KR20140041381A

KR20140041381A - 로팔러러스 정셔스 전갈 독으로부터의 펩티드 및 약리학적 조성물

Info

Publication number: KR20140041381A
Application number: KR1020137010868A
Authority: KR
Inventors: 카스트로 호세 안토니오 프라가; 갈리 레글라 마리아 메디나; 가르시아 알렉시스 디아즈; 오렐라나 이라니아 구에바라; 토레스 카리다드 클라라 로드리게즈; 코이펠 쥬디스 로드리게즈; 가를로보 야넬리스 리께네스; 마레로 이스벨 곤잘레스; 카포테 마리아 레글라 페레즈
Original assignee: 그루포 엠프레사리아 드 플로듀씨오네스 비오프 아르마소티카스 와이 퀴미카스
Priority date: 2010-09-27
Filing date: 2011-09-27
Publication date: 2014-04-04
Also published as: EP2623111A2; AU2011307691A1; MX360726B; WO2012041261A2; JP2013542196A; CA2812841A1; IL225577A0; RU2013119431A; WO2012041261A3; ECSP13012595A; SG191708A1; BR112013007198A2; AP2013006811A0; AR083117A1; CU20100186A7; CO6781464A2; RU2563348C2; MX2013003545A; CN103200951A; CU24055B1

Abstract

본 발명은 로팔러러스 정셔스 전갈 독으로부터 얻어진 새로운 펩티드에 관한 것으로, 이것은 활성 원리로서 펩티드를 포함하는, 높은 함량의 단백질, 림프구, 카르보히드레이트, 아미노 산, 무기 염 및 다른 이온을 갖는다. 본 발명은 또한 암 환자의 생존 기간을 개선시키는 항발암성, 진통 및 항염증성 특징으로 인해 약으로서 사용된 구성을 포함한다.

Description

로팔러러스 정셔스 전갈 독으로부터의 펩티드 및 약리학적 조성물{PEPTIDES FROM THE VENOM OF THE RHOPALURUS JUNCEUS SCORPION AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION}

본 발명은 본질적으로 약학 산업 분야에 관한 것으로, 특히 R. 정셔스 종(R. junceus sepcies), 로팔러러스 속(Rhopalurus genus), 전갈과(Buthidae family), 로팔러러스 정셔스 전갈(Rhopalurus junceus scorpion), 즉, 펩티드, 단백질, 아미노산 및 자유 아민의 혼합물을 함유하는 독을 갖는 공통적으로 이름이 "적색" 전갈로부터 얻어진 펩티드의 식별에 관한 것이다.

전갈은 지상 절지 동물이고, 맹독성 동물로서, 전갈은 지상에서 발견된 최초의 맹독성 동물이기 때문에 가장 오래된 그룹이다. 택소노미 분류(taxonomic classificatino)가 절지 동물문(Phylum Arthropoda), 거미강(Archnida Class) 전갈인 대략 1500개보다 많은 전갈종이 있다. 전갈의 자연 서식지에서, 전갈의 독은 pH 7.12를 갖는 유백색의 우유 빛깔 유체이고, 이것은 점액, 지질, 카르보히드레이트, 아미노산, 무기 염, 저분자 중량의 유기 분자를 주 성분으로 하고, 3 kDa-90kDa의 범위의 분자량을 갖는 광범위한 단백질을 함유한다. 최근에, 넓은 범위의 약리적 활성도를 보여준 고 함량의 펩티드로 인해 전갈 독에 대한 연구가 탄력 받고 있으며, 이러한 이유로 인해, 이러한 펩티드는 생물 의학적 연구를 위한 매우 중요한 도구이다(Martin-Eauclaire M-F, Segoard M, ramos C, Cestele S, Bougis PE, 및 Svenson B, 효모에서 활성 곤충-특정 전갈 신경독의 생성, Eur.J. Biochem. 1994; 223; 637-45; Bednarek MA, Bugianesi RM, Leonard RJ, Felix JP. 말가톡신의 화학 분석 및 구조-기능 연구, 인간 T 림프구에서의 전압 종속 칼륨의 강력한 억제제. Biochem Biophys Res Commun. 1994 1월 28일; 198(2):619-25.) 이러한 관점에서, 최근 몇 년에 암 치료시(Liu YF, Ma RL, Wang SL, Duan ZY, Zhang JH, LJ 및 Wu CF. Expression of an antitumor-analgesic peptide from the venom of Chinese scorpion Buthus martensi Karsch in Escherichia coli. Protein Expr. Burif. 2003; 27(2):253-8; Wang WX, Ji YH. Scorpion venom induces glioma cell apoptosis in vivo and inhibits glioma tumor growth in vitro. JNeurooncol. 200 5월; 73(1):1-7) 및 퇴행성 신경 질환(Rajendra W, Armugam A 및 Jeyaseelan K. 항통증 및 항염증에서의 독소, Toxicon 2004 7월; 44(1):1-17.)에서, 이들 독소 및 항염증 성분{Rajendra W, Armugan A 및 Jeyaseeian K. 항통증 및 항염증에서의 독소. Toxicon 2004 7월; 44(1):1-17); 진통제(Guan RJ, Wang CG, Wang M 및 Wang DC. A depressant insect toxin with a novel analgesic effect from scorpion Buthus martensii Karsch. Biochem. Biophys. 파일 2001; 1549(1):9-18)와 같은 그 유도체의 활동에 관한 많은 수의 특허 및 비-특허 공보가 있다. 조성물이 전갈 및/또는 그 독을 포함하는 발명은 암치료를 위해 의도된 광범위한 구성을 포함한다. 1993 CN 1073480 및 CN 1076858 특허의 저자는, 전갈과 다른 식물성 및 동물성 물질을 혼합함으로써 양쪽 경우에, 암치료 및 예방을 허용하는 와인을 얻었다는 것을 언급한다.

전갈은 1차적 간암(CN 1265901, 2000 및 CN 1279088, 2001)의 치료를 위한 태블릿 형태의 구성의 성분, 및 종양 세포 성장을 나타내고 환자 내의 암을 치료할 수 있는 캡슐(CN 1391941, 2003.)의 성분 중 하나이다. 다른 특허는 암치료를 위한 다양한 구성을 기재한다(CN 1252321; 2000 CN 1316249, 2001; CN 1399979, 2003.)

또한 특정 종양 세포 유형 상에 작용하는 전갈 독으로부터 얻어진 독소의 전적인 이용이 또한 발명된다. 펩티드라 불리는 전갈독 독소는 초기에 레이러스 퀸케스트리아투스 허브류(Leiurus quinquestriatus Hebrew) 전갈로부터 얻어졌다. 4KDa 펩티드 명칭의 크롤로톡신인 그러한 독소는 신경교종에서 나타난 클로라이드 채널로 결속하기 위한 용량을 갖는다{신경교로부터의 1차 뇌종양(De Bin JA, Maggio JE, Strichartz GR. 클로로톡신의 정화 및 특징, 전갈의 독소로부터의 클로라이드 채널 리간드. Am J Physiol 1993; 264:361-369.) 이러한 발견에 기초하여, 1999년에 Ullrich 등은 신경교종을 치료하기 위한 진단 방법을 미국 특허 5 905 027에 기재하였다. 신경교종에서 특정한 세포 수용체 상의 클로로톡신의 특정 작용을 취하는 다른 연구는, 이러한 독소가 중추 신경 계통(CNS) 세포를 갖는 공통적인 발생적 기원을 갖는 셀을 갖는 다른 유형의 종양에 대한 크게 특정한 마커(marker)라는 것을 보여주었다(Lyons SA, O'Neal J, Sontheimer H: 클로로톡신, 전갈 유도 펩티드는 특히 신경 외배엽 기원의 신경교종 및 종양에 별속된다. GLIA 2002; 39:162-73.) 추가로, 최근의 연구는, 클로로톡신이 시험관 신경교종 성장을 나타낼 뿐 아니라, 이러한 종류의 암의 높은 침습적 속도로 처리해야 하는 효소인, 금속 단백질 분해 효소와의 특정하고 선택적인 상호 작용으로 인해 손상을 받지 않는 뇌 영역으로의 이러한 종류의 종양의 침투 및 확산을 방지하기 위한 용량을 갖는다는 것을 보여 주었다(Deshane J, Garner CC 및 Sontheimer H: 클로로톡신은 기질 금속 단백질 분해 효소-2를 통한 신경교종 세포 침입을 방지한다. J Biol Chem 2003; 278:4135-44.) 2004년에, Buthus martenis Karsh scorpion on animal-implanted tumors로부터의 격리된 독소의 항종양성 작용에 대한 다른 특허(EP 20020774251)가 공개되었다.

몇몇 경우에, 설명된 특허들에는 암을 치료하거나 고칠 수 있는 능력을 갖는 광범위한 구성이 있다. 또한, 이들 경우는, 이러한 품질이 제조시 수반된 전갈 및 독소의 몇몇 유형에 고유하다는 것을 증명하지 않는다. 다른 한 편으로, 레이러스 퀸케스트리아투스 전갈로부터 얻어진 설명된 독소는, 전체 독에서 독소들의 혼합이 아닌 격리된 독소로서 특정한 유형의 종양을 치료하는데만 사용될 수 있는, 클로로톡신 및 부터스 마르텐시스 카르쉬의 경우에서와 같이, 본래 항종양성 작용을 보여주지 않는다.

쿠바에서, 항종양성 작용이 연구시 경험적으로 증명된 로팔러러스 정셔스 전갈 독이 있다. 이러한 작업 동안, 해법은 자연 발생 종양을 갖는 가축에 기여되었고, 종양 감소 및 제거, 그리고 양호한 생존이 관찰되었다(CU 22413 A1.). 본 발명은, 본 발명에 의해 청구되는 치료법 및 생존 기간 개선을 위한 임의의 약학 구성에 관한 지식이 지금까지 없다는 관점에서 특징적인 특징을 갖는다.

로팔러러스 정셔스 전갈 독 및/또는 그 유도체의 조성물 및 약학 특성은 크게 가치있는 천연 약을 만들고, 항염증의, 진통 및 항발암성 효과는 업계에서 다른 유사한 제품으로부터 실질적으로 구별한다. 이것은, 진통 및 항염증성 작용을 제공하는 종양 세포(펩티드)와 싸우기 위해 고 효율의 성분과 조합하는 완전한 천연 약이다. 추가로, 종양 세포 귀결의 유도를 통해 그리고 진통 및 항염증성 특성을 통해 유리한 효과를 갖는다. 이들 특징은 암 질병 및 관련 염증성 상태를 받는 환자의 생존 기간을 향상시키기 위해 매우 가치 있는 것이다. 본 발명으로부터 초래되는 천연 제품의 조성물이 생체 내 항종양성 활동에서 잠재력을 따르는 동작을 갖는 생체 외 항발암성 작용을 갖는 일련의 저분자량의 단백질을 포함한다는 것이 발견되었다.

본 발명의 하나의 목적은 독에서 발견된 항종양성 작용을 갖는 활성 원리인 펩티드의 조성물을 결정하고 이를 설명하는 것이다. 전갈 독의 질량적 조성물, 화학적 스크리닝, 화학-물리 특성 및 약학적 작용에 대한 요약은 각각 표 1, 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6 및 표 7에 도시되어 있다.

본 발명의 구성에 사용된 로팔러러스 정셔스 전체 독의 화학적 스크리닝

로팔러러스 정셔스 전체 독에서의 금속 이온의 결정

* 하한계 아래의 레벨을 갖는 중금속

본 발명의 구성에 사용된 로팔러러스 정셔스 전갈 독의 화학-물리 특성

저압 액체 크로마토그래피 및 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동법(SDS-PAGE)을 이용하여 분자 배제를 통해 얻어진 전갈 독에서의 단백질의 상대 분자량(RMW)의 표

로팔러러스 정셔스 전체 독으로부터 식별된 종양 세포에 대한 독소 작용을 갖는 활성 원리

독물학 연구의 요약

리간드:N.E.: 영향 없음

약리학 연구의 요약

다음의 절차는 본 발명에서 혼합물의 조성물을 결정하기 위해 수행되었다.

- 변형된, 로우리(Lowry) 방법을 통한 전체 단백질의 결정.

- 화학적 스크리닝

- 12 HR 10&30 슈퍼로즈 컬럼을 이용하여 저압 액체 크로마토그래피 분리를 통한 분자량 그룹당 펩티드의 분리.

- 폴리아크릴아미드 겔 단백질 전기 영동법(SDS-PAGE.)

- 역위상 C18 컬럼을 이용하여 고분해능 액체 크로마토그래피를 통한 전체 독 및 펩티드의 분리.

- 220nm- 및 280nm-파장 UV 스펙트럼의 결정.

- 정상 및 종양 세포에서의 세포 생존력.

쥐에서 실험한 급성 및 공시적(subchronic) 독성 분석으로부터의 결과에 따라, 본 발명으로부터의 제품은 비-독소이다.

본 발명의 제품의 예로서 아래에 구체적으로 설명되는 연구는 본 출원의 범주를 한정하지 않는다.

연구의 예로서 주어진 실험을 수행하기 위해, 여러 전갈들이 선택되었고, 그 전갈 독은 전기 자극을 통해 추출되었고, 적절히 증류수에서 희석되었다. 이것은 점액 및 세포 시편과 같은 성분을 제거하기 위해 15분 동안 10000 rpm에서 원심 분리하여 나중에 맑아지게 하였다. 독 단백질 함량 결정은 5-15 mg/mL 농도를 보여주는, 로우리 방법을 통해 수행되었다.

복막 내( IP ) 투여 루트

분석 요소 및 긍정적인 제어가 먼저 시행되었다. 30분 이후에, 10-15μL 크로톤 오일 용액은 동물의 우측 귀 내부 및 외부의 각 표면에 제공되었고, 좌측 귀는 제어로서 사용되었다. 3시간 이후에, 동물은 종들에 대한 통상적인 표준에 따라 희생되었고(FELASA에 따라), 양쪽 귀는 절단되었고, 둥근 8-mm 직경의 샘플이 펀치를 통해 얻어졌고, 분석 스케일에 대해 측정되었다.

국소적인 투여 루트

먼저, 25-30L 크로톤 오일 용액은 동물의 우측 귀의 내부 및 외부 표면 각각에 도포되었고, 좌측 귀는 제어로서 사용되었다. 그런 후에 분석 요소가 즉시 주어졌다. 3시간 이후에, 동물은 종들에 대한 통상적인 표준에 따라 희생되었고(FELASA에 따라), 양쪽 귀는 절단되었고, 둥근 8-mm 직경의 샘플이 펀치를 통해 얻어졌고, 분석 스케일에 대해 측정되었다.

구강 투여 루트

25-30L 크로톤 오일 용액은 동물의 우측 귀의 내부 및 외부 표면 각각에 도포되었고, 좌측 귀는 제어로서 사용되었다. 그런 후에 분석 요소가 구강 루트에 의해 즉시 주어졌다. 3시간 이후에, 동물은 종들에 대한 통상적인 표준에 따라 희생되었고(FELASA에 따라), 양쪽 귀는 절단되었고, 둥근 8-mm 직경의 샘플이 펀치를 통해 얻어졌고, 분석 스케일에 대해 측정되었다.

크로톤 오일의 국소적인 투여는 항염증제를 평가하기 위한 적절한 피부 염증 모델을 제공한다. 크로톤 오일 활성 원리는 포르볼-12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA)이고, 이것은 단백질 프로-염증성(pro-inflammatory) 약품이고, 이것은 높은 높은 혈관 침투성 및 혈관 파열, 백혈구 침입, 단백질 C 활성화, 및 아라키도닉 산(arachidonic acid) 및 그 대사 산물의 더 큰 배출을 포함하는 조직학적 및 생화학적 변화를 초래하는 피부 감작(epicutaneous) 적용을 갖는다. PMA는 또한 강력한 호중구 활성제인 것으로 알려져 있고, 귀에는 넓고 강력한 혈액 관개(blood irrigation)가 있다.

IP 투여 루트

쥐의 귀에서의 크로톤 오일에 의해 유도된 체중 증가당 1-5 mg/kg 분량과, 3 mg/kg 분량의 IP 투여는 더 높은 염증 금지 효과(97% 대 60.86%.)를 가질 때 실험 동물에서 15 mg/kg 덱사메타손의 IP 투여보다 더 효율적이었다. 5 mg/kg 분량은 긍정적인 제어(덱사메타손)와 비교하여 통계적으로(p > 0.05) 차이 나지 않는다.

쥐의 귀 수종 모델에서의 R. 정셔스 독의 복막 내 투여의 효과

값은 평균값 ±SD이다. 적어도 하나의 공통 문자를 갖는 그룹은 통계적으로 차이 나지 않는다(p > 0.05).

구강 투여 루트

5-, 10- 및 20-mg R. 정셔스 독의 투여는 부정적인 제어 그룹에 비해 상당한 귀 무게 손실을 초래하지만(표 9), 덱사메타손에 의해 유도된 체중 증가 금지에 통계적으로 비교되지 않고, 이것은 포스폴리파스 A₂를 금지하는 양호한 스테로이드 항염증성 약이다(아라키도닉 산을 위한 루트인 효소).

쥐에서 귀 수종 모델에서의 R. 정셔스 독의 구강 투여의 효과

국소적인 투여 루트

R. 정셔스 독의 국소적인 투여는 표 10에 도시된 바와 같이 제어 그룹에 비해 귀의 수종 감소를 초래한다.

표 11은 이루어진 연구로부터의 결과를 보여준다. R.정셔스 독의 구강 투여는 염증의 증식 단계에서 활성을 제안하는, 부정적인 제어 그룹에 비해 발생하는 약간의 육아종의 조직 억제를 야기한다. 2가지 연구된 생성 분량은 유사한 효과를 갖는다.

쥐에서의 코튼 펠릿-유도된 육아종에 대한 R.정셔스 독의 효과

표 12는 상이한 실험 그룹에 대한 육아종 무게 및 카르민 함량 값을 보여준다. 독소는 각각 3- 및 5-mg/kg 분량을 갖는 제어 그룹(p < 0.05)에 비해 육아종 무게를 1.32 및 2.05배로 낮아졌다.

신생 혈관은 종양 성장 및 변이를 위한 핵심적인 프로세스이므로, 이러한 복잡한 프로세스를 금지할 수 있는 생성물을 갖는 것은 종양 질병을 치료하기 위한 대안이다.

카르민 함량은 에어-파우치 육아종에서의 새로운 혈관의 구성의 표시자이다. 독소 투여는 각각 3- 5-mg/kg(IP) 분량을 갖는 39.22% 및 69.24%만큼 육아종에서의 새로운 혈관 형성을 감소하였고, 모든 실험 그룹 사이에는 상당한 통계적 차이가 있다(p < 0.001.)

쥐에서의 보조-유도 염증 신경 교종에서의 육아종 무게 및 카르민에 대한 복막 내 투여된 R. 정셔스 독의 효과(n=10.)

적어도 하나의 공통 문자를 갖는 그룹은 통계적으로 차이 나지 않는다(p > 0.05.)

A:490nm에서의 흡수제

표 13은 쥐에서의 3% 아세트 산-유도된 발작하는 모델에 막 내 접종된 R.정셔스 독의 진통 효과의 결과를 보여준다.

상이한 독 분량으로 치료된 모든 그룹은 부정적인 제어 그룹에 비해 훨씬 더 낮은(p < 0.05) 복수 수축을 보여주었다. 2.5- 및 7.5-mg/kg 독 분량은 아스피린이 주어진 그룹에서, 알려진 진통제보다 유사한 효과를 갖는다. 다른 한 편으로, 5.0mg/kg R. 정셔스 독 분량은 100 mg/kg 아스피린(49.28%)의 투여로부터 얻어진 것보다 높은 억제(87.74%)를 보여주었다.

아세트 산-유도 복부 발작 모델에서의 R. 정셔스 독의 복막 내 투여의 효과

NC: 부정적인 제어; No: 수

ASA: 아스피린

구강 루트 투여

표 14에서 관찰된 바와 같이, 다양한 독 분량이 주어진 모든 그룹은 부정적인 제어 그룹에 비해 복부 수축의 상당히 낮은 수(p < 0.05)를 보여주었다. 긍정적인 제어 그룹(아스피린)과 함께 사용된 독의 비교는 현저한 진통 효과를 보여주었다. 10-, 15- 및 20-mg/kg R. 정셔스 독의 분량은 아스피린과 유사한 방식으로 복부 수축을 억제하였다. 50-mg/kg 분량은 긍정적인 제어로부터 통계적으로 상당한 차이를 초래하지 않는 반면, 실험 동물에서의 복부 발작의 54.78% 억제를 얻었다.

R. 정셔스 독의 구강 투여 이후의 아세트 산-유도 복부 발작의 억제

NC: 부정적인 제어

ASA: 아스피린

- 쥐에서의 열 복부 무통각 모델

드러그 디스커버에 기재된 방법이 사용되었다.

실험 동물 생성을 위한 국립 센터(CENPALAB)로부터의 평균 20-25g의 무게를 갖는 OF1 숫쥐가 사용되었다.

(pag. 16)

동물은 분석 요소를 투여하기 전 및 후에 55℃ 일정한 온도로 (UGO-바질) 고온 플레이트 상에 위치되었다. 뒷다리 핥기 또는 점핑의 형태로 통각 반응의 지연시간이 측정되었다. 20초 내의 통각 반응을 보여준 동물만이 분석을 위해 선택되었다. 선택은 40초에 종료되었다.

부정적인 제어에 대한 생리학적 살린 용액, 긍정적인 제어에 대한 4% 코데인, 및 다양한 R. 정셔스 독 분량을 투여한 후에, 각 동물에서의 반응 지연시간은 2 내지 3 시간 이후에 측정되었다.

이러한 작업 동안, 쥐에서의 열 자극에 대한 통각 반응성은 오피오이드 무통각 및 몇몇 종류의 상당한 통각 과민증의 등 척추 반응을 검출하기 위해 급성 통증 민감도 테스트인, 고온 플레이트 분석을 이용하여 측정되었다. 요소는, 동물의 정상 반응 시간이 그 투여의 2배가 될 때 상당한 진통 효과를 갖는 것으로 고려된다.

R. 정셔스 독의 진통 효과는 도 1 및 표 15에 도시된다. 결과는, 생성물의 3개의 분량의 IP 투여가 고온 플레이트 열 자극을 상당히 감소시켰다는 것을 나타낸다. 도 1은, R. 정셔스 독 분량이 쥐에 대한 고온 플레이트 분석 동안 통각 반응 지연 시간 스팬을 크게 팽창시킨다.

다양한 실험 그룹에서의 고통 억제는 표 15에 도시된다. 무통각의 강력한 열-유도 억제가 관찰되고, 가장 높은 억제는 투여 이후 2시간 뒤에 발생한다. 3시간 이후에 강력한 효과가 있고, 2.5- 및 7.5-mg/kg 분량이 긍정적인 제어에 대한 유사한 효과를 갖지만, 더 높은 분량은 코데인보다 더 큰 더 긴 효과를 갖는다.

고온 플레이트 모델에서의 R. 정셔스 독 투여의 효과

고온 플레이트 테스트의 결과는, 더 크고 더 복잡한 뉴론 일체화가 핥음 및 점핑 반응에 필요함에 따라 R. 정셔스 독이 골수보다 더 높은 중앙 신경계에 항통증 효과를 갖는다는 것을 보여준다.

페난트롤린/Cu2⁺-유도 DNA 손상을 위한 모델에서의 R. 정셔스 전갈 독의 프로-산화 잠재력.

차이 나는 문자는 제어에 비해 통계적 차이(p < 0.05)를 의미한다.

R. 정셔스 전갈 독의 생체 밖 생리학 작용을 평가하기 위해 연구시 사용된 세포

ND 비-결정된 CC₅₀: 중간 세포 독성 농도

단일-층(카르시노마) 성장 세포 컬쳐는 현탁액에서 성장하는 정상 세포 및 종양 세포보다 상당한 세포 성장 억제(p < 0.05) 및 더 높은 민감도를 보여주었다.

인간의 종양 세포를 갖는 정상 MRC-5 인간 세포 라인의 CC₅₀ 사이의 비교는, R. 정셔스 전갈 독이 정상 세포에 비해 종양 세포에서 차이있고 상당한 세포 독성(p < 0.05)을 갖는다.

독 노출은 단일-층 성장 조건에서 인간 및 쥐 종양 라인에서의 상당한 성장 억제(p < 0.05)를 야기한다. U937 및 S-180 종양 세포 라인(양쪽 모두 현탁액에서 성장함)은 독의 투여에 적은 민감도를 보여주었고; 유일한 효과는 약간 더 적은 성장이다(표 18.)

정상 세포, 림프구 및 복막 대식 세포는 종양 세포보다 덜 민감도를 보여주었다. 어떠한 상당한 독소 효과도 사용된 농도의 전체 스펙트럼에 따라 관찰되지 않는다(p> 0.05)(표 18.)

50일 이후 폐 전이 입사의 평가는, 전갈 독의 투여가 자연적 폐 전이의 개시를 크게 감소시켰다(0.8mg/kg; 3.2 mg/kg)(표 19.)

F311 쥐 유방 종양이 이식된 Balb/c 쥐에서의 폐 전이의 입사. *제어로부터 통계적으로 상당한 차이(p < 0.05)

구강 투여 루트

발브 c 쥐에서 이식된 유방 선암 모델에 대한 전갈 독의 효과가 평가되었다. 치료 그룹에 대한 4가지 분량(6mg/kg, 12.5mg/kg, 25mg/kg 및 50mg/kg)이 사용되었다. 제어는 살린 용액이 주어졌고, 모든 투여는 35일 동안 구강 루트를 통해 이루어졌다. 종양 성장은 35일 동안 감시되었다.

전갈 독이 투여된 실험 그룹은 제어 그룹에 비해 상당한 종양 성장 억제(p < 0.05)를 보여주었다(도 4). 실험 그룹은 종양 진행 억제제와 같이 35일의 평가 동안 분량-반응비를 보여주었다.

10⁶ S-180개 쥐 세포가 복막내에 이식되고 구강으로 주어진 R. 정셔스 전갈 독으로 치료된 실험 그룹의 평균 생존 시간

12.5-mg/kg 분량은 더 긴 평균 생존 시간(24일)을 나타내었고, 뒤이어 25-mg/kg 분량(22.5일), 및 6-mg/kg 분량(20.5일)이 후속하는 한편, 제어의 평균 생존 시간은 20일이었다(표 21). 유사하게, 12.5-mg/kg 분량은 제어 그룹에서의 쥐의 100%가 죽는 시간만큼 가장 높은 생존 백분율을 보여주었고(표 21), 한편 6-mg/kg 및 25-mg/kg 분량은 각각 26% 및 22%를 보여주었다. 이러한 결과에도 불구하고, 3개의 실험 그룹(6mg/kg, 12.5mg/kg, 및 25mg/kg) 중에 더 긴 생존 시간 및 생존 백분율은 통계적으로 중요하지 않다. 50-mg/kg 분량은 모든 경우에 제어의 것과 유사한 값을 보여주었다.

분자 배출 크로마토그래피로부터 얻어진 분수의 항증식성 작용에 대한 분석

세포 성장에 대한 단백질 시편의 효과는 예 6에서와 유사한 방식으로 결정되었다. 연구는 2개의 종양 세포 라인을 사용하였다: HeLA(인간 자궁암) 및 A549(인간 폐암.) 시편은 우물(well)에서의 최종 9 μg/mL-600 μg/mL 농도에 있었다.

세포 라인 시편의 세포 독성 평가는 종양 세포의 억제된 성장 및 LB-03 및 LB-04 시편에 대한 정상 세포에서의 적은 독성을 보여주었다. 표 22는 각 정화 시편에 대한 CC₅₀를 보여준다.

종양 및 정상 세포 라인에서의 분자 배제 크로마토그래피로부터 시편의 상대적인 분자량 및 평균 세포 독성 농도.

* 로그 PM 대 V_oV_e 교정 곡선으로부터 결정된 상대적인 분자량

MW: 패턴 단백질의 분자량

V_o: 컬럼의 죽은 부피

V_e: 각 단백질 피크에 대한 회피.

FPLC 분자 배제 크로마토그래피로부터 얻어진 시편은, 단백질 조성물을 증명하기 위해 4-20% 그레디언트를 갖는 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동법으로 실행되었고, 이것은 도 7에 나타난다.

LB-03 및 LB-04 시편은 저 분자량 단백질 조성물을 갖고, 추가로, 종양 세포에 대한 높은 세포 독성(Hela 및 A549) 및 정상 세포에 대한 낮은 독성(MRC-5)을 보여주는 시편이었다.

이들 시편은 C18 역-위상 분석 곡선을 이용하여 고-분해능 액체 크로마토그래피를 통해 재-정화되었다. 2개의 용액이 모바일 단계로서 사용되었다: 용액 A{물에서의 0.12% 트리플로로아세트 산(TFA)} 및 용액 B(아세토니트릴에서의 0.10% TFA). 시편 성분 회피는 70분 동안 용액 B의 0 내지 70%로부터 그리고 0.5ml/min 흐름에서 점차적인 그레디언트로 이루어졌고, 시편 검출 파장은 220nm이었다. 종양(Hela) 및 정상(CHO) 세포에서의 얻어진 순수 펩티드는 예 6에 기재된 것과 유사한 방식으로 평가되었고, 그 분자량 및 단백질 시퀀스는 고-분해능 액체 크로마토그래피 디바이스에서 구축된 대량 스펙트로메트리를 통해 결정되었다.

종양 세포 상의 높은 세포 독성 작용 및 정상 세포 상의 낮은 독성을 갖는 8개의 펩티드(RjLB-01, RjLB-03, RjLB-04, RjLB-05, RjLB-07, RjLB-08, RjLB-09 및 RjLB-14)가 얻어졌다. 이들 결과는 전체 독으로 관찰된 것으로 확증하였고, 종양 세포 상의 독 성분의 우선적인 독성을 확인하였다.

활성 성분의 정화에 기초하여, 독에서의 비례적인 존재가 결정되었다(표 23).

종양 세포 상의 생체 밖 생리학적 작용의 독 조성물 및 범위에서의 활성 원리의 비율.

RjLB-01, RjLB-03 및 RjLB-04 펩티드에 대해 얻어진 분자량은 각각 908 Da, 1964 Da 및 4748.14 Da이었다. 얻어진 시퀀스는 전갈 독 펩티드 데이터베이스에 비교되었고, 전술한 펩티드와의 어떠한 상동 관계도 발견되지 않았고, 이 결과는 신규성의 추가 증거이다.

본 발명으로부터의 다른 결과는 다음과 같이 얻어진 구성이다: 50 내지 100개의 로팔러러스 정셔스 종의 전갈이 취해지고, 전기 자극에 의해 독소가 추출되고 10 내지 20mL의 증류수로 희석되었다. 그런 후에, 점액 및 세포 조각과 같은 성분을 제거하기 위해 15분 동안 10000 rpm 원심 분리를 통해 정화되었다. 동시에, 그 단백질은 로우리 방법을 이용하여 결정되었고, 결과는 5-15mg/mL의 농도이다. 전갈 독은 0.05-0.1 mg/mL인 농도 범위를 갖는 구성을 얻기 위해 유일한 첨가제로서 증류수로 편리하게 희석되었다.

본 발명은 진통 및 항염증성 작용을 제공하는 종양 세포(펩티드)와 싸우기 위해 고 효율의 성분과 조합하는 완전히 천연 약으로, 종양 세포 귀결의 유도를 통해 그리고 진통 및 항염증성 특성을 통해 유리한 효과를 갖는다.

도 1은 우리 결과와 일치하는, 2-3 시간 내에 변동하는 평균 수명을 갖는 코데인(긍정적인 제어)의 중추 진통 약의 작용을 도시한 도면.
도 2는 A549 및 Hela 종양 세포 라인으로부터 추출된 DNA의 1.5% 아가로스 겔 전기 영동을 도시한 도면으로서, 독이 우물당 0.5 mg/mL의 최종 농도로 주어지고, 각 세포 라인으로부터의 DNA가 24 및 48 시간 이후에 추출되고,
트랙 M: 람다 DNA/하인드 III 분자량 마커.
트랙 1-3: A549 세포 라인; 독 없는 1:DNA 제어; 24 시간 이후에 추출된 2:DNA; 48시간 이후에 추출된 3:DNA.
트랙 4-6: Hela 세포 라인; 독 없는 4:DNA 제어; 24 시간 이후에 추출된 5:DNA; 48 시간 이후에 추출된 6:DNA인 도면.
도 3은 실험 그룹에서 종양 성장의 동역학을 도시한 도면으로서, 종양 성장은 35일 동안 감시되었고, 종양 성장 억제는 주어진 독 분량에 따르고, 제어당 통계 중요성은 *p < 0.05; **p < .01, ***p < 0.001인, 도면.
도 4는 실험 그룹에서 종양 성장의 동역학을 도시한 도면으로서, 종양 성장은 35일 동안 감시되었고, 종양 성장 억제는 주어진 독 분량에 따르고, 제어당 통계 중요성은 *p < 0.05; **p < .01, ***p < 0.001인, 도면.
도 5는 실험 폐암의 침입시 전갈 독의 구강 투여의 효과(t)를 도시한 도면으로서, 통계적으로 중요한 차이는 *p < 0.01, ***p < 0.001인, 도면.
도 6은 12 HR10/30 수퍼로스 분자 배제 컬럼을 이용하여 저압 액체 크로마토그래피에서 R. 정셔스 독 크로마토그래픽 프로파일을 도시한 도면.
도 7은 저압 액체 크로마토그래피를 이용하여 정화로부터 얻어진 시편이 적용되는 반응성 조건에서의 포리아크릴아미드 겔 전기 영동을 도시한 도면으로서, 트랙 1: 분자량 마커; 트랙 2: 전체 독; 트랙 3: LB-01 시편; 트랙 4: LB-02 시편; 트랙 5: LB-03 시편; 트랙 6: LB-04 시편을 도시한 도면.
도 8은 평가된 시편의 재-정화로부터 얻어진 순수 펩티드에 대한 농도-반응 곡선을 도시한 도면으로서, 평가는 Hela(인간 유방암) 종양 세포에 대해 수행되었고, 사용된 농도는 6.25 μg/mL-400μg/mL인 도면.
도 9는 평가된 시편의 재-정화로부터 얻어진 순수 펩티드에 대한 농도-반응 곡선을 도시한 도면으로서, 평가는 CHO(Chinses Hamster Overium) 비-종양 세포에 대해 수행되었고, 사용된 농도는 6.25 μg/mL-800μg/mL인 도면.

예 1 쥐에서의 크로톤 오일-유도 귀 수종의 급성 염증 모델

실험 동물 생성을 위한 국립 센터(CENPALAB)로부터의 평균 18-22g의 무게를 갖는 OF-1 숫 쥐가 사용되었다. CYTED(ibero-American Programme for Science and Technology Development, Lima, 1996년 11월)에 의해 설명된 방법이 사용되었다. 0.5%-아세톤 크로톤 오일 용액이 사용되었다. 덱사메타손은 0.5% CMC에 용해되었다.

예 2 쥐에서의 코톤 볼 염증 모델

실험 동물 생성을 위한 국립 센터(CENPALAB)로부터의 180g 바디 무게의 스프라그-다우리(Sprague-Dawley) 쥐가 사용되었다.

CYTED(ibero-American Programme for Science and Technology Development, Lima, 1996년 11월)로부터의 코톤 볼 염증을 위한 방법이 수행되었다.

염증은 손상된 조직의 반응이다. 이것은 효소 관계 및 작용, 중재자 배출, 유체 관외 분출, 셀 이주 및 조직 파열 및 복원을 포함한다(Vane, 1995). 항염증 효과가 일련의 화학제로부터 초래될 수 있고, 약리학 작용과 화학 구조 사이의 약간의 상관 관계가 있다는 것이 잘 알려져 있다(Sertie, 1990.) 이것은 염증 프로세스의 복잡성과 조합되고, 약리학적 분석을 수행하기 위한 다양한 실험 모델의 이용을 요구한다. 쥐에서의 코톤 펠릿 그라널로스 모델은 만성 염증 상태에 대한 효과를 연구하기 위해 종종 사용된 분석 방법이다(Elieter, 1999.) 펠릿 염증 이후의 3가지 염증 단계가 설명되었다. 마지막 단계는 세번째와 6번째 날 사이에 발생하는 세포 증식의 단계이다. 이러한 단계는 덱사메타손과 같은 항염증성 스테로이드에 의해 그리고 비-스테로이드형 항염증성 약에 의해 억제될 수 있다(Sw, 1972.)

동물은 안락사를 통해 코튼 플러그의 주입 이후 7일 후에 희생되었고, 펠릿이 추출되고 연구되었다. 펠릿의 종료- 및 초기-무게 차이는 생성된 프라눌로마토스 조직인 것으로 고려되었다.

예 3 염증 혈관 신생 모델

180-240g 몸무게를 갖는 CENPALAB으로부터의 스프라그-다우리 숫 쥐가 사용되었다.

염증 혈관 신생은 일련의 상이한 프로세스를 포함하는 복잡한 프로세스지만, 혈관 신생 케스케이드(cascade)와, 기본적으로 유사한 분자 메커니즘을 수반한다. 육아종 형성 이후 6일이 유도되었고, 육아종은 제어 그룹에서 잘 형성되고, 이것은 2001년 Primelles에 의해 보고된 결과와 일치한다. 독 분량이 주어진 동물의 경우에, 육아종은 터치시 더 작고, 이들의 현미경 관찰은 덜-형성된 끝을 보여주었고, 이들은 표피에 부착되지 않았다.

예 4. 진통 작용

- 쥐에서의 아세트 산 -유도 발작의 모델

CYTED에 기재된 방법은 후속하였다.

CYTED(ibero-American Programme for Science and Technology Development, Lima, 1996년 11월)로부터의 평균 20-25g의 무게를 갖는 OF1 숫 쥐가 사용되었다.

복막 내 루트 투여

1-, 2.5- 및 7.5-mg/kg R. 정셔스 독의 분량은 복막 내로 예방 접종되었다. 30분 이후에, 실험 동물은 복막 내로 3-% 아세트 산 용액 중 0.1 mL가 투여되었고, 발작/동물의 수는 관찰된 첫번째 발작에서 시작하여 10분 동안 기록되었다.

구강 루트 투여

1-, 5-, 10-, 15-, 20- 및 50-mg/kg R. 정셔스 독의 분량이 구강으로 투여되었다. 1시간 이후에, 실험 동물은 3% 아세트 산 용액 중 0.1 mL가 복막 내로 투여되었고, 발작/동물의 수는 관찰된 첫번째 발작에서 시작하여 10분 동안 기록되었다.

예 5 항산화 작용의 평가

로팔러러스 정셔스 독에 의한 생체 내 항산화 작용은 구리-페난트롤린 및 블레오마이신-철 시스템 산화 프로세스에서의 DNA 보호 효과를 통해 평가되었다. 독은 과산화 작용 프로세스로부터 DNA를 보호할 때 항산화 작용을 보여준다.

구리-페난트롤린 및 바이오마이신-철 시스템은, 전술한 구성에서의 로팔러러스 정셔스 유도체가 DNA에 대한 어떠한 프로-산화 효과를 갖지 않는다는 것을 보여주었다. 다양한 로팔러러스 정셔스 유도체 농도에서 얻어진 흡수도 값은 긍정적인 제어에서 얻어진 값보다 더 작다. 표 11 및 12는 그러한 평가로부터의 결과를 도시한다.

예 6 종양 및 정상 세포의 패널에서의 생체 밖 세포 독성

세포 성장에 대한 독의 영향은 MTT 분석에서 보여지는데, 이것은 미토콘드리아 탈 수소화 효소에 의해 이러한 (노란색) 테트라졸륨 염의 신진 대사 감소로부터 초래되는 세포 증식을 측정한다. 결과적인 화합물{청색 포마잔(formazan)}은 용해성이고 분광 광도적으로 양을 측정하게 될 수 있다. 9개의 종양 세포 라인이 연구에 사용되었다: HeLa(인간 자궁암), HEp-2(인간 후두 표피암), NCI-H292(인간 폐 점막 표피양 암), A549(인간 폐암), U937(인간 조직구 림프종), L929(쥐과 섬유 육종), S-180(쥐과 육종), F311(쥐과 유방 선암), MRC-5(인간 폐 섬유아 세포), Vero(아프리카 녹색 원숭이 정상 신장 세포), MDCK(정상 개 신장 세포), N₂A(쥐과 신경모세포종 세포), 마크로파지(Balc/c 쥐 복막으로부터 추출된), 림프구(Balc/c 쥐 비장으로부터 추출된)가 또한 평가되었다. 세포는 세포 배양 특성에 따라 최소의 본질적 매질(MEM) 또는 RPMI-1640 매질에서의 배양 플라스크 내에서 성장되었고, 2mM 글루타민, 비-본질적 아미노산, 10% 소과 태아 혈청(BFS), 및100 IU-100μg/mL 페니실린-스트렙토마이신이 첨가되었다. 각각은, 단일 층이 형성될 때까지 37℃ 및 5% CO₂에서 습기 있는 대기에서 배양되었다. 각 세포 라인은 0.25% 트립신-EDTA 용액에 의해 분리되었고, 뉴바우어(neubauer) 챔버에서 카운트된 후에 2 x 10⁵ 세포/mL에서 조제되었다.

분석은 96개-우물의 플랩-바닥의 세포 배양 폴리스티렌 접시에서 이루어졌고(인입하는 Inc. costar^R) 각 세포 라인의 50μL은 각 우물(well)에 부어졌고, 24시간 동안 5% CO₂ 및 37℃ 대기에서 배양되었다. 그러한 시간 이후에, 이전에 용해된 독을 함유하는 50μL 매질이 첨가되었다. 최종 독 농도는 우물에서 0.1 mg/mL, 0.25 Mg/mL, 0.5 mg/mL, 0.75 mg/mL, 및 1 mg/mL이었다. 모든 최종 세포 라인 농도는 10⁴ 세포/우물이었다. 소과 태아 혈청(BFS)은 10% 매질에 사용되었다.

접시는 3일 동안 5% CO₂ 및 37℃ 대기에서 다시 배양되었다. 그러한 시간 이후에, 10μL MTT 살균 용액(살균 PBS에서의 5 mg/mL 테트라졸륨 염)은 각 우물에 첨가되었고, 4 시간 동안 동일한 상태 하에 배양되었다. 마지막으로, 매질이 부어졌고, 200μL/우물 디메틸 설폭시드(DMSO) 용액이 첨가되었고, 습기 있는 대기에서 30분 동안 37℃로 배양되었다. 광학 밀도(OD)는 기준으로서 630nm에 대해 560nm에서 Revelation Dynex Technologies ELisa MRX 마이크로디쉬 리더 상에서 판독되었다. 각 시편 농도는 3회 이루어졌고, 분석은 4번 수행되었다.

농도-반응 곡선 분석에 대해, 세포 증식 백분율은 상이한 독 농도에 대해 공식(1-OD(샘플/OD(제어))x 100)으로부터 그래픽적으로 얻어졌다. 평균 세포 독성 농도는 CC₅₀로서 표현되는데, 이것은 치료되지 않은 제어에 비해 생존 가능 세포의 수(MTT 흡수도)에서 50% 감소를 야기하고 평가된 각 세포에 대해 표 15에서 나타나는 독 농도이다.

예 7. 세포 소멸 연구

세포 소멸을 결정하기 위한 연구는 DNA 분열을 통해 이루어졌다. Hela 및 A659 세포 라인이 사용되었다. 결과는 도 2에 도시된다. 세포 소멸의 특징적인 DNA 분열은 독으로 치료된 Hela 세포의 대응하는 트랙에서 관찰된 한편, 제어 우물 및 A549 세포 라인에서 단일 원 염색체 DNA 밴드가 관찰되었다. 이들 결과는, 전갈 독이 메커니즘 - 세포 소멸 및 회저(necrosis) 모두를 통해 세포 죽음을 유도할 수 있다는 것을 보여준다.

예 8. 고체 종양 F311 유방 선암 실험 모델, 복막 내 투여 루트에서의 항종 양성 작용

Balc c. 쥐에서 이식된 유방 선암 모델에 대한 전갈 독의 효과가 평가되었다. 3가지 분량(0.2 mg/kg, 0.8 mg/kg 및3.2 mg/kg)은 치료 그룹에 사용되었다. 제어는 염류 용액이 복막 내에 투여되었다. 종양 성장은 35일 동안 감시되었다. 종양의 이식 이후 50일 후에 쥐가 희생되었고, 그 폐는 추출되었고, 폐 질환 세포 소멸이 검색되었다.

전갈 독으로 치료된 실험 그룹은 제어 그룹(도 3)에 비해 상당한 종양 성장 억제(p < 0.05)를 보여주었다. 실험 그룹은 종양 진행 지연을 위해 평가된 35일 동안 분량-반응비를 보여주었다. 치료받은 그룹에서 종양 성장의 상당한 감소는, R. 정셔스 전갈 독이 적어도 평가 기간 동안, 종양 성장에 영향을 주므로 항종양 효과를 갖는다는 것을 나타낸다.

예 9. F311 유방 선암 , 실험 모델. 구강 투여 루트

Balb c 쥐에 주입된 유방 선암 모델에서의 전갈 독의 효과가 평가되었다. 4개의 분량(6mg/kg, 12.5 mg/kg, 25mg/kg 및 50mg/kg)이 치료 그룹에 사용되었고, 제어 그룹에는 염류 용액이 구강으로 투여되었다. 종양 성장은 35일 동안 감시되었다.

전갈 독(12.5 mg/kg, 25 mg/kg 및 50mg/kg)으로 치료받은 실험 그룹은 제어 그룹(도 4)과 비교할 때 상당한 종양 성장 억제(p<0.05)를 보여주었다. 치료받은 그룹에서 발견된 종양 진행의 상당한 감소는 적어도 평가 기간 동안 종양 성장에 영향을 주므로, R. 정셔스 전갈 독의 항종양 효과를 나타낸다.

예 10. 복수 종양에서의 항종양 작용. 실험 육종 모델(S-180)

NMRI 쥐의 복막에 이식된 쥐과 육종 모델에서의 전갈 독의 효과가 평가되었다. 4개의 분량(6mg/kg, 12.5 mg/kg, 25mg/kg 및 50mg/kg)이 치료 그룹에 사용되었고, 제어 그룹에는 염류 용액이 투여되었다. 독은 모든 실험 그룹이 죽을 때까지 종양의 이식 이후에 매일 24시간 투여되었다. 표 20은 치료받은 동물 및 제어에 대한 생존 시간을 보여준다. 표 21은 실험 그룹 중에 생존 백분율을 보여준다.

예 11 활성 원리로서 독 단백질의 정화 및 식별

전체 단백질 내용을 분리시키기 위해, 전체 독은 0.1 M 암모늄 아세테이트(NH₄Ac)에 용해되었고, 15분 동안 10000 rpm에서 원심 분리되었다. 상청액(supernatant)은 10 x 300mm로 측정된 12 HR 10/30 수퍼로스 여과 겔 컬럼 측정을 갖는 AKTA FPLC(Amersham Pharmacia Biotech) 저압 액체 크로마토그래피 기기에 놓였다. 컬럼은 0.1M NH₄Ac 및 0.5 mL/min의 흐름율로 동일한 용매와 혼합물 물질과 균형을 이루었다. 흡수도는 72분 동안 280nm의 광 밀도(OD)에서 감시되었다. 75 HR 10/20 슈퍼로스 분자 배제 컬럼은 리보누클리스 A(13.7 Kda), 케모트립시노겐(25 Kda), 오보알부민(43 Kda), 알부민(67 Kda) 및 청색 덱스트란 2000을 포함하는 패턴 단백질 키트로 교정되었다. 패턴 곡선은 크로마토그래피 동안 얻어진 다양한 단백질 시편의 상대적인 분자량을 결정하도록 그려졌다. 크로마토그래피 실행으로부터의 결과는 도 6에서 나타난다.

예 12 임간 암 환자에 주어진 구성에 관한 임상 치료 연구

연구의 목적은 암 환자에서의 생존 기간을 평가하는 것이다. 연구에 포함된 주제는 임의의 단계에서 조직학적으로 확인된 암에 걸린 양쪽 성별의 환자이다. 치료 종양학자에 의해 제공된 임상 치료 기록의 요약 및 환자의 정보 제공 동의를 언급한 문헌이 기록되었다. 문헌은 임상 치료 발전 동안 병원에서의 의사에 의해 후속하는 환자의 임상 치료 상태의 평가를 포함한다. 추적 검사의 주기성은 최대 2달이다. 추적 검사는 1년 동안 발생하였다. 구성은 0.05-0.1 mg/mL 농도를 갖는 40-mL 플라스크에서 제조되었다. 플라스크 내용은 1리터를 완성할 때까지 부형제로서 사용된 증류수에서 희석되었다. 생성물은 구강 루트를 통해 매일 투여되었고, 권고된 분량은 환자의 단계 및 조직학적 진단에 따른다.

총 100명의 환자가 연구에 참여되었고, 암의 주요 위치는 유방, 전립선, 결장, 폐, 뇌 및 췌장이다. 생성물의 투여는 사전 임상 치료 연구 동안 관찰과 일치하는, 치료 동안의 임의의 순간에 어떠한 부장용도 야기하지 않는다. 모든 경우는, 모든 폐암 환자에 호흡 곤란 및 기침이 적게 있거나 전혀 없는 것과 같이, 주요한 임상 치료 변수의 개선에 의해 증명된 바와 같이 생존 기간을 연장하였다. 많은 환자는, 몇몇 경우에 손상의 안정화 및 사라짐의 형태로 양호한 방사선 테스트를 보여주었다. 추가로, 혈액학 변수가 안정화되었고, 고통 및 염증이 감소되었다. 1년 동안 본 발명의 구성으로 치료받은 환자의 50% 이상에서, 연구한 몇몇 조건에 대해 추정된 것보다 더 긴 생존 기간을 갖는다.

예 13

인간 암 환자에서의 구성의 임상 치료 연구

연구의 목적은 암 환자에서의 생존 기간의 평가이다. 임의의 단계에서 조직학적으로 암에 걸린 양쪽 성별의 환자는 연구용 개인으로서 포함되었다. 문헌이 준비되고, 이것은 1차적 건강 관리 종양학자에 의해 제공된 임상 치료 기록의 요악 및 환자의 동의 행위를 포함한다.

환자의 임상 치료의 평가는 문헌에 포함되고, 평가는 환자의 최초 병원으로부터 의사에 의해 수행되고 임상 치료 프로세스를 통해 후속된다. 추적 검사의 주기성은 적어도 2달 동안 이루어진다. 추적 검사는 1년 동안 수행되었다. 구성은 0.05-0.1 mg/mL 사이의 농도를 갖는 40mL의 부피를 갖는 병에서 조제된다. 플라스크는 1리터를 완성할 때까지 부형제로서 사용된 증류수로 희석되었다. 생성물은 구강 루트를 통해 매일 투여되었고, 권고된 분량은 환자의 단계 및 조직학적 진단에 따른다.

총 100명의 환자가 연구에 포함되었고, 암에 대한 주요 위치는 유방, 전립선, 결장, 폐, 뇌 및 췌장이다. 어떠한 경우에도, 생성물의 투여는 잠복기 연구에서 관찰된 것과 일치하는 치료 동안 부작용을 야기하지 않았다. 모든 경우에, 폐암 환자의 모든 경우에 호흡 곤란 및 기침의 감소 또는 사라짐과 같은 주요한 임상 치료 변수의 개선을 포함하는 생존 기간에서의 증가가 관찰되었다. 많은 환자에서, 몇몇 경우에 그 손상이 안정화되고 다른 손상이 사라졌기 때문에 x-선 테스트 결과에서 개선이 증명되었다. 이 외에도, 혈액학 변수의 안정화가 달성되었고, 고통 및 염증의 감소가 있었다. 본 발명의 구성 대상으로 1년 동안 치료받은 환자의 50% 이상에서, 연구한 몇몇 병리학자에 대해 추정된 생존 기간을 넘어섰다.

예 14. Vidatox ® 30 CH 클리닉 연구

VIDATOX® 30 CH는 LABIOFAM의 동종요법 실험에서 전개된 동종요법의 생물 요법 약이다. 그 활성 성분은 30 백분법 희석에서 로팔러러스 정셔스 전갈 독이다. 이것은 33% 알코올 매개물에서 방울 형태로 나타난다.

연구는 상이한 신체 위치(폐, 전립선, 유방, 결장, 췌장, t.림프구, 뇌, 직장 등)에서 암을 치료하기 위해 VIDATOX® 30 CH의 보조 효과를 설명한 특정한 암 치료법을 가지고, 양쪽 성별의 174명 환자에서 수행하였다. 그 결과는, 생성물이 투여된 환자의 96%가 12개월에 걸쳐 생존하였고, 환자의 90%에게서 임상 증상의 개선이 보고되었고, 이들 63명 환자 중, 이들 중 62%에게서 고통(우세한 증상으로서)이 완화되어 치료를 요구하지 않는 평균적인 형태로 야기되고, 이들 중 27%가 고통이 없음이 보고되었고, 이들 중 누구도 치료에 대한 부작용이 없음이 보고되었음을 보여준다.

Claims

전갈 독으로부터 얻어진 RjLB-01이라 불리는 펩티드로서,
544.42 Da 분자량 및 SEQ. Dl 넘버 1 아미노 산 시퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는, 펩티드.
전갈 독으로부터 얻어진 RjLB-03이라 불리는 펩티드로서,
1964.0 Da 분자량 및 SEQ. Dl 넘버 2 아미노 산 시퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는, 펩티드.
전갈 독으로부터 얻어진 RjLB-04라 불리는 펩티드로서,
4748.14 Da 분자량 및 SEQ. Dl 넘버 3 아미노 산 시퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는, 펩티드.
전갈 독으로부터 얻어진 RjLB-05라 불리는 펩티드로서,
908.0 Da 분자량 및 SEQ. Dl 넘버 4 아미노 산 시퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는, 펩티드.
전갈 독으로부터 얻어진 RjLB-07이라 불리는 펩티드로서,
707.03 Da 분자량 및 SEQ. Dl 넘버 5 아미노 산 시퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는, 펩티드.
전갈 독으로부터 얻어진 RjLB-08이라 불리는 펩티드로서,
712.42 Da 분자량 및 SEQ. Dl 넘버 6 아미노 산 시퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는, 펩티드.
전갈 독으로부터 얻어진 RjLB-09라 불리는 펩티드로서,
1203.44 Da 분자량 및 SEQ. Dl 넘버 7 아미노 산 시퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는, 펩티드.
전갈 독으로부터 얻어진 RjLB-014라 불리는 펩티드로서,
5930.45 Da 분자량 및 SEQ. Dl 넘버 8 아미노 산 시퀀스를 갖는 것을 특징으로 하는, 펩티드.
로팔러러스 정셔스(Rhopalurus junceus) 전갈 독으로부터 얻어진 약리학적 조성물로서,
부형제로서 증류수와 혼합된, 종양 세포에 대한 높은 세포 독성 작용을 갖는 활성 원리로서의 펩티드를 갖는 것을 특징으로 하는, 약리학적 조성물.
제 9항에 있어서, 동종요법으로 처리되는, 약리학적 조성물.
제 9항에 있어서, 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 펩티드를 함유하고, 이것은 항암 작용을 갖고, 이렇게 선택된 펩티드는 설명된 임의의 아미노 산 시퀀스를 갖는, 약리학적 조성물.
제 11항에 있어서, 다음의 농도, 즉 10-20 mL 증류수로 희석된 1.5-2.0% 범위에서의 RJL-01; 8-9% 범위에서의 RJLB-03; 0.5-0.8% 범위에서의 RJLB-07; 0.5-1.0% 범위에서의 RJLB-08; 0.3-0.60% 범위에서의 RJLB-09; 0.4-0.8% 범위에서의 RJLB-14를 갖는 로팔러러스 정셔스 전갈 독에 함유된 펩티드의 혼합물을 갖는 것을 특징으로 하는, 약리학적 조성물.
제 12항에 있어서, 동종 요법으로 처리된, 약리학적 조성물.
제 9항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, 구강, 국소적, 주사, 직장, 질, 및 에어로졸 루트에 의해 투여될 구성에 사용되는, 약리학적 조성물.