KR20150043236A - 적외선 분광법으로 피부 암 바이오마커 검출 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 약 1055 cm-1에서의 다중선의 존재에서 인간 표피 피부 조직의 IR (적외선) 스펙트럼, 즉 표피 피부 암 및 전암의 예후, 진단 및 예측을 나타내는 핵산 밴드, DNA 및 RNA,의 강도 비율의 검출을 위한 방법과 관련된다. 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서 DNA/RNA 트리아드 피크의 패턴화 출현과 함께 다중선의 검출은 특정한 유형의 종양 및 악성과의 관계를 추가적으로 나타내고, 또한 악성의 진행 및 악성으로의 진행을 나타낸다.
Description
발명의 배경
1. 발명 분야
본 발명은 약 1055 cm-1에서 다중선의 IR (적외선) 스펙트럼 할당을 통해 생검으로부터의 인간 피부 표피 암 조직내 분자 암 바이오마커의 식별 분야와 일반적으로 관련된다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 편평 세포 암종 (SCC), 기저 세포 암종 (BCC) 및 악성 흑색종 (MM)에 대해 진단하는, 인간 표피내 DNA/RNA 비율 피크의 존재를 식별하기 위한 검출 방법인, IR 분광법을 포함한다. 피부 암 바이오마커 밴드의 특이성과 민감성은 환자에서 치료의 예후 및 예측의 결정에 대하여, 피부 암 유형 및 이의 진행과 관련 있다. 인간 피부 표피 암 조직에서 분자 암 바이오마커의 정성적(qualitative) 및 정량적(quantitative) 분석은 표피 피부 암과 전암의 예후, 진단 및 예측을 일제히 나타낸다. 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서 DNA/RNA 트리아드(triad) 피크의 패턴화 출현과 함께 다중선의 검출은 특정한 유형의 종양 및 악성과의 관계를 추가적으로 나타내고, 또한 악성의 진행 및 악성으로의 진행을 나타낸다.
피부 조직이 대표적인 조직으로서 사용됨에도 불구하고, 바이오마커에 대한 검출 방법은 피부 표피 조직을 측정하는 것으로 제한되지 않고 통상의 기술자에게 명확해질 바와 같이, 다른 조직으로도 이용될 수 있다.
2. 사전 기술
표피 피부 암의 임상 진단의 특이성 및 민감성은 대략 40 내지 80%에서 변화한다. 진단 정확도는 임상의의 연수 기간 및 경험에 크게 의존한다: 연수 받은 피부과 전문의의 경우 80%, 선임 수련의의 경우 62%, 수련의의 경우 56%, 그리고 비-피부과 전문의의 경우 대략 40%로 보고됨. 따라서, 가장 일반적인 피부 암인, 기저 세포 암종 (BCC)의 임상 진단 정확도는 현역 피부과 전문의의 경우 단지 65%이다. 표피의 중간 부분으로부터 파생되는 또 다른 피부 암인, 편평 세포 암종 (SCC)은, 전형적인 임상 사례로 쉽게 진단되지만, 때로는 외음부 및 입술에 위치된 경우 진단하기가 어려울 수 있는데, 이는 오진과 빠른 전이를 초래하며, 이때 환자 중 약 75%에서 사망이 야기될 수 있다. 전암 피부병, 가령 보웬(Bowen) 병 (원 위치 표피내 암종) 및 기타 다수는 피부과 진료에서 종종 진단하기 어려운데, 그 이유는 기타 다수의 피부 병소가 그들을 모방하기 때문이다. 악성 흑색종 (MM)의 임상 진단은 양성 색소 병소와 종종 혼동될 수 있으며, 이는 최대 80%의 불필요한 생검을 야기한다. 중요하게도, MM을 진단 받은 환자는 남은 평생 동안 모니터링되어야 하고 국부적인 재발, 전이 및 새로운 악성 병소에 대해 검사 받아야 한다.
피부경(dermoscopy)은 형태학 패턴 인식을 확립하기 위한 수 많은 특징에 기반하여, 표피 피부 암 및 전암의 진단 정확도를 향상시키는 것으로 보고되었다. 그럼에도 불구하고, 이들 패턴의 인식은 피부학에서 장기간의 연수를 요구하고, 그리고 여전히 수많은 경우의 해석이 전문가들 사이에서 크게 달라진다.
공초점 현미경은 표피내 케라티노사이트의 세포 이미지 해석에 기반하고, 표준 조직학과의 상호관계와 함께 병리학-관련 패턴의 세포 형태학 인식에 다시 기반하여, 표피 피부 암 및 전암의 진단에서 유용할 수 있다. 이 기술이 표피 피부 암 및 전암의 진단 정확도를 증가시킴에도 불구하고, 특정한 피부 병소에 대한 제한이 설명되어 왔다.
형태학 패턴 인식에 의한 생검으로부터의 암 조직의 기존 병리조직학적 식별은 병리조직학적 평가의 주요 결점이 병리학자 사이에서의 진단 및 해석 차이를 지연시킴에도 불구하고, 피부 종양의 임상 진단을 위한 황금 표준(gold standard)을 유지한다.
허위-음성 결과를 감소시키기 위하여, 더 짧은 기간에 "사례를 결정하는 데에 어려움"의 진단 잠재성을 개선시키기 위한 새로운 및 보충적인 진단 기술의 요구가 증가되었다. 따라서, 오늘날 임상 피부과학에서 이상적으로 인간 해석을 대체하는 피부 종양의 임상 진단을 보완하기 위해 실시간 일차 및 후속 스크리닝에 적용될 수 있는 신규하고 신속한, 비-침습성 진단 기술이 절실히 필요하다.
적외선 (IR) 마이크로분광법은 임의의 해부학상 위치에서 생검으로부터의 비염색 조직의 분광기 평가를 위한 도구이다. 외부 대조-유도제의 요구 없이 화학 조성물 및 세포 성분의 고유 특성에 기반한 세포 성분의 용이한 가시화를 허용하여, 이 기술은 핵산, 단백질, 지질, 물의 분자에 대한 독특한 스펙트럼 지문, 샘플-특이적 분자 정보를 제공하고, 따라서 잠재적 경로를 제공하여 질병에 대한 진단 마커를 얻는다.
여러 가지 인간 암으로부터의 샘플에서 생물화학적 변이에 대한 이의 민감성 때문에 암 조직의 분광 분석이 진단 기술로 상당한 주목을 받았다.
피부 조직 IR 흡광 스펙트럼은 임상적으로 유용한 바이오마커의 개발을 위한 특성에 모두 적합하다. 세포에서 가장 풍부한 종류인, 단백질은 피부를 비롯한 세포 및 조직의 관찰된 스펙트럼에서 가장 두드러지는데 그 이유는 이들내 단백질 농도가 약 60%이기 때문이다. 양성, 전악성 및 악성 피부 암으로부터의 IR 스펙트럼내 핵산은 항상 단백질의 존재 하에 관찰되었다. 핵산 DNA 및 RNA가 특히 중요한데, 그 이유는 그들이 그들의 구조 내에서 단백질의 독자성과 구조를 결정하는 유전 정보를 가지고 있기 때문이다. 중간-IR 흡광 스펙트럼은 핵산의 입체구조와 그들 입체구조의 변화에 대한 이의 높은 민감도, 염기 조성물의 식별, 염기-중첩 효과 및 염기-쌍 상호작용의 효과에 대한 이의 민감도 등 때문에, 세포의 단백질 유전정보학 전체를 나타내는 데에 가장 정보가 풍부하고 간결한 방식 중 하나이다. 이것은 개별적인 뉴클레오티드와 관련된 정보만을 제공하는 또 다른 진동 분광법 기술인, 라만(Raman) 분광법보다 IR 분광법 기술을 더 이롭게 만든다.
최근 보고는 양성, 전악성 및 악성 피부 병소로부터의 IR 스펙트럼에서 발현된 핵산과 단백질의 분자간 및 분자내 상호작용의 분석에 기반하여 인간 피부 종양에서의 피부 발암을 공통적으로 그리고 특이적으로 특성화하기 위해, 형태학적 변화가 나타나기 전 배양물내 암 세포의 생물학적 활성의 스펙트럼 변화를 식별한 결과에 기반하여, 고 민감도를 가진, 잠재적으로 강력한 분석 방법으로서 FT (푸리에(Fourier) 변환) IR 분광법을 증명한다.
이들 방법론적 이점으로 인하여, 표피 피부 암 및 전암의 예후, 진단 및 예측에 유용한, 인간 피부 조직내 정상 (건강한, 변화되지 않은) 세포 및 암 세포를 명백하게 구별할 수 있는, 일정하고 유의적인 스펙트럼 파라미터 (바이오마커)를 결정하고 확인하기 위한 것이 본 발명의 목적이다.
인간 피부 조직으로부터의 IR 스펙트럼에서 피부 암 바이오마커 밴드의 확인 및 검증은 각각의 환자에서 가장 유효한 치료법의 결정 및 심지어, 가장 유효한 약물 복용량의 결정에 추가로 영향을 줄 수 있어, 개인 맞춤형 의료(personalized medicine) 분야를 보조한다.
발명의 요약
본 발명은 약 1055 cm-1에서 다중선을 검출하기 위한 FTIR 마이크로 분광법을 이용하는 방법을 제시하며, 여기서 표피 피부 조직의 존재 및 증가된 발현은 표피 피부 암 및 전암의 진단 및 후속조치에 대해 나타낸다. 발명된 방법은 생검된 피부 암 조직 샘플의 IR 스펙트럼내, 핵산, DNA 및 RNA의 2개의 밴드의 강도 비율의 식별에 기반한다. 더욱 특정하게, 제공된 바이오마커 검출 방법은 정상적인 표피 피부 조직에서는 검출되지 않는, 표피 피부 암 조직내 약 1055 cm-1에서 식별된 다중선의 정성적 및 정량적 분석을 위한 빠르고 시약을 쓰지 않는 방법이다. 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서 DNA/RNA-트리아드 피크의 패턴화 출현과 함께 다중선의 검출은 특정한 유형의 종양 및 악성과의 관계를 추가적으로 나타내며, 또한 악성의 진행 및 악성으로의 진행을 나타낸다.
방법은 수동으로 수행될 수 있고 다음 단계로 구성된다:
● 샘플에서 표피내 다수의 병리조직학적으로 증명된 병리학적 위치로부터, 이상적으로는 전체 병리학적 부위로부터 FTIR 스펙트럼을 얻는 단계,
● 각각의 개체 샘플 내에서 병리학적 부위와 스펙트럼 비교를 위해, 변하지 않은, 건강한 표피 전체에서 대조 측정치를 가능한대로, 얻는 단계,
● 아미드 I 피크에 대해 스펙트럼 각각을 정상화하는 단계 (1650 cm-1),
● 샘플에 대해 평균을 얻기 위해 모든 표피 측정치를 평균화하는 단계,
● 식별가능하다면, 900 내지 1300 cm-1에서 핵산의 경우 지정된 영역내 약 1055 cm-1에서 다중선의 할당 단계.
상기 방법에서, 확립된 조직병리학적 진단으로 생검된 조직 샘플은 다음 단계로 FTIR 마이크로분광법을 이용함으로써 측정을 위해 준비된다:
● 6 마이크로미터의 두께를 갖는, 정확히 순차적인 2개의 샘플 컷(cut)
● 조직병리학적인 평가를 위해 헤마톡실린과 에오신으로 1개의 샘플 컷을 염색하는 단계,
● FTIR 스펙트럼 수집을 위해 CaF2 슬라이드 글라스(slide glass) 상에서 1개의 샘플 컷을 공기-건조시키는 단계.
본 발명의 상기 및 다른 특성 및 이점 모두 추가로 설명될 것이다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 이제, 더욱 상세하게 설명될 것이다.
JEOL Co. Ltd. (Tokyo, Japan)의 FTIR 마이크로분광기, 모델 IR-MAU200은 피부 조직 샘플로부터의 IR 스펙트럼 획득을 위해 이용되었다. 각각의 측정 전에, 제조자에 의한 기기로 제공된 샘플을 이용하여 교정(calibration)이 수행되었고, 그리고 FTIR 마이크로분광기의 적절한 작동 조건이 확인되었다.
FTIR 마이크로분광법 측정을 위해 이용되는 조직 샘플은 건조 상태였고, 반면에 광학 현미경으로 관찰되는 해당 슬라이드는 병리학-관련 조직 구조의 식별을 위해 헤마톡실린 및 에오신으로 염색되었다.
초기에, 백그라운드 스펙트럼(background spectrum)이 수집되었다. 가시적인 빛을 이용하여 측정 부위가 선택된 후, 현미경은 IR 모드로 변경되었다. 고신호 대 잡음 비를 획득하기 위하여 공동-첨가된 스캔 횟수가 127회까지 증가되었다. 측정에서 이용된 조리개 크기는 25 x 25 마이크로미터였다. 4 cm-1의 해상도에서 측정된 스펙트럼은 800 내지 4000 cm-1의 파상수 범위에 걸쳐 있었다.
측정된 모든 FTIR 스펙트럼에 적용되는 스펙트럼 가공처리 방법은 다음 단계 포함하였다:
● 기기의 고주파 잡음을 감소시키기 위하여, 필요하다면, 스파이크(spike)를 제거 및 평활화(smoothing)하는 단계,
● 기저선의 이동으로 인한 스펙트럼 간의 비유사성을 제거하기 위하여, 기저선 보정하는 단계,
● 펩티드 기의 수소 결합 및 분자 입체구조에서의 작은 변화에 대한 이의 고 민감도로 인해, 약 1650 cm-1에서 아미드 I를 정상화하는 단계,
● 900-1700 cm-1영역에서 피크 할당을 고르는 단계.
본 발명은 표피 피부 암 조직에서의 약 1055 cm-1의 다중선에서, 핵산, DNA 및 RNA에 대한 두 개의 밴드의 강도 비율을 검출하기 위한 다음 단계를 포함하였다:
● 약 1055 cm-1에서 다중선의 할당 단계,
● 약 1055 cm-1에서 할당된 다중선의 평균 값의 계산 단계,
● 강도 비율 I1055/I1245의 계산 단계.
하기 실시예에서 이용된 데이터는 일본, 도쿠시마의 도쿠시마 대학, 피부병학 부서 (Department of Dermatology, Tokushima University, Tokushima, Japan)의 생검 보관소로부터 조직병리학적으로 확인된 조직 표본으로부터 얻는다.
종합하여, 피부 암 조직 샘플에서 이용되는 데이터는 24명의 대상으로부터 추출되었다.
데이터베이스는 4명의 건강한 대상내 정상적인 표피로부터 측정된 21개의 스펙트럼의 데이터베이스와 비교하여, BCC를 가진 6명의 환자, SCC를 가진 4명의 환자 그리고 MM을 가진 3명의 환자를 비롯한, 표피 피부 암을 가진 13명의 환자로부터 측정된 87개의 스펙트럼을 갖는다.
실시예에서, 전암 피부병인, 보웬병(Bowen's disease)을 가진 3명의 환자로부터 측정된 80개의 스펙트럼을 갖는 데이터베이스 그리고 양성 복합 유형인, 멜라닌세포 모반을 가진 4명의 환자로부터 측정된 80개의 스펙트럼을 갖는 데이터베이스가 또한 이용되었다.
실시예
표 1-7은 BCC, SCC, MM, 보웬병 및 멜라닌세포 모반을 가진 환자로부터 이용된 데이터의 요약이다.
표피 피부 암에서 다중선의 검출
약 1055 cm-1에서 피크 수준으로 발현된 다중선인, 피부 암 바이오마커는 측정된 모든 표피 피부 암 - BCC, SCC 및 MM에서 유의적이었는데, 그 이유는 정상적인 피부 조직 표피에서는 이 피크의 출현이 없었기 때문이다. 약 1055 cm-1에서 피크의 평균 강도는 BCC 환자에서 0.09 내지 0.47; SCC 환자에서 0.13 내지 0.66; MM 환자에서 0.14 내지 0.26에서 변화하였고, 따라서 그들 변동 범위 내에서 저, 중 그리고 고로 상이하였다.
실시예 1
기저 세포 암종 (BCC)
표 1은 BCC를 가진 6명의 환자에서 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 다중선의 평균 값, 변차를 가진 평균 강도 비율 (I1055/I1245) 그리고 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 평균 피크 위치의 분석으로 바이오마커 밴드의 IR 스펙트럼 검출을 요약한다.
BCC를 가진 6명의 환자로부터 제시된 52개의 스펙트럼에서, 강도 비율 I1055/I1245에 의한 바이오마커 밴드의 강도는 0.59 내지 0.96에서 변화하였다.
다중선의 오른쪽-이동 평균 피크 위치는 바이오마커의 강도 수준으로부터 독립적으로 4명의 환자에서 관찰되었다. 그럼에도 불구하고, 바이오마커의 평균 피크 위치에 대한 오른쪽-이동 변차는 BCC를 가진 모든 환자에서 관찰되었다.
실시예 2
편평 세포 암종 (SCC)
표 2는 SCC를 가진 4명의 환자에서 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 다중선의 평균 값, 변차를 가진 평균 강도 비율 (I1055/I1245) 그리고 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 평균 피크 위치의 분석으로 바이오마커 밴드의 IR 스펙트럼 검출을 요약한다.
SCC를 가진 4명의 환자로부터 제시된 20개의 스펙트럼에서, 강도 비율 I1055/I1245에 의한 바이오마커 밴드의 강도는 SCC를 가진 3명의 환자에게서만 제시되었고 그리고 0.77 내지 1.00에서 변화하였다.
약 1055 cm-1에서 다중선의 평균 피크 위치에 대한 오른쪽-이동 변차는 SCC를 가진 3명의 환자에서 관찰되었지만, 오른쪽-이동 평균 피크 위치는 상이한 강도 수준으로 SCC를 가진 2명의 환자에서 검출되었다.
실시예 3
악성 흑색종 (MM)
표 3은 MM을 가진 3명의 환자에서 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 다중선의 평균 값, 변차를 가진 평균 강도 비율 (I1055/I1245) 그리고 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 평균 피크 위치의 분석으로 바이오마커 밴드의 IR 스펙트럼 검출을 요약한다.
MM을 가진 2명의 환자의 표피에서 얻은 11개의 스펙트럼에서, 강도 비율 I1055/I1245에 의한 바이오마커 밴드의 강도는 0.47 내지 0.69에서 변화하였다.
MM을 가진 2명의 환자에서 검출가능한 다중선의 왼쪽-이동 평균 피크 위치는 1043 내지 1064 cm-1에서 큰 변차를 보여주었다.
실시예 4
BCC vs. SCC vs. MM vs. 건강한 표피
표 4는 피부 표피 암 (BCC, SCC, MM)을 가진 측정된 모든 환자 vs. 건강한 대상에서 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 다중선의 평균 값, 변차를 가진 평균 강도 비율 (I1055/I1245) 그리고 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 평균 피크 위치의 분석으로 바이오마커 밴드의 IR 스펙트럼 검출을 요약한다.
약 1055 cm-1에서 바이오마커 밴드의 유의적인 평균 값은 건강한 표피에서 피크 출현 없음과 비교하여, MM의 경우 0.20, BCC의 경우 0.30 그리고 SCC의 경우 0.36으로 계산되었다.
강도 비율 I1055/I1245에 의한 바이오마커 밴드의 강도는 MM의 경우 0.58, 그리고 서로 유사하게, BCC의 경우 0.83 그리고 SCC의 경우의 0.86이었다.
바이오마커 밴드의 오른쪽-이동 평균 피크 위치는 BCC를 가진 6명의 환자와 SCC를 가진 3명의 환자에서 각각 1057 cm-1 및 1058 cm-1로 유사하였다. MM을 가진 2명의 환자에서 바이오마커 밴드의 다변량 왼쪽-이동 평균 피크 위치는 1052 cm-1에서 검출되었다.
표피 전암에서 다중선의 검출
전암 피부병인, 보웬병은 소위 상피내 암(carcinoma in situ)이라고 불리우는, 피부 암의 가장 초기 형태이다. 침윤성 암종으로 진행시키기 위해 치료되지 않은 경우가 보고된다.
실시예 1
보웬병
표 1은 보웬병을 가진 3명의 환자에서 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 다중선의 평균 값, 변차를 가진 평균 강도 비율 (I1055/I1245) 그리고 변차를 가진 약 1055 cm-1에서의 평균 피크 위치의 분석으로 바이오마커 밴드의 IR 스펙트럼 검출을 요약한다.
보웬병을 가진 3명의 환자에서의 표피에서 측정된 70개의 스펙트럼에서, 2명의 환자에서의 단지 13개의 스펙트럼이 약 1055 cm-1에서 다중선, 바이오마커 밴드의 출현을 선별적으로 검출하였다.
따라서, 조직병리학적으로 증명된 보웬병을 가진 1명의 환자에서, 3개의 IR 스펙트럼에 기반하여 계산된 바이오마커 밴드의 평균 값은 0.15였으며, 이때 변차는 0.13 내지 0.16으로 적었다. 강도 비율 I1055/I1245에 의한 바이오마커 밴드의 강도는 0.66이었으며, 0.63 내지 0.69에서 변화하였다. 1053 cm-1에서 왼쪽-위치된 평균 피크는 1051 내지 1056 cm-1에서 변화하였다.
보웬병을 가진 조직병리학적으로 증명된 환자에서, 10개의 IR 스펙트럼에 기반하여 계산된 바이오마커 밴드의 평균 값은 0.26이었으며 이때 0.22 내지 0.29의 범위에서 변하였다. 강도 비율 I1055/I1245에 의한 바이오마커 밴드의 강도는 0.77이었으며, 0.63 내지 1.00에서 변화하였다. 측정된 다른 환자와 유사하게, 1052 cm-1에서 왼쪽-위치된 평균 피크는 1050 내지 1057 cm-1에서 변화하였다.
실시예 2
보웬병 vs. SCC vs. 건강한 표피
표 2는 SCC, 보웬병을 가진 측정된 모든 환자 vs. 건강한 대상에서 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 다중선의 평균 값, 변차를 가진 평균 강도 비율 (I1055/I1245) 그리고 변차를 가진 약 1055 cm-1에서의 평균 피크 위치의 분석으로 바이오마커 밴드의 IR 스펙트럼 검출을 요약한다.
검출된 바이오마커 밴드는 SCC (SCC를 가진 3명의 환자 중 2명의 환자에서 측정된 모든 스펙트럼에서)와 비교하여, 보웬병을 가진 환자 (3명의 환자의 70개의 스펙트럼 중 단지 2명의 환자의 13개 스펙트럼에서)에서 측정된 IR 스펙트럼의 출현이 일정하지 않았고 두드러지지도 않았다. 보웬병의 경우 바이오마커의 평균 값은 0.21이며, 이때 변차는 0.15 내지 0.26이었지만, SCC의 경우 바이오마커의 평균 값은 0.36이며, 이때 변차는 0.13 내지 0.66이었다.
강도 비율 I1055/I1245에 의한 바이오마커 밴드의 강도는, 바이오마커의 계산된 SCC 평균 강도가 0.86이며, 이때 변차는 0.77 내지 1.00인 것과 비교하여, 보웬병에서 더 낮았으며, 계산된 평균이 0.72이고, 이때 변차는 0.66 내지 0.81이었다.
SCC를 가진 환자에서 1057 cm-1에서의 평균 피크의 오른쪽-이동 위치와 비교하여, 보웬병을 가진 환자에서 1053 cm-1에서의 평균 피크의 왼쪽-이동 위치의 검출이 명확하다.
멜라닌세포 모반에서 다중선의 검출
조직병리학적으로, 모반 세포 (멜라닌세포)는 보통, 표피의 기저층에 국한된다. 그들의 증식은 표피에서 (경계 모반), 표피와 진피에서 (복합 모반), 또는 진피에서만 (진피내 모반) 나타날 수 있다. 모든 유형의 모반은 멜라닌세포성 (모반세포성, 멜라닌세포성), 양성 모반이다.
따라서, 4명의 환자에서 양성 멜라닌세포 모반의 IR 스펙트럼의 비교 표피 획득을 위해 복합 모반의 조직병리학적으로 확인된 샘플을 이용하였다.
실시예 1
표 1은 복합 모반 유형인, 양성 멜라닌세포 모반을 가진 4명의 환자에서 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 다중선의 평균 값, 평균 강도 비율 (I1055/I1245) 그리고 변차를 가진 약 1055 cm-1에서의 평균 피크 위치의 분석으로 바이오마커 밴드의 IR 스펙트럼 검출을 요약한다.
약 1055 cm-1에서 바이오마커 밴드는 멜라닌세포 모반, 복합 유형 모반을 가진 측정된 모든 환자에서 검출되었지만, 일정하게 검출된 것은 아니다. 표피에서, 바이오마커 밴드는 멜라닌세포 모반을 가진 4명의 환자에서 얻은 총 48개의 스펙트럼 중 26개의 스펙트럼에서: 환자 1에서 측정된 12개의 스펙트럼 중 5개에서, 환자 2에서 측정된 10개의 스펙트럼 모두에서, 환자 3에서 측정된 8개의 스펙트럼 중 2개의 스펙트럼에서, 그리고 환자 4에서 측정된 18개의 스펙트럼 중 9개의 스펙트럼에서 검출되었다.
멜라닌세포 모반을 가진 4명의 환자에서, 검출된 바이오마커에 대한 평균 값은 0.17 내지 0.24에서 변화하였다.
강도 밴드 비율 I1055/I1245에 의한 검출된 바이오마커 밴드의 평균 강도는 멜라닌세포 모반을 가진 환자에서 0.59 - 0.75 내의 범위를 가졌다.
멜라닌세포 모반을 가진 환자에서 바이오마커에 대한 평균 피크 위치는 1053 내지 1055 cm-1에서, 따라서 왼쪽-이동 위치로 결정되었다.
실시예 2
MM vs. MN vs. 건강한 표피
표 2는 MM, 멜라닌세포 모반 (MN) (양성 복합 모반)을 가진 측정된 모든 환자 vs. 건강한 대상에서 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 다중선의 평균 값, 변차를 가진 평균 강도 비율 (I1055/I1245) 그리고 변차를 가진, 약 1055 cm-1에서의 평균 피크 위치로 바이오마커의 IR 스펙트럼 검출을 요약한다.
검출된 바이오마커 밴드는 MM (MM을 가진 3명의 환자 중 2명의 환자에서 측정된 모든 스펙트럼에서)과 비교하여, 멜라닌세포 모반을 가진 환자 (4명의 환자에서 측정된 총 48개의 스펙트럼 중에서 단지 26개의 스펙트럼에서)에서 측정된 IR 스펙트럼의 출현이 일정하지 않았고 두드러지지도 않았다.
MM의 경우 평균 값이 0.20이며, 이때 변차는 0.14 내지 0.26인 것과 유사하게, 멜라닌세포 모반의 경우 바이오마커의 평균 값도 0.20이며, 이때 변차는 0.17 내지 0.24였다.
강도 비율 I1055/I1245에 의한 바이오마커 밴드의 강도는 멜라닌세포 모반과 MM을 가진 환자에서 유사하였다.
멜라닌세포 모반을 가진 환자에서 평균 피크가 1053 cm-1 내지 1055 cm-1에서 변화된다는 유일한 차이점만 가지고, 멜라닌세포 모반을 가진 환자에서는 1053 cm-1에서 그리고 MM을 가진 환자에서는 1052 cm-1에서 평균 피크의 유사한 왼쪽-이동 위치가 검출되었지만, MM을 가진 환자에서 평균 피크는 1043 cm-1 내지 1064 cm-1의 큰 변차를 가졌다.
DNA/RNA 트리아드 피크 (1071, 1084, 1095 cm
-1
) 패턴과 다중선 (1055 cm
-1
)의 종양-관련 검출
양성, 전악성 및 악성 피부 암 조직으로부터 IR 흡광 스펙트럼에서, 약 1055 cm-1에서의 다중선은 피부 종양의 병리학 유형과 관련하여, 상이한 모양과 강도로, 약 1071, 1084 및 1095 cm-1에서 DNA/RNA 트리아드 피크와 항상 결합된다.
더욱이, 다중선의 활성은 상이한 표피 피부 암을 가진 환자에서의 DNA/RNA 트리아드 피크에서 가장 돌출된 피크의 활성과 상호작용하는 것으로 보고되었다 [PCT/EE2013/000001].
실시예 1
기저 세포 암종 (BCC)
표 1은 BCC를 가진 6명의 환자에서 약 1055 cm-1에서의 표피에서 검출된 바이오마커 평균 값 그리고 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드내 피크의 평균 값을 요약한다.
BCC를 가진 모든 환자에서, 약 1055 cm-1에서 검출된 바이오마커 밴드는 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드 피크 출현과 명확하게 연관된다.
표 1에 나타난 결과에서 세 가지 패턴을 확인한다:
● 1084/1085 cm-1과 1055 cm-1 (4명의 환자에서),
● 1071, 1084/1085, 1095 cm-1과 1055 cm-1 (1명의 환자에서),
● 1084/1085, 1095 cm-1과 1055 cm-1 (1명의 환자에서).
실시예 2
편평 세포 암종 (SCC)
표 2는 SCC를 가진 4명의 환자에서 약 1055 cm-1에서의 표피에서 검출된 바이오마커 평균 값 그리고 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드내 피크의 평균 값을 요약한다.
SCC를 가진 모든 환자에서, 약 1055 cm-1에서 검출된 바이오마커 밴드는 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드 피크 출현과 명확하게 연관된다.
표 2에 나타난 결과에서 세 가지 패턴을 확인한다:
● 1084/1085 cm-1과 1055 cm-1 (1명의 환자에서),
● 1071, 1084/1085, 1095 cm-1과 1055 cm-1 (2명의 환자에서),
● 1084/1085, 1095 cm-1과 1055 cm-1 (1명의 환자에서).
실시예 3
악성 흑색종 (MM)
표 3은 MM을 가진 3명의 환자에서 약 1055 cm-1에서의 표피에서 검출된 바이오마커 평균 값 그리고 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드내 피크의 평균 값을 요약한다.
MM을 가진 모든 환자에서, 약 1055 cm-1에서 검출된 바이오마커 밴드는 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드 피크 출현과 명확하게 연관된다.
표 3에 나타난 결과에서 세 가지 패턴을 확인한다:
● 1071, 1084/1085, 1095 cm-1과 1055 cm-1 (1명의 환자에서),
● 1084/1085, 1095 cm-1과 1055 cm-1 (1명의 환자에서),
● 검출된 1084/1085 cm-1과 검출 안 된 1055 cm-1 (1명의 환자에서).
실시예 4
보웬병
표 4는 보웬병을 가진 3명의 환자에서 약 1055 cm-1에서의 표피에서 검출된 바이오마커 평균 값 그리고 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드내 피크의 평균 값을 요약한다.
보웬병을 가진 모든 환자에서, 약 1055 cm-1에서 검출된 바이오마커 밴드는 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드 피크 출현과 명확하게 연관된다.
표 4에 나타난 결과에서 두 가지 패턴을 확인한다:
● 1084/1085 cm-1과 1055 cm-1 (2명의 환자에서),
● 검출된 1084/1085 cm-1과 검출 안 된 1055 cm-1 (1명의 환자에서).
실시예 5
멜라닌세포 모반
표 5는 멜라닌세포 모반을 가진 4명의 환자에서 약 1055 cm-1에서의 표피에서 검출된 바이오마커 평균 값 그리고 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드내 피크의 평균 값을 요약한다.
멜라닌세포 모반을 가진 모든 환자에서, 약 1055 cm-1에서 검출된 바이오마커 밴드는 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드 피크 출현과 명확하게 연관된다.
표 5에 나타난 결과에서 두 가지 패턴을 확인한다:
● 1084/1085 cm-1과 1055 cm-1 (1명의 환자에서),
● 1071, 1084/1085 cm-1과 1055 cm-1 (3명의 환자에서).
실시예 6
건강한 표피 vs. BD vs. MN vs. MM vs. BCC vs. SCC
표 6은 4명의 건강한 대상에서, 보웬병을 가진 3명의 환자에서, 멜라닌세포 모반을 가진 4명의 환자에서, MM을 가진 3명의 환자에서, SCC를 가진 4명의 환자에서 그리고 BCC를 가진 6명의 환자에서 약 1055 cm-1에서의 표피에서 검출된 바이오마커 평균 값 그리고 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드내 피크의 평균 값을 요약한다.
표 6에서 나타난 결과는 표피 (BCC, SCC, MM, 보웬병, 멜라닌세포 모반)에서 측정된 모든 병리학에서 약 1055 cm-1에서의 바이오마커 밴드를 검출하지만, 건강한, 비-병리학적 표피에서는 바이오마커 밴드가 검출되지 않았다는 점을 보여준다.
양성 피부 종양의 경우 0.21, 전악성 피부 종양의 경우 0.21 그리고 악성 피부 종양, MM의 경우 0.20, BCC의 경우 0.29 그리고 SCC의 경우 0.36으로 약 1055 cm-1에서 검출된 바이오마커 밴드의 평균 값은 유의적이다.
하지만, 단독으로, BCC를 가진 6명의 환자에서 그리고 SCC를 가진 2명의 환자에서 바이오마커의 평균 값은 MM을 가진 2명의 환자에서, MN을 가진 4명의 환자에서 그리고 보웬병을 가진 3명의 환자에서의 바이오마커의 평균 값보다 훨씬 더 높다.
중요하게도, MM을 가진 2명의 환자에서, 표피에서 검출된 바이오마커 밴드는 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드내 모든 피크의 출현과 매우 연관되며, 이는 멜라닌세포 모반 (양성 복합 모반) 및 보웬병 (전암성 피부병)을 가진 환자에서는 관찰되지 않는다. DNA/RNA 트리아드내 모든 피크의 출현과 함께 바이오마커 밴드 검출의 동일한 패턴은 SCC와 BCC 환자에서 관찰된다.
따라서, 멜라닌세포 모반 (양성 복합 모반)을 가진, 표피에서 측정된 환자에서, 약 1055 cm-1에서의 바이오마커 밴드 검출은 약 1071 cm-1 및 1084/1085 cm-1에서 DNA/RNA 트리아드내 2개의 피크 출현과 연관되지만, 약 1095 cm-1에서는 전혀 그렇지 않다.
보웬병을 가진 2명의 환자에서, 0.20의 검출된 바이오마커 밴드의 평균 값은 약 1084/1085 cm-1에서의 DNA/RNA 트리아드내 1개의 피크 출현과 연관된다.
Claims (12)
- 인간 표피 암 조직 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드에서 약 1055 cm-1에서의 핵산, DNA 및 RNA 분자에 상응하는, 다중선을 검출하는 방법이되, 양성, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)의 진단, 예후 및 후속조치에 관련된 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 주파수 밴드 범위에 걸쳐 단독으로 그리고 DNA/RNA 트리아드(triad)내 DNA 서열의 패턴화 출현과 조합하여 결정되므로 악성의 진행 및 악성으로의 진행을 나타낼 수 있으며, 상기 방법은 하기로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법:
(i) IR 스펙트럼 바이오마커 밴드를 양성, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)에 관련되어 있을 수도 있는 800-4000 cm-1 영역내 주파수 밴드의 범위에 걸쳐 하기와 같이 식별하는 단계:
(a) 건강한 표피에 특이적인 출현 없음,
(b) 양성 및 전악성 피부 종양(들)에 특이적인 비 일정한 출현,
(c) 악성 피부 종양(들)에 특이적인 일정한 출현,
(ii) 양성, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)에 관련된 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 밴드 위치의 "왼쪽-이동 그리고 1055 cm-1 전" 또는 "오른쪽-이동 그리고 1055 cm-1 후"로서, 이동 결정 단계,
(iii) 양성, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)에 관련된 이의 평균 값으로 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 수준을 하기 범위 내에서 결정하는 단계:
(a) 양성 피부 병소(들)에 특이적인 변동 범위(들) 이내,
(b) 전악성 피부 병소(들)에 특이적인 변동 범위(들) 이내,
(c) 악성 피부 병소(들)에 특이적인 변동 범위(들) 이내,
(iv) 양성, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)에 관련된, 이의 강도 비율, I1055I1245로 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 수준을 하기 범위 내에서 결정하는 단계:
(a) 양성 피부 병소(들)에 특이적인 변동 범위(들) 이내,
(b) 전악성 피부 병소(들)에 특이적인 변동 범위(들) 이내,
(c) 악성 피부 병소(들)에 특이적인 변동 범위(들) 이내,
(v) 양성, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)에 관련되어 있을 수도 있는, 즉 DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열의 패턴화 출현인, 700-4000 cm-1 영역에서 주파수 밴드의 범위에 걸쳐 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서 주파수 밴드의 범위를 식별하는 단계,
(vi) 양성, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)에 관련된 이들 평균 값으로 하기와 같은 DNA/RNA 트리아드의 DNA 서열내 IR 스펙트럼 밴드의 수준을 결정하는 단계:
(a) 양성 피부 병소(들)에 특이적인 DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열,
(b) 전악성 피부 병소(들)에 특이적인 DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열,
(c) 악성 피부 병소(들)에 특이적인 DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열,
(vii) DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 나타난 밴드의 결정된 평균 값과 조합하여 IR 스펙트럼 바이오마커의 결정된 평균 값을 이용하여, 패턴 인식 기술을 이용함으로써, 하기와 같이 병소를 평가하는 단계:
(a) 양성 피부 병소(들) 특이적,
(b) 전악성 피부 병소(들) 특이적,
(c) 악성 피부 병소(들) 특이적. - 제1항에 있어서, DNA/RNA 트리아드에서 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 3개의 스펙트럼 밴드의 DNA 서열 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 세트는 악성 피부 종양 (병소)의 진단을 지원하기 위해 다음 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도:
(i) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드내 두 가지 핵산 간에 가장 유의적인 차이, 따라서 BCC, SCC 및 MM의 진단을 지원함,
(ii) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 오른쪽-이동 위치, 따라서 BCC의 진단을 지원함,
(iii) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 왼쪽-이동 위치, 따라서 악성 피부 종양 (병소)의 진단, MM의 진단을 지원함,
(iv) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드 및 다중선의 고 수준 평균 값, 따라서 BCC 및 SCC의 진단을 지원함,
(v) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드 및 다중선의 고 수준 강도 비율, 따라서 BCC 및 SCC의 진단을 지원함,
(vi) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드 및 다중선의 중간 수준 평균 값과 강도 비율, 따라서 MM의 진단을 지원함,
(vii) "0.43(1055); 0.36(1071); 0.48 (1084/1085), 0.36 (1095)"로서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 BCC의 진단을 지원함,
(viii) "0.30(1055); 0.35(1071); 0.29 (1084/1085); 0.34 (1095)"로서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 SCC의 진단을 지원함,
(ix) "0.26(1055); 0.27(1071); 0.29 (1084/1085); 0.30 (1095)"로서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 MM의 진단을 지원함. - 제1항에 있어서, DNA/RNA 트리아드에서 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 2개의 스펙트럼 밴드의 DNA 서열 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커의 세트는 악성 피부 종양 (병소)의 진단을 지원하기 위해 다음 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도:
(i) DNA/RNA 트리아드에서 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 2개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드내 두 가지 핵산 간에 다양한 유의적인 차이, 따라서 BCC, SCC 및 MM의 진단을 지원함,
(ii) DNA/RNA 트리아드에서 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 2개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 오른쪽-이동 위치, 따라서 SCC의 진단을 지원함,
(iii) DNA/RNA 트리아드에서 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 2개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 왼쪽-이동 위치, 따라서 MM의 진단을 지원함,
(iv) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드 및 다중선의 중간 수준의 평균 값, 따라서 BCC, SCC 및 MM의 진단을 지원함,
(v) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드 및 다중선의 고 수준 강도 비율, 따라서 BCC 및 SCC의 진단을 지원함,
(vi) DNA/RNA 트리아드에서 모든 밴드 및 다중선의 저 수준 강도 비율, 따라서 MM의 진단을 지원함,
(vii) "0.19(1055); "X"(1071); 0.23 (1084/1085); 0.08 (1095)"로서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 BCC의 진단을 지원함,
(viii) "0.13(1055); "X"(1071); 0.16 (1084/1085); 0.14 (1095)"로서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 SCC의 진단을 지원함,
(ix) "0.14(1055); "X"(1071); 0.27 (1084/1085); 0.18 (1095)"로서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 MM의 진단을 지원함. - 제1항에 있어서, DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 1084/1085 cm-1에서의 1개의 스펙트럼 밴드의 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 세트는 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)의 진단을 지원하기 위해 다음 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도:
(i) 평균 값과 강도 비율에 있어서 DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 1084/1085 cm-1에서의 1개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드내 두 가지 핵산 간에 매우 다양한 유의적 차이, 따라서 BCC의 진단을 지원함,
(ii) 평균 값과 강도 비율에 있어서 DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 1084/1085 cm-1에서의 1개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드내 두 가지 핵산 간에 가장 유의적인 차이, 따라서 SCC의 진단을 지원함,
(iii) DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 1084/1085 cm-1에서의 1개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 오른쪽-이동 위치, 따라서 BCC 및 SCC의 진단을 지원함,
(iv) DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 1084/1085 cm-1에서의 1개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 왼쪽-이동 위치, 따라서 보웬병(Bowen's disease)의 진단을 지원함,
(v) 평균 값과 강도 비율에 있어서 DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 1084/1085 cm-1에서의 1개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드내 두 가지 핵산 간에 덜 유의적인 차이, 따라서 보웬병의 진단을 지원함,
(vi) "0.09(1055); "X"(1071); 0.16(1084/1085), "X"(1095)" 및 "0.44(1055); "X"(1071); 0.45(1084/1085); "X"(1095)" 사이에서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 BCC의 진단을 지원함,
(vii) "0.66(1055); "X"(1071); 0.65 (1084/1085); "X"(1095)"로서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 SCC의 진단을 지원함,
(viii) "0.15(1055); "X"(1071); 0.18(1084/1085); "X"(1095)" 및 "0.26 (1055); "X"(1071); 0.29(1084/1085); "X"(1095)" 사이에서 발현 평균 값의 DNA 서열 패턴, 따라서 보웬병의 진단을 지원함. - 제1항에 있어서, DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 1071 및 1084/1085 cm-1에서의 2개의 스펙트럼 밴드의 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 세트는 양성 피부 종양 (병소)의 진단을 지원하기 위해 다음 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도:
(i) DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 1071 및 1084/1085 cm-1에서의 2개의 스펙트럼 밴드의 동시 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 왼쪽-이동 위치, 따라서 멜라닌세포 모반의 진단을 지원함. - 제1항 내지 제5항에 있어서, DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 스펙트럼 밴드의 상이한 패턴화 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 세트는 가장 근접하게 일치하는 특정한 유형의 종양 (병소) (i)~(v)를 찾기 위해 이와의 관계를 나타내기 위한 다음 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도:
(i) 다음 패턴 중 하나 이상을 포함하는, BCC (기저 세포 암종):
(a) DNA/RNA 트리아드에서 약 1084/1085 cm-1에서의 1개의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 두드러짐,
● 0.09-0.47 내에서 다중선의 평균 값의 큰 변차를 특징으로 함,
● 0.59-0.96 내에서 다중선 강도의 큰 변차를 특징으로 함,
● 다중선의 오른쪽-이동 평균 피크 위치를 특징으로 함,
● 0.16 내지 0.45의 범위에서, 약 1084/1085 cm-1에서 밴드의 강도 비율의 큰 변차를 특징으로 함,
(b) 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 각각, 약 0.43 및 0.95로, 다중선의 고 수준 평균 값과 강도 비율에 대한 특성이 있음,
● DNA/RNA 트리아드에서 3개의 모든 밴드의 고 수준 평균 값에 대한 특성이 있으며, 여기서 약 1084/1085 cm-1에서 일정하게 돌출된 피크는 약 0.48의 평균 값을 가짐,
● 다중선의 오른쪽-이동 평균 피크 위치를 특징으로 함,
(c) 약 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 2개의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 각각, 약 0.19 및 0.23으로, 약 1084/1085 cm-1에서의 다중선 및 밴드의 중간 수준 평균 값을 특징으로 함,
● 약 1095 cm-1에서 밴드의 저 수준 평균 값과 비교되는, 약 1084/1085 cm-1에서의 돌출된 피크를 특징으로 함,
(ii) 다음 패턴 중 하나 이상을 포함하는, SCC (편평 세포 암종):
(a) 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 다중선의 오른쪽-이동 평균 피크 위치를 특징으로 함,
● 약 0.30으로 다중선의 고 수준 평균 값을 특징으로 함,
● 약 0.81로 다중선의 고 수준 강도 비율을 특징으로 함,
● 약 1071 및 1095 cm-1에서 밴드의 고 수준 평균 값을 특징으로 하며, 이들은 각각, 약 0.35 및 0.34로 DNA/RNA 트리아드에서 두드러짐,
(b) 약 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 다중선의 오른쪽-이동 평균 피크 위치를 특징으로 함,
● 각각, 약 0.13 및 0.77로, 다중선의 저 수준 평균 값과 강도 비율을 특징으로 함,
● 각각, 약 0.16 및 0.14로, DNA/RNA 트리아드에서 2개의 밴드의 저 수준 평균 값을 특징으로 하며, 여기서 약 1084/1085 cm-1에서 피크가 돌출됨,
(c) DNA/RNA 트리아드에서 약 1084/1085 cm-1에서의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 다중선의 오른쪽-이동 평균 피크 위치를 특징으로 함,
● 각각, 약 0.66 및 1.00으로, 다중선의 가장 고 수준의 평균 값 및 평균 강도 비율을 특징으로 함,
● 각각, 약 0.65로, 약 1084/1085 cm-1에서 밴드의 가장 고 수준의 평균 값을 특징으로 함,
(iii) 다음 패턴 중 하나 이상을 포함하는, MM (악성 흑색종):
(a) 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 각각, 약 0.26, 0.27, 0.29 및 0.30으로, 약 1071, 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 다중선 및 밴드의 유사 수준의 평균 값을 특징으로 하며, 여기서 약 1095 cm-1에서 밴드가 두드러짐,
(b) 약 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 2개의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 다중선의 왼쪽-이동 평균 피크 위치를 특징으로 함,
● 각각, 약 0.14 및 0.47로, 다중선의 저 수준 평균값 및 평균 강도 비율을 특징으로 함,
● 약 1095 cm-1에서 밴드의 저 수준 평균 값과 비교되는, 약 0.27의 평균 값을 가진 약 1084/1085 cm-1에서의 두드러진 밴드를 특징으로 함,
(iv) 다음 패턴 중 하나 이상을 포함하는, 보웬병:
(a) DNA/RNA 트리아드에서 약 1084/1085 cm-1에서의 1개의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 다중선의 왼쪽-이동 평균 피크 위치를 특징으로 함,
● 약 1055 cm-1에서 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 비-일정 발현을 특징으로 함,
● 각각, 0.15-0.26 및 0.18-0.29의 범위에서, 약 1084/1085 cm-1에서 다중선 및 밴드의 저 수준 및 중간 수준 평균 값을 특징으로 함,
● 0.66 내지 0.77의 범위에서 다중선의 평균 강도 비율을 특징으로 함,
(v) 다음 패턴 중 하나 이상을 포함하는, 멜라닌세포 모반:
(a) DNA/RNA 트리아드에서 약 1071 및 1084/1085 cm-1에서의 2개의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 두드러짐,
● 약 1084/1085 cm-1에서 돌출된 피크를 특징으로 함,
● 약 1071 및 1084/1085 cm-1에서 2개의 밴드와 함께 다중선의 저-범위 평균 값 및 평균 강도 비율을 특징으로 함,
● 다중선의 평균 피크 위치의 작은 변차,
(b) DNA/RNA 트리아드에서 약 1084/1085 cm-1에서의 1개의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 패턴, 이때 패턴은:
● 다중선의 0.24의 평균 값 및 0.75의 평균 강도 값을 특징으로 함,
● DNA/RNA 트리아드에서 약 1084/1085 cm-1에서의 밴드의 0.27의 평균 값을 특징으로 함,
● 다중선의 피크 위치 변차는 없음. - 제1항 내지 제6항에 있어서, DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 스펙트럼 밴드의 상이한 패턴화 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 세트는 다음 비교 중 하나 이상으로 악성의 진행 및 악성으로의 진행을 나타내기 위한 것임을 특징으로 하는 용도:
(i) 건강한 피부와 대조하여, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소) 간의 비교, 따라서 보웬병, 즉 표피내의 상피내 암종에서 SCC로의 진행을 지원하며, 하기를 특징으로 함:
(a) 건강한 표피 피부에서 다중선의 출현 없음 대 전악성 피부 종양에서 다중선의 비-일정 출현 대 악성 피부 종양에서 다중선의 일정한 출현,
(b) 1055평균: 건강한 표피 피부에서 "X" < 보웬병에서 "0.21" [범위 0.15-0.26] < SCC에서 "0.36" [범위 0.13-0.66],
(c) I1055/I1245: 건강한 표피 피부에서 "X" < 보웬병에서 "0.72" [0.66-0.77] < SCC에서 "0.86" [범위 0.77-1.00],
(d) 다중선의 평균 피크 위치: 건강한 피부에서 피크 출현 없음 대 보웬병에서 약 1053 cm-1 [1052-1053]에서의 왼쪽-이동 위치 대 SCC에서 약 1057 cm-1 [1054- 1060]에서의 오른쪽-이동 위치,
(e) DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 스펙트럼 밴드의 상이한 패턴화 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 세트의 보웬병에서 한 가지 패턴 대 SCC에서 세 가지 패턴,
(ii) 건강한 피부와 대조하여, 양성 및 악성 피부 종양 (병소) 간의 비교, 따라서 양성 모반에서 MM으로의 진행을 지원하며, 하기를 특징으로 함:
(a) 건강한 표피 피부에서, 다중선, "X"의 출현 없음 대 양성 모반에서 다중선의 비-일정 출현 대 MM에서 다중선의 일정한 출현,
(b) 1055평균: 건강한 표피 피부에서 "X" < 양성 멜라닌세포 모반에서 "0.20" [범위 0.17-0.24] < MM에서 "0.20" [범위 0.14-0.26],
(c) 다중선의 평균 피크 위치: 건강한 피부에서 피크 출현 없음 대 양성 멜라닌세포 모반에서 약 1054 cm-1 [1053-1055]에서의 위치 대 MM에서 약 1052 cm-1 [1043-1064]에서의 왼쪽-이동 위치
(d) DNA/RNA 트리아드에서 약 1071 및 1084/1085 cm-1에서의 2개의 밴드 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 양성 멜라닌세포 모반내 두드러진 패턴 대 DNA/RNA 트리아드내 DNA 서열에서 스펙트럼 밴드 -3개의 모든 스펙트럼 밴드에서 또는 약 1084/1085 및 1095 cm-1에서의 2개의 스펙트럼 밴드에서- 의 2개의 상이한 패턴화 출현과 약 1055 cm-1에서의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 MM에서의 두 가지 패턴,
(iii) 건강한 표피 피부와 비교하여 멜라닌세포 모반 (양성 피부 병소), 보웬병 (전악성 피부 병소), BCC (악성 피부 병소), SCC (악성 피부 병소) 및 MM (악성 피부 병소) 간의 비교, 따라서 양성 피부 암에서 전악성 피부 암으로 그리고 전악성 피부 암에서 악성 피부 암으로의 진행을 지원하며, 다음 패턴을 특징으로 함:
(a) "X"(1055); 0.50 (1071); 0.30 (1084/1085) < 0.50 (1095)"로서, 건강한 표피 피부에서 DNA/RNA 트리아드 피크의 평균 값으로 발현된 DNA 서열 패턴화 출현,
(b) "0.21"(1055); 0.19 (1071); 0.23 (1084/1085) < "X" (1095) "로서, 양성 피부 암인, 멜라닌세포 모반에서 DNA/RNA 트리아드 피크의 평균 값으로 발현된 DNA 서열 패턴화 출현,
(c) "0.2l" (1055); "X" (1071); 0.18 (1084/1085) < "X" (1095)"로서, 전악성 피부암인, 보웬병에서 DNA/RNA 트리아드 피크의 평균 값으로 발현된 DNA 서열 패턴화 출현,
(d) "0.36"(1055); "0.23" (1071); 0.31 (1084/1085) < "0.19" (1095)"로서, 전악성 피부암인, 편평 세포 암종에서 DNA/RNA 트리아드 피크의 평균 값으로 발현된 DNA 서열 패턴화 출현,
(e) "O.29"(1055); "0.36" (1071); 0.32 (1084/1085) < "022" (1095)"로서, 전악성 피부 암인, 기저 세포 암종에서 DNA/RNA 트리아드 피크의 평균 값으로 발현된 DNA 서열 패턴화 출현,
(f) "O.2O" (1055); "0.27" (1071); 0.31 (1084/1085) < "0.24" (1095)"로서, 전악성 피부암인, 악성 흑색종에서 DNA/RNA 트리아드 피크의 평균 값으로 발현된 DNA 서열 패턴화 출현. - 제1항에 있어서, 검출 단계는 적외선 분광계 및/또는 적외선 마이크로분광계로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, (iv)에서 약 1055 cm-1에서의 다중선의 IR 스펙트럼 바이오마커 밴드의 강도 비율, I1055/I1245의 계산은 IR 스펙트럼에서 포스포디에스테르 진동 (DNA)과 아미드 III의 조합에 상응하여, 약 1245 cm-1에서 피크에 대해 계산되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제7항에 있어서, 건강한 표피 조직 (표피), 그리고 양성, 전악성 및 악성 암 조직은 인간 조직이며, 상기 조직은 동물 조직에도 적용가능한 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제7항에 있어서, 공지된 양성, 전악성 및 악성 피부 종양 (병소)은 멜라닌세포 모반, 보웬병, 악성, 흑색종, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종으로 구성된 군에서 선택되고, 상기 피부 종양은 다른 양성, 전악성 및 악성 피부 종양에 적용가능하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제7항에 있어서, 양성, 전악성 및 악성 종양 (병소)은 피부 조직으로부터 생긴 것이고, 상기 종양은 다른 기관으로부터의 조직에도 적용가능한 것을 특징으로 하는 방법.
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