KR20140145473A - Culture media of adult stem cells derived human skin dermis - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 인간의 피부로부터 유래한 성체 줄기세포의 배양액에 관한 것이다. The present invention relates to a culture solution of adult stem cells derived from human skin.
다분화 기능(pluripotent)을 소유하는 성체 줄기세포를 조직으로부터 분리하려는 노력은 최근 몇 년 전부터 계속적으로 진행되어 왔다. 이러한 성체 줄기세포는 배아줄기세포의 전분화기능(totipotent)에 비해 조직 내의 모든 세포로 분화하지는 못하는 단점이 있지만, 배아줄기세포에서 문제시될 수 있는 윤리적인 문제에서는 자유로울 수 있다는 점에서 연구 및 활용의 의미가 있다. 그러나, 성체 줄기세포는 배아줄기세포와 달리 성체 조직에서 발굴/동정 할 수 있는 성체 줄기세포의 수(해당 조직의 약 1~5% 미만으로 추정)가 매우 적어서, 연구에 어려움이 있다. Efforts to isolate pluripotent adult stem cells from tissues have been ongoing in recent years. These adult stem cells have the disadvantage that they are not differentiated into all the cells in the tissue as compared with the totipotent of embryonic stem cells, but they can be free from the ethical problems that can be encountered in embryonic stem cells. It has meaning. However, unlike embryonic stem cells, adult stem cells are difficult to study because the number of adult stem cells (estimated to be less than about 1 to 5% of the tissues) can be excavated / identified in adult tissues.
줄기세포 연구의 궁극적인 목표는 주로 재생의학적 관점에서의 치료로, 특정 장기 조직에서의 질환 또는 질병을 앓고 있는 환자들에게 줄기세포 기반의 신규 세포를 공급하는 세포 이식(cell transplantation) 또는 교체(replacement) 방법으로 활발히 연구되고 있다. 인간의 피부 성체 줄기세포 역시 화상과 같은 피부 손상, 창상, 궤양, 아토피 등 피부 질환을 치료하는 데 응용될 수 있다고 판단되고 연구가 진행되고 있다. 각질층(epidermis), 진피(dermis), 피하지방층(subcutaneous adipose), 그리고, 부속기(appendage)로 구성된 이들 피부층에서 즉, 각질층으로부터 각질 줄기세포(epidermal stem cells), 부속기인 모발로부터 모낭 줄기세포 (hair follicle stem cells) 같은 다분화 기능을 갖는 세포군이 동정이 되었다. 또한, 진피 성체 줄기세포들의 경우에는 설취류 및 인간으로부터 현탁 배양(suspension culture)이라는 특정 배양 시스템을 사용해서 동정이 되었는데, 이런 진피 성체 줄기세포들(Skin Derived Precursors, SKPs)은 지방 세포, 골세포, 근육 세포 등 중간엽(mesoderm) 형태의 세포로 분리될 수 있다는 정도만 관찰되었다 (Toma et al., 2001). The ultimate goal of stem cell research is primarily regenerative medicine, where cell transplantation or replacement for stem cell-based new cells is provided to patients suffering from diseases or diseases in certain organ tissues ) Method. Human skin adult stem cells can also be used to treat skin diseases such as burns, wounds, ulcers, and atopy. These skin layers, consisting of the epidermis, dermis, subcutaneous adipose, and appendage, are composed of epidermal stem cells from the stratum corneum, hair follicles from the appendage hair follicle stem cells) have been identified. In addition, in the case of dermal adult stem cells, a specific culture system called suspension culture from broodstock and human has been used to identify these skin derived precursors (SKPs) , And mesoderm-like cells such as muscle cells (Toma et al., 2001).
무엇보다, 이들 피부 성체 줄기세포의 전체 피부 조직에서 차지하는 수가 현저히 낮은데, 각질 줄기세포의 경우에는 각질형성세포 수의 1-5% 미만으로 예상되며, 진피 줄기세포의 경우에도 2-3% 정도로 파악되어 이를 분리하는 데 어려움이 있었다. 이에 따라, 진피 유래 성체 줄기세포를 분리 및 확보하는 방법에 대한 연구 및 이렇게 분리한 진피 유래 성체 줄기세포의 기능에 대한 연구 역시 논의된 바가 전혀 없었다. Above all, these skin adult stem cells occupy a very low percentage in the total skin tissue. In the case of keratinocyte stem cells, it is expected to be less than 1-5% of keratinized cells, and in dermal stem cells it is about 2-3% And it was difficult to separate them. Accordingly, a study on the isolation and securing of dermal-derived adult stem cells and the study on the function of adult dermal-derived adult stem cells have not been discussed at all.
본 발명의 목적은 인간 피부 중 진피 유래 성체 줄기세포의 배양액을 제공하는 데 있다. It is an object of the present invention to provide a culture solution of dermal-derived adult stem cells in human skin.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 bFGF(basic Fibroblast growth factor), HGF(Hepatocyte growth factor), IGFBP-1 (Insulin-like growth factor binding protein-1), IGFBP-2 (Insulin-like growth factor binding protein-2), IGF-1(Insulin-like growth factor) 및 VEGF(Vascular endothelial growth factor)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자를 인간 진피유래 섬유아세포의 배양액보다 증가된 양으로 가지는 인간 피부 진피 유래의 성체 줄기세포의 배양액 및 상기 배양액을 포함하는 노화 억제 또는 개선용 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising basic fibroblast growth factor (bFGF), hepatocyte growth factor (HGF), insulin-like growth factor binding protein-1 (IGFBP- protein-2), insulin-like growth factor (IGF-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in an amount higher than that of the human dermis-derived fibroblast A culture solution of adult stem cells derived from the above-mentioned culture medium, and the above-mentioned culture medium.
본 발명의 배양액은 특정한 분리방법을 이용하여 인간 피부 진피 유래의 성체 줄기세포를 쉽고 간단하며 놓은 수득률로 확보한 줄기세포를 배양한 액으로, bFGF(basic Fibroblast growth factor), HGF(Hepatocyte growth factor), IGFBP-1, -2 (Insulin-like growth factor binding protein), IGF-1(Insulin-like growth factor), 및 VEGF(Vascular endothelial growth factor) 로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자의 양이 인간 진피유래 섬유아세포의 배양액에 비해 증가될 수 있다. The culture solution of the present invention is a culture solution of adult stem cells derived from human skin dermis using a specific separation method and obtained by simple and simple disposition of stem cells. The culture solution contains basic fibroblast growth factor (bFGF), hepatocyte growth factor (HGF) Wherein the amount of one or more growth factors selected from the group consisting of insulin-like growth factor binding protein (IGFBP-1) -2, insulin-like growth factor (IGF-1) Can be increased compared to the culture solution of dermis-derived fibroblasts.
아울러, 본 발명의 배양액을 포함하는 조성물은 피부 세포의 노화를 억제 또는 개선할 수 있다. 구체적으로 상기 조성물은 자외선을 조사한 피부 세포의 사멸을 방지시키거나, 또는 자외선을 조사함에 따라 그 수가 감소한 세포의 정상적인 증식을 촉진할 수 있거나, 이렇게 증식된 세포의 이동을 회복시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 상기 조성물은 콜라겐의 생성을 촉진하고, 콜라겐 분해 효소의 발현을 감소시켜서 항노화 효과를 가질 수 있다. In addition, the composition containing the culture medium of the present invention can inhibit or improve aging of skin cells. Specifically, the composition can prevent the skin cells from being killed by ultraviolet rays, or irradiate with ultraviolet rays to promote normal proliferation of the cells, or restore the proliferation of the cells. In addition, the composition promotes the production of collagen, reduces the expression of collagenase, and has an anti-aging effect.
도 1은 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포와 인간 진피유래 섬유아세포에서 유래하는 배양액의 성분을 분석한 결과이다. (A. 음성 대조군(non-hDSPC-CM), B. 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포 유래 배양액 성분(hDSPC-CM), C. 6 종류의 성장인자에 대한 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포 배양액과 음성 대조군의 함량 비교)
도 2는 피부 섬유아세포에 자외선을 조사한 후, 피부 섬유아세포의 감소된 이동율 (A 및 B) 및 세포 증식 (C)을 관찰한 것이다.
도 3은 피부 섬유아세포에 자외선을 조사한 후, 세포 사멸율을 관찰한 것이다.
도 4는 피부 섬유아세포에 자외선을 조사하고 본 발명의 배양액을 처리한 후, 콜라겐 I (A), 콜라겐 IV (B), 콜라겐 V (C), MMP1 (D), TIMP1 (E)의 발현 변화를 관찰한 것이다.
도 5는 내인성 노화를 겪는 피부 섬유아세포에 본 발명의 배양액을 처리한 결과, 베타갈락토시다아제 (beta galactosidase)가 감소한 결과를 관찰한 것이다. BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a graph showing the results of analysis of components of a culture medium derived from human skin dermis-derived adult stem cells and human dermis-derived fibroblasts. (HDSPC-CM), C. human dermal dermis-derived adult stem cell culture medium for six kinds of growth factors, and negative (non-hDSPC-CM) negative adult dermal epithelial stem cell culture medium Comparison of contents of control group)
FIG. 2 is a view of the reduced migration rates (A and B) and cell proliferation (C) of dermal fibroblasts after irradiating ultraviolet rays to dermal fibroblasts.
FIG. 3 shows the results of irradiating ultraviolet rays to the skin fibroblasts and observing the cell death rate.
FIG. 4 shows changes in expression of collagen I (A), collagen IV (B), collagen V (C), MMP1 (D) and TIMP1 (E) after irradiating ultraviolet light to the skin fibroblasts and treating the culture medium of the present invention. .
FIG. 5 shows the results of treatment of the skin fibroblasts undergoing endogenous senescence with the culture medium of the present invention as a result of reduction of beta-galactosidase.
본 발명은 일 관점에서, 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포의 배양액으로, 상기 배양액은 bFGF(basic Fibroblast growth factor), HGF(Hepatocyte growth factor), IGFBP-1 (Insulin-like growth factor binding protein-1), IGFBP-2 (Insulin-like growth factor binding protein-2), IGF-1(Insulin-like growth factor) 및 VEGF(Vascular endothelial growth factor)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자를 인간 진피유래 섬유아세포의 배양액에 비해 증가된 양으로 가지는,배양액에 관한 것이다. In one aspect, the present invention provides a culture medium for human skin dermis-derived adult stem cells, which comprises at least one of basic fibroblast growth factor (bFGF), hepatocyte growth factor (HGF), insulin-like growth factor binding protein- One or more growth factors selected from the group consisting of insulin-like growth factor binding protein (IGFBP-2), insulin-like growth factor (IGF-1) Of the total volume of the culture medium.
구체적으로, 상기와 같은 범위의 성장인자를 가지는 배양액은 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포와 인간 진피유래 섬유아세포를 (i) 세럼이 없는 상태에서 (ⅱ) 2 내지 5일간, 구체적으로 2일간; (ⅲ) 1 내지 5% CO2, 구체적으로 5% CO2조건 하에서; (ⅳ) 37 ℃ 세포배양기에서 배양하여 얻어질 수 있다. Specifically, a culture solution having growth factors in the above-mentioned range is prepared by mixing human skin dermis-derived adult stem cells and human dermis-derived fibroblasts in the absence of serum (ii) for 2 to 5 days, specifically for 2 days; (Iii) under 1 to 5% CO 2, specifically 5% CO 2 ; (Iv) culturing in a 37 ° C cell incubator.
본 명세서에서, 상기 “인간 진피유래 섬유아세포”는 제4형 콜라겐이 코팅된 배양접시에서 피부 섬유아세포 (Normal human dermal fibroblasts, NHDF)를 5분간 배양하였을 때, 초기 5분 내에 배양접시에 붙지는 않지만 4시간 이내에 붙는 세포(SA; Slowly Adhering)를 의미할 수 있다. In the present specification, the " human dermis-derived fibroblast " is a fibroblast derived from human dermal fibroblasts (NHDF) cultured for 5 minutes in a culture dish coated with collagen type IV, But it can mean cells attached within 4 hours (SA: slow adhering).
아울러, 본 명세서에서 상기 “인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포”는 제4형 콜라겐이 코팅된 배양접시에서 피부 섬유아세포 (Normal human dermal fibroblasts, NHDF)를 5분간 배양하였을 때, 초기 5분 내에 배양접시에 붙은 세포(RA; Rapidly Adhering)를 의미할 수 있다. In addition, in the present specification, the "human skin dermis-derived adult stem cells" were cultured for 5 minutes in normal human dermal fibroblasts (NHDF) in a culture dish coated with
본 발명의 일 관점인 배양액에 있어서, 상기 줄기세포는 피부 섬유아세포를 계대배양하여 얻어지는 세포 중 제4형 콜라겐을 처리하고 1 내지 5분 동안 콜라겐에 부착되는 세포를 포함한다. In the culture solution which is one aspect of the present invention, the stem cells include cells that are treated with the type-IV collagen in the cells obtained by subculturing the dermal fibroblasts and adhere to the collagen for 1 to 5 minutes.
구체적으로, 상기 줄기세포는 상기 피부 섬유아세포를 1~5분 동안 젤라틴 또는 제4형 콜라겐과 반응시켜 얻어진 것일 수 있고, 상기 젤라틴은 증류수에 0.1~1 중량%의 농도로 용해된 것일 수 있으며, 상기 제4형 콜라겐은 증류수에 10~30 μg/ml의 함량으로 용해된 것일 수 있다. 아울러, 상기 젤라틴 또는 제4형 콜라겐은 0~10℃의 온도에서 16~24시간 동안 기질에 코팅시켜 사용할 수 있다. Specifically, the stem cells may be obtained by reacting the dermal fibroblasts with gelatin or type-IV collagen for 1 to 5 minutes, and the gelatin may be dissolved in distilled water at a concentration of 0.1 to 1 wt% The type-IV collagen may be dissolved in distilled water in an amount of 10 to 30 μg / ml. The gelatin or
본 발명의 일 관점인 배양액에 있어서, 상기 줄기세포는 KCTC11995BP일 수 있다. 상기 줄기세포 KCTC11995BP는 본 발명의 발명자들이 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포의 동정 및 수득율을 높이는 방법을 고안하는 과정 중, 제4형 콜라겐이 세포와 부착력이 시간에 따라 상이함을 확인하고, 이를 바탕으로 완성한 발명이다.In the culture medium which is one aspect of the present invention, the stem cell may be KCTC11995BP. The inventors of the present invention have confirmed that the stem cell KCTC11995BP is different in time from the type IV collagen to the adherence of cells in the course of devising a method for enhancing the identification and yield of human skin dermis-derived adult stem cells, .
본 발명의 일 관점인 배양액에 있어서, 상기 배양액은 상기 bFGF를 인간 진피유래 섬유아세포 배양액에 비해 1.3배 이상으로 포함할 수 있다. 상기 범위의 bFGF를 포함하여야 피부의 노화를 억제하거나 개선할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 bFGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.32배 이상, 1.34배 이상, 1.36배 이상, 1.38배 이상 또는 1.4배 이상으로 포함할 수 있다. 아울러, 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 bFGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.6 배 이하로 포함할 수 있다. In the culture solution which is one aspect of the present invention, the culture liquid may contain the bFGF at 1.3 times or more as compared with the human dermis-derived fibroblast culture solution. The above range of bFGF should be included to suppress or ameliorate skin aging. In view of the above, the culture solution may contain 1.32 times, 1.34 times, 1.36 times, 1.38 times, or 1.4 times as much as the human dermis-derived fibroblasts. In addition, from the above viewpoint, the culture liquid may contain the bFGF at 1.6 times or less as compared with the human dermis-derived fibroblast.
본 발명의 일 관점인 배양액에 있어서, 상기 배양액은 상기 HGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 2배 이상으로 포함할 수 있다. 상기 범위의 HGF를 포함하여야 피부의 노화를 억제하거나 개선할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 HGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 2.5배 이상, 3배 이상 또는 3.5배 이상으로 포함할 수 있다. 아울러, 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 HGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 4.2 배 이하로 포함할 수 있다. In the culture solution which is one aspect of the present invention, the culture solution may contain HGF at least twice as much as the human dermal fibroblast. The above range of HGF must be included to suppress or improve aging of the skin. From the above viewpoint, the culture solution may contain 2.5 times, 3 times, or 3.5 times or more of the HGF as compared with the human dermis-derived fibroblast. In addition, from the above viewpoint, the culture solution may contain the HGF at 4.2 times or less as compared with the human dermis-derived fibroblast.
본 발명의 일 관점인 배양액에 있어서, 상기 배양액은 상기 IGFBP-1를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 2배 이상으로 포함할 수 있다. 상기 범위의 IGFBP-1를 포함하여야 피부의 노화를 억제하거나 개선할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 IGFBP-1를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 2.1배 이상, 2.2배 이상, 2.3배 이상, 2.4배 이상 또는 2.5배 이상으로 포함할 수 있다. 아울러, 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 IGFBP-1를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 3.2 배 이하로 포함할 수 있다.In the culture solution which is one aspect of the present invention, the culture solution may contain the IGFBP-1 at least twice as much as the human dermis-derived fibroblast. The above range of IGFBP-1 must be included to inhibit or ameliorate aging of the skin. In view of the above, the culture solution may contain 2.1 times or more, 2.2 times, 2.3 times, 2.4 times, or 2.5 times or more of the IGFBP-1 as compared to the human dermis-derived fibroblast. In addition, from the above viewpoint, the culture solution may contain the IGFBP-1 at a ratio of 3.2 times or less as compared to the human dermis-derived fibroblast.
본 발명의 일 관점인 배양액에 있어서, 상기 배양액은 상기 IGFBP-2를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.5배 이상으로 포함할 수 있다. 상기 범위의 IGFBP-2를 포함하여야 피부의 노화를 억제하거나 개선할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 IGFBP-2를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.6배 이상, 1.7배 이상, 또는 1.8배 이상으로 포함할 수 있다. 아울러, 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 IGFBP-2를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 2.2 배 이하로 포함할 수 있다.In the culture solution which is one aspect of the present invention, the culture solution may contain the IGFBP-2 at a concentration of 1.5 times or more as compared with the human dermis-derived fibroblast. The above range of IGFBP-2 must be included to inhibit or ameliorate aging of the skin. In view of the above, the culture solution may contain 1.6 times, 1.7 times, or 1.8 times or more of the IGFBP-2 as compared to the human dermis-derived fibroblast. In addition, from the above viewpoint, the culture solution may contain the IGFBP-2 at a ratio of 2.2 times or less as compared with the human dermis-derived fibroblast.
본 발명의 일 관점인 배양액에 있어서, 상기 배양액은 상기 IGF-1를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.3배 이상으로 포함할 수 있다. 상기 범위의 IGF-1를 포함하여야 피부의 노화를 억제하거나 개선할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 기 배양액은 상기 IGF-1를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.32배 이상, 1.34배 이상, 1.36배 이상, 1.38배 이상 또는 1.4배 이상으로 포함할 수 있다. 아울러, 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 IGF-1를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.6 배 이하로 포함할 수 있다. In the culture solution which is one aspect of the present invention, the culture solution may contain the IGF-1 at a ratio of 1.3 times or more as compared to the human dermis-derived fibroblast. The above range of IGF-1 must be included to inhibit or ameliorate aging of the skin. From the above viewpoint, the basal medium may contain 1.32 times, 1.34 times, 1.36 times, 1.38 times, or 1.4 times as much as the human dermis-derived fibroblasts. In addition, from the above viewpoint, the culture solution may contain the IGF-1 at a ratio of 1.6 times or less as compared to the human dermis-derived fibroblast.
본 발명의 일 관점인 배양액에 있어서, 상기 배양액은 상기 VEGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.3배 이상으로 포함할 수 있다. 상기 범위의 VEGF를 포함하여야 피부의 노화를 억제하거나 개선할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 기 배양액은 상기 VEGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.32배 이상, 1.34배 이상, 1.36배 이상, 1.38배 이상 또는 1.4배 이상으로 포함할 수 있다. 아울러, 상기와 같은 관점에서, 상기 배양액은 상기 VEGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.6 배 이하로 포함할 수 있다. In the culture solution which is one aspect of the present invention, the culture liquid may contain the VEGF at least 1.3 times as compared to the human dermis-derived fibroblast. The above range of VEGF should be included to suppress or improve aging of the skin. From the above viewpoint, the basal medium may contain the VEGF in an amount of 1.32 times, 1.34 times, 1.36 times, 1.38 times, or 1.4 times as much as that of the human dermis-derived fibroblasts. In addition, from the above viewpoint, the culture solution may contain the VEGF at 1.6 times or less as compared with the human dermis-derived fibroblast.
본 발명은 다른 관점에서, 상기 배양액을 유효성분으로 포함하는, 피부 세포의 노화 억제 또는 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 관점인 조성물은 피부 세포의 노화를 억제하여 노화가 천천히 진행되게 하거나, 노화된 피부를 새롭게 생성시킨 피부로 대체하거나 또는 콜라겐 등의 생성을 촉진함과 동시에 콜라겐 분해 효소의 발현을 억제시켜서, 진행 중인 노화에 따른 현상을 개선시킬 수 있다. In another aspect, the present invention relates to a composition for suppressing or alleviating aging of skin cells comprising the above-mentioned culture medium as an active ingredient. The composition, which is one aspect of the present invention, inhibits aging of skin cells to slow the progression of aging, to replace aged skin with fresh skin, or to promote the production of collagen and the like and to inhibit the expression of collagenase Thereby improving the phenomenon caused by ongoing aging.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 노화는 광노화를 포함한다. In one aspect of the present invention, the aging comprises photoaging.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 배양액은 자외선에 의한 피부 세포 사멸을 감소시킬 수 있다. 상기 세포의 사멸량 또는 사멸률은 본 발명의 배양액이 피부 세포의 사멸 자체를 감소시킬 수 있거나, 또는 정상 세포의 생성을 촉진하거나 활성을 촉진하고 이러한 정상 세포가 상기 자외선 조사된 피부로 이동하여 감소될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In the composition according to one aspect of the present invention, the culture solution can reduce skin cell death due to ultraviolet rays. The killing or killing rate of the cells may be such that the culture medium of the present invention can reduce the killing of the skin cells or promotes the production of normal cells or promotes the activity, But is not limited thereto.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 배양액은 자외선에 의해 손상된 피부 세포의 회복을 촉진시킬 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 일 관점인 조성물은 자외선에 의해 손상된 피부 세포 자체의 재생을 촉진할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In a composition according to one aspect of the present invention, the culture liquid can promote recovery of skin cells damaged by ultraviolet light. Specifically, the composition, which is one aspect of the present invention, can promote regeneration of skin cells damaged by ultraviolet rays, but is not limited thereto.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 배양액은 정상적인 피부 세포의 증식을 증진시키거나, 또는 상기 증식된 피부 세포를 자외선에 의해 손상된 피부 세포로 이동을 촉진시킬 수 있다. In one aspect of the present invention, the culture medium may promote normal skin cell proliferation or promote the migration of the proliferated skin cells to skin cells damaged by ultraviolet light.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 노화는 내인성 노화를 포함한다. In one aspect of the invention, the aging comprises endogenous aging.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 배양액은 콜라겐 또는 TIMP(tissue inhibitor of metalloprotease)의 발현을 증진시킬 수 있다. 상기 콜라겐 또는 TIMP의 형태 (type)에는 제한이 없으나, 구체적으로 콜라겐 I, 콜라겐 IV 및 콜라겐 V 중 어느 하나를 포함하거나 또는 TIMP1, TIMP2, TIMP3 및 TIMP4 중 어느 하나를 포함할 수 있다. 아울러 본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 배양액은 콜라겐을 생성하는 기작 (cascade)의 업스트림 (up-stream)의 기작을 활성화시키거나 이에 관련된 단백질 또는 효소 등의 발현을 증진시킬 수 있다. 본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 배양액은 또한 TIMP를 생성하는 기작 (cascade)의 업스트림 (up-stream)의 기작을 활성화시키거나 이에 관련된 단백질 또는 효소 등의 발현을 증진시킬 수 있다.In a composition according to one aspect of the present invention, the culture may enhance the expression of collagen or a tissue inhibitor of metalloprotease (TIMP). There is no limitation on the type of the collagen or TIMP, but it may include any one of collagen I, collagen IV and collagen V, or may include any one of TIMP1, TIMP2, TIMP3 and TIMP4. In addition, in the composition according to one aspect of the present invention, the culture solution can promote the up-stream mechanism of the cascade of producing collagen or enhance the expression of proteins or enzymes associated therewith. In a composition that is an aspect of the present invention, the culture may also enhance the expression of proteins or enzymes that activate or are associated with an up-stream mechanism of the cascade that produces TIMP.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 콜라겐은 콜라겐 I, 콜라겐 IV 및 콜라겐 V으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 콜라겐을 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, the collagen may comprise at least one collagen selected from the group consisting of Collagen I, Collagen IV and Collagen V.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 배양액은 MMP(matrix metalloproteinase)의 발현을 저해할 수 있다. 상기 콜라겐 또는 MMP의 형태 (type)에는 제한이 없으나, 구체적으로 MMP1, MMP8, MMP13, MMP2, MMP9 및 MMP12 중 어느 하나를 포함할 수 있다. In a composition according to one aspect of the present invention, the culture medium may inhibit the expression of matrix metalloproteinase (MMP). There is no limitation on the type of the collagen or MMP, but it may specifically include any one of MMP1, MMP8, MMP13, MMP2, MMP9 and MMP12.
본 발명의 일 관점인 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. One aspect of the present invention is a cosmetic composition.
화장료 조성물로는 예를 들어, 기초 화장료, 메이크업 화장료, 모발용 화장료, 바디용 화장료 등이 있을 수 있고, 그 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. The cosmetic composition may be, for example, a basic cosmetic composition, a makeup cosmetic composition, a hair cosmetic composition, a body cosmetic composition or the like, and the formulation is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose.
예를 들면, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연화장수, 영양화장수, 로션, 바디로션, 영양 크림, 마사지 크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 젤, 패치, 수중유(O/W)형, 유중수(O/W)형 등의 기초 화장료, 립스틱, 메이크업베이스 또는 파운데이션 등의 색조 화장료, 샴푸, 린스, 바디클렌저, 치약 또는 구강 청정제 등의 세정료, 헤어토닉, 젤 또는 무스 등의 정발제, 양모제 또는 염모제 등의 모발용 화장료 조성물로 제형화 될 수 있다. For example, the cosmetic composition can be formulated into a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, But is not limited thereto. More specifically, the present invention relates to a cosmetic composition, which comprises at least one of a softening agent, a nutritional lotion, a lotion, a body lotion, a nutritional cream, a massage cream, a moisturizing cream, a hand cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, Shampoos, rinses, body cleansers, toothpastes or mouthwashes, hair tonics, cosmetics, cosmetics, cosmetics, cosmetics, cosmetics, Gel or mousse, or a hair cosmetic composition such as a hair dye or a hair dye.
상기 화장료 조성물은 화장품학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다.The cosmetic composition contains a cosmetically acceptable medium or base. It may be in any form suitable for topical application, for example as a solution, a gel, a solid or a paste anhydrous product, an emulsion obtained by dispersing an oil phase in water, a suspension, a microemulsion, a microcapsule, a microgranule or an ionic form (liposome) and / In the form of a non-ionic follicle dispersing agent, or in the form of creams, skins, lotions, powders, ointments, sprays or conical sticks. These compositions may be prepared according to conventional methods in the art.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a dissolving agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.In the case where the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다. When the formulation of the present invention is an interfacial active agent-containing cleansing, the carrier component may include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives, or ethoxylated glycerol fatty acid esters.
본 발명의 일 실시태양에서, 상기 화장료 조성물에 추가적으로 점증제를 함유할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 점증제는 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 하이드록시 구아닌, 하이드록시 메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄, 세테아릴 알콜, 스테아릭산, 카라기난 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 카르복시 메틸 셀룰로스, 카르복시 비닐 폴리머, 폴리쿼터늄 중에서 1종 이상을 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 카르복시 비닐 폴리머가 될 수 있다. In one embodiment of the present invention, the cosmetic composition may further contain an enhancer. The thickening agent included in the cosmetic composition of the present invention may be selected from the group consisting of methylcellulose, carboxymethylcellulose, carboxymethylhydroxyguanine, hydroxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, carboxyvinyl polymer, polyquaternium, cetearyl alcohol, Carrageenan, and the like. Among them, at least one of carboxymethyl cellulose, carboxyvinyl polymer, and polyquaternium can be used, and most preferably, it can be a carboxyvinyl polymer.
본 발명의 일 실시태양에서 상기 화장료 조성물은 필요에 따라 적절한 각종의 기제와 첨가제를 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 발명자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 필요에 따라 허용 가능한 첨가제를 함유할 수 있으며, 예를 들면, 당업계에 통상적인 방부제, 색소, 첨가제 등의 성분을 추가로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the cosmetic composition may contain various bases and additives as appropriate, and the kind and amount of these components can be easily selected by the inventors. The composition may contain an additive that is acceptable according to need, and may further include components such as preservatives, pigments, and additives customary in the art.
방부제는 구체적으로 페녹시에탄올(Phenoxyethanol) 또는 1,2-헥산디올 (1,2-Hexanediol) 등이 될 수 있고, 향료는 인공향료 등이 될 수 있다.The preservative may specifically be phenoxyethanol or 1,2-hexanediol, and the perfume may be an artificial perfume or the like.
그리고, 본 발명의 일 실시태양에서 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수 등을 들 수 있다.And, in one embodiment of the present invention, the cosmetic composition may comprise a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymeric polysaccharides, sphingolipids and seaweed extracts. Examples of the compounding ingredients that may be added include organic solvents such as a preservative component, a moisturizer, an emollient, a surfactant, an organic and inorganic pigment, an organic powder, an ultraviolet absorbent, a preservative, a bactericide, an antioxidant, a plant extract, a pH adjuster, A blood circulation promoter, a cold agent, a restriction agent, and purified water.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.The components to be added in addition to these components are not limited thereto, and any of the above components can be compounded within a range that does not impair the objects and effects of the present invention.
본 발명의 일 관점인 조성물은 또한 약학 조성물일 수 있다. A composition that is an aspect of the invention may also be a pharmaceutical composition.
본 발명의 일 실시예에서 약학 조성물은 상기 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포의 배양액을 유효성분으로 하여 상용되는 무기 또는 유기의 담체, 부형제 및 희석제를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다. 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 패취, 스프레이, 현탁제 및 유제로 이루어진 군에서 선택되는 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In one embodiment of the present invention, the pharmaceutical composition is prepared by adding a commercially available inorganic or organic carrier, excipient, and diluent as the active ingredient of the human skin dermis-derived adult stem cell to a solid preparation, a semi-solid or liquid form, Can be formulated. The preparation for parenteral administration may be a transdermal dosage form selected from the group consisting of drops, ointments, lotions, gels, creams, patches, sprays, suspensions, and emulsions.
상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. Examples of carriers, excipients and diluents that can be contained in the composition include lactose, dextrose, sucrose, oligosaccharide, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
각 제형에 의한 조성물에 있어서, 상기한 본 발명의 조성물 이외의 다른 성분들을 기타 피부 외용제의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 이 경우 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승효과가 일어날 수 있다.In the composition according to each formulation, other components other than the composition of the present invention may be mixed and selected without difficulty by those skilled in the art according to the formulation or use purpose of other external preparation for skin, etc. In this case, A synergistic effect can occur.
또한, 본 발명에 의한 조성물이 약학 조성물로 사용될 경우에, 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투업 조절을 위한 염 또는 완충제 등의 약학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다. Further, when the composition according to the present invention is used as a pharmaceutical composition, it may further contain a preservative, a stabilizer, a wetting agent or an emulsifying accelerator, a pharmaceutical adjuvant such as a salt or buffer for controlling the osmotic pressure, and other therapeutically useful substances And can be formulated into various oral or parenteral dosage forms according to conventional methods.
유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다.It should be understood that the actual dosage of the active ingredient should be determined in light of various relevant factors such as the severity of the symptoms, the route of administration selected, the age, sex, weight and health status of the subject.
일반적으로 유효성분의 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 대략 2000mg/kg/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 0.5mg/kg/일 내지 2.5mg/kg/일이다. 외용투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
Generally, the dosage of active ingredient is in the range of 0.001 mg / kg / day to about 2000 mg / kg / day. A more preferred dosage is 0.5 mg / kg / day to 2.5 mg / kg / day. External administration may be administered once a day or divided into several doses.
이하, 하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐, 본 발명의 범주 및 범위가 이에 한정되지 않는다.Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to the following examples. However, the following examples are provided for illustrative purposes only in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited thereto.
[실시예 1] 제4형 콜라겐를 이용한 피부 섬유아세포에서 RA/SA 세포의 분리[Example 1] Separation of RA / SA cells from skin
피부 섬유아세포 (Normal human dermal fibroblasts, NHDF)를 론자(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에서 구입하였다. 상기 피부 섬유아세포를 75 cm2 T-플라스크에서 계대배양하여, CO2 배양기 (CO2 Incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양을 하였다. 75 cm2 T-플라스크에 피부 섬유아세포를 배양하여 가득차면, trypsin/EDTA로 처리하여 세포를 떼어내어 1:4로 계대배양하는 것을 3차례까지 하고, 이렇게 해당 세포의 양을 충분히 늘려서 RA/SA세포로 분리를 시도하였다. 20 μg/ml의 제4형 콜라겐을 100 mm 배양접시에 5ml씩 넣어주어 4℃에서 24시간 동안 코팅하였다. 인간 진피유래 섬유아세포를 0.25% 트립신 (Trypsin-EDTA)으로 100 mm 배양접시로부터 분리한 뒤, 1200rpm에서 원심분리시켜 5분간 세포를 가라앉힌 다음, 상층액을 제거한 뒤에 5ml의 DMEM배지를 넣어주어 세포를 현탁하고, 제4형 콜라겐이 코팅된 배양접시에서 5분간 배양하여 배양접시에 붙은 세포(RA; Rapidly Adhering) 와 초기 5분 내에 배양접시에 붙지는 않지만 4시간 이내에 붙는 세포(SA; Slowly Adhering)로 각각 분리하였고, 상기 RA 세포를 기탁하였다 (KCTC11995BP). 상기 RA 세포가 본 발명의 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포이고, 상기 SA 세포가 본 발명의 인간 진피유래 섬유아세포이다.
Normal human dermal fibroblasts (NHDF) were purchased from Lonza (Inc., Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511). The skin fibroblasts were subcultured in a 75 cm 2 T-flask and cultured in a CO 2 incubator (CO 2 Incubator) at 37 ° C and 5% CO 2 . When the skin fibroblasts were cultured in a 75 cm 2 T-flask and the cells were filled up with trypsin / EDTA, the cells were removed, and subcultured at a ratio of 1: 4 to 3 times. Cells. 20 μg / ml type-IV collagen was added to a 100-mm culture dish in an amount of 5 ml, and the mixture was coated at 4 ° C. for 24 hours. Human dermis-derived fibroblasts were separated from 100-mm culture dishes with 0.25% trypsin-EDTA, centrifuged at 1200 rpm for 5 minutes, and then the supernatant was removed and 5 ml of DMEM medium was added to the cells (RA: Rapidly Adhering), which was incubated for 5 minutes on a culture plate coated with
[실시예 2] 분리한 RA/SA 세포로부터 배양액 확보[Example 2] Culture of RA / SA cells isolated
실시예 1에서와 같이 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포와 인간 진피유래 섬유아세포를 분리한 후, 세럼이 없는 DMEM배지 상태에서 2일간 CO2 배양기 (CO2 Incubator)에서 37℃, 5% CO2 조건하에서 부유배양한 후 각각의 배양액을 확보하였다.
Human dermal dermis-derived adult stem cells and human dermis-derived fibroblasts were separated from each other in a serum-free DMEM medium for 2 days in a CO 2 incubator (CO 2 Incubator) at 37 ° C and 5% CO 2 , Respectively, and the respective culture media were obtained.
[[ 실시예Example 3] 인간 성장 인자/ 3] human growth factor / 싸이토카인Cytokine 항체를 이용한 인간 피부 진피 유래 Derived from human skin dermis using antibodies 성체 줄기세포의 분석Analysis of adult stem cells
RayBio Human Cyokine/Growth Factor Antibody(RayBiotech, Noncross, GA, USA)를 사용하여, 세럼이 없는 상태에서의 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포 및 음성 대조군 (실시예 1의 인간 진피유래 섬유아세포)의 배양액 성분을 비교하였다. 어레이 멤브레인(Array membrane)을 상온에서 30분 동안 블로킹 버퍼(blocking buffer)에서 인큐베이션(incubation)시킨 후, 각각의 세포를 키운 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포 및 음성 대조군 (실시예 1의 인간 진피유래 섬유아세포)의 배양액 (conditioned medium) 1 ml를 1시간 동안 처리하였다. 상기 멤브레인을 5번 세척한 후, 비오틴-결합된(biotin-conjugated) 항체를 1-2시간 동안 상온에서 처리하고, 기질인 HRP-결합된 스트렙타비딘(HRP-conjugated streptavidin) 2ml을 첨가한 후 2시간 동안 기다렸다. 그 후, 디텍션 버퍼(detection buffer)를 2분 동안 처리하여 LAS 3000 chemiluminescence imaging system (Fujifilm Inc., Tokyo, Japan)로 분석하여, 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포의 배양액 성분으로서 bFGF(basic Fibroblast growth factor), HGF(Hepatocyte growth factor), IGFBP-1, -2 (Insulin-like growth factor binding protein), IGF-1(Insulin-like growth factor), 및 VEGF(Vascular endothelial growth factor)를 동정한 결과, 도 1을 얻었다. Human skin dermis-derived adult stem cells and a negative control (fibroblast-derived human dermis of Example 1) culture medium without serum were cultured using RayBio Human Cykine / Growth Factor Antibody (RayBiotech, Noncross, GA, USA) Were compared. The array membrane was incubated in a blocking buffer for 30 minutes at room temperature and then incubated with human skin dermis-derived adult stem cells grown in the respective cells and a negative control (human dermis-derived fiber of Example 1 1 ml of the conditioned medium was treated for 1 hour. After washing the
도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예 1의 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포의 배양액은 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 상기 성장인자의 발현이 증가하는 것을 알 수 있었다.
As can be seen from FIG. 1, the culture medium of human skin dermis-derived adult stem cells of Example 1 showed an increase in the expression of the growth factor as compared with human dermis-derived fibroblasts.
[실시예 4] 인간 피부 진피 성체 줄기세포의 배양액의 스크래치 상처 치유 효과 분석[Example 4] Analysis of scratch wound healing effect of cultured human dermal epithelial stem cells
음성 대조군(control)은 피부 섬유아세포 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 어떠한 처리도 하지 않은 군, 양성 대조군 1(UVA)은 상기 피부 섬유아세포 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 자외선을 조사한 군, 양성 대조군 2(UVA non-hDSPC-CM)는 자외선을 조사한 피부 섬유아세포(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 인간 진피유래 섬유아세포 배양액을 처리한 군으로 하였고, 실험군(UVA hDSPC-CM)은 자외선을 조사한 피부 섬유아세포(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 인간 피부 진피 성체 줄기세포 배양액을 처리한 군으로 하였다. 음성대조군과 자외선을 조사한 상기 3개 군 각각의 피부 섬유아세포 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511) 5 ml 파이펫 팁으로 스크래치를 내었다. The negative control group was a group that did not undergo any treatment with dermal fibroblast (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511), positive control group 1 (UVA) (Lonza, Inc., Walkerville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511) were irradiated with ultraviolet light. Positive control 2 (UVA non-hDSPC-CM) (UVA hDSPC-CM) were irradiated with UV-irradiated skin fibroblasts (Lonza, Inc.) And treated with human fibroblast-derived fibroblast culture. Human dermal epithelial stem cell cultures were treated with NHDF-Ad-Der Fibroblasts (CC-2511, Walkersville, MD, USA). Negative control and scintillation were performed with a 5 ml pipette tip of dermal fibroblast (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511) in each of the three groups irradiated with ultraviolet light.
그 후, 세포의 이동률과 세포의 증식률을 측정하였다. 세포의 이동률은 0hr에서 스크래치된 부분의 너비 대비 48hr에서 스크래치된 부분의 너비를 백분화하여 구하였고, 세포의 증식은 CCK8 assay kit를 상기 각각 군에 해당하는 세포를 키우는 배양액에, 배양액의 1/10 분량을 처리하고 2시간 동안 CO2 배양기 (CO2 Incubator)의 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양시킨 후, 배양액의 optical density를 SpectraMax 190 microplate reader (Molecular Devices)로 측정하였고, 그 결과 도 2를 얻었다.After that, the cell migration rate and cell proliferation rate were measured. The cell migration rate was determined by dividing the width of the scratched area by 48 hours versus the width of the scratched area at 0 hr. To proliferate the cells, CCK8 assay kit was added to the cultures to grow cells corresponding to the respective groups, 10 min and treated with CO 2 incubator (CO2 Incubator) at 37 ° C and 5% CO 2 for 2 hours. The optical density of the culture was measured with a SpectraMax 190 microplate reader (Molecular Devices) .
도 2에 의하면, 양성 대조군 1(UVA)은 음성 대조군(control)에 비해 세포의 이동율이 감소하였고, 세포의 증식 역시 현저히 감소하였다. 아울러, 양성 대조군 2(UVA non-hDSPC-CM)는 음성 대조군(control)에 비해 세포의 이동율이 감소하였고, 세포의 증식 역시 현저히 감소한 반면, 실험군(UVA hDSPC-CM)의 경우 세포의 이동률과 증식이 음성대조군에 준할 만큼 회복 되는 것을 확인할 수 있었다.
2, the positive control group 1 (UVA) showed a decrease in cell migration rate and a marked decrease in cell proliferation compared to the negative control group. In addition, the positive control group 2 (UVA non-hDSPC-CM) showed a decrease in cell migration rate and a marked decrease in cell proliferation compared to the negative control group, whereas in the experimental group (UVA hDSPC-CM) Was recovered to a level comparable to the negative control group.
[[ 실시예Example 5] 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포의 배양액의 세포 사멸 억제 효과 5] Effect of human skin dermis-derived adult stem cells on cell death
음성 대조군(control)은 피부 섬유아세포 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 어떠한 처리도 하지 않은 군, 양성 대조군 1(UVA)은 상기 피부 섬유아세포 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 자외선을 조사한 군, 양성 대조군 2(UVA non-hDSPC-CM)는 자외선을 조사한 피부 섬유아세포(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 인간 진피유래 섬유아세포 배양액을 처리한 군으로 하였고, 실험군(UVA hDSPC-CM)은 자외선을 조사한 피부 섬유아세포(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포 배양액을 처리한 군으로 하였다. The negative control group was a group that did not undergo any treatment with dermal fibroblast (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511), positive control group 1 (UVA) (Lonza, Inc., Walkerville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511) were irradiated with ultraviolet light. Positive control 2 (UVA non-hDSPC-CM) (UVA hDSPC-CM) were irradiated with UV-irradiated skin fibroblasts (Lonza, Inc.) And treated with human fibroblast-derived fibroblast culture. Human Adipose-derived stem cell culture medium was treated with NHDF-Ad-Der Fibroblasts (CC-2511, Walkersville, MD, USA).
세포 사멸의 정도를 염색하기 위해, 상기 4개의 군에 해당하는 세포들을 Annexin V binding buffer (BD Pharmingen, San Jose, CA, USA) 로 처리한 후, Annexin V-FITC (BD Pharmingen)로 15분 동안 염색하였다. 이후 세포의 이미지는 형광 현미경(EVOS fl fluorescence microscope , Advanced Microscopy Group, Mill Creek, WA, USA)을 사용하여 관찰하였다. Cells of the four groups were treated with Annexin V binding buffer (BD Pharmingen, San Jose, CA, USA) and stained with Annexin V-FITC (BD Pharmingen) for 15 minutes Lt; / RTI > Subsequently, the images of the cells were observed using a fluorescence microscope (EVOS fl fluorescence microscope, Advanced Microscopy Group, Mill Creek, WA, USA).
또한, 세포 사멸의 정도를 염색하기 위해, 상기 4개의 군에 해당하는 세포들을 Annexin V-FITC 및 propidium iodide (PI)로 염색한 후, 유세포형광 분석기 FACSAria II (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) 를 통해 분석하였다. Cells corresponding to the four groups were stained with Annexin V-FITC and propidium iodide (PI), and analyzed by flow cytometry FACSAria II (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA ).
그 결과 (도 3), 양성 대조군 1(UVA)과 양성 대조군 2(UVA non-hDSPC-CM)은 음성 대조군(control) 에 비해 세포의 사멸이 증가되었으나, 실험군(UVA hDSPC-CM)은 피부 진피 유래 성체 줄기세포 배양액을 처리하여 세포의 사멸이 음성 대조군(control)에 준할 만큼 회복 되는 것을 확인할 수 있었다.
(UVA hDSPC-CM) was significantly higher in the skin dermis (Fig. 3), positive control group 1 (UVA) and positive control group 2 (UVA non-hDSPC- Derived adult stem cell culture medium was treated to confirm that the death of the cells was recovered to a level equivalent to the negative control (control).
[[ 실시예Example 6] 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포의 배양액의 6] Human skin dermal-derived adult stem cells 세포외기질Extracellular matrix 유전자 및 Gene and 세포외기질Extracellular matrix 분해효소 유전자의 발현 회복 효과 Restoration of expression of degrading enzyme gene
음성 대조군(control)은 피부 섬유아세포 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 어떠한 처리도 하지 않은 군, 양성 대조군 1(UVA)은 상기 피부 섬유아세포 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 자외선을 조사한 군, 양성 대조군 2(UVA non-hDSPC-CM)는 자외선을 조사한 피부 섬유아세포(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 인간 진피유래 섬유아세포 배양액을 처리한 군으로 하였고, 실험군(UVA hDSPC-CM)은 자외선을 조사한 피부 섬유아세포(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)에 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포 배양액을 처리한 군으로 하였다.The negative control group was a group that did not undergo any treatment with dermal fibroblast (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511), positive control group 1 (UVA) (Lonza, Inc., Walkerville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511) were irradiated with ultraviolet light. Positive control 2 (UVA non-hDSPC-CM) (UVA hDSPC-CM) were irradiated with UV-irradiated skin fibroblasts (Lonza, Inc.) And treated with human fibroblast-derived fibroblast culture. Human Adipose-derived stem cell culture medium was treated with NHDF-Ad-Der Fibroblasts (CC-2511, Walkersville, MD, USA).
상기 4개의 군의 세포 각각을 2 ml의 PBS로 세척한 다음, 이후, 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kit, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트사의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. 인비트로젠사의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(real time-reverse transcription polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)을 통해 정량적으로 분석하였다. Each of the four groups of cells was washed with 2 ml of PBS and then RNA was isolated from the cells using Trizol reagent (Invitrogen, Carlsbad, Calif., USA). Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, Calif., USA) was used to purify the separated RNAs once more with a Qiagen RNeasy kit (QIAGEN, Valencia, CA) Were used to confirm the quality of the RNA. CDNA was synthesized from the RNA using a reverse transcription kit (Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, Calif.), And the cDNA was synthesized using real time reverse transcription polymerase chain reaction -RT-PCR).
진피의 세포외 기질 유전자의 발현 패턴 변화를 어플라이드 바이오시스템사의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan gene expression assay kit,Applied Biosystems, Foster City, CA) (COL1A1, ; COL4A1, ; COL5A1, ; MMP1, ; and TIMP1, . Human GAPDH (43333764F))을 이용하여 평가하였으며, 그 결과를 도 4 에 나타내었다. (COL1A1, COL4A1, COL5A1, MMP1,; and TIMP1, and TIMP1) of Applied Biosystems, Inc. were used for the expression pattern change of the extracellular matrix gene of dermis, . Human GAPDH (43333764F)). The results are shown in FIG.
그 결과, 양성 대조군 1(UVA)과 양성 대조군 2(UVA non-hDSPC-CM)에서 세포외기질인 콜라겐류 및 TIMP1의 발현 (콜라겐 분해효소 MMP1의 발현은 반대)이 음성 대조군(control)에 비해 감소되었으나, 실험군은 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포 배양액을 처리한 결과, 음성 대조군(control)에 준할 만큼 회복이 되는 것을 확인할 수 있었다 (도 4). 이러한 증가는 통계적으로 유의하였으며, 통계는 양측 스튜던트 t 테스트로 검증하였으며, p 값이 0.05 이하일 때 유의적인 차이가 있다고 표시하였다.
As a result, the expression of collagen and TIMP1 (the expression of collagenase MMP1 was reversed) in the positive control group 1 (UVA) and the positive control group 2 (UVA non-hDSPC-CM) However, the experimental group treated with human dermal dermis-derived adult stem cell cultures was found to be recovered to a level comparable to the negative control (Fig. 4). These increases were statistically significant, and statistical tests were verified by both Student's t test, indicating a significant difference when the p-value was less than 0.05.
[실시예 7] 베타갈락토시다아제 양 관찰 [Example 7] Observation of beta-galactosidase amount
계대배양이 10번째로 진행된 내인성 노화(senescence)를 겪는 피부 섬유아세포(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511)로부터 배양 배지를 걷어낸 후, 음성 대조군(control)은 인간 진피유래 섬유아세포 배양액을 72시간 처리하고 실험군에는 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포 배양액을 72시간 처리하였다. 배양배지를 걷어낸 후, 고정 용액을 15분 동안 처리하였다. 상기 고정 용액을 제거한 후, PBS로 두 번 씻어준 후, SA-beta-galactosidase detection solution (Cellular Senescence Assay Kit, Chemicon, US) 2ml을 처리한 후, 빛이 없는 곳에서 4시간 동안 두었다. 그 후, PBS로 염색된 세포를 씻어주고, 현미경(Phase contrast microscopy)으로 푸른 색으로 염색된 세포를 관찰하였다. After the culture medium was removed from the skin fibroblast (Lonza, Inc., Walkersville, MD, USA, NHDF-Ad-Der Fibroblasts, CC-2511) undergoing the 10th-last intravenous senescence, control) were treated with human dermis - derived fibroblast cultures for 72 hours and treated with human skin dermis - derived adult stem cell cultures for 72 hours. After the culture medium was removed, the fixative solution was treated for 15 minutes. The immobilized solution was removed, washed twice with PBS, treated with 2 ml of SA-beta-galactosidase detection solution (Cellular Senescence Assay Kit, Chemicon, US), and placed in the absence of light for 4 hours. Then, cells stained with PBS were washed, and blue-stained cells were observed by a microscope (phase contrast microscopy).
그 결과 (도 5), 음성대조군에 비해 인간 피부 진피 유래 성체 줄기세포의 배양액을 처리한 경우, 푸른 색을 띠는 세포의 수가 현저하게 감소되어, 베타갈락토시다아제 (beta galactosidase)가 감소한 결과를 관찰할 수 있었다.
As a result (Fig. 5), when the culture medium of human skin dermis-derived adult stem cells was treated as compared with the negative control group, the number of blue-colored cells was remarkably decreased and beta-galactosidase was decreased .
이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형 예를 설명하나, 약학 조성물 및 화장료 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
Hereinafter, a formulation example of the composition according to the present invention will be described. However, the pharmaceutical composition and the cosmetic composition can be applied to various formulations, which are not intended to limit the present invention but merely to illustrate the present invention.
[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)[Formulation Example 1] Softening lotion (skin lotion)
[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)[Formulation Example 2] Nutritional lotion (Milk lotion)
[제형예 3] 영양크림[Formulation Example 3] Nourishing cream
[제형예 4] 마사지 크림[Formulation Example 4] Massage cream
[제형예 5] 팩[Formulation Example 5] Pack
[제형예 6] 연고[Formulation Example 6] ointment
[제제예 1] 연질캅셀제[Formulation Example 1] Soft capsule
KCTC11995BP 의 배양액 0.0025g, 홍삼추출물 50 mg, 팜유 2 mg, 팜경화유 8 mg, 황납 4 mg 및 레시틴 6 mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 1 캡슐당 400 mg씩 충진하여 연질캅셀을 제조하였다.A soft capsule was prepared by mixing 0.0025 g of culture medium of KCTC11995BP, 50 mg of red ginseng extract, 2 mg of palm oil, 8 mg of palm kernel oil, 4 mg of yellow pearls and 6 mg of lecithin and filling the capsule with 400 mg per capsule according to a conventional method.
[제제예 2] 정제[Formulation Example 2] Tablets
KCTC11995BP 의 배양액 0.0025g, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다.The granules were prepared by mixing 0.0025 g of the culture medium of KCTC11995BP, 100 mg of glucose, 50 mg of red ginseng extract, 96 mg of starch and 4 mg of magnesium stearate and 40 mg of 30% ethanol, followed by drying at 60 ° C., Tablets were tableted.
[제제예 3] 과립제[Formulation Example 3] Granules
KCTC11995BP 의 배양액 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg 및 전분 600 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 1 g으로 하였다.The granules were formed by mixing 150 mg of the culture medium of KCTC11995BP, 100 mg of glucose, 50 mg of red ginseng extract and 600 mg of starch and 100 mg of 30% ethanol, and dried at 60 ° C to form granules. The final weight of the contents was 1 g.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the same is by way of illustration and example only and is not to be construed as limiting the scope of the present invention. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (20)
상기 배양액은 bFGF(basic Fibroblast growth factor), HGF(Hepatocyte growth factor), IGFBP-1 (Insulin-like growth factor binding protein-1), IGFBP-2 (Insulin-like growth factor binding protein-2), IGF-1(Insulin-like growth factor) 및 VEGF(Vascular endothelial growth factor)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 성장인자를 인간 진피유래 섬유아세포의 배양액에 비해 증가된 양으로 가지는, 배양액. As a culture medium for human skin dermal-derived adult stem cells,
The culture medium may be selected from the group consisting of basic fibroblast growth factor (bFGF), hepatocyte growth factor (HGF), insulin-like growth factor binding protein-1 (IGFBP- 1 (insulin-like growth factor) and VEGF (vascular endothelial growth factor) in an amount increased relative to the culture medium of human dermis-derived fibroblasts.
상기 줄기세포는 피부 섬유아세포를 계대배양하여 얻어지는 세포 중 제4형 콜라겐을 처리하고 1 내지 5분 동안 콜라겐에 부착되는 세포인, 배양액. The method according to claim 1,
Wherein said stem cell is a cell which is treated with said type 4 collagen in cells obtained by subculturing dermal fibroblasts and adheres to collagen for 1 to 5 minutes.
상기 줄기세포는 KCTC11995BP인, 배양액. The method according to claim 1,
Wherein said stem cell is KCTC11995BP.
상기 배양액은 상기 bFGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.3배 이상으로 포함하는 배양액. The method according to claim 1,
Wherein said culture medium contains said bFGF at least 1.3 times as much as said human fibroblast-derived fibroblasts.
상기 배양액은 상기 HGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 2배 이상으로 포함하는, 배양액. The method according to claim 1,
Wherein said culture medium contains said HGF at least twice as much as said human fibroblast-derived fibroblasts.
상기 배양액은 상기 IGFBP-1를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 2배 이상으로 포함하는, 배양액. The method according to claim 1,
Wherein said culture medium contains said IGFBP-1 more than twice as much as said human fibroblast-derived fibroblasts.
상기 배양액은 상기 IGFBP-2를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.5배 이상으로 포함하는, 배양액. The method according to claim 1,
Wherein said culture medium contains said IGFBP-2 at least 1.5 times as much as said human fibroblast-derived fibroblasts.
상기 배양액은 상기 IGF-1를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.3배 이상으로 포함하는 배양액. The method according to claim 1,
Wherein said culture medium contains said IGF-1 at least 1.3 times as much as said human fibroblast-derived fibroblasts.
상기 배양액은 상기 VEGF를 인간 진피유래 섬유아세포에 비해 1.3배 이상으로 포함하는, 배양액. The method according to claim 1,
Wherein said culture medium contains said VEGF at least 1.3 times as much as said human fibroblast-derived fibroblasts.
상기 노화는 광노화인, 조성물. 11. The method of claim 10,
Wherein said aging is photoaging.
상기 배양액은 자외선에 의한 피부 세포 사멸을 감소시키는, 조성물.12. The method of claim 11,
Wherein the culture solution reduces skin cell death by ultraviolet light.
상기 배양액은 자외선에 의해 손상된 피부 세포의 회복을 촉진시키는, 조성물. 12. The method of claim 11,
Wherein the culture solution promotes recovery of skin cells damaged by ultraviolet light.
상기 배양액은 정상적인 피부 세포의 증식을 증진시키거나, 또는
자외선에 의해 손상된 피부 세포의 위치로 상기 증식된 피부 세포의 이동을 촉진시키는, 조성물. 14. The method of claim 13,
The culture medium may promote normal skin cell proliferation, or
Thereby promoting migration of said proliferated skin cells to the location of skin cells damaged by ultraviolet light.
상기 노화는 내인성 노화인, 조성물. 11. The method of claim 10,
Wherein said aging is endogenous aging.
상기 콜라겐은 콜라겐 I, 콜라겐 IV 및 콜라겐 V으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 콜라겐을 포함하는, 조성물. 17. The method of claim 16,
Wherein the collagen comprises at least one collagen selected from the group consisting of collagen I, collagen IV and collagen V.
상기 배양액은 MMP(matrix metalloproteinase)의 발현을 저해하는, 조성물. 16. The method of claim 15,
Wherein said culture medium inhibits the expression of matrix metalloproteinase (MMP).
상기 조성물은 화장료 조성물인, 조성물. 11. The method of claim 10,
Wherein the composition is a cosmetic composition.
상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물. 11. The method of claim 10,
Wherein the composition is a pharmaceutical composition.
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|---|---|---|---|
| KR20130067959A KR20140145473A (en) | 2013-06-13 | 2013-06-13 | Culture media of adult stem cells derived human skin dermis |
Applications Claiming Priority (1)
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20200040968A (en) * | 2018-10-10 | 2020-04-21 | 의료법인 성광의료재단 | Manufacturing method of 3D artificial skin using stem cell culture media |
-
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- 2013-06-13 KR KR20130067959A patent/KR20140145473A/en active Search and Examination
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment |