KR20140019185A - 저온 초고압 처리한 우산고로쇠 수액을 함유하는 화장료 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 초고압 처리한 우산고로쇠 수액을 함유하는 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하기는 25℃의 저온에서 300 ~ 500 MPa의 압력으로 15~45분간 초고압 처리한 항염증 활성 및 항아토피 활성을 갖는 우산고로쇠 추출물, 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물 및 상기 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 저온에서 초고압 처리한 우산고로쇠 추출물은 초고압 공정을 수행하였기 때문에 추출물 내에 함유된 미생물의 생육이 저해되어 있어 저장성이 증진되며, 저온에서의 처리로 인해 우산고로쇠 내에 함유된 유용 생리활성 물질의 고온으로 인한 손실 및 불활성이 감소되는 효과가 있다. 또한, 본 발명의 방법으로 제조된 우산고로쇠 수액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 천연물질을 사용하였기에 장기간의 사용에도 안전한 이점이 있으며, 독성 및 부작용도 없을뿐더러, 염증 억제 및 아토피 개선 및 치료 효과가 우수하여 기능성 화장료의 제조에 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다.

Description

저온 초고압 처리한 우산고로쇠 수액을 함유하는 화장료 조성물 및 그 제조방법{Cosmetic composition comprising Acer okamotoanum Nakai sap by extra-high pressure treatment in low temperature and manufacturing method thereof}

본 발명은 염증 및 아토피를 개선 및 예방할 수 있는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 저온 초고압 처리한 우산고로쇠 수액을 함유하는 기능성 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

아토피(atopy)란 그리스어인‘a-topos’가 어원으로‘특이한,‘이상한',‘비정상적인 반응’등의 뜻을 가진다. 말 그대로 다양한 원인이 복잡하게 뒤엉켜 발병하고 완화와 재발을 반복하는 질환이다.

아토피 질환에는 알레르기 천식, 알레르기 결막염, 알레르기 비염, 아토피 피부염 등이 있으며 이들 질환은 단독 또는 여러 질환이 동시에 나타날 수 있다. 현재까지 알려진 아토피 질환의 발병 원인은 정확히 밝혀져 있지 않지만 보편적으로 유전적, 면역학적 요인이 관여하는 것으로 추정되며, 기타 환경적, 정신적 요인 등이 악화 요인으로 작용한다는 것이 전문가들의 보편적인 견해이다.

아토피 피부염은 영아와 소아에서 가장 흔한 피부 질환 중 하나이며 생후 6개월 동안에 45 %, 생후 12개월 이전에 60 %, 5세 이전에 적어도 85 %의 비율로 시작된다. 보통 어릴 때 잠시 앓는 병이라고 알려져 있으나 환자의 50 %는 두 돌 이내에 그 증상이 없어지지만, 25 %는 청소년기까지 지속되며, 나머지 25 %는 성인이 되어도 없어지지 않고 계속된다.

아토피 피부염의 주증상은 가려움인데, 가려워서 긁게 되면 습진성 병변으로 발전하고 이러한 병변이 진행되면서 다시 더 심한 소양증이 유발되는 일련의 악순환이 반복되게 된다. 또한 아토피 질환 환자 중 아토피 피부염 환자의 80 % 이상에서 총 면역 글로블린 E 값이 증가되어 있으며, 알레르기 결막염, 알레르기 비염 또는 알레르기 천식 환자 역시 면역 글로블린 E 값이 수치가 높은 것으로 알려져 있다.

현재 아토피 피부염에 가장 널리 사용되는 치료제는 스테로이드제로 알려진 덱사메타손(Dexamethasone)이 있으나, 이는 단기 치료에는 효과적일 뿐, 1년 이상 장기 치료 시에는 안정성과 그 효능이 성립되지 않고 피부가 얇아지거나, 피부위축, 상흔, 피부변색 등의 부작용이 발생되는 사례가 보고되는 등 문제점이 나타내고 있다. 이처럼 합성 의약품은 장기간 사용에 문제가 있을 뿐만 아니라 하나의 유효성분으로는 치료가 잘 되지 않아 최근에는 다양한 유효성분과 기능을 지닌 천연물 유래의 추출물에 관심이 고조되고 있는 실정이다.

따라서, 피부의 항염증 및 아토피를 치료할 수 있는 천연물의 개발이 필요한 실정이다.

한국공개특허 제2012-0077889호 한국공개특허 제2012-0071841호

따라서 본 발명의 목적은 저온에서 초고압 처리하여 항염증 활성 및 항아토피 활성을 갖는 우산고로쇠 추출물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 저온에서 초고압 처리한 우산고로쇠 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 기능성 화장료 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 25℃의 저온에서 300 ~ 500 MPa의 압력으로 15~45분간 초고압 처리한 항염증 활성 및 항아토피 활성을 갖는 우산고로쇠 추출물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 본 발명에 따른 우산고로쇠 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 및 아토피 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은,

25℃의 온도에서 300 ~ 500 MPa의 압력으로 15~45분간 초고압 처리하여 수득한 우산고로쇠 수액을 전체 화장료의 0.1~10 중량%가 되도록 첨가하는 단계를 포함하는, 저온 초고압 처리한 우산고로쇠 수액을 함유하는 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 25℃의 저온에서 300 ~ 500 MPa의 압력으로 15~45분간 초고압 처리한 항염증 활성 및 항아토피 활성을 갖는 우산고로쇠 추출물, 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물 및 상기 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 저온에서 초고압 처리한 우산고로쇠 추출물은 초고압 공정을 수행하였기 때문에 추출물 내에 함유된 미생물의 생육이 저해되어 있어 저장성이 증진되며, 저온에서의 처리로 인해 우산고로쇠 내에 함유된 유용 생리활성 물질의 고온으로 인한 손실 및 불활성이 감소되는 효과가 있다. 또한, 본 발명의 방법으로 제조된 우산고로쇠 수액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 천연물질을 사용하였기에 장기간의 사용에도 안전한 이점이 있으며, 독성 및 부작용도 없을뿐더러, 염증 억제 및 아토피 개선 및 치료 효과가 우수하여 기능성 화장료의 제조에 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다.

도 1은 우산고로쇠 수액을 함유한 화장료 조성물의 하이알루로니다아제 저해 활성도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 우산고로쇠 수액을 함유한 화장료 조성물의 산화질소(NO) 생성량을 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 아토피 피부염 유발된 마우스에 본 발명의 우산고로쇠 수액을 처리한 군에서의 혈청 중 IgE 농도를 측정한 그래프이다.

본 발명은 25℃의 저온에서 300 ~ 500 MPa의 압력으로 15~45분간 초고압 처리한 항염증 활성 및 항아토피 활성을 갖는 우산고로쇠 추출물 및 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 및 아토피 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공함에 특징이 있다.

최근 많은 여성들뿐만 아니라 남성의 경우에도 미용에 대한 관심이 급증하면서 피부미백, 여드름, 아토피 피부염 및 주름 개선을 위한 다양한 기능성 화장품들이 출시되고 있다. 그러나 시중에 판매되고 있는 대부분의 기능성 화장품의 경우, 합성 화합물을 사용한 제품들이 대부분인데 합성화합물이 첨가된 화장품은 피부에 따라 민감한 피부반응을 유발시킬 수 있어, 다양한 피부 부작용을 초래하는 문제점이 있다.

이에 본 발명자들은 천연물 유래 피부에 유용한 기능성 효과를 갖는 물질을 연구하고 있던 중, 우산고로쇠 수액에 플라보노이드 글라이코사이드 계열 및 탄닌 계열의 화합물들이 함유되어 있어 피부 개선 효과 및 항바이러스 효과가 있다는 사실을 확인하고, 우산고로쇠 수액에 존재하는 활성물질 용출을 극대화시키기 위한 방법을 위한 연구를 계속 진행하였다.

그 결과, 우산고로쇠 수액을 25℃의 저온에서 300 ~ 500 MPa의 압력으로 15~45분간 초고압 처리한 경우, 항염 및 항아토피 활성이 매우 향상되며, 미생물에 대한 살균 효과도 우수하여 저장성이 개선되는 효과가 있음을 규명하였다.

한편, 우산고로쇠(Acer okamotoanum Nakai)는 경상북도 울릉군에 서식하고 있는 쌍떡잎식물 무환자나무목 단풍나무과의 낙엽교목으로, 잎이 6개에서 9개로 갈라지기 때문에 일반 고로쇠와 구별이 된다. 예전부터 고로쇠수액을 채취하여 먹었으며, 일본인 나카이(Nakai)가 처음 발견하여 일본의 학회에 보고하였고, 그 후 계속된 연구를 통하여 우리나라 울릉도에만 살고 있는 특산식물로 밝혀졌다. 민간에서는 봄에 수액을 채취하여 위장병 치료에 이용하였고, 줄기껍질을 골절, 타박상을 치료하는데 사용하였다. 줄기껍질을 물에 넣고 달인 다음 아침, 저녁으로 복용하고 환부에 바르면 효용이 있다고 알려져 있다.

또한, 우리나라에서는 일반적으로 고로쇠 수액이 건강 음료로 알려져 있어 음용으로서 사용되는 편이나 화장료로서 사용된 바는 거의 없다. 고로쇠 수액에는 Ca, Mg, K, Na, Si, P, Mn 등 다량의 미네랄이 함유되어 있으며, 일반 물과 비교하였을 경우 칼슘은 약 40배, 마그네슘은 약 30배 이상의 많은 미네랄이 함유되어 있다. 이러한 미네랄은 신체의 밸런스를 맞춰주고 항상성을 유지시킬 수 있도록 하는 중요한 영양소로서, Ca, Mg, K 등의 필수미네랄 섭취 시 다른 영양소의 흡수 및 활동을 도우며 원활한 신진대사를 통하여 피부를 건강하게 유지하고 영양을 공급해주는 역할을 한다. 또한 Mg, K, Na 등은 체내 삼투압을 조절에 사용되어 수분의 균형을 유지시켜 준다. 이로 인하여 수분 유지는 피부의 저항력이 높아져 자외선 등의 외부 환경으로부터 유발된 스트레스를 막아 피부트러블의 예방 효과에 도움이 된다.

이에 본 발명자들은 이러한 우산고로쇠의 효능을 보다 증진시킬 수 있는 방법으로, 우산고로쇠 수액을 저온에서 초고압 처리하는 경우 우산고로쇠의 기능성을 향상시킬 수 있다는 것을 확인할 수 있었는데, 즉, 본 발명의 일실시예에 따르면 우산고로쇠를 저온에서 초고압 처리하였을 경우, 고온으로 인한 유용물질의 손실을 최소화시킬 수 있고 동시에 우산고로쇠 수액에 미생물이 생육할 수 없는 환경을 만듦으로써 화장료에 적용 시 저장성에 대한 한계를 극복할 수 있음을 확인하였다(표 2 및 표 3 참조).

또한, 본 발명에 따른 저온에서 초고압 처리한 우산고로쇠 추출물은 항염 및 항아토피 효과가 우수한 특징이 있다.

즉, 본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명에 따른 상기 우산고로쇠 수액을 함유한 화장료 조성물을 항염 및 항아토피 효과가 있는지를 알기 위하여 히알루로니다아제(Hyaluronidase) 억제효과 및 마크로파지를 이용한 산화질소(NO) 생성량을 측정한 결과, 저온에서 초고압 처리한 우산고로쇠 수액이 저온에서 초고압 처리하지 않은 우산고로쇠 수액 및 일반고로쇠 수액에 비해 높은 히알루로니다아제 저해율을 보여 항염 활성이 우수하다는 것을 알 수 있었다(도 1 및 도 2 참조).

또한, 아토피 피부염이 유발된 실험동물 모델을 대상으로 한 실험에서도 본 발명의 우산고로쇠를 8주간 도포한 후 표피층을 측정한 결과 아토피 유발군에 비하여 표피층 두께가 현저히 감소하였으며 아토피 피부염을 가지지 않은 일반 대조군과 비슷한 두께를 보임을 알 수 있었고(표 1 참조), 아토피를 유발한 마우스의 심장에서 혈청 중의 IgE를 ELISA법으로 측정한 결과 본 발명의 우산고로쇠를 처리한 군에서 면역글로블린 IgE 농도가 현저히 감소하여 항아토피 활성이 높다는 것을 알 수 있었다(도 3 참조).

따라서 이러한 결과를 토대로 본 발명자들은 본 발명의 방법으로 제조한 우산고로쇠 수액(추출물)은 항염 및 항아토피 효과가 우수하므로 기능성 화장료의 제조에 사용할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.

그러므로 본 발명은 저온에서 초고압 추출 처리한 우산고로쇠 수액(추출물)을 유효성분으로 포함하는 항염 및 항아토피 효과가 있는 기능성 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에서 사용할 수 있는 상기 우산고로쇠 수액(추출물)은 울릉도에서 자생하는 우산고로쇠나무에서 채취한 수액일 수 있는데, 즉, 우산고로쇠나무에 채취용 드릴로 1 ~ 3cm 깊이의 구멍을 뚫고 호수를 꽂아 흘러내리는 수액을 통에 받는 방법으로 수득할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 상기 우산고로쇠 수액(추출물)은 우산고로쇠나무에서 채취한 수액을 포함하는 우산고로쇠 추출물일 수 있으며, 상기 우산고로쇠 수액(추출물)은 천연물로부터 추출물을 수득하는 공지의 추출방법을 통해 수득할 수 있는데, 특히 당업계에 공지된 용매 추출법으로 제조할 수 있다.

추출용매로는 이에 제한되지는 않으나, 유기용매로서 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트, 메틸렌클로라이드, 헥산 및 시클로헥산으로 이루어진 군 중에서 선택되는 용매를 사용할 수 있다. 또한 본 발명의 우산고로쇠 수액(추출물)은 용매 추출법 이외에도 열수 추출, 초음파 추출 및 환료 추출 방법을 사용할 수 있다.

물을 이용하여 추출물을 제조하는 경우, 우산고로쇠나무와 물의 비율은 특별히 한정되지 않으나, 우산고로쇠나무의 중량을 기준으로 물을 1배~10배로 첨가할 수 있다.

추출 시 온도는 상압 하의 실온에서 수행하는 것이 바람직하며 추출시간은 추출온도에 따라 다르지만, 1시간 내지 6시간, 바람직하게는 1시간 내지 3시간 추출한다. 또한, 추출 시 교반기로 교반할 경우에 더욱 추출효율을 증대시킬 수 있다.

본 발명에 따른 우산고로쇠 수액을 함유한 화장료 조성물은 화장료 총 부피 대비 우산고로쇠 수액을 0.1~10%(v/v)의 함량으로 첨가할 수 있으며, 부가적으로 부틸렌글리콜(Butylene glycol), 글리세린(glycerin), 카복시비닐 폴리머(Carboxyvinyl polymer)로서 1% carbopol 941, 10% L-아르지닌(L-arginine), 메틸파라벤(methylparaben), 트리에탄올아민(triethanolamine), 향료(fragrance), 피이지-40하이드로제네이티드 캐스터오일(PEG-40 hydrogenated castor oil), 4% 젤라틴 서스펜션(gelatin suspension)의 배합은 부틸렌글리콜(Butylene glycol) 10%(v/v), 글리세린(glycerin) 2~10%(v/v), 1% carbopol 941 30%(v/v), 10% L-아르지닌(L-arginine) 3%(v/v), 메틸파라벤(methylparaben) 3%(v/v), 트리에탄올아민(triethanolamine) 5%(v/v), 향료(fragrance) 2%(v/v), 피이지-40하이드로제네이티드 캐스터오일(PEG-40 hydrogenated castor oil) 3%(v/v), 4% 젤라틴 서스펜션(gelatin suspension) 25%(v/v)을 첨가할 수 있다.

보다 구체적으로 본 발명에 따른 화장료 조성물은 우산고로쇠 수액을 화장료 조성물 총 부피 기준 0.1~10%(v/v)로 첨가할 수 있고, 글리세린(glycerin)을 1~10%(v/v)의 함량으로 첨가할 수 있다.

우산고로쇠 수액을 화장료 총 부피에 대해 0.1%(v/v) 미만으로 첨가하는 경우에는 본 발명의 화장료 조성물이 가지는 다양한 생리활성 효과를 나타내지 않으며, 반면, 10%(v/v)를 초과하여 첨가될 경우에는 세포 등에 독성으로 작용하거나 또는 목적하는 효과를 첨가량에 비례하여 얻지 못하기 때문에 경제성을 고려하여 상기 기술된 범위 이내의 함량으로 첨가하는 것이 바람직하며, 또한 첨가량에 따른 화장료 조성물 가격이 상승되므로 경제적이지 못한 문제점이 있다.

또한, 글리세린(glycerin)은 화장료의 보습제로 많이 쓰여 피부의 수분 손실을 예방해주고 보습 작용을 하는 역할을 한다. 그러나 과량 첨가 시 여드름 등의 피부트러블을 야기하므로 글리세린(glycerin)의 조성비율은 화장료 총 부피에 대해 최대 10%(v/v)까지 하는 것이 바람직하다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 상술한 우산고로쇠 수액 뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.

본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 피부에 도포하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 아토피 치료 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 실시예 1>

우산고로쇠 수액의 저온 초고압 처리

우산고로쇠 수액을 비닐팩에 넣어 공기가 들어가지 않도록 진공 포장한 후 초고압 장치(Ilshin autoclave, Korea)를 이용하여 25℃의 저온에서, 300~500 MPa의 압력으로 40분간 초고압 처리를 시행하였다. 이러한 초고압 공정은 25℃ 이하의 저온에서 높은 압력을 가하여 수행하기 때문에 높은 열로 인한 우산고로쇠 수액 내에 함유된 유효성분의 파괴를 줄일 수 있고 미생물 및 유해세균의 사멸이 가능하여 저장기간을 연장하게 하는 효과가 있다. 또한, 이때 본 발명의 방법에 따라 제조된 초고압 우산고로쇠 수액과 비교할 수 있는 대조군으로서 저온에서 초고압 처리를 하지 않은 우산고로쇠 수액, 일반고로쇠 수액 및 상기 동일한 조건으로 저온에서 초고압 처리한 일반고로쇠 수액을 사용하였다. 또한 참고로 본 발명에서 사용한 우산고로쇠 수액은 울릉도에서만 자생하는 고로쇠 나무에서 채취한 수액을 말한다.

< 실시예 2>

화장료 제조

실시예 1에서 저온 초고압 공정을 처리한 우산고로쇠 수액을 화장료 총 부피에 대하여 5%(부피%)를 사용하였으며, 부재료로서 화장료 총 부피에 대하여 부틸렌글리콜(Butylene glycol)을 10 %, 글리세린(glycerin)을 5 %, 카복시비닐 폴리머(Carboxyvinyl polymer)로서 1% carbopol 941을 30%, 10% L-아르지닌(L-arginine)을 3%, 메틸파라벤(methylparaben)을 0.3%, 트리에탄올아민(triethanolamine)을 0.5%, 향료(fragrance)를 0.2%, 피이지-40하이드로제네이티드 캐스터오일(PEG-40 hydrogenated castor oil)를 0.3%, 4% 젤라틴 서스펜션(gelatin suspension)을 25%로 일정비율로 혼합하고 총 부피를 1000mL로 정량하여, 우산고로쇠 수액을 함유하는 화장품(로션)을 제조하였다. 또한 하기 실험예에서 대조군으로의 사용을 위해 본 발명의 방법으로 수득한 저온 초고압 처리 우산고로쇠 수액 대신 저온에서 초고압 처리를 하지 않은 우산고로쇠 수액, 일반고로쇠 수액 및 상기 동일한 조건으로 저온에서 초고압 처리한 일반고로쇠 수액을 사용하였다.

< 실험예 1>

항염 활성 실험

<1-1> 히알루로니다아제 억제 활성 실험

히알루로니다아제(Hyaluronidase) 억제효과는 Rooster Comb.에서 형성된 N-아세틸글루코사민(acetylglucosamine)의 양을 분광광도계로 측정하여 활성을 판단하였다. 0.1M 아세테이트 버퍼(acetate buffer, pH 3.5)에 녹인 히알루로니다아제(77900 unit/ml) 50 ㎕에 시료(실시예 1에서 수득한 저온에서 고초압 처리한 우산고로쇠수액)를 최종 농도 0.2, 0.6, 1.0 mg/ml가 되도록 하여 20㎕씩 가하고, 효소의 활성화를 위해 12.5 mM의 CaCl₂ 200㎕를 혼합한 후 37℃ 수욕상에서 20분간 배양시켰다. 대조군은 DMSO 용액을 넣고 수욕상에서 20분간 배양하였다. 활성화된 히알루로니다아제 용액에 0.1 M 아세테이트 버퍼(pH 3.5)에 녹인 히알루론산(hyaluronic acid, 12 mg/5ml) 250㎕를 첨가하여 다시 수욕상에서 40분간 배양하였다. 배양 후 0.4 NaOH용액과 100㎕와 0.4M potassium tetraborate 100㎕를 반응 혼합물에 첨가하여 끓는 수조에서 3분간 배양시킨 후 냉각시켰다. 냉각시킨 반응물에 dimethyl aminobenzaldegye 용액 (p-dimethyl amino-benzaldehyde 4g, 100% acetic acid 350ml, 및 10 HCl 50ml 혼합액) 3.28ml를 반응 혼합물에 첨가한 후 37℃ 수욕 상에서 20분간 배양하고 585nm에서 흡광도를 측정하였다. 저해율은 다음과 같이 계산하였다.

ODc: Optical density of control, ODs: Optical density of samples

히알루로니다아제 저해율을 측정한 결과, 모든 실험군에서 농도 의존적으로 하이알루로니다아제 저해활성이 증가되었으며, 우산고로쇠 수액의 활성을 비교하기 위하여 대조군으로 우산고로쇠가 아닌 일반적인 고로쇠 수액의 활성도 측정하였다. 그 결과, 일반 고로쇠 수액과 비교하여 우산고로쇠 수액의 활성이 약 12% 정도 높은 것으로 나타났고, 우산고로쇠 수액과 본 발명의 초고압 공정을 통해 수득한 우산고로쇠 수액을 비교하였을 때 본 발명의 초고압 공정을 통해 수득한 우산고로쇠 수액이 더 높은 활성을 갖는 것으로 나타났다.

따라서 본 발명의 우산고로쇠 수액이 일반적인 고로쇠 수액에 비해 높은 히알루로니다아제 저해율을 보인다는 것을 알 수 있었고, 특히 저온에서 초고압 처리한 우산고로쇠 수액이 가장 우수한 히알루로니다아제 저해율을 갖는다는 사실을 알 수 있었다(도 1 참조).

<1-2> 마크로파지를 이용한 NO 생성량 측정 실험

NO 생성량 측정을 위해 사용된 세포주는 마우스 유래 J774.1 대식세포를 사용하였으며, 세포를 10% FBS와 RPMI 1640 배지에 배양하여 24 웰 플레이트에 4.5×10⁴ cells/well의 농도로 넣은 다음, 시료를 첨가한 것과 첨가하지 않은 두 가지 군을 나누어 모두 37℃, 5% CO² 배양기에 48시간 동안 배양한 후 LPS(lipipilysaccharide)를 200 ng/well의 농도로 처리하여 48시간 동안 세포를 배양하였다. 상등액 50 μg을 취하여 동일 부피의 Griess시약(1% sulfanilamide/0.1% N-(1-naphthyl)-ethylenediamine dihtdrochloride/2.5% h3po4)을 첨가하여 실온에서 10분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트리더를 이용하여 540 nm의 흡광도를 측정하였다. Nitrite의 표준물질로는 아질산나트륨(sodium nitrite)를 사용하였으며, 농도는 32 μM에서부터 0.25 μM까지 RPMI 1640 배지로 2배씩 희석하여 얻은 표준곡선과 비교하여 계산하였다.

대식세포의 NOS(nitric oxide synthase)는 TNF-γ, TNF-α와 같은 여러 가지 사이토카인(cytokine)이나 LPS(E. coli 유래 lipopolysaccharide) 등 세균내독소의 영향을 받아 NOS 유전자가 발현 유도됨으로써 나타나기 때문에 이를 확인하고자 시료와 LPS를 단독 및 병합 투여함으로써 NO의 생성능을 확인하였다. 시료를 단독 투여한 경우 대조군과 비교하여 큰 차이를 보이지 않음을 확인 할 수 있었으나, LPS와 함께 처리할 경우, LPS를 단독으로 처리한 군(10.24 μM)보다 낮은 NO 생성량을 보였고, 그 중 본 발명의 저온에서 초고압 처리한 우산고로쇠가 6.10 μM로 가장 낮은 NO 생성량을 보여 가장 우수한 항염 활성을 갖는다는 것을 알 수 있었다(도 2 참조).

< 실험예 2>

아토피 피부염에 대한 치료 효과

본 발명의 방법으로 제조된 우산고로쇠 수액을 함유하는 화장료 조성물에 아토피 피부염의 치료 효과가 있는지를 알아보기 위하여 아토피 피부염 유발 마우스의 환부 중앙부에서 피부조직을 1㎝x1㎝의 크기로 채취하여 10% 포름알데하이드 용액에 고정한 다음 파라핀으로 포매하고 두께 4㎛의 절편을 제작하였다. 조직 절편을 헤마토자일린-에오신(hematoxylin-eosin) 법으로 염색한 다음 광학현미경을 이용하여 200배로 확대하고 5 시야를 선택하여 표피층의 두께를 계측하였다.

분석 결과, 아토피 피부염 유발 마우스에 우산고로쇠 수액을 함유한 화장료 조성물을 8주간 도포한 후 표피층을 측정한 결과, 정상군의 경우 22.8 mm, 아토피 유발군의 경우 59.9 mm의 두께를 나타내었으나, 아토피 유발된 군에 우산고로쇠를 처리한 군의 경우 모든 처리군에서 표피층의 두께가 감소하는 것으로 나타났으나, 특히 본 발명의 저온 초고압 처리한 우산고로쇠 수액을 사용한 경우가 거의 정상에 가깝게 아토피 피부염 증상이 회복되는 것으로 나타났다(표 1 참조).

< 실험예 3>

아토피 피부염 마우스 모델에서의 혈청 내 IgE 농도 및 히스타민 농도 측정

정상 마우스에 아토피를 4주간 및 8주간 각각 유발시킨 후, 상기 실험예 2에서 사용한 각각의 우산고로쇠 수액을 각 마우스에 투여한 다음, 마우스의 심장에서 채혈하고 혈청 중의 IgE를 ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)법으로 측정하였다.

그 결과, 아토피 피부염을 4주간 유발한 경우보다 8주간 유발했을 때 약 3배정도 IgE 농도가 증가하였으며, 아토피 피부염이 유발된 실험동물에 고로쇠 수액을 처리한 경우 IgE 농도가 감소하는 것으로 나타났으나, 특히 다른 수액에 비해 본 발명의 저온 초고압 처리한 우산고로쇠 수액을 사용한 경우가 가장 현저하게 IgE 농도가 감소하는 것으로 나타났다(도 3 참조).

< 실험예 4>

초고압 처리 우산고로쇠 수액의 저장성 실험

<4-1> 당 분석

본 발명의 저온 초고압 처리한 우산고로쇠 수액과 저온 초고압 처리하지 않은 우산고로쇠 수액을 대상으로 하기와 같은 실험을 수행하였다. 먼저 당 분석을 위해 0.45㎛ 멤브레인 필터(membrane filter)로 이들 수액을 여과하고 HPLC를 이용하여 당 분석을 실시하였다. 버퍼(buffer)는 아세토나이트릴(acetonitrile)과 증류수를 75:25의 비율로 혼합하여 사용하였다. Sugarpak column(300㎜ x 6.5 ㎜)을 사용하여 1 mL/min의 유속으로 분석하였고, 각 피크 검출에 RI 검출기를 사용하였다. 당류 정량을 위한 표준물질로 글루코오스(glucose), 프락토오스(fructose), 수크로오스(sucrose)를 이용하여 검량선을 작성 후, 이를 기준으로 농도를 계산하였다. 당 분석결과는 하기 표 2에 기재하였다.

<4-2> 유기산 분석 및 pH 측정

0.45㎛ 멤브레인 필터(membrane filter)로 우산고로쇠 수액을 여과하고 HPLC를 이용하여 유기산 함량을 분석하였다. 이동상은 0.01 N H₂SO₄를 사용하였고 column은 Aminex HPX-87H column(300㎜ x 7.8㎜)을 사용하여 0.6 mL/min의 유속으로 분석을 실시하였으며, 각 피크 검출에는 RI검출기를 사용하여 피르브산(pyruvic acid), 숙신산(succinic acid), 젖산(lactic acid), 포름산(formic acid), 아세트산(acetic acid), 에탄올(ethanol), 글리세롤(glycerol) 등을 분석하였다. pH 분석은 수액을 여과 없이 교반한 후 pH meter(Orion. US/520A)를 이용하여 측정하였다.

저온에서 초고압 처리하지 않은 우산고로쇠 수액의 경우, 저장 기간 동안 수크로오스(sucrose)가 글루코오스(glucose)와 프락토오스(fructose)로 분해되고 수액 내에 존재하는 미생물을 통한 해당작용이 일어나 피르브산(pyruvic acid)이 생산되는 것으로 나타났고 이어 피르브산(pyruvic acid)이 젖산(lactic acid), 숙신산(succinic acid), 에탄올(ethanol)로 발효가 되어 이에 따라 pH도 낮아지는 것으로 나타났다. 한편, 본 발명에 따른 저온에서 초고압 처리한 우산고로쇠 수액은 글루코오스(glucose), 프락토오스(fructose) 및 수크로오스(sucrose) 함량이 저장 기간이 길어져도 거의 변함이 없는 것으로 나타났고, 유기산 및 pH도 비교적 변화 없이 일정한 것을 나타나, 본 발명에 따른 저온에서의 초고압 처리가 수액 내의 미생물을 살균시켜 고로쇠 수액의 저장성을 향상시키는 것을 알 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (3)

1. 25℃의 저온에서 300 ~ 500 MPa의 압력으로 15~45분간 초고압 처리한 항염증 활성 및 항아토피 활성을 갖는 우산고로쇠 추출물.
2. 제1항의 우산고로쇠 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 및 아토피 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
3. 25℃의 온도에서 300 ~ 500 MPa의 압력으로 15~45분간 초고압 처리하여 수득한 우산고로쇠 수액을 전체 화장료의 0.1~10중량%가 되도록 첨가하는 단계를 포함하는, 저온 초고압 처리한 우산고로쇠 수액을 함유하는 화장료 조성물의 제조방법.

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