KR20140069125A

KR20140069125A - B7-h6 폴리펩티드에 대한 b7-h6 치료학적인 활성 단일클론 항체

Info

Publication number: KR20140069125A
Application number: KR1020147009463A
Authority: KR
Inventors: 아델하이드 세르웬카; 게르하르트 몰덴하우어
Original assignee: 도이체스 크렙스포르슝스첸트룸
Priority date: 2011-09-13
Filing date: 2012-09-10
Publication date: 2014-06-09
Also published as: IL231108A0; CN103797032B; US9676855B2; SG2014015051A; JP2014534165A; EP2756000B1; CN103797032A; EP2756000A1; US20140341915A1; ZA201401759B; AU2012307549A1; WO2013037727A1; NZ621727A; RU2014104695A; SG10201507970SA; MX2014003065A; CA2848333A1; BR112014005573A2

Abstract

본 발명은 진단 방법 및 수단에 관한 것이다. 구체적으로, B7-H6 폴리펩티드의 세포외 도메인의 부분에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다. 더욱이, 상기 항체는 암 또는 염증성 질병의 치료 또는 진단에서 사용하기 위해 제공된다. 더군다나, 암 또는 염증성 질병으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상의 시료에서 암을 진단하기 위한 방법은 제공된다. 또한, 본 발명은 암 또는 염증성을 진단하기 위한 장치 및 키트에 관한 것이다.

Description

B7-H6 폴리펩티드에 대한 B7-H6 치료학적인 활성 단일클론 항체 {B7-H6 therapeutically active monoclonal antibody against B7-H6 polypeptide}

본 발명은 진단 방법 및 수단에 관한 것이다. 구체적으로, B7-H6 폴리펩티드의 세포외 (extracellular) 도메인의 부분에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다. 더욱이, 상기 항체는 암 또는 염증성 질병 (inflammatory disease)의 치료 또는 진단에서 사용하기 위해 제공된다. 더군다나, 암 또는 염증성 질병으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상의 시료에서 암을 진단하기 위한 방법은 제공된다. 또한, 본 발명은 암 또는 염증성을 진단하기 위한 장치 및 키트에 관한 것이다.

오늘날까지, 암은, 발병률 및 사망률이 감소하고 생존율이 향상되는 진천이 있을지라도, 미국에서 사망의 주된 원인 중 하나이다 (Jemal et al. 2010, CA Cancer J Clin. Sep-Oct 60(5):277-300 참조). 추가 진전은 암의 발달이 면역 시스템에 의한 종양 세포의 특이 인식의 부족과 종종 관련되는 사실에 기인하여 진단 방법 및 수단을 개선시켜 가속화될 수 있다.

표적 암 치료 (Targeted cancer therapy)는 암 세포의 성장을 직접적으로 차단하기 위해 특이 표적 분자 (예를 들어, 단일클론 또는 폴리클로날 항체)를 방해하는 약물을 포함한다. 따라서, 표적 암 치료는 전통적인 치료 접근법 (예를 들어, 절제, 방사선, 화학 요법)보다 좀더 효과적일 수 있고, 정상 세포에 대해 덜 유해할 수 있다. 단일클론 항체 (mAb)는 세포외 도메인 또는 환자의 면역 시스템을 자극하기 위해 표적 세포의 세포 표면 표적에 특이적으로 결합하도록 설계될 수 있다. 단일클론 항체는 또한 다수의 심각한 질병 (예를 들어, 염증성 질병 또는 다른 타입의 암)에 대해 만들어질 수 있다. 따라서, 단일크론 항체는, 예를 들어, 이들 질병의 초기 발전 단계에서 검출 또는 치료적 접근법을 제공하기 위한 신뢰성 있고 효과적인 치료적 및 진단 방법 및 수단을 제공할 수 있다.

천연 킬러 세포 (NK 세포)는 염증성 및 후천성 면역반응 (adaptive immune response)을 형성하고 ((Vivier et al. 2008, Nat. Immuno. 9:503-510 참조), 형질전환 및 바이러스 감염된 세포의 거부반응에서 중요한 역할을 수행하는 (Smyth et al. 2002, Nat. Rev. Cancer 2:850-861; Lanier 2005, Annu. Rev. Immunol. 23:225-274 참조) 내재 면역계 (innate immune system)의 주요 성분을 구성한다. NK 세포는 NK 세포 활성 및 NK 세포 공격으로부터 표적 세포를 보호하는, 주요 조직적합성 (histocompatibility) 복합체 (MHC) 부류 I의 발현을 위한 표적 세포를 조사한다 (Parham 2005, Nat. Rev. Immunol. 5:201-204 참조). MHC 부류 I이 부족한 표적 세포들은 세포사멸 (apoptosis) (프로그램된 세포 죽음)의 유도에 기인하여 NK 세포에 의해 직접적으로 죽는다. NK-활성 수용체 (예를 들어, NKp30과 유사한 천연 독성 수용체 (cytotoxicity receptor) (NCR) 과 (family))의 발견은 또한 활성 신호가 NK 세포 및 종양 세포 용해 (lysis)의 활성을 위해 필수적인 것으로 밝혀졌다 (Pende et al. 1999, Cancer Res. 62:6178-6186; Moretta et al. 2001, Annu. Rev. Immunol. 19:197-223 참조).

최근에, 사람 NKp30이 상기 B7 과 일원 (family member) B7-H6과 직접적으로 상호작용하고, 종양 세포에서 B7-H6의 발현이 NKp30-의존성 세포 활성 및 세포독성을 유도하는 것을 나타낼 수 있다 (Brandt et al. 2009, J. Exp. Med. 206(7):1495-1503; US　2011/0081346 참조). 이에 의해, NKp30의 세포외 도메인은 여러 가지 종양 세포주의 표면상에 독점적으로 발현된, B7-H6의 세포외 도메인과 직접적으로 상호작용한다 (Brandt et al. 2009, J. Exp. Med. 206(7):1495-1503 참조).

본 발명은 B7-H6 폴리펩티드의 세포외 도메인의 부분에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다.

본 발명은 B7-H6 폴리펩티드의 세포외 도메인의 부분 (portion)에 의해 형성된 에피토프 (epitope)에 특이적으로 결합된 항체로서, 상기 부분은 SEQ ID NO: 22에서 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 항체에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 서열은 IgV-유사 도메인을 나타낸다.

본 발명의 항체의 바람직한 구현 예에 있어서, 상기 항체는 SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 15, 17, 및 19에서 나타낸 바와 같은 상보성 결정 부위 (complementarity determining regions) (CDRs)를 포함한다. 전술된 CDRs의 핵산 서열은 IMGT-ONTOLOGY에 따른 주석이 달린다 (Giudicelli and Lefranc 1999, Bioinformatics 15:1047-1054 참조).

본 발명의 항체의 바람직한 구현 예에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체이다. 좀더 바람직하게는, 상기 항체는 부다페스트 조약하의 독일, Braunschweig, DSMZ에 2011년 2월 02일자에 기탁 번호 DSM ACC 3117호로 기탁된 항체이다.

본 발명은 암의 치료 또는 진단에서 사용하기 위한 본 발명의 항체를 고려한다. 바람직하게는, 상기 암은 T 세포 림프종 (T cell lymphoma), 골수성 백혈병 (myeloid leukemia), 대장암 (colon caecinoma), B 세포 림프종 (B cell lymphoma), 흑색종 (melanoma), 또는 자궁 경부암 (cervical carcinoma)이다.

더욱이, 본 발명은 염증성 질병의 치료 또는 진단에서 사용하기 위한 본 발명의 항체를 고려한다. 바람직하게는, 상기 염증성 질병은 바이러스성 감염이다.

본 발명은 하기 단계를 포함하는 암으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상의 시료에서 암을 진단하는 방법에 관한 것이다:

a) B7-H6 폴리펩티드 상에 본 발명의 항체와 이의 에피토프의 결합을 허용하는 조건 하에서 상기 항체와 시료를 접촉시키는 단계; 및

b) 상기 에피토프에 항체의 결합을 결정시키고, 이에 의해 암이 진단되는 결정 단계.

본 발명의 방법의 바람직한 구현 예에 있어서, 상기 암은 T 세포 림프종, 골수성 백혈병, 대장암, B 세포 림프종, 흑색종, 또는 자궁 경부암이다.

본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는 염증성 질병으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상의 시료에서 염증성 질병을 진단하는 방법에 관한 것이다:

b) 상기 에피토프에 항체의 결합을 결정시키고, 이에 의해 염증성 질병이 진단되는 결정 단계.

본 발명의 방법의 바람직한 구현 예에 있어서, 상기 시료는 조직 또는 체액 (body fluid) 시료이다.

본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는 시료에서 염증성 질병 또는 암을 진단하기 위한 장치를 포함한다:

a) 본 발명의 항체를 포함하는 분석 단위; 및

b) B7-H6 폴리펩티드 상에 상기 분석 단위의 항체와 이의 에피토프의 결합을 검출하는 검출기.

본 발명의 장치의 바람직한 구현 예에 있어서, 상기 시료는 조직 또는 체액 시료이다.

본 발명은 최종적으로 본 발명의 항체, 바람직하게는 B7-H6 폴리펩티드 상에 상기 항체와 이의 에피토프의 결합을 검출하기 위한 제제를 포함하는 암 또는 염증성 질병을 진단하기 위한 키트에 관한 것이다.

도 1은 상기 B7-H6-Ig-융합단백질 (fusionprotein)의 핵산 및 아미노산 서열을 나타낸다. 이탤리체의 핵산 및 아미노산 서열은 효소 제한 부위를 나타낸다. 사람 B7-H6의 세포외 도메인의 핵산 및 아미노산 서열은 굵은 밑줄이고, 이에 의해 Fcm의 서열은 점선 밑줄이다.
도 2는 사람 B7-H6 폴리펩티드의 세포외 도메인의 아미노산 서열을 나타내고, IgV-유사 도메인 및 IgC-유사 도메인을 나타낸다.
도 3은 항-B7-H6 클론 1.18이 효소-연결된 면역흡수 분석법 (immunoabsorbant assay) (ELISA)를 사용하여 B7-H6과 반응하는 것을 나타낸다.
도 4a는 항-B7-H6 클론 1.18이 형광-활성화 세포 분류 (fluorescence-activated cell sorting) (FACS)을 사용하여 형질감염체 (transfectants) (BA/F3-B7-H6) 상에 B7-H6을 결합하는 것을 도시한다. 도 4b는 상기 항-B7-H6 클론 1.18이 세포주 (조혈 (haematopoietic) 및 고체 종양 기원 (solid tumor origin)) 상에 B7-H6과 결합하지만, 건강한 말초 혈액 단핵 세포 (peripheral blood mononuclear cells) (PBMCs)에는 결합하지 않는 것을 나타낸다.
도 5는 B7-H6의 IgV 도메인의 부분이 항-B7-H6 클론 1.18의 결합에 포함된 것을 나타낸다.
도 6은 B7-H6의 세포 표면 발현이 형광-활성화 세포 분류 (FACS) 및 다른 세포 주에서 mRNA 발현에 의해 결정된 것을 도시하고 있다. 도 6a는 조혈 기원 (hematopoietic origin)의 종양 세포주에서 B7-H6의 발현을 나타낸다. 도 6b는 고체 종양 기원의 종양 세포주에서 B7-H6의 발현을 나타낸다.
도 7은 항-B7-H6 mAb 1.18이 BA/F-3-B7-H6 형질감염체의 시토스핀 (cytospin) (냉동 섹션)상에 B7-H6을 검출하는 것을 나타낸다.
도 8은 1차 천연 킬러 (NK) 세포가 BA/F3-B7-H6 형질감염체와 공-배양시 탈과립화하는 (degranulate) 것을 나타낸다.

본 발명은 B7-H6 폴리펩티드의 세포외 도메인의 부분에 의해 형성된 에피토프에 특이적으로 결합된 항체로서, 상기 부분은 SEQ ID NO: 22에서 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 항체에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 서열은 IgV-유사 도메인을 나타낸다.

상기 용어 "항체"는 상기 B7-H6 폴리펩티드의 세포외 도메인의 부분에 포함된 에피토프에 특이적으로 결합하는 모든 타입의 항체를 의미한다. 본 명세서에 언급된 에피토프는, 바람직하게는 길이에서 7 내지 15, 바람직하게는 8 내지 11 연속 아미노산 (contiguous amino acids)의 스트레치 (stretches)로 한정된다. 그러나, 본 발명에 따른 에피토프는 또한 어떤 3-차원 구조에 의해 형성될 수 있고, 이러한 구조의 에피토프는 또한 본 명세서에서 고찰된다. 이러한 상황에서 특이 결합은 본 발명의 항체가 상기 B7-H6 폴리펩티드 또는 다른 폴리펩티드 상에서 다른 에피토프에 상당한 가교-반응성 (cross-reactivity) (즉, 결합)없이 상기 에피토프에 필수적으로 결합한다는 것을 의미한다. 특이 결합은 기술분야에서 알려진 기술에 의해 결정될 수 있다. 바람직하게는, 상기 항체는 상기 에피토프에 특이적으로 결합한다. 전술된 에피토프는 상기 B7-H6 폴리펩티드의 세포외 도메인의 부분에 위치될 수 있다. 바람직하게는, 상기 B7-H6 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 가지며, 상기 세포외 도메인은 상기 서열의 58 내지 300 아미노산에 상응한다 (또한 도 1 및 2를 참조). 상기 B7-H6 폴리펩티드는 하나 이상의 아미노산의 치환, 부가 및/또는 삭제에 의한 그것과 다른, SEQ ID NO: 2의 변형체 서열에 의해 또한 대표될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 이러한 변형체 서열은 다른 종으로부터의 병렬상동 아미노산 (orthologous amino acid) 서열뿐만 아니라 전술된 특이 B7-H6의 직렬상동 (paralogous) 또는 다른 상동 (homologous) 서열일 수 있다. 바람직하게는, 이러한 변형체 서열은 상기 서열을 갖는 SEQ ID NO: 2의 적어도 50% 또는 전체 길이에 걸쳐 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일하다. 본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "서열 동일성"은 두 개 이상의 폴리펩티드 서열 사이의 관계, 즉 기준 서열 (reference sequence) 및 상기 기준 서열과 비교하여 제공된 서열의 관계를 의미한다. 서열 동일성은 상기 서열이 이러한 서열의 열들 (strings) 사이에 짝을 이루어 결정될 수 있는, 가장 높은 정도의 서열 유사성을 생산하도록 최적으로 배열된 후, 상기 기준 서열 대 제공된 서열을 비교하여 결정될 수 있다. 상기 배열은 어려움 없이 당업자에 의해 수행될 수 있다. 따라서, 서열 동일성은 상기 짝을 이루는 총 수에 대한 정보를 제공한다. 서열 동일성은, 바람직하게는 당업자에 의해 알려진 공적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램, 예를 들어, BLAST 및 FASTA를 사용하여 계산될 수 있다. 본 발명에 따라 고찰된 다른 서열 변형체는 SEQ ID NO: 1에서 나타낸 B7-H6을 엔코딩하는 핵산 서열에 대한 엄격한 혼성화 (hybridization) 조건 하에서 혼성화할 수 있는 핵산 분자에 의해 엔코팅된 것이다. 바람직하게는, 상기 B7-H6 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1에서 나타낸 핵산 서열에 의해 엔코딩된다. 본 발명에 따라 언급된 엄격한 혼성화 조건은 50℃ 또는 65℃에서 1 X SSC, 0.1% SDS에서 세척하여 50℃에서 7% 소듐 도데실 황산염 (sodium dodecyl sulfate) (SDS), 0.5 M NaPO₄, 1 mM EDTA에서 혼성화하는 것에 해당하고, 여기서 SEQ ID NO:1 또는 이의 역 상보체 (complement)의 적어도 100, 바람직하게는 적어도 150, 좀더 바람직하게는 적어도 200, 가장 바람직하게는 적어도 250 연속적 뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자 프로브 (probe)는 사용된다. 이러한 서열 변형체에서 상기 세포외 도메인의 제1 및 최종 아미노산이 상기 SEQ ID NO: 2에 대해 지시된 위치와 다를 수 있다는 것으로 이해될 것이다. 그러나, 상기 세포외 도메인은 상기 위치들에 상응하는 위치에서 출발 및 말단일 것이다. 이러한 상응하는 위치는 어려움 없이 당업자에 의해 서열 분석 도구에 의해 결정될 수 있다.

바람직하게는, 본 발명에 따라 언급된 바와 같은 항체는 단일클론 항체, 단일 사슬 항체, 키메라 항체 또는 어떤 단편 (fragment) 또는 전술된 결합 특성을 갖는 이러한 항체의 유도체를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 항체에 의해 포함된 이러한 단편 및 유도체는 합성 항체, Fab, F(ab)₂ Fv 또는 scFv 단편, 또는 어떤 이들 항체의 화학적으로 변형된 유도체를 포함한다. 본 발명에 의해 바람직하게 관찰된 화학적 변형은 본 명세서 어디에서나 명시된 바와 같은 검출가능한 마커 (marker)에 항체와 연결하기 위한 목표를 포함한다. 일반적으로, 항체 또는 이의 단편은, 예를 들어, Harlow and Lane "Antibodies, A Laboratory Manual", CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988에 기재된 방법을 사용하여 얻어질 수 있다.

유리하게, 본 발명의 항체는 고 친화력 (high affinity)으로 B7-H6에 특이적으로 결합한다. 본 발명을 기초한 연구에 있어서, 종래의 기술 (Brandt 2009, J. Exp. Med. 206(7): 1495-1503 및 US　2011/0081346)에서 기재된 또는 제안된 다른 항-B7-H6 항체와 비교하여, 상기 항체는, 예를 들어, 냉동 조직 섹션 상에서 면역 조직 화학 (immunohistochemistry)을 포함하는 생체외 적용뿐만 아니라 세포 배양 및 FACS 부류와 같은 생체 내 적용에서 특히 유용하다. 본 발명 덕분에, B7-H6의 결정에 기초한 암 진단은 개선될 것이다. 더욱이, B7-H6 양성 세포에 대한 항-종양 약물을 표적화하기 위한 목표로 삼는 치료학적 접근은 실현 가능하다.

본 발명의 항체의 바람직한 구현 예에 있어서, 상기 항체는 SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 15, 17, 및 19에서 나타낸 바와 같은 상보성 결정 부위 (CDRs)를 포함한다. 전술된 CDR의 핵산 서열은 IMGT-ONTOLOGY에 따른 주석이 달린다 (Giudicelli 및 Lefranc 1999, Bioinformatics 15:1047-1054 참조).

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "상보성 결정 부위" 또는 "cDR"는 항원 결합에서 특이성에 대해 담당하는 항체의 변화가능한 도메인을 의미한다. 일반적으로, 항원은 세 개의 CDRs (CDR1, CDR2 및 CDR3)을 포함한다. 이들 CDRs는 비-연속적 방식으로 배열된다. 상기 항체의 항원 인지 부위가 통상적으로 중쇄 (heavy chain) 및 경쇄 (light chain)상에 두 개의 변화가능한 도메인으로 구성되기 때문에, 여섯 개의 CDRs는 결합시 항원과 접촉한다. 상기 CDRs는 CDR 이식과 같은 종래의 분자 생물학 기술에 의해 하나의 항체 종에서 다른 종으로 이동될 수 있다 (Ewert 2004, Methods 34(2): 184-199; Benny K.C. Lo in Antibody Engineering - Methods in Molecular Biology 2004, Volume 248, II, 135-159, DOI 10.1385/1-59259-666-5:135 참조).

또 다른 바람직한 구현 예에 있어서, 본 발명의 항체는 단일클론 항체인 것을 상기로부터 이해될 것이다.

바람직하게는, 이러한 단일클론 항체는 포유류, 바람직하게는 쥐에 대해 상기 특징과 같은 세포외 도메인의 부분을 갖는 면역원성 (immunogenic) 폴리펩티드를 적용하여 제조될 수 있다. 좀더 바람직하게는, 상기 면역원성 폴리펩티드가 소 혈청 알부민, 티로글로불린 (thyroglobulin), 및 키홀 림펫 헤모시아닌 (keyhole limpet hemocyanin) (KLH)과 같은, 캐리어 단백질 (carrier protein)에 접합된다. 숙주 종에 의존하여, 다양한 보조제 (adjuvants)는 면역 반응을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 보조제는, 바람직하게는, Freund의 보조제, 미네랄 겔, 예를 들어, 수산화 알루미늄 (aluminum hydroxide), 및 표면 활성 물질, 예를 들어, 리소레시틴 (lysolecithin), 플루로닉 폴리올 (pluronic polyols), 폴리음이온 (polyanion), 펩타이드, 오일 에멀젼, 키홀 립펫 헤모시아닌, 및 디니트로페놀 (dinitrophenol)을 포함한다. 본 발명에 따른 단일클론 항체는 잘 알려진 융합세포주 (hybridoma) 기술, 사람 B 세포 융합세포주 기술, 및 EBV 융합세포주 기술을 사용하여 나중에 제조될 수 있다. 본 발명의 항체의 제조에 더욱 상세한 것은 하기 수반하는 실시 예에서 기재된다.

본 발명의 항체의 더욱 바람직한 구현 예에 있어서, 상기 항체는 "dSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH" 38124 Braunschweig, GERMANY on February 2, 2011 according to the Budapest Treaty by "deutsches Krebsforschungszentrum", Heidelberg, GERMANY에서 기탁 번호 DSM ACC 3117호하에서 기탁된 바와 같은 항체 또는 상응하는 융합세포주 세포 클론에 의해 생산된 항체이다.

전술된 항-B7-H6 mAb는 적어도 하나의 중쇄 및 적어도 하나의 경쇄를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 항-B7-H6 mAb는 SEQ ID NO: 3에서 나타낸 바와 같은 중쇄 (IGHV/IGHD/IGHJ)의 아미노산 서열을 갖고, 이에 의해 상기 분비된 형태 (IGHV/IGHD/IGHJ/IGHG1)는 SEQ ID NO: 11에서 나타내고, 막 결합 형태 (IGHV/IGHD/IGHJ/IGHG1)는 SEQ ID NO: 12에서 나타낸다. 상기 중쇄의 단편 1-4의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 4, 6, 8, 및 10에 나타내고, 상기 중쇄의 CDRs 1-3의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 5, 7, 및 9에서 나타낸다. 또한, 상기 항체는 SEQ ID NO: 13에서 나타낸 바와 같은 경쇄 (IGLV/IGLJ)의 아미노산 서열을 갖고, 이에 의해 IGLV/IGLJ/IGLC의 서열은 SEQ ID NO: 21에서 나타낸다. 상기 경쇄의 단편 1-4의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 14, 16, 18, 및 20에서 나타내고, 상기 경쇄의 CDRs 1-3의 핵산 서열은 SEQ ID NO: 15, 17, 및 19에서 나타낸다. 상기 항-B7-H6 mAb는 하나 이상의 아미노산의 치환, 부가 및/또는 삭제에 의해 그것과 다른, 전술된 SEQ ID NOs: 3-21의 변형체 서열에 의해 또한 대표될 수 있는 것으로 이해될 수 있다. 이러한 변형체 서열은 전술된 특이 항-B7-H6 mAb의 직렬상동 또는 다른 상동성 서열뿐만 아니라 다른 종으로부터 병렬상동 아미노산 서열일 수 있다. 바람직하게는, 이러한 변형체 서열은 상기 서열로 SEQ ID NOs: 3-21의 전체 길이 또는 적어도 50%에 걸쳐 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 동일하다. 용어 서열 동일성은 본 상세한 설명 어디서나 정의되고, 필요한 부분만 변형을 가하여 적용한다.

본 발명은 또한 암의 치료 및 진단에 사용하기 위한 본 발명의 항체에 관한 것이다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "치료"는 상기 질병을 치유, 즉, 질병 또는 이의 증상에 대한 대상에서 건강 상태의 회복뿐만 아니라, 본 발명에서 언급된 질병 또는 이의 증상의 개선 (amelioration)을 포함한다. 본 발명에 언급된 바와 같은 개선 (Amelioration)은 상기 질병 또는 상기 질병의 증상과 관련하여 건강한 상태로 상당한 향상을 의미한다. 이러한 상당한 향상은, 바람직하게는, 예를 들어, 대상을 조사하기 위하여 적용된 단계 (staging) 또는 등급 (grading) 시스템에서, 임상적으로 명백하다. 기술분야에서 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 본 명세서에 사용된 치료는 제공된 치료하에서 상기 대상의 모두 (즉, 100%)에 대해 적합한 것을 일반적으로 의도하지는 않는다. 그러나, 상기 용어는 대상의 통계적으로 의미 있는 부분이 치료될 수 있는 것을 요구한다 (예를 들어, 코호트 연구에서 코호트 (cohort)). 부분이 통계적으로 의미 있는지의 여부는 다양한 알려진 통계 평가 도구, 예를 들어, 신뢰 구간의 결정, p-값 결정, 학생의 t-시험, Mann-Whitney 시험 등을 사용하여 기술분야에서 당업자에 의해 문제없이 결정될 수 있다. 상세는 Dowdy 및 Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983에서 확인된다.

바람직하게는, 암을 치료하는데 사용하기 위한 본 발명의 항체는 세포독성제 (cytotoxic agent) 또는 항-종양제 (anti-tumor agent)에 연결되거나, 또는 암을 치료하기 위해 적절한 이러한 제제를 선발할 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이 용어 "제제 (agent)"는 원소, 화합물, 또는 다른 분자 엔티티 (예를 들어, 약학적 화합물, 치료학적 화합물, 또는 약리학적 화합물)를 의미한다. 이러한 제제는 천연, 합성 또는 이의 조합일 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "치료학적 제제"는 단독 또는 세포 또는 조직상에서 치료학적 또는 유리한 효과를 나타내는 다른 제제와 조합인 제제를 의미한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 치료학적 제제는 약물, 독소, 면역조절제 (immunomodulators), 킬레이트제 (chelators), 붕소화합물, 광활성제 (photoactive agents) 또는 염료, 및 방사성 동위원소 (radioisotopes)를 포함할 수 있다. 항체와 같은 폴리펩티드에 치료학적 제제를 연결하기 위한 기술은 당업자에게 잘 알려져 있다 (Amon et al. 1985, "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy (Reisfeld et al. eds., Alan R. Liss, Inc., 1985) 참조). 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "세포독성제"는 세포에 세포독성 또는 세포증식억제 (cytostatic) 효과를 갖는 제제를 의미하고, 이에 의해 세포 집단 내에 각각 세포의 성장을 억제하거나 또는 고갈시킨다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 세포독성제는 항-튜불린 제 (anti-tubulin agent) (예를 들어, 돌라스타틴 (dolastatins), 빈카 알카로이드 (vinca alkaloids), 포도필라톡신 (podophyllatoxins), 탁산 (taxanes), 바카틴 유도체 (baccatin derivatives), 크립토피신 (cryptophysins), 마이탄시노이드 (maytansinoids), 및 콤브레타스타틴 (combretastatins)), DNA 마이너 홈 결합제 (groove binding agents), DNA 복제 억제제, 알킬화제 (alkylating agents) (예를 들어, 백금 복합체 (platinum complexes)), 안트라사이클린 (anthracyclines), 항생제 (antibiotics), 항엽산제 (antifolates), 항대사물질 (antimetabolites), 화학요법 증감제 (chemotherapy sensitizers), 듀오카르마이신 (duocarmycins), 에토포사이드 (etoposides), 플루오르화 피리미딘 (fluorinated pyrimidines), 이오노포어 (ionophores), 렉시트롭신 (lexitropsins), 미트로소우레아 (nitro soureas), 플라티놀 (platinols), 예비-형성 화합물 (pre-forming compounds), 푸린 항대사물질 (purine antimetabolites), 프로마이신 (puromycins), 방사선 증감제 (radiation sensitizers), 스테로이드 (steroids), 탁산 (taxanes), 토포아이소모라제 억제제 (topoisomerase inhibitors), 빈카 알칼로이드 (vinca alkaloids), 또는 이와 유사한 것을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "항-종양제"는 암 세포에 대한 세포독성 또는 악성 효과 (malign effect)를 가져, 이에 의해 세포 사멸을 바람직하게 결과하는 종양에서 암 세포들의 개별적인 성장을 저지하는 제제를 의미한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 표적 세포 (예를 들어, 암 세포) 및 표적 세포 사멸을 결과하는 상기 항체 (예를 들어, 천연 킬러 세포, 단핵구 (monocytes), 과립구 (granulocytes))에 대한 수용체를 발현하는 특이 효과인자 세포 (effector cell)에 결합한다. 본 발명의 또 다른 바람직한 구현 예에 있어서, 본 발명의 항체는 링커를 통해 세포독성제 또는 항-종양제에 연결된다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 링커는 세포 내 조건하에서 절단가능한 링커를 포함할 수 있다 (예를 들어, 세포 내 프로테아제, 디펩타이드 링커, 디설파이드 링커, 및 가수분해가능한, 예를 들어, pH 5.5 미만에서 가수분해가능한 링커에 의해 절단가능한 펩타이드 링커). 그러나, 본 발명의 항체는 암에 포함된 신호 캐스캐이드 (signaling cascades)의 조절자 (modulator)로서 B7-H6상에 이의 차단 및 결합 특성에 기인하여 암을 치료하는데 사용될 수 있다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "진단"은 본 명세서에 언급된 질병으로부터 고통받는 대상의 여부를 평가하는 것을 의미한다. 기술 분야에서 당업자에게 이해될 수 있는 바와 같이, 이러한 평가는 확인하기 위한 대상의 모두 (즉, 100%)에 대해 적합한 것으로 일반적으로 의도되지는 않는다. 그러나, 상기 용어는 대상의 통계적으로 의미 있는 부분이 확인될 수 있는 것을 요구한다 (예를 들어, 코호트 연구에서 코호트). 부분이 통계적으로 의미있는지의 여부는 본 명세서 어디서나 언급된 여려 잘 알려진 통계적 평가 도구를 사용하여 기술분야의 당업자에게 문제없이 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 진단은 연관된 질병의 모니터링, 확인 및 서브-분류에서 방법의 적용을 포함한다. 더욱이, 본 명세서에 사용된 바와 같은 진단의 확립은 대상에 대한 예후를 확립하는 것을 포함한다. 이러한 진단은 미래 시간 창 (future time window), 즉, 예측 창 (predictive window)에서 질병의 또 다른 전개에 대한 예측 표시기 (predictive indicator)이다. 따라서, 본 명세서에 사용된 진단은, 바람직하게는 대상이 상기 질병 또는 미래에 질병 증상에 관하여 개선될 것인지의 여부 또는 상기 질병 또는 증상이 더 나빠지는 지의 여부의 예측을 포함한다. 따라서, 본 발명의 항체는 또한 위험 계층화 접근법, 및 따라서, 본 명세서에 언급된 질병으로부터 고통받는 개별적 대상에 대해 요구될 수 있는 집중 치료 및 입원기간의 양을 결정하기 위해 적용될 수 있다.

바람직하게는, 진단에서 사용하기 위한 본 발명의 항체는 검출제 (detection agent)에 연결되었거나 또는 이러한 제제를 선발할 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 검출제는 방사선 동위원소 (radioactive isotope) (예를 들어, 요오드 테크니튬 (Iodide Technetium)의 방사선 동위원소), 형광 (fluorescent) 또는 화학발광 제제 (chemoluminescent agents) (예를 들어, FITC, 로다민 (rhodamin)), 기질 (예를 들어, 호스래디시 페록시다아제 (horseradish peroxidase), 파이어플라이 루시퍼레이즈 (firefly luciferase), 또는 베타 갈락코시다제 (beta galactosidase)), 형광 단백질 (예를 들어, 그린-, 블루-, 또는 레드-형광 단백질)을 전환하여 검출가능한 신호를 발생할 수 있는 효소를 포함한다. 적절한 검출제는 기술분야에서 잘 알려져 있다. 또한 바람직하게는, 본 발명의 방법에 적용될 항체는 검출제를 끌어당길수 있는 제제와 연결될 수 있다. 이러한 제제는 바이오틴 (biotin)일 수 있다. 이러한 경우에 있어서, 아비딘 (avidin)- 또는 스트렙타비딘 (streptavidin) 연결 검출제는 검출가능한 마커로서 제공될 수 있는 결합 항체의 바이오틴의 결합시 사용될 수 있다. 이러한 경우에 있어서 적절한 검출가능한 마커는 상기에서 언급된 것, 좀더 바람직하게는, 효소는 이러한 경우에 있어서 검출가능한 마커로서 사용될 수 있다. 더욱이, 제2 항체는 상기 제1 항체의 검출, 즉, 상기 시료의 B7-H6 폴리펩티드에 결합된 본 발명의 방법에서 적용될 항체의 검출을 위해 사용될 수 있다. 이러한 제2 항체는 전술된 바와 같은 검출가능한 마커에 연결될 수 있다. 따라서, 후자의 경우에 있어서, 제2 항체는 검출가능한 신호를 발생하는 상기 제1 항체에 결합할 수 있고, 이에 의해 상기 결합 제1 항체의 검출을 가능하게 한다. 제2 항체와 결합 항체의 검출의 원리는 기술분야에서 잘 알려져 있고, 예를 들어, 조직 섹션에 결합하는 항체를 결정하기 위하여 일상적으로 적용된다. 검출가능한 마커의 타입에 의존하여, 다른 검출 방법은 상기 검출가능한 마커에 의해 발생된 신호에 대한 리더 시스템 (reader system)을 사용하여 적용될 수 있다. 이러한 시스템은 ELISA 또는 RIA 리더와 같은, 자동 신호 리더 장치를 포함하지만, 또한 검출가능한 신호의 수동 또는 자동 검출을 위한 현미경 장치를 포함한다. 더구나, 상기 리더 시스템은 상기 시료의 부가적 정보를 결정할 수 있는데, 예를 들어, 현미경 시스템은 부가적으로 상기 시료에 의해 포함된 또 다른 바이오마커를 결정할 수 있는 자동 신호 리더 또는 선택적으로 세포의 조직 섹션을 표현할 수 있다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "암"은 어떤 악성 종양 (malignant neoplasm)을 의미한다. 상기 악성 종양은 기관에서 손상된 세포의 원하지 않는 성장, 침윤, 및 어떤 조건하에서 천이 (metastasis)로부터 결과하는 질병을 의미한다. 암을 유발하는 세포는 유전적으로 손상되고, 일반적으로 세포 분열 (cell division), 세포 이주 습성 (cell migration behavior), 분화상태 (differentiation status) 및/또는 세포 사멸 절차 (cell death machinery)를 조절할 수 있는 이들의 능력을 상실한다. 대부분 암은 종양을 형성하지만, 백혈병과 같은 몇몇 조혈계 (hematopoietic) 암는 아니다. 본 발명에 따른 암은 별도의 언급이 없는 한 B7-H6 폴리펩티드를 발현하는 암 세포를 포함할 수 있다. 암의 바람직한 타입은 T 세포 림프종, 골수성 백혈병, 대장암, B 세포 림프종, 흑색종, 또는 자궁 경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 암에 대한 증상 및 단계 시스템은 기술분야에서 잘 알려져 있고, 병리학의 표준 교과서에 기재되었다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 암은 상기 암 또는 조직 또는 이에 영향을 받는 기관의 어떤 단계, 등급, 형태론적 특징, 생체침입성 (invasiveness), 공격성 (aggressiveness) 또는 악성종양을 포함한다.

본 발명은 염증성 질병의 치료 또는 진단에서 사용하기 위한 본 발명의 항체에 관한 것이다.

바람직하게는, 염증성 질병을 치료하는데 사용하기 위한 본 발명의 항체는 항-염증제 (anti-inflammation agent)와 연결되거나 또는 본 명세서에 어디에서 특정된 바와 같은 이러한 제제를 선발할 수 있다. 그러나, 본 발명의 항체는 염증에 포함된 신호 캐스캐이드의 조절제로서 B7-H6 상에 이의 차단 및 결합 특성에 기인한 염증성 질병에 대해 사용될 수 있다.

바람직하게는, 진단에 사용하기 위한 본 발명의 항체는 검출제와 연결되거나 또는 본 명세서 어디에서나 특정된 바와 같은 이러한 제제를 선발할 수 있다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "염증성 질병"은 조직의 손상 또는 파괴에 반응하여 염증성 사이토킨 및 염증성 세포 침투를 포함하는 조직 반응을 의미한다. 본 발명에 따른 염증성 질병은 바이러스 감염, 및 박테리아 감염을 포함할 수 있다. 부가적으로, 당뇨병과 같은 자가면역 질병, 다발성 경화증 (multiple sclerosis) 및 염증성 볼 병 (bowl disease)은 포함된다.

본 발명은 하기 단계를 포함하는 암으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상의 시료에서 암을 진단하기 위한 방법에 관한 것이다:

a) B7-H6 폴리펩티드 상에 항체와 이의 에피토프의 결합을 허용하는 조건 하에서 본 발명의 항체와 시료를 접촉시키는 단계; 및

b) 상기 에피토프에 대한 항체의 결합을 결정하여, 이에 의해 암이 진단되는 결정 단계.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "진단 (diagnosing)"은 본 명세서에 언급된 질병으로부터 고통받는 대상의 여부를 평가하는 것을 의미한다. 기술 분야에서 당업자에게 이해될 수 있는 바와 같이, 이러한 평가는 확인하기 위한 대상의 모두 (즉, 100%)에 대해 적합한 것으로 일반적으로 의도되지는 않는다. 그러나, 상기 용어는 대상의 통계적으로 의미 있는 부분이 확인될 수 있는 것을 요구한다 (예를 들어, 코호트 연구에서 코호트). 부분이 통계적으로 의미있는지의 여부는 본 명세서 어디서나 언급된 여려 잘 알려진 통계적 평가 도구를 사용하여 기술분야의 당업자에게 문제없이 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 진단은 연관된 질병의 모니터링, 확인 및 서브-분류에서 방법의 적용을 포함한다. 더욱이, 본 명세서에 사용된 바와 같은 진단의 확립은 대상에 대한 예후를 확립하는 것을 포함한다. 이러한 진단은 미래 시간 창, 즉, 예측 창에서 질병의 또 다른 전개에 대한 예측 표시기이다. 따라서, 본 명세서에 사용된 진단은, 바람직하게는 대상이 상기 질병 또는 미래에 질병 증상에 관하여 개선될 것인지의 여부 또는 상기 질병 또는 증상이 더 나빠지는 지의 여부의 예측을 포함한다. 따라서, 본 발명의 항체는 또한 위험 계층화 접근법, 및 따라서, 본 명세서에 언급된 질병으로부터 고통받는 개별적 대상에 대해 요구될 수 있는 집중 치료 및 입원기간의 양을 결정하기 위해 적용될 수 있다.

상기 대상의 시료에서 암을 진단하기 위한 전술된 방법은 또한, 바람직하게는, 상기 방법에 의해 얻어진 진단 결과에 기초하여 대상에 대한 항-암 치료를 권고하는 단계를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "권고하는"은 항-암 치료에 대해 권고하거나 또는 대상에 대한 특정 항암 치료를 제외하는 (즉, 권고하지 않는) 것을 의미한다. 이러한 권고는 임상의가 개별적 대상에 대한 특정 항-암 치료를 적용할지 또는 아닌지에 대한 기초로서, 다른 정보, 예를 들어, 조직병리학적 조사로부터의 정보와 함께 선택적으로 제공될 수 있다. 본 발명의 진단, 즉, 암 또는 암이 아닌 진단에 기초하여, 항-암치료에 대한 권고가 이루어질 것이다. 오직 암의 진단이 본 발명의 방법에 의해 확립된 경우에 있어서, 항-암 치료에 대한 권고는 이루어질 수 있는 것으로 이해될 수 있다. 본 발명의 방법에 기초한 진단으로서 암이 아닌 경우에 있어서, 상기 권고는 항-암 치료를 자제할 수 있다. 전술된 바와 같이, 상기 대상의 시료로부터 유래된 또 다른 정보는 상기 권고를 개선할 뿐만 아니라 사용될 수 있다. 관점에 있어서, 예를 들어, 다른 항종양 약물과 함께, 조합된 항-암 치료는, 만약 본 발명의 방법이 암 세포를 확인하였지만, 만약 본 발명의 방법에 의해 확인되지 않는 또 다른 암세포가, 조사된 암에서 검출, 예를 들어, 조직병리학적 분석에 의해 검출된다면 권고될 수 있다.

상기 용어 "시료"는 분리된 세포의 시료 또는 조직 또는 기관으로부터 시료를 의미한다. 조직 또는 기관 시료는, 예를 들어, 조직 검사 (biopsy)에 의해, 어떤 조직 또는 기관으로부터 얻어질 수 있다. 분리된 세포는 림프, 혈액, 혈장, 혈청, 용액 (liquor) 및 다른 것과 같은 체액, 또는 원심분리 또는 세포 분류와 같은 분리 기술에 의해 조직 또는 기관으로부터 얻을 수 있다. 바람직하게는, 상기 시료는 본 발명에서 언급된 폴리펩티드를 발현 또는 생산하는 조직 또는 체액 시료이다. 상기 시료는 기술분야에서 당업자에게 잘 알려진 일상적 기술에 의해, 예를 들어, 대상으로부터 조직 또는 세포 물질의 흡입 (aspiration)을 포함하는 개방 조직검사 (open biopsy)에 의해 얻어질 수 있다. 개방 조직검사를 통해 쉽게 도달될 수 없는 영역에 대하여, 수술 및 바람직하게는 최소 침습 수술 (minimal invasive surgery)은 수행될 수 있다.

본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "대상"은 동물, 바람직하게는 포유류, 및 좀더 바람직하게는 사람을 의미한다. 본 발명의 방법은 암으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상에 대해 적용될 수 있다. 암으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상은 상기 암의 임상적으로 뚜렷한 증상을 나타내는 대상이거나 또는 암에 대한 증가된 소인 (predisposition)을 갖는 대상이다. 대규모 진단 스크린 시험 (large scale diagnostic screening trials)의 상황에 있어서, 암으로부터 고통받는 것으로 의심받는 대상은 심지어 건강한 대상, 즉, 상기 질병의 증상을 보이지 않는 대상 또는 이의 소인을 갖는 대상이 아닐 수 있다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "접촉" 및 "상기 시료를 접촉하는"은 상기 항체 및 시료가 물리적 접촉을 하고, 이에 의해 만약 상기 시료에 의해 포함된다면 B7-H6 폴리펩티드상에 에피토프에 대한 항체의 특이적 결합을 허용하는 것을 의미한다. 본 명세서에서의 의미로 접촉은 상기 B7-H6 폴리펩티드에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 허용하기에 충분한 시간 및 조건하에서 수행되는 것으로 이해될 것이다. 상기 시료의 본질에 의존하여, 전-처리 단계는 상기 B7-H6 폴리펩티드를 방출하기 위하여 또는 상기 항체가 평가되고 이에 특이적으로 결합하도록 상기 B7-H6 폴리펩티드에 에피토프를 디-마스크 (de-mask)하기 위하여 필수적일 수 있다. 더욱이, 상기 시료의 종류에 의존하여, 상기 취급은 다를 수 있다. 예를 들어, B7-H6 폴리펩티드의 존재 또는 부재를 위해 분석될 수 있는 조직 시료는, 바람직하게는 균질화되고, 상기 조직에 의해 포함된 단백질은, 예를 들어, 당업자에게 잘 알려진 SDS PAGE 또는 다른 단백질 분리 방법에 의해, 추출되고 (isolated) 분리된다. 상기 분리된 단백질은 본 명세서에 정의된 항체를 사용하여 웨스턴 블럿과 같은 면역학적 방법에 의해 B7-H6 폴리펩티드의 존재 또는 부재에 대해 분석된다. 이들 방법은 또한 상기 B7-H6 폴리펩티드에 대한 항체의 특이적 결합을 허용하는 배양 단계를 또한 포함한다. 상기 특이성을 증가시키기 위하여, 세척 단계는 수행되어야 한다. 이러한 측정을 수행하는 방법은 기술분야에 당업자에게 잘 알려져 있다. 만약 조직 섹션이 시료 (즉, 조직 섹션 시료)로서 사용된다면, 이것은 B7-H6 폴리펩티드의 존재 또는 부재뿐만 아니라 세포 내 또는 서브 세포 내 이의 부위도 분석하기 위해 관찰되는 것으로 이해될 것이다. 따라서, 상기 조직은 원래대로 유지하고, 항체 결합 전 또는 후의 조직화학적 염색 기술 (histochemical staining techniques)에 의해 염색될 수 있다. 조직 섹션의 면역염색을 허용하는 적절한 기술은 기술분야의 당업자에게 잘 알려져 있다. 상기 조직 섹션 시료가 파라핀과 같은, 내장형 배지 (embedding medium)에 내장된지의 여부에 의존하여, 상기 내장형 배지의 제거는 필수적이다. 연관된 기술은 또한 기술분야에서 잘 알려져 있다.

본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "결정"은, 만약 있다면, 상기 시료에 포함된 상기 B7-H6 폴리펩티드에 특이적으로 결합된 항체의 검출을 의미한다. 항원에 특이적으로 결합된 항체에 대한 검출 방법은 기술분야에서 잘 알려져 있다. 바람직하게는, 본 발명 자체의 방법에서 적용된 항체는 방사선 동위원소 (예를 들어, 요오드 테크니튬의 방사선 동위원소), 형광 또는 화학발광 제제 (예를 들어, FITC, 로다민), 기질 (예를 들어, 호스래디시 페록시다아제 (horseradish peroxidase), 파이어플라이 루시퍼레이즈 (firefly luciferase), 또는 베타 갈락코시다제 (beta galactosidase)), 형광 단백질 (예를 들어, 그린-, 블루-, 또는 레드-형광 단백질)과 같은 검출가능한 마커에 연결될 수 있다. 적절한 검출가능한 마커는 기술분야에서 잘 알려져 있다. 또한 바람직하게는, 본 발명의 방법에 적용될 항체는 검출제를 끌어들일 수 있는 제제와 연결될 수 있다. 이러한 제제는 바이오틴일 수 있다. 이러한 경우에 있어서, 아비딘- 또는 스트렙타비딘 연결된 검출제는 검출가능한 마커로서 제공될 수 있는 결합 항체의 바이오틴의 결합시 사용될 수 있다. 이러한 경우에 있어서, 적절한 검출가능한 마커는 전술된 것이고, 좀더 바람직하게는, 효소는 이러한 경우에 있어서 검출가능한 마커로서 사용될 수 있다. 더욱이, 제2 항체는 상기 제1 항체, 즉, 상기 시료의 B7-H6 폴리펩티드에 결합된 본 발명의 방법에 적용된 항체의 검출에 대해 사용될 수 있다. 이러한 제2 항체는 전술된 바와 같은 검출가능한 마커에 연결될 수 있다. 따라서, 후자의 경우에 있어서, 상기 제2 항체는 검출가능한 신호를 발생하는 상기 제1 항체에 결합할 것이고, 이에 의해 상기 결합 제1 항체의 검출을 가능하게 한다. 제2 항체와 결합 항체의 검출의 원리는 기술분야에서 잘 알려져 있고, 예를 들어, 조직 섹션에 항체 결합을 결정하기 위해 일상적으로 적용된다. 검출가능한 마커의 타입에 의존하여, 다른 검출 방법은 상기 검출가능한 마커에 의해 발생된 신호에 대한 리더 시스템을 사용하여 적용될 수 있다. 이러한 시스템은 ELISA 또는 RIA 리더와 같은 자동 신호 리더 장치를 포함하고, 그러나 또한 검출가능한 신호의 수동 또는 자동 검출을 위한 현미경 장치를 포함한다. 더욱이, 상기 리더 시스템 (reader system)은 상기 시료의 부가적 정보를 결정할 수 있고, 예를 들어, 현미경 시스템은 조직 섹션의 세포를 나타낼 수 있거나, 또는 자동 신호 리더는 부가적으로 상기 시료에 의해 포함된 추가 바이오마커를 결정할 수 있다.

본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는 염증성 질병으로부터 고통받는 의심받는 대상의 시료에서 염증성 질병을 진단하기 위한 방법을 제공한다:

a) B7-H6 폴리펩티드 상에 상기 항체와 이의 에피토프의 결합을 허용하는 조건 하에서 상기 항체와 시료를 접촉시키는 단계; 및

상기 용어의 설명은 암을 진단하기 위한 방법과 연관하여 설명되거나 또는 본 명세서에서의 다른 구현 예를 하기에 명시된 바와 같은 전술된 방법과 연관하여 용어에 대해 필요한 변경을 가하여 적용한다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "대상"은 동물, 바람직하게는 포유류, 좀더 바람직하게는 사람을 의미한다. 본 발명의 방법은 염증성 질병으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상에 대해 적용될 수 있다. 염증성 질병으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상은 염증성 질병의 임상적으로 뚜렷한 증상을 나타내는 대상이거나 또는 염증성 질병에 대해 증가된 소인을 갖는 대상이다. 대규모 진단 스크린 시험에 있어서, 염증성 질병으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상은 비록 건강한 대상일 지라도, 즉, 상기 질병의 증상을 나타내지 않는 또는 이의 소인을 갖지 않는 대상일 수 있다.

본 명세서에서 논의된 바와 같이, 상게에서 언급된 상기 염증성 질병은 명확하게는 바이러스 감염이다.

본 발명은 또한 하기를 포함하는 시료에서 염증성 질병 또는 암을 진단하기 위한 장치에 관한 것이다:

a) 본 발명의 항체를 포함하는 분석 단위; 및

b) 상기 B7-H6 폴리펩티드 상에 항체의 에피토프에 분석 단위에서 상기 항체의 결합을 검출하는 검출기.

본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "장치"는 서로 작동적으로 연결된 적어도 전술된 분석 단위 및 평가 단위를 포함하는 시스템을 의미한다. 작동 방식에서 상기 장치의 단위를 연결하는 방법은 상기 장치에 포함된 단위의 타입에 의존할 것이다. 예를 들어, 시료의 자동 분석을 위한 단위는 적용되고, 상기 자동적으로 작동 분석 단위에 의해 얻어진 데이터는, 예를 들어, 상기 평가 단위에 의해 원하는 결과를 얻기 위하여 컴퓨터 프로그램에 의해 처리될 수 있다. 바람직하게는, 상기 단위는 이러한 경우에 있어서 단일 장치에 의해 포함된다. 상기 분석 단위는 고체 지지체 상에 고정화된 형태의 항체를 포함할 수 있다. 이러한 분석 단위는 액체 시료를 위해 특히 유용하다. 본 발명의 장치로 조사될 시료는 바람직하게는 조직 시료, 좀더 바람직하게는, 조직 섹션 시료이다. 따라서, 또 다른 관점에 있어서, 상기 항체는 상기 분석 단위에 의해 조직 섹션과 같은 조직 시료에 적용될 수 있는 검출 용액에 포함될 수 있다. 상기 검출 용액은 상기 장치의 외부일지라도, 분석 단위 또는 분리 바이알에 저장될 수 있다. 평가 단위, 바람직하게는 컴퓨터, 또는 데이터 처리 장치는 상기 분석 단위에 의해 결정된 결합을 평가하기 위한, 시행된 규칙, 즉, 알고리즘 (algorithm)을 포함하고, 이에 의해 상기 결합은 신호 타입, 강도, 및 조직 시료의 경우에 있어서, 상기 조직에 대한 상기 신호의 위치에 기초한 의미 있는 또는 의미 없는 결합으로 평가된다. "암이 아님"으로 진단하는 의미 없는 결합을 나타내도록 평가된 시료에 대해 확립될 것이다. 만약 의미 있는 결합이 평가의 결과로서 얻어진다면, 상기 진단 암은 확립될 것이다.

바람직하게는, 이의 평가 단위에서 장치는 또한 본 명세서에 더욱 상세하게 설명된 바와 같이 적절한 치료 또는 처치에 대한 확립된 진단에 기초하여 권고하는데 적용된 알로리즘으로 실행된 전문 시스템을 포함한다.

최종적으로, 본 발명은 본 발명의 항체 및 바람직하게는 상기 B7-H6 폴리펩티드 상에 상기 항체와 이의 에피토프의 결합의 검출을 위한 제제를 포함하는 암 또는 염증성 질병을 진단하기 위한 키트에 관한 것이다.

본 명세서에 사용된 바와 같이 용어 "키트"는 전술된 항체의 수집물 및 시료에서 암을 진단하기 위해 즉시-사용 방식으로 제공된 지시서를 의미한다. 상기 항체 및 지시서는, 바람직하게는, 단일 용기에서 제공된다. 바람직하게는, 상기 키트는 또한 진단을 수행하기에 필수적인 또 다른 성분을 포함한다. 이러한 성분은 상기 항체 결합의 검출을 위해 요구된 보조제, 분석 또는 보정 표준이 될 시료를 미리-처리하기 위한 제제일 수 있다.

본 명세서에 예시된 모든 참조는 이들의 전체 개시 내용 및 본 명세서에 언급된 개시 내용에 대하여 참조로서 포함된다.

실시 예

하기 실시 예를 통하여 본 발명을 좀더 구체적으로 설명하지만, 하기 예에 본 발명의 범주가 한정되는 것은 아니다.

실시 예 1: 항-B7-H6 단일클론 항체 (mAb) 1.18를 얻기 위한 면역 방법:

6주령 BALB/c 쥐는 네 개의 다른 부위에 피하주사된 완전 프로인트 보조제 (complete Freud's Adjuvant)에서 도 1에 나타낸 IgG1-Fc 도메인 (B7-H6-Ig-FP)에 융합된 B7-H6의 세포외 도메인으로 이루어진 100 ㎍의 B7-H6-Ig-융합단백질로 면역된다. 3주 후, 100 ㎍ B7-H6-Ig-FP는 PBS에서 복강내 주사된다. 3주 후, PBS에서 BA/F3 (pro-B 세포)-B7-H6 형질감염체 (2 x 10⁷ 세포)가 복강내 주사된다. 두 달 후, PBS에서 100 ㎍ B7-H6-Ig-FP는 복강내 적용된다. 3주 후, PBS에서 BA/F3-B7-H6 형질감염체 (2 x 10⁷ 세포)로 복강내 주사는 수행되고, 5일 후, 비장 세포는 Ag8 쥐 골수 세포 (myeloma cell)로 융합된다. 910 융합세포주는 BA/F3-B7-H6 세포에 생산된 면열글로불린의 결합을 위한 유동 세포 분석법 (flow cytometry)에 의해 스크린된다. 부가적으로, 480 클론은 상기 B7-H6-Ig-FP에 결합하기 위해 ELISA에 의해 스크린된다. 항-B7-H6 클론 1.18은 추가 연구를 위해 선택되는데, 이것은 높은 수준에서 대조구 벡터 변환된 (transduced) BA/F3 세포가 아닌 BA/F3-B7-H6 형질감염체을 염색하고, 이것은 높은 수준에서 내인성으로 B7-H6을 발현하는 세포주에 결합하기 때문이다.

실시 예 2: ELISA에 의해 B7-H6-Ig-FP 및 유동세포 분석법에 의해 BA/F3-B7-H6 형질전환된 세포에 항-B7-H6 mAb 1.18의 결합

ELISA에 대하여: B7-H6-Ig-FP (3 ㎍/ml)는 ELISA 플레이트에 고정되고, 항-B7-H6 mAb 1.18의 지시된 농도로 배양되며, HRP-접합 mAbs로 발달된다.

유동세포 분석법에 대하여: BA/F3 또는 BA/F3-B7-H6 형질감염체는 항-B7-H6 mAb 1.18 (2 ㎍/ml), 동종형 (isotype) 대조구, NKp30-FP 및 대조구 FP 및 PE-접합 제2 mAbs로 염색된다.

상기 데이터는 ELISA에 의해 B7-H6-Ig-FP 및 유동세포 분석법에 의해 BA/F3-B7-H6 형질전환된 세포에 항-B7-H6 mAb 1.18의 결합을 예측한다.

실시 예 3: 항-B7-H6 1.18 mAb의 결합은 B7-H6의 IgV 도메인을 포함한다: CD8-리더 펩타이드 및 B7-H6의 하기 부분에 대해 엔코딩하는 C-터미널 HA-tag를 갖는 상기 pcDNA3.1에 기초하여 하기 구조는 제조된다:

B7-H6_1 (아미노산 24-454)

B7-H6_2 (아미노산 83-454)

B7-H6_3 (아미노산 141-454)

B7-H6_4 (아미노산 190-454)

B7-H6_5 (아미노산 239-454)

최종 플라스미드는 HEK 세포에서 일시적으로 형질전환되고, 실시 예 2에서 기재된 바와 같이 상기 항-B7-H6 1.18 mAb로 나중에 염색된다. 도 5에서 알 수 있는 바와 같이, 상기 항-B7-H6 1.18 mAb는 B7-H6_1 (아미노산 24-454) 및 B7-H6_2 (아미노산 83-454)에 결합되지만, B7-H6의 아미노산 83-141 (도 1 및 2 및 SEQ ID NO: 22에 나타낸 바와 같은, GDHQEAFRPGAIVSPWRLKSGDASLRLPGIQLEEAGEYRCEVVVTPLKAQGTVQLEVV)이 항-B7-H6 mAb 1.18의 결합에 포함된 것을 나타내는 B7-H6_3 (아미노산 141-454)에는 결합되지 않는다. 절단형 (truncated) B7-H6의 모든 단백질은 발현되고, 상기 항-HA-tag mAb을 사용하는 웨스턴 블럿팅에 의해 검출가능하다.

실시 예 4: 다른 기원의 세포주에 항-B7-H6 mAb 1.18의 결합: 다른 기원의 세포주는 항-B7-H6 mAb 1.18로 염색되며, 실시 예 2에 기재된 바와 같은 유동세포 분석법에 의해 분석된다. 상기 데이터는 다른 기원의 세포주에 항-B7-H6 mAb 1.18의 결합을 나타낸다.

실시 예 5: B7-H6 mRNA 발현을 결정하기 위해 정량 실-시간 PCR: RNA는 RNeasy Mini kit (Qiagen)를 사용하여 종양 세포주로부터 추출되고, 오염 DNA는 TURBO DNase (Ambion)을 사용하여 제거되며, 상기 RNA는 ProtoScript M-MuLV 제1 가닥 cDNA 합성 키트 (NEB)를 사용하여 역전사된다. 정량 실-시간 PCR은 SYBR Green I Master 및 LightCycler480 (Roche)을 사용하여 수행된다. B7-H6 (SEQ ID NO: 23에서 나타낸 바와 같은 GACCTGGAGCCATTGTGTCT 및 SEQ ID NO: 24에서 나타낸 바와 같은 AAGCTGGACTGTTCCCTGTG) 및 하우스키핑 유전자 GAPDH (SEQ ID NO: 25에서 나타낸 바와 같은 GCAAATTCCATGGCACCGT 및 SEQ ID NO: 26에서 나타낸 바와 같은 TCGCCCCACTTGATTTTGG)에 대한 특이 프라이머는 GAPDH과 비교하여 B7-H6 mRNA 발현 수준을 계산하는데 사용된다. 상기 데이터는 다른 양에서 B7-H6의 항-B7-H6 mAb 1.18 발현 mRNA로 염색된 다른 기원의 세포주를 나타낸다.

실시 예 6: Ba/F3-B7-H6 형질감염체의 시토스핀상에 B7-H6의 면역조직화학 염색. Ba/F3 및 Ba/F3-B7-H6 세포의 1:1 혼합물의 아세톤-고정 시토스핀 (Acetone-fixed cytospin)은 Dual Envision+ System-HRP (Dako)을 사용하여 염색된다. 내인성 과산화효소 활성 (endogenous peroxidase activity) 차단 후, 시토스핀은 10% 염소 혈청 및 0.1 mg/ml 사람 IgG로 차단된다. 상기 시토스핀은 5 ㎍/ml 항-B7-H6 mAb 1.18 또는 Dako 항체 희석액에서 쥐 IgG1 동종형 대조구 (클론 11711, R&D)으로 배양되고, 염소 항-쥐 및 염소 항-토끼 면역글로빈에 접합된 Dako 과산화효소 라벨된 중합체로 세척하고 배양된다. 3,3'-디아미노벤지딘 (DAB) 기질 용액으로 배양한 후, 세포 핵은 헤마톡실린 (Hematoxylin)과 대비염색되고, 장착된 시토스핀은 광 현미경에 의해 분석된다. 상기 데이터는 항-B7-H6 mAb 1.18이 시토스핀 상에 B7-H6 Ba/F3-B7-H6 형질감염체를 염색하는 것으로 나타난다.

실시 예 7: B7-H6으로 변환된 BA/F3 세포와 공-배양 후 주된 NK 세포의 탈과립화. 14일 동안 IL-2로 확장된 주된 NK 세포는, 5시간 동안 PE-접합된 항-CD107 mAb의 존재하에서 BA/F3, BA/F3-B7-H6 (NKp30에 대한 리간드) 또는 BA/F3-MICA (활성 수용체 NKG2D에 대한 리간드) 세포와 함께, 배지에서 배양된다. NK 세포의 탈과립화는 유동세포 분석법에 의해 공-배양 후 CD107-양성 NK 세포의 퍼센트로 결정된다. 에러 바는 삼중 배양의 평균 ± SD를 예측한다. 상기 데이터는 BA/F3-B7-H6 세포가 주된 NK 세포의 탈과립화를 유도한다는 것을 나타낸다.

SEQUENCE LISTING <110> Deutsches Krebsforschungszentrum <120> B7-H6 therapeutically active monoclonal antibody against B7-H6 polypeptide <130> DK10314PC <160> 26 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1653 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggaacaac ggggacagaa cgccccggcc gcttcggggg cccggaaaag gcacggccca 60 ggacccaggg aggcgcgggg agccaggcct gggccccggg tccccaagac ccttgtgctc 120 gttgtcgccg cggtcctgct gttggtctca gctgagtctg ctctggaatc cgatctgaaa 180 gtagagatga tggcaggggg gactcagatc acacccctga atgacaatgt caccatattc 240 tgcaatatct tttattccca acccctcaac atcacgtcta tgggtatcac ctggttttgg 300 aagagtctga cgtttgacaa agaagtcaaa gtctttgaat tttttggaga tcaccaagag 360 gcattccgac ctggagccat tgtgtctcca tggaggctga agagtgggga cgcctcactg 420 cggctgcctg gaatccagct ggaggaagca ggagagtacc gatgtgaggt ggtggtcacc 480 cctctgaagg cacagggaac agtccagctt gaagttgtgg cttccccagc cagcagattg 540 ttgctggatc aagtgggcat gaaagagaat gaagacaaat atatgtgtga gtcaagtggg 600 ttctacccag aggctattaa tataacatgg gagaagcaga cccagaagtt tccccatccc 660 atagagattt ctgaggatgt catcactggt cccaccatca agaatatgga tggcacattt 720 aatgtcacta gctgcttgaa gctgaactcc tctcaggaag accctgggac tgtctaccag 780 tgtgtggtac ggcatgcgtc cttgcatacc cccttgagga gcaactttac cctgactgct 840 gctcggcaca gtctttctga aactgagaag acagataatt tttccattca ttggtggcct 900 gatatcactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgagggcgc gccgtcagtc 960 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 1020 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 1080 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 1140 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 1200 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1260 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1320 aaccaggtca gcctgcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1380 gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1440 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1500 ctctccctgt ctccgggtaa acatatggga ggtgacgaaa agaccaccgg ctggcgcggc 1560 ggccacgtgg tggaaggcct ggccggcgaa ctggaacagc tgcgcgcccg cctggaacac 1620 cacccacagg gccagcgcga accatgactc gag 1653 <210> 2 <211> 548 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Glu Gln Arg Gly Gln Asn Ala Pro Ala Ala Ser Gly Ala Arg Lys 1 5 10 15 Arg His Gly Pro Gly Pro Arg Glu Ala Arg Gly Ala Arg Pro Gly Pro 20 25 30 Arg Val Pro Lys Thr Leu Val Leu Val Val Ala Ala Val Leu Leu Leu 35 40 45 Val Ser Ala Glu Ser Ala Leu Glu Ser Asp Leu Lys Val Glu Met Met 50 55 60 Ala Gly Gly Thr Gln Ile Thr Pro Leu Asn Asp Asn Val Thr Ile Phe 65 70 75 80 Cys Asn Ile Phe Tyr Ser Gln Pro Leu Asn Ile Thr Ser Met Gly Ile 85 90 95 Thr Trp Phe Trp Lys Ser Leu Thr Phe Asp Lys Glu Val Lys Val Phe 100 105 110 Glu Phe Phe Gly Asp His Gln Glu Ala Phe Arg Pro Gly Ala Ile Val 115 120 125 Ser Pro Trp Arg Leu Lys Ser Gly Asp Ala Ser Leu Arg Leu Pro Gly 130 135 140 Ile Gln Leu Glu Glu Ala Gly Glu Tyr Arg Cys Glu Val Val Val Thr 145 150 155 160 Pro Leu Lys Ala Gln Gly Thr Val Gln Leu Glu Val Val Ala Ser Pro 165 170 175 Ala Ser Arg Leu Leu Leu Asp Gln Val Gly Met Lys Glu Asn Glu Asp 180 185 190 Lys Tyr Met Cys Glu Ser Ser Gly Phe Tyr Pro Glu Ala Ile Asn Ile 195 200 205 Thr Trp Glu Lys Gln Thr Gln Lys Phe Pro His Pro Ile Glu Ile Ser 210 215 220 Glu Asp Val Ile Thr Gly Pro Thr Ile Lys Asn Met Asp Gly Thr Phe 225 230 235 240 Asn Val Thr Ser Cys Leu Lys Leu Asn Ser Ser Gln Glu Asp Pro Gly 245 250 255 Thr Val Tyr Gln Cys Val Val Arg His Ala Ser Leu His Thr Pro Leu 260 265 270 Arg Ser Asn Phe Thr Leu Thr Ala Ala Arg His Ser Leu Ser Glu Thr 275 280 285 Glu Lys Thr Asp Asn Phe Ser Ile His Trp Trp Pro Asp Ile Thr His 290 295 300 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val 305 310 315 320 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 325 330 335 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 340 345 350 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 355 360 365 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 370 375 380 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 385 390 395 400 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 405 410 415 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 420 425 430 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Gln Pro Glu 435 440 445 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 450 455 460 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 465 470 475 480 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 485 490 495 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys His Met Gly Gly Asp 500 505 510 Glu Lys Thr Thr Gly Trp Arg Gly Gly His Val Val Glu Gly Leu Ala 515 520 525 Gly Glu Leu Glu Gln Leu Arg Ala Arg Leu Glu His His Pro Gln Gly 530 535 540 Gln Arg Glu Pro 545 <210> 3 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ) <400> 3 Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Asn Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Tyr Gly Tyr Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 4 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ), FR1 <400> 4 gacgtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctct 75 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ), CDR1 <400> 5 ggattcactt tcagtagcta tacc 24 <210> 6 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ), FR2 <400> 6 atgtcttggg ttcgccagac tccggagaag aggctggagt gggtcgcaac c 51 <210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ), CDR2 <400> 7 attaataatg gtggtagtta cacc 24 <210> 8 <211> 114 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ), FR3 <400> 8 tactatccag acagtgtgaa gggccgattc accatctcca gagacaatgc caagaacacc 60 ctgtacctgc aaatgagcag tctgaagtct gaggacacag ccatttatta ctgc 114 <210> 9 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ), CDR3 <400> 9 tatggttacg acccggcctg gtttgcttac 30 <210> 10 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ), FR4 <400> 10 tggggccaag ggactctggt cactgtctct gca 33 <210> 11 <211> 428 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ/IGHG1), secreted form <400> 11 Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Asn Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Tyr Gly Tyr Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser 165 170 175 Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Pro Arg 180 185 190 Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe 210 215 220 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val 225 230 235 240 Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe 245 250 255 Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro 260 265 270 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro 275 280 285 Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val 290 295 300 Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 305 310 315 320 Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys 325 330 335 Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp 340 345 350 Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro 355 360 365 Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser 370 375 380 Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala 385 390 395 400 Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His 405 410 415 His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys 420 425 <210> 12 <211> 498 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the heavy chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGHV/IGHD/IGHJ/IGHG1), membrane bound form <400> 12 Asp Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Asn Asn Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Tyr Gly Tyr Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser 165 170 175 Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Pro Arg 180 185 190 Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe 210 215 220 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val 225 230 235 240 Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe 245 250 255 Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro 260 265 270 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro 275 280 285 Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val 290 295 300 Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 305 310 315 320 Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys 325 330 335 Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp 340 345 350 Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro 355 360 365 Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser 370 375 380 Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala 385 390 395 400 Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His 405 410 415 His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Leu Gln Leu Asp 420 425 430 Glu Thr Cys Ala Glu Ala Gln Asp Gly Glu Leu Asp Gly Leu Trp Thr 435 440 445 Thr Ile Thr Ile Phe Ile Ser Leu Phe Leu Leu Ser Val Cys Tyr Ser 450 455 460 Ala Ala Val Thr Leu Phe Lys Val Lys Trp Ile Phe Ser Ser Val Val 465 470 475 480 Glu Leu Lys Gln Thr Leu Val Pro Glu Tyr Lys Asn Met Ile Gly Gln 485 490 495 Ala Pro <210> 13 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ) <400> 13 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 14 <211> 75 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ), FR1 <400> 14 Cys Ala Gly Gly Cys Thr Gly Thr Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Cys 1 5 10 15 Ala Gly Gly Ala Ala Thr Cys Thr Gly Cys Ala Cys Thr Cys Ala Cys 20 25 30 Cys Ala Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Gly Gly Thr Gly Ala Ala 35 40 45 Ala Cys Ala Gly Thr Cys Ala Cys Ala Cys Thr Cys Ala Cys Thr Thr 50 55 60 Gly Thr Cys Gly Cys Thr Cys Ala Ala Gly Thr 65 70 75 <210> 15 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ), CDR1 <400> 15 actggggctg ttacaactag taactat 27 <210> 16 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ), FR2 <400> 16 gccaactggg tccaagaaaa accagatcat ttattcactg gtctaatagg t 51 <210> 17 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ), CDR2 <400> 17 ggtaccaac 9 <210> 18 <211> 108 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ), FR3 <400> 18 aaccgagctc caggtgttcc tgccagattc tcaggctccc tgattggaga caaggctgcc 60 ctcaccatca caggggcaca gactgaggat gaggcaatat atttctgt 108 <210> 19 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ), CDR3 <400> 19 gctctatggt acagcaacca ctgggtg 27 <210> 20 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ), FR4 <400> 20 ttcggtggag gaaccaaact gactgtcctg 30 <210> 21 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the light chain of anti-B7-H6 clone 1.18 (IGLV/IGLJ/IGLC) <400> 21 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn 85 90 95 His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro 100 105 110 Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 115 120 125 Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp Phe Tyr Pro 130 135 140 Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro Val Thr Gln 145 150 155 160 Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Met 165 170 175 Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu Arg His Ser 180 185 190 Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val Glu Lys Ser 195 200 205 Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser 210 215 <210> 22 <211> 58 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gly Asp His Gln Glu Ala Phe Arg Pro Gly Ala Ile Val Ser Pro Trp 1 5 10 15 Arg Leu Lys Ser Gly Asp Ala Ser Leu Arg Leu Pro Gly Ile Gln Leu 20 25 30 Glu Glu Ala Gly Glu Tyr Arg Cys Glu Val Val Val Thr Pro Leu Lys 35 40 45 Ala Gln Gly Thr Val Gln Leu Glu Val Val 50 55 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for B7-H6 <400> 23 gacctggagc cattgtgtct 20 <210> 24 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for B7-H6 <400> 24 aagctggact gttccctgtg 20 <210> 25 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for GADPH <400> 25 gcaaattcca tggcaccgt 19 <210> 26 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for GADPH <400> 26 tcgccccact tgattttgg 19

Claims

B7-H6 폴리펩티드의 세포외 도메인의 부분에 의해 형성된 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체로서, 상기 부분이 SEQ ID NO: 22에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 항체.
청구항 1에 있어서,
상기 항체는 SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 15, 17, 및 19에서 나타낸 바와 같은 상보성 결정 부위 (CDRs)를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체.
청구항 1 또는 2에 있어서,
상기 항체가 단일클론 항체인 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체는 부다페스트 조약하의 독일, Braunschweig, DSMZ에 2011년 2월 02일자에 기탁 번호 DSM ACC 3117호로 기탁된 항체인 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서,
암의 치료 또는 진단에서 사용하기 위한 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체.
청구항 4에 있어서,
상기 암은 T 세포 림프종, 골수성 백혈병, 대장암, B 세포 림프종, 흑색종, 또는 자궁 경부암인 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서,
염증성 질병의 치료 또는 진단에서 사용하기 위한 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체.
청구항 7에 있어서,
상기 염증성 질병은 바이러스성 감염인 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체.
a) B7-H6 폴리펩티드 상에 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항의 항체와 이의 에피토프의 결합을 허용하는 조건 하에서 상기 항체와 시료를 접촉시키는 단계; 및
b) 상기 에피토프에 항체의 결합을 결정시키고, 이에 의해 암이 진단되는 결정 단계를 포함하는 암으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상의 시료에서 암을 진단하는 방법.
청구항 9에 있어서,
상기 암은 T 세포 림프종, 골수성 백혈병, 대장암, B 세포 림프종, 흑색종, 또는 자궁 경부암인 시료에서 암을 진단하는 방법.
a) B7-H6 폴리펩티드 상에 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항의 항체와 이의 에피토프의 결합을 허용하는 조건 하에서 상기 항체와 시료를 접촉시키는 단계; 및
b) 상기 에피토프에 항체의 결합을 결정시키고, 이에 의해 염증성 질병이 진단되는 결정 단계를 포함하는 염증성 질병으로부터 고통받는 것으로 의심되는 대상의 시료에서 염증성 질병을 진단하는 방법.
청구항 9 내지 11 중 어느 한 항에 있어서,
상기 시료는 조직 또는 체액 시료인 시료에서 염증성 질병을 진단하는 방법.
a) 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 분석 단위; 및
b) B7-H6 폴리펩티드 상에 상기 분석 단위의 항체와 이의 에피토프의 결합을 검출하는 검출기를 포함하는 시료에서 염증성 질병 또는 암을 진단하기 위한 장치.
청구항 13에 있어서,
상기 시료는 조직 또는 체액 시료인 염증성 질병 또는 암을 진단하기 위한 장치.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항의 항체, 바람직하게는 B7-H6 폴리펩티드 상에 상기 항체와 이의 에피토프의 결합을 검출하기 위한 제제를 포함하는 암 또는 염증성 질병을 진단하기 위한 키트.