KR20150064573A - 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법 - Google Patents

태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법에 따르면, 태양광 조사에 따른 피부세포 내 유전자 발현량을 비교함으로써 정확하고 객관적으로 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝하거나, 태양광 차단 효능을 평가할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 방법은 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)를 이용함으로써 가시광선 중 가장 피부 손상을 가장 많이 유도하는 400∼500 nm 파장의 블루/바이올렛 라이트의 차단여부까지 판별할 수 있으므로, 보다 세분화된 태양광 차단 기능 측정 결과를 제공할 수 있다.

Description

태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 방법 및 태양광 차단 효능 평가 방법{Method for screening of sunlight protection functional material and method for evaluating sunlight protection effect}
본 명세서에 기재된 내용은 피부 세포에서 특정 유전자의 발현변화를 통해 태양광 차단 기능을 측정하는 방법, 구체적으로 태양광 차단 기능성 물질을 스크리닝 방법 또는 태양광 차단 효능을 평가하는 방법에 관한 것이다.
태양광(태양에너지)은 빛의 파장이 긴 쪽에서부터 차례로 라디오파, 초단파, 적외선, 가시광선, 자외선, X선 및 γ선 등으로 이루어진다. 그리고 태양광의 피부에 대한 부정적인 영향이 알려지면서, 이러한 태양광으로부터 피부를 보호하기 위한 많은 제품이 개발되었다.
그러나, 상술한 바와 같이 태양광에는 여러 다양한 파장의 전자기파들이 존재함에도, 현재 대부분의 태양광 차단 효능은 자외선을 얼마나 효과적으로 차단할 수 있는지로만 판단되고 있다. 이에 따라 태양광 차단 제품의 효능 평가도 자외선 차단정도를 평가하는 지표인, "SPF(sun protection factor)"라 명명되는 UVB 영역(290∼320 nm)이 유도하는 홍반(erythema) 및 "PA(Protection of UVA)"로 명명되는 UVA 영역(320∼400 nm)이 유도하는 흑화(Persistent Pigment Darkening) 현상을 실험자가 육안으로 관찰하는 방법을 통해서만 이루어지고 있다. 즉, 실제로 태양광에서 자외선이 차지하는 비중은 매우 적으며 태양광은 다른 파장영역의 전자기파들이 더 많은 비중을 차지하고 있음에도, 상기 SPF와 PA를 통한 자외선 차단효능 외에 다른 파장을 갖는 대부분의 태양광의 차단 효능을 확인할 수 없다는 문제가 있다.
실제로 시판되는 대부분의 태양광 차단 제품들의 경우 상기와 같은 SPF와 PA로 표시되는 자외선 차단지수에만 초점을 맞추어 개발되어 왔고, 그 결과 가시광선에 대한 태양광 차단 효능에 대한 개발은 미흡한 실정이다. 따라서, 상기와 같은 태양광 차단 제품들은 가시광선 중 가장 피부 손상을 가장 많이 유도하는 400∼500 nm 파장의 블루/바이올렛 라이트 영역을 포함하는 가시광선에 대한 태양광 차단 기능이 매우 미흡함에도, 현재 상기 블루/바이올렛 라이트의 차단 효능을 평가할 수 있는 어떠한 차단 지표도 설정되어 있지 않아 이를 확인할 수 없다는 문제가 있다.
대한민국 공개특허공보 제1999-0008348호 대한민국 공개특허공보 제2010-0099849호 대한민국 공개특허공보 제2013-0027016호 대한민국 공개특허공보 제2006-0132330호 미국 공개특허공보 제2013-0113352호
본 발명의 일측면은 태양광, 구체적으로 블루/바이올렛 라이트의 차단 기능을 측정하여 태양광 차단 기능 물질을 스크리닝할 수 있는 방법, 또는 태양광 차단 효능을 평가할 수 있는 태양광 차단 효능 평가 방법을 제공하고자 한다.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 구현예는,
태양광 조사에 의해 변화하는 피부 세포 내 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3) 중 하나 이상의 유전자 발현량의, 대상물질에 의한 변화를 측정하는 단계를 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
또한, 본 발명의 일 구현예는 상기 유전자 발현량 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 발현량이 증가하면 태양광 차단 기능이 있는 것으로 판정하는 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 일 구현예는 유전자 발현량 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 발현량이 증가한 정도가 클수록 태양광 차단 기능이 높은 것으로 판정하는 태양광 차단 효능 평가 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
본 발명의 태양광 차단 기능 측정방법은 태양광 조사에 따른 피부세포 내 유전자 발현량 변화를 측정함으로써, 기존에 육안평가를 통해 자외선 차단정도를 평가하던 방법과 달리 정확하고 객관적으로 측정 및 판단할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 측정방법은 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)를 이용함으로써, 자외선 차단 지수만을 제공하던 기존의 태양광 차단 효능 평가 방법과 달리 가시광선 중 가장 피부 손상을 가장 많이 유도하는 400∼500 nm 파장의 블루/바이올렛 라이트의 차단여부까지 판별할 수 있으며, 보다 세분화된 태양광 차단 효능 평가 결과를 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 구현예에 따른 평가 대상 물질 실시예 1-5의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet Light) 차단율과 각 SPF, PA지수를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 일 구현예로서 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet Light) 조사강도에 따른 피부 세포내 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)의 각 발현량(Relative mRNA level/RPL13A) 감소 정도를 비교한 그래프를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 일 구현예로서 실시예 4의 자외선(UV) 조사에 따른 피부 세포내 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)의 각 발현량(Relative mRNA level/RPL13A)을 비교한 그래프를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 일 구현예로서 실시예 1 내지 5의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet Light) 조사에 따른 피부 세포내 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)의 각 발현량(Relative mRNA level/RPL13A)을 비교한 그래프를 나타낸 도이다.
본 명세서에서 “태양광(sunlight)”이라 함은 자외선뿐만 아니라 라디오파, 초단파, 적외선, 가시광선, X선 및 γ선 등 태양광의 모든 파장을 포함하는 최광의의 개념이다. 또한, 본 명세서에서 "피부세포"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직의 세포를 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 몸 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발에 존재하는 세포를 포함하는 최광의의 개념이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 구현예는 대상 물질에 의한, 태양광 조사에 의해 변화하는 피부 세포 내 케라틴 10(Keratin 10, ACCESSION NM_000421 XM_352919, VERSION NM_000421.3 GI:195972865), 케라틴 1(Keratin 1, ACCESSION NM_006121, VERSION NM_006121.3 GI:119395749), 필라그린(Filaggrin, ACCESSION NM_002016 XM_048104 XM_378901, VERSION NM_002016.1 GI:60097901) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3, ACCESSION NM_003245, VERSION NM_003245.3 GI:189458820) 중 하나 이상의 유전자 발현량의, 대상물질에 의한 변화를 측정하는 단계를 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
또한, 본 발명의 일 구현예는 상기 유전자 발현량 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 발현량이 증가하면 태양광 차단 기능이 있는 것으로 판정하는 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 일 구현예는 유전자 발현량 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 발현량이 증가한 정도가 클수록 태양광 차단 기능이 높은 것으로 판정하는 태양광 차단 효능 평가 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법을 제공한다.
일 구현예에 따른 본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법에서 조사되는 상기 태양광은 400~500nm파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 포함하며, 290~400nm 파장의 자외선을 더 포함할 수 있다.
일 구현예에 따른 본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법에 사용되는 상기 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)은 피부 세포의 각질형성을 조절함으로써 표피각화를 정상화시키는 작용을 하는 유전자로서, 태양광 노출에 의한 멜라닌 세포의 파괴로 인한 피부 손상, 홍반, 피부 주름, 노화 등에 관여한다. 또한, 상기 유전자들은 태양광, 구체적으로 블루/바이올렛 라이트를 조사시 발현량이 감소한다. 그러나 이에만 한정되는 것은 아니다. 상기 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제-3 은 블루/바이올렛 라이트 조사에 의한 발현량의 변화가 UV 조사에 의한 것과 상반되어 블루/바이올렛 라이트 차단 지표로서 적절하였다.
일 구현예로서, 상기 본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법은 상기 유전자 발현량 변화를 측정하는 단계 이전에, 대상 물질을 태양광 투과성 물질에 도포하는 단계; 및 피부 세포를 상기 태양광 투과성 물질 하부에 위치시킨 후 태양광 투과성 물질 상부에 태양광을 조사하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 태양광 투과성 물질은 태양광, 즉, 상기 자외선 또는 블루/바이올렛 라이트를 투과시키면서 측정 대상 물질의 도포가 가능한 물성을 지닌 것이면 모두 사용이 가능하며, 예를 들면 석영판(Quartz Plate) 또는 목표로 하는 광선영역만 투과시키는 대역(帶域)통과필터(Band pass filter) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 이때 상기 대상 물질은 태양광 차단 효능을 평가하고자 하는 물질로서, 사람의 피부에 적용하는 물질이면 화장품, 약품, 섬유 등과 같이 이를 포함하는 제품이나 제형에 제한되지 않고 모두 포함한다.
일 구현예에 따른 본 발명의 태양광 차단 기능 측정 방법에서 사용되는 상기 피부 세포는 인간 또는 동물 유래 피부 세포를 모두 사용할 수 있으며, 예를 들면, 각질분화형성세포(Keratinocytes), 섬유아세포(fibroblast) 및 머켈세포(Merkel cell)와 같은 멜라닌형성세포(Melanocytes) 중 하나 이상을 사용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
이하, 시험예, 실시예 및 비교예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 시험예, 실시예 및 비교예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 시험예, 실시예 및 비교예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[시험예 1]
본 발명의 일 구현예에 따라 측정 대상 물질의 피부세포에 대한 태양광 차단 기능을 측정하기에 앞서, 대상 물질의 자외선 및 블루/바이올렛 라이트 투과정도를 하기와 같이 측정하였다.
본 실험에 앞서, 대상 물질로서 실시예 1 내지 5의 태양광 차단 제형을 하기의 조성으로 통상적인 방법에 따라 제조하였다(단위: 중량%).
성분 실시예1 실시예2 실시예3 실시예4 실시예5
TiO2 1.4 1.1 2 8.8 3.4
ZnO - 2.8 12 8 -
OMC(octyl methoxy cinnamate) 5 7 7.5　 - 3
이소아밀 p-메톡시신나메이트
(Isoamyl p-Methoxycinnamate) 		2 2　 - - -
에틸헥실 살리실레이트
(Ethylhexyl Salicylate) 		- 4.5 - - -
티노소브 S(Tinosorb S) 3 3 3 - 6
옥토크릴렌(Octocrylene) - - 2　 - -
폴리실리콘-15(Polysilicone-15) - - 2　 - -
세티올 CC(Cetiol CC) 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00
놈콧-HK-G(Nomcort-HK-G) 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50
지랍(Ozokerite) 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
아빌 EM90(Abil EM90) 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50
크릴-6(Crill-6) 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50
벤톤 27VCG(Bentone 27VCG) 1.40 1.40 1.40 1.40 1.40
DC 2-9040 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00
DC 345 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00
핀솔브 TN(Finsolv TN) 20.00 20.00 20.00 20.00 17.00
증류수 45.33 36.33 28.23 39.93 47.33
EDTA.2Na 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
NaCl 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
글리세린 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00
폴리에틸렌(PE) 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30
센시바 SC50(Sensiva SC50) 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
총 합계 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00
그 다음, 상기 실시예 1∼5의 각 SPF 및 PA 임상지수, 및 블루/바이올렛 라이트의 투과율을 각각 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 2 및 도 1에 각각 나타내었다. 이때, 블루/바이올렛 라이트의 투과율은 실시예 1∼5의 태양광 차단 제형을 각각 석영 또는 대역통과필터 위에 2 mg/㎠의 양으로 도포한 후 블루/바이올렛 라이트 영역을 포함한 광원을 조사하고 투과되는 블루/바이올렛 라이트 파장영역(400∼500 nm)을 SPR-4001 분광방사계(Spectroradiometer, Luzchem, Canada)로 측정하였다. 상기 표 2는 태양광 투과성 물질로 석영을 사용한 결과를 나타낸 것이다. 자외선에 의한 SPF (피부홍반) 및 PA (피부흑화) 확인 실험은 자외선 차단제 실험법 식품의약품안전처(KFDA)의 방법대로 실시하였다.
시험물질 SPF PA 투과율(%)
실시예1 35 ++ 14%
실시예2 50 +++ 3%
실시예3 50 +++ 12%
실시예4 50 +++ 60%
실시예5 50 +++ 32%
상기 표 2 및 도 1의 결과로부터, 실시예 1-5의 태양광 차단 제형들은 자외선에 대하여 거의 동일한 SPF 및 PA를 나타낸 반면, 블루/바이올렛 라이트의 투과율에 있어서는 큰 차이를 가짐을 알 수 있다. 이는 동일한 자외선 차단 효능을 갖는 태양광 차단 제품들간에도 가시광선 중 400~500nm의 파장영역을 갖는 블루/바이올렛 라이트의 차단 효능은 각각 다를 수 있으므로, 자외선 차단 지수가 곧 태양광의 전반적인 차단 기능 보유 또는 차단 효능 정도를 포괄적으로 의미할 수는 없음을 의미한다.
[시험예 2]
본 발명의 일 구현예로서, 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 피부세포에 조사시 빛의 세기에 따른 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)의 발현량 변화를 측정하는 실험을 하기와 같이 실시하였다.
먼저, 본 발명에서 사용하는 사람정상각질피부세포(Human epidermal neonatal keratinocyte cells)는 상용적으로 확보되어 권장하는 방법으로, 론자사(Lonza, Inc. 미국 메릴랜드주 워커스빌(Walkersville) 소재)에서 구입하여 계대배양한 후 CO2 배양기(CO2 incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. 세포 배양액은 론자사의 지침서에 따라 배양하였다. 500 ml의 KBM-2(Clonetics CC-3103) 배지에 KGM-2 불렛 키트(Bullet kit: BPE(Bovine pituitary extract) 2 ml, hEGF(human epidermal growth factor) 0.5 ml, 인슐린(Insulin) 0.5 ml, 하이드로코티손(Hydrocortisone) 0.5 ml, 트랜스페린(Transferrin) 0.5 ml, 에피네프린(Epinephrine) 0.5 ml, 및 젠타마이신 설페이트+암포페리신-B(Gentamycin Suflate + Amphofericin-B: GA-1000) 0.5 ml을 첨가하여 사용하였다.
그 다음, 상기 시험예 1에서 사용한 실시예 4의 태양광 차단 제형을 석영판(Quartz Plate) 또는 대역통과필터 위에 2 mg/㎠ 도포한 후 그 하부에 사람정상각질피부세포를 위치시킨 다음, 태양광 차단이 도포된 부위의 위쪽에서 400∼500 nm의 블루/바이올렛 라이트를 0, 10, 50, 100 J/㎠의 세기로 각각 조사하였다. 그 다음 사람정상각질피부세포의 배양액을 제거하고, 2 ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 이후, 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다.
분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트사의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(Q-RT-PCR: real time-reverse transcription polymerase chain reaction)을 통해 정량적으로 분석하였다.
그리고 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3) 유전자의 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA)을 이용하여 블루/바이올렛 라이트가 태양광 차단을 투과한 후 유도하는 세포의 유전자 변화를 실시간 PCR로 평가하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 이때, 각 유전자 증폭을 위해 사용한 프라이머는 하기 표 3과 같으며, 도 2의 결과는 태양광 투과성 물질로 석영을 사용한 결과이다.
유전자 명칭 프라이머
케라틴 10(Keratin 10) Hs00166289_m1
케라틴 1(Keratin 1) Hs00196158_m1
필라그린(Flaggrin) Hs00856927_g1
트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3) Hs00162752_m1
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3) 모두 블루/바이올렛 라이트의 조사강도가 증가함에 따라 유전자 발현량이 감소하는 것으로 나타났다. 이는 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)의 유전자 발현량 변화정도가 가시광선 중 블루/바이올렛 라이트의 차단 기능을 측정하는 지표가 될 수 있음을 의미한다.
[시험예 3]
본 발명의 일 구현예로서, 290∼400 nm 파장의 자외선을 피부세포에 조사시 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)의 발현량 변화를 측정하기 위하여, 290~400 nm의 자외선을 0, 30 mJ/㎠의 세기로 조사한 것을 제외하고는 상기 시험예 2와 동일한 방법으로 실험을 실시하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3) 모두 블루/바이올렛 라이트와 달리 자외선 조사시 유전자 발현량이 증가하는 것으로 나타났다.
[시험예 4]
본 발명의 일 구현예로서, 400∼500 nm의 블루/바이올렛 라이트를 피부세포에 조사시 태양광 차단 제형의 종류에 따른 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3)의 발현량 차이를 측정하기 위하여, 태양광 차단 제형으로 실시예 1 내지 5를 각각 사용하고 400∼500 nm의 블루/바이올렛 라이트를 40mw/cm2로 총 50J/cm2을 조사한 것을 제외하고는 상기 시험예 2와 동일한 방법으로 실험을 실시하였다.
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 태양광 차단 제형의 종류에 따라, 즉 실시예 1-5 모두 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3) 유전자 발현량이 다르게 나타났다. 또한, 상기 네 유전자 간의 발현양상은 태양광 차단 제형별로 유사하게 나타났다.

Claims (9)

  1. 태양광 조사에 의해 변화하는 피부 세포 내 케라틴 10(Keratin 10), 케라틴 1(Keratin 1), 필라그린(Filaggrin) 및 트랜스글루타미나아제 3(Transglutaminase 3) 중 하나 이상의 유전자 발현량의, 대상물질에 의한 변화를 측정하는 단계를 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 유전자 발현량의 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 발현량이 증가하면 태양광 차단 기능이 있는 것으로 판정하는 태양광 차단 기능성 물질 스크리닝 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 유전자 발현량 변화를 측정한 결과, 대상물질에 의해 발현량이 증가한 정도가 클수록 태양광 차단 기능이 높은 것으로 판정하는 태양광 차단 효능 평가 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 태양광은 400~500nm 파장의 블루/바이올렛 라이트(Blue/Violet light)를 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 태양광은 290~400nm 파장의 자외선을 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피부 세포내 유전자는 태양광을 조사하면 발현량이 감소하는 유전자인 태양광 차단 기능 측정 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전자 발현량 변화를 측정하는 단계 이전에,
    대상 물질을 태양광 투과성 물질에 도포하는 단계; 및
    피부 세포를 상기 태양광 투과성 물질 하부에 위치시킨 후 태양광 투과성 물질 상부에 태양광을 조사하는 단계를 더 포함하는 태양광 차단 기능 측정 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 태양광 투과성 물질은 석영판(Quartz Plate) 또는 대역(帶域)통과필터(Band pass filter)인 태양광 차단 기능 측정 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피부 세포는 각질분화형성세포(Keratinocytes), 섬유아세포(fibroblast) 및 멜라닌형성세포(Melanocytes) 중 하나 이상인 태양광 차단 기능 측정 방법.
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