KR20140143940A - 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물 - Google Patents

피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물 Download PDF

Info

Publication number
KR20140143940A
KR20140143940A KR1020130065729A KR20130065729A KR20140143940A KR 20140143940 A KR20140143940 A KR 20140143940A KR 1020130065729 A KR1020130065729 A KR 1020130065729A KR 20130065729 A KR20130065729 A KR 20130065729A KR 20140143940 A KR20140143940 A KR 20140143940A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
aloe vera
vera extract
extract
mmp
bae
Prior art date
Application number
KR1020130065729A
Other languages
English (en)
Inventor
도선길
김진완
진유정
김선여
문지혜
이충환
이사라
Original Assignee
주식회사 유니베라
가천대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 유니베라, 가천대학교 산학협력단 filed Critical 주식회사 유니베라
Priority to KR1020130065729A priority Critical patent/KR20140143940A/ko
Publication of KR20140143940A publication Critical patent/KR20140143940A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/886—Aloeaceae (Aloe family), e.g. aloe vera
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

본 발명은 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물, 이를 유효성분으로 하는 피부 노화 예방 또는 치료용 화장료 조성물 및 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 알로에 베라 새순 추출물은 자외선 조사 후 정상 인간 진피 섬유아세포(NHDF)들에서 MMP-1, MMP-3 및 IL-6 레벨을 억제시키면서, 타입 Ⅰ 프로콜라겐 및 TGF-β1 레벨을 증가시키는바, 자외선 조사에 의한 피부 광노화 예방 또는 치료에 특히 효과적이다.

Description

피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물{BABY ALOE VERA SHOOT EXTRACT FOR PREVENTING OR TREATING SKIN AGING}
본 발명은 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물에 관한 것이다.
자외선(UV)은 자외선A(UVA; 320-400㎚), 자외선B(UVB; 290-320㎚) 및 자외선C(UVC; 100-280㎚)로 구성되어 있다. 과도하거나 반복적인 자외선 조사에 노출은, 특히 자외선B에 노출은, 대부분의 피부에 대한 일광화상 및 손상의 원인으로 생각된다. 광노화된 피부에서, 타입 Ι 콜라겐, 엘라스틴, 프로테오글리칸 및 피브로넥틴을 포함하는 매트릭스 성분의 파괴와 같은 가장 두드러진 변화는 진피에서 발견된다(Fisher 등, 2002; Fisher 등, 2009). 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMPs)에 의한 콜라겐의 분열, 다른 피부 광노화의 신호는 다시 콜라겐 합성에 의해 완전하게 원상태로 만들지 못한다(Quan 등, 2009). 구조적인 세포외 기질(ECM)의 분열은 사이 콜라게나제로서 알려진 MMP들의 발현을 증가시킨다. Cherng 등은 UVB-조사에 의한 IL-6의 유도는 특히, 표적 콜라겐 타입 Ι 및 Ⅲ인, MMP-1 및 MMP-3의 단백질 레벨에 영향을 준다고 보고한바 있다. 형질전환생장인자-β1(TGF-β1)은 진피 섬유 아세포에서 타입 Ⅰ 프로콜라겐 합성의 주요한 조절인자로 잘 알려져 있다(Quan 등, 2002).
500 알로에 종 이상 중에서, 알로에 베라를 포함하는 단지 몇 종만 경작되고 있다. 이는 남부 텍사스, 미국; 멕시코; 인디아; 및 아프리카와 같은 뜨거운 지역에서 자란다(Moghaddasi 및 Verm, 2011). 이는 한국의 제주도에서도 역시 자란다.
Aloe barbadensis M.(알로에 베라)는 아스포델과 식물의 일종으로, 기능 식품, 화장품, 천연물 의약품의 원료로 널리 사용되어 왔다(Wynn 등, 2005; Djuv 및 Nilsen, 2012; Shimpo 등, 2002). 이는 항산화 효과를 포함하는 생물학적 효능을 가지는 것으로 보여지는 폴리페놀릭 구조로, 알로인, 알로에-에모딘 및 알로에신을 포함하는 것으로 알려져 있다(Wamer 등, 2003; Bawankar 등, 2012). 특히, 알로에신은 티로시나아제의 경쟁적인 저해제이고, 라디칼 소거 활성을 가지는 것으로 보여진다(Jones 등, 2002; Yagi 등, 2002). 많은 연구들은 보습, 항염증 효과, 항옴(anti-scabies), 항건선(anti-psoriatic) 활동 및 부상 치료를 포함하는 알로에 베라의 피부 과학적인 효능에 집중하고 있다(Dal'sBelo 등, 2006; Byeon 등, 1998; Oyelami 등, 2009; Dhanabal 등, 2012; John 등, 1995).
그러나, UV-유도된 피부의 광노화에 알로에 베라의 보호적인 효능에 대한 연구는 지금껏 없었다. 나아가, 알로에 성장 패턴에서 활성 변화의 표준에 대한 연구도 없었다.
본 발명은 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물을 제공하고자 한다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로, 상기 알로에 베라 새순 추출물을 유효성분으로 하는 피부 노화 예방 또는 치료용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 알로에 베라 새순 추출물을 유효성분으로 하는 피부 노화 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물, 이를 유효성분으로 하는 피부 노화 예방 또는 치료용 화장료 조성물 및 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 알로에 베라 새순 추출물은 자외선 조사 후 정상 인간 진피 섬유아세포(NHDF)들에서 MMP-1, MMP-3 및 IL-6 레벨을 억제시키면서, 타입 Ⅰ 프로콜라겐 및 TGF-β1 레벨을 증가시키는바, 자외선 조사에 의한 피부 광노화 예방 또는 치료에 특히 효과적이다.
도 1(A)는 네가티브 모드에서 BAE 및 AE의 UPLC-Q-TOF-TICs을 나타낸 것으로, BAE < 10㎝이고, AE > 50㎝이다. 피크 1은 알로에신이고, 피크 2는 알로인B이며, 피크 3은 알로인A이다. 또한, 도 1(B)는 알로에 베라의 다른 사이즈에서 UPLC-Q-TOF-MS로 분석된 중요한 다른 대사산물들(p < 0.05)의 상자 수염도를 나타낸 것이다. 또한, 도 1(C)는 알로에신의 화학적 구조, 도 1(D)는 알로인B의 화학적 구조, 도 1(E)는 알로인A의 화학적 구조를 나타낸 것이다.
도 2는 BAE- 및 AE-처리되고 배양된 인간 진피 섬유상세포들에서 (A)세포 생존 능력, (B)MMP-1 생성량, (C)MMP-3 생성량, (D)타입 Ι 프로콜라겐 레벨, (E)TGF-β1 생성량을 나타낸 것이다. 세포들은 72시간 동안 BAE 또는 AE의 존재 또는 부재하에 배양된 것이다.
도 3은 UVB-조사되고 BAE- 및 AE-처리되고 배양된 인간 진피 섬유상세포들에서 (A)세포 생존 능력, (B)MMP-1 생성량, (C)MMP-3 생성량, (D)타입 Ι 프로콜라겐 레벨, (E)TGF-β1 생성량을 나타낸 것이다. 세포들은 UVB(144 mJ/㎠)으로 조사되고, 72시간 동안 BAE 또는 AE의 존재 또는 부재하에 배양된 것이다.
도 4(A)는 UVB-조사되지 않고 BAE- 또는 AE-처리된 세포들에서 인터류킨-6(IL-6) 생성량을 나타낸 것이고, 도 4(B)는 UVB-조사되고 BAE- 및 AE-처리된 세포에서 인터류킨-6(IL-6) 생성량을 나타낸 것이다. 세포들은 UVB(144 mJ/㎠)으로 조사되고, 72시간 동안 BAE 또는 AE의 존재 또는 부재하에 배양된 것이다.
본 발명자들은 알로에 베라의 항-노화 효능을 연구하였다. 자외선 유도된 피부 손상의 조절에 알로에의 생물학적 활성을 최대화시키고자, 성장 시간에 따른 알로에의 보호적인 효능을 결정하는 것을 시도하였다. 먼저, UPLC-Q-TOF-MS(ultra-performance liquid chromatography-quadrupole-time of flight mass spectrometry)를 사용하여 알로에 베라로부터 표준 물질을 측정하였다. 결과에 근거하여, 성장 시간의 패턴에 따른 새로운 타입의 알로에를 규명하였다.
본 발명은 생체외 정상 인간 진피 섬유 아세포(NHDF)들에서 자외선 유도된 피부 손상과 관련하여 알로에 베라 새순 추출물 및 알로에 베라 성체 추출물의 효과를 비교하기 위한 것으로, 알로에 베라 새순 추출물 및 알로에 베라 성체 추출물의 존재 하에 자외선-노출 및 비노출 인간 진피 섬유 아세포(NHDF)들에서 MMP-1, MMP-3, IL-6, 타입 Ⅰ 프로콜라겐 및 TGF-β1 생성을 연구하였다.
즉, 본 발명은 피부 노화로부터 보호하기 위한 알로에 베라 추출물의 능력을 증명하기 위한 것이다. 알로에 베라 새순과 같은 새로운 생체재료의 탐구는 피부 광 노화를 조절할 수 있다. 따라서, 이는 화장료 조성물 또는 약학적 조성물로 발정시키기 위한 생체재료로 사용될 수 있다.
본 발명은 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물을 제공한다.
이때, 피부 노화란, 자연노화 또는 광노화를 포함하는 것으로, 자연노화는 내적 변화에 의한 것이고, 광노화는 외적 변화에 의한 것을 말한다.
상기 피부 노화는 자외선 조사에 의한 피부 광노화일 수 있다.
상기 자외선은 파장 290㎚ 내지 320㎚의 자외선B(UVB)일 수 있다.
상기 알로에 베라 새순 추출물은 알로에 베라의 3개월생 이하 가지로부터 추출된 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에서는 알로에 베라의 1개월생 가지로부터 추출한 알로에 베라 새순 추출물을 사용하였고, 이를 BAE(baby aloe shoot extract)로 명명하였다. 한편, 알로에 베라 성체 추출물은 알로에 베라의 4개월생 이상 가지로부터 추출된 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에서는 알로에 베라의 4개월생 가지로부터 추출한 알로에 베라 성체 추출물을 사용하였고, 이를 AE(adult aloe shoot extract)로 명명하였다.
상기 알로에 베라 새순 추출물은 알로에신(aloesin), 알로인B(aloinB) 및 알로인A(aloinA)를 포함할 수 있다.
상기 알로에 베라 새순 추출물에서 알로에신은 알로에 베라 성체 추출물에서 알로에신 중량대비 1.5 내지 20배인 것이 바람직하고, 상기 알로에 베라 새순 추출물에서 알로인B는 알로에 베라 성체 추출물에서 알로인B 중량대비 1.5 내지 20배인 것이 바람직하고, 상기 알로에 베라 새순 추출물에서 알로인A는 알로에 베라 성체 추출물에서 알로인A 중량대비 1.5 내지 20배인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 즉, 알로에 베라 성체 추출물 보다 알로에 베라 새순 추출물에서 상대적으로 높은 함량의 알로에신, 알로인B 및 알로인A를 포함한다.
상기 알로에 베라 새순 추출물은 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 탄소수 1-4의 저급 케톤, 탄소수 1-4의 저급 에스테르, 클로로포름 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 알로에 베라 새순 추출물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 알로에 베라 새순 추출물의 용량은 0.1㎍/㎖ 내지 25㎍/㎖일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 알로에 베라 새순 추출물을 유효성분으로 하는 피부 광노화 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 알로에 베라 새순 추출물의 용량은 0.1㎍/㎖ 내지 25㎍/㎖일 수 있다.
이와 같이, 본 발명에 따른 알로에 베라 새순 추출물이 화장료 조성물 또는 약학적 조성물로 제공되는 경우, 화장료 조성물 또는 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제, 희석제 등을 더 포함할 수 있다.
즉, 상기 화장료 조성물 또는 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 연고, 겔, 크림, 패치, 분무제 등의 외용제 등을 비롯하여 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 각 제형은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 발명자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 알로에 베라 새순 추출물은 자외선 조사 후 정상 인간 진피 섬유아세포(NHDF)들에서 MMP-1, MMP-3 및 IL-6 레벨을 억제시키면서, 타입 타입 Ι 프로콜라겐 및 TGF-β1 레벨을 증가시키는바, 자외선 조사에 의한 피부 광노화 예방 또는 치료에 특히 효과적이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[ 실시예 ]
화합물
DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium), FBS(fetal bovine serum) 및 페니실린 스트렙토마이신(penicillin strptomycin)은 Gibco BRL(그랜드아일랜드, NY, 미국)에서 구입하였다. MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드, 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 및 DMSO(디메틸 설폭사이드, dimethyl sulfoxide)는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, 미국)로부터 구입하였다. 알로에신(aloesin)은 도선길 박사(유니베라사, 서울, 한국)에 의해 공급받았다. 프로콜라겐 타입 Ⅰ에 대한 ELISA 키트는 Takara(프로콜라겐 타입Ⅰ C-펩타이드 EIA 키트; Takara, Shiga, 일본)으로부터 획득하였다. NMP-1, NMP-3, IL-6 및 TGF-β1은 R&D 시스템(인간 토탈 NMP-1 키트, 인간 토탈 NMP-3 키트, 인간 토탈 IL-6 키트 및 인간 토탈 TGF-β1 키트; R&D 시스템사, 미니애폴리스, MN, 미국)으로부터 구입하였다.
샘플 준비
트위스트 쉐이커(BioFree, 한국)를 이용하여 12시간 동안 메탄올 400㎖로부터 건조된 샘플을 추출하였다. 추출 후, 추출물은 10분 동안 4℃, 3000rpm으로 원심분리하였다. 상청액 1㎖는 고속 진공 농축기(Biotron, 한국)으로 12시간 동안 완전히 건조시켰다. LC-MS 분석을 위하여, 건조된 샘플은 메탄올 1㎖로 용해시켰고, 0.2㎛의 폴리테트라플루오르에틸렌 필터를 통과시켜 여과하였다.
UPLC -Q- TOF - MS 분석
UPLC는 이성분 용매 전달 시스템, 자동샘플러 및 UV검출기가 장착된 Waters ACQUITY UPLC 시스템(Waters사, Mildford, MA) 상에서 수행되었다. 크로마토그래픽 분리는 Waters Acquity HLPC BEH C18 컬럼(100×2.1㎜ i.d., 1.7㎛ 입자 크기)상에서 수행되었다. 용출은 0.1% 포름산을 함유하는 ACN(아세토니트릴)/물에 의해 수행되었다. 입자는 12분 안에 0%에서 90%까지 선형적으로 증가한 후, 3분이 지나 0%로 감소하였다. 시작 조건에서 컬럼의 재평형을 포함한, 총 진행시간은 17분이었다. 주입량은 5㎕이고, 유량은 0.3㎖/min이었다. MS 실험을 위해, Waters G-TOF Premier(Micromass MS Technologies, 맨체스터, 영국)는 음 및 양 이온 모드에서 m/z 100 및 1500 사이로 수집된 TOF 데이터를 구비한 와이드 패스 사중극자 모드에서 작동되었다. 탈용매 가스(질소)는 200℃의 온도에서 600l/h로 세팅되어 있었고, 콘가스(질소)는 50l/h로 세팅되어 있었으며, 공급 온도는 100℃로 세팅되어 있었다. 모세관 및 콘 전압은 상대적으로, 3.0kV 및 40V로 세팅되어 있었다. 데이터는 0.2초 스캔 축적 시간과 함께, 중심 모드에서 수집되어 있었다. 화합물은 질량 스펙트럼 및 보유 시간을 모두 비교함으로써, 정확한 화합물을 사용하여 분명히 확인하였다.
세포 배양
건강한 젊은 남성 지원자(MCTT Core사, 서울, 한국)의 피부 생검에 의해 정상 인간 진피 섬유아세포(NHDF)들을 획득하였다. 세포들은 100-㎜조직 배양 플레이트들에서 플레이트되었고, 5% CO2를 함유하는 습기찬 환경의 37℃에서 10%의 열-비활성화된 FBS 및 1%의 페니실린-스트렙토마이신으로 보충된 DMEM에서 배양되었다. 모든 실험은 오직 계대 6 및 10 사이의 세포들을 사용하여 수행하였다.
UVB 조사 및 샘플 처리
NHDF들은 40-㎜ 조직 배양 플레이트들(1.2×105 세포들)에 시드되었다. 세포들이 80% 융합에 도달할 때, 그들은 인산 완충 식염수(PBS)로 두차례 씻어내었고, 모든 조사는 PBS의 얇은 층 아래에서 수행되었다. 플레이트들은 조사 동안 닫혀 있었다. UVB 조사는 7.5㎝ 거리에서 일정한 조사를 전달하는 Sankyo Denki 태양등 다섯 개의 배열에 밀접하게 배치됨으로써 공급되었다. 조사(0.1mW/㎠)는 UVB 광도계(IL1700 광도계, International Light)를 사용하여 측정되었다. 조사 후 즉시, 신선한 세럼-프리 배지 1980㎕와 샘플 20㎕는 각 웰에 첨가된 후, 세포들은 따뜻한 PBS로 세차례 씻어내었다. UVB 노출 없이 대조군 세포들은 같은 배양 조건에서 보관되었다. MMP-1, MMP-3, IL-6, 타입 Ⅰ 프로콜라겐 및 TGF-β1 생성은 UVB 조사 후 72시간 채취된 상청액에서 평가되었다. 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)의 분석을 위해, 세포들은 UVB 조사 후 24시간 채취되었다.
MTT 분석
MTT 분석, 비색 분석은 세포 생존 능력을 측정하기 위해 사용되는 것으로, MTT가 보라색을 생성하는 포마르잔 염색으로 바꾸는 것이다. 인큐베이션 72시간 후, 배지의 부피는 1㎖로 감소하였고, 1㎎/㎖ MTT의 100㎕는 각 벽에 첨가되었다. 이후, 세포는 37℃에서 2시간 동안 5%의 CO2 및 95%의 O2 존재 하에 배양되었다. 기질-함유 배지는 제거되었고, 1㎖의 DMSO는 포마르잔 결정을 용해시키기 위해 각 벽에 첨가되었다. 또한, 상온에서 30분 동안 오비탈 쉐이커로 플레이트를 흔들었다. 100㎕의 부분 표본의 흡수율은 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices E09090; 샌프란시스코, CA, 미국)를 사용하여 570㎚에서 흡수율을 측정함으로써 정량화하였다.
MMP -1, MMP -3 및 IL -6 측정
배지에서 MMP-1, MMP-3 및 IL-6의 농도는 제조자의 지시에 따라 상용화된 ELISA 키트(인간 토탈 NMP-1 키트, 인간 토탈 NMP-3 키트 및 인간 토탈 IL-6 키트; R&D 시스템사, 미니애폴리스, MN, 미국)를 사용하여 결정하였다. 각 샘플은 3배하여 분석되었다.
타입 Ι 프로콜라겐 및 TGF -β1 측정
배지에서 타입 Ι 프로콜라겐 및 TGF-β1의 농도는 제조자의 지시에 따라 상용화된 ELISA 키트(프로콜라겐 타입 Ι C-펩타이드 EIA 키트; Takara, Shiga, 일본; 인간 토탈 TGF-β1 키트, R&D 시스템사, 미니애폴리스, MN, 미국)를 사용하여 결정하였다. 각 샘플은 3배하여 분석되었다.
RT - PCR
하기 UVB 조사 샘플로 처리된 정상 인간 진피 섬유아세포(NHDF)들로부터 RNA의 분리는 TRIZOL 시약(Invitrogen Life Technologies, 칼즈배드, 캐나다)를 사용하여 제조자의 지시에 따라 수행되었다. RNA(5㎍)은 역전사효소 200 단위와 0.5㎍/㎕ 올리고-(dT)15 프라이머(Bioneer사, 한국)로 역전사되었다. 반응은 60분 동안 42℃에서 수행되었고, 5분 동안 94℃에서 열을 가하여 종결되었다. cDNA 주형의 PCR 증폭은 PCR premix(Bioneer) 및 하기 프라이머 쌍들을 사용하여 수행되었다: MMP-1, 정방향 5'-ATT CTA CTG ATA TCG GGG CTT TGA-3', 역방향 5'-ATG TCC TTG GGG TAT CCG TGT AG-3'; 타입 Ⅰ 프로콜라겐, 정방향 5'-CTC GAG GTG GAC ACC ACC CT-3', 역방향 5'-CAG CTG GAT GGC CAC ATC GG-3'; 및 글리세르알데히드-3-포스페이트 디하이드로제네이즈(GAPDH), 센스 5‘-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3', 안티센스 5’-CCA CCA CCC TGT TGC TGT AC-3'. PCR 생성물은 상대적으로, 30사이클 동안 Veriti Thermal Cycler(Applied Biosystems, 포스터 시티, CA, 미국)에서 수행되었다. PCR 생성물은 UV 조명 하에 브롬화 에티늄 염색된 2.0% 아가로오스 겔 전기영동에 의해 분리되었다. GAPDH는 내부적인 조절제로 사용되었다. 각 실험은 적어도 세 번 반복되었다.
통계학적 분석
모든 실험은 3배하여 수행되었다. 데이터는 평균 ±SD 값으로 표현되었다. 상이한 처리 간의 통계학적 비교는 Duncan's test에 의한 분산 분석의 한 방법으로 수행되었다. 통계학적 분석을 위해, 대조군에 개별적인 처리를 비교하기 위한 Student's T-test가 수행되었다. 통계학적 의미는 p<0.05로 정하였다.
< 실시예 1> 알로에 베라 조성물 확인
BAE 및 AE 표준 화합물을 이용하여 3가지 이차대사산물을 확인하였고, 확정하였다. 이들은 알로에신(1로 표기, m/z 393, ESI-), 알로인B(2로 표기, m/z 417, ESI-) 및 알로인A(3으로 표기, m/z 417, ESI-)였다. 도 1에서 보듯이, AE 보다 BAE에서 상대적으로 높은 함량의 알로에신, 알로인B 및 알로인A가 관찰되었다. 알로인 및 알로에신과 같은 페놀릭 대사산물이 다양한 알로에 종에서 주요한 항산화 화합물이 된다는 것은 기존 연구에서 이미 밝힌바 있었다. 특히, 알로인A는 알로에 베라로부터 획득되는 주요한 약물학적 활성 화합물이다. 또한, 알로에신은 라디칼적 소거 활성을 가지는 것으로 알려져 있다.
< 실시예 2> UVB 노출 없이 배양된 인간 진피 섬유 아세포들에서 BAE 및 AE 가 NMP -1, NMP-3, 타입 Ⅰ 프로콜라겐 및 TGF -β1생성에 미치는 영향
UVB에 노출되지 않고 배양된 인간 상피 섬유 아세포에서 MMP-1 및 MMP-3 분비물에서 BAE 및 AE의 영향을 연구하였다. 0.1 내지 25㎍/㎖범위의 농도에서 BAE 및 AE로 세포 처리는 BAE 및 AE는 정상 그룹과 비교하건대, 같은 범위의 농도에서 인간 상피 섬유 아세포에 상당한 세포독성이 없음을 확인시켜 주었다. 정상 그룹은 UVB로 조사되지 않았고, BAE 및 AE로 처리되지 않았다. 도 2는 BAE 및 AE로 처리된 후 비-조사된 세포에서 MMP-1 및 MMP-3의 생성 레벨을 보여준다. BAE 및 AE 처리 모두 정상 세포들과 비교하건대, MMP-1의 분비물을 감소시켰다. 그러나, MMP-3 생성은 BAE 및 AE 처리에 의해 억제되지 아니하였다. BAE-처리된 세포들은 타입 Ⅰ 프로콜라겐 생성을 증가시킨 반면, AE-처리된 세포들에서는 감소되었다. 그럼에도 불구하고, BAE 및 AE 처리는 타입 Ⅰ 프로콜라겐 발현에 약간의 영향을 주었다. BAE- 또는 AE- 처리된 정상 인간 진피 섬유 아세포(NHDF)들에서 TGF-β1의 생성은 결정되었다. 25㎍/㎖의 농도에서 BAE 처리는 대조군 그룹에 비해 높은 TGF-β1생성(최대 23%)을 유도하였다(도 2(E)). 그러나, AE 처리는 TGF-β1의 분비물에 영향을 미치지 못하였다.
< 실시예 3> UVB -조사되어 배양된 인간 진피 섬유 아세포에서 BAE 및 AE 가 NMP -1, NMP-3, 타입 Ⅰ 프로콜라겐 및 TGF -β1생성에 미치는 영향
UV-손상된 피부에서 BAE 및 AE의 영향을 조사하고자, UVB-조사되어 배양된 인간 진피 섬유 아세포들에서 MMP-1 및 MMP-3 분비물을 측정하였다. BAE 및 AE 처리는 UVB-손상 피부 섬유 아세포들에서 약한 독성을 보여주었다. UVB-조사된 섬유 아세포들은 처리되지 않은 세포들에 비해 높은 MMP-1 및 MMP-3 생성물을 가졌다. 도 3에서 보듯이, BAE 및 AE 처리 모두 UVB-조사된 대조군 세포들과 비교하건대, MMP-1 및 MMP-3의 분비물을 감소시켰다. 또한, 대조군과 비교하건대, BAE 처리는 투여량 의존 방법에서 MMP-1 및 MMP-3의 생성을 상당히 저해하였다. 타입 Ⅰ 프로콜라겐은 가장 풍부한 구조 단백질인 타입 Ⅰ 콜라겐을 합성한다. TGF-β1은 타입 Ⅰ 프로콜라겐의 주요한 조절자로 잘 알려져 있다. 따라서, BAE 및 AE로 처리되고, UVB-조사된 정상 인간 진피 섬유 아세포(NHDF)들에서 타입 Ⅰ 프로콜라겐 및 TGF-β1생성이 결정되었다. UVB-조사된 섬유 아세포는 노출되지 않은 세포들에 비해 보다 낮은 타입 Ⅰ 프로콜라겐 발현을 가졌다. 그러나, BAE 및 AE로 처리되고, UVB-조사된 세포들은 처리되지 않은 세포들에 비해 상대적으로 높은 타입 Ⅰ 프로콜라겐 발현을 가졌다(도 3(D)). 특히, 25㎍/㎖의 BAE로 처리는 UVB-조사 대조군에서 보다 매우 높은 타입 Ⅰ 프로콜라겐 생성(최대 74%)을 유도하였다(도 3(D)). UVB 노출은 비-조사 세포들에서의 약 40%로 TGF-β1을 감소시켰다. 낮은 농도에서, BAE 처리(0.1㎍/㎖)는 처리되지 않은 세포들에서 보다 높은 레벨로 TGF-β1생성을 상향 조절시켰다. 그러나, AE 처리는 TGF-β1의 분비물에 영향을 미치지 아니하였다.
< 실시예 4> UVB -조사된 정상 인간 진피 섬유 아세포( NHDF )들에서 BAE 및 AE 가 IL -6 생성에 미치는 영향
부분적인 MMP-1의 불균형 유도는 IL-6와 같은 전염증성 사이토카인에 의해 영향을 받았다. 또한, 이는 진피 사이 콜라겐의 손실, 광노화 특징을 초래할 수 있다. 도 4(A)에서 보듯이, 비-조사된 세포들에서, BAE 처리만 IL-6 생성의 약간의 감소를 보여주었다. UVB 노출은 IL-6 생성을 극단적으로 증가시켰다. 그러나, 25㎍/㎖에서 BAE의 처리는 조사된 세포들에 비해 약 45% 이하로 IL-6 레벨을 감소시켰다(도 4(B)). 이러한 결과들은 BAE 처리가 IL-6 생성의 UVB-유도된 생성물을 감소시킴을 보여준다.
알로에 베라는 전통적인 약학적 조성물로 빈번하게 사용되어 왔는바, 알로에 베라의 연구는 일광화상, 피부 건조 및 화상 치료에 초점이 맞춰져 왔고, 피부 상에 알로에 항염증 및 항산화 활성도 잘 정립되어 있다. 그러나, 지금까지 알로에 베라와 피부 노화의 관계에 대한 어떠한 연구도 없었다. 또한, 피부 광노화가 진행되는 시간에 따른 알로에의 효능에 대한 어떠한 연구도 없었다. 최근 몇 년간 주름, 색소침착 및 거칠음을 포함하는 광노화를 조절하기 위한 안전하고 자연스러운 방법들에 대한 연구가 진행되어오고 있다.
UV 조사에 반복적이거나 직접적인 피부 노출은 광노화로 불리우는 시기상조의 피부 노화를 유도하는 것으로 알려져 있다. UV 조사에 노출은 세포 상에 조사의 직접적 또는 재생되고 노화된 ECM의 간접적인 영향을 통하여, 케라틴세포들, 섬유아세포들 및 수지상세포들을 포함하는 내장된 세포들의 표현형에 영향을 준다.
콜라겐, 합성된 프로콜라겐은 인간 피부의 주요 빌딩 블록의 하나이다. 광노화된 피부는 MMP-1, MMP-3 및 MMP-9를 포함하는 여러 MMP들의 유도된 합성뿐만 아니라 프로콜라겐 생성의 하향조절을 보여준다. 특히, MMP-1 및 MMP-3은 UV 조사에 의해 유도되는 진피 사이 콜라겐 및 프로테오글리칸들의 파괴에 관여한다. 또한, UVB 조사는 IL-1 및 IL-6와 같은 사이토카인의 합성에 기여하는 것으로 보고된바 있고, IL-6 분비물은 UVB-조사된 섬유 아세포에서 MMP-1 및 MMP-3 생성을 증가시키는 것으로 보고된바 있다. UVB 조사에 의한 MMP-1 및 MMP-3 생성의 증가는 피부 광노화를 야기한다. 두가지 주요한 MMP들인, MMP-1 및 MMP-3의 조절은 UV 파장에 의존한다. 즉, 이들은 피부 광노화의 조절에 관한 리딩 인자들이다. 본 발명에서는 MMP-1 및 MMP-3의 UVB-유도된 활성은 BAE 및 AE 처리에 의해 저해됨을 확인할 수 있었다. UVB 조사 후, 높은 농도(25㎍/㎖)에서 BAE 처리는 MMP-1 및 MMP-3 생성 모두를 상당히 감소시켰다. 그러나, UV 조사 없이 BAE 처리된 세포들은 MMP-1 및 MMP-3에 영향을 미치지 않는다. 즉, UVB 조사되고 BAE 처리된 세포들은 UVB 처리에 노출되지 않고 처리된 세포들에 비해 낮은 MMP-1 및 MMP-3 생성을 가진다. 도 4는 BAE 처리는 UVB-유도된 IL-6 생성을 감소시킴을 보여주나, AE 처리는 그에 영향을 주지 못하였다. 이러한 결과들은 BAE가 정상 세포들에서 보다 UVB-처리된 세포들에서 더욱 잠재력 있음을 증명하는 것이다.
TGF-β1은 콜라겐 생성에 중요한 조절자이다. MMP들을 촉진시킴으로써 AP-1은 프로콜라겐을 떨어뜨리는 반면, TGF-β1은 프로콜라겐 합성을 촉진시킨다. 피부가 UVB 조사에 노출되어 있을 때, 프로콜라겐의 생성은 TGF-β1발현의 하향조절로 인해 감소되었다. 기존의 연구는 로얄젤리(RJ) 및 석류나무(PG) 껍질은 콜라겐 발현의 상향조절을 통해 정상 인간 진피 섬유 아세포(NHDF)들에서 UVB-유도된 피부 손상에 대항하는 보호적인 효과를 가짐을 보여준 바 있었다. RJ 1㎍/㎖ 및 PG 1000㎍/㎖로 처리된 UVB-조사된 세포들은 타입 Ⅰ 프로콜라겐 생성을 증가시켰다(상대적으로, 최대 64.6% 및 최대 20%). 본 발명에서 UVB 조사는 정상 인간 진피 섬유 아세포(NHDF)들에서 타입 Ⅰ 프로콜라겐 및 TGF-β1의 생성을 감소시키는 것을 초래함을 확인할 수 있었다. 특히, BAE-처리된 세포들(25㎍/㎖)은 TGF-β1(최대 30%)뿐만 아니라 타입 Ⅰ 프로콜라겐(최대 74%)의 생성을 증가시켰으나, 반면 AE-처리된 세포들은 그러지 못하였다(도 3). 이러한 결과들은 BAE는 RJ 및 PG 보다 UVB-유도된 피부 광노화에 대항하는 강력한 보호적인 영향을 가질 수 있음을 가르킨다.
또한, 광노화된 피부는 일반적으로 AP-1의 활성화에 의한 MMP-1의 증가를 초래한다. 이전의 연구들은 알로인 및 알로에신과 같은 페놀릭 대사산물들은 다양한 알로에 종에서 주요한 황산화 화합물로 보고되어 왔다. 본 발명에서는 정상 인간 진피 섬유 아세포(NHDF)들에서 UVB-유도된 피부 광노화에 보호적인 영향을 미치는 BAE를 연구하였다. BAE는 AE에 비해 높은 알로에신, 알로인 B 및 알로인 A를 가지기 때문에, 광노화에 대한 BAE의 저해 효과는 정상 인간 진피 섬유 아세포(NHDF)들에서 AE 보다 강력하였다. BAE는 AE에 비해 UVB 조사로 인한 광-손실의 조절에 강력한 조절자일 수 있다. 이러한 발견은 새로운 물질로서 BAE 및 알로에신은 UVB 노출로 인한 피부 손상을 보호함을 보여 준다. 따라서, 이는 화장료 조성물 뿐만 아니라 약학적 조성물로 사용가능함을 보여 준다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (13)

  1. 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 피부 노화는 자외선 조사에 의한 피부 광노화인 알로에 베라 새순 추출물.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 자외선은 파장 290㎚ 내지 320㎚의 자외선B(UVB)인 알로에 베라 새순 추출물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 알로에 베라 새순 추출물은 알로에 베라의 3개월생이하 가지로부터 추출된 것인 알로에 베라 새순 추출물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 알로에 베라 새순 추출물은 알로에신(aloesin), 알로인B(aloinB) 및 알로인A(aloinA)를 포함하는 알로에 베라 새순 추출물.
  6. 제 5항에 있어서,
    상기 알로에 베라 새순 추출물에서 알로에신은 알로에 베라 성체 추출물에서 알로에신 중량대비 1.5 내지 20배인 알로에 베라 새순 추출물.
  7. 제 5항에 있어서,
    상기 알로에 베라 새순 추출물에서 알로인B는 알로에 베라 성체 추출물에서 알로인B 중량대비 1.5 내지 20배인 알로에 베라 새순 추출물.
  8. 제 5항에 있어서,
    상기 알로에 베라 새순 추출물에서 알로인A는 알로에 베라 성체 추출물에서 알로인A 중량대비 1.5 내지 20배인 알로에 베라 새순 추출물.
  9. 제 1항에 있어서,
    상기 알로에 베라 새순 추출물은 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 탄소수 1-4의 저급 케톤, 탄소수 1-4의 저급 에스테르, 클로로포름 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출된 것인 알로에 베라 새순 추출물.
  10. 제 1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 알로에 베라 새순 추출물을 유효성분으로 하는 피부 노화 예방 또는 치료용 화장료 조성물.
  11. 제 10항에 있어서,
    상기 알로에 베라 새순 추출물의 용량이 0.1㎍/㎖ 내지 25㎍/㎖인 피부 노화 예방 또는 치료용 화장료 조성물.
  12. 제 1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 알로에 베라 새순 추출물을 유효성분으로 하는 피부 노화 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  13. 제 12항에 있어서,
    상기 알로에 베라 새순 추출물의 용량이 0.1㎍/㎖ 내지 25㎍/㎖인 피부 노화 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
KR1020130065729A 2013-06-10 2013-06-10 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물 KR20140143940A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020130065729A KR20140143940A (ko) 2013-06-10 2013-06-10 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020130065729A KR20140143940A (ko) 2013-06-10 2013-06-10 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20140143940A true KR20140143940A (ko) 2014-12-18

Family

ID=52674434

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020130065729A KR20140143940A (ko) 2013-06-10 2013-06-10 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20140143940A (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019083132A1 (ko) * 2017-10-27 2019-05-02 (주)아모레퍼시픽 사이토칼라신 d 또는 sag를 포함하는 항노화용 조성물 및 항노화 물질 스크리닝 방법
KR20200102830A (ko) * 2019-02-22 2020-09-01 (주)모아캠 알로에 속 식물 유래 dna의 제조방법, 및 알로에 속 식물 유래 dna를 유효성분으로 포함하는 항노화 및 항염증용 조성물
US10912956B2 (en) 2016-03-23 2021-02-09 Mary Kay Inc. Cosmetic compositions and uses thereof

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10912956B2 (en) 2016-03-23 2021-02-09 Mary Kay Inc. Cosmetic compositions and uses thereof
US11344751B2 (en) 2016-03-23 2022-05-31 Mary Kay Inc. Cosmetic compositions and uses thereof
US11918833B2 (en) 2016-03-23 2024-03-05 Mary Kay Inc. Cosmetic compositions and uses thereof
WO2019083132A1 (ko) * 2017-10-27 2019-05-02 (주)아모레퍼시픽 사이토칼라신 d 또는 sag를 포함하는 항노화용 조성물 및 항노화 물질 스크리닝 방법
KR20200102830A (ko) * 2019-02-22 2020-09-01 (주)모아캠 알로에 속 식물 유래 dna의 제조방법, 및 알로에 속 식물 유래 dna를 유효성분으로 포함하는 항노화 및 항염증용 조성물

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kim et al. Inhibition effect of Gynura procumbens extract on UV-B-induced matrix-metalloproteinase expression in human dermal fibroblasts
Park et al. Eucalyptus globulus extract protects against UVB-induced photoaging by enhancing collagen synthesis via regulation of TGF-β/Smad signals and attenuation of AP-1
JP5122060B2 (ja) 抗老化剤
Wen et al. Inhibitory effects of Terminalia catappa on UVB‐induced photodamage in fibroblast cell line
Jung et al. Pinus densiflora extract protects human skin fibroblasts against UVB-induced photoaging by inhibiting the expression of MMPs and increasing type I procollagen expression
Hwang et al. A comparative study of baby immature and adult shoots of Aloe vera on UVB‐induced skin photoaging in vitro
US9511013B2 (en) Herbal composition for skin-whitening and anti-skin-aging, method of preparation and the use thereof
KR100825450B1 (ko) 연교추출물을 함유하는 피부 주름개선용 화장료 조성물
KR20110054022A (ko) 미백제 및 항노화제, 그리고 피부 화장료
JP2010534720A (ja) ジベンゾ−ｐ−ダイオキシン誘導体を有効成分として含有した皮膚保護及び改善剤
Bazylko et al. Inhibition of ROS production, photoprotection, and total phenolic, flavonoids and ascorbic acid content of fresh herb juice and extracts from the leaves and flowers of Tropaeolum majus
Wölfle et al. Luteolin prevents solar radiation-induced matrix metalloproteinase-1 activation in human fibroblasts: a role for p38 mitogen-activated protein kinase and interleukin-20 released from keratinocytes
KR101824770B1 (ko) 적하수오 부정근 추출물을 함유하는 피부 주름개선 기능성 화장료 조성물
Tiraravesit et al. Artocarpus altilis heartwood extract protects skin against UVB in vitro and in vivo
Alexandru et al. Phenolic content, antioxidant activity and effect on collagen synthesis of a traditional wound healing polyherbal formula
Kang et al. Beneficial effects of dried pomegranate juice concentrated powder on ultraviolet B-induced skin photoaging in hairless mice
KR20130142424A (ko) 괭생이 모자반 유래 크로멘 화합물을 함유하는 광노화 억제용 조성물
Park et al. Effects of unripe apple polyphenols on the expression of matrix metalloproteinase-1 and type-1 procollagen in ultraviolet irradiated human skin fibroblasts
Hwang et al. Helianthus annuus L. flower prevents UVB‐induced photodamage in human dermal fibroblasts by regulating the MAPK/AP‐1, NFAT, and Nrf2 signaling pathways
Xuan et al. Atractyligenin, a terpenoid isolated from coffee silverskin, inhibits cutaneous photoaging
KR101633519B1 (ko) 오르키드 추출물을 포함하는 화장품 또는 피부학적 조성물 및 상기 조성물을 사용한 화장 케어 방법
KR20140143940A (ko) 피부 노화 예방 또는 치료에 효과적인 알로에 베라 새순 추출물
KR20150015083A (ko) 알로에신 또는 그 유도체를 함유하는 피부 노화 억제용 조성물
KR20160021371A (ko) 수선화 식물 세포 배양 추출물을 함유한 항염 및 항노화 효과를 지닌 피부 외용제 조성물 및 그 제조방법
KR101799426B1 (ko) 적하수오 추출물을 함유하는 화장품 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment