KR20120058830A - Cosmetic composition for promoting the stemness of adipose-derived stem cell and proliferating skin cell containing hypericum extracts - Google Patents

Cosmetic composition for promoting the stemness of adipose-derived stem cell and proliferating skin cell containing hypericum extracts

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KR20120058830A
KR20120058830A KR20100120314A KR20100120314A KR20120058830A KR 20120058830 A KR20120058830 A KR 20120058830A KR 20100120314 A KR20100120314 A KR 20100120314A KR 20100120314 A KR20100120314 A KR 20100120314A KR 20120058830 A KR20120058830 A KR 20120058830A
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hypericum
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cells
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김지영
김지현
김한곤
노민수
모상현
민대진
서효현
신동욱
심중현
이태룡
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(주)아모레퍼시픽
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Abstract

PURPOSE: A composition containing Hypericum extract is provided to promote adipose-derived stem cell regeneration and to transition-amplifying cell proliferation. CONSTITUTION: A composition for enhancing stemness of adipose-derived stem cells contains 0.0001-10 wt% of hypericum extract as an active ingredient. The adipose-derived stem cells are human adipose derived stem cells(hADSCs). A composition for enhancing skin cell proliferation contains the hypericum extract as an active ingredient. The skin cell is transit-amplifying cells(TA cells). A method for skin care comprises a step of treating the composition onto the skin. The hypericum extract is prepared by dissolving hypericum in boiling water and filtering.

Description

하이페리쿰 추출물을 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 및 피부세포 증식용 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR PROMOTING THE STEMNESS OF ADIPOSE-DERIVED STEM CELL AND PROLIFERATING SKIN CELL CONTAINING HYPERICUM EXTRACTS} High Perry glutamicum extract for stem cell proliferation for the last name and promote skin cell of the adipose derived stem cell composition containing {COSMETIC COMPOSITION FOR PROMOTING THE STEMNESS OF ADIPOSE-DERIVED STEM CELL AND PROLIFERATING SKIN CELL CONTAINING HYPERICUM EXTRACTS}

본 발명은 하이페리쿰 추출물을 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 및 피부세포 증식용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a high-fat extract Perry glutamicum stem cell-mediated enhancement, and for compositions for the skin cell proliferation derived from stem cells containing a.

피부는 인체를 구성하고 있는 기관 중 가장 큰 기관으로, 우리 몸 부피의 약 16%를 차지하고, 면적이 1.8 m 2 , 두께가 2~4mm, 무게가 약 3kg이며, 표피, 진피 및 피하지방층으로 구성되어 있다. The largest organ the skin of the organizations that make up the human body, accounting for about 16% of our body, volume, area of 1.8 m 2, a thickness of 2 ~ 4mm, about 3kg weight, composed of epidermis, dermis and subcutaneous fat It is. 이러한 피부는 외부 환경과 직접 접하고 있으면서 인체 유해 미생물과 같은 다양한 유해인자들과 자외선 등과 같은 외부 자극으로부터 인체를 보호하는 중요한 보호막 역할을 담당하는 동시에 전신의 대사에 필요한 생화학적 기능을 영위하는 생명 유지에 필수 불가결한 기관이다. These skin while direct contact with the external environment, a variety of adverse factors and life support, which plays an important protective role in protecting the body from external stimuli simultaneously engaged in biochemical functions required for metabolism of the body, such as ultraviolet light, such as the human body harmful microbes an indispensable institution. 특히, 진피 아래에 존재하는 피하지방층은 지방세포(adipocyte)의 소엽으로 구성되어 있는데, 외부의 열에 대해 피부 내부 기관의 보호 및 충격을 흡수하는 쿠션 역할을 하며 영양성분을 트리글리세라이드(Triglyceride)의 형태로 지방체(Lipid droplet)라는 세포 소기관에 저장하여 필요시 에너지원으로 사용하기도 한다. In particular, there subcutaneous fat layers that are below the dermis is made up of lobules of adipocytes (adipocyte), in the form of a cushion to absorb the protection and shock of the skin into an internal organ for the outer columns and triglycidyl nutrients triglyceride (Triglyceride) to save the organelles of fat body (Lipid droplet) is sometimes used as an energy source if required. 그러나 나이가 들어감에 따라 자연적인 요인과 각종 외부 자극에 의해 피부는 손상을 입게 되는데, 특히 진피에서 탄력을 담당하는 교원섬유(콜라겐), 탄력섬유(엘라스틴)의 활성 및 발현이 저하되며 탄력이 줄어듦과 동시에, 피하지방에서도 지방 생성이 감소함으로써 결국에는 피부 전반적으로 각 구성 세포들의 본래 기능이 제대로 이루어지지 않게 된다. But with age there is wear the skin is damaged by natural factors and various external stimuli, according to the entry, in particular the activity and expression of collagen which is responsible for elasticity in the dermal fibers (collagen), elastic fibers (elastin) and decreased shrink elastic at the same time, decreased lipogenesis in fat is eventually not supported by the original function of each constituent cells work properly overall skin. 그래서, 현재 널리 사용되고 있는 방법이 지방이식수술로, 이는 튤립 니들(tulip needle) 모양의 끝이 날카롭지 않은 바늘을 갖는 주사기를 이용하여 자신의 지방을 채취해 탄력이 떨어져 보이는 피부의 각 부위에 이식하는 수술이다. So, this method is currently widely used as a fat transplant, which Tulip needle (tulip needle) using a syringe with a needle tip shape that is blunt to collect their fat transplanted into each area of ​​the skin looks off momentum a surgery. 그러나 지방이식수술 이후에 이식 부피의 40~60%가 다시 인체 내에 흡수된다는 것이 보고된 바 있고, 피부가 얇고 피하지방이 적은 부위에서의 지방이식수술은 세포 덩어리가 만져지는 등의 문제가 제기되며, 실제로 이식한 지방의 생존율과 생존기간이 기대에 미치지 못해 재이식이 필요한 경우가 발생한다. But fat graft, and it reported 40% to 60% of the transplanted volume after the surgery is being absorbed into the body again, the fat transplants in the thin skin subcutaneous fat, less area is raised problems such that the cell mass by touching and it occurs if the fact of the fat graft survival and graft survival time needed to re unable to expectations.

이에, 이러한 문제점들이 있는 지방이식수술을 대체하면서 피하지방층을 충분히 증가시킬 수 있는 조성물에 대한 요구가 높아지고 있다. Therefore, these issues have been raised as to replace the fat transplant surgery can be sufficiently increased subcutaneous fat layer requirements for the composition in that. 최근 피부 탄력 감소의 원인인 콜라겐과 엘라스틴의 감소를 억제하려는 목적으로 개발되어 사용되고 있는 레티놀과 레티노익산 등의 레티노이드는 탁월한 피부 탄력 개선 효과를 나타내지만, 소량만을 피부에 적용하여도 자극이 나타난다는 단점을 가진다. Retinoids such as recently used have been developed for the purpose of suppressing the cause of collagen and elastin decrease of reduced skin elasticity, retinol and retinoic acid may exhibit excellent skin elasticity improvement, the downside is only a small amount appears stimulation is applied to the skin have. 따라서 최근 들어 이러한 원료들의 피부 자극 문제를 해소하기 위해 보다 안전하고 피부에 자극이 없는 원료를 이용한 화장품 개발에 대한 요구가 높아지고 있다. Therefore, in recent years it has increased the demand for more secure and cosmetics developed using the raw materials is not stimulate the skin to relieve skin irritation problems in these materials.

피부의 기본적인 구조는 피하지방조직에 의해서 유지되고, 이러한 피하지방조직은 피부의 볼륨감과 강도를 좌우하는 역할을 하므로, 지방조직의 부피를 증가시키는 것이 피부의 볼륨감 유지에 좋은 해결책이 될 수 있으므로, 피부의 볼륨감 유지 및 증진을 위해 피부 자극이 없으면서 지방조직의 부피를 증가시킬 수 있는 조성물의 개발이 필요한 실정이었다. The basic structure of skin is maintained by the subcutaneous adipose tissue, because the role of this subcutaneous fat tissue influence the strength feeling of skin volume, so to increase the volume of the adipose tissue can be a good solution to maintain a sense of volume of the skin was a situation eopeumyeonseo the irritation of the skin to maintain a sense of volume and improvement required for the development of compositions that can increase the volume of adipose tissue.

한편, 피부의 가장 바깥에 위치하는 표피(epidermis)에서 재생능력을 보이는 것으로 알려진 것은, 기저층에 존재하는 피부의 각질 줄기세포(Keratinocyte stem cells, KSC)이다. On the other hand, it is known to exhibit the ability to play in the skin (epidermis) which is located on the outside of the skin, the horny stem cells (Keratinocyte stem cells, KSC) present in the base layer of the skin. 각질 줄기세포가 지속적으로 분열하여 크게 두 가지 세포를 생성하는데, 하나는 자기 복제(self-renewal)를 하여 만드는 똑같은 줄기세포이고, 다른 하나는 전이-증폭 세포(Transit-Amplifying Cells, TA cells)이다. Largely to the dead skin stem cells continue dividing to create two cells, one is the same, and stem cells, and another to create the self-replication (self-renewal) is a transition - an amplifying cells (Transit-Amplifying Cells, TA cells) . 전이-증폭 세포들은 더욱 증폭하고, 초기 분화하여 각질 세포(Keratinocyte cells)가 되고, 계속 분화가 진행되어 이들은 피부 표면으로 밀려 올라간다. Transition-amplifying cells, and further amplified, and the keratinocytes (Keratinocyte cells) by the initial differentiation, differentiation is still in progress, it pushed up to the surface of the skin. 이 과정에서 각질 세포는 분화(Differentiation)와 각화(Keratinazation)를 일으키면서 각질층을 이루게 되며, 3~4주 후에는 각질층에서 떨어져 나간다. In this process, dead skin cells, causing differentiation (Differentiation) and abandonment (Keratinazation) will constitute the stratum corneum, 3-4 weeks off from the stratum corneum.

상기 각질 줄기세포 및 전이-증폭세포는 보통 기저층 세포들의 약 4-7% 정도로 극히 적은 수로 분포되며, 각질 줄기세포의 수를 증가시키는 것은 전이-증폭 세포의 수를 증가시키는 것보다 쉽지 않으며, 상대적으로 더 넓은 지역에 분포되어 있지 않아 연구에 많은 어려움이 따른다. The dead skin cells and metastasis-amplified cells are typically extremely small number of distributions to be about 4-7% of the basal layer cells, increasing the number of dead skin cells, stem transition - not easy than to increase the number of cells amplified, relatively It does not be distributed in a wider area to comply with the many difficulties in the study. 그래서 각질 줄기세포 및 전이-증폭 세포의 증식 능력을 보이는 조성물의 개발이 필요한 실정이었다. So horny stem cells and metastasis - was a situation that requires the development of amplification seen the proliferation of the cell composition.

상기 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 피부에 자극이 없으면서 지방조직을 증가시킬 수 있는 하이페리쿰 추출물을 함유하는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. In order to solve the above problems, the present invention eopeumyeonseo irritation to the skin to provide a composition containing a high-Ferry glutamicum extract which can increase the fatty tissue for the purpose. 또한 본 발명은 지방유래 줄기세포의 줄기세포성을 증진시키고 피부 볼륨감을 증가시킬 뿐 아니라, 각질 세포의 전이-증폭 세포를 증식시키고 피부세포 재생 능력을 나타내는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. In another aspect, the present invention promote the stem cells of the adipose derived stem cells and as well as to increase skin feeling of volume, the transition of keratinocytes - an object of the present invention to proliferate and amplify the cell provides a composition that represents the skin cell renewal ability.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명의 일실시예는 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 조성물을 제공할 수 있다. To achieve the above object, one embodiment of the present invention may provide a high-Ferry glutamicum extract for promoting the stem cells of the adipose derived stem cell composition containing as an active ingredient.

본 발명의 일실시예는 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부세포 증식용 조성물을 제공할 수 있다. One embodiment of the present invention can provide a high-Ferry for skin cell growth compositions containing glutamicum extract as an active ingredient.

본 발명의 일실시예는 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 볼륨감 증대용 피부 미용 및 성형용 조성물을 제공할 수 있다. One embodiment of the present invention can provide a high-Ferry glutamicum extract the skin voluminous increase skin care and cosmetic composition for containing, as an active ingredient.

본 발명의 일실시예는 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 볼륨감 증대용 피부외용제 조성물을 제공할 수 있다. One embodiment of the present invention may provide a high-Ferry skin voluminous increase skin external preparation composition containing a glutamicum extract as an active ingredient.

본 발명의 일실시예는 피부에 하이페리쿰 추출물을 처리하는 것을 포함하는 피부세포 증식 촉진에 의한 피부 미용 방법을 제공할 수 있다. One embodiment of the present invention may provide a skin care method according to promote skin cell growth, which comprises processing a high-Ferry glutamicum extract to the skin.

본 발명의 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 지방유래 줄기세포 재생을 촉진시키고 표피의 재생에 관여하는 피부 표피 기저층의 전이-증폭 세포의 증식을 촉진시켜, 피부 볼륨감을 증진시키고 손상된 피하지방의 기능을 회복시켜 주므로, 피부 볼륨감 증대용 피부 미용, 성형용 조성물 및 피부 볼륨감 증대용 피부외용제 조성물에 적용 가능하다. Composition containing a high-Ferry glutamicum extract of the present invention as an active ingredient to promote the play adipose derived stem cells and metastasis of skin epidermal basal layer involved in the epidermis play-by promoting the growth of the amplification cell, and enhance a sense of skin volume damaged subcutaneous because restoration of the local feature, and is applicable to the skin, sense of volume increase for skin care, cosmetic compositions for the skin and a sense of volume increase of the external preparation for skin composition.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 조성물의 농도에 따른 지방유래 줄기세포의 세포독성을 나타내는 그래프이다. 1 is a graph showing the cytotoxicity of the fat-derived stem cells according to the concentration of the composition in accordance with one embodiment of the present invention.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 조성물의 농도에 따른 피부 각질 세포의 세포독성을 나타내는 그래프이다. 2 is a graph showing the cytotoxicity of skin keratinocytes according to the concentration of the composition in accordance with one embodiment of the present invention.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 조성물을 산화 스트레스를 가한 지방유래 줄기세포에 처리했을 때, CD29 및 CD44 유전자의 발현양상을 나타내는 그래프이다. Figure 3 is a process when the composition according to one embodiment of the invention the fat-derived stem cells were added to oxidative stress, a graph showing the expression patterns of CD29 and CD44 genes.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 조성물을 자외선을 가한 피부 각질 세포에 처리했을 때, CD71 유전자의 발현양상을 나타낸 그래프이다. 4, when processing a composition according to one embodiment of the present invention on skin keratinocytes was added to ultraviolet light, a graph showing the expression profile of CD71 gene.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 조성물을 산화 스트레스를 가한 지방유래 줄기세포에 처리했을 때, (a) CD29, (b) CD44 단백질의 발현을 비교하는 그래프이다. Figure 5 is a graph comparing, when processing a composition according to one embodiment of the invention the fat-derived stem cells were added to oxidative stress, (a) CD29, (b) the expression of CD44 protein.

이하에서는, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있도록 하기 위하여, 본 발명의 바람직한 실시예에 관하여 첨부된 도면을 참조하여 상세히 설명하기로 한다. Hereinafter, in order that the self this invention one of ordinary skill in the art can be easily performed with reference to the accompanying drawings, with respect to a preferred embodiment of the present invention will be described in detail.

본 발명은 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 조성물을 제공한다. The present invention provides a high-Ferry glutamicum extract for promoting the stem cells of the adipose derived stem cell composition containing as an active ingredient.

하이페리쿰(Hypericum)은 물레나물과의 한 속으로, 세인트존스워트, 물레나물, 망종화, 갈퀴망종화, 고추나물 등 약 400종의 현화식물을 포함하는 속이다. Perry High Qom (Hypericum) is in one of the potter's wheel and herbs, St. John's wort, wheel herbs, chisel comprising a screen villain, villain rakes Flowers, herbs, pepper, etc. flowering plants about 400 species. 과(family)는 Clusiaceae, 아과(subfamily)는 Hypericoideae로 알려져 있다. And (family) is Clusiaceae, subfamily (subfamily) is known as Hypericoideae. 하이페리쿰은 열대 저지방, 사막, 극지방을 제외한 전세계에 분포되어 있다. Perry High Qom is worldwide, except for the tropical low-fat, deserts, polar regions.

본 발명에서 하이페리쿰은 하이페리쿰 속에 속하는 어떠한 식물이라도 사용될 수 있으며, 바람직하게는 세인트존스워트(Hypericum perforatum)를 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. Perry glutamicum high in the present invention may be any plant belonging to the high-Ferry glutamicum, preferably not intended to be used to St. John's Wort (Hypericum perforatum), but like.

하이페리쿰 추출물은 하이페리쿰을 열수 추출 또는 에탄올 추출하여 얻을 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. High Perry glutamicum extract but obtained by a high-Ferry glutamicum hot water extraction or ethanol extraction, and the like. 또한, 하이페리쿰 추출물은 상업적으로 구입하여 사용할 수도 있다. In addition, high-Ferry glutamicum extract may be used commercially. 예컨대, 한국의 바이오 에프디엔씨(Bio-FD&C)에서 구입하여 사용할 수 있다. For example, it may be purchased from Bio F. dienssi (Bio-FD & C) in Korea.

상기 '줄기세포성 (stemness)'이란 줄기세포의 자기재생능력과 항상성을 지니며 줄기세포의 활성이 있는 상태를 말하며 줄기세포성 증진이란 줄기세포의 활성이 증가하는 것을 의미한다. It means that the stem cell property (stemness) "is said Genie the magnetic reproducing power and homeostasis of stem cell refers to a stem cell that has the active stem cell-promoting activity of the stem cell is increased.

상기 지방유래 줄기세포(Adipose derived stem cell: ADSC)는 인간의 지방유래 줄기세포(human adipose derived stem cells, hADSCs)일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. The fat-derived stem cells (Adipose derived stem cell: ADSC) can be a human fat-derived stem cells (human adipose derived stem cells, hADSCs), but the embodiment is not limited thereto.

상기 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 조성물은 지방유래 줄기세포 표지마커인 분화 클러스터 29, 인테그린 베타 1(cluster of differentiation 29,integrin beta 1: 이하 CD29) 및 분화 클러스터 44(이하 CD44)의 발현량을 증가시킬 수 있다. The stem cell-promoting composition of the fat-derived stem cells, fat derived stem cells labeled marker Cluster of Differentiation 29, integrin beta 1 expression (cluster of differentiation 29, integrin beta 1 or less CD29) and differentiation cluster 44 (hereinafter referred to as CD44) It can increase the amount. CD29와 CD44의 발현량 증가는 지방유래 줄기세포의 활성이 증가된다는 것을 의미한다. Increased expression levels of CD29 and CD44 means that the increase in the activity of fat-derived stem cells. 따라서 상기 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 조성물은 지방조직을 증가시켜서 피부에 볼륨감을 증가시키는 효능을 가질 수 있다. Accordingly stem cell-promoting composition of the fat-derived stem cells may be by increasing the local organization to have efficacy for increasing the sense of volume to the skin.

상기 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 하이페리쿰 추출물 0.0001 내지 10중량% 함유할 수 있고, 상세하게는 0.0001 내지 0.01중량%을 함유할 수 있다. The stem cell-promoting composition of the fat-derived stem cells, the composition may contain from 0.0001 to 10% by weight high-Ferry glutamicum extract based on the total weight of detail can advantageously contain from 0.0001 to 0.01% by weight. 0.0001중량% 미만이면 효과가 미미하고, 10중량% 이상이면 세포독성을 나타내는 문제가 있다. Less than 0.0001% by weight, the effect is insignificant, and there is a problem indicating the cytotoxicity is less than 10% by weight.

또한, 본 발명의 일실시예는 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부세포 증식용 조성물을 제공한다. Further, one embodiment of the present invention provides a high-Ferry for skin cell growth compositions containing glutamicum extract as an active ingredient.

상기 피부세포는 전이-증폭 세포(Transit-Amplifying cell, 이하 TA cell)일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. The skin cells are transition-amplifier may be a cell (Transit-Amplifying cell, hereinafter cell TA) is not limited thereto.

상기 피부세포 증식용 조성물에 의하면 전이-증폭 세포의 증식 촉진에 의해 피부 표피를 재생시킬 수 있으며, 전이-증폭 세포는 각질 줄기세포와 함께, 끊임없는 세포 분열을 통해 각질세포 탈락에 의한 표피 손실을 극복하고, 표피를 재생시키는 역할을 할 수 있다. According to the above-mentioned skin cell proliferation composition metastasis-can be regenerated epidermis by the growth promotion of the amplification cell, the transition-amplifying cells, the skin loss due to, it keratinocytes eliminated through continuous cell division with the dead skin stem cells overcome, and may serve to reproduce the skin. 따라서 상기 피부세포 증식용 조성물은 피부를 재생시키거나 피부 노화를 방지할 수 있다. Accordingly, the composition for skin cell proliferation can be to regenerate skin, or preventing skin aging.

본 명세서에 사용된 용어 '피부 재생'은 전반적인 피부 노화 및 피부 표피 등에 유발된 상처 등에 대응하여 새로운 각질세포를 생성하는 능력을 포함하는 광의의 개념이다. The term "skin regeneration" used herein is a concept in a broad sense that includes the capability to generate a new keratinocyte response like a wound-induced senescence and the like overall skin epidermis. 구체적으로, 피부 재생은 피부 표피의 기저층에 존재하는 각질 줄기세포의 분열에 의해 생성된 전이-증폭 세포들이 더욱 증폭하고, 초기 분화하여 각질 세포가 되고, 피부 표면으로 밀려 올라가 분화(Differentiation)와 각화(Keratinazation)를 일으키면서 각질층을 이루게 되는 모든 과정을 의미한다. Specifically, skin regeneration is the transition generated by the cleavage of keratin stem cells present in the skin epidermis basal layer - and is further amplified amplifying cells, and keratinocytes by the initial differentiation, up pushed into the skin surface differentiation (Differentiation) and keratinocyte while the cause (Keratinazation) refers to any process that formed the stratum corneum. 그 중에서 피부 재생의 핵심 과정은 기저층에 존재하는 각질 줄기세포와 이 세포의 딸세포인 전이-증폭 세포의 증식에 있다. Among the key process of skin regeneration exists keratin stem cells and daughter cells which are cells in the basal layer of the transition - it amplifies the proliferation of cells. 피부의 겉부분만이 소실되는 찰과상, 긁혔을 때 나타나는 열상, 불에 의한 화상 등 외부의 물리적, 화학적 환경에 의해 일어나는 피부 손상이 일어났을 때, 이를 빠른 시간에 회복하기 위해서는 피부 기저층에 존재하며 피부 재생을 담당하고 있는 각질 줄기세포와 전이-증폭세포들의 활발한 증식이 필요하다. When wake the skin damage caused by external physical and chemical environment, such as scratches that are only the shells of the skin is lost, the image according to the thermal, light that appears with closed scraped up, in order to restore them to quickly present in skin basal layer and skin keratin is in charge of regenerative stem cells and metastasis - the active growth of cell amplification is needed. 보통 어릴 때는 피부 손상이 일어나더라도 흉터가 남지 않는 반면, 나이가 들어 피부 손상이 일어나게 되면 흉터가 남는 이유도 피부 재생에 필요한 각질 줄기세포와 전이-증폭 세포의 증식의 수준 정도가 나이 정도에 따라 현저하게 낮아지기 때문이다. Whereas normal skin damage arose even when young scar does not remain, when get older the skin damage occurs reason keratin stem cells and metastasis necessary for skin regeneration scars remain - notably in accordance with the degree of the level of the degree of proliferation of amplifying cells age because it lowered. 즉, 노화가 진행하게 되면, 이러한 세포들의 증식 정도가 낮아지게 되며, 이는 피부 재생 능력이 감퇴하는 것으로, 상처 등의 회복이 지연되거나, 피부 탄력 감소가 심화될 수 있다. That is, when the aging is in progress, the proliferation of these cells is lowered, which is that the regenerative capacity of the skin loss, the restoration of scratches or delay can be reduced skin elasticity intensified.

상기 피부세포 증식용 조성물을 이용해 증식된 피부세포를, 각질 줄기세포를 필요로 하는 개체에 이식할 수 있다. A skin cell proliferation using the cell proliferation For the skin compositions can be transplanted into a subject in need of stem cell keratinocytes.

본 발명자들은 하기의 시험예를 통해 입증된 바와 같이, 본 발명에 따른 하이페리쿰 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부세포 증식용 조성물을 피부 각질 세포에 적용하여, 전이-증폭세포 표지 마커의 발현이 유효하게 증가함을 밝혀내었다. The expression of the amplified cells labeled marker-present inventors, as demonstrated by the test examples below, by applying a high-Ferry for skin cell growth compositions containing glutamicum extract as an active ingredient according to the invention in skin keratinocytes, the transition revealed that the increase in effect.

상기 각질 줄기세포는 앞서 언급한 바와 같이 표피를 재생시키는 데 중요한 역할을 담당한다. The dead skin stem cells will play an important role in reproduction for the skin as previously mentioned. 따라서, 본 발명에 따른 조성물에 의한 각질 줄기세포수의 증가를 통해, 상처 회복을 위한 피부 재생 능력을 향상시키고, 피부 재생 능력 감퇴로 인한 피부 탄력 감소 및 피부 노화의 심화를 방지할 수 있다. Thus, through the increase in the number of dead skin stem cells by the composition according to the invention, it is possible to improve the skin regenerative capacity for wound healing and prevent the loss due to the skin elasticity and skin regeneration ability decay and deepening of skin aging.

상기 조성물은 분화 클러스터 71(Cluster of Differentiation 71: 이하 CD71)을 발현하는 전이-증폭 세포의 표지 마커의 발현을 증가시킬 수 있으며, 상기 CD71은 전이-증폭 세포에 특이적인 표지 마커 단백질들이다. The composition Cluster of Differentiation 71 (of Cluster Differentiation 71: CD71 below) transition expressing - can increase the expression of cell markers of the amplification marker, the CD71 is a metastasis-specific markers are amplified marker protein in the cells.

상기 CD71 단백질은 트랜스페린(Transferrin) 수용체라고도 하며, 기저층에만 존재한다. The CD71 protein is also known as transferrin (Transferrin) receptor, it is present only in the basal layer. 구체적으로, 상기 CD71 단백질은 세포 혈류를 타고 흐르는 철분과 결합되는 트랜스페린(transferring) 단백질과 상호작용을 하여, 수용체 매개 트랜스페린 함입(receptor mediated transferrin endocytosis)이라는 과정을 거쳐, 세포 내에 철분을 공급하는 역할을 한다. Specifically, the role of the CD71 protein through a process known to the transferrin (transferring) protein interaction, combined with iron flowing take the cell flow, receptor mediated transferrin constriction (receptor mediated transferrin endocytosis), the supply of iron in the cell do. 활성화되고 있는 세포나, 증식하는 세포는 세포 내에 철분을 많이 필요로 하는데, 이때 CD71 단백질의 발현이 증가할 수 있다. Cell activation and proliferation, or cell, that is to require a lot of iron into cells, where it is possible to increase the expression of CD71 protein.

상기 피부세포 증식용 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 하이페리쿰 추출물을 0.0001 내지 10중량% 함유할 수 있고, 상세하게는 0.0001 내지 0.01 중량%을 함유할 수 있다. The skin composition for cell proliferation is the composition may contain a high-Ferry glutamicum extract from 0.0001 to 10% by weight relative to the total weight of detail can advantageously contain from 0.0001 to 0.01% by weight. 0.0001중량% 미만이면 효과가 미미하고, 10중량% 이상이면 세포독성을 나타내는 문제가 있다. Less than 0.0001% by weight, the effect is insignificant, and there is a problem indicating the cytotoxicity is less than 10% by weight.

또한, 본 발명의 일실시예는 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 볼륨감 증대용 피부 미용 및 성형용 조성물을 제공한다. Further, one embodiment of the present invention provides a high-Ferry glutamicum extract the skin voluminous increase skin care and cosmetic composition for containing, as an active ingredient.

상기 조성물은 비제한적인 예로 유방 조직 형성을 통한 가슴 확대, 미세지방 이식술, 자가지방 이식술 등 얼굴에 피부 볼륨감을 증진시켜 팔자 주름 및 미간주름 제거 및 탄력 유지를 목적으로 사용할 수도 있다. The composition may be to enhance a sense of non-limiting examples of skin volume to the face, such as breast augmentation, fat grafting fine, local self-graft through the breast tissue for the purpose of forming the nasolabial folds and forehead wrinkles and maintain elasticity.

상기 조성물은 약학적 분야에서 통상의 방법에 따라 환자의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 제제로 제형화시켜 투여할 수 있다. The composition may be administered by formulation into preparation of unit dosage forms suitable for administration of the patient's body according to a conventional method in the pharmaceutical field screen. 이러한 목적에 적합한 제형으로는 비경구투여 제제로서 주사제 또는 국소 투여용 제제 등이 바람직하다. Formulations suitable for this purpose is a dosage formulation is preferably parenteral administration such as injections or topical preparations. 주사용 제형은 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. Injectable formulations isotonic aqueous solutions or suspensions are preferred. 그러나, 이때, 일반적으로 사용되는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 함께 사용할 수 있다. However, at this time, it is possible to use fillers that are commonly used, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, diluents or excipients such as a surface active agent together.

이렇게 제조된 본 발명의 제제는 통상의 방법에 따라 비경구적으로, 예를 들면 특정 부위에 직접 투여할 수 있다. Thus the formulation of the present invention is prepared parenterally in a usual manner, for example, it can be administered directly to a specific site. 이때, 조성물의 주입은 주사기를 이용하여 이루어진다. In this case, the injection of the composition is achieved by using a syringe. 상기 조성물의 1일 투여량은 1×10 5 내지 1×10 7 세포/kg 체중, 바람직하게는 5×10 5 내지 5×10 6 세포/kg 체중이며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. The daily dosage of the composition is 1 × 10 5 to 1 × 10 7 cells / kg body weight, preferably from 5 × 10 5 to 5 × 10 6, and cells / kg body weight, may be administered in divided once or several circuit . 그러나, 유효성분의 실제 투여량은 분화 및 증식시키고자 하는 지방세포의 양, 투여경로, 환자의 체중, 연령 및 성별 등 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. However, the actual dosage of the active ingredient is to be understood to be determined in light of various relevant factors, such as differentiation and the amount of fat cells to proliferate and characters, the route of administration, body weight, age and sex of the patient and, thus, the dosage is in any plane it not intended to limit the scope of the invention.

또한, 본 발명의 일실시예는 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 볼륨감 증진용 피부 외용제 조성물을 제공한다. Further, one embodiment of the present invention provides a high-Ferry glutamicum extract a skin external composition for skin containing as an active ingredient, a sense of volume increase.

상기 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물 또는 약학 조성물일 수 있다. The topical composition may be a cosmetic composition or a pharmaceutical composition.

상기 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. The formulation of the cosmetic composition is not particularly limited and may suitably be selected, as desired. 예를 들어 유연 화장수, 영양화장수, 마사지 크림, 에센스, 영양크림, 팩 등의 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. For example, it can be manufactured in a dosage form such as a flexible skin lotion, nutrient lotion, massage cream, essence, nutrient cream, pack, but not limited to this.

상기 약학 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. The pharmaceutical compositions may be lotions, ointments, gels, may be a transdermal administration type formulation such as a cream, patch or spray, but is not limited thereto.

각 제형에 의한 피부 외용제 조성물에 있어서, 상기한 본 발명의 조성물 이외의 다른 성분들을 기타 피부 외용제의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 이 경우 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승효과가 일어날 수 있다. In the topical composition according to each dosage form, according to the other components other than the composition of the present invention, etc. formulation or the intended use of the other of the external preparation for skin may be one of ordinary skill in the art by blending the enemy selected without difficulty, applied in this case at the same time as the other raw material If you happen to be a synergistic effect.

또한, 본 발명에 의한 조성물이 약학 조성물로 사용될 경우에, 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제 등의 약학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다. Further, when the composition according to the invention used in the pharmaceutical composition to, preservatives, stabilizers, wetting or emulsifying accelerators, may further contain a pharmaceutical adjuvants and other therapeutically useful substances such as salts or buffer for osmotic pressure and, a wide variety of oral or parenteral administration in a conventional manner sphere can be formulated into dosage forms.

유효성분의 실제 투여량은 증상의 중증도, 선택된 투여 경로, 대상의 연령, 성별, 체중 및 건강상태 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. It should be understood that the actual dose of the active ingredient is to be determined in light of various relevant factors, such as severity, route of administration selected, the age, sex, weight and health status of the target of the symptoms.

일반적으로 유효성분의 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 대략 2000mg/kg/일의 범위이다. In general, the dosage of the active ingredient is in the range of 0.001mg / kg / day to about 2000mg / kg / day. 더 바람직한 투여량은 0.5mg/kg/일 내지2.5mg/kg/일이다. A more preferable dosage is 0.5mg / kg / day to 2.5mg / kg / day.

또한, 본 발명의 일실시예는 피부에 하이페리쿰 추출물을 함유하는 조성물을 처리하는 단계 포함하는 피부세포 증식 촉진에 의한 피부 미용 방법을 제공한다. Further, one embodiment of the present invention provides a skin care method according to promote skin cell growth comprising treating a composition containing a high-Ferry glutamicum extract to the skin. 상기 하이페리쿰 추출물은 하이페리쿰을 끓는 물에 녹여 필터링 하여 얻은 추출물인 것일 수 있다. The high Perry glutamicum extract may be an extract obtained by filtering the high melt Perry glutamicum in boiling water.

본 발명에 의한 조성물의 적용 부위는 신체의 모든 지방 조직을 포함하며, 특정 부위에 한정하지는 않지만, 예를 들면, 지방층이 적은 얼굴 부위를 포함할 수 있다. The site of application of the composition according to the present invention includes all the fatty tissue of the body, but not limited to a specific site, for example, may include a layer of fat less facial area.

본 발명에 따른 조성물에 의한 피부세포 증식은 생체 외에서 수행될 수 있고, 증식된 피부세포는 각질 줄기세포를 필요로 하는 개체에 이식될 수 있다. Skin cell proliferation by the composition according to the invention can be performed in vitro, the proliferating skin cells can be transplanted in a subject in need of stem cell keratinocytes.

본 발명에 따른 조성물에 의한 지방조직의 증가 효과로, 피부 볼륨감 증가 효과 외에도 피부 탄력 증대 효과, 피부 주름 개선 효과, 피부 재생 효과, 피부 노화 방지 효과 등이 있으나, 이에 한정되지는 않는다. To increase the effect of fat tissue using the composition according to the invention, in addition to increase in skin effect, but the sense of volume and increase skin elasticity effect, skin wrinkle improvement effect, the skin regeneration effect, the skin aging preventing effect, but it is not limited to this.

이하 하기 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 이는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다. Embodiment to the following examples and test example described the present invention in more detail, but this is not the scope of the invention as intended to illustrate the present invention limited to these.

[실시예 1] 하이페리쿰 추출물을 함유하는 조성물의 제조 [Example 1] Preparation of compositions containing high-Ferry glutamicum extract

바이오 에프디엔씨(Bio-FD&C)에서 세인트존스워트(Hypericum perforatum)를 구입하였다. In the bio F. dienssi (Bio-FD & C) were purchased St. John's Wort (Hypericum perforatum). 이 세인트존스워트(Hypericum perforatum)의 분말을 끓는 물에 녹인 후, 0.2㎛ 시린지 필터로 필터링하였고, 필터링한 액체를 하이페리쿰 추출물로 사용하였다. Dissolve the powder in a St. John's Wort (Hypericum perforatum) in boiling water, were filtered with 0.2㎛ syringe filter was used to filter a liquid to a high Perry glutamicum extract.

[시험예 1] 하이페리쿰 추출물의 세포독성 Cytotoxicity of Test Example 1 High Perry glutamicum extract

상기 실시예 1에 따른 하이페리쿰 추출물 함유 조성물의 세포독성을 파악하기 위하여 인간 지방유래 줄기세포 및 피부 각질 세포에 대한 세포독성 실험을 수행하였다. Example 1 Cytotoxicity test for high-Ferry glutamicum to determine the cytotoxicity of the extract-containing composition of human adipose derived stem cells and skin keratinocytes were carried out according to the.

(1) 인간 지방유래 줄기세포에서의 세포독성 (1) cytotoxicity in human adipose derived stem cells

인간의 지방유래 줄기세포(human adipose derived stem cells, hADSCs)를 론자社(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA)에서 구입하였다. Human adipose derived stem cells (human adipose derived stem cells, hADSCs) were purchased from Lonza 社 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA). 상기 인간 지방유래 줄기세포를 75cm 2 T-flask에 계대배양(passage)하여, CO 2 배양기(CO 2 Incubator)에서 37℃, 5% CO 2 조건 하에서 배양을 하였다. The human fat-derived stem cells by a subculture (passage) in 75cm 2 T-flask, were cultured in a CO 2 incubator (CO 2 Incubator) at 37 ℃, 5% CO 2 condition. 통상적으로 두 번째 또는 세 번째에서 세포의 계대배양을 진행하였다. Typically the subculture of the cells was performed on the second or third.

상기 하이페리쿰 추출물을 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1, 1, 5, 10%의 농도로 상기 지방유래 줄기세포에 처리하고, 지방유래 줄기세포에서의 세포독성 정도를 CCK-8키트(Dojindo)를 이용하여 확인하였다. The high-Ferry glutamicum extracts were 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1, 1, 5, and a concentration of 10% treated in the adipose derived stem cells, and the cytotoxic level in adipose derived stem cells, CCK-8 kit (Dojindo) It was confirmed using.

상기 실험 결과를 도 1에 나타내었다. The results of the above experiment are shown in Fig. 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 하이페리쿰 추출물이 상기 농도에서 세포독성이 없거나 극히 미미함을 확인할 수 있었다. As can be seen in Figure 1, could be the high Perry glutamicum extract confirmed that extremely minimal or no cytotoxicity in the above concentrations.

(2) 피부 각질 세포에서의 세포독성 (2) cytotoxicity in skin keratinocytes

인간의 피부 각질 세포(keratinocyte)를 론자社(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA)에서 구입하였다. Human skin keratinocytes (keratinocyte) were purchased from Lonza 社 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA). 상기 피부 각질 세포를 75cm 2 T-flask에 계대배양(passage)을 하여, CO 2 배양기(CO 2 Incubator)에서 37℃, 5% CO 2 조건하에서 배양을 하였다. And the subculture (passage) of the skin keratinocytes in 75cm 2 T-flask, were cultured in a CO 2 incubator (CO 2 Incubator) at 37 ℃, 5% CO 2 condition. 통상적으로 두 번째 또는 세 번째에서 세포의 계대배양을 진행하였다. Typically the subculture of the cells was performed on the second or third.

상기 실시예 1에 따른 하이페리쿰 추출물을 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1, 1, 5, 10%의 농도로 피부 각질세포에 처리하고, 피부 각질세포에서의 세포독성 정도를 CCK-8키트(Dojindo)를 이용하여 확인하였다. A high-Ferry glutamicum extract according to Example 1, 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1, 1 and 5, at a concentration of 10% of treated skin keratinocytes, and a cytotoxic amount of the skin keratinocyte CCK-8 kit (Dojindo ) it was confirmed using the.

상기 실험 결과를 도 2에 나타내었다. The results of the above experiment is shown in Fig. 도 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 상기 농도에서 세포독성이 없거나 극히 미미함을 확인할 수 있었다. As can be seen in Figure 2, and confirmed that a very slight or no cytotoxicity in the above concentrations.

[시험예 2] 하이페리쿰 추출물의 세포 표지 마커 유전자의 발현량 측정 [Test Example 2] Measurement of the expression level of cell labeling marker genes of high Perry glutamicum extract

상기 실시예 1에 따른 하이페리쿰 추출물 함유 조성물의 효과를 파악하기 위하여 인간 지방유래 줄기세포 및 전이-증폭세포 각각의 표지 마커 유전자의 발현 수준을 측정하였다. Example 1 High Perry glutamicum extract in order to identify the effect of the composition containing human adipose derived stem cells and metastasis according to - the expression level of each marker gene amplification cell cover was measured. 지방유래 줄기세포(human adipose derived stem cells, hADSCs) 및 피부 각질세포(keratinocyte)는 론자社(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA)에서 구입하였다. Fat-derived stem cells (human adipose derived stem cells, hADSCs) and skin keratinocytes (keratinocyte) were purchased from Lonza 社 (Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA).

(1) 지방유래 줄기세포의 CD29 , CD44 발현량 측정 (1) CD29, CD44 expression level measured in the adipose derived stem cells

지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진효과를 파악하기 위해서 하이페리쿰 추출물을 0.01%로 배지에 첨가하였다. In order to determine the effect of promoting stem cell-mediated adipose derived stem cells were added to the medium to high Perry glutamicum extract was 0.01%. 지방유래 줄기세포의 산화스트레스는 과산화수소수(H 2 O 2 )를 200μM 농도로 24시간 처리하였다. Local oxidative stress derived from the stem cells were treated for 24 hours hydrogen peroxide (H 2 O 2) as a 200μM concentration.

2ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다. After washing the cells with PBS (Phosphate Buffered Saline, PBS) and then 2ml of, by using the Trizol reagent (reagent Trizol, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) to separate the RNA within the cell. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트社의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. One again purifying the isolated RNA with Qiagen Jen's RNA Kit (QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA) and then, bio eonael riser 2100 model appliances Agilent 社 (Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA ) it was confirmed using the quality (quality) of the RNA. 인비트로젠社의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(real time-reverse transcription polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)을 통해 정량적으로 분석하였다. Invitrogen 社 of reverse transcription kit (Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA) to was to synthesize cDNA from the RNA is used, real-time reverse transcription polymerase chain reaction (real time-reverse transcription polymerase chain this reaction, through Q-RT-PCR) were analyzed quantitatively.

지방유래 줄기세포에서 CD29, CD44 유전자의 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템社의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA) (CD29 유전자 프라이머: Hs00559595_m1, CD44 유전자 프라이머: Hs01075861_m1)을 이용하여 평가하였으며, 그 결과를 도 3((a)CD29, (b)CD44)에 나타내었다. Fat-derived stem cells CD29, Applied Biosystems 社 of taekmaen gene expression system the expression pattern changes in the CD44 gene (TaqMan gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA) (CD29 gene primers: Hs00559595_m1, CD44 gene primers: Hs01075861_m1 ) it was evaluated using, shown in the Figure 3 ((a) the results CD29, (b) CD44).

(2) 피부 각질 세포의 CD71 발현량 측정 (2) CD71 expression level measurement of skin keratinocytes

피부 각질 세포에 UVB를 100mJ/㎠로 조사한 후 하이페리쿰 추출물 0.001%을 처리하였다. After examining the UVB skin keratinocytes to 100mJ / ㎠ was treated with a 0.001% high Perry glutamicum extract.

2ml의 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, 트리졸 시약(Trizol reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 세포 내의 RNA를 분리하였다. After washing the cells with PBS (Phosphate Buffered Saline, PBS) and then 2ml of, by using the Trizol reagent (reagent Trizol, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) to separate the RNA within the cell. 분리된 RNA를 키아젠사의 RNA 키트(QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA)로 한번 더 정제한 후, 애질런트社의 바이오어낼라이저 2100 모델 기기(Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 RNA의 질(quality)을 확인하였다. One again purifying the isolated RNA with Qiagen Jen's RNA Kit (QIAGEN RNeasy kt, QIAGEN, Valencia, CA) and then, bio eonael riser 2100 model appliances Agilent 社 (Agilent 2100 BioAnalyzer, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA ) it was confirmed using the quality (quality) of the RNA. 인비트로젠社의 역전사키트(Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하여 상기 RNA로부터 cDNA를 합성하였고, 이를 실시간 역전사 중합 효소 연쇄반응(real time-reverse transcription polymerase chain reaction, Q-RT-PCR)을 통해 정량적으로 분석하였다. Invitrogen 社 of reverse transcription kit (Superscript Reverse Transcriptase (RT) kit, Invitrogen, Carlsbad, CA) to was to synthesize cDNA from the RNA is used, real-time reverse transcription polymerase chain reaction (real time-reverse transcription polymerase chain this reaction, through Q-RT-PCR) were analyzed quantitatively.

피부 각질 세포에서 유전자의 발현 패턴 변화를 어플라이드바이오시스템社의 택맨 유전자 발현 시스템(TaqMan Taekmaen gene expression system of the gene expression patterns of changes in skin keratinocytes Applied Biosystems 社 (TaqMan gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA) (CD71 유전자 프라이며: Hs00951083_m1)을 이용하여 평가하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다. gene expression assay kit, Applied Biosystems, Foster City, CA) (CD71 gene and PRA: were evaluated using the Hs00951083_m1), the results are shown in Fig.

통계는 양측 student t 테스트로 검증하였으며, p 값이 0.05 이하일 때 유의적인 차이가 있다고 표시하였다(*로 표시함). Statistics show that there was no significant difference when less than 0.05, p value was verified by both sides student t test (indicated by *).

도 3 및 도 4에서 볼 수 있는 바와 같이, 지방유래 줄기세포 및 피부 각질 세포의 각 유전자(CD29, CD44, CD71)의 발현양이 음성대조군 대비 약 1.35배, 1.38배, 1.67배 증가함을 확인하였다. 3 and confirmed that the expression amount is about 1.35 times, 1.38 times, an increase of 1.67 times compared to the negative control group of fat each gene derived from the stem cells and skin keratinocytes (CD29, CD44, CD71), as can be seen in Figure 4 It was. 이러한 증가는 통계적으로 유의한 것이었다. This increase was statistically significant.

[시험예 3] 지방유래 줄기세포의 유세포 분석 [Test Example 3] Flow cytometric analysis of adipose derived stem cells

인간 지방유래 줄기세포를 0.25% 트립신(Trypsin-EDTA)으로 75cm 2 Ti 플라스크로부터 분리한 뒤 1500rpm에서 5분간 세포를 가라앉힌 다음, 배양액을 제거한 뒤에 3ml의 차단버퍼(Blocking buffer), 2% 우태아 혈청(Fetal calf serum: FCS), 2% 소의 혈청 알부민(Bovine Serum Albumin(BSA) KGM-2)을 넣어주어 세포를 현탁하였다. Human adipose derived stem cells in 0.25% trypsin isolated from (Trypsin-EDTA) to 75cm 2 Ti flask after 1500rpm immersed for 5 minutes the cells, and then a 3ml blocking buffer followed by removal of the culture solution (Blocking buffer), 2% fetal bovine serum: given put (Fetal calf serum FCS), bovine serum albumin, 2% (bovine serum albumin (BSA) KGM-2) were suspended in a cell.

4℃에서 15분 동안 세포 (약 10 6 개의 세포)를 적용시킨 다음, FITC (Fluorescein isothiocyanate)가 부착된 CD44 항체(Cat No. 560977)(BD Pharmingen, CA, US)와 PE-Cy(phycoerythrin-cyanine)가 부착된 CD29 항체(Cat No. 559882) (BD Pharmingen, CA, US)을 각각 100: l로 넣어주어, 4℃ 하에서 45분 동안 반응시켰다. At 4 ℃ for 15 minutes, the cells (approximately 10 6 cells) was then applied, FITC (Fluorescein isothiocyanate) is attached to a CD44 antibody (Cat No. 560977) (BD Pharmingen, CA, US) and PE-Cy (phycoerythrin- cyanine) is attached to a CD29 antibody (Cat No. 559882) (BD Pharmingen, CA, US), respectively 100: given put to l, and the reaction was carried out for 45 minutes at 4 ℃. 한편, 음성대조군으로 사용되는 세포에는 FITC Rat IgG2a, k 아이소타이프(isotype)(Cat No. 555742)와 PE-Cy5 mouse IgG1 k 아이소타이프(Cat No. 555750)를 역시 100: l로 넣어주어, 4℃ 하에서 45분 동안 반응시켰다. On the other hand, cells used as a negative control, the FITC Rat IgG2a, k iso type (isotype) (Cat No. 555742) and PE-Cy5 mouse IgG1 k iso type (Cat No. 555750) is also a 100: given into a l, 4 ℃ under the reaction was carried out for 45 minutes.

반응이 끝난 후 3ml의 워싱 버퍼(2% Bovine Serum Albumin (BSA) KGM-2)로 두 번 세척한 후, 세포를 현탁하였다. After the reaction was terminated by washing buffer (2% Bovine Serum Albumin (BSA) KGM-2) in 3ml washed twice, and suspended cells. 이후 FACSCalibur(BD Bioscience, San Jose, CA, US)로 지방유래 줄기세포에서 CD29, 44을 발현하는 세포들의 활성의 변화를 관찰하고, 이를 도 5((a)CD29, (b)CD44) 및 표 1에 나타내었다. After FACSCalibur (BD Bioscience, San Jose, CA, US) to observe the change in the activity of cells expressing CD29, 44 in the adipose derived stem cells, and Figure 5 it ((a) CD29, (b) CD44) and Table It is shown in Fig.

음성대조군 Negative control 하이페리쿰 추출물 Perry High Qom extract
CD29를 발현하는 지방유래 Adipose derived expressing CD29
줄기세포(세포의 수) Stem cells (number of cells)
3788 3788 4708 4708
증가 % increase % 24% 24%
CD44를 발현하는 지방유래 Adipose derived expressing CD44
줄기세포(세포의 수) Stem cells (number of cells)
5163 5163 5876 5876
증가 % increase % 14% 14%

도 5 및 표 1에서 볼 수 있듯이, 음성대조군에 비해서 CD29는 24%, CD44는 14% 증가하였음을 확인할 수 있었다 . 5 and as shown in Table 1, as compared to the negative control is CD29 24%, CD44 was confirmed that it has increased by 14%.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제형예 및 제제예를 예시한다. To illustrate the Formulation Examples and Formulation Examples for the composition of the present invention.

[제형예 1] 유연화장수 [Formulation Example 1] The flexible longevity

상기 하이페리쿰 추출물을 함유하는 유연화장수 제형을 하기 표 2에 나타낸 조성으로 통상의 제조 방법에 따라 제조하였다. The high, was prepared in accordance with the conventional method of manufacturing a composition shown in the ferry to the flexible longevity formulations containing glutamicum extract Table 2.

성분 ingredient 함량(중량%) Content (% by weight)
베타인 Betaine 3.0 3.0
낫토검 Natto gum 3.0 3.0
셀룰로오스검 Cellulose gum 0.005 .005
에탄올 ethanol 10.0 10.0
폴리옥시에틸렌경화피마자유 Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.2 0.2
초산토코페롤 Tocopheryl acetate 2.0 2.0
하이페리쿰 추출물 Perry High Qom extract 10 10
방부제 antiseptic 미량 a very small amount
색소 Coloring 미량 a very small amount
incense 미량 a very small amount
정제수 Purified water 잔량 Remaining

[제형예 2] 영양화장수 [Formulation Example 2] Nutrition lotion

상기 하이페리쿰 추출물을 함유하는 영양화장수 제형을 하기 표 3에 나타낸 조성으로 통상의 제조 방법에 따라 제조하였다. To the nutritional lotion formulations containing the high Perry glutamicum extract was prepared according to a conventional method of manufacturing a composition shown in Table 3.

성분 ingredient 함량(중량%) Weight percentages
세틸에틸렌헥사노에이트 Ethylene cetyl hexanoate 4.0 4.0
세토스테아릴알콜 Cetostearyl alcohol 1.0 1.0
친유형모노스테아릴산스테아레이트 Pro-type monostearyl acid stearate 1.0 1.0
스쿠알란 Squalane 0.5 0.5
하이페리쿰 추출물 Perry High Qom extract 5.0 5.0
폴리솔베이트 60 Polysorbate 60 1.5 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 Sorbitan process kwiol rate 0.5 0.5
글리세린 glycerin 5.0 5.0
트리에탄올아민 Triethanolamine 0.5 0.5
카르복시비닐폴리머 Carboxyvinylpolymer 0.2 0.2
방부제 antiseptic 미량 a very small amount
색소 Coloring 미량 a very small amount
incense 미량 a very small amount
정제수 Purified water 잔량 Remaining

[제형예 3] 크림 [Formulation Example 3 Cream

상기 하이페리쿰 추출물을 함유하는 크림 제형을 하기 표 4에 나타낸 조성으로 통상의 제조 방법에 따라 제조하였다. To the cream formulations containing the high Perry glutamicum extract was prepared according to a conventional method of manufacturing a composition shown in Table 4.

성분 ingredient 함량(중량%) Weight percentages
글리세릴스테아레이트 Glyceryl stearate 3.0 3.0
폴리솔베이트 60 Polysorbate 60 1.0 1.0
세토스테아레이트 Seto stearate 2.5 2.5
밀납 Beeswax 1.0 1.0
스쿠알란 Squalane 2.0 2.0
솔비탄세스퀴올레이트 Sorbitan process kwiol rate 0.5 0.5
세틸에틸헥사노에이트 Cetyl ethylhexanoate 0.5 0.5
유동파라핀 Liquid paraffin 5.0 5.0
유효성분혼합물 Active ingredient mixture 5.0 5.0
글리세린 glycerin 3.0 3.0
프로필렌글리콜 Propylene glycol 3.0 3.0
하이페리쿰 추출물 Perry High Qom extract 5.0 5.0
방부제 antiseptic 미량 a very small amount
색소 Coloring 미량 a very small amount
incense 미량 a very small amount
정제수 Purified water 잔량 Remaining

[제제예 1] 정제 [Formulation Example 1] Tablets

본 발명에 따른 하이페리쿰 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다. Then a solution of the high-Ferry glutamicum extract 100mg, lactose 400mg, corn starch 400mg and magnesium stearate 2mg according to the invention, the appointed other according to the conventional method for preparing tablets of tablet were prepared.

[제제예 2] 캡슐제 [Formulation Example 2] Capsules

본 발명에 따른 하이페리쿰 추출물 100mg, 락토오스 400mg, 옥수수 전분 400mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조 방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다. Then a solution of the high-Ferry glutamicum extract 100mg, lactose 400mg, corn starch 400mg and magnesium stearate 2mg according to the invention, filled in a gelatin capsule to prepare a capsule according to the conventional method for preparing capsules.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. Having described a preferred embodiment of the present invention, these specific techniques according to those skilled in the art, is just an example only a preferred embodiment, it is obvious that this is not to be limit the scope of the present invention. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다. Thus, the substantial scope of the present invention will be defined by appended claims and their equivalents.

Claims (14)

  1. 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 지방유래 줄기세포의 줄기세포성 증진용 조성물. High Perry glutamicum extract the active ingredient for promoting stem cells of the adipose derived stem cell composition containing a.
  2. 제 1항에 있어서, According to claim 1,
    상기 지방유래 줄기세포는 인간의 지방유래 줄기세포(human adipose derived stem cells: hADSCs)인 줄기세포성 증진용 조성물. Wherein the adipose derived stem cells, human adipose derived stem cells (human adipose derived stem cells: hADSCs) the stem cell-promoting composition.
  3. 제 1항에 있어서, According to claim 1,
    상기 조성물은 지방 조직을 증가시켜 피부 볼륨감을 증가시키는 것을 특징으로 하는 줄기세포성 증진용 조성물. Such compositions stem cell-promoting composition, comprising a step of increasing the fat tissue increased feeling of the skin volume.
  4. 제 1항에 있어서, According to claim 1,
    상기 조성물은 지방유래 줄기세포 표지마커인 CD29 및 CD44의 발현량을 증가시키는 작용을 하는 것을 특징으로 하는 줄기세포성 증진용 조성물. The composition adipose derived stem cells, stem cell-promoting composition characterized in that the cover of the marker CD29, and acts to increase the expression amount of CD44.
  5. 하이페리쿰 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부세포 증식용 조성물. High Perry glutamicum extract composition for skin cell growth containing as an active ingredient.
  6. 제 5항에 있어서, 6. The method of claim 5,
    상기 피부세포는 전이-증폭 세포(Transit-Amplifying cell: TA cell)인 피부세포 증식용 조성물. The skin cells are transition-amplifying cells (Transit-Amplifying cell: cell TA) the composition for a skin cell proliferation.
  7. 제 5항에 있어서, 6. The method of claim 5,
    상기 조성물은 피부를 재생시키고 피부 노화를 방지시키는 것을 특징으로 하는 피부세포 증식용 조성물. The composition is a composition for skin cell growth, comprising a step of reproducing a skin and to prevent skin aging.
  8. 제 5항에 있어서, 6. The method of claim 5,
    상기 조성물은 전이-증폭 세포 표지 마커인 CD71의 발현량을 증가시키는 작용을 하는 것을 특징으로 하는 피부세포 증식용 조성물. The composition transition-amplifying cell composition for skin cells proliferation, which is characterized in that the action to increase the expression level of the marker in the marker CD71.
  9. 제 1항 또는 제 5항에 있어서, According to claim 1 or 5,
    상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 하이페리쿰 추출물을 0.0001 내지 10중량% 함유하는 것인 조성물. Wherein the composition is to contain the high-Ferry glutamicum extract from 0.0001 to 10% by weight relative to the total weight of the composition.
  10. 제 1항 또는 제 5항에 있어서, According to claim 1 or 5,
    상기 조성물은 피부 미용용 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물. The composition is a composition wherein the composition for skin care.
  11. 제 1항 또는 제 5항에 있어서, According to claim 1 or 5,
    상기 조성물은 성형용 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물. The composition is a composition wherein the molding composition.
  12. 제 1항 또는 제 5항에 있어서, According to claim 1 or 5,
    상기 조성물은 피부외용제 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물. The compositions are compositions wherein the topical composition.
  13. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 피부에 처리하는 단계를 포함하는 피부 미용 방법. Any one of claims 1 to 8, skin care comprises the step of processing the composition according to any one of the skin of the claims.
  14. 제 13항에 있어서, 14. The method of claim 13,
    상기 하이페리쿰 추출물은 하이페리쿰을 끓는 물에 녹여 필터링하여 얻은 추출물인 것인 피부 미용 방법. Beauty How high is the ferry Colchicum extract is an extract obtained by filtering high melt ferry Qom in boiling water.
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