JP2019113555A - 赤外分光法による皮膚癌バイオマーカーの検出 - Google Patents
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Abstract
【課題】表皮皮膚癌および前癌の予後、診断、予測の指標を提供する。【解決手段】ヒト表皮皮膚組織のＩＲ（赤外）スペクトルにおいて、１０５５ｃｍ−１付近の多重線の存在、すなわち核酸であるＤＮＡおよびＲＮＡのバンドの強度比を検出する工程、多重線と共に、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークのパターン化した出現を検出することにより、特定の種類の腫瘍および悪性腫瘍との関係、また悪性腫瘍の進行および悪性腫瘍への進行を評価する工程を含む。【選択図】なし
Description
本発明は、概して１０５５ｃｍ−１付近の多重線のＩＲ（赤外）スペクトル帰属によって、生検由来のヒト皮膚表皮癌性組織における癌の分子バイオマーカーを同定する分野に関する。より具体的には、本発明はヒト表皮におけるＤＮＡ／ＲＮＡ比ピークの存在を認識して、扁平上皮細胞癌（ＳＣＣ）、基底細胞癌（ＢＣＣ）および悪性黒色腫（ＭＭ）を診断するための検出方法である、ＩＲ分光法に関する。皮膚癌バイオマーカーバンドの特異性および感度は、患者における治療の予後予測の決定に用いる皮膚癌のタイプおよびその進行と相関する。ヒト表皮皮膚癌性組織中の癌の分子バイオマーカーの定性的および定量的評価により、表皮皮膚癌および前癌の予後、診断および予測が全て一緒に提示される。多重線と、約１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークのパターン化した出現とを一緒に検出することにより、腫瘍および悪性腫瘍の特定の種類との関係がさらに示され、また悪性腫瘍の進行と悪性腫瘍への進行も示される。
代表的組織として皮膚組織を用いるが、バイオマーカーの検出方法の使用は、皮膚表皮組織測定に限られるものではなく、他の組織にも使用可能であることは、当業者には明らかであろう。
表皮皮膚癌の臨床診断の特異性および感度は約４０から８０％に変動する。その診断精度は臨床医の訓練や経験の長さに大きく依存し、訓練を受けた皮膚科医であれば８０％、上級研修医なら６２％、研修医なら５６％、非皮膚科医なら４０％との報告がある。したがって、皮膚で最も一般的な癌である基底細胞癌（ＢＣＣ）の臨床診断精度は、開業皮膚科医でもわずか６５％である。表皮の中央部分に由来する他の皮膚癌である、扁平上皮細胞癌（ＳＣＣ）は典型的な臨床例では診断が容易であるが、生殖器や唇上に位置する場合は診断が難しいことがあり、患者の約７５％において死を伴う誤診や急速な転移につながる。ボーエン病（表皮内癌ｉｎｓｉｔｕ）などの前癌性皮膚疾患やその他多くの疾患は、皮膚科クリニックにおける診断は難しいことが多いが、これは多くのその他皮膚病変がこれらとよく似るためである。悪性黒色腫（ＭＭ）の臨床診断は、良性色素性病変と混同し得ることが多く、８０％に及ぶ不必要な生検をもたらす。重要なのは、ＭＭと診断された患者は、終生モニタリングを受け、局所再発、転移、新たな悪性病変について検査されるべきだということである。
ダーモスコピーは、形態学的パターン認識確立のための多数の特性に基づいて、表皮皮膚癌および前癌の診断精度を向上することが報告されてきた。とはいえ、これらパターンの認識は皮膚科における長いトレーニングを要し、いまだに多くの症例が、専門家の間でも解釈が大きく分かれる。
共焦点顕微法は、表皮中のケラチノサイトの細胞画像の解釈に基づき、かつ、標準的な組織学と共に病理関連パターンの細胞形態学的認識にも基づき、表皮皮膚癌や前癌の診断に有用であり得る。この技術は表皮皮膚癌や前癌の診断精度を上げるが、特定の皮膚病変には限界があるとの記載がある。
形態学的パターン認識による生検由来癌性組織の従来の病理組織学的同定は、いまだに皮膚腫瘍の臨床診断にとってゴールドスタンダードであるが、その病理組織学的評価には主に診断の遅れや病理医間の解釈のばらつきといった欠点がある。
偽陰性結果を低減するための、より短い時間枠で「判定困難な症例」の診断可能性を改善するための新たな補助診断技術の必要性がますます増してきている。このように、リアルタイムプライマリおよびフォローアップスクリーニングに適用して皮膚腫瘍の臨床診断を補完でき、理想的には人間の解釈と申し分なく置き換わる、新規、迅速、非侵襲性の診断技術は、今日の臨床皮膚科学において緊急に必要である。
赤外（ＩＲ）顕微分光法は、あらゆる解剖学的部位の生検由来の未染色組織の分光評価用ツールである。外部コントラスト誘導剤を必要とせず、その固有の特性および化学組成に基づいて、細胞成分の容易な視覚化を可能にするこの技術は、試料特異的な分子情報、核酸、タンパク質、脂質、水の分子についての固有の指紋スペクトルをもたらし、疾患の診断マーカー取得のために有望な方法を提供する。
癌性組織の分光分析は、種々のヒト癌由来試料における生化学的変動に対するその感度による診断技術としてかなりの注目を集めてきた。
皮膚組織のＩＲ吸収スペクトルは、臨床的に有用なバイオマーカーの開発のための全ての特性に適合する。細胞中で最も豊富な種であるタンパク質は、皮膚を含む細胞および組織の観測スペクトル内で支配的であるが、それはその整合性（ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｅ）が約６０％であるためである。良性、前悪性および悪性皮膚癌由来のＩＲスペクトル中、核酸は常にタンパク質の存在下で観察されてきた。核酸であるＤＮＡおよびＲＮＡはその構造内にタンパク質の同一性や構造を決定する遺伝情報を担持するため、特に重要である。中赤外吸収スペクトルは、核酸の立体構造やその立体構造の転移に対する高い感度、塩基組成の同定、塩基対形成の相互作用および塩基スタッキング効果などに対する感度のため、細胞の全プロテオミクスを表すのに、最も情報に富んだ簡潔な方法の一つである。こうした点が、個々のヌクレオチドに関連する情報を提供するに過ぎない他の振動分光法やラマン分光法と比べて、ＩＲ分光法を有利にしている。
最近の報告では、形態学的変化の出現前の培養中癌性細胞における生物学的活性のスペクトル変化を同定し、良性、前悪性および悪性皮膚病変由来のＩＲスペクトルに出現した核酸およびタンパク質についての分子内および分子間相互作用分析によりヒト皮膚腫瘍における皮膚の発癌を一般的かつ特異的に特徴づけした結果に基づいて、ＦＴ（フーリエ変換）ＩＲ分光法が、潜在的に強力な高感度の分析方法であることが実証されている。
こうした方法論的利点により、本発明の目的は、表皮皮膚癌や前癌の予後、診断および予測に有用な、ヒト皮膚組織における正常（健康、変化なし）細胞と癌性細胞とを明確に識別可能な安定して有意なスペクトルパラメータ（バイオマーカー）を決定、検証することである。
ヒト皮膚組織由来のＩＲスペクトルにおける皮膚癌バイオマーカーバンドの検定と検証は、各患者にとって最も効果的な治療の決定や、最も効果的な薬物投与量の決定に更なる影響を与え得るものであり、オーダーメイド医療分野を支援すると考えられる。
本発明は、ＦＴＩＲ顕微分光法を用いて、その表皮皮膚組織における存在や発現の増加が表皮皮膚癌や前癌の診断および経過観察のための指標となる約１０５５ｃｍ−１の多重線を検出する方法を提供する。本発明の方法は、生検で得た皮膚の癌性組織試料のＩＲスペクトルにおいて核酸であるＤＮＡやＲＮＡの２つのバンドの強度比の同定に基づく。より具体的には、提供するバイオマーカー検出方法は、表皮癌性皮膚組織において、正常表皮皮膚組織では検出されない、同定した約１０５５ｃｍ−１の多重線の定性的および定量的分析のための迅速かつ試薬を用いない方法である。多重線と共にＤＮＡ／ＲＮＡ−トライアドピークの約１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１でのパターン化した出現の検出によりさらに特定の種類の腫瘍や悪性腫瘍との関係が示され、また悪性腫瘍の進行および悪性腫瘍への進行が示される。
本方法は、手動で実施可能であり、以下の工程からなる。
・試料上表皮内の、多数の組織病理学的に証明済の病的部位、理想的には全病理学エリアからＦＴＩＲスペクトルを取得。
・場合によっては、個体の各試料内病的部位とのスペクトル比較のため、変化の無い健常表皮全域の対照測定値を取得。
・各スペクトルをアミドＩピーク（１６５０ｃｍ−１）で規格化。
・全表皮測定値を平均して試料の平均値を取得。
・同定可能であれば、約１０５５ｃｍ−１の多重線を、９００〜１３００ｃｍ−１の間の核酸の特定領域内に帰属。
本方法は、手動で実施可能であり、以下の工程からなる。
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・全表皮測定値を平均して試料の平均値を取得。
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上述の方法において、既定の病理組織学的診断により生検で得た組織試料を、ＦＴＩＲ顕微分光法を用いた測定のために以下の工程により調製する。
・厳密に連続した、６μｍの厚さを有する２つの試料切片（ｃｕｔ）を取得。
・組織病理学的評価を行うため、１つの試料切片をヘマトキシリン及びエオシンで染色。
・ＦＴＩＲスペクトル収集のため、１つの試料切片をＣａＦ２スライドガラス上で風乾。
・厳密に連続した、６μｍの厚さを有する２つの試料切片（ｃｕｔ）を取得。
・組織病理学的評価を行うため、１つの試料切片をヘマトキシリン及びエオシンで染色。
・ＦＴＩＲスペクトル収集のため、１つの試料切片をＣａＦ２スライドガラス上で風乾。
本発明の上記特徴やその他の特徴の全ておよび利点についてさらに記載する。
本発明の方法をさらに詳細に記載する。
ＪＥＯＬ社（東京、日本）のＦＴＩＲ顕微分光計、ＩＲ−ＭＡＵ２００型は、皮膚組織試料からのＩＲスペクトル取得に用いられてきた。各測定前には、製造会社により機器と共に提供された試料を用いて較正を行い、かつＦＴＩＲ顕微分光計の適正な動作条件を確認した。
ＦＴＩＲ顕微分光法による測定に用いる組織試料は乾燥状態であり、一方、光学顕微鏡により観察する対応スライドは、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、病理関連の組織構造を同定した。
初めに、バックグラウンドスペクトルを収集した。測定部位を可視光を用いて選んだ後、顕微鏡をＩＲモードに変更した。共付加スキャン数は、高い信号対雑音比を達成するため１２７に増加させた。測定に用いた開口部のサイズは２５×２５マイクロメートルであった。４ｃｍ−１の分解能で測定したスペクトルは、８００〜４０００ｃｍ−１の間の波数範囲をカバーした。
全測定ＦＴＩＲスペクトルに適用するスペクトル前処理方法は、
・必要に応じて、高周波機器ノイズを低減するための、スパイク除去および平滑化、
・ベースラインのシフトによるスペクトル間の相違を排除するためのベースライン補正、
・分子立体構造やペプチド基の水素結合におけるわずかな変化に対するその高感度のため、約１６５０ｃｍ−１のアミドＩで規格化
・９００〜１７００ｃｍ−１領域内への帰属ピークの選択
を含んでいる。
全測定ＦＴＩＲスペクトルに適用するスペクトル前処理方法は、
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・９００〜１７００ｃｍ−１領域内への帰属ピークの選択
を含んでいる。
本発明の方法は、表皮皮膚癌性組織中１０５５ｃｍ−１付近の多重線において、核酸であるＤＮＡやＲＮＡについての２つのバンドの強度比を検出するための以下の工程を含んでいた。
・１０５５ｃｍ−１付近の多重線の帰属、
・帰属した１０５５ｃｍ−１付近の多重線の平均値を算出、
・強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５を算出。
実施例に用いたデータは、徳島大学医学部皮膚科教室（徳島県）の生検アーカイブからの組織病理学的に確認済の組織標本に由来する。
・１０５５ｃｍ−１付近の多重線の帰属、
・帰属した１０５５ｃｍ−１付近の多重線の平均値を算出、
・強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５を算出。
実施例に用いたデータは、徳島大学医学部皮膚科教室（徳島県）の生検アーカイブからの組織病理学的に確認済の組織標本に由来する。
併せて、皮膚癌性組織試料で用いたデータは、２４名の被験者から抽出した。
ＢＣＣ患者６名、ＳＣＣ患者４名およびＭＭ患者３名を含む、１３名の表皮皮膚癌患者から測定した８７個のスペクトルのデータベースと、健常被験者４名における正常表皮から測定した２１個のスペクトルのデータベースを比較。
実施例においては、ボーエン病（前癌性皮膚病）患者３名から測定した８０個のスペクトルのデータベースおよびメラノサイト母斑（良性、複合型）患者４名から測定した８０個のスペクトルのデータベースをも用いた。
表１から７は、ＢＣＣ、ＳＣＣ、ＭＭ、ボーエン病およびメラノサイト母斑患者から採用したデータをまとめたものである。
表皮皮膚癌における多重線の検出
皮膚癌バイオマーカーである、約１０５５ｃｍ−１のピークレベルで出現する多重線は、測定した全ての表皮皮膚癌、すなわちＢＣＣ、ＳＣＣ、ＭＭにおいて顕著であったが、正常皮膚組織表皮においてはこのピークの出現は皆無であった。約１０５５ｃｍ−１のピークの平均強度は、ＢＣＣ患者で０．０９から０．４７、ＳＣＣ患者で０．１３から０．６６、ＭＭ患者で０．１４から０．２６の間であり、その変動範囲は低、中、高と異なった。
皮膚癌バイオマーカーである、約１０５５ｃｍ−１のピークレベルで出現する多重線は、測定した全ての表皮皮膚癌、すなわちＢＣＣ、ＳＣＣ、ＭＭにおいて顕著であったが、正常皮膚組織表皮においてはこのピークの出現は皆無であった。約１０５５ｃｍ−１のピークの平均強度は、ＢＣＣ患者で０．０９から０．４７、ＳＣＣ患者で０．１３から０．６６、ＭＭ患者で０．１４から０．２６の間であり、その変動範囲は低、中、高と異なった。
（実施例１）
基底細胞癌（ＢＣＣ）
表１は、ＢＣＣ患者６名における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析による、バイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
基底細胞癌（ＢＣＣ）
表１は、ＢＣＣ患者６名における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析による、バイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
ここに示したＢＣＣ患者６名からの５２個のスペクトルにおいて、強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５による、バイオマーカーバンドの強度は０．５９から０．９６の間であった。
多重線の右にシフトした平均ピーク位置は、患者４名においてバイオマーカーの強度レベルとは独立して観察された。それにもかかわらず、バイオマーカーの平均ピーク位置について右にシフトした変動が、全てのＢＣＣ患者においてみられた。
（実施例２）
扁平上皮癌（ＳＣＣ）
表１は、ＳＣＣ患者４名における、約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置、の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
扁平上皮癌（ＳＣＣ）
表１は、ＳＣＣ患者４名における、約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置、の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
ここに示したＳＣＣ患者４名からの２０個のスペクトルにおいて、強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５によるバイオマーカーバンドの強度は、ＳＣＣ患者３名のみにおいて示され、０．７７から１．００の間であった。
約１０５５ｃｍ−１の多重線の平均ピーク位置について右にシフトした変動が、ＳＣＣ患者３名においてみられたが、右にシフトした平均ピーク位置が、ＳＣＣ患者２名において異なる強度レベルで検出された。
（実施例３）
悪性黒色腫（ＭＭ）
表３は、ＭＭ患者３名における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
悪性黒色腫（ＭＭ）
表３は、ＭＭ患者３名における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
ＭＭ患者２名の表皮にて取得した１１個のスペクトルにおいて、強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５によるバイオマーカーバンドの強度は、０．４７から０．６９の間であった。
ＭＭ患者２名において検出可能な多重線の左にシフトした平均ピーク位置は、１０４３から１０６４ｃｍ−１の間と、大きな変動を示した。
ＭＭ患者２名において検出可能な多重線の左にシフトした平均ピーク位置は、１０４３から１０６４ｃｍ−１の間と、大きな変動を示した。
（実施例４）
ＢＣＣ対ＳＣＣ対ＭＭ対健常表皮
表４は、測定した全ての表皮皮膚癌（ＢＣＣ、ＳＣＣ、ＭＭ）患者対健常被験者における、約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
ＢＣＣ対ＳＣＣ対ＭＭ対健常表皮
表４は、測定した全ての表皮皮膚癌（ＢＣＣ、ＳＣＣ、ＭＭ）患者対健常被験者における、約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
算出した約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドの平均値は、ＭＭで０．２０、ＢＣＣで０．３０、ＳＣＣで０．３６と、健常表皮においてピーク出現が皆無であったことと比較して、顕著であった。
強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５によるバイオマーカーバンドの強度は、ＭＭで０．５８であり、ＢＣＣで０．８３またＳＣＣで０．８６と互いにほぼ同じであった。
バイオマーカーバンドの右にシフトした平均ピーク位置は、ＢＣＣ患者６名とＳＣＣ患者３名にてほぼ同じで、それぞれ１０５７ｃｍ−１と１０５８ｃｍ−１であった。ＭＭ患者２名のバイオマーカーバンドは大きく変動し、左にシフトした平均ピーク位置が１０５２ｃｍ−１で検出された。
表皮前癌における多重線の検出
前癌性皮膚病であるボーエン病は、皮膚癌の最も早期の形であり、いわゆる上皮内癌である。未処置の症例は浸潤癌に進行するとの報告がある。
前癌性皮膚病であるボーエン病は、皮膚癌の最も早期の形であり、いわゆる上皮内癌である。未処置の症例は浸潤癌に進行するとの報告がある。
（実施例１）
ボーエン病
表１は、ボーエン病患者３名における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
ボーエン病
表１は、ボーエン病患者３名における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
ボーエン病患者３名の表皮で測定した７０個のスペクトルで、患者２名における１３個のスペクトルのみにおいて、バイオマーカーバンドの出現、約１０５５ｃｍ−１の多重線が選択的に検出された。
したがって、組織病理学的に証明済のボーエン病患者１名において、３個のＩＲスペクトルに基づいて算出したバイオマーカーバンドの平均値は０．１５であり、変動は小さく０．１３から０．１６の間であった。強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５によるバイオマーカーバンドの強度は０．６６であり、０．６３から０．６９の間であった。左に位置した１０５３ｃｍ−１の平均ピークは１０５１から１０５６ｃｍ−１の間であった。
別の組織病理学的に証明済のボーエン病患者１名において、１０個のＩＲスペクトルに基づいて算出したバイオマーカーバンドの平均値は０．２６であり、０．２２から０．２９の間の範囲であった。強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５によるバイオマーカーバンドの強度は０．７７で、０．６３から１．００の間であった。測定したその他の患者と同様に、左に位置する平均ピークは１０５２ｃｍ−１であり、１０５０から１０５７ｃｍ−１の間であった。
（実施例２）
ボーエン病対ＳＣＣ対健常表皮
表２は、測定した全てのＳＣＣ患者とボーエン病患者対健常被験者において約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
ボーエン病対ＳＣＣ対健常表皮
表２は、測定した全てのＳＣＣ患者とボーエン病患者対健常被験者において約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
ＳＣＣ（ＳＣＣ患者３名中２名において測定された全スペクトルにおいて）と比較して、検出バイオマーカーバンドは、ボーエン病患者（患者３名の７０個のスペクトルのうち患者２名の１３個のスペクトルにおいてのみ）について測定されたＩＲスペクトルにおける出現は、一定でも顕著でもなかった。ボーエン病についてのバイオマーカーの平均値は０．２１であり、変動は０．１５から０．２６の間であったが、ＳＣＣについてのバイオマーカーの平均値は０．３６であり、変動は０．１３から０．６６の間であった。
ＳＣＣのバイオマーカーの平均算出強度が０．８６、変動が０．７７から１．００の間であるのと比較すると、強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５によるバイオマーカーバンドの強度は、ボーエン病においてより低く、平均算出強度は０．７２であり、変動は０．６６から０．８１の間であった。
ＳＣＣ患者における右にシフトした位置の１０５７ｃｍ−１の平均ピークと比較して、ボーエン病患者における左にシフトした位置の１０５３ｃｍ−１の平均ピークの検出は明らかである。
メラノサイト母斑における多重線の検出
病理組織学的には、母斑細胞（メラノサイト）は、通常、表皮の基底層に局在する。その増殖は表皮（接合部母斑）内、表皮と真皮（複合母斑）内または真皮（皮内母斑）内にのみ起こり得る。母斑の全ての種類は、メラノサイト性（母斑細胞性、メラニン細胞性）の良性母斑である。
したがって、良性メラノサイト母斑患者４名の組織病理学的に確認済の複合母斑試料を、取得表皮のＩＲスペクトル比較のために用いた。
病理組織学的には、母斑細胞（メラノサイト）は、通常、表皮の基底層に局在する。その増殖は表皮（接合部母斑）内、表皮と真皮（複合母斑）内または真皮（皮内母斑）内にのみ起こり得る。母斑の全ての種類は、メラノサイト性（母斑細胞性、メラニン細胞性）の良性母斑である。
したがって、良性メラノサイト母斑患者４名の組織病理学的に確認済の複合母斑試料を、取得表皮のＩＲスペクトル比較のために用いた。
（実施例１）
表１は、複合母斑型の良性メラノサイト母斑患者４名における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
表１は、複合母斑型の良性メラノサイト母斑患者４名における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーバンドのＩＲスペクトル検出をまとめたものである。
約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドは、測定した全てのメラノサイト母斑（複合型母斑）患者において検出されたが、常に一定して検出されたわけではなかった。表皮において、メラノサイト母斑患者４名から取得した全４８個のスペクトルのうち２６個のスペクトル、患者１名にて測定した１２個のスペクトルのうち５個、患者２名にて測定した全１０個のスペクトル、患者３名にて測定した８個のスペクトルのうち２個のスペクトル、および患者４名にて測定した１８個のスペクトルのうち９個のスペクトルにおいて、バイオマーカーバンドが検出された。
検出バイオマーカーの平均値は、メラノサイト母斑患者４名において０．１７から０．２４の間であった。
バンドの強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５による検出バイオマーカーバンドの平均強度は、メラノサイト母斑患者において０．５９から０．７５の範囲内であった。
メラニン細胞性母斑患者におけるバイオマーカーの平均ピーク位置は、１０５３から１０５５ｃｍ−１の間に測定され、したがって左にシフトした位置であった。
（実施例２）
ＭＭ対ＭＮ対健常表皮
表２は、全ての測定したＭＭ患者、メラノサイト母斑（ＭＮ）（良性複合母斑）患者における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーのＩＲスペクトル検出を、健常被験者と比べてまとめたものである。
ＭＭ対ＭＮ対健常表皮
表２は、全ての測定したＭＭ患者、メラノサイト母斑（ＭＮ）（良性複合母斑）患者における約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の多重線の平均値、平均強度比（Ｉ１０５５／Ｉ１２４５）（変動あり）および約１０５５ｃｍ−１（変動あり）の平均ピーク位置の分析によるバイオマーカーのＩＲスペクトル検出を、健常被験者と比べてまとめたものである。
検出バイオマーカーバンドは、メラノサイト母斑患者（患者４名にて測定した全４８個のスペクトルのうち２６個のスペクトルのみ）にて測定したＩＲスペクトルにおける出現は、ＳＣＣ患者（ＭＭ患者３名のうち患者２名にて測定した全てのスペクトル）と比べて一定でも顕著でもなかった。
メラノサイト母斑のバイオマーカーの平均値は０．２０であり、変動は０．１７から０．２４の間であり、同様にＭＭについての平均値は０．２０、変動は０．１４から０．２６の間であった。
強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５によるバイオマーカーバンドの強度は、メラノサイト母斑患者とＭＭ患者において同様であった。
同様に左にシフトした位置の平均ピークがメラノサイト母斑患者では１０５３ｃｍ−１に、ＭＭ患者では１０５２ｃｍ−１に検出され、違いはメラノサイト母斑患者の平均ピークの変動が１０５３ｃｍ−１から１０５５ｃｍ−１の間であったのが、ＭＭ患者の平均ピークの変動が１０４３ｃｍ−１から１０６４ｃｍ−１の間と、より大きかった点のみであった。
ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピーク（１０７１、１０８４、１０９５ｃｍ−１）パターンを用いた多重線（１０５５ｃｍ−１）の腫瘍関連検出
良性、前悪性および悪性皮膚癌性組織からのＩＲ吸収スペクトルにおいて、約１０５５ｃｍ−１の多重線は、皮膚腫瘍の病状の種類に関する異なる形および強度の約１０７１、１０８４、１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークと常に結びついている。
また、多重線の活性は、異なる表皮皮膚癌患者のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークにおいて最も顕著なピークの活性と相互作用するとの報告がある（ＰＣＴ／ＥＥ２０１３／０００００１）。
良性、前悪性および悪性皮膚癌性組織からのＩＲ吸収スペクトルにおいて、約１０５５ｃｍ−１の多重線は、皮膚腫瘍の病状の種類に関する異なる形および強度の約１０７１、１０８４、１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークと常に結びついている。
また、多重線の活性は、異なる表皮皮膚癌患者のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークにおいて最も顕著なピークの活性と相互作用するとの報告がある（ＰＣＴ／ＥＥ２０１３／０００００１）。
（実施例１）
基底細胞癌（ＢＣＣ）
表１は、ＢＣＣ患者６名の表皮にて検出された、約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値、および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
基底細胞癌（ＢＣＣ）
表１は、ＢＣＣ患者６名の表皮にて検出された、約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値、および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
全てのＢＣＣ患者において、検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドは、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの出現と明らかに結びついている。
表１に示す結果により、３つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者４名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
表１に示す結果により、３つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者４名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
（実施例２）
扁平上皮癌（ＳＣＣ）
表２は、ＳＣＣ患者４名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
扁平上皮癌（ＳＣＣ）
表２は、ＳＣＣ患者４名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
全てのＳＣＣ患者において、検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドは、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの出現と明らかに結びついている。
表１に示す結果により、３つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者２名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
表１に示す結果により、３つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者２名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
（実施例３）
悪性黒色腫（ＭＭ）
表３は、ＭＭ患者３名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
悪性黒色腫（ＭＭ）
表３は、ＭＭ患者３名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
全てのＭＭ患者において、検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドは、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの出現と明らかに結びついている。
表１に示す結果により、３つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１の検出無しと１０８４／１０８５ｃｍ−１の検出有り（患者１名において）
表１に示す結果により、３つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０７１、１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５、１０９５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１の検出無しと１０８４／１０８５ｃｍ−１の検出有り（患者１名において）
（実施例４）
ボーエン病
表４は、ボーエン病患者３名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
ボーエン病
表４は、ボーエン病患者３名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
全てのボーエン病患者において、検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドは約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの出現と明らかに結びついている。
表１に示す結果により、２つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者２名において）
・１０５５ｃｍ−１の検出無しと１０８４／１０８５ｃｍ−１の検出有り（患者１名において）
表１に示す結果により、２つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者２名において）
・１０５５ｃｍ−１の検出無しと１０８４／１０８５ｃｍ−１の検出有り（患者１名において）
（実施例５）
メラノサイト母斑
表５は、メラノサイト母斑患者４名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
メラノサイト母斑
表５は、メラノサイト母斑患者４名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
全てのメラノサイト母斑患者において、検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドは、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの出現と明らかに結びついている。
表１に示す結果により、２つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０７１、１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者３名において）
表１に示す結果により、２つのパターンが認識される。
・１０５５ｃｍ−１と１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者１名において）
・１０５５ｃｍ−１と１０７１、１０８４／１０８５ｃｍ−１（患者３名において）
（実施例６）
健常表皮対ＢＤ対ＭＮ対ＭＭ対ＢＣＣ対ＳＣＣ
表６は、健常被験者４名、ボーエン病患者３名、メラノサイト母斑患者４名、ＭＭ患者３名、ＳＣＣ患者４名およびＢＣＣ患者６名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
健常表皮対ＢＤ対ＭＮ対ＭＭ対ＢＣＣ対ＳＣＣ
表６は、健常被験者４名、ボーエン病患者３名、メラノサイト母斑患者４名、ＭＭ患者３名、ＳＣＣ患者４名およびＢＣＣ患者６名の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーの平均値および約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値をまとめたものである。
表６の結果は、測定した全ての表皮における病変（ＢＣＣ、ＳＣＣ、ＭＭ、ボーエン病、メラニン細胞性母斑）において、約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドが検出されたが、健常表皮や非病的表皮においてはバイオマーカーバンドが検出されなかったこと示す。検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドの平均値は、良性では０．２１、前悪性では０．２１、また悪性皮膚腫瘍についてはＭＭの０．２０、ＢＣＣの０．２９、ＳＣＣの０．３６が顕著である。
ただし、ＢＣＣ患者６名およびＳＣＣ患者２名におけるバイオマーカーの平均値に関してのみは、ＭＭ患者２名、ＭＮ患者４名およびボーエン病患者３名におけるバイオマーカーの平均値よりもかなり高い。
重要なことに、ＭＭ患者２名の表皮にて検出されたバイオマーカーバンドは、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の全ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの出現と強く結びついており、こうしたことはメラノサイト母斑患者（良性複合母斑）およびボーエン病（前癌性皮膚病）患者においては観察されない。全ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの出現と共に検出されるバイオマーカーバンドの同パターンが、ＳＣＣ患者およびＢＣＣ患者において観察される。
したがって、メラノサイト母斑（良性複合母斑）患者の表皮にて検出された約１０５５ｃｍ−１のバイオマーカーバンドは、約１０９５ｃｍ−１ではなく、約１０７１ｃｍ−１および１０８４／１０８５ｃｍ−１の２つのＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの出現と結びついている。
ボーエン病患者２名において、検出されたバイオマーカーバンドの平均値である０．２０は、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの１つのピーク、約１０８４／１０８５ｃｍ−１の出現と結びついている。
Claims (12)
- ヒト表皮癌組織において、良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）の診断、予後およびフォローアップに関連する約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の周波数帯範囲のＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおけるＤＮＡ配列のパターン化した出現単独およびこれとの組み合わせで決定した核酸ＤＮＡおよびＲＮＡ分子に対応する、ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの約１０５５ｃｍ−１の多重線を検出し、これにより悪性腫瘍の進行および悪性腫瘍への進行を示すことができる方法であって、
（ｉ）前記良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）に該当するかもしれない８００〜４０００ｃｍ−１領域における周波数帯範囲にわたる前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドを、
（ａ）出現無しは、健常表皮に特異的、
（ｂ）一定ではない出現は、良性および前悪性皮膚腫瘍に特異的、
（ｃ）一定の出現は、悪性皮膚腫瘍に特異的、
と同定し、
（ｉｉ）前記良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）に該当する前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドのバンド位置を、「左にシフトし、１０５５ｃｍ−１の前」または「右にシフトし、１０５５ｃｍ−１の後」とシフト判定し、
（ｉｉｉ）その平均値により、前記良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）に該当する前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドのレベルを
（ａ）変動範囲内なら良性皮膚病変に特異的、
（ｂ）変動範囲内なら前悪性皮膚病変に特異的、
（ｃ）変動範囲内なら悪性皮膚病変に特異的、
と判定し、
（ｉｖ）前記良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）に該当する、前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドのレベルを、その強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５により、
（ａ）変動範囲内なら良性皮膚病変に特異的、
（ｂ）変動範囲内なら前悪性皮膚病変に特異的、
（ｃ）変動範囲内なら悪性皮膚病変に特異的、
と判定し、
（ｖ）７００〜４０００ｃｍ−１領域の周波数帯範囲にわたり、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の周波数帯範囲、すなわち前記良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）に該当するかもしれないＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列のパターン化した出現を同定し、
（ｖｉ）ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドのＤＮＡ配列における前記ＩＲスペクトルのバンドのレベルを前記良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）に該当するその平均値により、
（ａ）良性皮膚病変に特異的なＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列、
（ｂ）前悪性皮膚病変に特異的なＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列、
（ｃ）悪性皮膚病変に特異的なＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列、
と判定し、
（ｖｉｉ）前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーの前記判定済平均値と、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列中の前記出現バンドの判定済平均値とを組み合わせて用い、パターン認識技術を使用することにより、前記病変を、
（ａ）良性皮膚病変に特異的
（ｂ）前悪性皮膚病変に特異的
（ｃ）悪性皮膚病変に特異的
であると評価する
ことからなる方法。 - 方法の使用であって、約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドの１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の３つのスペクトルバンドの前記ＤＮＡ配列出現とのセットが下記１つ以上を含み、前記悪性皮膚腫瘍（病変）の診断を裏付ける、
（ｉ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンド内の２つの核酸間で最も顕著な相違および前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドの同時出現により、ＢＣＣ、ＳＣＣおよびＭＭの診断を裏付け、
（ｉｉ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの右にシフトした位置と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドとの同時出現により、ＢＣＣの診断を裏付け、
（ｉｉｉ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの左にシフトした位置と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドとの同時出現により、悪性皮膚腫瘍（病変）の診断を裏付け、さらにＭＭの診断を裏付け、
（ｉｖ）多重線の高レベルの平均値およびＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドにより、ＢＣＣおよびＳＣＣの診断を裏付け、
（ｖ）多重線の高レベルの強度比およびＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドにより、ＢＣＣおよびＳＣＣの診断を裏付け、
（ｖｉ）多重線の中レベルの平均値と強度比およびＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドにより、ＭＭの診断を裏付け、
（ｖｉｉ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が「０．４３（１０５５）、０．３６（１０７１）、０．４８（１０８４／１０８５）、０．３６（１０９５）」と表され、これによりＢＣＣの診断を裏付け、
（ｖｉｉｉ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が「０．３０（１０５５）、０．３５（１０７１）、０．２９（１０８４／１０８５）、０．３４（１０９５）」と表され、これによりＳＣＣの診断を裏付け、
（ｉｘ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が「０．２６（１０５５）、０．２７（１０７１）、０．２９（１０８４／１０８５）、０．３０（１０９５）」と表され、これによりＭＭの診断を裏付ける
請求項１に記載の方法の使用。 - 方法の使用であって、約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の２つのスペクトルバンドの前記ＤＮＡ配列出現とのセットが、下記
（ｉ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドにおける２つの核酸間の各種の顕著な相違と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の２つのスペクトルバンドとの同時出現により、ＢＣＣ、ＳＣＣおよびＭＭの診断を裏付け、
（ｉｉ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの右にシフトした位置と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の２つのスペクトルバンドとの同時出現により、ＳＣＣの診断を裏付け、
（ｉｉｉ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの左にシフトした位置と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の２つのスペクトルバンドとの同時出現により、ＭＭの診断を裏付け、
（ｉｖ）多重線の中レベルの平均値およびＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドにより、ＢＣＣ、ＳＣＣおよびＭＭの診断を裏付け
（ｖ） 多重線の高レベルの強度比およびＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドにより、ＢＣＣおよびＳＣＣの診断を裏付け
（ｖｉ）多重線の低レベルの強度比およびＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける全バンドにより、ＭＭの診断を裏付け
（ｖｉｉ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が「０．１９（１０５５）、「Ｘ」（１０７１）、０．２３（１０８４／１０８５）、０．０８（１０９５）」と表され、これにより、ＢＣＣの診断を裏付け
（ｖｉｉｉ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が「０．１３（１０５５）、「Ｃ」１０７１）、０．１６（１０８４／１０８５）、０．１４（１０９５）」と表され、これにより、ＳＣＣの診断を裏付け
（ｉｘ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が「０．１４（１０５５）、「Ｘ」（１０７１）、０．２７（１０８４／１０８５）、０．１８（１０９５）」と表され、これにより、ＭＭの診断を裏付ける、
ことのうち１以上からなり、前記悪性皮膚腫瘍（病変）の診断を裏付ける請求項１に記載の方法の使用。 - 方法の使用であって、約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのスペクトルバンドの出現とのセットが、下記
（ｉ）平均値および強度比による約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドにおける２つの核酸間の広範囲の顕著な相違と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのスペクトルバンドとの同時出現により、ＢＣＣの診断を裏付け、
（ｉｉ）その平均値および強度比による約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドにおける２つの核酸間で最も顕著な相違と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのスペクトルバンドとの同時出現により、ＳＣＣの診断を裏付け、
（ｉｉｉ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの右にシフトした位置と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における、１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのスペクトルバンドとの同時出現により、ＢＣＣおよびＳＣＣの診断を裏付け、
（ｉｖ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの左にシフトした位置と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのスペクトルバンドとの同時出現により、ボーエン病の診断を裏付け、
（ｖ）その平均値および強度比による約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドにおける２つの核酸間のより低い顕著な相違と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのスペクトルバンドとの同時出現により、ボーエン病の診断を裏付け、
（ｖｉ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が、「０．０９（１０５５）、「Ｘ」（１０７１）、０．１６（１０８４／１０８５）、「Ｘ」（１０９５）」と、「０．４４（１０５５）、「Ｘ」（１０７１）、０．４５（１０８４／１０８５）、「Ｘ」（１０９５）」との間と表され、これによりＢＣＣの診断を裏付け、
（ｖｉｉ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が、「０．６６（１０５５）、「Ｘ」（１０７１）、０．６５（１０８４／１０８５）、「Ｘ」（１０９５）」として表され、これによりＳＣＣの診断を裏付け、
（ｖｉｉｉ）ＤＮＡ配列パターンの平均値が、「０．１５（１０５５）、「Ｘ」（１０７１）、０．１８（１０８４／１０８５）、「Ｘ」（１０９５）」と「０．２６（１０５５）、「Ｘ」（１０７１）、０．２９（１０８４／１０８５）、「Ｘ」（１０９５）」との間と表され、これによりボーエン病の診断を裏付ける、
ことの１以上からなり、前記前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）の診断を裏付ける請求項１に記載の方法の使用。 - 方法の使用であって、約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における１０７１および１０８４／１０８５ｃｍ−１の２つのスペクトルバンドの出現とのセットが、下記
（ｉ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの左にシフトした位置と、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における１０７１および１０８４／１０８５ｃｍ−１の２つのスペクトルバンドとの同時出現により、メラノサイト母斑の診断を裏付ける、
ことのうち１以上からなり、前記良性皮膚腫瘍（病変）の診断を裏付ける請求項１に記載の方法の使用。 - 方法の使用であって、約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列におけるスペクトルバンドの異なるパターン化出現とのセットが、下記のうち１以上からなり、一定の種類の腫瘍（病変）との関連を示し、
（ｉ）１以上の下記パターンからなる、ＢＣＣ（基底細胞癌）、
（ａ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける約１０８４／１０８５ｃｍ−１出現の１つのバンドとのパターン、すなわち
・ドミナント
・ 多重線の広範囲の平均値が０．０９〜０．４７以内であることを特徴とする
・ 多重線の広範囲の強度が０．５９〜０．９６以内であることを特徴とする
・ 右にシフトした平均ピーク位置の多重線を特徴とする
・ 約１０８４／１０８５ｃｍ−１の、広範囲の強度比のバンドが０．１６から０．４５の間の範囲であることを特徴とする
（ｂ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１出現のバンドとのパターン、すなわち
・多重線の高レベル化した平均値および強度比がしたがって約０．４３および０．９５であることを特徴とする、
・ ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける高レベル化した平均値の全３つのバンドであり、約１０８４／１０８５ｃｍ−１の一定のドミナントピークで平均値が約０．４８であることを特徴とする
・ 右にシフトした平均ピーク位置の多重線を特徴とする
（ｃ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、約１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１出現の２つのバンドとのパターン、すなわち
・ 多重線の中レベル化した平均値および約１０８４／１０８５ｃｍ−１のバンドがしたがって約０．１９および０．２３であることを特徴とする
・約１０９５ｃｍ−１のバンドの低レベル化した平均値と比べ、約１０８４／１０８５ｃｍ−１のドミナントピークを特徴とする
（ｉｉ）１以上の下記パターンからなる、ＳＣＣ（扁平上皮細胞癌）、
（ａ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のバンド出現とのパターン、すなわち
・ 右にシフトした平均ピーク位置の多重線を特徴とする
・ 多重線の高レベル化した平均値が約０．３０であることを特徴とする
・ 多重線の高レベル化した強度比が約０．８１であることを特徴とする
・約１０７１および１０９５ｃｍ−１のバンドの高レベル化した平均値が、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおいてドミナントであり、したがって約０．３５および０．３４であることを特徴とする
（ｂ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、約１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の２つのバンド出現とのパターン、すなわち
・ 右にシフトした平均ピーク位置の多重線であることを特徴とする
・ 多重線の低レベル化した平均値および強度比がしたがって約０．１３および０．７７であることを特徴とする
・ ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける２つのバンドの低レベル化した平均値がしたがって約０．１６および０．１４であり、約１０８４／１０８５ｃｍ−１のドミナントバンドであることを特徴とする
（ｃ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける約１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのバンド出現とのパターン、すなわち
・ 右にシフトした平均ピーク位置の多重線であることを特徴とする
・ 多重線の最高レベルの平均値および平均強度比が、したがって約０．６６および１．００であることを特徴とする
・約１０８４／１０８５ｃｍ−１のバンドの最高レベルの平均値がしたがって約０．６５であることを特徴とする
（ｉｉｉ）１以上の下記パターンからなるＭＭ（悪性黒色腫）、
（ａ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のバンド出現とのパターン、すなわち
・ 多重線と約１０７１、１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１のバンドの同様レベルの平均値がしたがって、約０．２６、０．２７、０．２９および０．３０であり、約１０９５ｃｍ−１のドミナントバンドであることを特徴とする
（ｂ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、約１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の２つのバンドの出現とのパターン、すなわち
・ 左にシフトした平均ピーク位置の多重線であることを特徴とする
・多重線の低レベル化した平均値と平均強度比がしたがって約０．１４および０．４７であることを特徴とする
・ 約１０９５ｃｍ−１のバンドの低レベル化した平均値と比べ、約１０８４／１０８５ｃｍ−１のドミナントバンドの平均値が約０．２７であることを特徴とする、
（ｉｖ）１以上の下記パターンからなるボーエン病、
（ａ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける約１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのバンドの出現とのパターン、すなわち
・ 安定した左にシフトした平均ピーク位置の多重線を特徴とする
・約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの一定しない出現を特徴とする
・多重線と約１０８４／１０８５ｃｍ−１のバンドの低および中レベルの平均値がしたがって０．１５〜０．２６および０．１８〜０．２９の範囲であることを特徴とする
・多重線の平均強度比が０．６６〜０．７７の間の範囲であることを特徴とする
（ｖ）１以上の下記パターンからなる、メラノサイト母斑、
（ａ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける約１０７１および１０８４／１０８５ｃｍ−１の２つのバンドの出現とのパターン、すなわち、
・ ドミナント
・ 約１０８４／１０８５ｃｍ−１のドミナントピークを特徴とする
・低範囲の平均値および平均強度比の多重線と約１０７１および１０８４／１０８５ｃｍ−１の２つのバンドを特徴とする
・ 多重線の平均ピーク位置の変動が小さい
（ｂ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける約１０８４／１０８５ｃｍ−１の１つのバンドの出現とのパターン、すなわち
・ 多重線の平均値が０．２４であり平均強度が０．７５であることを特徴とする
・ＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける約１０８４／１０８５ｃｍ−１のバンドの平均値が０．２７であることを特徴とする
・多重線のピーク位置の変動が無い、
こととの最も近い一致を発見する請求項１から５に記載の方法の使用。 - 方法の使用であって、約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列におけるスペクトルバンドの異なるパターン化出現とのセットにより、１以上の下記比較
（ｉ）健常皮膚に対して前悪性と悪性皮膚腫瘍（病変）を比較することによって、以下（ａ）から（ｅ）を特徴とするボーエン病すなわち表皮内癌ｉｎｓｉｔｕからＳＣＣへの進行を裏付ける、
（ａ）健常表皮皮膚にて多重線の出現が無いこと 対 前悪性皮膚腫瘍にて多重線の一定ではない出現 対 多重線の一定の出現
（ｂ）１０５５平均値（ｍｅａｎ）：健常表皮皮膚にて「Ｘ」＜ボーエン病にて「０．２１」［０．１５〜０．２６の範囲］＜ＳＣＣにて「０．３６」［０．１３〜０．６６の範囲］
（ｃ）Ｉ１０５５／Ｉ１２４５：健常表皮皮膚にて「Ｘ」＜ボーエン病にて「０．７２」［０．６６〜０．７７］＜ＳＣＣにて「０．８６」［０．７７〜１．００の範囲］
（ｄ）多重線の平均ピーク位置：健常皮膚にてピーク出現無し 対 ボーエン病にて左にシフトした約１０５３ｃｍ−１［１０５２〜１０５３］の位置、 対 ＳＣＣにて右にシフトした約１０５７ｃｍ−１［１０５４〜１０６０］の位置、
（ｅ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドと、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列におけるスペクトルバンドの異なるパターン化出現とのセットの、ボーエン病における１つのパターン 対 ＳＣＣにおける３つのパターン
（ｉｉ）健常皮膚に対して良性と悪性皮膚腫瘍（病変）を比較することによって、以下（ａ）から（ｄ）を特徴とする良性母斑からＭＭへの進行を裏付ける、
（ａ）健常表皮皮膚にて多重線の出現無し「Ｘ」 対 良性母斑にて多重線の一定ではない出現 対 ＭＭにて多重線の一定の出現
（ｂ）１０５５平均値：健常表皮皮膚にて「Ｘ」＜良性メラノサイト母斑にて「０．２０」［０．１７〜０．２４の範囲］＜ＭＭにて「０．２０」［０．１４〜０．２６の範囲］
（ｃ）多重線の平均ピーク位置：健常皮膚にてピーク出現無し 対 良性メラノサイト母斑にて約１０５４ｃｍ−１［１０５３〜１０５５］の位置 対 ＭＭにて約１０５２ｃｍ−１［１０４３〜１０６４］の左にシフトした位置
（ｄ）約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの良性メラノサイト母斑におけるドミナントパターンとＤＮＡ／ＲＮＡトライアドにおける約１０７１および１０８４／１０８５ｃｍ−１の２つのバンド出現 対 約１０５５ｃｍ−１の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドのＭＭにおける２パターンと、スペクトルバンドの２つの異なるパターン化出現、すなわち、前記ＤＮＡ／ＲＮＡトライアド中ＤＮＡ配列における約１０８４／１０８５および１０９５ｃｍ−１の全３つのスペクトルバンドまたは２つのスペクトルバンド
（ｉｉｉ）健常表皮皮膚に対して、メラノサイト母斑（良性皮膚病変）、ボーエン病（前悪性皮膚病変）、ＢＣＣ（悪性皮膚病変）、ＳＣＣ（悪性皮膚病変）およびＭＭ（悪性皮膚病変）を比較することにより、下記パターンを特徴とする良性から前悪性、および前悪性から悪性皮膚癌への進行を裏付ける、
（ａ）ＤＮＡ配列のパターン化出現が健常表皮皮膚におけるＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値「Ｘ」（１０５５）、０．５０（１０７１）、０．３（Ｙ（１０８４／１０８５）＜０．５０（１０９５）によって表され、
（ｂ）ＤＮＡ配列のパターン化出現が良性皮膚癌、メラノサイト母斑におけるＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値「０．２１」（１０５５）、０．１９（１０７１）、０．２３（１０８４／１０８５）＜「Ｘ」（１０９５）によって表され、
（ｃ）ＤＮＡ配列のパターン化出現が前悪性皮膚癌、ボーエン病におけるＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値「０．２１」（１０５５）、「Ｘ」（１０７１）、０．１８（１０８４／１０８５）＜「Ｘ」（１０９５）によって表され、
（ｄ）ＤＮＡ配列のパターン化出現が前悪性皮膚癌、扁平上皮細胞癌におけるＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値「０．３６」（１０５５）、「０．２３」（１０７１）、０．３１（１０８４／１０８５）＜「０．１９」（１０９５）」によって表され、
（ｅ）ＤＮＡ配列のパターン化出現が前悪性皮膚癌、基底細胞癌におけるＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値「０．２９」（１０５５）、「０．３６」（１０７１）、０．３２（１０８４／１０８５）＜「０．２２」（１０９５）によって表され、
（ｆ）ＤＮＡ配列のパターン化出現が前悪性皮膚癌、悪性黒色腫におけるＤＮＡ／ＲＮＡトライアドピークの平均値「０．２０」（１０５５）、「０．２７」（１０７１）、０．３１（１０８４／１０８５）＜「０．２４」（１０９５）によって表される、
ことを行い、悪性腫瘍の進行および悪性腫瘍への進行を示す請求項１から６に記載の方法の使用。 - 検出工程が、赤外分光計および／または赤外マイクロ分光計により行われる請求項１に記載の方法。
- （ｉｖ）において約１０５５ｃｍ−１の多重線の前記ＩＲスペクトルのバイオマーカーバンドの強度比Ｉ１０５５／Ｉ１２４５を前記算出により、リン酸ジエステル振動（ＤＮＡ）およびＩＲスペクトル中アミドＩＩＩに対応する、約１２４５ｃｍ−１のピークとする請求項１に記載の方法。
- 十分に良性、前悪性および悪性癌組織としての前記表皮健常組織（表皮）が、ヒト組織であり、また動物組織としても適用可能である請求項１から７に記載の方法。
- 前記周知の良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍（病変）が、その他の良性、前悪性および悪性皮膚腫瘍である、メラノサイト母斑、ボーエン病、悪性、黒色腫、扁平上皮細胞癌、および基底細胞癌からなる群より選択される請求項１から７に記載の方法。
- 前記良性、前悪性および悪性腫瘍（病変）が、皮膚組織由来であり、その他器官由来の組織にも適用可能である請求項１から７に記載の方法。
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