KR20140081984A - A skin-care agent containig Dictyophora indusiata fruit body extract or Dictyophora indusiata mycelium extract - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 흰망태버섯 자실체 추출물로부터 수득한 여과액 또는 흰망태버섯 균사체를 발효시켜 수득한 여과액을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for external application for skin containing an extract of Fagaceae mushroom Fruit body or an extract of Fungus mushroom mycelium. More specifically, the present invention relates to a composition for external application for skin comprising a filtrate obtained by fermentation of a filtrate obtained from an extract of Fagaceae mushroom Fruit body, To a composition for external application for skin.
피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological aging)와 광노화(phtoaging) 두 가지로 나눌 수 있다[Gilchrest BA: J. Am . Acad . Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상이다[Braverman IM 등: J. Invest . Dermatol., 78, 434-443(1982)]. 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다[Ridder GM등: J. Am . Acad . Dermatol., 25, 751-760(1991)]. 또한, 피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 활성산소종이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화 될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되어 심한 과다 염증반응이 일어나고, 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.Skin aging can be divided into two types: intrinsic (chronological aging) and phtoaging (Gilchrest BA: J. Am . Acad . Dermatol ., 21, 610-613 (1989)]. Endogenous aging is a naturally occurring aging phenomenon that is accompanied by decreased physiological function of the body as age increases [Braverman IM et al . : J. Invest . Dermatol ., 78, 434-443 (1982)]. Photoaging means that the skin is repeatedly exposed to light to change the appearance or function of the skin [Ridder GM et al . : J. Am . Acad . Dermatol ., 25, 751-760 (1991)]. In addition, skin aging can be caused by active oxygen species activated by ultraviolet rays, stress, disease states, environmental factors, wounds, and aging. When such conditions are deepened, the antioxidant defense network existing in the living body is destroyed, It damages tissues and promotes adult diseases and aging. More specifically, lipids, proteins, polysaccharides and nucleic acids, which are major constituents of the skin, are oxidized to destroy skin cells and tissues, resulting in skin aging. In particular, the oxidation of proteins causes severe hyperinflammation of collagen, hyaluronic acid, elastin, proteoglycans, and fibronectin, which are connective tissues of the skin, which interferes with skin elasticity. Mutation, cancer induction, and immune function.
그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부가 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다. 노화에는 활성산소종 뿐만 아니라 MMP(Matrix metallopretease)라는 효소가 관여하는데 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포 외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 자외선 노출에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 자외선에 의해 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 지금까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 분해효소(MMP)의 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다.Therefore, it is necessary to protect the cell membranes by abolishing reactive oxygen species that are mediated by the body's metabolic processes, ultraviolet irradiation, and inflammatory reactions, and regenerate already damaged cells by active metabolism to proliferate the cells Can be restored and healthy skin can be maintained. In aging, not only active oxygen species but also MMP (Matrix metallopretease) is involved. In vivo, the synthesis and degradation of extracellular matrix such as collagen are properly regulated, but the synthesis is reduced as aging progresses and the collagen- Expression of matrix metalloproteinases (MMPs) is promoted, and skin elasticity is lowered and wrinkles are formed. These degrading enzymes are also activated by exposure to ultraviolet light. Therefore, there is a demand for development of a substance capable of controlling the activation of MMP induced in the cell by ultraviolet light or inhibiting its activity. Until now, the raw materials used as cosmetic materials mostly inhibited only the activity of degrading enzyme (MMP).
한편, 멜라닌은 색소 세포 내에 존재하는 티로시나제의 작용에 의해 타이로신으로부터 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되어 도파크롬(dopachrome) 등을 거처 생성된다. 멜라닌은 피부에 존재하여 자외선 등으로부터 신체를 보호하고 체내 호르몬 분비 조절에 중요한 기능을 나타낸다. 그러나, 멜라닌이 과잉생산되면 기미, 주근깨 등을 형성하고 피부노화를 촉진하며 피부암 유발에 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 멜라닌 과잉생산을 예방하기 위한 연구개발이 활발히 진행되고 있다. 이미 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되고 있으나 화장품 제형 중에서의 안정성이 나빠, 분해되어 착색되거나, 이취가 발생하거나, 생체 수준에서의 효능, 효과가 불분명하거나 또는 안전성이 문제가 되어 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.On the other hand, melanin is converted from tyrosine to dopa and dopaquinone by the action of tyrosinase existing in pigment cells, and is generated by dopachrome. Melanin is present in the skin, protects the body from ultraviolet light and has an important function in regulating hormone secretion in the body. However, when melanin is overproduced, it is known that it forms spots and freckles, promotes skin aging, and plays an important role in skin cancer induction. Therefore, research and development are actively conducted to prevent melanin overproduction. (Japanese Patent Laid-open No. 4-93050) and plant extracts inhibit tyrosinase (Japanese Patent Laid-open Publication No. 4-9320), hydroquinone (Japanese Patent Laid Open No. 6-192062), kojic acid Activity and is used as a whitening cosmetic, but its stability is poor in cosmetic formulations, it is decomposed to cause coloration, odor, or efficacy at a biological level, its effect is unclear, or its safety is a problem. to be.
한편, 아토피 피부염(atopic dermatitis)은 아토피 알러지를 가진 사람에게서 나타나는 대표적인 질환으로, 아직까지 아토피 피부염의 원인은 명확히 밝혀지지 않았지만 아토피 피부염 환자의 70%에서 아토피의 병력이 있었으며, 알레르기성 체질인 사람에서 호발하고, 특히 다른 알러지 질환인 알러지성 비염, 천식 등을 동반하기 때문에 유전적 요인에 의한 질병이나 면역 질환 중의 하나로 이해되고 있다. 아토피성 피부염의 치료에는, 높은 약리효과를 기대할 수 있는 부신피질 호르몬 등의 약재가 사용되고 있으나 부신피질 호르몬제의 부작용이 문제가 되고 있고, 부신피질 호르몬제의 사용 중지에 의하여 리바운드(약물의 사용정지 후에 일어나는 극적인 환부의 병세악화)가 생기는 것도 잘 알려져 있다. 이와 같이 부작용의 대책으로서, 부신피질 호르몬 등의 호르몬을 포함하지 않는 비스테로이드성 항염증제 또는 항히스타민제 등이 사용되고 있으나 완치가 어려운 상태이기 때문에 부작용이 없는 아토피 피부염의 개선제 또는 치료제 개발이 매우 절실한 실정이다.Atopic dermatitis is a common disease in people with atopic allergies. Although the cause of atopic dermatitis has not yet been clarified, atopic dermatitis has a history of atopy in 70% of the patients, And it is understood to be one of diseases caused by genetic factors or immune diseases because it is accompanied by allergic diseases such as allergic rhinitis and asthma. In the treatment of atopic dermatitis, medicines such as corticosteroids, which can expect high pharmacological effects, are used, but side effects of corticosteroids are problematic, and the use of corticosteroids causes the rebound It is also well-known that a later severe worsening of the affected part occurs. As a countermeasure for such side effects, a non-steroidal anti-inflammatory agent or an antihistamine agent which does not contain a hormone such as adrenocortical hormone is used but it is very difficult to develop a remedy or therapeutic agent for atopic dermatitis without side effects because it is difficult to cure.
최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연 추출물로부터 얻어진 항산화, 주름완화, 미백, 가려움 완화 등의 기능을 가진 기능성 화장료(Functional cosmetics)에 많은 관심이 집중되고 있다. 예를 들어, 미국 특허공보 US 5,972,341은 코미포라 무쿨(Commiphora mukul) 추출물의 주름개선 효과에 관하여, 일본특허공개 평9-672662는 히아루로니디아제(Hyaluronidase) 억제 효능을 가지는 해조류 추출물에 관하여, 일본특허공개 평10-85905는 와카메(Wakame)로부터 추출된 푸코이단(Fucoidan)의 피부감촉 개선효과에 관하여, 일본특허공개 평2-245087은 사르가숨(Sargassum) 속 추출물의 항산화 효과에 관하여, 대한민국 특허 제0431076호는 백급, 자소, 에키나시아 및 발효대두 추출물을 포함하는 아토피 피부의 치유 개선용 화장료 조성물을, 대한민국 특허 제0511494호는 하수오, 시엽, 일라이트를 포함하는 아토피 피부염 치료를 위한 추출물 및 조성물에 관해 개시하고 있다.Recently, much attention has been focused on functional cosmetics having functions such as antioxidation, wrinkle reduction, whitening, and itching relief obtained from natural extracts in order to reduce skin irritation caused by various chemical substances and the like. For example, U.S. Patent No. 5,972,341 discloses a wrinkle-reducing effect of an extract of Commiphora mukul. Japanese Patent Application Laid-Open No. 9-672662 discloses an extract of seaweed having a hyaluronidase inhibitory effect, Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 2-245087 discloses an antioxidative effect of Sargassum sp. Extract on the skin texture improvement effect of Fucoidan extracted from Wakame, Patent No. 0431076 discloses a cosmetic composition for improving the healing of atopic skin including a white, black, echinacea, and fermented soybean extract, Korean Patent No. 0511494 discloses an extract and composition for treating atopic dermatitis including at least one of Hashuo, .
또한, 남성형 탈모증은 남성호르몬 의존적이어서 남성호르몬의 양에 직접적인 관계가 있으며, 이에 따라 최근 남성호르몬 활성억제를 통한 탈모의 예방 및 치료를 위한 많은 연구가 보고되고 있다. 한편, 남성호르몬의 분비상승에 의해 피지선의 기능이 활발해지면 생성된 과잉 피지가 모낭벽의 과각화로 인하여 모낭 내에 정체되면서 생기는 면포가 여드름의 초기단계이다. 남성호르몬에 의한 탈모 및 여드름의 기전을 설명하면, 5-알파-리덕타아제(5-α-Reductase)는 피지선, 모낭, 전립선, 부고환 등의 남성 호르몬 반응성 조직에 존재하는 남성 호르몬들 중 하나로서, 테스토스테론(testosterone)을 디하이드로 테스토스테론(dihydrotestosterone)으로 대사시키는데 관여하는 효소이며, 그 전환에는 NADPH를 필요로 한다. 또한, 테스토스테론은 남성 성충동, 골격근 증가, 남성외부생식기, 음낭성장, 정자형성 등에 관여하고, 디하이드로테스토스테론은 여드름, 피지 증가, 탈모 및 전립선 비대증 등의 해당 조직에 관여한다. 특히, 사춘기 이후에 남성 호르몬의 과량 분비는 여드름과 탈모를 유발하는데, 5-알파-리덕타아제에 의하여 생성되는 남성 호르몬의 활성형태인 디하이드로테스토스테론의 과량 생성을 막기 위해 5-알파-리덕타아제 억제제를 사용하여 탈모방지 및 여드름 방지제를 개발하려는 연구들이 활발히 진행되고 있다.In addition, male-pattern alopecia are male hormone-dependent and have a direct relationship with the amount of male hormone. Accordingly, many studies for prevention and treatment of alopecia through inhibition of male hormone activity have been reported. On the other hand, when the function of the sebaceous gland is activated by the increase of the secretion of the male hormone, the excess sebum produced in the hair follicle is stagnated in the hair follicle due to the overgrowth of the hair follicle wall. 5-alpha-Reductase is one of the male hormones present in male hormone reactive tissues such as sebaceous glands, hair follicles, prostate, and epididymis, as a result of male hormone-induced hair loss and acne. , An enzyme involved in the metabolism of testosterone into dihydrotestosterone, and requires NADPH for its conversion. In addition, testosterone is involved in male sexual dysfunction, skeletal muscle increase, male external genitalia, scrotum growth, spermatogenesis and the like, and dihydrotestosterone is involved in the relevant tissues such as acne, sebum increase, hair loss and enlargement of the prostate. In particular, after puberty, excessive secretion of male hormones causes acne and hair loss. To prevent excessive production of dihydrotestosterone, an active form of male hormone produced by 5-alpha-reductase, 5-alpha-reductase Studies have been actively conducted to develop anti-hair loss and anti-acne agents using an azide inhibitor.
이러한 피부의 문제점을 해결하기 위하여, 최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물 또는 약용과 식용버섯 추출물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 지금까지 알려진 버섯의 추출물을 이용한 화장료 조성물로서는 눈꽃동충하초(한국특허 제0340185호), 상황버섯, 치마버섯(한국특허 제0681703호, 제0295623호), 잎새버섯(한국특허 제0438009호), 표고버섯 등이 있으며 이들 추출물의 피부 노화방지 효과에 관한 연구가 계속되어 왔다.In order to solve such skin problems, many cosmetics using natural products or medicinal and edible mushroom extracts have recently been developed to reduce skin irritation caused by various chemical substances and the like. As the cosmetic compositions using the mushroom extracts known so far, there have been proposed various cosmetic compositions such as snow flake (Korean Patent No. 0340185), Situ mushroom, Chima mushroom (Korean patent No. 0681703, No. 0295623), Leaf mushroom (Korean patent No. 0438009) And the research on the anti-aging effect of these extracts has been continued.
약용과 식용으로 사용되고 있는 버섯류들은 그 예와 종류가 무수히 많지만, 화장료 조성물로서 이용되고 연구되고 있는 버섯류들은 아직은 일부분으로 알려져 있다. Mushrooms which are used for medicinal and edible purposes are many examples and kinds, but mushrooms which are used and studied as cosmetic composition are still known as a part.
흰망태버섯(Dictyophora indusiata)은 말불버섯목 말불버섯과에 속하는 버섯으로, 장마철에서 가을에 걸쳐 주로 대나무 숲이나 잡목림 등의 지상에서 발생한다. 처음에는 땅속에 지름 3~5 cm의 백색 뱀알 모양의 덩어리가 생기고 밑부분에 다소 가지친 긴 균사속이 뿌리같이 붙어 있으며 점차 위쪽 부분이 터지면서 버섯이 솟아나온다. 자루는 주머니에서 곧게 10~20 cm의 높이로 뻗어 나오고 순백색이며 속이 비어 있고 수많은 다각형의 소실로 된다. 갓은 주름잡힌 삿갓모양을 이루고 강한 냄새가 나는 올리브색, 암갈색의 점액 포자로 뒤덮여있다. 식용, 약용으로 이용되고 있다. The white mushroom ( Dictyophora indusiata ) is a mushroom belonging to the bamboo forest mushroom and the mushroom, and it occurs mainly in the bamboo forest and the mushroom forest from the rainy season to the autumn. Initially, a white, snake-like lump of 3 ~ 5 cm in diameter is formed in the ground, and a long mycelium, which is slightly branched, is attached like a root. The upper part of the mycelium bursts gradually and the mushroom pops up. The bag extends straight from the pouch at a height of 10 to 20 cm, and is pure white, empty and void of numerous polygons. The gut is covered with mucous spores of olive and dark brown color with a pleated shape and strong smell. Edible, and medicinal.
이러한 흰망태버섯에 대하여 아직까지 피부 외용제로서 피부 노화방지 효과, 미백효과, 피부자극 완화효과, 아토피 개선효과, 여드름 개선효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 개선효과 및 염증질환 예방 또는 치료효과를 나타내는지는 규명된 바가 전혀 없다.
In addition, it is possible to prevent skin aging, whitening effect, skin irritation alleviation effect, atopy improvement effect, acne improvement effect, hair damage prevention effect, hair loss prevention and hair growth improvement effect and inflammatory disease prevention or treatment effect Has never been identified.
본 발명은 천연추출물을 이용하여 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부자극 완화, 여드름 방지, 아토피 개선 및 항염증의 효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과를 가지는 피부 외용제 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.The present invention relates to the use of natural extracts for the treatment of skin having antioxidation, promoting collagen synthesis, improving skin wrinkles, whitening, moisturizing, alleviating skin irritation, preventing acne, improving atopic appearance and antiinflammation, preventing hair damage, And an object of the present invention is to provide a composition for external application.
또한, 본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하고자 고등균류인 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양액으로부터 얻은 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.Another object of the present invention is to provide a composition for external application for skin, which comprises as an active ingredient a culture solution obtained from a culture of a higher mushroom extract, a mushroom mycelium extract or a mushroom mycelium extract, The purpose is to provide.
또한, 본 발명은 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부자극 완화, 여드름 방지, 아토피 개선 및 항염증의 효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과를 복합적으로 가지는 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물을 효율 좋게 수득하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
The present invention also relates to a method for preventing or treating hair loss, which comprises a combination of antioxidant, collagen synthesis promotion, skin wrinkle improvement, whitening, moisturizing, skin irritation mitigation, acne prevention, atopic improvement and anti- It is an object of the present invention to provide a method for efficiently obtaining mushroom fruit body extract or white mushroom mycelium extract.
상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for external application for skin, which comprises, as an active ingredient, a culture solution obtained from the culture of white mushroom fruity body extract or white mushroom mycelium extract or white mushroom mycelium.
이하 본 발명의 과제 해결 수단에 대해 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 외용제 조성물은 항산화 효과, 노화 방지 효과, 주름 개선효과, 피부 보습효과, 콜라겐 합성촉진효과, 미백효과, 아토피성 피부염 개선·예방 또는 치료 효과, 피부자극 완화효과, 염증질환 예방 또는 치료효과, 여드름 개선·예방 또는 치료효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 개선효과가 우수한 피부 외용제 조성물을 제공하기 위해, 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다. The composition for external application of the present invention is effective for preventing or treating atopic dermatitis, skin irritation mitigation effect, prevention or treatment of inflammation, antioxidative effect, anti-aging effect, wrinkle improvement effect, skin moisturizing effect, collagen synthesis promotion effect, whitening effect , A composition for preventing or treating acne, prevention of hair damage, prevention of hair damage, prevention of hair loss, and improvement of hair growth, comprising the steps of: extracting white mushroom fruity body extract or white mushroom mycelium extract or white mushroom mycelium; Characterized by containing a culture medium as an effective ingredient.
본 발명의 흰망태버섯 자실체 추출물은 흰망태버섯 자실체를 추출하여 얻을 수 있는데, 여기서 흰망태버섯 자실체의 종류에는 특정의 종류에 한정되는 것은 아니며 자연채취된 것 또는 인공배양된 것 모두 사용할 수 있다. The white foxtail mushroom fruiting body extract of the present invention can be obtained by extracting white foxtail mushroom fruiting body. Here, the type of white foxtail mushroom fruiting body is not limited to a specific kind but can be either natural picked or artificially cultured.
또한, 본 발명의 흰망태버섯 자실체 추출물의 추출방법은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상 사용하는 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면, 흰망태버섯 자실체를 동결건조하고 분쇄하여 수득한 자실체 분말에 약 2배 내지 20배, 바람직하게는 약 2배 내지 5배의 물, 메탄올 또는 에탄올 등의 저급(C1-C4)알코올의 극성용매 또는 이들의 혼합용매로 10℃ 내지 30℃ 추출온도에서 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 열수 추출, 초음파 추출, 초고압 추출 등의 추출방법을 이용할 수 있다. In addition, the method for extracting the Fusarium oxysporum fructus extract of the present invention may be a method commonly used in the art to which the present invention belongs. For example, water of about 2 to 20 times, preferably about 2 to 5 times, water, a lower (C1-C4) alcohol such as methanol or ethanol is added to the fruity body powder obtained by lyophilizing and grinding the white foxtail mushroom fruiting body A polar solvent or a mixed solvent thereof at an extraction temperature of 10 캜 to 30 캜, such as cold extraction, reflux cooling extraction, hot water extraction, ultrasonic extraction and ultrahigh pressure extraction.
또한, 바람직하게는 이와 같이 수득한 추출액을 여과, 감압농축 또는 동결건조하여 극성용매에 가용할 수 있다. 예를 들면, 수득된 추출액을 여과시킨 후 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하고, 이렇게 얻어진 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 ~ 70.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출물을 제조할 수 있다. Further, preferably, the thus obtained extract can be filtered, concentrated under reduced pressure, or lyophilized to be soluble in a polar solvent. For example, the obtained extract is filtered and then transferred to a concentration tank and concentrated under reduced pressure and freeze-dried at 50 DEG C or lower. To obtain the thus obtained reduced pressure concentrate and the lyophilized product in an amount of 0.001 to 70.0 wt%, purified water, ethanol, Propylene glycol, and the like can be used to produce an extract.
또한, 본 발명의 흰망태버섯 자실체 추출물은 이와 같이 얻어진 추출물에 유효성분으로 함유된 다당체 자체를 의미할 수도 있다.In addition, the fruity body extract of white mushroom of the present invention may mean the polysaccharide itself contained as an active ingredient in the extract thus obtained.
한편, 본 발명의 흰망태버섯 균사체 추출물은 흰망태버섯 균사체를 추출하여 얻은 것으로, 그 추출방법은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상 사용하는 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면, 흰망태버섯 균사체를 동결건조하고 분쇄하여 수득한 균사체 분말의 열수추출물, 또는 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출한 유기용매 추출물일 수 있다.On the other hand, the white mushroom mycelium extract of the present invention is obtained by extracting white mushroom mycelium, and the extraction method can be a commonly used method in the technical field to which the present invention belongs. For example, it may be a hot-water extract of the mycelial powder obtained by freeze-drying and pulverizing the mycelia of white mushroom, or an organic solvent extract obtained by using methanol, ethanol, butanol or a mixed solvent thereof.
한편, 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 그대로 사용하거나, 건조(또는 동결건조)하여 분말 형태로 사용할 수 있다. 바람직하게는 배양액을 여과하여 사용할 수도 있다. 구체적으로 흰망태버섯 균사체를 액체 배양한 후, 균사체를 원심분리를 통해 제거한 후, 배양 여액을 종이필터로 여과하여 수득된 여과액을 사용할 수 있는 것이다. 이때, 배양은 '발효'를 포함하는 의미이다. On the other hand, the culture liquid obtained from the culture of mycelia of white mushroom can be used as it is, or dried (or lyophilized) and used in powder form. Preferably, the culture solution may be used by filtration. Specifically, the mycelium is removed by centrifugation after liquid culture of white mushroom mycelium is liquid, and the filtrate obtained by filtering the culture filtrate with a paper filter can be used. At this time, the culture means 'fermentation'.
또한, 본 발명의 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 상기 열수추출물, 상기 유기용매 추출물 또는 상기 여과액에서 추출된 다당체일 수도 있다.In addition, the culture solution obtained from the culture of the mycelial white mushroom mycelium extract or the white mushroom mycelium of the present invention may be a polysaccharide extracted from the hot-water extract, the organic solvent extract or the filtrate.
또한, 본 발명의 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 1종 이상의 동물 또는 식물 또는 생약재를 기질로 사용한 흰망태버섯 균사체의 추출물인 것이 바람직하다. 여기서, 상기 동물 또는 식물 또는 생약재는 특별히 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상 사용되는 동물 또는 식물 또는 생약재를 기질로 사용할 수 있다. In addition, the culture solution obtained from the cultivation of the mycelium extract of mycorrhizal mushroom mycelium of the present invention or the mycorrhizal mushroom mycelium of the present invention is preferably an extract of white mushroom mycelium using at least one animal or plant or herbal medicine as a substrate. Herein, the animal, plant or herb medicine is not particularly limited, and an animal, a plant or a herbal medicine commonly used in the technical field of the present invention can be used as a substrate.
이와 같이 수득된 본 발명의 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액은 항산화 효과, 기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해효과, 기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현 억제효과, 프로콜라겐 생합성 촉진효과, 엘라스틴 생성 촉진효과, 미백효과, 염증유발관련 효소(hyaluronidase) 활성 억제효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과, 자외선 조사에 의한 프로스타글란딘 생합성 억제 효과, 여드름균에 대한 항균효과, 아토피 피부염에 대한 항염증효과, 피부 자극 완화효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과가 매우 우수하여 다기능성 피부 외용제 조성물에 이용될 수 있다. The culture obtained from the culture of the thus obtained white mushroom fruiting body extract or white mushroom mycelium extract or white mushroom mycelium of the present invention showed antioxidative effect, inhibitory effect on substrate metalloproteinase (MMP-1) activity, The effect of suppressing the expression of the enzyme (MMP-1), the promoting effect of pro-collagen biosynthesis, the promoting effect of elastin production, the whitening effect, the inhibitory effect of hyaluronidase activity, the cytotoxic relaxation effect by ultraviolet irradiation, The anti-inflammatory effect against atopic dermatitis, the skin irritation alleviation effect, the hair damage prevention effect, the hair loss prevention effect and the hair growth effect are excellent, so that the multi-functional It can be used in a composition for external application for skin.
한편, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 조성물 전체에 대해 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 0.001 ~ 90.0 중량% 함유하는 것이 좋은데, 0.001 중량% 미만으로 포함되는 경우에는 피부개선효과 등이 미미하고, 90.0 중량%를 초과하는 경우에는 재료 투입량 대비 효율성이 떨어져 경제적이지 못하기 때문이다. On the other hand, the composition for external application for skin of the present invention preferably contains 0.001 to 90.0% by weight of a culture solution obtained from the culture of white mushroom fruity body extract or white mushroom mycelium extract or white mushroom mycelium, If it is included, the effect of improving the skin is insignificant. If it exceeds 90.0% by weight, the efficiency with respect to the amount of the material is inferior, which is not economical.
한편, 본 발명에서 "유효성분으로 포함된다"는 의미는 본 발명의 피부 외용제 조성물로부터 피부질환의 예방 및 억제의 효과를 나타낼 수 있는 정도로, 피부 외용제 조성물에 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation) 되는 것을 포함하는 의미이다.In the present invention, the term "included as an active ingredient" means that the composition of the external preparation for skin of the present invention is effective to prevent and inhibit skin diseases, Means the addition of a culture solution obtained from the culture of the extract or the mycelia of white mushroom, and includes various formulations in which various components are added as subcomponents for drug delivery and stabilization.
한편, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 바람직하게 화장료 조성물인 것이 좋은데, 화장료 조성물의 제형으로는 일예로 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초화장료 제형; 수중유형 또는 유중수형의 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형; 이 있다. The composition for external application for skin of the present invention is preferably a cosmetic composition. Examples of the cosmetic composition include cosmetics, gels, water-soluble liquids, creams, essences, oil-in-water (O / W) O) type; A color cosmetic formulation consisting of an underwater type or a water-in-oil type makeup base, a foundation, a skin cover, a lipstick, a lip gloss, a face powder, a two way cake, an eye shadow, a cheek color and an eyebrow pencil; .
한편, 화장료 조성물은 가장 바람직하게 피부 미백용, 노화방지용, 피부자극완화용, 피부 보습용, 주름 개선용, 아토피 피부 개선용, 여드름 개선용, 모발손상 방지용 또는 탈모방지용인 것이 좋다.On the other hand, the cosmetic composition is most preferably used for skin whitening, anti-aging, skin irritation, skin moisturizing, wrinkle improvement, atopic skin improvement, acne improvement, hair damage prevention or hair loss prevention.
한편, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 바람직하게 약학 조성물인 것이 좋은데, 약학 조성물의 제형으로는 일예로 경고제(PLASTERS), 로션제(LOTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 첩부제, 서방화제제가 있다. Meanwhile, the external composition for skin of the present invention is preferably a pharmaceutical composition. Examples of the pharmaceutical composition include PLASTERS, LOTIONS, LINIMENTS, LIQUIDS AND SOLUTIONS, AEROSOLS, EXTRACTS, OINTMENTS, FLUIDEXTRACTS, EMULSIONS, SUSPESIONS, CAPSULES, CREAMS, Gelatin capsules, pastes, and sustained release preparations.
한편, 본 발명의 약학적 조성물은 약리학적으로 허용되는 기제; 운반제; 부형제; 전분, 트래거캔스 고무, 젤라틴, 당밀, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스를 포함하는 결합제; 한천, 전분, 젤라틴 가루, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스 칼슘, 결정 셀룰로오스, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨 및 알긴산 나트륨을 포함하는 분쇄제; 스테아린산 마그네슘, 활석 및 수첨 식물유를 포함하는 윤활제; 및 착색제 등을 포함할 수 있고, 상기 운반제 및 부형제로는 젖당, 글루코오스, 수크로오스, 만니톨, 감자녹말, 옥수수녹말, 탄산칼슘, 인산칼슘 및 셀룰로오스 등이 있다. 상기 외에도 안정화제, 용해보조제, 경피흡수 촉진제 등의 보조제 방향제, 방부제 등의 첨가제가 더 첨가될 수 있다.On the other hand, the pharmaceutical composition of the present invention comprises a pharmacologically acceptable base; Carrier; Excipients; Binders comprising starch, tragacanth gum, gelatin, molasses, polyvinyl alcohol, polyvinyl ether, polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylcellulose, methylcellulose, ethylcellulose and carboxymethylcellulose; A pulverizing agent comprising agar, starch, gelatin powder, carboxymethyl cellulose sodium, carboxymethyl cellulose calcium, crystalline cellulose, calcium carbonate, sodium hydrogen carbonate and sodium alginate; Lubricants including magnesium stearate, talc and hydrogenated vegetable oils; And a coloring agent. Examples of the carrier and excipient include lactose, glucose, sucrose, mannitol, potato starch, cornstarch, calcium carbonate, calcium phosphate, and cellulose. In addition to the above, additives such as stabilizers, solubilizers, perfume fragrances such as transdermal absorption accelerators, and preservatives may be further added.
한편, 많은 환자에게 본 발명인 피부 외용제 조성물에 대한 표준 투여량은 환자의 개별적 특성에 의해 그 양이 변화될 수 있으며, 실질적으로 숙련된 임상 의사는 환자를 위해 본 발명의 피부 외용제 조성물에 대한 이상적인 투여량 및 투여 계획, 예를 들어 특정 필요 및 환자의 전체적인 조건의 관점에서 가장 적절한 치료 전략을 정할 수 있다. 본 발명의 피부 외용제 조성물에 대하여, 적절한 투여량을 결정하는 데는 수많은 참조 문헌을 참조할 수 있다. The standard dose of the composition for external application for skin of the present invention can be varied depending on the individual characteristics of the patient, and a practitioner skilled in the art will be able to make an ideal administration Amount and dosage regimen, for example, the most appropriate treatment strategy in terms of the specific needs and the overall condition of the patient. For the dermal topical composition of the present invention, a number of references can be referred to in determining an appropriate dosage.
또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물의 적절한 투여량은 시험관 내 또는 동물 모델에서 일반적으로 결정될 수도 있다. 예를 들어 시험관 내에서 표적 세포에 대해 여러 농도의 본 발명 피부 외용제 조성물을 첨가하여 그 적절한 투여량을 결정할 수도 있다. In addition, a suitable dose of the external skin application composition of the present invention may be generally determined in vitro or in an animal model. For example, various concentrations of the inventive skin topical composition may be added to the target cells in vitro to determine their proper dosage.
한편, 약학 조성물은 바람직하게 염증질환 예방 또는 치료용, 아토피 예방 또는 치료용 또는 여드름 예방 또는 치료용인 것이 좋다.
On the other hand, the pharmaceutical composition is preferably used for preventing or treating an inflammatory disease, for preventing or treating atopy, or for preventing or treating acne.
본 발명에 의하면, 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 노화 방지, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부자극 완화, 여드름 방지, 아토피 개선 및 항염증의 효과, 모발손상 방지효과, 탈모방지 및 육모 효과를 복합적으로 발휘하는 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 배양액을 수율 좋게 수득할 수 있고, 이를 이용하여 다기능성 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다.
According to the present invention, it is possible to provide a cosmetic composition for preventing or treating hair loss, which comprises a combination of antioxidant, collagen synthesis promotion, aging prevention, skin wrinkle improvement, whitening, moisturizing, skin irritation mitigation, acne prevention, atopic improvement and anti- The present invention provides a method for producing a multifunctional dermatological composition comprising the steps of:
이하, 본 발명의 내용을 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail in the following Examples. However, the scope of the present invention is not limited to the following embodiments, and includes modifications of equivalent technical ideas.
실시예Example 1: 흰망태버섯 자실체 추출물의 제조 1: Preparation of white foxtail mushroom fruit body extract
흰망태버섯(Dictyophora indusiata) 자실체를 동결건조하고 분쇄하여 수득한 자실체 분말을 에탄올이 70%(v/v) 함유된 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조시킨 후, 수득된 동결 건조물을 15중량% 함유되도록 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜의 혼합용매에 용해시킴으로써 추출물(이하, '흰망태버섯 자실체 추출물'이라 칭함)을 제조하였다.
White mushroom ( Dictyophora indusiata fruiting body was lyophilized and pulverized. The resulting fruiting body powder was refluxed for 3 hours with an aqueous solution containing 70% (v / v) ethanol, cooled with ice, filtered through a Whatman # 5 filter paper . The filtered extract was concentrated under reduced pressure and freeze-dried at 50 DEG C or lower, and the lyophilized product thus obtained was dissolved in a mixed solvent of purified water, ethanol, butylene glycol and propylene glycol so as to contain 15 wt% Fruit body extract ") was prepared.
실시예Example 2: 흰망태버섯 균사체 추출물의 제조 2: Preparation of mycelia extract of white mushroom
실험에 사용된 흰망태버섯(Dictyophora indusiata) 균주는 신선한 자실체로부터 직접 분리하였으며, 흰망태버섯 균사체를 효모-맥아즙 한천배지(효모 추출물 3 g, 맥아즙 3 g, 포도당 10 g, 펩톤 5 g, 한천 20 g, 증류수 1 ℓ)가 든 시험관에 사면배양하여 4℃에 보관하고 1개월마다 계대배양하여 사용하였다. 상기 사면배지에서 자란 균사체를 무균적으로 균질화하고, 이를 포도당 3%, 효모 추출물 1.0%를 함유한 단순 복합 배지로 하며 pH 5.5로 조정한 액체배지에 5%(v/v)되게 접종한 후, 발효조 내에서 온도 27℃, 회전수 150 rpm, 통기량 1.5 vvm의 조건으로 10일간 배양하였다.The white mushroom ( Dictyophora Indusiata was isolated directly from fresh fruiting bodies and the white mushroom mycelium was isolated from yeast-malt juice agar medium (yeast extract 3 g, malt juice 3 g, glucose 10 g, peptone 5 g, agar 20 g, distilled water 1 ℓ) The slides were incubated at 4 ° C and subcultured every month. The mycelia grown on the slope medium were aseptically homogenized and inoculated in a liquid medium adjusted to pH 5.5 to 5% (v / v) as a simple complex medium containing 3% glucose and 1.0% yeast extract, The mixture was incubated in a fermenter at a temperature of 27 ° C, a rotation speed of 150 rpm, and aeration amount of 1.5 vvm for 10 days.
배양완료 후, 균사체를 원심분리를 통해 회수한 후, 상기 실시예 1에 기재된 방법으로 추출하여 균사체 추출물(이하, '흰망태버섯 균사체 추출물'이라 칭함)을 제조하였다.
After completion of the cultivation, the mycelium was recovered through centrifugation, and then extracted with the method described in Example 1 to prepare a mycelial extract (hereinafter, referred to as "white mushroom mycelium extract").
실시예Example 3: 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액의 제조 3: Preparation of a culture obtained from the culture of mycelia of white mushroom
실험에 사용된 흰망태버섯(Dictyophora indusiata) 균주는 신선한 자실체로부터 직접 분리하였으며, 흰망태버섯 균사체를 효모-맥아즙 한천배지(효모 추출물 3 g, 맥아즙 3 g, 포도당 10 g, 펩톤 5 g, 한천 20 g, 증류수 1 ℓ)가 든 시험관에 사면배양하여 4℃에 보관하고 1개월마다 계대배양하여 사용하였다. 상기 사면배지에서 자란 균사체를 무균적으로 균질화하고, 이를 포도당 3%, 효모 추출물 1.0%를 함유한 단순 복합 배지로 하며 pH 5.5로 조정한 액체배지에 5%(v/v)되게 접종한 후, 발효조 내에서 온도 27℃, 회전수 150 rpm, 통기량 1.5 vvm의 조건으로 10일간 배양하였다.The white mushroom ( Dictyophora Indusiata was isolated directly from fresh fruiting bodies and the white mushroom mycelium was isolated from yeast-malt juice agar medium (yeast extract 3 g, malt juice 3 g, glucose 10 g, peptone 5 g, agar 20 g, distilled water 1 ℓ) The slides were incubated at 4 ° C and subcultured every month. The mycelia grown on the slope medium were aseptically homogenized and inoculated in a liquid medium adjusted to pH 5.5 to 5% (v / v) as a simple complex medium containing 3% glucose and 1.0% yeast extract, The mixture was incubated in a fermenter at a temperature of 27 ° C, a rotation speed of 150 rpm, and aeration amount of 1.5 vvm for 10 days.
배양완료 후, 균사체를 원심분리를 통해 제거한 배양여액을 종이필터 (watman no.4)로 여과하여 여과액을(이하, '흰망태버섯 균사체 배양액'이라 칭함) 수득하였다.
After completion of the cultivation, the mycelium was removed by centrifugation, and the culture filtrate was filtered with a paper filter (watman no. 4) to obtain a filtrate (hereinafter, referred to as "white mushroom mycelial culture liquid").
실험예Experimental Example 1: One: NBTNBT 을 이용한 항산화 효과 측정Antioxidant effect measurement
상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 항산화 수준을 확인하기 위해 항산화제로 잘 알려진 BHT를 비교샘플로 사용하였고, 항산화 측정은 NBT법을 이용하였다.To confirm the antioxidant levels of the white foxtail mushroom fruit extract obtained in Example 1 and the white foxtail mushroom culture obtained in Example 3, BHT, which is well known as an antioxidant, was used as a comparative sample. Respectively.
NBT법은 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시키고, 생성된 활성산소와 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)이 반응하여 생성된 청색을 파장 560 nm에서 측정하는 방법으로, 활성산소 소거율을 측정하였으며, 측정방법은 하기와 같다. The NBT method is a method in which active oxygen is generated by xanthine and xanthine oxidase and blue light generated by the reaction of the generated active oxygen with Nitro Blue Tetrazolium (NBT) is measured at a wavelength of 560 nm, The active oxygen scavenging rate was measured and the measurement method was as follows.
바이엘병에 0.05 M의 탄산나트륨(Na2CO3) 2.4 ㎖, 3 mM의 크산틴 용액 0.1 ㎖, 3 mM의 EDTA 용액 0.1 ㎖, BSA 용액 0.1 ㎖, 0.72 mM의 NBT 용액 0.1 ㎖를 가하고 여기에 시료용액을 각각 첨가한 후, 25℃에서 10분간 방치하였다. 방치 후, 크산틴옥시다제 용액 0.1 ㎖를 가하여 빠르게 교반한 다음, 25℃에서 20분간 배양 하였고, 여기에 6 mM의 염화구리(CuCl2) 용액 0.1 ㎖를 가하여 반응을 정지시키고 560 nm에서의 흡광도(St)를 측정하였다. 공시험은 시료용액 대신 증류수를 사용한 것으로, 상기와 동일한 방법으로 흡광도(Bt)를 측정하였다. 시료용액의 블랭크(Blank)는 크산틴옥시다제 용액 대신 증류수를 사용해 상기와 동일한 방법으로 흡광도(Bo)를 측정하였다. 2.4 ml of sodium carbonate (Na 2 CO 3 ), 0.1 ml of 3 mM xanthine solution, 0.1 ml of 3 mM EDTA solution, 0.1 ml of BSA solution and 0.1 ml of 0.72 mM NBT solution were added to Bayer's disease, Solution, respectively, and left at 25 캜 for 10 minutes. After incubation, 0.1 ml of xanthine oxidase solution was added, and the mixture was rapidly stirred. Then, the mixture was incubated at 25 ° C for 20 minutes, and then 0.1 ml of a 6 mM copper chloride (CuCl 2 ) solution was added to stop the reaction. (St). The blank test was performed using distilled water instead of the sample solution, and the absorbance (Bt) was measured in the same manner as described above. The blank of the sample solution was measured for absorbance (Bo) in the same manner as above using distilled water instead of xanthine oxidase solution.
측정 결과는 하기 수학식 1에 의하여 산출하였다.The measurement results were calculated by the following equation (1).
[수학식 1][Equation 1]
활성산소 소거율(%) = [1-(St-So)/(Bt-Bo)] × 100Active oxygen scavenging rate (%) = [1- (St-So) / (Bt-Bo)] 100
St : 시료용액의 효소 반응 후의 560 ㎚에서의 흡광도St: Absorbance at 560 nm after enzyme reaction of sample solution
Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560 ㎚에서의 흡광도Bt: Absorbance at 560 nm after enzyme reaction of blank test solution
So : 효소 무첨가 시료용액의 효소 반응 전의 560 ㎚에서의 흡광도So: absorbance at 560 nm before enzymatic reaction of enzyme solution-free sample solution
Bo : 효소 무첨가 공시험용액의 효소 반응 전의 560 ㎚에서의 흡광도Bo: Absorbance at 560 nm before enzymatic reaction of enzyme-free blank test solution
NBT법을 이용한 항산화 효과를 측정한 결과(표 1, 표 2), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 BHT와 같은 농도에서 보다 우수한 항산화효과를 발휘하는 것을 확인할 수 있었다.The results of the antioxidative effects of NBT method (Table 1 and Table 2) showed that the extracts of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium exerted superior antioxidative effects at the same concentration as BHT.
상기의 결과로부터 본 발명의 유효성분인 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 항산화효과를 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 우수한 항산화 효과를 알 수 있었다.
From the above results, it was possible to confirm the excellent antioxidative effect of the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom mycelium culture liquid, which are effective ingredients of the present invention.
실험예Experimental Example 2: 2: DPPHDPPH 법을 이용한 항산화 효과 측정Antioxidant effect measurement
본 실험예 2에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 항산화 수준을 확인하기 위해 항산화제로 잘 알려진 BHT를 비교샘플로 사용하였고, 항산화 측정은 DPPH법을 이용하였다.In Experimental Example 2, BHT, which is well known as an antioxidant, was used as a comparative sample in order to confirm the antioxidant level of the white manganic acid fruiting body extract obtained in Example 1 and the white manganese mushroom culture obtained in Example 3, The DPPH method was used for the measurement.
DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 자유라디칼 소거활성을 측정하는 방법으로, 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560 nm에서 자유라디칼 소거율을 측정하였으며, 측정방법은 하기와 같다. The DPPH method is a method of measuring free radical scavenging activity by reducing power using a free radical called DPPH (2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl free radical) The degree of decrease of the absorbance was compared with the absorbance of the blank test solution, and the free radical scavenging rate was measured at a wavelength of 560 nm. The measurement method is as follows.
0.25, 0.1, 0.05, 0.025중량% 농도의 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 준비한 후, 농도에 따른 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 96-웰 프레이트에 넣었다. 여기에 100 uM 메탄올용액으로 제조된 DPPH를 첨가하여 용액의 총 부피가 200 ㎕가 되도록 하였다. 이것을 37℃에서 30분간 방치한 후 560 nm에서 흡광도(St)를 측정하였다. 0.25, 0.1, 0.05 and 0.025% by weight of the extracts of white foxtail mushroom fruiting body and white foxtail mushroom mycelium were prepared, and then the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom body culture solution were respectively added to 96-well plates. To this was added DPPH prepared from 100 uM methanol solution so that the total volume of the solution became 200 μl. The absorbance (St) was measured at 560 nm after being left at 37 캜 for 30 minutes.
자유라디칼 소거활성(%)은 다음의 수학식 2로 산출하였다.The free radical scavenging activity (%) was calculated by the following equation (2).
[수학식 2]&Quot; (2) "
자유라디칼 소거활성(%)={100-(B/A)} × 100Free radical scavenging activity (%) = {100- (B / A)} 100
A: 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 배양액을 처리하지 않은 대조군 웰의 흡광도A: Absorbance of control wells not treated with white mushroom fruity body extract or white mushroom culture
B: 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 배양액을 처리한 실험군 웰의 흡광도B: Absorbance of experimental group wells treated with white foxtail mushroom fruit body extract or white foxtail mushroom mycelia
DPPH법을 이용하여 항산화 효과를 측정한 결과(표3, 표 4), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 BHT 보다 낮은 농도에서도 우수한 항산화 효과를 발휘하는 것을 확인할 수 있었다.The results of the antioxidative effects of DPPH assay (Table 3 and Table 4) show that the extracts of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium exert excellent antioxidative effects even at lower concentrations than BHT.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 우수한 항산화 효과를 추론할 수 있었다.
From the above results, it is possible to confirm the excellent antioxidative effect of the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom mycelium culture medium, and to deduce the excellent antioxidative effect of the present invention.
실험예Experimental Example 3: 세포 내 활성산소 소거 효과 측정 3: Measurement of reactive oxygen scavenging effect in cells
본 실험예 3에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 자외선에 의해 세포 내에서 생성되는 활성산소의 소거 효과를 측정하기 위해 EGCG를 비교샘플로 사용하였고, 형광물질을 이용하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.In Experimental Example 3, EGCG was used to measure the scavenging effect of intracellular reactive oxygen species produced by the ultraviolet rays of the white foxtail mushroom fruit body extract obtained in Example 1 and the white foxtail mushroom culture obtained in Example 3 As a comparative sample, the following experiment was performed using a fluorescent substance.
본 실험예 3에서 사용한 세포주는 독일 암연구센터의 퓌세니그 박사(Dr. Fusenig)로부터 분양받은 인간 각질세포 HaCaT 세포주(Human keratinocytes HaCaT cell line)로서 이를 형광측정용 96-웰 블랙 플레이트(well black plate)에 웰당 2.0 × 104개로 분주하고 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)이 첨가된 DMEM(Dulbeccos Modification of Eagles Medium, FBS 10%, Gibco, USA)배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 1일간 배양한 후, 0.02, 0.01, 0.005중량% 농도로 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 처리하였다.The cell line used in Experimental Example 3 was a human keratinocyte HaCaT cell line (human keratinocytes HaCaT cell line) distributed from Dr. Fusenig of the German Cancer Research Center, which was cultured in a 96-well black plate for fluorescence measurement plate) in per well 2.0 × 10 4 pieces busy and penicillin / streptomycin (10% penicillin / streptomycin) are added to the DMEM (Dulbeccos Modification of Eagles medium, FBS, 37 ℃ using the Gibco, USA) medium, 5% CO 2 After culturing for one day under the conditions, the extracts of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium were treated at concentrations of 0.02, 0.01 and 0.005 wt%, respectively.
시험시료를 넣고 24시간 배양한 후, HCSS(HEPES-buffered control salt solution)로 세척하여 남아있는 배지를 제거하고 HCSS에 20 μM로 준비된 DCFH-DA (2',7'- dichlorodihydro-fluorescein diacetate, Molecular Probes, USA)를 100 ㎕ 가하고 37℃, 5% CO2 조건에서 20분간 배양한 후, HCSS로 세척하였다. 이후 농도별로 처리된 HCSS를 100 ㎕ 가한 후, 초기에 활성산소로 산화된 DCF(dichlorofluorescein)의 형광도를 형광플레이트리더(Ex;485 nm, Em;530 nm)로 측정하였다. 이후 UVB(20 mJ/cm2)를 조사하고 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 처리한 후, 형광플레이트 리더(Ex;485 nm, Em;530nm)를 사용하여 형광도를 측정하였다. The test samples were incubated for 24 hours and then washed with HCSS (HEPES-buffered control salt solution) to remove the remaining medium. DCFH-DA (2 ', 7'-dichlorodihydro-fluorescein diacetate, Probes, USA) was added, and the mixture was incubated at 37 ° C in 5% CO 2 Lt; 0 > C for 20 min, and then washed with HCSS. After the addition of 100 μl of the treated HCSS, the fluorescence of DCF (dichlorofluorescein) initially oxidized to active oxygen was measured with a fluorescent plate reader (Ex: 485 nm, Em: 530 nm). The fluorescence intensity was measured using a fluorescent plate reader (Ex (485 nm, Em: 530 nm) after irradiating UVB (20 mJ / cm 2 ) and treating the culture of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium, respectively .
활성산소 소거 효과를 측정한 결과(표 5, 표 6), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 EGCG와 동일한 농도에서 EGCG 보다 높은 활성산소 소거율을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.As a result of the measurement of the active oxygen scavenging effect (Table 5, Table 6), it was confirmed that both the white manganic acid fruiting body extract and the white manganese mushroom mycelial culture liquid exhibited higher ROS than the EGCG at the same concentration as EGCG.
상기의 결과로부터 본 발명의 유효성분인 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 활성산소 소거효과를 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 우수한 활성산소 소거 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it can be concluded that the effective component of the present invention, white foxtail mushroom fruit body extract and white foxtail mushroom mycelium It was confirmed that the active oxygen scavenging effect of the culture broth was excellent and that the excellent active oxygen scavenging effect of the present invention was confirmed.
실험예Experimental Example 4: 4: 금속단백질분해효소Metalloproteinase (( MMPMMP -1) 활성 저해율 측정(-1) Activity inhibition rate measurement ( inin vitrovitro ))
본 실험예 4에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 in vitro에서 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해율을 측정하기 위해 녹차추출물을 비교 샘플로 사용하였고, 형광분석법을 이용하였다.This experiment example 4 of the mantle white mushroom fruit body extract and a white mantle mushroom mycelium culture obtained in Example 3 obtained in Example 1 in Green tea extract was used as a comparative sample and fluorescence assay was used to measure inhibition rate of metal protease (MMP-1) activity in vitro .
실험에 사용한 기질은 형광물질이 표지된 DQ-Collagen을 사용하였고, 효소는 Molecular probe사(Eugene, OR, USA)에서 시판중인 콜라게나제(collagenase)를 사용하였으며, 반응완충액(0.5 M Tris-HCl, 1.5 M NaCl, 50 mM CaCl2, 2 mM sodium azide, pH 7.6)은 10배 희석 후 사용하였다. 반응완충액 100 ㎕에 0.25 ㎎/㎖로 반응완충액에 용해한 DQ collagen 20 ㎕와 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액(0.02, 0.01, 0.005중량%) 40 ㎕를 각각 첨가하고 0.5 unit으로 희석한 콜라게나제(collagenase) 40 ㎕를 첨가하였다. 암소, 실온에서 20분 경과 후, 형광 분광광도계(Perkin Elmer, UK)를 이용하여 흡수파장 495 nm, 방출파장 515 nm로 형광값을 측정하였다. 대조군은 효소액 대신 반응완충액을 효소와 동량 첨가한 후, 형광값을 측정하였으며 시료 자체의 형광값도 측정하여 효소활성 계산시 이용하였다.A commercially available collagenase was used in the Molecular probe (Eugene, OR, USA) and the reaction buffer (0.5 M Tris-HCl , 1.5 M NaCl, 50 mM CaCl 2 , 2 mM sodium azide, pH 7.6) was used after 10-fold dilution. 20 μl of DQ collagen dissolved in the reaction buffer at a concentration of 0.25 mg / ml was added to each 100 μl of the reaction buffer, and 40 μl of the white mushroom fruiting body extract and white mushroom mycelium culture solution (0.02, 0.01, 0.005% by weight) 40 [mu] l of collagenase was added. After 20 minutes at room temperature, the cow was measured for fluorescence with an absorption wavelength of 495 nm and an emission wavelength of 515 nm using a fluorescence spectrophotometer (Perkin Elmer, UK). In the control group, fluorescence value was measured after addition of enzyme buffer in the same amount as the enzyme buffer, and the fluorescence value of the sample itself was also measured to calculate the enzyme activity.
in vitro에서 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해율을 측정한 결과(표 7, 표 8), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 녹차추출물에 비해 낮은 농도에서 금속단백질분해효소(MMP-1)의 활성을 효과적으로 저해하는 것을 확인할 수 있었다. in (MMP-1) activity in vitro (Table 7, Table 8). The results showed that both the extracts of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium produced metal proteolytic enzymes (MMP-1) -1) was inhibited effectively.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 금속단백질분해효소(MMP-1) 활성 저해효과가 우수하다는 사실을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물은 금속단백질분해효소를 효과적으로 저해함으로써 피부의 탄력 저하 및 주름 형성을 예방할 수 있음을 알 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the effect of inhibiting the metalloproteinase (MMP-1) activity of the white mushroom fruit body extract and the white mushroom mycelium culture medium was excellent, and based on this, the skin external- It was found that skin elasticity and wrinkle formation can be prevented by effectively inhibiting the enzyme.
실험예Experimental Example 5: 자외선 조사 후 5: After UV irradiation 금속단백질분해효소Metalloproteinase (( MMPMMP -1) 발현억제 정도 측정-1) Measurement of inhibition of expression
본 실험예 5에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 자외선 조사 후 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현억제 정도를 측정하기 위해 레티놀을 비교샘플로 사용하였다. In Experimental Example 5, in order to measure the degree of inhibition of metalloproteinase (MMP-1) expression after ultraviolet irradiation of the white foxtail mushroom fruit extract obtained in Example 1 and the white foxtail mushroom culture obtained in Example 3 Retinol was used as a comparative sample.
UV 조사 및 시료 첨가(흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 배양액, 레티놀) 후, 금속단백질분해효소(MMP-1) 농도를 측정하기 위해서 효소면역 시험법(ELISA)을 수행하였다.Enzyme immunoassay (ELISA) was performed to measure the concentration of metalloproteinase (MMP-1) after UV irradiation and sample addition (white mushroom fruiting body extract or white mushroom mycelium culture medium, retinol).
UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 6.3 J/㎠의 에너지로 조사하였고, 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였고, UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사한 후, 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양한 다음, 배지를 회수하여 96-웰 플레이트에 코팅하였다. 일차항체{MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체}를 처리하고 37℃에서 60분 반응시켰다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1 mg/㎖ ρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였다.UVA was irradiated to human dermal fibroblasts at an energy of 6.3 J / cm 2 using a UV chamber, and ultraviolet irradiation dose and incubation time were measured by preliminary experiments to determine the maximum amount of metalloproteinase (MMP-1) Respectively. The negative control was wrapped in silver foil and kept in the UVA environment for the same time, and the UVA emission was measured using a UV radiometer. The cells while UVA was irradiated were irradiated with UVA, and then cultured for 24 hours in a medium containing the sample. Then, the medium was recovered and coated on a 96-well plate. The primary antibody {MMP-1 (Ab-5) monoclonal antibody} was treated and reacted at 37 DEG C for 60 minutes. After incubating for 60 minutes with a secondary antibody, anti mouse IgG (alkaline phosphatase conjugated), the alkaline phosphatase substrate solution (1 mg / ml ρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer) was reacted at room temperature for 30 minutes, Absorbance was measured at 405 nm with a plate reader. As a control group, a sample to which no sample was added was used.
자외선 조사 후 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현억제 정도를 측정한 결과(표 9, 표 10), 시료를 처리하지 않은 대조군에 반해 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 우수한 억제율을 보였는데, 이는 비교샘플로 사용한 레티놀의 억제율에 비해서도 상당히 우수한 결과였다.The inhibition rate of metalloproteinase (MMP-1) expression after UV irradiation was measured (Table 9, Table 10). In contrast to the untreated control group, both the white mushroom fruiting body extract and the white mushroom mycelial culture showed excellent inhibition rate , Which was significantly better than the inhibition rate of retinol used as a comparative sample.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 추추물의 금속단백질분해효소(MMP-1) 발현 억제효과가 우수하다는 사실을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물은 금속단백질분해효소의 발현을 효과적으로 억제함으로써 피부의 탄력 저하 및 주름 형성을 예방할 수 있음을 알 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the effect of inhibiting the metalloproteinase (MMP-1) expression inhibition of the extracts of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium was excellent, It was found that the skin elasticity and wrinkle formation can be prevented by effectively inhibiting the expression of the degrading enzyme.
실험예Experimental Example 6: 타입 1 프로콜라겐 생합성 촉진효과 측정 6: Measuring the promoting effect of type 1 procollagen biosynthesis
본 실험예 6에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 피부기질 성분인 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 확인하기 위하여 TGF-β를 양성대조군으로 사용하였고, 프로콜라겐 분석(procollagen assay)을 하기와 같이 수행하였다. In Experimental Example 6, in order to confirm the effect of promoting the biosynthesis of type 1 procollagen, which is a skin matrix component, in the culture of the white mushroom fruiting body obtained in Example 1 and the white mushroom mycelial body obtained in Example 3, -β was used as a positive control, and procollagen assay was performed as follows.
신생아의 표피조직에서 분리한 사람진피섬유아세포(human dermal fibroblast)는 Modern Tissue Technology(MTT, Korea)로부터 분양받아 DMEM/F-12(3:1) 배지에 10% 우태아혈청(FBS)을 첨가하여 1×104 cell/cm2농도로 배양하였다. 70-80% 정도 자라면 1:3의 비율로 분주하여 계대 배양하였고, 3~4차 계대 배양된 세포를 실험에 이용하였다.Human dermal fibroblasts isolated from the epidermal tissue of newborns were purchased from Modern Tissue Technology (MTT, Korea) and supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) in DMEM / F-12 (3: And cultured at a concentration of 1 × 10 4 cells / cm 2 . When 70-80% of the cells were grown, the cells were subcultured at a ratio of 1: 3, and cells in the third to fourth subculture were used for the experiment.
프로콜라겐의 양을 측정하는 실험을 위해서 섬유아세포를 48-웰 플레이트(well plate)에 90% 이상 배양한 후, 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 0.02%, 0.01%, 0.005중량% 농도로 각각 가하고, 24시간이 지난 후, 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐타입-1C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit, MK101, Takara, Japan)를 사용하여 측정하였다.For the measurement of the amount of procollagen, the fibroblasts were cultured in a 48-well plate at a concentration of 90% or more, and the concentrations of 0.02%, 0.01%, and 0.005% by weight of the culture solution of white foxtail mushroom fruiting body and white foxtail mushroom mycelium . After 24 hours, the amount of procollagen liberated in the medium was measured using a procollagen type-1 C-peptide EIA kit (MK101, Takara, Japan) .
프로콜라겐 생합성 촉진효과를 측정한 결과(표 11, 표 12), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액은 세포신호전달 물질 TGF-β와 유사한 효과를 나타내었다.The results of measuring the promoting effect of procollagen biosynthesis (Table 11, Table 12) showed that the culture of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium showed similar effects to the cell signaling substance TGF-β.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 프로콜라겐 생합성 촉진효과를 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명은 피부노화 개선효과가 뛰어나다는 것을 알 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the extracts of white foxtail mushroom fruit body and white foxtail mushroom mycelium promoted excellent procoagulant biosynthesis, and it was found that the present invention has excellent skin aging improving effect.
실험예Experimental Example 7: 7: 엘라스타제Elastase 활성 억제효과 측정 Measurement of inhibition of activity
본 실험예 7에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 엘라스틴 생성 촉진효과를 측정하기 위해, 사람으로부터 직접 채취하거나 상업적으로 구입한 사람의 섬유 아세포에 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 처리하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.In Experimental Example 7, in order to measure the effect of accelerating the production of elastin by the fruiting body extract obtained in Example 1 and the fruiting body of the fruiting body obtained in Example 3, The following experiment was carried out by treating each of the white foxtail mushroom fruiting body extract and the white foxtail mushroom mycelial body with fibroblasts.
먼저, 사람의 섬유 아세포를 배양용 플라스크에 넣고 약 70~80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이후, 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 1일간 각각 처리한 후 세포배양액을 채취하여 상업적으로 이용 가능한 엘라스틴 측정기구를 이용하여 엘라스틴 생성 정도를 측정하였다[Bieth J: Biochem med ., 11, 350-357(1974), Schwartz DE: J. Invest Dermatol., 86, 63-68(1986)]. 즉, 엘라스타제의 기질인 Suc-(Ala) 3 NA의 NA가 분해되면서 생기는 색의 변화를 흡광도를 이용하여, 엘라스타제의 활성도를 측정하였다. 이때 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 처리하지 않은 군을 대조군으로 사용하였다.First, human fibroblasts were placed in a culture flask and cultured until they were about 70-80% grown. Thereafter, the culture of white foxtail mushroom fruiting body and white foxtail mushroom mycelium was treated for 1 day, and the cell culture fluid was collected and the degree of elastin production was measured using a commercially available elastin measuring apparatus [Bieth J: Biochem med . , 11, 350-357 (1974), Schwartz DE: J. Invest Dermatol ., 86, 63-68 (1986)]. That is, the activity of elastase was measured using the absorbance of a color change caused by the decomposition of NA of Suc- (Ala) 3 NA which is a substrate of elastase. At this time, the control group was a group that did not treat the white mushroom fruiting body extract and white mushroom mycelium culture.
엘라스타제 활성 억제율을 측정한 결과(표 13, 표 14), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 농도의존적으로 엘라스타제의 활성 억제율이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.As a result of measuring the inhibition rate of the elastase activity (Table 13, Table 14), it was confirmed that the inhibitory rate of the elastase activity was increased in a concentration-dependent manner in both the white mushroom fruiting body extract and the white mushroom mycelium culture solution.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 엘라스타제 활성 억제효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 노화 방지 및 탄력 증진 효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was possible to confirm the superior inhibitory effect on the elastase activity of the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom mycelium culture medium, and it was confirmed that the skin external application composition of the present invention has excellent anti-aging effect and elasticity enhancement effect.
실험예Experimental Example 8: 8: 티로시나제Tyrosinase 활성 억제효과 측정 Measurement of inhibition of activity
본 실험예 8에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 티로시나제 활성 저해효과를 확인하기 위해 미백제로 잘 알려진 알부틴을 비교샘플로 사용하였다. In Experimental Example 8, arbutin, which is well known as a whitening agent, was used as a comparative sample in order to confirm the inhibitory effect of tyrosinase activity of the white mushroom fruit body extract obtained in Example 1 and the white mushroom mycelial culture obtained in Example 3 .
티로시나제는 생체 내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되도록 하는 효소이다. Tyrosinase is an enzyme that stimulates the oxidation of tyrosine in vivo to produce melanin.
티로시나제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 Sigma 사에서 구입하여 사용하였다. 기질인 L-티로신은 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 용해하여 0.1 ㎎/㎖ 용액으로 만들고, 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액은 각각 0.05 M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 적당한 농도로 조절하여 용해한 후 사용하였다. L-티로신 용액 0.5 ㎖를 시험관에 넣고 여기에 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 시료액 0.5 ㎖를 각각 가하고 37℃ 항온기에서 10분간 방치하였다. 그 후, 200 unit/㎖ 티로시나제 0.5 ㎖를 첨가하고 37℃에서 10분간 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음 위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시킨 후, 분광광도계를 파장 475 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 대신 완충용액 0.5 ㎖를 넣은 것을 사용하였다.Tyrosinase was isolated and purified from mushrooms and purchased from Sigma. L-tyrosine, a substrate, was dissolved in 0.05 M sodium phosphate buffer solution (pH 6.8) to make a 0.1 mg / ml solution. The culture solution of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium was 0.05 M sodium phosphate buffer solution (pH 6.8) And then the solution was used. 0.5 ml of L-tyrosine solution was added to the test tube, and 0.5 ml of the white foxtail mushroom fruiting body extract and white foxtail mushroom culture liquid was added thereto, and the mixture was allowed to stand at 37 ° C for 10 minutes. Thereafter, 0.5 ml of 200 units / ml tyrosinase was added, and the mixture was reacted at 37 占 폚 for 10 minutes. The reaction tube was placed on ice to quench the reaction, and the absorbance at 475 nm was measured by a spectrophotometer. As a control, 0.5 ml of the buffer solution was used instead of the white mushroom fruity body extract and the white mushroom mycelium culture solution.
상기 각 시료의 티로시나아제 활성 저해율은 수학식 3에 따라 계산하였다.The inhibition rate of tyrosinase activity of each of the above samples was calculated according to Equation (3).
[수학식 3]&Quot; (3) "
티로시나제 활성 저해율(%) = 100 - [(비교군흡광도/대조군흡광도)] × 100Tyrosinase activity inhibition rate (%) = 100 - [(comparative group absorbance / control group absorbance)] x 100
티로시나제의 활성 저해효과를 측정한 결과(표 15, 표 16), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액은 알부틴과 유사한 티로시나제 활성 저해율을 나타내었다. The inhibitory effect of tyrosinase was measured (Table 15, Table 16), and the culture of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium showed inhibition rate of tyrosinase activity similar to arbutin.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 티로시나제 활성 저해효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 미백효과를 알 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the extract of white mushroom fruiting body and the culture of white mushroom mycelium inhibited the excellent tyrosinase activity, and the excellent whitening effect of the composition for external application for skin of the present invention was confirmed.
실험예Experimental Example 9: B16F1 멜라닌 세포를 이용한 멜라닌 합성 억제효과 측정 9: Measurement of melanin synthesis inhibitory effect using B16F1 melanocytes
본 실험예 9에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 멜라닌 합성 억제효과를 확인하기 위해 미백제로 알려진 알부틴을 비교샘플로 사용하였고, B16F1 멜라닌 세포를 이용하였다.In Experimental Example 9, arbutin, which is known as a whitening agent, was used as a comparative sample in order to confirm the melanin synthesis inhibitory effect of the white mushroom fruiting body extract obtained in Example 1 and the white mushroom mycelial body obtained in Example 3, B16F1 melanocytes were used.
본 실험예 9에서 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. The B16F1 melanocyte used in Experimental Example 9 is a cell line derived from a mouse and is a cell that secretes a melanin pigment called melanin.
B16F1 멜라닌 세포의 멜라닌 합성 억제효과 측정은 다음과 같이 수행하였다. B16F1 멜라닌 세포를 6-웰 플레이트에 각 웰당 2×106 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후, 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후, 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(R Lotan and D Lotan, Cancer Res, 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후, 균질화 완충액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ㎖를 첨가하고, 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후, 마이크로 플레이트 판독기로 405 ㎚에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음, 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. The inhibitory effect of B16F1 melanin on melanin synthesis was measured as follows. B16F1 melanocytes were plated at a concentration of 2 x 10 6 per well in a 6-well plate, and the cells were adhered, treated at a concentration not causing toxicity, and cultured for 72 hours. After culturing for 72 hours, cells were detached with trypsin-EDTA, the number of cells was measured, and the cells were recovered by centrifugation. Quantification of intracellular melanin was carried out with a slight modification of the method of Rotan (R Lotan and D Lotan, Cancer Res, 40: 3345-3350, 1980). Cell pellets were washed once with PBS and then 1 ml of homogenization buffer (50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. After centrifugation (3,000 rpm, 10 min), 1N NaOH (10% DMSO) was added to the cell filtrate to dissolve the extracted melanin, and the absorbance of melanin was measured at 405 nm using a microplate reader. Melanin was quantified The percent inhibition of melanin formation in the sample was measured.
B16F1 멜라닌 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 수학식 4에 의하여 계산하였다.The inhibition rate (%) of melanin formation of B16F1 melanocytes was calculated by the following equation (4).
[수학식 4]&Quot; (4) "
멜라닌 합성 저해율(%) = [(A-B)/A] × 100Melanin synthesis inhibition rate (%) = [(A-B) / A] 100
A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Amount of melanin in wells to which no sample was added
B: 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양B: Amount of melanin in the well to which the sample was added
B16F1 멜라닌 세포를 이용한 멜라닌 합성 억제효과를 측정한 결과(표 17, 표 18), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액은 알부틴과 유사한 멜라닌 합성 저해율을 나타내었다.The inhibitory effect of melanin on B16F1 melanocytes was measured (Table 17, Table 18), and the culture of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium showed similar inhibition rates of arbutin-like melanin synthesis.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 멜라닌 합성 저해율을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 미백효과를 알 수 있었다.
From the above results, it was possible to confirm the excellent inhibitory rate of melanin synthesis of the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom mycelium culture medium, and the excellent whitening effect of the composition for external application for skin of the present invention was confirmed based on this.
실험예Experimental Example 10: 염증유발관련 효소( 10: Inflammation-inducing enzymes hyaluronidasehyaluronidase ) 활성 억제효과 측정) Measurement of inhibitory effect
본 실험예 10에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 항염증 효과를 측정하기 위해 컴프리 추출물, 시소 추출물, 유용성 감초 추출물을 양성대조군으로 사용하였고, 염증유발효소인 히아루로니디아제(hyaluronidase) 활성 억제효과를 측정하였다.In Experimental Example 10, to determine the anti-inflammatory effect of the white mushroom fruiting body extract obtained in Example 1 and the white mushroom mycelial body obtained in Example 3, the extracts of comfrey, seaweed extract and soluble licorice extract were used as positive control And the inhibitory effect of hyaluronidase activity, which is an inflammation inducing enzyme, was measured.
히아루로니디아제(hyaluronidase)는 히아루론산을 가수분해하는 효소로 염증을 유발하는 효소이다.Hyaluronidase is an enzyme that hydrolyzes hyaluronic acid and causes inflammation.
본 실험예에서는 히아루로니디아제(hyaluronidase)의 활성을 억제하여 항염증효과를 측정하는 방법(Kakegawa Y: Japanese J. of Inflammation, 4, 437-438, 1984)을 응용해 항염증 효과를 판정하였다.In this experimental example, anti-inflammatory effect was evaluated by the method of inhibiting the activity of hyaluronidase and measuring the anti-inflammatory effect (Kakegawa Y: Japanese J. of Inflammation, 4, 437-438, 1984) .
시료 100 ㎕와 히아루로니디아제 용액(type Ⅳ-S, Sigma, 400U/㎖) 50 ㎕를 넣고 37℃에서 20분간 반응시킨 후, 효소활성화용액(compound 48/80 CaCl2ㆍ2H2O, Sigma, 0.1 ㎎/㎖)을 100 ㎕ 첨가하고 다시 37℃에서 20분간 반응시켰다. 히아루론산(hyaluronic acid) 용액(0.4 ㎎/㎖)을 250 ㎕ 넣고 37℃에서 40분간 반응시키고, 0.4N NaOH 100 ㎕를 넣어 반응을 종결시켰다. 포타슘보레이트 용액을 100 ㎕ 첨가하여 95℃에서 3분간 반응시키고 냉각시킨 다음 ρ-디메틸아미노벤즈알데히드 용액을 3 ㎖ 넣고 다시 20분간 37℃에서 반응시킨 후 발색시켰다. 585 ㎚에서 흡광도를 측정하여 히아루로니디아제 활성 저해율을 측정하였다. Sample 100 ㎕ and hyaluronic ruro nidiah agent solution (type Ⅳ-S, Sigma, 400U / ㎖) was introduced into a 50 ㎕ at 37 ℃ 20 minutes of reaction, the enzyme solution active (compound 48/80 CaCl 2 and 2H 2 O, Sigma , 0.1 mg / ml) was added and reacted at 37 캜 for 20 minutes. 250 μl of hyaluronic acid solution (0.4 mg / ml) was added, reacted at 37 ° C for 40 minutes, and 100 μl of 0.4 N NaOH was added to terminate the reaction. 100 μl of potassium borate solution was added, reacted at 95 ° C for 3 minutes, cooled, added with 3 ml of? -Dimethylaminobenzaldehyde solution, reacted at 37 ° C for 20 minutes, and developed. The absorbance was measured at 585 nm to measure the inhibition rate of hyparonidase activity.
히아루로니디아제의 활성 저해율(%)은 수학식 5에 의하여 계산하였으며, IC50 값은 히아루로니디아제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.The activity inhibition (%) of the hyaruronidase is calculated by the equation (5), and the IC 50 value is the concentration of the substance that inhibits the enzyme activity of the hyaruronidase by 50%.
[수학식 5]&Quot; (5) "
히아루로니디아제의 활성 저해율(%) = [(A-B)/A] × 100(%) = [(A-B) / A] x 100
A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소활성A: Enzyme activity of well without addition of sample
B: 시료를 첨가한 웰의 효소 활성B: Enzyme activity of the well to which the sample was added
히아루로니디아제(hyaluronidase)의 활성 저해효과를 측정한 결과(표 19, 표 20), 흰망태버섯 자실체 추출물의 IC50값과 흰망태버섯 균사체 배양액의 IC5은 항염증제로 잘 알려진 컴프리 추출물, 시소 추출물 및 유용성 감초 추출물과 유사하거나 뛰어난 효과를 나타내었다.IC 50 values of white mushroom fruiting body extract and IC 5 of white mushroom mycelium culture solution were measured by the results of the inhibition of hyaluronidase activity (Table 19, Table 20) The extracts showed similar or superior effects to the licorice extract.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 항염증 효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 항염증 효과를 알 수 있었다.
From the above results, it was possible to confirm the excellent anti-inflammatory effect of the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom mycelium culture medium, and the excellent anti-inflammatory effect of the skin external composition of the present invention was confirmed.
실험예Experimental Example 11: 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과 측정 11: Measurement of mitigation effect of cytotoxicity by ultraviolet irradiation
본 실험예 11에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 자외선 조사에 의한 세포독성의 완화효과를 측정하였다. In Experimental Example 11, mitochondrial cytotoxicity was measured by ultraviolet irradiation of the white foxtail mushroom fruit extract obtained in Example 1 and the white foxtail mushroom culture obtained in Example 3.
섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 1x105개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된 것) 1 ㎖를 첨가하였다. 여기에 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지 500 ㎕와 MTT용액(2.5 ㎎/㎖) 60 ㎕를 넣은 후, 2시간 동안 37℃ CO2 배양기에서 배양하였다. 배양 후, 배지를 제거하고 이소프로판올-HCl(0.04 N)을 500 ㎕씩 넣어주었다. 그리고 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 상등액 100 ㎕씩을 96-웰 시험 플레이트에 옮긴 후, 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 565 nm에서 흡광도를 측정하였다. Fibroblasts were placed in 24-well test plates at 1 × 10 5 cells and adhered for 24 hours. Each well was washed once with PBS and 500 占 퐇 of PBS was added to each well. After irradiating the fibroblasts with 10 mJ / cm 2 of ultraviolet light using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UVB 15W, Sankyo Dennki, Japan), PBS was removed and the cell culture medium (DMEM supplemented with 10% FBS 1 ml) was added. The white foxtail mushroom fruiting body and white foxtail mushroom culture were treated for 24 hours. After 24 hours, the medium was removed, and 500 μl of the cell culture medium and 60 μl of MTT solution (2.5 mg / ml) were added to each well, followed by culturing in a 37 ° C. CO 2 incubator for 2 hours. After the culture, the medium was removed and 500 μl of isopropanol-HCl (0.04 N) was added. After shaking for 5 minutes, the cells were lysed and 100 μl of the supernatant was transferred to a 96-well test plate, and the absorbance was measured at 565 nm using a microplate reader.
수학식 6에 의해 세포생존율(%)을 측정하고 자외선에 의한 세포독성 완화율은 수학식 7에 의하여 계산하였다.The cell viability (%) was measured by the equation (6) and the cytotoxic relaxation rate by ultraviolet was calculated by the formula (7).
[수학식 6]&Quot; (6) "
세포생존율(%) = [(St-Bo)/(Bt-Bo)] × 100Cell survival rate (%) = [(St-Bo) / (Bt-Bo)] 100
Bo : 세포배양배지만을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도Bo: Absorbance at 565 nm of wells reacting with cell culture medium
Bt : 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도Bt: Absorbance at 565 nm of a well that underwent chromogenic reaction in a sample not treated with the sample
St : 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도St: absorbance at 565 nm of wells treated with the sample
[수학식 7]&Quot; (7) "
자외선에 의한 세포독성 완화율(%) = [1-(St-Bo)/(Bt-Bo)] × 100(%) = [1- (St-Bo) / (Bt-Bo)] x 100
Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율Bo: Cell survival rate of wells not irradiated with ultraviolet light and not treated with sample
Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포 생존율Bt: Cell viability of wells irradiated with ultraviolet light and not treated with the sample
St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포 생존율St: Cell viability of well treated with ultraviolet light and treated with sample
흰망태버섯 자실체 추출물
White mushroom fruiting body extract
흰망태버섯 균사체 배양액
White mushroom mycelium culture
자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과를 측정한 결과(표 21, 표 22), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액은 자외선에 의한 세포 독성을 우수하게 완화하여 자외선에 의한 세포독성을 효과적으로 방어함을 알 수 있었다. The cytotoxic relaxation effect by ultraviolet irradiation was measured (Table 21, Table 22), and the culture of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelial body excellently mitigates cytotoxicity by ultraviolet rays to effectively protect against cytotoxicity by ultraviolet rays .
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과가 우수함을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 자외선에 의한 피부자극 완화효과를 알 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the cytotoxic relaxation effect of the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom culture solution was excellent by UV irradiation. Based on this, it was confirmed that the skin irritation mitigation effect of ultraviolet I could.
실험예Experimental Example 12: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과 측정 12: Measurement of inhibitory effect of inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation
본 실험예 12는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 항염증효과를 측정하기 위해 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 정도를 측정하였다. In Experimental Example 12, in order to measure the anti-inflammatory effect of the white foxtail mushroom fruit body extract obtained in Example 1 and the white foxtail mushroom culture obtained in Example 3, the inhibitory effect of inflammatory cytokines expressed by ultraviolet irradiation Were measured.
사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5X104개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다. 여기에 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 처리한 후, 5시간 동안 배양하였다. 배양한 후, 배양 상층액을 150 ㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로서 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였으며, IL-1α의 생성율은 수학식 8에 의해 계산하였다.Fibroblasts isolated from human epidermal tissue were placed in a 24-well test plate in an amount of 5 × 10 4 and adhered for 24 hours. Each well was washed once with PBS and 500 占 퐇 of PBS was added to each well. The fibroblasts were irradiated with ultraviolet rays at 10 mJ / cm 2 using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UVB 15W, Sankyo Dennki Co., Japan), and PBS was removed. Cell culture medium ≪ / RTI > medium). The white foxtail mushroom fruiting body extract and white foxtail mushroom mycelial culture were treated respectively and then cultured for 5 hours. After culturing, 150 μl of the culture supernatant was taken to quantitate IL-1α, and thus the inhibitory effect of the culture of white foxtail mushroom fruit body extract and white foxtail mushroom mycelium on inflammatory cytokine expression was evaluated. The amount of IL-1.alpha. Was quantitated using Enzyme-linked Immunosorbent Assay, and the production rate of IL-1.alpha. Was calculated by Equation (8).
[수학식 8]&Quot; (8) "
염증성 사이토카인 발현 억제율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕× 100Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%) = [1- (St-Bo) / (Bt-Bo)] 100
Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량Bo: IL-1? Production in wells without UV irradiation
Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량Bt: IL-1? Production in wells irradiated with ultraviolet light and not treated with the sample
St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α 생성량St: IL-1α production in wells irradiated with ultraviolet light and treated with the sample
흰망태버섯 자실체 추출물
White mushroom fruiting body extract
흰망태버섯 균사체 배양액
White mushroom mycelium culture
자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 측정한 결과(표 23, 표 24), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액은 자외선에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서 효과적으로 방어함을 확인할 수 있었다. 상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과가 우수함을 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 항염증 효과를 알 수 있었다.
As a result of measuring the inhibitory effect of inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation (Table 23, Table 24), it was confirmed that the culture of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium effectively inhibited the development of inflammation caused by ultraviolet light at low concentrations . From the above results, it was confirmed that the effect of inhibiting the expression of inflammatory cytokines by ultraviolet irradiation in the culture of white foxtail mushroom fruit body extract and white foxtail mushroom mycelium was excellent, and the anti-inflammatory effect of the composition for external application for skin of the present invention was found based on this .
실험예Experimental Example 13: 자외선조사에 의한 프로스타글란딘 생합성 억제효과 측정 13: Measurement of inhibitory effect of prostaglandin biosynthesis by ultraviolet irradiation
본 실험예 13에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 프로스타글란딘(prostaglandin E2;이하, PGE2로 칭함) 생합성 억제효과를 평가하기 위하여 사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포(Keratinocyte)를 24-웰 시험 플레이트에 5x104개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. FBS가 포함되지 않은 배지로 교체하고, 18시간 동안 배양한 다음, 상기의 각질형성세포에 최종농도가 50 uM이 되도록 아스피린(aspirin)을 처리하여 각질형성세포에 존재하는 프로스타글란딘 생합성 효소(prostaglandin E2 synthetase, 또는 cyclooxygenase, 이하 COX)의 활성을 제거하였다. 아스피린 처리 2시간 후에 각질형성세포가 들어있는 각 웰을 PBS로 2회 세척하고 각 웰에 100 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 각질형성세포에 UVB 램프(Model : F15T8, UV B 15 W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 30 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 각 웰에 각질형성세포 배양액(keratinocyte growth media, Clonetics, Biowhittacker사, MD, USA) 250 ㎕를 첨가하였다. 여기에 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 처리한 후 16시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 적당량 취하여 16시간 동안 생합성된 PGE2(prostaglandin E2)를 정량함으로서 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 프로스타글란딘 억제효과를 판단하였다. PGE2의 양은 효소면역분석법(enzyme immunoassay)을 이용하여 정량화하였다.In Experimental Example 13, the inhibitory effect of the prostaglandin E 2 (hereinafter referred to as PGE 2 ) biosynthesis inhibitory effect of the white rot fungus fruit body extract obtained in Example 1 and the white rot fungus body mycelial fluid obtained in Example 3 was evaluated Keratinocytes isolated from human epidermal tissue were placed in a 24-well test plate in an amount of 5 × 10 4 and adhered for 24 hours. After replacing the medium with FBS-free medium for 18 hours, the keratinocytes were treated with aspirin to a final concentration of 50 uM to remove prostaglandin biosynthesis enzyme (prostaglandin E 2 synthetase, or cyclooxygenase, hereinafter referred to as COX). Two hours after aspirin treatment, each well containing keratinocytes was washed twice with PBS, and 100 占 퐇 of PBS was added to each well. The keratinocyte was irradiated with ultraviolet rays of 30 mJ / cm 2 using a UVB lamp (Model: F15T8, UVB 15 W, Sankyo Dennki, Japan), and PBS was removed. Keratocyte growth media Clonetics, Biowhittacker, MD, USA). The white foxtail mushroom fruit body extract and white foxtail mushroom mycelial culture were treated and cultured for 16 hours. The prostaglandin inhibitory effect of the white mushroom fruiting body extract and white mushroom mycelial culture solution was determined by quantifying the biosynthesized PGE 2 (prostaglandin E 2 ) by taking an appropriate amount of the culture supernatant for 16 hours. The amount of PGE 2 was quantitated using enzyme immunoassay.
자외선조사에 의한 프로스타글란딘 생합성 억제효과를 측정한 결과(표 25, 표 26), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 자외선에 의한 프로스타글란딘의 생성을 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다. 특히 생성되는 PGE2는 주로 COX-2 효소에 의해 만들어지는 것으로 알려져 있으므로 상기 실험을 통해 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액이 COX-2 효소의 유도작용 또는 활성을 억제함을 추론할 수 있었다.As a result of measuring the inhibitory effect of prostaglandin biosynthesis by ultraviolet irradiation (Table 25, Table 26), it was confirmed that both the white mushroom fruiting body extract and the white mushroom mycelial body culture effectively inhibit the production of prostaglandin by ultraviolet light. In particular, it is known that PGE 2 produced is mainly produced by COX-2 enzyme. Therefore, it can be inferred that the culture of white manganic acid fruiting body and white manganese mushroom mycelium suppress the induction activity or activity of COX-2 enzyme there was.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 프로스타글란딘 생합성 억제효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 프로스타글란딘 생합성 억제효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that an excellent inhibitory effect on the prostaglandin biosynthesis of the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom mycelial culture solution was confirmed, and the excellent effect of inhibiting the prostaglandin biosynthesis of the skin external composition of the present invention was confirmed.
실험예Experimental Example 14: 여드름균에 대한 항균력 측정 14: Antimicrobial activity against acne bacteria
본 실험예 14에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위해 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)를 실시하였다. In Experimental Example 14, a paper disc test was conducted to examine the antimicrobial activity against the acne extract of the white mushroom fruiting body obtained in Example 1 and the white mushroom culture obtained in Example 3 above Respectively.
먼저, 여드름 발생원인의 피부 상재균인 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)를 활성화시키기 위하여 BHI액체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%)에서 48시간 전배양하였다. 이렇게 준비한 균 배양액을 BHI 고체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%;agar1.5%)에 0.1 ㎖씩 도말 한 후, 건조시켰다. 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 95% 에탄올 수용액에 12%(w/v)로 희석하여 직경 8 ㎜의 paper disc에 50 ㎕씩 점적한 후 앞서 준비한 고체 배지 위에 올려놓은 후 이것을 35℃ 혐기 배양조에서 3일간 배양하였다. 'Paper disc' 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하였다. First, for activation of Propionibacterium acnes, a skin overgrowth caused by acne, 48 hours pre-culture was carried out in a BHI liquid medium (Brain-Heart Infusion Broth; 3.7%). The bacterial culture thus prepared was plated in 0.1 ml of BHI solid medium (Brain-Heart Infusion Broth; 3.7%; agar 1.5%) and dried. White foxtail mushroom fruiting body and white foxtail mushroom culture were diluted to 12% (w / v) in 95% ethanol aqueous solution, respectively, and 50 μl of the suspension was placed on a paper disc having a diameter of 8 mm. And cultured in an anaerobic incubator at 35 ° C for 3 days. The antimicrobial activity was evaluated by observing the growth inhibition zone around the 'paper disc' and measuring the size of the inhibition zone.
여드름균에 대한 항균력을 측정한 결과, 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 균 성장 저지환의 크기는 16 ㎜인 것으로 나타나, 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 항균력을 확인할 수 있었다.
As a result of the measurement of the antibacterial activity against the acne bacteria, the size of the bacterial growth inhibition in the culture of the extract of Fusarium oxysporum fucata and the fungus cultivar was 16 ㎜, and the excellent antibacterial activity of the composition for external application for skin of the present invention was confirmed.
실험예Experimental Example 15: 15: CompoundCompound 48/80에 의한 아토피 피부염 유발 후 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 항염증 효과 측정 Measurement of anti-inflammatory effect of white foxtail mushroom fruit body extract and white mushroom mycelium culture after 48/80 induced atopic dermatitis
BALB/c 마우스(5 wks, male)의 등 쪽 목 부위 피부의 진피 내로 마리당 30 ㎕의 compound 48/80(Sigma, Co.; 1 ㎎/㎖ in saline)을 주사한 후 케이지에 집어넣고 60분 동안 마우스가 목을 긁는 행동을 관찰하였다. 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 항염 치료 효능을 검정하기 위하여 compound 48/80을 주사하기 5일 전부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 250 ㎕/㎖의 농도로 마리당 100 ㎕씩 각각 마우스의 등 쪽 목 부위에 도포하였다. 도포방법은 5일 동안 하루에 두 번씩 총 10회에 걸쳐 마우스의 등 쪽 목 부위에 도포하여 전처리 한 다음 compound 48/80을 주사한 후 총 1시간 동안 5분 간격으로 마우스가 뒷발로 목을 긁는 시간을 측정하여 소양증 정도를 측정하였다.30 μl of compound 48/80 (Sigma, Co .; 1 mg / ml in saline) was injected into the dermis of the dorsal skin of BALB / c mice (5 wks, male) Mice were observed to scratch their necks. In order to test the anti - inflammatory efficacy of white foxtail mushroom fruiting body extract and white foxtail mushroom mycelia, the culture of white foxtail mushroom fruiting body and white foxtail mushroom mycelium was added at a concentration of 250 μl / Mu] L of each mouse. After applying Compound 48/80 for 5 days, the mice were pretreated at the dorsal neck of the mouse for 10 times for 5 days. The time was measured and the degree of pruritus was measured.
아토피 피부염 유발 후 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 항염증 효과를 측정한 결과(표 27, 표 28), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 compound 48/80에 의한 아토피 피부염(피부 소양증) 유발을 억제하는 것을 확인할 수 있었다.The antiinflammatory effects of white foxtail mushroom fruiting body extracts and white foxtail mushroom mycelium cultures after atopic dermatitis induction were measured (Table 27, Table 28) (Skin pruritus).
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 아토피 예방 효과를 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 아토피 개선, 예방 또는 치료 효과를 알 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the atopic prevention effect of the white manganic acid mushroom fruit body extract and the white manganic acid mushroom mycelial fluid was excellent, and the excellent atopy improvement, prevention, or therapeutic effect of the skin external composition of the present invention was confirmed.
실험예Experimental Example 16: 수분 흡습성 측정 16: Measurement of water hygroscopicity
본 실험예 16에서는 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 수분 흡습성을 측정하기 위하여, 인간으로부터 직접 채취하거나 또는 상업적으로 구입한 사람의 건조 표피세포에 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 배양액과 증류수에 각각 포화 흡수시키고 흡수된 물의 양을 측정한 후, 48시간 건조 후의 질량변화를 측정하였다.In Experimental Example 16, in order to measure the water hygroscopicity of the white mushroom fruiting body extract and white mushroom mycelial body fluid, the extracts of white mushroom fruited body or white mushroom mycelium The amount of water absorbed by the culture solution and distilled water was measured, and the mass change after drying was measured for 48 hours.
각각의 측정된 질량의 변화로부터 피부 세포 단위 질량당 흡수된 물의 양을 비교하였다. 이러한 실험은 표피세포에 흡습되는 물의 양을 비교하기 위한 방법으로 실제 사람의 피부에 있어서도 그 보습효과를 예상할 수 있는 한가지 방법으로 사용되고 있다.The amount of water absorbed per skin cell unit mass was compared from each measured mass change. This experiment is a method for comparing the amount of water absorbed to the epidermal cells, and is used as one method for predicting the moisturizing effect even in the human skin.
구체적으로, 사람의 표피세포를 건조시켜 단위질량당 함유된 수분의 양을 일정하게 만든 후, 각각의 표피세포 시료의 무게와 함유된 물의 양을 카이저 방법(Kaiser method)을 사용하여 측정하였다. 물의 함량이 측정된 표피세포를 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 배양액, 정제수에 각각 24시간 담지하여 포화 흡수시켜준 뒤, 세포 내에 물이 포화흡수된 표피세포를 꺼내서 무게를 달고, 일부를 채취하여 카이저 수분측정기로 함유되어 있는 단위질량당 수분의 양을 측정하였다. 이후 다시 48시간 감압건조시키고 무게를 달고난 후, 일부를 채취하여 카이저 방법에 의해 수분량을 측정하여 함유되어 있는 단위질량당 수분의 양을 측정하였다(수분 mg/표피세포 질량 g).Specifically, human epidermal cells were dried to make the amount of water contained per unit mass constant, and then the weight of each epidermal cell sample and the amount of water contained were measured using the Kaiser method. The epidermal cells, in which the water content was measured, were carried on a white foxtail mushroom fruit body extract or a white foxtail mushroom mycelial culture liquid and purified water for 24 hours, respectively, to saturate and absorb the water. Then, the skin cells in which water was saturated and absorbed were taken out and weighted. And the amount of water per unit mass contained in the Kaiser moisture meter was measured. Then, after drying for 48 hours under reduced pressure, the weight was added, and a part of the weight was measured. The water content was measured by the Kaiser method and the amount of water per unit mass was measured (mg / epidermal cell mass g).
수분 흡습성을 측정한 결과(표 29, 표 30), 흰망태버섯 자실체 추출물, 흰망태버섯 균사체 배양액으로 포화 흡습시킨 표피세포가 정제수에 의하여 포화 흡습 된 표피세포보다 재건조 과정에 있어 훨씬 많은 물을 함유하고 있음을 확인할 수 있었다.As a result of measuring the water hygroscopicity (Table 29, Table 30), it was found that the epidermal cells saturated with hygroscopic mushroom fruiting body extract and white mushroom mycelium culture solution had much water in the re-drying process than the saturated hygroscopic epidermal cells As shown in Fig.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 피부 흡습성을 확인할 수 있었고, 그로부터 본 발명의 우수한 보습 효과를 알 수 있었다.
From the above results, it was possible to confirm excellent skin hygroscopicity of the white foxtail mushroom fruit body extract and the white foxtail mushroom mycelium culture medium, and the excellent moisturizing effect of the present invention was confirmed.
실험예Experimental Example 17: 흰망태버섯 자실체 추출물 및 흰망태버섯 균사체 배양액과 사람 모발 단백질의 결합 효과 17: Combination of Human Hair Protein and White Fungus Extract and White Fungus Mushroom Culture
사람 모발 케라틴 단백질 50 ㎍에 상기 실시예 1 또는 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 0.5, 0.25, 0.1중량%의 시험 농도로 첨가하고 상온에서 30분 동안 반응시킨 후, 6% 과산화수소와 0.5% 암모니아 1:1 혼합 용액으로 처리하여 30분 동안 반응시켰다. 반응액을 10% SDS-폴리아크릴아미드 젤에서 램리(Laemmli)의 방법에 따라 전기영동하고, 젤에 있는 케라틴 단백질을 0.1% 쿠마시 블루(Coomassie brilliant blue R 250), 10% 빙초산 및 40% 에탄올의 혼합 용액에서 1시간 동안 염색한 후 10% 빙초산 및 40% 에탄올의 혼합용액에서 탈색시키고 케라틴 단백질 띠를 확인하였다. 이미지 마스터(Amersham Pharmacia Biotech.) 소프트웨어를 사용하여 50 ㎍의 사람 모발 케라틴 단백질만 전기영동했을 때 나타나는 케라틴 단백질 띠를 100%로 하고, 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 배양액을 처리하지 않은 군을 대조군으로 비교하여 케라틴 결합 효과를 %로 표시하였다.To each 50 ㎍ of human hair keratin protein, the white mushroom fruit body extract and the white mushroom mycelium culture obtained in Example 1 or Example 3 were added at test concentrations of 0.5, 0.25, and 0.1 wt%, respectively, and incubated at room temperature for 30 minutes , Treated with a mixed solution of 6% hydrogen peroxide and 0.5% ammonia 1: 1, and reacted for 30 minutes. The reaction solution was electrophoresed on a 10% SDS-polyacrylamide gel according to the method of Laemmli and the keratin protein in the gel was dissolved in 0.1% Coomassie brilliant blue R 250, 10% glacial acetic acid and 40% ethanol For 1 hour, decolorized in a mixed solution of 10% glacial acetic acid and 40% ethanol, and the keratin protein band was identified. Using the image master (Amersham Pharmacia Biotech.) Software, the keratin protein bands that appeared when only 50 μg of human hair keratin protein was electrophoresed were regarded as 100%, and the culture of white mushroom fruiting body extract or white mushroom mycelium was not treated Were compared as control and the keratin binding effect was expressed in%.
실험결과(표 31, 표 32), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액모두 함량이 증가함에 따라 모발 단백질 케라틴과의 결합 능력도 증가하는 것을 알 수 있었다.
As a result of the experiment (Table 31, Table 32), it was found that the binding ability of hair follicle keratin and hair follicle keratin increases with increasing contents of white foxtail mushroom fruiting body extract and white foxtail mushroom mycelial body fluid.
실험예Experimental Example 18: 알칼리와 과산화수소 처리에 의한 케라틴 용출에 대한 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 18: Extract of white mushroom fruiting body and kelp mushroom culture for keratin elution by treatment with alkali and hydrogen peroxide 보호 효과Protection effect
3 g의 모발을 10 ㎖의 과산화수소(6%)와 암모니아(1.68%)의 1:1 혼합용액에 넣고 상기 실시예 1 또는 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 0.5, 0.25, 0.1중량%의 시험 농도로 첨가한 후에 상온에서 30분 동안 처리하였다. 반응액 0.5 ㎖를 Rapid-Con protein concentration kit(Elpis Biotech.)를 사용하여 농축시키고 농축액을 10% SDS-폴리아크릴아미드 젤에서 램리(Laemmli)의 방법에 따라 전기영동한 후 젤에 있는 케라틴 단백질을 0.1% 쿠마시 블루(Coomassie brilliant blue R 250), 10% 빙초산 및 40% 에탄올의 혼합 용액에서 1시간 동안 염색하고 10% 빙초산 및 40% 에탄올의 혼합 용액에서 탈색시켜 케라틴 단백질 띠를 확인하였다. 이미지 마스터 소프트웨어(Amersham Pharmacia Biotech.)를 사용하여 50 ㎍의 사람 모발 케라틴 단백질만 전기영동했을 때 나타나는 케라틴 밴드를 100%로 하고, 흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 배양액을 처리하지 않은 군을 대조군으로 비교하여 케라틴 단백질의 결합 효과를 %로 표시하였다.3 g of hair was placed in a 1: 1 mixed solution of 10 ml of hydrogen peroxide (6%) and ammonia (1.68%), and the white mushroom fruit body extract and white mushroom mycelium culture obtained in Example 1 or Example 3 Were added at test concentrations of 0.5, 0.25, and 0.1 wt%, respectively, and then treated at room temperature for 30 minutes. 0.5 ml of the reaction solution was concentrated using a Rapid-Con protein concentration kit (Elpis Biotech.), And the concentrate was electrophoresed on a 10% SDS-polyacrylamide gel according to Laemmli's method. The mixture was dyed in a mixed solution of 0.1% Coomassie brilliant blue R 250, 10% glacial acetic acid and 40% ethanol for 1 hour and discolored in a mixed solution of 10% glacial acetic acid and 40% ethanol to identify a keratin protein band. Using the image master software (Amersham Pharmacia Biotech.), The keratin band appeared when 50 μg of human hair keratin protein alone was electrophoresed was used as 100%, and the culture medium of white mushroom fruiting body extract or white mushroom mycelium was not treated The binding effect of keratin protein was expressed as% in comparison with control.
실험결과(표 33, 표 34), 흰망태버섯 자실체 추출물, 흰망태버섯 균사체 배양액모두 함량이 증가함에 따라 모발로부터 용출되는 케라틴 단백질 함량이 감소하는 것을 알 수 있었다.
As a result of the experiment (Table 33, Table 34), it was found that the content of keratin protein eluted from the hair was decreased as the content of the white mushroom fruiting body extract and the white mushroom mycelium culture increased.
실험예 19: 알칼리와 과산화수소 처리에 의한 모발 인장 강도와 신도에 대한 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 효과 Experimental Example 19: Effect of the extract of white mushroom fruiting body and white mushroom mycelium on hair tensile strength and elongation by treatment with alkali and hydrogen peroxide
3 g의 모발을 10 ㎖의 과산화수소(6%)와 암모니아(1.68%)의 1:1 혼합 용액에 넣고 상기 실시예 1 또는 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액을 각각 0.5, 0.25, 0.1중량%의 시험 농도로 첨가하여 상온에서 30분 동안 처리한 후, 물로 씻고 바람에 건조시켜 오토그래프(Autograph) 시험기에서 인장 강도(gf)및 신도(%)를 측정하였다. 다음 표 18은 이와 같이 처리한 모발의 인장 강도 및 신도를 나타낸 것이다.3 g of hair was placed in a 1: 1 mixed solution of 10 ml of hydrogen peroxide (6%) and ammonia (1.68%), and the white mushroom fruit body extract and white mushroom mycelium culture obtained in Example 1 or Example 3 (0.5, 0.25, and 0.1 wt%, respectively), treated at room temperature for 30 minutes, washed with water, and dried in air to measure tensile strength (gf) and elongation (%) in an autograph tester. Table 18 below shows the tensile strength and elongation of the hair thus treated.
실험결과(표 35, 표 36), 탈색제(상기 과산화수소와 암모니아 혼합 용액)를 30분간 처리한 경우 흰망태버섯 자실체 추출물, 흰망태버섯 균사체 배양액 모두 첨가량이 증가함에 따라서 모발의 강도 저하가 억제된 것을 볼 수 있다. 이에 따라 탈색제를 처리한 경우 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액에 의한 모발 보호 효과를 기대할 수 있을 것으로 판단되었다.
When the bleaching agent (the hydrogen peroxide and ammonia mixed solution) was treated for 30 minutes in the experimental results (Table 35 and Table 36), the decrease in the hair strength was suppressed as the addition amount of both the white mushroom fruity body extract and the white mushroom mycelium culture increased can see. Therefore, it could be expected that the hair - protecting effect of white foxtail mushroom fruit body extract and white foxtail mushroom mycelial culture fluid can be expected when treated with bleaching agent.
실험예Experimental Example 20: 모발성장효과 시험 20: Hair Growth Effect Test
상기 실시예 1 또는 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액 2중량%을 함유하는 30% 함수 에탄올 용액을 각각 제조하여 모발성장효과 시험에 사용하였다. 모발성장효과 시험은 마우스(ICR), 생후 47~53일 것을 사용하여 등 부위 털을 제거하고, 등 부위가 깨끗한 것을 골라 물질 군 마다 10마리를 사용하여 다음날부터 매일 시험물질을 개체당 100 ㎖씩 도포하였다. 시간 경과에 따른 모발의 길이 및 모발 성장 정도를 모 제거 후 복원 정도에 따라 점수를 0에서 2까지 부가하여 각각 비교하였다. 모발성장 정도를 비교하기 위하여, 대조군으로는 30% 알코올 용액을 각 개체에 도포하여 성장 상태를 관찰하였다.The 30% ethanol solution containing 2% by weight of the white mushroom fruit body extract obtained in Example 1 or Example 3 and the white mushroom mycelial culture solution was prepared and used for the hair growth effect test. Hair growth test was carried out by using mouse (ICR), 47 ~ 53 days after birth, removing the hairs from the dorsal area, and selecting the back area clean. Using 10 animals per group, 100 ml of test substance per day Respectively. The length of hair and hair growth according to time were removed and the scores were added from 0 to 2 according to the degree of restoration. In order to compare the degree of hair growth, a 30% alcohol solution was applied to each individual as a control group and the growth state was observed.
모발성장 촉진 효과 정도를 3등급으로 분류하여 평가하였다(0:전혀 자라지 않음, 1:약간자람, 2:많이자람).The degree of hair growth promoting effect was classified into three grades (0: no growth, 1: slight growth, 2: much growth).
실험결과(표 37, 표 38), 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액의 우수한 모발성장 촉진 효과를 확인할 수 있었다.
Experimental results (Table 37, Table 38) confirmed the excellent hair growth promoting effect of the white mushroom fruiting body extract and the white mushroom mycelial culture medium.
실시예Example 4 및 4 and 비교예Comparative Example 1 : 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 1: Containing white foxtail mushroom fruit body extract 화장료Cosmetics 제조 Produce
본 실시예 4에서는 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 화장료를 제조하였다. In Example 4, cosmetics containing the extract of Fusarium oxysporum fucanosus obtained in Example 1 were prepared.
제조된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 하기 표 39에 나타낸 바와 같다. The cosmetic preparation was in the form of a cream, and its composition was as shown in Table 39 below.
우선 하기 표 39에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였고, 나)상에 가)상을 가하여 예비 유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 서서히 냉각하여 크림(실시예 3, 비교예 1)을 제조하였다.First, the b) phase recorded in Table 39 below was heated and stored at 70 캜, and a) phase was added to b) to emulsify uniformly with a homomixer after preliminary emulsification and gradually cooled to obtain cream (Example 3, Comparative Example 1).
실시예Example 5 및 5 and 비교예Comparative Example 2 : 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 2: a culture containing the mycelial culture of white mushroom 화장료Cosmetics 제조 Produce
본 실시예 5에서는 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장료를 제조하였다. In Example 5, a cosmetic containing the cultured white mushroom mycelium obtained in Example 3 was prepared.
제조된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 하기 표 40에 나타낸 바와 같다. The cosmetics prepared are in the form of a cream, and the composition thereof is shown in Table 40 below.
우선 하기 표 40에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였고, 나)상에 가)상을 가하여 예비 유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 서서히 냉각하여 크림(실시예 4, 비교예 2)을 제조하였다.First, the b) phase recorded in Table 40 below was heated and stored at 70 占 폚, and a) phase was added to b) to emulsify uniformly with a homomixer after preliminary emulsification and then slowly cooled to obtain a cream (Example 4, 2).
실험예Experimental Example 21: 21: 화장료의Cosmetic 피부 탄력 개선효과 측정 Measuring skin elasticity improvement effect
상기 실시예 4 내지 5 및 비교예 1 내지 2에서 제조된 화장료의 피부 탄력 개선효과를 측정하기 위해 실험자(20세~35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 4 또는 실시예 5를 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1 또는 비교예 2를 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.In order to measure the skin elasticity improvement effect of the cosmetic preparations prepared in Examples 4 to 5 and Comparative Examples 1 and 2, 20 patients (20 to 35 years old) 5 on the left side of the face, and Comparative Example 1 or Comparative Example 2 on the left side of the face for 2 consecutive months.
피부 탄력 개선효과를 확인하기 위해 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부탄력측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표 21에 Cutometer SEM 575의 △R7값으로 기재하였는데 R7값은 피부의 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다(n=20, p<0.05). To evaluate the effect of skin elasticity improvement, the skin elasticity was measured before use and after 2 months of use with a skin elasticity meter (SEM 575, C + K Electronic Co., Germany). The experimental results are shown in Table 21 as ΔR7 values of Cutometer SEM 575, where R7 values are indicative of viscoelasticity of the skin (n = 20, p <0.05).
화장료의 피부 탄력 개선효과를 측정한 결과(표 41, 표 42), 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 실시예 4와, 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 실시예 5 를 도포한 실험자의 피부 탄력개선효과가 비교예 1 내지 비교예 2 보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.The skin elasticity improvement effect of the cosmetic material was measured (Table 41, Table 42), and the skin elasticity improvement of the experiment example 4 containing Example 4 containing white mushroom fruiting body extract and Example 5 containing the white mushroom mycelium culture liquid It was confirmed that the effect was better than those of Comparative Examples 1 to 2. [
상기 결과로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 피부 탄력 개선효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the skin external-application composition of the present invention has an excellent skin elasticity-improving effect.
실험예Experimental Example 22: 22: 화장료의Cosmetic 피부 주름 개선효과 측정 Measurement of wrinkle improvement effect
상기 실시예 4 내지 5 및 비교예 1 내지 2에서 제조된 화장료의 피부 주름 개선효과를 측정하기 위해 실험자(20세~35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 3 또는 실시예 4를, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1 또는 비교예 2를 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. In order to measure the effect of improving the skin wrinkles of the cosmetic preparations prepared in Examples 4 to 5 and Comparative Examples 1 and 2, 20 subjects (20 to 35 years old) 4 on the left side of the face and Comparative Example 1 or Comparative Example 2 on the left side of the face for 2 consecutive months.
피부의 주름개선효과를 알아보기 위하여 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 실리콘 재질의 모사판(replica)을 제작하여 지정 부위의 주름의 상태를 화상분석기인 비지오 미터(visiometer: SV60, C+K Electronic Co., Germany)로 측정하였다. To evaluate the effect of wrinkles on the skin, a replica of silicone material was prepared before use and after 2 months of use, and the state of the wrinkles at the designated area was measured with a visiometer (SV60, C + K Electronic Co.) using an image analyzer. , Germany).
그 결과를 하기 표 42 및 표 43에서 나타내었으며, 표 42 및 표 43은 2개월 후의 각각의 파라미터(parameter) 값에서 2개월 전 파라미터 값을 뺀 것의 평균을 나타낸 것이다. 즉, 값이 음수가 나올수록 주름 개선효과가 높다는 것을 의미한다. The results are shown in Tables 42 and 43, and Tables 42 and 43 show the average of the parameter values after two months, minus the parameter values two months ago. That is, the more negative the value, the higher the effect of wrinkle improvement.
R2: 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값 들의 평균
R3: 5개씩 나눈 R1값 중 최고치
R4: 주름 등고선의 기선(baseline)에서 각각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값
R5: 주름 등고선의 기선에서 각각의 주름 윤곽을 뺀 값의 평균값R1: Difference between the maximum value and the minimum value of the wrinkle contour line
R2: The wrinkle contour line is arbitrarily divided into 5 squares, and the average of R1 values
R3: Maximum value of R1 divided by 5
R4: Mean value of the baseline of the wrinkle contour minus the value of each apex and valley
R5: Mean value of the value obtained by subtracting the outline of each wrinkle from the base line of the wrinkle contour line
R2: 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값 들의 평균
R3: 5개씩 나눈 R1값 중 최고치
R4: 주름 등고선의 기선(baseline)에서 각각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값
R5: 주름 등고선의 기선에서 각각의 주름 윤곽을 뺀 값의 평균값R1: Difference between the maximum value and the minimum value of the wrinkle contour line
R2: The wrinkle contour line is arbitrarily divided into 5 squares, and the average of R1 values
R3: Maximum value of R1 divided by 5
R4: Mean value of the baseline of the wrinkle contour minus the value of each apex and valley
R5: Mean value of the value obtained by subtracting the outline of each wrinkle from the base line of the wrinkle contour line
화장료의 피부 주름 개선효과를 측정한 결과(표 43, 44), 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유한 실시예 4와 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유한 실시예 5의 피부 주름 개선효과가 비교예 1 내지 비교예 2 보다 우수함을 확인할 수 있었다.The results of measurement of the skin wrinkle-improving effect of cosmetics (Table 43, Table 44), Example 4 containing white mushroom fruity body extract and Example 5 containing white mushroom mycelia culture liquid showed wrinkle- It was confirmed that it was superior to Comparative Example 2.
상기의 결과로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 주름 개선효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the wrinkle-improving effect of the composition for external application for skin of the present invention is excellent.
실험예Experimental Example 23 : 23: 화장료의Cosmetic 미백효과 측정 Whitening effect measurement
본 실험예 23에서는 상기 실시예 4 내지 5 및 비교예 1 내지 3에서 제조된 화장료의 미백효과를 측정하기 위해 실험자(20세~35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 4 또는 실시예 5를, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1 또는 비교예 2를 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. In Experimental Example 23, in order to measure the whitening effect of the cosmetic compositions prepared in Examples 4 to 5 and Comparative Examples 1 to 3, 20 subjects (20 to 35 years old) Or Example 5 was applied to the left side of the face, and Comparative Example 1 or Comparative Example 2 was applied to the left side of the face for 2 consecutive months, twice a day.
2개월 후, 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타(Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기변화(ΔL)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 44, 표 45에 나타내었고, 미백효능 정도를 7등급으로 분류하여 평가하였다(-3: 매우 악화, -2: 악화, -1: 약간 악화, 0: 변화 없음, 1: 약간 개선, 2: 개선, 3: 매우 개선).Two months later, the color of the applied area of both sides of the face was analyzed with an image analyzer and color change (ΔL) of the color was measured using a Minolta CR300, and visual observation by a plurality of experts and observation And the effects were measured according to the following classification. The results are shown in the following Tables 44 and 45 and the degree of whitening efficacy was classified into seven grades (-3: very bad, -2: worse, -1: slightly worse, 0: Improvement, 2: improvement, 3: very improvement).
화장료의 미백효과를 측정한 결과(표 45, 표 46), 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 실시예 4와 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 실시예 5는 비교예 1 내지 2 보다 미백효과가 우수함을 확인할 수 있었다.The results of measuring the whitening effect of cosmetics (Table 45, Table 46), Example 4 containing white foxtail mushroom fruit body extract and Example 5 containing white foxtail mushroom mycelium culture culture have better whitening effect than Comparative Examples 1 and 2 .
상기의 결과로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 미백효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the skin whitening agent composition of the present invention has excellent whitening effect.
실험예Experimental Example 24: 24: 화장료의Cosmetic 아토피성 피부염에 대한 개선효과 측정 Measurement of improvement effect on atopic dermatitis
본 실험예 24에서는 상기 실시예 4 내지 5와 비교예 1 내지 2에서 제조된 화장료의 아토피성 피부염에 대한 개선효과를 비교측정하기 위해 다음과 같이 임상실험을 실시하였다. In Experimental Example 24, clinical experiments were conducted as follows to compare and evaluate the improvement effects of the cosmetic compositions prepared in Examples 4 to 5 and Comparative Examples 1 and 2 on atopic dermatitis.
5~30세의 아토피 환자로서, 2년 이상 아토피성 피부염을 앓고 있는 환자 30명에 대하여 아토피성 피부염 개선효과를 조사하였다. 동일인에게 왼쪽 손에는 실시예 4 또는 실시예 5를, 오른쪽 손에는 비교예 1 또는 비교예 2를 매일 저녁 세정 후, 피부에 1일 1회 60일간 도포하고 아토피성 피부염 상태 개선 정도를 측정하였다. 측정은 설문조사에 의한 관능평가로 실시하였다. 그 결과는 하기 표 47, 표 48에 나타내었다.We evaluated the improvement of atopic dermatitis in 30 patients with atopic dermatitis for 2 years or more as a 5 to 30 year old atopic patient. The same person applied Example 4 or Example 5 on the left hand and Comparative Example 1 or Comparative Example 2 on the right hand every evening after washing the skin every day for 60 days once a day to measure the degree of improvement of the atopic dermatitis condition. Measurements were carried out by sensory evaluation by questionnaire. The results are shown in Tables 47 and 48 below.
화장료 아토피성 피부염에 대한 개선효과를 측정한 결과(표 47, 표 48), 흰망태버섯 자실체 추출물이 함유된 실시예 3과 흰망태버섯 균사체 배양액이 함유된 실시예 4가 비교예 1 내지 2 보다 아토피성 피부개선효과가 우수하다는 사실을 확인할 수 있었다.(Table 47, Table 48), and Example 3, which contained a white mushroom fruiting body extract, and Example 4, which contained a white mushroom mycelial culture, were compared with Comparative Examples 1 to 2 It was confirmed that the effect of improving atopic skin is excellent.
상기의 결과로부터 본 발명의 피부 외용제 조성물의 우수한 아토피성 피부염 개선효과를 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the composition for external application for skin of the present invention is excellent in improving atopic dermatitis.
실험예Experimental Example 25: 25: SLSSLS 에 의한 피부 자극 완화효과 측정Of skin irritation mitigation
본 실험예 25에서는 상기 실시예 4 내지 5에서 제조된 화장료의 자극 완화 효과를 인체 첩포 실험으로 평가하였다.In Experimental Example 25, the effects of stimuli relaxation of the cosmetic compositions prepared in Examples 4 to 5 were evaluated by a human skin patch test.
일반적 화장품 처방(크림, 로션, 스킨, 에센스)에 자극을 일으키는 SLS(sodium lauryl sulfate) 1%와 실시예 4 또는 실시예 5의 화장료를 혼용하여 24시간, 48시간, 72시간 동안 첩포한 후, 자극 유발지수를 바탕으로 자극완화 효과를 평가한 것이다.1% of SLS (sodium lauryl sulfate) which stimulates general cosmetic prescription (cream, lotion, skin, essence) and the cosmetic materials of Example 4 or 5 were mixed for 24 hours, 48 hours and 72 hours, Based on the stimulation index, the effect of stimulation relaxation was evaluated.
20~50세의 건강한 남녀 50명의 팔 상박 부위에 FINN CHAMBER(FINLAND)를 이용하여 제품을 0.3 mg씩 첩포하고, 24시간 후 급성 자극 지수를 평가하였다. 평가 후 재차 동일한 부위에 동량의 제품을 첩포하고 48시간 및 72시간 후의 지연성 자극 지수를 평가하였다.Fifty milliliters of healthy men and women aged 20 to 50 years were exposed to FINN CHAMBER (FINLAND) using 0.3 mg of the product, and the acute irritation index was evaluated after 24 hours. After the evaluation, the same amount of product was applied again to the same site again, and the delayed irritation index after 48 hours and 72 hours was evaluated.
SLS에 의한 피부 자극 완화효과를 측정한 결과, SLS를 단독으로 첩포한 부분은 24시간 후부터 피부에 붉게 자극이 나타났으나, 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 실시예 4와 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 실시예 5는 첩포하고 24시간, 48시간, 72시간 경과 후에도 아무런 피부 발작을 일으키지 않았다.As a result of the measurement of the skin irritation mitigation effect by SLS, the portion where SLS was applied alone showed reddish stimulation from the skin after 24 hours. However, in Example 4 containing white foxtail mushroom fruit body extract and the culture of white foxtail mushroom mycelium , Did not cause any skin seizure even after 24 hours, 48 hours, and 72 hours.
상기의 결과로부터 흰망태버섯 자실체 추출물과 흰망태버섯 균사체 배양액이 화장료에 혼용되었을 때 자극을 유발시키는 기재(계면 활성제, 향, 알콜)에 의한 피부 자극을 감소시킬 수 있다는 사실을 확인할 수 있었다.
From the above results, it was confirmed that the skin irritation caused by the stimulant base (surfactant, fragrance, alcohol) can be reduced when the culture of white foxtail mushroom fruiting body and white foxtail mushroom mycelium is mixed with cosmetics.
실시예Example 6: 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 화장수 제조 6: Production of lotion containing white fungus mushroom fruit body extract
95% 에탄올 8 g에 폴리피로리돈 0.05 g, 올레일알콜 0.1 g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2 g, 향료 0.2 g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1 g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해하였다. 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물 0.05 g, 글리세린 5 g을 정제수 85.33 g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 화장수를 제조하였다.
0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of perfume, 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant and a small amount of dye were mixed and dissolved in 8 g of 95% Respectively. 0.05 g of the white mushroom fruity body extract obtained in Example 1 and 5 g of glycerin were dissolved in 85.33 g of purified water, and the mixture was added to the mixture, followed by stirring to prepare a lotion containing white foxtail mushroom fruit body extract.
실시예Example 7: 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장수 제조 7: Production of cosmetic lotion containing culture of white mushroom mycelium
95% 에탄올 8 g에 폴리피로리돈 0.05 g, 올레일알콜 0.1 g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2 g, 향료 0.2 g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1 g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해하였다. 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액 0.05 g, 글리세린 5 g을 정제수 85.33 g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장수를 제조하였다.
0.05 g of polypyrrolidone, 0.1 g of oleyl alcohol, 0.2 g of polyoxyethylene monooleate, 0.2 g of perfume, 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid methyl ester, a small amount of antioxidant and a small amount of dye were mixed and dissolved in 8 g of 95% Respectively. 0.05 g of the cultured white mushroom mycelium obtained in Example 3 and 5 g of glycerin were dissolved in 85.33 g of purified water. The mixture was added to the mixture, followed by stirring to produce a lotion containing white mushroom mycelium culture liquid.
실시예Example 8: 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 유액 제조 8: Manufacture of emulsion containing white foxtail mushroom fruit body extract
세틸알콜 1.2 g, 스쿠알란 10 g, 바세린 2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2 g, 글리세린모노에스테아레이드 1 g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1 g 및 향료 0.1 g을 70℃에서 가열 혼합 용해하고, 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물 0.5 g, 디프로필렌글리콜 5 g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2 g, 트리에탄올아민 0.2 g, 정제수 76.2 g을 75℃로 가열해서 용해시켰다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 유액을 제조하였다.
1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of vaseline, 0.2 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoestearaide, 1 g of polyoxyethylene (20 mols) monooleate and 0.1 g of perfume were mixed at 70 캜 0.5 g of the white foxtail extract obtained in Example 1, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol-1,500, 0.2 g of triethanolamine and 76.2 g of purified water were dissolved by heating at 75 占 폚. The mixture was emulsified by mixing them and then cooled to prepare oil-in-water (O / W) type emulsion.
실시예Example 9: 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 유액 제조 9: Preparation of emulsion containing culture of mycelia of white mushroom mycelium
세틸알콜 1.2 g, 스쿠알란 10 g, 바세린 2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2 g, 글리세린모노에스테아레이드 1 g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1 g 및 향료 0.1 g을 70℃에서 가열 혼합 용해하고, 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액 0.5 g, 디프로필렌글리콜 5 g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2 g, 트리에탄올아민 0.2 g, 정제수 76.2 g을 75℃로 가열해서 용해시켰다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 유액을 제조하였다.
1.2 g of cetyl alcohol, 10 g of squalane, 2 g of vaseline, 0.2 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester, 1 g of glycerin monoestearaide, 1 g of polyoxyethylene (20 mols) monooleate and 0.1 g of perfume were mixed at 70 캜 0.5 g of the culture solution of white mushroom mycelium obtained in Example 3, 5 g of dipropylene glycol, 2 g of polyethylene glycol-1,500, 0.2 g of triethanolamine and 76.2 g of purified water were dissolved by heating at 75 占 폚. The mixture was emulsified by mixing them and then cooled to prepare oil-in-water (O / W) type emulsion.
실시예Example 10: 흰망태버섯 자실체 추출물을 함유하는 10: White mushroom containing fruity body extract 미용액Serum 제조 Produce
95% 에틸알콜 5 g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2 g, 키툴로오즈 0.3 g, 히야론산나트륨 0.2 g, 비타민 E-아세테이트 0.2 g, 감초산 나트륨 0.2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1 g, 상기 실시예 1에서 수득된 흰망태버섯 자실체 추출물 1 g 및 적량의 색소를 혼합하여 미용액을 제조하였다.
To 5 g of 95% ethyl alcohol, 1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of chitoolose, 0.2 g of sodium hyaluronate, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium permanganate and 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester , 1 g of the white mushroom fruity body extract obtained in Example 1 and the appropriate amount of pigment were mixed to prepare a serum.
실시예Example 11: 흰망태버섯 균사체 배양액을 함유하는 11: Culture medium containing a culture of mycelia of white mushroom 미용액Serum 제조 Produce
95% 에틸알콜 5 g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2 g, 키툴로오즈 0.3 g, 히야론산나트륨 0.2 g, 비타민 E-아세테이트 0.2 g, 감초산 나트륨 0.2 g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1 g, 상기 실시예 3에서 수득된 흰망태버섯 균사체 배양액 1 g 및 적량의 색소를 혼합하여 미용액을 제조하였다.1.2 g of polyoxyethylene sorbitan monooleate, 0.3 g of chitoolose, 0.2 g of sodium hyaluronate, 0.2 g of vitamin E-acetate, 0.2 g of sodium permanganate, 0.1 g of p-hydroxybenzoic acid ethyl ester , 1 g of the white mushroom mycelium culture obtained in Example 3 and an appropriate amount of pigment were mixed to prepare a serum.
Claims (18)
A composition for external application for skin, which comprises an extract of Fagaceae mushroom Fructus as an active ingredient.
A composition for external application for skin, which comprises an extract of Mycobacterium tuberculosis mycelia as an active ingredient.
A composition for external application for skin, which comprises as an active ingredient a culture solution obtained from culturing mycelia of white mushroom.
상기 피부 외용제 조성물은,
흰망태버섯 자실체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체 추출물 또는 흰망태버섯 균사체의 배양으로부터 얻은 배양액을 조성물 전체에 대해 0.001 ~ 90.0중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
The method according to any one of claims 1 to 3,
The composition for external application for skin,
Wherein the composition comprises 0.001 to 90.0% by weight of a culture solution obtained from the culture of white foxtail mushroom fruit body extract or white foxtail mushroom mycelium extract or white foxtail mushroom mycelium.
상기 피부 외용제 조성물은,
화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
The method according to any one of claims 1 to 3,
The composition for external application for skin,
A composition for external application for skin, which is a cosmetic composition.
상기 화장료 조성물은,
피부 미백용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
A composition for external application for skin, which is used for skin whitening.
상기 화장료 조성물은,
노화 방지용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
The composition for external application for skin is characterized in that it is for preventing aging.
상기 화장료 조성물은,
주름 개선용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
Wherein the composition is for wrinkle improvement.
상기 화장료 조성물은,
피부 보습용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
A composition for external application for skin, which is used for moisturizing the skin.
상기 화장료 조성물은,
피부자극 완화용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
A composition for external application for skin, which is used for relieving skin irritation.
상기 화장료 조성물은,
아토피 피부 개선용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
A composition for external application for skin, which is for improving atopic skin.
상기 화장료 조성물은,
여드름 개선용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
The composition for external application for skin is characterized in that it is for improving acne.
상기 화장료 조성물은,
모발손상 방지용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
Wherein the composition is for preventing hair damage.
상기 화장료 조성물은,
탈모방지 및 육모 개선용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. The method of claim 5,
In the cosmetic composition,
Wherein the composition is for preventing hair loss and for improving hair growth.
상기 피부 외용제 조성물은,
약학 조성물인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
The method according to any one of claims 1 to 3,
The composition for external application for skin,
A composition for external application for skin, which is a pharmaceutical composition.
상기 약학 조성물은,
염증질환 예방 또는 치료용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
16. The method of claim 15,
The pharmaceutical composition may contain,
Wherein the composition is for preventing or treating an inflammatory disease.
상기 약학 조성물은,
아토피 예방 또는 치료용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
16. The method of claim 15,
The pharmaceutical composition may contain,
A composition for external application for skin, which is characterized in that it is for prevention or treatment of atopy.
상기 약학 조성물은,
여드름 예방 또는 치료용인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.16. The method of claim 15,
The pharmaceutical composition may contain,
A composition for external application for skin characterized by being for preventing or treating acne.
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KR100438009B1 (en) | 2001-10-11 | 2004-06-30 | 한불화장품주식회사 | A cosmetic composition containing an extract of Grifola frondosa |
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