닥된 DNA 파쇄를 일으킬 수 있다. 칼리케아미신 계열의 접합체의 제조를 위해, 미국 특허 제5,712,374호, 제5,714,586호, 제5,739,116호, 제5,767,285호, 제5,770,701호, 제5,770,710호, 제5,773,001호, 제5,877,296호(모두 아메리칸 시아나미드 캄파니(American Cyanamid Company))를 참조한다. 사용될 수 있는 칼리케아미신의 구조적 유사체로는, 제한되지 않지만, γ1 I, α2 I, α3 I, N-아세틸-γ1 I, PSAG 및 θI 1(문헌[Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993)], 문헌[Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998)] 및 아메리칸 시아나미드의 전술된 미국 특허)이 포함된다. 항체가 접합될 수 있는 또 다른 항-종양 약물은 항엽산제인 QFA이다. 칼리케아미신 및 QFA 둘 다는 세포내 작용 자리를 갖고, 혈장 막을 쉽게 가로지르지 않는다. 따라서, 항체 매개된 내재화를 통한 이들 제제의 세포 섭취는 이들의 세포독성 효과를 크게 향상시킨다.
c. 다른 세포독성제
항체에 접합될 수 있는 다른 항종양제로는 BCNU, 스트렙토조신(streptozocin), 빈크리스틴 및 5-플루오로우라실, 미국 특허 제5,053,394호, 제5,770,710호에 기재된 집합적으로 LL-E33288 착체로서 공지된 제제의 계열뿐만 아니라, 에스페라미신(esperamicin)(미국 특허 제5,877,296호)이 포함된다.
사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 이의 단편으로는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas Aeruginosa)로부터), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모덱신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디 단백질, 디안틴 단백질, 파이토라카 아메리카나 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아 저해제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 저해제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센스가 포함된다. 예를 들어, 1993년 10월 28일자로 공개된 국제 특허출원공개 제93/21232호를 참조한다.
본 발명은 추가로 항체 및 핵산분해 활성을 갖는 화합물(예를 들어, 리보뉴클레아제 또는 DNA 엔도뉴클레아제, 예컨대 데옥시리보뉴클레아제; DNA 분해효소) 사이에 형성되는 면역접합체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물을 고려한다.
특정 양태에서, 면역접합체와 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체의 조합물은 고도의 방사성 원자를 포함할 수 있다. 다양한 방사성 동위원소가 방사접합된 항체의 생산을 위해 이용가능하다. 예로는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소가 포함된다. 면역접합체가 검출을 위해 사용될 경우, 이는 신티그래프(scintigraphic) 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들면 tc99m 또는 I123, 또는 핵자기공명(NMR) 영상화(또한 자기 공명 영상화, mri로서 공지됨)를 위한 스핀 표지, 예컨대 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 플루오르-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
방사- 또는 다른 표지가 공지된 방식으로 면역접합체에 혼입될 수 있다. 예를 들면, 펩타이드는 생합성될 수 있거나, 관여하는 적합한 아미노산 전구체, 예를 들면, 플루오르-19를 수소 대신 사용하는 화학적 아미노산 합성에 의해 합성될 수 있다. 표지, 예컨대 tc99m 또는 I123, Re186, Re188 및 In111은 펩타이드에서 시스테인 잔기를 경유하여 부착될 수 있다. 이트륨-90은 라이신 잔기를 경유하여 부착될 수 있다. 이오도겐(IODOGEN) 방법(문헌[Fraker et al (1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80: 49-57])은 요오드-123을 혼입하기 위해 사용될 수 있다. 문헌["Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy"(Chatal,CRC Press 1989)]은 다른 방법을 상세히 기재한다.
특정 양태에서, 본원에 정의된 바와 같은 항-CD20 항체와 면역접합체의 조합물은 전구약물(예를 들어, 펩티딜 화학요법제, 국제 특허출원공개 제81/01145호 참조)을 활성 약물, 예컨대 항암 약물로 전환시키는 전구약물-활성화 효소에 접합된 항체를 포함할 수 있다. 이러한 면역접합체는 항체-의존성 효소-중재된 전구약물 치료법("ADEPT")에 있어서 유용하다. 항체에 접합될 수 있는 효소로는, 제한되지 않지만, 포스페이트-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 알칼리성 포스파타아제; 설페이트-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 아릴설파타아제(arylsulfatase); 무독성 5-플루오로사이토신을 항암 약물, 5-플루오로우라실로 전환시키는데 유용한 사이토신 탈아민화효소(cytosine deaminase); 펩타이드-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 단백질분해효소, 예컨대 세라티아(serratia) 단백질분해효소, 써모라이신(thermolysin), 서브틸리신(subtilisin), 카복시펩티다아제(carboxypeptidase) 및 카텝신(cathepsin)(예컨대, 카텝신 B 및 L); D-아미노산 치환기를 함유하는 전구약물을 전환시키는데 유용한 D-알라닐카복시펩티다아제; 당화된 전구약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 탄수화물-분할 효소, 예컨대 β-갈락토시다아제 및 뉴라미니다아제(neuraminidase); β-락탐으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 β-락타마아제(lactamase); 및 아민 질소에서 페녹시아세틸 또는 페닐아세틸 기 각각으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 페니실린 아미다아제(penicillin amidase), 예컨대 페니실린 V 아미다아제 및 페니실린 G 아미다아제가 포함된다. 효소는 당업계에 널리 공지된 재조합 DNA 기법에 의해 항체에 공유적으로 결합될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Neuberger et al, Nature 312:604-608 (1984)]을 참조한다.
d. 약물 적재량
약물 적재량은 화학식 I의 분자중의 항체당 약물 부분의 평균 수, p로 표시된다. 약물 적재량은 항체당 1 내지 20개의 약물 부분(D)의 범위일 수 있다. 화학식 I의 ADC는 1 내지 20개의 약물 부분 범위로 접합된 항체의 집합을 포함한다. 접합 반응으로부터의 ADC의 제조시에 항체당 약물 부분의 평균 수는 종래의 수단, 예컨대 질량 분광분석, ELISA 검정, 및 HPLC에 의해 특징지워질 수 있다. p에 관하여 ADC의 정량적 분포가 또한 결정될 수 있다. 몇몇 경우에, 균일한 ADC(이때, p는 특정 값을 가짐)의 다른 약물 적재량의 ADC로부터의 분리, 정제, 및 특징화는 예컨대 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다. 따라서, 화학식 I의 항체-약물 접합체의 약학 제형은 이러한 접합체 및 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 그 이상의 약물 부분에 연결된 항체의 불균일한 혼합물일 수 있다.
몇몇 항체-약물 접합체의 경우, p는 항체 상의 부착 자리의 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들면, 상기 예시적인 양태에서와 같이, 부착이 시스테인 티올인 경우, 항체는 단지 1개 또는 수 개의 시스테인 티올 기를 가질 수 있거나, 단지 1개 또는 수 개의 충분히 반응성인 티올 기(이를 통해 연결기가 부착됨)를 가질 수 있다. 특정 양태에서, 더 높은 약물 적재량(예를 들어, p>5)은 특정 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성 또는 세포 투과성의 손실을 초래할 수 있다. 특정 양태에서, 본 발명의 ADC를 위한 약물 적재량은 1 내지 약 8개; 약 2 내지 약 6개; 또는 약 3 내지 약 5개의 범위이다. 사실, 특정 ADC의 경우, 항체당 약물 부분의 최적 비는 8개 미만일 수 있고, 약 2 내지 약 5개일 수 있는 것으로 제시되었다. 미국 특허출원공개 제2005-0238649 A1호를 참조한다.
특정 양태에서, 이론적 최대값보다 적은 수의 약물 부분이 접합 반응 동안 항체에 접합된다. 항체는, 예를 들면, 하기 논의되는 바와 같이, 약물-연결기 중간체 또는 연결기 제제와 반응하지 않는 라이신 잔기를 함유할 수 있다. 일반적으로, 항체는 약물 부분에 연결될 수 있는 많은 유리 및 반응성 시스테인 티올 기를 함유하지 않고; 실제로 항체중 대부분의 시스테인 티올 잔기는 다이설파이드 가교로서 존재한다. 특정 양태에서, 항체는 환원제, 예컨대 다이티오트레이톨(DTT) 또는 트라이카보닐에틸포스핀(TCEP)에 의해, 부분적 또는 전체적 환원 조건하에 환원되어, 반응성 시스테인 티올 기를 생성할 수 있다. 특정 양태에서, 항체는 변성 조건에 놓여 반응성 친핵성 기, 예컨대 라이신 또는 시스테인을 드러낸다.
ADC의 적재량(약물/항체 비)은 상이한 방식으로, 예를 들어: (i) 항체에 대하여 몰 과량의 약물-연결기 중간체 또는 연결기 제제를 제한하고, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한하고, (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 환원 조건을 부분적으로 제한함으로써 제어될 수 있다.
하나보다 많은 친핵성 기가 약물-연결기 중간체 또는 연결기 제제와 반응한 후 약물 부분과 반응하고, 이어서 생성된 생성물이 항체에 부착된 하나 이상의 약물 부분의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물임을 이해해야 한다. 항체당 약물의 평균 수는 항체에 특이적이고 약물에 특이적인 2중 ELISA 항체 검정에 의해 혼합물로부터 계산될 수 있다. 개별적 ADC 분자는 혼합물로부터 질량 분광분석에 의해 식별되고, HPLC, 예를 들어 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다(예를 들어, 문헌[McDonagh et al (2006) Prot. Engr. Design & Selection 19(7):299-307]; 문헌[Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070]; 문헌[Hamblett, K.J., et al. "항-CD30 항체-약물 접합체의 약리학, 약동력학 및 독성에 미치는 약물 적재량의 효과(Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate)", Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004]; 문헌[Alley, S.C., et al. "항체-약물 접합체에서 약물 부착의 위치 제어(Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates)", Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004] 참조). 특정 양태에서, 단일 적재값을 갖는 균일한 ADC는 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
항체 약물 접합체의 제조
본원에 정의된 바와 같은 조합물 발명의 항체 약물 접합체(ADC)는 당업계의 숙련가에게 공지된 바와 같은 방법에 의해 제조될 수 있다. 예시적인 방법은, 예를 들어 국제 특허출원공개 제2009/099728호에 개시되어 있다. 상기 방법은, 예를 들어 국제 특허출원공개 제2009/099728호의 문단 538 내지 545(면역접합체의 제조), 문단 546 내지 585(예시적 면역접합체-티오-항체 약물 접합체의 제조), 문단 586 내지 591(연결기), 문단 592 내지 605(연장부 단위), 문단 606 내지 610(아미노산 단위), 문단 611 내지 617(이격자 단위), 문단 618 내지 624(수지상 연결기), 문단 625 내지 632(연결기 제제), 문단 633 내지 636(시스테인 조작된 항-CD79b 항체-약물 접합체의 제조)(이들 전부는 참고로 혼입됨)에 기재되어 있다.
본 발명에 따른 CD79b 항체-약물 접합체의 IC 50 결정을 위한 시험관내 활성 검정
"IC50"은 측정된 특정 활성의 50%를 저해하는데 필요한 특정 화합물의 농도를 지칭한다. CD79b 상호작용을 저해하는 제제의 IC50은, 무엇 보다도, 이후 기재된 바와 같이 측정될 수 있다.
용어 "세포독성 활성"은 항체-약물 접합체 또는 항체-약물 접합체의 세포내 대사산물의 세포-사멸, 세포정지 또는 성장 저해 효과를 지칭한다. 세포독성 활성은 IC50 값으로서 표현될 수 있고, 이는 세포의 반이 생존하는 단위 부피당 농도(몰 또는 질량)이다.
다발성 림프종 세포주 상에서의 인간 CD79b의 표면 발현
표면상에 다양한 양의 CD79b를 발현하는 19개의 림프종 세포주를 배양하고 대수증식기 성장시에 수확하였다. 세포를 각각 100 ㎍/㎖의 정상 마우스 IgG 및 정상 인간 IgG가 함유된 FACS 세척 완충액(PBS; 0.5% 소 혈청 알부민; 0.1% 아지드화 나트륨)에 재현탁시키고, 얼음 상에 유지시켰다. 약 1 × 106 세포/100 ㎕를 항-huCD79b APC(mIgG1, 클론 RFB4, 서던 바이오텍(Southern Biotech) #9361-11) 또는 뮤린 IgG1 APC 이소타입(비디 파르민겐(BD Pharmingen) #555751)에 의해 얼음 상에서 30분 동안 염색하였다. 죽은 세포를 7-AAD(비디 파르민겐 #559925)로 염색하였다. 데이터를 비디 팩스칼리부르(BD FacsCalibur: 상표) 유세포분석기 상에서 획득하고 플로우조(FlowJo: 상표) 소프트웨어에 의해 분석하였다. huMA79b.v28-MCvcPAB-DM1 또는 huMA79b.v28-MCvcPAB-MMAF 또는 huMA79b.v28-MCvcPAB-MMAE 또는 각각의 자유 약물(DM1, MMAF, 또는 MMAE)에 대한 IC50 결정을, 상기와 같이 림프종 세포를 배양하고, 배양된 세포를 대수증식기에서 수확하고, 96 웰 플레이트에서 웰당 90 ㎕의 배양 배지중 5,000개 세포를 접종함으로써 결정하였다. ADC 및 자유 약물을 검출 범위내에서 연속적으로 희석하였다(ADC의 경우 300 ㎍/㎖에서, 또는 자유 약물의 경우 90 nM에서 출발하고 본질적으로 제로 검정 표적으로 희석함). 분취량의 10 ㎕의 희석된 ADC 또는 자유 약물을 첨가하여 세포를 함유하는 웰을 복제하고, 3일 동안 37℃에서 항온처리하였다. 각각의 웰에, 100 ㎕의 셀타이터 글로(CellTiter Glo: 상표)를 첨가하고 30분 동안 항온처리하였다. 화학발광을 검출하고 데이터를 프리즘(Prism: 상표) 소프트웨어로 분석하였다.
올리고사카라이드 성분은 물리적 안정성, 단백질분해효소 공격에 대한 저항성, 면역계와의 상호작용, 약동학 및 특이적인 생물학적 활성을 비롯하여 치료용 당단백질의 효능과 관련되는 특성에 크게 영향을 미칠 수 있다. 이러한 특성은 올리고사카라이드의 존재 또는 부재뿐만 아니라 올리고사카라이드의 특이적인 구조에 따라서도 달라질 수 있다. 올리고사카라이드 구조와 당당백질 작용 사이의 관계를 어느 정도 일반화시킬 수 있다. 예를 들면, 특정 올리고사카라이드 구조는 특정 탄수화물 결합 단백질과의 상호작용을 통해 혈류로부터의 당단백질의 신속한 제거를 매개하는 한편, 다른 것들은 항체에 의해 결합되어 바람직하지 않은 면역 반응을 유발할 수 있다(문헌[Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981]).
포유동물 세포는 인간 적용시에 가장 상용가능한 형태로 단백질을 당화시키는 이들의 능력으로 인해 치료용 당단백질의 생산에 탁월한 숙주이다(문헌[Cumming, D.A., et al., Glycobiology 1 (1991) 115-130]; 문헌[Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981]). 세균은 단백질을 거의 당화시키지 않고, 효모, 사상균, 곤충 및 식물 세포 같은 다른 유형의 통상적인 숙주와 마찬가지로 혈류로부터의 신속한 제거, 바람직하지 않은 면역 상호작용 및 일부 특정한 경우 감소된 생물학적 활성과 연관된 당화 패턴을 수득한다. 포유동물 세포 중에서, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포가 지난 20년 동안 가장 통상적으로 사용되어 왔다. 적합한 당화 패턴을 제공함에 더하여, 이들 세포는 유전학적으로 안정하고 고도로 생산성인 클론 세포주를 일관되게 생산할 수 있다. 이들은 무혈청 배지를 사용하여 단순한 생물 반응기에서 고밀도로 배양될 수 있고, 안전하고 재현성 있는 생물학적 공정의 개발을 가능케 한다. 다른 통상적으로 사용되는 동물 세포로는 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, NSO- 및 SP2/0-마우스 골수종 세포가 포함된다. 더욱 최근에는, 유전자 이식된 동물로부터의 생산 또한 시험되었다(문헌[Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981]).
모든 항체는 중쇄 불변성 영역에서 보존된 위치에 탄수화물 구조를 함유하고, 각 이소타입은 N-연결된 탄수화물 구조의 개별 어레이를 갖는데, 이는 단백질 조립, 분비 또는 작용적 활성에 가변적으로 영향을 끼친다(문헌[Wright, A. and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32]). 부착된 N-연결된 탄수화물의 구조는 가공 정도에 따라 상당히 변화되고, 고-만노스, 다중-분지 및 바이안테너리 복합 올리고사카라이드를 포함할 수 있다(문헌[Wright, A. and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32]). 전형적으로, 단클론성 항체라도 복수개의 당형태로서 존재하도록 특정 당화 부위에 부착된 코어 올리고사카라이드 구조의 불균일한 가공이 존재한다. 마찬가지로, 세포주 사이에서는 항체 당화의 큰 차이가 발생하고, 상이한 배양 조건하에 생육된 소정의 세포주의 경우에도 작은 차이가 보이는 것으로 제시되었다(문헌[Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822]).
간단한 생산 공정을 유지하고 심각한 바람직하지 않은 부작용을 피하면서 효력의 큰 증가를 수득하는 한가지 방법은, 문헌[Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180] 및 미국 특허 제6,602,684호에 기재되어 있는 바와 같이 올리고사카라이드 성분을 조작함으로써 단클론성 항체의 자연적인, 세포-매개되는 효과기 작용을 향상시키는 것이다. 암 면역 요법에 가장 통상적으로 사용되는 항체인 IgG1 유형 항체는 각 CH2 도메인에서 Asn297에 보존된 N-연결된 당화 부위를 갖는 당단백질이다. Asn297에 부착된 2개의 복합 바이안테너리 올리고사카라이드는 CH2 도메인 사이에 매립되어 폴리펩타이드 주쇄와 광범위한 접촉을 형성하고, 이들의 존재는 항체가 항체 의존성 세포독성(ADCC) 같은 효과기 작용을 매개하는데 필수적이다(문헌[Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822]; 문헌[Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76]; 문헌[Wright, A. and Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32]).
이분된 올리고사카라이드의 형성을 촉매화하는 글리코실전달효소인 β(1,4)-N-아세틸글루코스아민일전달효소 III("GnTIII7y")의 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서의 과발현이 조작된 CHO 세포에 의해 생성되는 항신경아세포종 키메라 단클론성 항체(chCE7)의 시험관내 ADCC 활성을 상당히 증가시킨다는 것은 이미 제시되어 있다(문헌[Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180]; 및 국제 특허출원공개 제99/154342호 참조, 이들 문헌의 전체 내용은 본원에 참고로 혼입됨). 항체 chCE7은 높은 종양 친화력 및 특이성을 갖지만 GnTIII 효소가 결핍된 표준 공업용 세포주에서 생산되는 경우 효력이 너무 작아서 임상적으로 유용하지 못한 컨주케이트화되지 않은 단클론성 항체의 대 부류에 속한다(문헌[Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180]). 이 연구는 항체를 조작하여 GnTIII을 발현하는 세포를 생산함으로써(이는 또한 이분된 비-푸코실화된 올리고사카라이드를 비롯하여 불변성 영역(Fc)-결합된 이분된 올리고사카라이드의 비율을 천연-발생 항체에서 발견되는 수준보다 높게 증가시켰음) ADCC 활성을 크게 증가시킬 수 있음을 보여준 첫 연구였다.
본원에서 사용된 용어 "암"은, 하기 암 중 임의의 것의 불응성 형태 또는 하기 암 중 하나 이상의 조합을 비롯하여, 림프종, 림프성 백혈병, 폐암, 비-소세포 폐암(NSCL), 기관지 폐포 세포 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부의 암, 위암, 위장관암, 결장암, 유방암, 자궁암, 난관암, 자궁내막암, 자궁경부암, 질암, 음문암, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신세포암, 신우암, 중피종, 간암, 담관암, 중추신경계(CNS)의 종양, 척추 종양, 뇌간 교세포종, 다형성 교모세포종, 성상세포종, 신경초종, 상의세포종, 수모세포종, 뇌수막종, 편평세포암종, 뇌하수체 선종을 포함한다. 일 양태에서, 용어 "암"은 CD20 발현 암을 지칭한다.
용어 "CD20의 발현" 항원은 각각 종양 또는 암, 바람직하게는 비-고형암으로부터의 세포, 바람직하게는 T- 또는 B-세포, 더욱 바람직하게는 B-세포의 세포 표면 상에서 CD20 항원의 상당한 발현 수준을 나타내고자 한다. 당업계에 공지되어 있는 표준 검정에 의해 "CD20 발현 암" 환자를 결정할 수 있다. 예를 들면, 면역조직화학(IHC) 검출, FACS를 이용하여 또는 상응하는 mRNA의 PCR-계 검출을 통해, CD20 항원 발현을 측정할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "CD20 발현 암"은 암세포가 CD20 항원의 발현을 나타내는 모든 암을 나타낸다. 바람직하게는 본원에 사용되는 CD20 발현 암은 림프종(바람직하게는 B-세포 비-호지킨 림프종(NHL)) 및 림프성 백혈병을 지칭한다. 이러한 림프종 및 림프성 백혈병은, 예를 들어 a) 소낭성 림프종, b) 비-분할성 소세포 림프종/버킷(Burkitt) 림프종(풍토성 버킷 림프종, 산발성 버킷 림프종 및 비-버킷 림프종 포함), c) 변연부 림프종(결절외 변연부 B 세포 림프종(점막-결합 림프 조직 림프종, MALT), 결절 변연부 B 세포 림프종 및 비장 변연부 림프종 포함), d) 맨틀세포 림프종(MCL), e) 대세포 림프종(B-세포 미만성 대세포 림프종(DLCL), 미만성 혼합 세포 림프종, 면역모세포 림프종, 종격동 B-세포 림프종, 혈관 중심성 림프종-폐 B-세포 림프종), f) 모발상 세포 백혈병, g) 림프구성 림프종, 발덴스트롬(waldenstrom) 거대글로불린혈증, h) 급성 림프성 백혈병(ALL), 만성 림프성 백혈병(CLL)/소림프구성 림프종(SLL), B-세포 전림프성 백혈병, i) 형질세포 종양, 형질세포 골수종, 다발성 골수종, 형질세포종, j) 호지킨병을 포함한다.
일 양태에서, CD20 발현 암은 B-세포 비-호지킨 림프종(NHL)이다. 다른 양태에서, CD20 발현 암은 맨틀세포 림프종(MCL), 급성 림프성 백혈병(ALL), 만성 림프성 백혈병(CLL), B-세포 미만성 대세포 림프종(DLCL), 버킷 림프종, 모발상 세포 백혈병, 소낭성 림프종, 다발성 골수종, 변연부 림프종, 이식 후 림프 증식성 질환(PTLD), HIV 관련 림프종, 발덴스트롬 거대글로불린혈증 또는 원발성 CNS 림프종이다.
용어 "치료 방법" 또는 그의 등가 용어는, 예컨대 암에 적용되는 경우, 환자에서 암 세포의 수를 감소시키거나 제거하도록, 또는 암의 증상을 경감시키도록 고안된 절차 또는 행위의 과정을 지칭한다. 암 또는 다른 증식성 질환의 "치료 방법"은 반드시 암 세포 또는 다른 질환이 실제로 제거되거나, 세포 또는 질환의 수가 실제로 감소되거나, 암 또는 다른 질환의 증상이 실제로 경감됨을 의미하지는 않는다. 종종, 성공 가능성이 낮은 경우에라도, 환자의 병력 및 추정되는 생존 기대를 고려하여 그럼에도 불구하고 전체적으로 유리한 행위의 과정을 유도해내는 것으로 보이는 암 치료 방법을 수행하게 된다.
용어 "공동-투여" 또는 "공동으로 투여하는"은 상기 어푸코실화된 항-CD20, 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체를 2개의 별개의 제형으로서(또는 하나의 단일 제형으로서) 투여함을 지칭한다. 공동-투여는 동시일 수 있거나 아무 순서대로나 연속적일 수 있고, 바람직하게는 두(또는 모든) 활성 제제가 동시에 그들의 생물학적 활성을 발휘하는 기간이 존재한다. 상기 항-CD20 어푸코실화된 항체 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 동시에 또는 연속적으로 공동-투여된다(예를 들어, 연속 주입(하나는 항-CD20 항체용, 마지막으로 하나는 상기 CD79b 항체-약물 접합체용)을 통해 정맥내(i.v.)로; 또는 예를 들어 항-CD20 항체는 연속 주입을 통해 정맥내(i.v.)로 투여되고 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 경구로 투여됨). 두 치료제를 순차적으로 공동-투여하는 경우, 같은 날에 2회의 별도 투여로 투약량을 투여하거나, 제제 중 하나는 제1일에 투여하고 두번째 제제는 제2일 내지 제7일, 바람직하게는 제2일 내지 제4일에 공동-투여한다. 따라서, 용어 "순차적으로"는 첫번째 성분(항-CD20 항체 또는 CD79b 항체-약물 접합체)을 투여한 후 7일 이내, 바람직하게는 첫번째 성분을 투여한 후 4일 이내를 의미하고; 용어 "동시에"는 동일한 시간을 의미한다. 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체의 유지 투약량과 관련하여 용어 "공동-투여"는 치료 주기가 두 약물 모두에게 적절한 경우, 유지 투약량을 동시에, 예컨대 매주 공동-투여할 수 있음을 의미한다. 또는, CD79b 항체-약물 접합체를, 예를 들어 매 1일 내지 3일에 투여하고, 상기 어푸코실화된 항체를 매주 투여한다. 또는 유지 투약량을 1일 이내 또는 7일 이내에 순차적으로 공동-투여한다.
연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의가 추구하는 조직, 계통, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어내는 개별 화합물 또는 조합물의 양인 "치료 효과량"(또는 간단히 "효과량")으로 항체를 환자에게 투여하는 것은 자명하다.
상기 항-CD20 어푸코실화된 항체 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체의 공동-투여량 및 공동-투여의 시간은 치료되는 환자의 유형(종, 성별, 연령, 체중 등) 및 상태, 및 치료되는 질병 또는 질환의 중증도에 따라 달라질 것이다. 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 CD79b 항체-약물 접합체는 1회로 또는 일련의 치료(예를 들어, 동일한 날 또는 다음 날)에 걸쳐 환자에게 적합하게 공동-투여된다.
투여가 정맥내 투여인 경우, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 또는 상기 CD79b 항체-약물 접합체의 최초 주입 시간은 후속 주입 시간보다 더 길 수 있고, 예를 들면, 최초 주입의 경우 약 90분이고, (최초 주입시 내약성이 우수하면) 후속 주입의 경우 약 30분이다.
질병의 유형 및 중증도에 따라, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체의 약 0.1 mg/kg 내지 50 mg/kg(예를 들어, 0.1 내지 20 mg/kg); 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체의 1 ㎍/kg 내지 50 mg/kg(예를 들어, 0.1 내지 20 mg/kg)이 환자에 대한 두 약물의 공동-투여를 위한 초기 후보 투여량이다. 일 양태에서, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체)의 바람직한 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 30 mg/kg의 범위일 것이다. 이와 같이, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, lO mg/kg 또는 30 mg/kg(또는 이들의 임의의 조합) 중 하나 이상의 투약량을 환자에게 공동-투여할 수 있다. 일 양태에서 상기 CD79b 항체-약물 접합체의 바람직한 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 30 mg/kg의 범위일 것이다. 이와 같이, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, lO mg/kg 또는 30 mg/kg(또는 이들의 임의의 조합) 중 하나 이상의 투약량을 환자에게 공동-투여할 수 있다.
이들 암을 치료하기 위해, 일 양태에서, 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 상기 언급된 바와 같이, 정맥내 주입을 경유하여 투여된다. 주입을 경유하여 투여되는 투여량은 투약 당 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 10,000 ㎍/㎡의 범위이고, 일반적으로 총 1, 2, 3 또는 4회 투약의 경우 1주당 1회 투약량이다. 다르게는, 투여량 범위는 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 1000 ㎍/㎡, 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 800 ㎍/㎡, 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 600 ㎍/㎡, 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 400 ㎍/㎡, 약 10 ㎍/㎡ 내지 약 500 ㎍/㎡, 약 10 ㎍/㎡ 내지 약 300 ㎍/㎡, 약 10 ㎍/㎡ 내지 약 200 ㎍/㎡, 및 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 200 ㎍/㎡이다. 투약량은 질병의 증후를 완화 또는 경감시키기 위해 1일 1회, 1주 1회, 1주 다수 회이지만 1일 1회 미만, 1개월 다수 회이지만 1일 1회 미만, 1개월 다수 회이지만 1주 1회 미만, 1개월 1회 또는 간헐적으로 투여될 수 있다. 투여는 림프종의 종양 또는 증후가 진정되거나 백혈병이 치료될 때까지 개시된 임의의 간격으로 지속될 수 있다. 투여는 증후의 진정 또는 완화가 달성된 이후에 지속될 수 있는데, 이때 이러한 진정 또는 완화는 이러한 지속된 투여에 의해 연장된다.
환자의 유형(종, 성별, 연령, 체중 등) 및 상태, 및 어푸코실화된 항-CD20 항체의 유형에 따라, 상기 어푸코실화된 항-CD 항체의 투여량 및 투여 스케쥴이 상기 CD79b 항체-약물 접합체에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는, 예를 들어 매 1주 내지 3주마다 투여될 수 있고, 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 매일 또는 매 2일 내지 10일마다 투여될 수 있다. 더 높은 투약량으로 시작한 후, 하나 이상의 더 낮은 투여량이 투약될 수도 있다.
일 양태에서, 본 발명에 따른 상기 CD79b 항체-약물 접합체와 조합되는 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체)의 바람직한 투여량은 3주- 내지 6주-투여-주기의 제1일, 제8일, 제15일에 800 내지 1600 mg(일 양태에서 800 내지 1200 mg), 이어서 9회 이하의 3주- 내지 4주-투여-주기의 제1일에 400 내지 1200 mg(일 양태에서 800 내지 1200 mg)일 것이다. 가장 바람직하게는, 투약량은 3-주 투여 스케쥴에서 일정한 투약량 1000 mg이고, 제2주에서 1000 mg의 일정한 투약량의 추가의 주기가 가능하다.
역시 또 다른 양태에서, 본 발명에 따른 어푸코실화된 항-CD20 항체와 조합되는 상기 CD79b 항체-약물 접합체의 투약량은 3-주-투여 스케쥴에서 약 1.5 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 바람직하게는 약 1.7 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 가장 바람직하게는 약 1.8 mg/kg 또는 약 2.4 mg/kg이다. 상기 가장 바람직한 투여량은 CD79b 항체-약물 접합체 단일요법에 대해 상 2 실험에서 현재 시험되고 있다.
역시 또 다른 양태에서, 본 발명에 따른 상기 CD79b 항체-약물 접합체와 조합되는 어푸코실화된 항-CD20 항체의 투약량은 제1일(제 1주기의 제1일(C1D1))에 약 1000 mg의 일정한 투약량, 제8일(C1D8)에 약 1000 mg의 또 다른 일정한 투약량 및 제15일(C1D15)에 약 1000 mg의 또 다른 일정한 투약량이고, 이후 매 3주 마다 약 1000 mg의 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체(제 2주기)의 6회 이상의 일정한 투약량이 수반된다: 제22일(C2D1), 제43일(C2D2), 제64일(C2D3), 제85일(C2D4), 제106일(C2D5), 및 제127일(C2D6). 상기 양태에서, 본 발명에 따른 어푸코실화된 항-CD20 항체와 조합되는 CD79b 항체-약물 접합체의 투약량은 매 3주 마다 약 2.4 mg/kg 또는 다르게는 매 3주 마다 1.8 mg/kg이다. 상기 양태에서, 본 발명에 따른 어푸코실화된 항-CD20 항체와 조합되는 상기 CD79b 항체-약물 접합체의 투약은 제1일(C1D1), 제22일(C2D1), 제43일(C2D2), 제64일(C2D3), 제85일(C2D4), 제106일(C2D5), 및 제127일(C2D6)이다.
바람직하게는, 상기 기재된 바와 같은 상기 투여량 섭생에서, 어푸코실화된 항-CD20 항체는 오비누투주맙 또는 GA101이다. 또한 바람직하게는, 상기 기재된 바와 같은 상기 투여량 섭생에서, 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이다.
본 발명은 자가면역 질환을 앓는 환자에게 치료 효과량의 본원에 개시된 바와 같은 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 선행 양태중 임의의 인간화된 huMA796.v28 항체-약물 접합체를 투여함을 포함하는, 자가면역 질환을 경감시키는 방법을 제공한다. 바람직한 양태에서, 항체는 정맥내로 또는 피하로 투여된다. 항체-약물 접합체는 정맥내로 1 ㎍/㎡ 내지 약 100 mg/㎡ 범위의 투여량으로 투여되고, 하나의 특정 양태에서, 투여량은 1 ㎍/㎡ 내지 약 500 ㎍/㎡이다. 투약량은 질병의 증후를 완화 또는 경감시키기 위해 1일 1회, 1주 1회, 1주 다수 회이지만 1일 1회 미만, 1개월 다수 회이지만 1일 1회 미만, 1개월 다수 회이지만 1주 1회 미만, 1개월 1회 또는 간헐적으로 투여될 수 있다. 투여는 치료될 자가면역 질환의 증후의 완화 또는 경감이 달성될 때까지 개시된 임의의 간격으로 지속될 수 있다. 투여는 증후의 완화 또는 경감 달성된 이후에 지속될 수 있는데, 이때 이러한 경감 또는 완화는 이러한 지속된 투여에 의해 연장된다.
본 발명은 또한 B 세포 질병, 예컨대 B 세포 증식 질병(제한없이 림프종 및 백혈병 포함) 또는 자가면역 질환을 앓는 환자에게 치료 효과량의 본원에 개시된 바와 같은 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 선행 양태중 임의의 인간화된 huMA796.v28 항체(이 항체는 세포독성 분자 또는 탐침가능한 분자에 접합되지 않음)를 투여함을 포함하는, B 세포 질병을 치료하는 방법을 제공한다. 항체는 전형적으로 약 1 ㎍/㎡ 내지 약 1000 mg/㎡의 투여량 범위로 투여될 것이다.
권고된 투약량은 화학요법제가 추가로 공동투여될 것인지의 여부 및 화학요법제의 유형에 기초하여 달라질 수 있다.
일 양태에서, 약제는 암, 바람직하게는 CD20 발현 암을 앓는 환자에서 전이 또는 추가적인 전파를 예방하거나 감소시키는데 유용하다. 약제는 이러한 환자의 생존 기간을 증가시키고, 이러한 환자의 무진행 생존을 증가시키고, 응답 기간을 증가시켜, 생존 기간, 무진행 생존, 응답 속도 또는 응답 기간에 의해 측정되는 치료되는 환자의 통계학적으로 유의하고 임상적으로 의미있는 개선을 야기하는데 유용하다. 바람직한 양태에서, 약제는 일군의 환자에서 응답 속도를 증가시키는데 유용하다.
본 발명의 맥락에서, 추가의 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물(예컨대, 사이토카인)을 암의 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체 병용 요법에 사용할 수 있다. 이러한 분자는 의도되는 목적에 효과적인 양으로 조합물에 적합하게 존재한다. 일 양태에서, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체 병용 요법을 이러한 추가적인 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 없이 사용한다.
이러한 제제는, 예를 들어 사이클로포스파마이드(CTX; 예컨대 사이톡산(cytoxan: 등록상표)), 클로람부실(CHL; 예를 들어, 류케란(leukeran: 등록상표)), 시스플라틴(CisP; 예를 들어, 플라티놀(platinol: 등록상표)), 부설판(예를 들어, 마일레란(myleran: 등록상표)), 멜팔란, 카무스틴(BCNU), 스트렙토조토신, 트라이에틸렌멜라민(TEM), 미토마이신 C 등과 같은 알킬화제 또는 알킬화 작용을 갖는 제제; 메토트렉세이트(MTX), 에토포사이드(VP16; 예를 들어, 베페시드(vepesid: 등록상표)), 6-머캅토퓨린(6MP), 6-티옥구아닌(6TG), 사이타라빈(Ara-C), 5-플루오로우라실(5-FU), 카페시타빈(예를 들어, 젤로다(Xeloda: 등록상표)), 다카바진(DTIC) 등과 같은 대사길항물질; 액티노마이신 D, 독소루비신(DXR; 예컨대, 아드리아마이신(adriamycin: 등록상표)), 다우노루비신(다우노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 등과 같은 항생제; 빈크리스틴(VCR), 빈블라스틴 등과 같은 빈카 알칼로이드 등의 알칼로이드; 및 파클리탁셀(예를 들어, 탁솔(taxol: 등록상표)) 및 파클리탁셀 유도체, 세포정지제, 덱사메타손(DEX; 예컨대, 데카드론(decadron: 등록상표)) 같은 글루코코르티코이드, 및 프레드니손 같은 코르티코스테로이드, 하이드록시우레아 같은 뉴클레오사이드 효소 저해제, 아스파라기나제 같은 아미노산 결핍 효소, 류코보린 및 다른 엽산 유도체, 및 유사한 다양한 항종양제 등의 다른 항종양제를 포함한다. 하기 제제를 또한 추가적인 제제로서 사용할 수 있다: 아니포스틴(예를 들어, 에티올(ethyol: 등록상표)), 닥티노마이신, 메클로레타민(질소 머스타드), 스트렙토조신, 사이클로포스파마이드, 로무스틴(CCNU), 독소루비신 리포(예를 들어, 독실(doxil: 등록상표)), 겜시타빈(예를 들어, 겜자(gemzar: 등록상표)), 다우노루비신 리포(예컨대, 다우녹솜(daunoxome: 등록상표)), 프로카바진, 미토마이신, 도세탁셀(예컨대, 탁소테레(taxotere: 등록상표)), 알데스류킨, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 클라드리빈, 캄프토테신, CPT 11(이리노테칸), 10-하이드록시 7-에틸-캄프토테신(SN38), 플록수리딘, 플루다라빈, 이포스파마이드, 이다루비신, 메스나, 인터페론 베타, 인터페론 알파, 미토잔트론, 토포테칸, 류프롤라이드, 메게스트롤, 멜팔란, 머캅토퓨린, 플리카마이신, 미토테인, 페가스파가스, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 타목시펜, 테니포사이드, 테스톨락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 클로람부실. 일 양태에서, 이러한 추가적인 제제 없이 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체 병용 요법을 사용한다.
화학치료 섭생에 상기 기재된 세포독성제 및 항암제뿐만 아니라, 단백질 키나제 저해제 같은 항증식성 표적-특이적 항암 약물을 사용하는 것은 일반적으로 암 치료 분야에서 잘 특징화되어 있고, 본원에서의 이들의 사용은 내약성 및 효율을 모니터링하고, 투여 경로 및 투여량을 제어하기 위하여 약간의 조정하에 동일한 고려사항 하에 놓인다. 예를 들면, 세포독성제의 실제 투여량은 조직 배양 방법을 이용함으로써 결정되는 환자의 배양된 세포 응답에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 투여량은 추가적인 다른 제제의 부재하에 사용되는 양에 비해 감소될 것이다.
효과적인 세포독성제의 전형적인 투여량은 제조업체에서 권장되는 범위일 수 있고; 시험관내 응답 또는 동물 모델에서의 응답에 의해 표시되는 경우, 농도 또는 양의 크기의 약 10배 이하로 감소될 수 있다. 따라서, 실제 투여량은 의사의 판단, 환자의 상태, 및 초대 배양된 악성 세포 또는 조직 배양된 조직 샘플의 시험관내 응답, 또는 적절한 동물 모델에서 관찰되는 응답에 기초하는 치료 방법의 효율에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 맥락에서, CD20 발현 암의 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체 병용 요법에 더하여 효과량의 이온화 방사선을 실시할 수 있고/있거나 방사성 의약품을 사용할 수 있다. 방사선의 공급원은 치료되는 환자에 대해 외부적이거나 내부적일 수 있다. 공급원이 환자에 대해 외부적인 경우, 이 요법은 외부 빔 조사 요법(EBRT)으로서 알려진다. 방사선의 공급원이 환자에 대해 내부적인 경우, 이 치료는 근접치료(BT)로 불린다. 본 발명과 관련하여 사용하기 위한 방사성 원자는, 제한되지 않지만, 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리슘-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 요오드-123, 요오드-131 및 인듐-111을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 항체를 이러한 방사성 동위원소로 표지화하는 것도 가능하다. 일 양태에서, 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체 병용 요법은 이러한 이온화 방사선 없이 이용된다.
방사선 요법은 절제 또는 수술이 불가능한 종양 및/또는 종양 전이를 제어하기 위한 표준 치료이다. 방사선 요법이 화학요법과 조합되면 개선된 결과가 나타난다. 방사선 요법은 표적 구역에 전달되는 고-선량 방사선이 종양 조직 및 정상 조직 둘 다에 있는 생식 세포의 사멸을 야기하는 원리에 기초한다. 방사선 투여 섭생은 일반적으로 방사선 흡수 선량(Gy), 시간 및 분별화에 관해 정의되고, 종양학자에 의해 조심스럽게 규정되어야 한다. 환자가 받아들이는 방사선의 양은 다양한 고려사항에 따라 달라지지만, 두 가지 가장 중요한 것은 신체의 다른 중요한 구조 또는 기관과 관련한 종양의 위치, 및 종양이 퍼진 정도이다. 방사선 요법을 받고 있는 환자에게 전형적인 치료 과정은 1주당 5일간 약 1.8 내지 2.0 Gy의 단일 1일 분율로 환자에게 투여되는 10 내지 80 Gy의 총 선량으로, 1 내지 6주의 기간에 걸친 치료 스케쥴이다. 본 발명의 바람직한 일 양태에서, 인간 환자의 종양을 본 발명의 병용 요법 및 방사선으로 치료할 경우 상승작용이 있다. 달리 말해, 임의적으로는 추가적인 화학요법제 또는 항암제와 함께 방사선과 조합될 때, 본 발명의 조합물을 포함하는 제제에 의한 종양 성장의 저해가 향상된다. 보조적인 방사선 요법의 매개변수는, 예컨대 국제 특허출원공개 제99/60023호에 포함되어 있다.
본 발명에 따른 어푸코실화된 항-CD20 항체 및/또는 항-CD79b 항체-약물-접합체는 공지된 방법에 따라, 볼루스(bolus)로서 정맥내 투여함으로써, 또는 일정 기간에 걸친 연속적인 주입으로서, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활막내 또는 척추강내 경로에 의해 환자에게 투여될 수 있다. 일 양태에서, 항체의 투여는 정맥내 또는 피하 투여이다.
본원에 사용되는 "약학적으로 허용가능한 담체"는 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제, 항진균제, 등장화제, 흡수 지연제, 및 약학 투여와 상용성인 다른 물질 및 화합물을 비롯하여, 약학 투여와 상용성인 임의의 모든 물질을 포함하고자 한다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 활성 화합물과 상용성이 아닌 경우를 제외하고는 본 발명의 조성물에서 이들의 사용이 고려된다. 보충적인 활성 화합물이 또한 조성물에 혼입될 수 있다.
약학 조성물
본 발명에 따른 항-CD20 항체 및/또는 CD79b 항체-약물 접합체를 약학적으로 허용가능한 무기 또는 유기 담체와 함께 가공함으로써 약학 조성물을 수득할 수 있다. 락토즈, 옥수수 전분 또는 그의 유도체, 활석, 스테아르산 또는 그의 염 등이, 예컨대 정제, 코팅된 정제, 당의정 및 경질 젤라틴 캡슐용 담체로서 사용될 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐에 적합한 담체는, 예를 들어 식물성 오일, 왁스, 지방, 반고체 및 액체 폴리올 등이다. 그러나, 활성 성분의 성질에 따라, 연질 젤라틴 캡슐의 경우에는 담체가 대체적으로 필요하지 않다. 용액 및 시럽의 생산에 적합한 담체는, 예를 들어 물, 폴리올, 글리세롤, 식물유 등이다. 좌약에 적합한 담체는, 예를 들면 천연 또는 경화된 오일, 왁스, 지방, 반고체 또는 액체 폴리올 등이다.
약학 조성물은 또한 보존제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 향미제, 삼투압을 변화시키기 위한 염, 완충제, 마스킹제 또는 산화방지제를 함유할 수 있다. 이들은 또한 다른 치료 면에서 가치있는 성분도 함유할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 조성물은 암, 특히 CD20 발현 암(바람직하게는 림프종 또는 림프성 백혈병, 예를 들어 B 세포 비-호지킨 림프종(NHL))의 치료에 사용하기 위하여, 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는 상기 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체) 및 상기 CD79b 항체-약물 접합체 둘 다를 포함한다.
상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명은 (i) 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체)의 제1 효과량, 및 (ii) CD79b 항체-약물 접합체의 제2 효과량을 포함하는, 예컨대 암에 사용하기 위한 약학 조성물을 추가로 제공한다. 이러한 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 부형제를 임의적으로 포함한다.
본 발명에 따라 사용되는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 단독으로 포함하는 약학 조성물은, 임의적인 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제(문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)])와 목적하는 순도를 갖는 항체를 동결 건조된 제형 또는 수용액 형태로 혼합함으로써 저장을 위해 제조된다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수여자에게 비독성이고, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 산화방지제; 보존제(예를 들어, 옥타데실다이메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤 등의 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신 같은 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 모노사카라이드, 다이사카라이드 및 다른 탄수화물; EDTA 같은 킬레이트화제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨 같은 당; 나트륨 같은 염-형성 대이온; 금속 착체(예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 트윈(TWEEN: 상표), 플루로닉스(PLURONICS: 상표) 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.
CD79b 항체-약물 접합체의 약학 조성물은 어푸코실화된 항-CD20 항체에 대해 상기 기재된 조성물과 유사할 수 있다.
소 분자 CD79b 항체-약물 접합체의 약학 조성물은 경구, 비측, 국부(구강 및 설하 포함), 직장, 질 및/또는 비경구 투여에 적합한 조성물을 포함한다. 조성물은 편리하게는 단위 투여형으로 제공될 수 있고, 약학 분야에 널리 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투여형을 생산하기 위한 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 구성성분의 양은 치료되는 숙주뿐만 아니라 특별한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 단일 투여형을 생산하기 위한 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 구성성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 생산하는 화학식 I의 화합물의 양일 것이다. 일반적으로, 100%중, 이러한 양은 활성 구성성분의 약 1% 내지 약 99%, 바람직하게는 약 5% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 10% 내지 약 30%의 범위일 것이다. 이들 조성물을 제조하는 방법은 CD79b 항체-약물 접합체, 및 임의적으로, 하나 이상의 부속 구성성분을 담체와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, CD79b 항체-약물 접합체의 약학 조성물은 CD79b 항체-약물 접합체를 액체 담체, 또는 미분된 고체 담체, 또는 이들 둘 다와 균일하고 친밀하게 회합시키고, 이어서 필요하다면, 생성물을 성형함으로써 제조된다. 경구 투여에 적합한 조성물은 캡슐, 약포(cachet), 향낭(sachet), 환제, 정제, 로젠지(lozenge)(착향 베이스, 대체적으로 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트 사용), 분말, 과립의 형태, 또는 수성 또는 비수성 액체중의 용액 또는 현탁액, 또는 수중유적형 또는 유중수적형 액체 현탁액, 또는 엘릭시르(elixir) 또는 시럽, 또는 캔디류(pastille)(불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아 사용), 및/또는 구강 세정제 등일 수 있고, 각각은 활성 구성성분으로서 본 발명의 화합물의 예정된 양을 함유한다. 본 발명의 화합물은 또한 볼루스, 연약(electuary) 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
본 발명의 추가의 양태에서, 어푸코실화된 항-CD20 항체 및 CD79b 항체-약물 접합체는 2개의 별도의 약학 조성물로 제형화된다.
또한, 활성 성분은, 예를 들면 코아세르베이션 기법에 의해 또는 상이한 종 간(interracial) 중합에 의해 제조된 미소캡슐, 예를 들면 각각 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-미소캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 미소캡슐내에, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구, 미소유화액, 나노입자 및 나노캡슐)내에, 또는 거대유화액내에 포획될 수 있다. 이러한 기법은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980)]에 개시되어 있다.
서방성 제제를 제조할 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 미소캡슐의 형태이다. 서방성 매트릭스의 예는 폴리에스터, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락티드(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 루프론 디포(LUPRON DEPOT: 상표)(락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사가능한 미소구)와 같은 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다.
생체내 투여에 사용되는 제형은 멸균되어야 한다. 이는 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.
일 양태는 Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스의 양으로 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체, 및 본원에 개시된 바와 같은 CD79b 항체-약물 접합체를 포함하는, 암을 치료하기 위한 조성물이다.
본 발명은 (i) 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체(바람직하게는 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체)의 제1 효과량; 및 (ii) CD79b 항체-약물 접합체의 제2 효과량을 암의 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하는, 암의 치료 방법을 추가로 제공한다.
일 양태에서, 푸코스 양은 40% 내지 60%이다.
바람직하게는, 상기 암은 CD20 발현 암이다.
바람직하게는, 상기 CD20 발현 암은 림프종 또는 림프성 백혈병이다.
바람직하게는, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는 유형 II 항-CD20 항체이다.
바람직하게는, 상기 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이다. 바람직하게는, 상기 인간화된 B-Ly1 항체는 오비누투주맙이다.
바람직하게는, 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이다. 바람직하게는, 이러한 CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체는 huMA79b.v28이다.
가장 바람직하게는, 상기 항-CD20 항체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE인 상기 CD79b 항체-약물 접합체와 조합된 오비누투주맙이다.
바람직하게는, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이고, 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이며, 상기 암은 CD20 발현 암, 바람직하게는 림프종 또는 림프성 백혈병이다.
본원에서 사용된 용어 "환자"는 바람직하게는 임의의 목적을 위해 어푸코실화된 항-CD20 항체로 치료될 필요가 있는 인간(예를 들어, CD20 발현 암을 앓는 환자), 더욱 바람직하게는 암, 또는 전암 상태 또는 병변을 치료하기 위하여 이러한 치료를 받을 필요가 있는 인간을 지칭한다. 그러나, 용어 "환자"는 또한 인간이 아닌 동물, 바람직하게는 특히 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 양 및 인간 이외의 영장류와 같은 포유동물도 지칭할 수 있다.
본 발명은 암을 치료하는데 사용하기 위한, 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체, 및 CD79b 항체-약물 접합체를 추가로 포함한다.
바람직하게는, 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이다.
바람직하게는, 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 본 발명에 따른 방법의 일 양태에 존재하고, CD79b 항체-약물 접합체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이다. 바람직하게는, 이러한 CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체는 huMA79b.v28이다.
바람직하게는 상기 어푸코실화된 항-CD20 항체는 인간화된 B-Ly1 항체이고, 상기 CD79b 항체-약물 접합체는 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE이다. 가장 바람직하게는, 이러한 CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체는 huMA79b.v28이다.
바람직하게는, 상기 암은 CD20 발현 암, 바람직하게는 림프종 또는 림프성 백혈병이다.
본 발명의 이해를 돕기 위하여 하기 실시예 및 도면이 제공되고, 본 발명의 진정한 범주는 첨부된 특허청구범위에 제시된다. 본 발명의 취지로부터 벗어나지 않으면서 제시된 절차를 변형할 수 있는 것으로 이해된다.
실험 절차
실시예 1 - CD79b 항체 약물 접합체
BJAB-루시퍼라아제(Luciferase)(버킷 림프종) 이종이식편
생체내 종양 세포 사멸 검정
A. 이종이식편 - DM1 접합체
HVR-L2 및 HVR-H3(huMA79b L2/H3)에서 변화를 갖는 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체의 IgG 변이체의 효능을 시험하기 위해, huMA79b L2/H3 변이체를 DM1에 접합하고, 마우스의 종양에 대한 접합된 변이체의 효과를 분석하였다.
구체적으로, 다중 이종이식편 모델, 예컨대 RAMOS 세포, BJAB 세포(+(2;8)(p112;q24)(IGK-MYC) 전좌, 돌연변이된 p53 유전자를 함유하고, 엡스타인-바르 바이러스(EBV: Epstein-Barr virus) 음성인 버킷 림프종 세포주)(문헌[Drexler, H.G., The Leukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book, San Diego: Academic Press, 2001]), 그란타(Granta) 519 세포(t(11;14)(ql3;q32)(BCL1-IGH) 전좌를 함유하여 D1(BCL1)의 과발현을 초래하고, P16INK4B 및 P16INK4A 결실을 함유하며, EBV 양성인 맨틀 세포 림프종 세포주)(문헌[Drexler, H.G., The Leukemia-Lymphoma cell Line Facts Book, San Diego: Academic Press, 2001]), U698M 세포(임파아구성 림프육종 B 세포주)(문헌[Drexler, H.G., The Leukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book, San Diego: Academic Press, 2001]) 및 DoHH2 세포(Ig 중쇄에 의해 유도된 Bcl-2의 과발현을 초래하는 소낭성 림프종 t(14;18)(q32;q21)의 전좌 특징을 함유하고, P16INK4A 결실을 함유하며, t(8;14)(q24;q32)(IGH-MYC) 전좌를 함유하고, EBV 음성인 소낭성 림프종 세포주)(문헌[Drexler, H.G., The Leukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book, San Diego: Academic Press, 2001])에서 종양을 회귀시키는 항체 능력이 검사될 수 있다.
MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체의 효능을 분석하기 위해, 암컷 CB17 ICR SCID 마우스(6 내지 8주령, 미국 캘리포니아주 홀리스터 소재의 찰스 리버스 래버레이토리스(Charles Rivers Laboratories)로부터)에게 2 × 107개의 BJAB-루시퍼라아제 세포 또는 그란타-519 세포를 주사를 통해 CB17 ICR SCID 마우스의 옆구리내로 피하로 접종하고, 이종이식편 종양이 평균 200 ㎟으로 성장하도록 허용하였다. 제0일은, 달리 구체적으로 아래에 지시되지 않는 한, 종양이 평균 200 ㎟이고 치료의 제1/또는 유일한 투약량이 투여되는 경우의 날짜를 지칭한다. 종양 부피는 2개의 치수에 기초하여 계산되고, 캘리퍼(caliper)를 사용하여 측정되며, 다음의 식에 따라서 ㎣으로 표시된다: V= 0.5a × b2, 이때 a 및 b는 각각 종양의 긴 직경 및 짧은 직경이다. 각각의 실험군으로부터 수집된 데이터는 평균±SE로 표시되었다. MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체 또는 대조 항체-약물 접합체에 의해 50 ㎍ 내지 210 ㎍의 항체-연결된 약물/㎡ 마우스(약 1 내지 4 mg/kg 마우스에 상응함)의 단일 정맥내(i.v.) 투약으로 10마리 마우스의 군을 치료하였다. 종양을 실험 전 기간을 통해 1주당 1회 또는 2회 측정하였다. 마우스의 체중을 실험 전 기간을 통해 1주당 1회 또는 2회 측정하였다. 종양 부피가 3000 ㎣에 도달되기 이전에 또는 종양이 임박한 궤양의 징후를 보일 때 마우스를 안락사시켰다. 모든 동물 프로토콜은 동물실험윤리 위원회(IACUC: Institutional Animal Care and Use Committee)에 의해 승인받았다.
사용된 항체 및 독소 사이의 연결기는 DM1의 경우 티오에테르 가교결합제 SMCC였다. 추가의 연결기로는 DM1 또는 MC의 경우 다이설파이드 연결기 SPP 또는 티오에테르 가교결합제 SMCC를, 또는 모노메틸아우리스타틴 E(MMAE) 또는 모노메틸아우리스탄 F(MMAF)의 경우 말레이미드 성분 및 파라-아미노벤질카바모일(PAB) 자가-희생적 성분을 갖는 MC-발린-시트룰린(vc)-PAB(또는 발린-시트룰린(vc) 다이펩타이드 연결기 제제)가 포함된다. 사용된 독소는 DM1이었다. 추가적인 독소로는 MMAE 또는 MMAF가 포함될 수 있다.
이러한 실험을 위한 CD79b 항체로는 2006년 8월 3일자로 출원된 미국 특허출원 제11/462,336호에 기재된 바와 같은 키메라 MA79b(chMA79b) 항체뿐만 아니라, 본원에 기재된 MA79b-그라프팅된 "인간화된" 항체 변이체가 포함된다. 추가적 항체로는 상업적으로 입수가능한 항체가 포함되고, 예컨대 항-CD79b 항체, 및 1993년 7월 20일자로 HB11413으로서 ATCC에 의해 기탁된 하이브리도마로부터 생성된 MA79b 단클론성 항체이다.
B. 이종이식편 -추가의 접합체
음성 대조군은 항-HER2(헤르셉틴(등록상표)(트라스투주맙)) 기제 접합체(SMCC-DM1)를 포함한다. 유사한 연구에서, 실시예 A(상기)에 개시된 바와 같은 동일한 이종이식편 연구 프로토콜을 사용하여, 투여된 약물 접합체 및 투약량을 달리하면서, 추가의 약물 접합체의 효능을 CB17 SCID 마우스에서의 BJAB-루시퍼라아제 이종이식편(버킷 림프종)에서 시험하였다. 약물 접합체 및 투약량(모든 ADC 및 대조군의 경우 제0일째 투여됨)은 아래의 표 3에 제시된다.
대조군 항체는 huMA79b.v28(SMCC-DM1에 접합됨)이었다. 대조군 HC(A118C) thioMAb는 thio hu-항-HER2-HC(A118C) 항체 thioMAb(BMPEO-DM1, MC-MMAF 또는 MCvcPAB-MMAE에 접합됨), thio huMA79b.v28-HC(A118C) thioMAb 또는 thio hu-항-CD79b(10F4v3)-HC(A118C) thioMAb(MC-MMAF에 접합됨)였다. 결과는 아래의 표 3에 제시된다.
thio huMA79b.v28-HC(A118C)-BMPEO-DM1, thio-huMA79b.v28-HC(A118C)-MC-MMAF 및 thio huMA79b.v28-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE thioMAb 약물 접합체의 투여는, 음성 대조군 항체 약물 접합체(thio-hu-항-HER2-HC(A118C)-BMPEO-DM1, thio-hu-항-HER2-HC(A118C)-MC-MMAF 및 thio-hu-항-HER2-HC(A118C)-MCvcPAB-MMAE)와 비교할 경우 종양 성장의 저해를 나타내었다. 다른 대조군은 thio-huMA79b.v28-HC(A118C), huMA79b.v28-SMCC-DM1 및 thio-hu-항-CD79b(10F4v3)-HC(A118C)-MC-MMAF였다.
추가로, 동일한 연구에서, 처음 7일의 체중 변화율을 각각의 투여군으로부터 결정하였다. 그 결과, 이들 thioMAb 약물 접합체의 투여는 상기 기간 동안 유의적인 체중 감소율(%) 또는 감량을 일으키지 않았다.
또한 추가로, 표 3에서, PR = 부분적 회귀(이때 투여 후 임의의 시점에서의 종양 부피는 제0일째 측정된 종양 부피의 50% 미만으로 떨어짐) 또는 CR = 완전한 차도(Complete Remission)(이때 투여 후 임의의 시점에서의 종양 부피는 0 ㎣으로 떨어짐)를 보여주는, 시험된 총 수중의 마우스의 수가 지시되고, NA = 적용불가능이다(DAR = 약물 대 항체 비).
[표 3]
CB17 SCID 마우스에서 BJAB-루시퍼라아제 이종이식편에서의 Thio HuMA79b.v28-HC(A118C) MMAE, MMAF 및 DM1 접합체 투여에 의한 생체내 종양 부피 감소
Figure pct00023
실시예 2 - GA101과 CD79b 항체 약물 접합체의 조합물
실험 파트는 CD79b 항체 약물 접합체 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE와 조합되는 GA101(본원에 정의된 바와 같은 오비누투주맙)에 관한 것이고, 이때 이러한 CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체는 huMA79b.v28이다. 이러한 CD79b 항체 약물 접합체는 본원에서 "CD79b-ADC"로 지칭된다. 본 연구의 주요 목적은, GA101에 의한 단일 제제 요법, 리툭시맙에 의한 단일 제제 요법 및 리툭시맙과 CD79b-ADC의 조합물과 비교하여, SCID 베이지 마우스에서 미만성 Z138 맨틀 세포 림프종(MCL) 이종이식편 모델에서의 CD79b-ADC와 조합된 GA101의 효과를 조사하는 것이다. 연구 고안은 표 4에 표시된다.
[표 4]
연구 고안
Figure pct00024
세포 배양액 및 세포 적용
Z138 인간 맨틀 세포 림프종(MCL) 세포를 처음에는 마틴 다이어(Martin Dyer)로부터 수득하였고, 팽창 후 글라이카트(Glycart) 내부 세포 은행에 기탁하였다. 종양 세포주를 37℃에서 수-포화된 대기 중에서 5% C02 하에 10% FCS(깁코(Gibco))가 함유된 DMEM에서 일상적으로 배양시켰다. 96.4%의 생존율로 이식을 위해 26회의 계대배양을 사용하였다. 동물당 10 × 106개 세포를 200 ㎕의 에임(Aim) V 세포 배양 배지(깁코) 중에서 꼬리 정맥내로 정맥내 주사하였다. CD20 및 CD79b의 발현을 FACS에 의해 Z138 MCL 세포 상에서 확인하였다. 이러한 목적을 위해, 0.2 미오(Mio) 세포를 항-인간 CD20 PE(비디 바이오사이언스 #555623), 항-인간 CD79b-PE(비디 바이오사이언스 #555679) 또는 이소타입 대조 마우스 IgG1(비디 바이오사이언스 #555749) 또는 마우스 IgG2b(비디 바이오사이언스 #555743)에 의해 3중으로 염색하였다. 평균 형광도를, FACS 칸토(Canto)II(소프트웨어 FACS 디바(Diva))에서 플레이트 프로토콜을 사용하여 측정하였다.
동물
실험 시작시 7 내지 8주령의, 62마리의 SCID 베이지 암컷 마우스(타코닉(Taconic)으로부터 구입함; 덴마크 소재)를, 약속된 지침(GV-솔라스(Solas); 펠라사(Felasa); 티에르쉬그(TierschG))에 따라서 12시간의 명/12시간의 암의 1일 주기로 특정-병원균-부재 조건하에 유지시켰다. 실험 연구 프로토콜은 지역 수의센터, 허가 번호 P2008016에 의해 검토되고 승인되었다. 도착 후, 동물들이 1주일 동안 새로운 환경 및 관찰에 적응하도록 유지시켰다. 연속적인 건강 모니터링을 규칙적으로 실행하였다.
치료
세포 이식 후 제21일째 치료를 시작하였다. 치료학적 항체 및 상응하는 비히클을 단일 제제로서 30 mg/kg의 투약량으로 연구 제21일, 제28일 및 제35일째에 정맥내로 제공하였다. CD79bADC를 연구 제21일째 1회 4mg/kg의 투약량으로 제공하였다. 사용 전 모액으로부터 신선하게 항체 희석물을 제조하였다. 연구를 제309일째에 종료하였다.
모니터링, 종결 기준 및 검시
동물을 임상적 증후 및 부작용의 검출에 대해 매일 제어하였다. 동물의 종결 기준은 시각적으로 병든 상태였다: 지저분한 털, 굽은 등, 거친 호흡, 손상된 운동성, 뒷다리 마비(HLP: hind leg paralysis). 마우스를 종결 기준에 따라 희생시켰다. 부과된 종양을 체크하기 위해 실험의 시작시에 1회 관찰을 실행하였다. 마우스를 종결 기준에 따라 희생시켰다.
통계
생존 데이터를 페어와이즈 윌콕슨 및 페어와이즈 로그-랭크 시험에 의해 통계적으로 분석하였다.
결과
인간 맨틀 세포 림프종 세포주 Z138을 마우스의 꼬리 정맥내로 정맥내 접종하였다(10 × 106개 세포). 마우스를 제1 요법 이전에 무작위로 분류하고, 세포 이식 후 제21일째에 치료를 시작하였다. 항체 약물 접합체를 제21일째에 4 mg/kg의 투약량으로 1회 제공한 반면, GA101, 리툭시맙 및 상응하는 비히클을 연구 제21일, 제28일 및 제35일째에 30 mg/kg의 투약량으로 정맥내로 제공하였다. 대조군의 동물에 PBS를 공급하였다. 모든 동물을 임상적 증후 및 부작용의 검출에 대해 매일 제어하였고, 설정된 종결 기준에 따라 희생시켰다. 연구 종결은 연구 제309일째였다. 생존 데이터를 생존 곡선으로 표시하였고(도 1), 페어와이즈 윌콕슨 및 페어와이즈 로그-랭크 시험에 의해 통계적으로 분석하였다(도 2). 도 2에서 *로 표시된 값은 유의적인 차이를 지시한다. 상이한 치료군에 대한 중간 및 전체 생존 값은 표 5 및 표 6에 제시된다. 실험이 완료되었을 때 309일까지 생존한 모든 동물은 검시 동안 종양이 나타나지 않았다.
[표 5]
중간 생존
Figure pct00025
[표 6]
실험 종료시(제309일)의 전체 생존:
Figure pct00026
모든 군은 페어와이즈 로그 랭크 시험에서 리툭시맙을 제외하고 비히클 군과 유의적으로 상이하였다. 두 조합물, GA101 + 항-CD79b-ADC뿐만 아니라 리툭시맙 + CD79b-ADC는 개별적 단일요법과 비교하여 유의적으로 증가된 생존을 보여준다. GA101 + CD79b-ADC의 조합물은 최고의 중간 생존율을 나타내었고, 그 뒤로 리툭시맙 + CD79b-ADC의 조합물이 뒤따랐고, 각각 2/10 또는 3/10의 종양 부재 동물을 생성하였다. 더욱이, 리툭시맙 및 GA101과 CD79b-ADC의 조합물은 전체 생존에 있어서 RTX, GA101 또는 항-CD79b-ADC에 의한 개별적 단일요법에 비하여 강한 항-종양 활성을 보여준다.
SEQUENCE LISTING <110> F. HOFFMANN-LA ROCHE AG <120> Combination therapy of an afucosylated CD20 antibody with a CD79b antibody-drug conjugate <130> 31511 and PR5608 <140> PCT/EP2014/058827 <141> 2014-04-30 <150> US 61/818,821 <151> 2013-05-02 <160> 182 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 112 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <221> MISC_FEATURE <223> amino acid sequence of variable region of the heavy chain (VH) of murine monoclonal anti-CD20 antibody B-Ly1 <400> 1 Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys 1 5 10 15 Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Leu 20 25 30 Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp 35 40 45 Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 50 55 60 Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr 65 70 75 80 Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly 85 90 95 Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 100 105 110 <210> 2 <211> 103 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <221> MISC_FEATURE <223> amino acid sequence of variable region of the light chain (VL) of murine monoclonal anti-CD20 antibody B-Ly1 <400> 2 Asn Pro Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser 1 5 10 15 Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu 20 25 30 Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn 35 40 45 Leu Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr 50 55 60 Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val 65 70 75 80 Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 85 90 95 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH2) <400> 3 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH3) <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr 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Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH7) <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH8) <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HH9) <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL8) <400> 11 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu 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Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 15 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL13) <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 16 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL14) <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Lys Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) of humanized B-Ly1 antibody (B-HL15) <400> 17 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg 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gaagctggaa aagggccgca tggaagagtc ccagaacgaa 400 tctctcgcca ccctcaccat ccaaggcatc cggtttgagg acaatggcat 450 ctacttctgt cagcagaagt gcaacaacac ctcggaggtc taccagggct 500 gcggcacaga gctgcgagtc atgggattca gcaccttggc acagctgaag 550 cagaggaaca cgctgaagga tggtatcatc atgatccaga cgctgctgat 600 catcctcttc atcatcgtgc ctatcttcct gctgctggac aaggatgaca 650 gcaaggctgg catggaggaa gatcacacct acgagggcct ggacattgac 700 cagacagcca cctatgagga catagtgacg ctgcggacag gggaagtgaa 750 gtggtctgta ggtgagcacc caggccagga gtgagagcca ggtcgcccca 800 tgacctgggt gcaggctccc tggcctcagt gactgcttcg gagctgcctg 850 gctcatggcc caaccccttt cctggacccc ccagctggcc tctgaagctg 900 gcccaccaga gctgccattt gtctccagcc cctggtcccc agctcttgcc 950 aaagggcctg gagtagaagg acaacagggc agcaacttgg agggagttct 1000 ctggggatgg acgggaccca gccttctggg ggtgctatga ggtgatccgt 1050 ccccacacat gggatggggg aggcagagac tggtccagag cccgcaaatg 1100 gactcggagc cgagggcctc ccagcagagc ttgggaaggg ccatggaccc 1150 aactgggccc cagaagagcc acaggaacat cattcctctc ccgcaaccac 1200 tcccacccca gggaggccct ggcctccagt gccttccccc gtggaataaa 1250 cggtgtgtcc tgagaaacca 1270 <210> 22 <211> 229 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Ala Arg Leu Ala Leu Ser Pro Val Pro Ser His Trp Met Val 1 5 10 15 Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ser Ala Glu Pro Val Pro Ala Ala Arg 20 25 30 Ser Glu Asp Arg Tyr Arg Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser Arg 35 40 45 Ile Trp Gln Ser Pro Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe Thr 50 55 60 Val Lys Met His Cys Tyr Met Asn Ser Ala Ser Gly Asn Val Ser 65 70 75 Trp Leu Trp Lys Gln Glu Met Asp Glu Asn Pro Gln Gln Leu Lys 80 85 90 Leu Glu Lys Gly Arg Met Glu Glu Ser Gln Asn Glu Ser Leu Ala 95 100 105 Thr Leu Thr Ile Gln Gly Ile Arg Phe Glu Asp Asn Gly Ile Tyr 110 115 120 Phe Cys Gln Gln Lys Cys Asn Asn Thr Ser Glu Val Tyr Gln Gly 125 130 135 Cys Gly Thr Glu Leu Arg Val Met Gly Phe Ser Thr Leu Ala Gln 140 145 150 Leu Lys Gln Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly Ile Ile Met Ile Gln 155 160 165 Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro Ile Phe Leu Leu 170 175 180 Leu Asp 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Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 140 145 150 Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 155 160 165 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175 180 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 185 190 195 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 24 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy Chain of Chimeric Antibody (chMA79b) <400> 24 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp 80 85 90 Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 110 115 120 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 125 130 135 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 140 145 150 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 155 160 165 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 170 175 180 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 185 190 195 Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 200 205 210 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 215 220 225 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 320 325 330 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 335 340 345 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 350 355 360 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 365 370 375 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 380 385 390 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 395 400 405 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 410 415 420 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 425 430 435 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 440 445 <210> 25 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys 35 40 45 Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 80 85 90 Tyr Asn Ser Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu 95 100 105 Ile Lys Arg <210> 26 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Variable domain of Light Chain of Chimeric Antibody (chMA79b) <400> 26 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu 1 5 10 15 Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly 50 55 60 Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70 75 Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr 80 85 90 Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr 95 100 105 Glu Leu Glu Leu Lys Arg 110 <210> 27 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Variable Domain of LIght Chain of Humanized Antibody Graft (huMA79b graft) <400> 27 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 110 <210> 28 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ser Val Ile Ser Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr 50 55 60 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 95 100 105 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 <210> 29 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Variable domain of Heavy Chain of Chimeric Antibody (chMA79b) <400> 29 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp 80 85 90 Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 30 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Variable Domain of Heavy Chain of Humanized Antibody Graft (huMA79b graft) <400> 30 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HVR1-LC of huMA79b graft <400> 31 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn 1 5 10 15 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HVR2-LC of huMA79b graft <400> 32 Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HVR3-LC of huMA79b graft <400> 33 Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr 5 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HVR1-HC of huMA79b graft <400> 34 Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu 5 10 <210> 35 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HVR2-HC of huMA79b graft <400> 35 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile 1 5 10 15 Phe Lys Gly <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HVR3-HC of huMA79b graft <400> 36 Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp Tyr 5 10 <210> 37 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b. V28) <400> 37 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn 1 5 10 15 <210> 38 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR3-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b. V28) <400> 38 Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr 5 10 <210> 39 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 40 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 41 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 1 5 10 15 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 20 25 30 Tyr Cys <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 5 10 <210> 43 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 44 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 5 10 <210> 45 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 1 5 10 15 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 46 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 5 10 <210> 47 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 47 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn 1 5 10 15 <210> 48 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR2-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 48 Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 5 <210> 49 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR3-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 49 Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr 5 <210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 50 Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu 5 10 <210> 51 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR2-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 51 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile 1 5 10 15 Phe Lys Gly <210> 52 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR-H3 of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 52 Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp Tyr 5 10 <210> 53 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> LC-HC Variety Domain of Humanized Antibody Varient(huMA79b.v17) <400> 53 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 110 <210> 54 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HC-Variable Domain of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 54 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 55 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 55 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn 1 5 10 15 <210> 56 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR2-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 56 Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 5 <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR3-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 57 Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr 5 <210> 58 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 58 Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu 5 10 <210> 59 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR2-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 59 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile 1 5 10 15 Phe Lys Gly <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR3-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 60 Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr 5 10 <210> 61 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> LC-Variable Domain of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 61 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 110 <210> 62 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HC-Variable Domain of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 62 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 63 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 63 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn 1 5 10 15 <210> 64 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR2-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 64 Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 5 <210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR3-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 65 Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr 5 <210> 66 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 66 Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu 5 10 <210> 67 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR2-HLC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 67 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile 1 5 10 15 Phe Lys Gly <210> 68 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR3-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 68 Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr 5 10 <210> 69 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> LC-variable domain of (huMA79b.v28) <400> 69 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 110 <210> 70 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HC-Variable Domain of Humanized Antibody (huMA79b.v28) <400> 70 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 71 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 71 Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Ser Gly Asp Ser Phe Leu Asn 1 5 10 15 <210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR2-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 72 Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 5 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR3-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 73 Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr 5 <210> 74 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR1-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 74 Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu 5 10 <210> 75 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR2-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 75 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile 1 5 10 15 Phe Lys Gly <210> 76 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HVR3-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 76 Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr 5 10 <210> 77 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> LC -Variable Domain of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 77 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Ser Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 110 <210> 78 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> HC-Variable Domain of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 78 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 79 <211> 893 <212> DNA <213> Macaca fascicularis <400> 79 tcatggtgat ggtgatgatg accggtacgc gtagaatcga gaccgaggag 50 agggttaggg ataggcttac cttcgaaccg cgggccctct agactcgagc 100 ggccgccact gtgctggata tctgcagaat tgcccttggg gacagagcag 150 tgaccatggc caggctggcg ttgtctcctg tgtccagcca ctggctggtg 200 gcgttgctgc tgctgctctc agcagctgag ccagtgccag cagccaaatc 250 agaggacctg tacccgaatc ccaaaggtag tgcttgttct cggatctggc 300 agagcccacg tttcatagcc aggaaacggg gcttcacggt gaaaatgcac 350 tgctacgtga ccaacagcac cttcagcatc gtgagctggc tccggaagcg 400 ggagacggac aaggagcccc aacaggtgaa cctggagcag ggccacatgc 450 atcagaccca aaacagctct gtcaccaccc tcatcatcca agacatccgg 500 tttgaggaca acggcatcta cttctgtcag caggagtgca gcaagacctc 550 ggaggtctac cggggctgcg gcacggagct gcgagtcatg gggttcagca 600 ccttggcaca gctgaagcag aggaacacgc tgaaggatgg catcatcatg 650 atccagacgc tgctgatcat cctcttcatc atcgtgccca tcttcctgct 700 gctggacaag gatgacagca aggccggcat ggaggaagat cacacctacg 750 agggcctgga cattgaccag acggccacct acgaggacat agtgacgctg 800 cggacagggg aagtgaagtg gtctgtgggt gagcacccag gtcaggagtg 850 agagccagga cctccccacg gcctgggtgc aggctcccca gcc 893 <210> 80 <211> 231 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 80 Met Ala Arg Leu Ala Leu Ser Pro Val Ser Ser His Trp Leu Val 1 5 10 15 Ala Leu Leu Leu Leu Leu Ser Ala Ala Glu Pro Val Pro Ala Ala 20 25 30 Lys Ser Glu Asp Leu Tyr Pro Asn Pro Lys Gly Ser Ala Cys Ser 35 40 45 Arg Ile Trp Gln Ser Pro Arg Phe Ile Ala Arg Lys Arg Gly Phe 50 55 60 Thr Val Lys Met His Cys Tyr Val Thr Asn Ser Thr Phe Ser Ile 65 70 75 Val Ser Trp Leu Arg Lys Arg Glu Thr Asp Lys Glu Pro Gln Gln 80 85 90 Val Asn Leu Glu Gln Gly His Met His Gln Thr Gln Asn Ser Ser 95 100 105 Val Thr Thr Leu Ile Ile Gln Asp Ile Arg Phe Glu Asp Asn Gly 110 115 120 Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Glu Cys Ser Lys Thr Ser Glu Val Tyr 125 130 135 Arg Gly Cys Gly Thr Glu Leu Arg Val Met Gly Phe Ser Thr Leu 140 145 150 Ala Gln Leu Lys Gln Arg Asn Thr Leu Lys Asp Gly Ile Ile Met 155 160 165 Ile Gln Thr Leu Leu Ile Ile Leu Phe Ile Ile Val Pro Ile Phe 170 175 180 Leu Leu Leu Asp Lys Asp Asp Ser Lys Ala Gly Met Glu Glu Asp 185 190 195 His Thr Tyr Glu Gly Leu Asp Ile Asp Gln Thr Ala Thr Tyr Glu 200 205 210 Asp Ile Val Thr Leu Arg Thr Gly Glu Val Lys Trp Ser Val Gly 215 220 225 Glu His Pro Gly Gln Glu 230 <210> 81 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric anti-cyno CD79b (ch10D10)- LC <400> 81 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu 1 5 10 15 Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp 20 25 30 Ser Tyr Gly Lys Thr Phe Met His Trp His Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly 95 100 105 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 110 115 120 Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 125 130 135 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 140 145 150 Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 155 160 165 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175 180 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 185 190 195 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 82 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Chimeric anti-cyno CD79b (ch10D10)- LC <400> 82 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser 1 5 10 15 Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr 20 25 30 Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys 35 40 45 Leu Glu Trp Met Gly Asn Ile Trp Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr 50 55 60 Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Arg Met Asp Phe Trp Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 110 115 120 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 125 130 135 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 140 145 150 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 155 160 165 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 170 175 180 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 185 190 195 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 200 205 210 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 215 220 225 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 260 265 270 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 320 325 330 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 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Thio-huMA79b HC-variant <400> 86 Thr Leu Val Thr Val Cys Ser Ala Ser Thr Lys 5 10 <210> 87 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b HC-variant <400> 87 Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro 5 10 <210> 88 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b HC-variant <400> 88 Val Ser Ser Ala Ser Cys Lys Gly Pro Ser Val 5 10 <210> 89 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b HC-variant <400> 89 Trp Tyr Val Asp Gly Cys Glu Val His Asn Ala 5 10 <210> 90 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b HC-variant <400> 90 Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu 5 10 <210> 91 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 91 Pro Pro Val Leu Asp Cys Asp Gly Ser Phe Phe 5 10 <210> 92 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 92 Glu Val Gln Leu Cys Gln Ser Gly Ala Glu 5 10 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 93 Val Lys Ile Ser Cys Cys Ala Thr Gly Tyr Thr 5 10 <210> 94 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 94 Leu Ser Ser Leu Thr Cys Glu Asp Ser Ala Val 5 10 <210> 95 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 95 Thr Ser Val Thr Val Cys Ser Ala Ser Thr Lys 5 10 <210> 96 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 96 Val Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro 5 10 <210> 97 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 97 Val Ser Ser Ala Ser Cys Lys Gly Pro Ser Val 5 10 <210> 98 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 98 Trp Tyr Val Asp Gly Cys Glu Val His Asn Ala 5 10 <210> 99 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 99 Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu 5 10 <210> 100 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b HC-variant <400> 100 Pro Pro Val Leu Asp Cys Asp Gly Ser Phe Phe 5 10 <210> 101 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 101 Glu Val Gln Leu Cys Glu Ser Gly Pro Gly 5 10 <210> 102 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 102 Leu Ser Leu Thr Cys Cys Val Thr Gly Tyr Ser 5 10 <210> 103 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 103 Leu Asn Ser Val Thr Cys Glu Asp Thr Ala Thr 5 10 <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 104 Thr Thr Leu Thr Val Cys Ser Ala Ser Thr Lys 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 105 Leu Thr Val Ser Ser Cys Ser Thr Lys Gly Pro 5 10 <210> 106 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 106 Val Ser Ser Ala Ser Cys Lys Gly Pro Ser Val 5 10 <210> 107 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-anti-cynoCD79b (ch10D10)-HC-variant <400> 107 Trp Tyr Val Asp Gly Cys Glu Val His Asn Ala 5 10 <210> 108 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 108 Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu 5 10 <210> 109 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 109 Pro Pro Val Leu Asp Cys Asp Gly Ser Phe Phe 5 10 <210> 110 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b LC-variant <400> 110 Ser Leu Ser Ala Ser Cys Gly Asp Arg Val Thr 5 10 <210> 111 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b LC-variant <400> 111 Glu Ile Lys Arg Thr Cys Ala Ala Pro Ser Val 5 10 <210> 112 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b LC-variant <400> 112 Thr Val Ala Ala Pro Cys Val Phe Ile Phe Pro 5 10 <210> 113 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b LC-variant <400> 113 Phe Ile Phe Pro Pro Cys Asp Glu Gln Leu Lys 5 10 <210> 114 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b LC-variant <400> 114 Asp Glu Gln Leu Lys Cys Gly Thr Ala Ser Val 5 10 <210> 115 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b LC-variant <400> 115 Val Thr Glu Gln Asp Cys Lys Asp Ser Thr Tyr 5 10 <210> 116 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-huMA79b LC-variant <400> 116 Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn 5 10 <210> 117 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b LC-variant <400> 117 Ser Leu Ala Val Ser Cys Gly Gln Arg Ala Thr 5 10 <210> 118 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b LC-variant <400> 118 Glu Leu Lys Arg Thr Cys Ala Ala Pro Ser Val 5 10 <210> 119 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b LC-variant <400> 119 Thr Val Ala Ala Pro Cys Val Phe Ile Phe Pro 5 10 <210> 120 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b LC-variant <400> 120 Phe Ile Phe Pro Pro Cys Asp Glu Gln Leu Lys 5 10 <210> 121 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b LC-variant <400> 121 Asp Glu Gln Leu Lys Cys Gly Thr Ala Ser Val 5 10 <210> 122 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b LC-variant <400> 122 Val Thr Glu Gln Asp Cys Lys Asp Ser Thr Tyr 5 10 <210> 123 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio-chMA79b LC-variant <400> 123 Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn 5 10 <210> 124 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 124 Ser Leu Ala Val Ser Cys Gly Gln Arg Ala Thr 5 10 <210> 125 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 125 Glu Ile Lys Arg Thr Cys Ala Ala Pro Ser Val 5 10 <210> 126 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 126 Thr Val Ala Ala Pro Cys Val Phe Ile Phe Pro 5 10 <210> 127 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 127 Phe Ile Phe Pro Pro Cys Asp Glu Gln Leu Lys 5 10 <210> 128 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 128 Asp Glu Gln Leu Lys Cys Gly Thr Ala Ser Val 5 10 <210> 129 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 129 Val Thr Glu Gln Asp Cys Lys Asp Ser Thr Tyr 5 10 <210> 130 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Thio anti-cynoCD79b(ch10D10)-HC-variant <400> 130 Gly Leu Ser Ser Pro Cys Thr Lys Ser Phe Asn 5 10 <210> 131 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 131 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 132 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR2-LC Humanized Antibody variant huMA79b.v17) <400> 132 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 133 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR3-LC of Humanized Antibody variant (huMA79b.v17) <400> 133 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 1 5 10 15 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 20 25 30 Tyr Cys <210> 134 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR4-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 134 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 5 10 <210> 135 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> CL1-LC ofHumanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 135 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 20 25 30 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 35 40 45 Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 50 55 60 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 65 70 75 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His 80 85 90 Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu 95 100 105 Cys <210> 136 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR1-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 136 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 20 25 <210> 137 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR2-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 137 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 5 10 <210> 138 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR3-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 138 Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu 1 5 10 15 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 139 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR4-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 139 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 5 10 <210> 140 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1-HC of Humanized Antibody Varient (huMA79b.v17) <400> 140 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 1 5 10 15 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 20 25 30 Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 35 40 45 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 50 55 60 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 65 70 75 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 80 85 90 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 95 100 105 Thr His Thr <210> 141 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc-HC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v17) <400> 141 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 1 5 10 15 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 35 40 45 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 50 55 60 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 80 85 90 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 95 100 105 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 110 115 120 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 125 130 135 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 140 145 150 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 155 160 165 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 170 175 180 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 185 190 195 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 200 205 210 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 215 220 <210> 142 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 142 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20 <210> 143 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR2-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 143 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 144 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR3-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 144 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 1 5 10 15 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 20 25 30 Tyr Cys <210> 145 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR4-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v18) <400> 145 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 5 10 <210> 146 <211> 446 <212> 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Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 156 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 1 5 10 15 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 20 25 30 Tyr Cys <210> 157 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR4-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 157 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 5 10 <210> 158 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CL1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v28) <400> 158 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 20 25 30 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 35 40 45 Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 50 55 60 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 65 70 75 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His 80 85 90 Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu 95 100 105 Cys <210> 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(huMA79b.v32) <400> 166 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 167 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR3-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 167 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 1 5 10 15 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 20 25 30 Tyr Cys <210> 168 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> FR4-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 168 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 5 10 <210> 169 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CL1-LC of Humanized Antibody Variant (huMA79b.v32) <400> 169 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 20 25 30 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 35 40 45 Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 50 55 60 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 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5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 110 115 120 Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 125 130 135 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 140 145 150 Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 155 160 165 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175 180 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 185 190 195 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 177 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain of huMA79bv.17 <400> 177 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Val Tyr Phe Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 110 115 120 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 125 130 135 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 140 145 150 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 155 160 165 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 170 175 180 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 185 190 195 Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 200 205 210 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 215 220 225 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 320 325 330 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 335 340 345 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 350 355 360 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 365 370 375 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 380 385 390 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 395 400 405 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 410 415 420 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 425 430 435 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 440 445 <210> 178 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light chain of huMA79bv.18 <400> 178 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Asp Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 110 115 120 Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 125 130 135 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 140 145 150 Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 155 160 165 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175 180 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 185 190 195 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 179 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain of huMA79bv.18 <400> 179 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 110 115 120 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 125 130 135 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 140 145 150 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 155 160 165 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 170 175 180 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 185 190 195 Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 200 205 210 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 215 220 225 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 320 325 330 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 335 340 345 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 350 355 360 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 365 370 375 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 380 385 390 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 395 400 405 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 410 415 420 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 425 430 435 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 440 445 <210> 180 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light chain of huMA79bv.28 <400> 180 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 110 115 120 Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 125 130 135 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 140 145 150 Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 155 160 165 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175 180 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 185 190 195 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215 <210> 181 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain of huMA79bv.28 <400> 181 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser 20 25 30 Ser Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr 50 55 60 Asn Glu Ile Phe Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser 65 70 75 Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 110 115 120 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 125 130 135 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe 140 145 150 Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 155 160 165 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 170 175 180 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 185 190 195 Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 200 205 210 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 215 220 225 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 320 325 330 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 335 340 345 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 350 355 360 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 365 370 375 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 380 385 390 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 395 400 405 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 410 415 420 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 425 430 435 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 440 445 <210> 182 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light chain of huMA79bv.32 <400> 182 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp 20 25 30 Tyr Ser Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 110 115 120 Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 125 130 135 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 140 145 150 Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 155 160 165 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 170 175 180 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 185 190 195 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 200 205 210 Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 215

Claims (47)

  1. CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체.
  2. 제1항에 있어서,
    암이 CD20 발현 암인 항-CD20 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    CD20 발현 암이 림프종 또는 림프성 백혈병인 항-CD20 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    인간화된 B-Ly1 항체인 항-CD20 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    오비누투주맙(obinutuzumab)인 항-CD20 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 추가적인 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선이 투여되는 항-CD20 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체가
    (i) A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 131)인 서열 A1-A15를 포함하는 HVR-L1;
    (ii) B1-B7이 AASNLES(서열번호 132)인 서열 B1-B7을 포함하는 HVR-L2;
    (iii) C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 133)인 서열 C1-C9를 포함하는 HVR-L3;
    (iv) D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 134)인 서열 D1-D10을 포함하는 HVR-H1;
    (v) E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 135)인 서열 E1-E18을 포함하는 HVR-H2; 및
    (vi) F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 136)인 서열 F1-F10을 포함하는 HVR-H3
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함하는 항-CD20 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때
    (a) Ab가 제7항에 정의된 CD79b 항체이고;
    (b) L이 연결기이고;
    (c) D가 약물 부분인
    항-CD20 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 L이 6-말레이미도카프로일(MC), 말레이미도프로파노일(MP), 발린-시트룰린(val-cit), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe), p-아미노벤질옥시카보닐(PAB), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트(SPP), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트(SMCC) 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트(SIAB)로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-CD20 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 D가 아우리스타틴, 돌로스탄틴, DM1, DM3, DM4, MMAE 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택되는 항-CD20 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE인 항-CD20 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체가 huMA79b.v28인 항-CD20 항체.
  13. Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 인간화된 B-Ly1 항체, 및 CD79b 항체-약물 접합체를 포함하는, 암을 치료하기 위한 조성물.
  14. 제13항에 있어서,
    항-CD20 항체가 오비누투주맙인 조성물.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서,
    하나 이상의 추가적인 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선이 투여되는 조성물.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체가
    (i) A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 131)인 서열 A1-A15를 포함하는 HVR-L1;
    (ii) B1-B7이 AASNLES(서열번호 132)인 서열 B1-B7을 포함하는 HVR-L2;
    (iii) C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 133)인 서열 C1-C9를 포함하는 HVR-L3;
    (iv) D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 134)인 서열 D1-D10을 포함하는 HVR-H1;
    (v) E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 135)인 서열 E1-E18을 포함하는 HVR-H2; 및
    (vi) F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 136)인 서열 F1-F10을 포함하는 HVR-H3
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함하는 조성물.
  17. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때
    (a) Ab가 제16항에 정의된 CD79b 항체이고;
    (b) L이 연결기이고;
    (c) D가 약물 부분
    인 조성물.
  18. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 L이 6-말레이미도카프로일(MC), 말레이미도프로파노일(MP), 발린-시트룰린(val-cit), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe), p-아미노벤질옥시카보닐(PAB), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트(SPP), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트(SMCC) 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트(SIAB)로 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물.
  19. 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 D가 아우리스타틴, 돌로스탄틴, DM1, DM3, DM4, MMAE 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물.
  20. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE인 조성물.
  21. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체가 huMA79b.v28인 조성물.
  22. Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체를 CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료할 필요가 있는 환자에게 투여함으로써 암을 앓는 환자를 치료하는 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    암이 CD20 발현 암인 방법.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서,
    CD20 발현 암이 림프종 또는 림프성 백혈병인 방법.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20 항체가 인간화된 B-Ly1 항체인 방법.
  26. 제22항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20 항체가 오비누투주맙인 방법.
  27. 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 추가적인 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선을 투여하는 방법.
  28. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체가
    (i) A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 131)인 서열 A1-A15를 포함하는 HVR-L1;
    (ii) B1-B7이 AASNLES(서열번호 132)인 서열 B1-B7을 포함하는 HVR-L2;
    (iii) C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 133)인 서열 C1-C9를 포함하는 HVR-L3;
    (iv) D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 134)인 서열 D1-D10을 포함하는 HVR-H1;
    (v) E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 135)인 서열 E1-E18을 포함하는 HVR-H2; 및
    (vi) F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 136)인 서열 F1-F10을 포함하는 HVR-H3
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함하는 방법.
  29. 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때
    (a) Ab가 제28항에 정의된 CD79b 항체이고;
    (b) L이 연결기이고;
    (c) D가 약물 부분
    인 방법.
  30. 제22항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 L이 6-말레이미도카프로일(MC), 말레이미도프로파노일(MP), 발린-시트룰린(val-cit), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe), p-아미노벤질옥시카보닐(PAB), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트(SPP), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트(SMCC) 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트(SIAB)로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  31. 제22항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 D가 아우리스타틴, 돌로스탄틴, DM1, DM3, DM4, MMAE 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  32. 제22항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE인 방법.
  33. 제22항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체가 huMA79b.v28인 방법.
  34. CD79b 항체-약물 접합체와 조합으로 암을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, Asn297에서 올리고사카라이드(당)의 총량의 60% 이하의 푸코스 양을 갖는 어푸코실화된 항-CD20 항체의 용도.
  35. 제34항에 있어서,
    암이 CD20 발현 암인 용도.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서,
    CD20 발현 암이 림프종 또는 림프성 백혈병인 용도.
  37. 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20 항체가 인간화된 B-Ly1 항체인 용도.
  38. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    항-CD20 항체가 오비누투주맙인 용도.
  39. 제34항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 추가적인 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선이 투여되는 용도.
  40. 제34항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체에서 CD79b 항체가
    (i) A1-A15가 KASQSVDYDGDSFLN(서열번호 131)인 서열 A1-A15를 포함하는 HVR-L1;
    (ii) B1-B7이 AASNLES(서열번호 132)인 서열 B1-B7을 포함하는 HVR-L2;
    (iii) C1-C9가 QQSNEDPLT(서열번호 133)인 서열 C1-C9를 포함하는 HVR-L3;
    (iv) D1-D10이 GYTFSSYWIE(서열번호 134)인 서열 D1-D10을 포함하는 HVR-H1;
    (v) E1-E18이 GEILPGGGDTNYNEIFKG(서열번호 135)인 서열 E1-E18을 포함하는 HVR-H2; 및
    (vi) F1-F10이 TRRVPVYFDY(서열번호 136)인 서열 F1-F10을 포함하는 HVR-H3
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 HVR을 포함하는 용도.
  41. 제34항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때
    (a) Ab가 제40항에 정의된 CD79b 항체이고;
    (b) L이 연결기이고;
    (c) D가 약물 부분
    인 용도.
  42. 제34항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 L이 6-말레이미도카프로일(MC), 말레이미도프로파노일(MP), 발린-시트룰린(val-cit), 알라닌-페닐알라닌(ala-phe), p-아미노벤질옥시카보닐(PAB), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트(SPP), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트(SMCC) 및 N-석신이미딜 (4-요오도-아세틸) 아미노벤조에이트(SIAB)로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
  43. 제34항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 화학식 Ab-(L-D)p를 갖고, 이때 D가 아우리스타틴, 돌로스탄틴, DM1, DM3, DM4, MMAE 및 MMAF로 이루어진 군으로부터 선택되는 용도.
  44. 제34항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체가 항-CD79b-MC-vc-PAB-MMAE인 용도.
  45. 제34항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    CD79b 항체-약물 접합체에서 항-CD79b 항체가 huMA79b.v28인 용도.
  46. 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 추가적인 다른 세포독성제, 화학요법제 또는 항암제, 또는 이러한 제제의 효과를 향상시키는 화합물 또는 이온화 방사선이 투여되는 용도.
  47. 상기 기재된 바와 같은 발명.
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