KR20130086546A - 암 치료에 있어 ｓｐａｒｃ 미세환경 시그니처의 용도 - Google Patents

암 치료에 있어 ｓｐａｒｃ 미세환경 시그니처의 용도 Download PDF

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Abstract

이 발명은 화학요법으로 반응을 예측하는 다변수 항-SPARC-근거한 방법을 제공한다.

Description

암 치료에 있어 ＳＰＡＲＣ 미세환경 시그니처의 용도{USE OF THE SPARC MICROENVIRONMENT SIGNATURE IN THE TREATMENT OF CANCER}
이 출원은 2010년 06월 03일자 제출된 미국 가특허번호 61/351,233의 35 U.S.C. §1 19(e)하의 우선권 이점을 청구한 것이고, 이 특허출원의 전체 내용은 참고적으로 여기에 혼입되어 있다.
시스테인의 풍부한, 산성 분비 단백질(또한 오스테오넥틴, BM40, 또는 SPARC로 알려져 있음) (이후 "SPARC"라 한다)은 세포 형상의 변화를 유도하고, 세포-순환 진행을 억제하고, 세포외 기질의 합성에 영향을 미치는 기질-관련 단백질을 뜻한다(Bradshaw 등, Proc. Nat. Acad. Sci. 미국 100: 6045-6050 (2003)). 마우스 SPARC 유전자는 1986년에 클론화 되었고 (Mason 등, EMBO J. 5: 1465-1472 (1986) 전장 사람 SPARC cDNA는 1987년에 클론화되고 서열화되었다(Swaroop 등, Genomics 2: 37-47 (1988). SPARC 발현은 발전적으로 조절되고 정상 발육하는 동안 또는 상처에 대한 반응에 개조를 받는 조직에서 우세하게 발현하고, 예를들면 높은 수준의 SPARC 단백질은 뼈와 치아 발육에 발현된다(참조. 예를들어, Lane 등, FASEB J., 8, 163 173 (1994); Yan & Sage, J. Histochem. Cytochem. 47:1495-1505 (1999)).
SPARC는 몇몇 공격성 암에서는 조절되지 않지만, 해당 정상 조직에는 존재하지 않는다(Porter, 등. J. Histochem. Cytochem., 43, 791 (1995)). SPARC 발현은 여러가지 종양(예를들어, 방광, 간, 난소, 신장, 장과 유방)사이에서 유발된다. 방광암에서, 예를들어. SPARC 발현은 진전된 암종과 연관된다. 단계 T2 또는 그 이상의 침입성 방광 종양이 나타나서 단계 T1의 방광 종양보다 더 높은 수준의 SPARC(또는 그 이하의 외면의 종양)가 발현하고, 더 불량한 예후를 갖는다(참조, 예를들어, Yamanaka 등., J. Urology, 166, 2495 2499 (2001)). 수막종에서, SPARC 발현은 침입성 종양만이 관련된다(참조, 예를들어, Rempel 등., Clincal Cancer Res., 5, 237-241 (1999)). 또한 SPARC 발현은 74.5%의 침입성 유방 암종 병변의 원위치(참조, 예를들어, Bellahcene 등., Am. J. Pathol, 146, 95-100 (1995))와, 54.2%의 유방 유관 상피내 암종의 침윤(참조, 예를들어, KIM 등., J Korean Med. ScL, 13, 652-657 (1998))에서 검출된다. 또한. SPARC 발현은 유방암에서 흔한 미세석회화와 관련되고(참조, 예를들어, 상기한 Bellahcene 등.,), SPARC 발현은 뼈에 대한 유방전이 친화성에 있는 것으로 예상된다.
놀랍게도, 또한 SPARAC는 몇몇 시스템에서 항-종양 활성을 갖는 것으로 나타났다. SPARC는 mid-G1의 세포를 억제하는 강한 세포 순환 억제제이고(Yan & Sage, J. Histochem. Cytochem. 47:1495-1505 (1999))이고, SPARC의 유도성 발현은 생체외 모델계에서 유방암 세포증식을 억제하는 것으로 나타나 있다(Dhanesuan 등, Breast Cancer Res. Treat. 75:73-85 (2002)). 비슷한 것으로, 외인성 SPARC는 농축-의존 방법으로 두 HOSE(사람 난소 표면 상피)와 난소 암세포의 증식을 감소시킬 수 있다. 더불어, SPARC는 난소 암세포의 세포 자연사를 유도한다. 더우기, 난소 상피 세포와 같은 세포에 관한 SPARC 수용체가 보고되어 있다. 이들 수용체에 SPARC의 결합은 SPARC의 종양 억제 기능을 매개하는 유발 조직-특이적 신호 경로일 것이다(Yiu 등, Am. J. Pathol. 159:609-622 (2001)). 또한 정제된 SPARC는 맥관 형성을 억제하고 생체내 이종이식 모델계에서 신경아세포종 성장을 현저하게 손상시키는 것으로 보고되어 있다(Chlenski 등, Cancer Res. 62:7357-7363 (2002)).
암은 현재 하나 또는 세가지 형의 치료: 수술, 방사선과 화학요법의 조합으로 주로 치료된다. 일반적으로 수술은 암의 초기 단계를 치료하는데만 효과적이다. 50%이상의 암개개에 있어서, 이들은 진단되는 시간에 따라 이들이 효과적 수술 치료 후보는 아니다. 방사선 치료는 초기에 임상적으로 위치하는 질병으로 존재하는 개인에 대하여서만 효과가 있고 전이를 갖는 후기 단계의 암에는 효과가 없다.
화학요법에는 세포복제 또는 세포 대사의 파괴가 있다. 화학요법은 효과적이나, 몇가지 부작용, 예를들어. 구토, 낮은 백혈구(WBC), 모발손실, 체중감소와 기타 중독작용이 있다. 심한 중독 부작용 때문에, 여러개개의 암은 완전한 화학치료 요법을 성공적으로 끝낼 수가 없다. 화학요법-유도된 부작용은 개개의 생명질에 현저하게 나쁜 영향을 주고 치료하는 개개의 유순도에 극적으로 영향을 미칠 수 있다. 더불어, 화학요법제와 관련되는 유해 부작용은 일반적으로 이들 약제투여에 있어 주 투약량-한정 독성(DLT)이 있다. 예를들면, 점막염은 항대사제 세포독성제 5-U, 메토트렉사이트와, 독소루비산과 같은 항종양 항생물질을 포함한 몇몇 항암제의 주투약량 한정 독성 중 하나이다. 많은 이들 화학요법-유도된 부작용에 있어, 심하면 입원해야하고, 또는 통증치료용 진통제로 치료해야 한다. 암을 갖는 몇몇 개개인은 화학요법에 대한 불량한 내성으로 인하여 사망할 수 있다. 항암제의 극한 부작용은 이러한 약제의 불량한 표적 특이성에 의하여 야기된다. 약제는 의도되는 표적의 암은 물론 개인의 가장 정상적인 기관을 순환한다. 또한 부작용을 일으키는 불량한 표적 특이성은 약제의 분획만이 정확하게 표적되기 때문에 화학요법의 효능을 감소시킨다. 화학요법의 효능은 표적 종양내의 항암제의 불량한 보존으로 더 감소된다.
암의 심도와 폭에 따라, 수술, 화학요법과 방사선 치료의 결점을 극복하기 위하여, 이와 같은 질병 또는 장애의 효과적인 치료가 크게 필요한 것이다. 특히, 화학요법과 연관되는 일련의 부작용을 보아, 종양이 화학치료 요법에 반응하는지 또는 하지 않는지를 확인할 필요가 있다.
이 발명은 암을 갖는 동물의 관리에 있어 기구로서 "SPARC 미세환경 시그니처를 제공한다." "SPARC 미세환경 시그니처"(SMS)는 조직학적 절편이 두 항-SPARC 항체, 종양세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하는 제일 항-SPARC 항체와 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하는 제이 항-SPARC 항체로 염색할때 관찰되는 항체 염색 패턴을 뜻한다. 종양 또는 이들의 조합물내에서 종양세포, 섬유아세포, 염증성세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경조직, 정상해부의 SMS를 측정하여 항체 염색하고 스코어를 기록한다(양성세포의 퍼센트, 기정 배율로 항체 염색된 부분의 퍼센트 와/또는 0-4의 염색 강도로서).
하나의 구성으로, 이 발명은 화학 요법으로 동물의 종양을 다음과 같이 치료하는 방법을 제공한다:
(a). SPARC 미세환경 시그니처를 얻기위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조,
(b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하고, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색과 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내에서 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색을 측정하고,
(e). 예정된 SMS가 항체가 항체 면역에 의하여 나타내면, 치료적 유효량의 화학요법을 투여하여서 한다.
다른 구성에 있어, 이 발명은 화학 요법으로 동물의 종양반응을 예측하는 다음과 같은 방법을 제공한다:
(a). SPARC 미세환경 시그니처를 얻기위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조,
(b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하고, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색과 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내에서 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색을 측정하고,
(e). 기정 SMS가 항체 염색에 의하여 나타내면 화학요법에 대한 양성반응으로 예측한다.
다른 구성으로, 이 발명은 종양을 갖는 동물이 낮은 위험의 종양 진행 또는 낮은 위험의 종양으로 치사를 갖는지를 예측하는 다음과 같은 방법을 제공한다:
(a). SPARC 미세환경 시그니처를 얻기위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조,
(b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하고, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색과 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내에서 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색을 측정하고,
(e). 기정 SMS가 항체염색에 의하여 나타나면 낮은 위험의 종양 진행 또는 낮은 위험의 종양으로 치사를 예측한다.
또한 이 발명은 화학 요법으로 동물의 종양의 반응을 예측하는 키트를 제공한다:
(a). 제일 항-SPARC 항체로 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(b). 제이 항-SPARC 항체로 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색한다.
도 1은 임상 시험 설계의 대표적 계통도이다.
도 2는 전보조 유방암 시험(N=107)에서 HER2 - 음성환자의 결과를 나타내는 도표이다. 도2A는 진행 무생존(PFS)을 나타내고 도2B는 전체 생존(OS)을 나타낸다(평균 PFS와 OS는 이 환자군에는 도달되지 않았다).
도 3은 다른 예후 인자에 SMS 위험 균주군의 부가는 단축된 PFS에서 저위험(0 위험인자), 중간위험(1 위험인자)와 고위험(2 위험인자)를 갖는 종양과 더 구별되는 것을 증명하는 도표이다.
도 4는 다른 예후 인자에 SMS 위험 균주군의 부가는 단축된 PFS에서 저위험(0 위험인자), 중간위험(1 위험인자)와 저위험(2 위험인자)를 갖는 종양과 더 구별되는 것을 증명하는 도표이다.
여기에 사용된 "종양"이란 용어는 양성 또는 악성(암성) 여부, 주부위 병소 또는 전이 여부의 어떠한 신생물성 성장, 증식 또는 세포집단을 뜻한다. 여기에 사용된 "암"이란 용어는 정상 성장억제제에 대하여 감수성을 잃은 세포증식에 의하여 일어나거나 특징을 갖는 증식성 장애를 뜻한다. 동일한 조직형의 암은 통상 동일한 조직에서 나오고, 이들의 생물학적 특성을 기초로한 다른 아형으로 분할된다. 암의 네가지 일반 카테고리에는 암종(상피 조직 유도), 육종(결합조직 또는 중배엽 유도), 백혈병(혈액-형성 조직 유도)와 림프종(림프조직 유도)이 있다. 200가지 이상의 다른 형의 암이 알려져 있고, 몸체의 모든 기관과 조직에 영향을 미친다. 암의 정의가 한정되어 있지 않은 특수한 암의 예를들면. 흑색종, 백혈병, 성상세포종, 교모세포종, 망막모세포종, 림프종, 교세포종, 호지킨 림프종과 만성 림프구 백혈병이 있다. 여러가지 암에 의하여 영향을 받는 기관과 조직의 예를들면, 췌장, 유방, 갑상선, 난소, 자궁, 고환, 전립선, 갑상선, 뇌하수체, 부신, 신장, 위, 식도 또는 직장, 머리와 목, 골, 신경계, 피부, 혈액, 상인두 조직, 폐, 뇨관, 자궁, 질, 외분비선과 내분비선이 있다. 선택적으로, 암은 다중심 또는 알려지지 않은 주부위(CUPS)에 있다.
여기에서 사용된 "암세포"란 암화를 받고 이 암화전과 동일한 범위로 성장이 더이상 조절되지 않는 세포를 뜻한다.
여기서 사용되는 "약물"이란 환자 또는 시험 대상체에 투여하여 효과를 가져올 수 있는 조성물을 뜻한다. 효과는 화학적, 생물학적 또는 물리학적인 것을 뜻하고, 환자 또는 시험 대상체는 사람 또는, 설치류 또는 형질전환 마우스와 같은 비-사람 동물을 뜻한다. 조성물은 유기 또는 무기 소분자를 포함하고 다른 분자 조성물은 합성으로 만들거나, 자연에서 발견하거나 또는 부분합성으로 제조한다. 이러한 그룹에 포함되는 것은 뉴클레오티드, 핵산, 아미노산, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질 또는 최소한 하나의 이들 구성요소를 함유하는 복합체가 있다. 약물은 유효적 조성물 단독 또는 약학적으로 허용할 수 있는 부형제와 조합하여 이루어질 수 있다.
여기서 사용된 "약학적으로 허용할 수 있는 부형제"란 생리적으로 화합할 수 있는 용매, 분산매, 피복물, 항박테리아제, 항균제 또는 항진균제, 등장제와 흡수 지연제 등의 어느 하나 또는 모두를 포함한다. 부형제는 정맥내, 복강내, 근육내, 척수강내, 또는 경구 투여에 적합하다. 부형제는 멸균주사액 또는 분산액을 임시 제조하기위하여 멸균수용액 또는 분산액을 포함할 수 있다. 약물을 제조하기 위한 이러한 매체의 사용은 이 분야에 알려져 있다.
여기에 사용된 약물의 "약리학적 유효량"이란 약제를 사용하는 용어에서 유래된 약제의 치료적 수준을 가져오는 농도로 존재하는 약물의 양을 사용하는 것을 뜻한다. 이것은 약물을 받는 대상체에 대한, 방출 형태, 투약기간, 나이, 체중, 일반건강, 성별과 식이에 따른다. 투약에서 "약리학적 유효량"의 결정에는 이 분야의 통상의 지식을 가진자가 할 수 있는 통상의 최적조건이 요구된다. 암 또는 암세포는 암세포를 괴사시키거나 종양크기를 감소시키고, 전체 암 성장을 감소시키거나(즉, 혈관형성 감소를 통하여), 전이를 억제시키는 요법의 능력을 기초로하는 주어진 치료요법 또는 화학요법제에 대한 "감수성" 또는 "내성"과 같이 기술될 수 있다. 치료요법에 내성을 갖는 암세포는 요법에 대하여 반응하지 않고 증식을 계속한다. 치료요법에 대하여 감수성을 갖는 암 세포는 세포괴사, 종양크기감소, 감소된 전체 성장(종양 반복), 또는 전이 억제를 가져오는 요법에 대하여 반응한다.
여기에 사용된 "치료요법" 또는 "치료"는 암세포에 유해한 최소한 하나의 제제의 투여를 뜻한다. 이 발명에 의하여 사용하는데 적합한 치료요법은, 제한되는 것은 아니나, "화학 치료요법", "방사선 치료요법", "선택적 치료요법"과 이들의 조합에 있다.
여기에 사용된, "화학 치료요법"은 암세포를 파괴하는데 유해한 최소한 하나의 화학요법제를 투여하는 것을 뜻한다. 임상의가 이용할 수 있는 이와 같은 화학요법제에는 미리애드가 있다. 화학요법제는 대형환제의 단일 투약량으로 대상체에 투여하거나, 시간에 따라 더 작은 투약량으로 투여할 수 있다. 단일 화학요법제를 사용하거나(단일-제제치료) 또는 하나 이상의 제제를 조합하여 사용할 수 있다(조합치료), 화학요법은 단독으로 사용하여 몇가지 형의 암을 치료할 수 있다. 또한, 화학요법은 다른 형의 치료와 조합하여 예를들어, 상기한 바와같은 방사선 요법 또는 선택적 요법(예를들어 면역요법)과 사용할 수 있다. 더불어 화학감작제는 화학요법제와 조합한 요법으로 투여할 수 있다.
여기에 사용된 "화학요법제" 또는 "항암제"는 암치료에 사용하고 일반적으로 직접 암세포를 괴사시키는 능력을 갖는 약물을 뜻한다. 화학요법제의 예를들면. 알킬화제, 항대사물질, 천연생성물, 호르몬 및 길항물질과 기타 제제가 있다. 교호명의 예는 괄호에 표시했다. 알킬화제의 예를들면, 메클로르에타민, 시클로포스파미드, 이소스파미드, 멜파란(L-사르콜리신)과 클로람부신과 같은 질소 머스타드; 에틸에니민 및 헥사메틸멜라민과 같은 메틸멜라민과 티오테파; 부술판과 같은 알킬 술포네이트; 카르무스틴(BCNU), 세무스틴(메틸-CCNU); 로무스틴(CCNU)과 스트렙토조신(스트렙토조토신)과 같은 니트로소우레아; 인산에스트라무스틴과 같은 DNA 합성 길항물질; 다카르바진(DTIC, 디메틸-트리아제노이미다졸카르복스아미드)와 테모졸로미드와 같은 트리아진이 있다. 항대사물질의 예를들면, 메토트렉에이트(아메토프테린)와 같은 폴산 유사체; 플루오로우라신(5-플루오로우라실, 5-FU, 5FU), 플록수리딘(플루오로데옥시우리딘, FUdR), 시타라빈(시토신 아라비노시드)와 젬시타빈과 같은 피리미딘 유사체; 머캅토푸린(6-머캅토푸린, 6-MP), 티오구아닌(6-티오구아닌, TG), 및 펜토스타틴(2'-데옥시코포르마이신, 데옥시포르마이신), 클라드리빈과 플루다라빈과 같은 푸린 유사체; 암사크린과 같은 위상이성질화 효소억제제가 있다. 천연 생성물의 예를들면 빈블라스틴(VLB)과 빈크리스틴과 같은 빈카 알카로이드; 파클리탁셀과 도세탁셀(탁소테르)과 같은 탁산; 에토포시드와 테니포시드와 같은 에피포도필로톡신; 토포테칸과 이리노테칸과 같은 캄프토테신; 닥티노마이신(악티노마이신 D), 다우노루비신(다우노마이신, 루비도마이신), 독소루비신, 블레오마이신, 미토마이신(미토마이신 C), 이다루비신, 에피루비신과 같은 항생물질; L-아스파라기나아제와 같은 효소; 인터페론 알파와 인터류킨 2와 같은 생물학적 반응 수식인자가 있다. 호르몬과 길항물질의 예를들면, 부세레린과 같은 항체형성 호르몬 방출 작동제; 프레드니손과 같은 아드레노코르티코스테로이드와 관련 제제;히드록시프로게스테론 카프로에이트, 초산 메드록시프로게스테론과, 초산 메게스트롤과 같은 프로게스틴; 디에틸스틸베스트롤과 에틴일 에스트라디올과 같은 에스트로겐과 관련 제제; 타목시펜과 안나스트로졸과 같은 에스트로겐 길항물질; 프로피온산 테스토스테론과 플루옥시메스테론과 같은 안드로겐과 관련 제제; 플루타미드와 비칼루타미드와 같은 안드로겐 길항물질; 류프롤리드와 같은 고나도트로핀-방출 호르몬 유사체가 있다. 기타 제제의 예를들면, 탈리도미드; 시스플라틴(cis-DDP), 옥사리플라틴과 카르보플라틴과 같은 백금 배위 복합체; 미톡산트론과 같은 안트라센에디온; 히드록시우레아와 같은 치환된 우레아; 프로카르바진(N-메틸히드라진, MIH)과 같은 메틸히드라진 유도체; 미토탄(o,p'-DDD)과 아미노글루테티미드와 같은 아드레노코르티칼 억제제; 벡사로텐과 같은 RXR 작용제; 이마티니브와 같은 티로신 키나아제 억제제가 있다. 이들의 교호명과 상품명과 화학요법제의 부가적 예와, 투약과 투여 요법을 포함한 이들의 사용 방법은 이 분야의 전문가에게 알려져 있다. 특히 이 발명에 의하여 사용하는데 적합한 화학요법제에는 제한없이, 나노입자 알부민-결합 파클리탁셀이 있다.
또한 ABI-007으로 알려져 있는 Abraxane™이 바람직한 화학요법제이다. Abraxane™은 파클리탁셀의 알부민-나노입자 제제이다. 부형제로서 알부민 나노입자를 사용하면 염수와 재구성 했을때 콜로이드 제제를 가져온다. 임상적 연구를 기초로 하면, Abraxane™의 사용은 Taxol™과 비교했을 때, 감소된 과민성 반응의 특징을 갖는 것으로 나타났다: 따라서, 예비투약은 Abraxane™을 받은 환자에게는 요구되지 않는다.
알부민-나노입자 제제의 다른 이점은 독성 유화제를 배제하므로서 Taxol™에서 보다 더 빈번한 간격으로 더 높은 투약량의 파클리탁셀을 투여할 수 있는 것이다. 증강된 효능을 (ⅰ)더 높은 허용 투약량(300 mg/m2), (ⅱ)더 긴 반감기, (ⅲ)지속되는 국소 종양 가용성 과/또는 (ⅳ)지속되는 생체내 방출 Abraxane™의 결과로서 고체 종양에서 볼 수 있는 잠재력이 있다.
양성 반응은 한정되어 있는 것은 아니나, 최소한 5%, 바람직하기로는 최소한 10%, 더 바람직하기로는 최소한 15%, 더욱 바람직하기로는 최소한 20%, 가장 바람직하기로는 최소한 25% 또는 그 이상의 계량 개선으로 나타나는 병리학적 반응(종양 크기 또는 덩어리 감소), 전체 생존, 또는 진행 무 생존을 포함하는 것으로 정의된다. 또한, 무치료나 종전 또는 선택적 치료와 비교하여 통계적으로 상당한 양의 개량을 나타낸다.
음성 반응은 한정되어 있는 것은 병리학적 진행, 감소된 전체 또는 진행 무 생존을 포함한다.
여기에 사용된 "방사선 치료요법" 또는 "방사선 치료"란 용어는 암세포를 괴사시키기 위한 방사선 투여를 뜻한다. 방사선은 세포내의 여러가지 분자와 상호작용하지만, 세포괴사를 가져오는 일차 표적은 데옥시리보핵산(DNA)이다. 그러나, 방사선 치료는 세포 및 핵막과 기타 세포 소기관에 손상을 가져온다. 통상 DNA 손상에는 당분-인산 주쇄에서 단쇄 및 이중쇄 파괴를 포함한다. 더우기, 세포기능을 와해 시킬 수 있는 DNA와 단백질의 가교일 수 있다. 방사선 형에 따라, DNA 손상의 메카니즘은 상대의 생물학적 효과에 따라 변할 수 있다. 예를들면, 중 입자(즉. 양자, 중성자)는 직적 DNA에 손상을 주고 더 큰 상대의 생물학적 효과를 가져온다. 전자기 방사선은 세포 수분의 이온화에 의하여 일차적으로 생성되는 단수명 히드록시 유리기를 통하여 간접 이온화 작용을 가져온다. 방사선의 임상적 적용은 외부 비임 방사선(외부 공급원으로부터)과 근접치료(환자에게 이식되거나 삽입되는 방사선 공급원을 사용하여)로 구성된다. 외부 비임 방사선은 X-선 과/또는 감마선으로 구성되고, 근접 치료에서는 감마선에 따라 알파 입자, 또는 베타입자를 붕괴하고 방출하는 방사성 핵을 사용한다.
방사선 치료는 방사선 증감제로서 작용하는 화학요법제와 함께 조합하여 화학 요법에 사용할 수 있다. 개별 환자에 적합한 특별한 방사선 요법의 특이적 선택은 암의 조직과 단계를 고려하여 전문가에 의하여 주의하여 결정할 수 있다.
여기서 사용되는 "선택적 치료요법" 또는 "선택적 치료"란 용어는 예를들어. 생물학적 반응 수식인자(폴리펩티드-, 카르보하드레이트-,와 지질-생물학적 반응 수식인자 포함), 톡신, 렉틴, 항혈관형성제, 수용체 트로신 키나아제 억제제(예를들어 Iressa™(게피티니브)), Tarceva™(에르로티니브), Erbitux™(세툭시마브), 이마티니브 메실레이트(Gleevec™), 프로테오솜 억제제(예를들어. 보르테조미브, Velcade™); PTK787 (ZK222584)와 같은 VEGFR2억제제, 아우로라 키나아제 억제제(예를들어 ZM447439); 포유류 표적의 라파마이신(mTOR)억제제, 시클로옥시게나아제-2(COX-2)억제제, 라파마이신 억제제(예를들어 시로리무스, RapamuneTM); 파르네실트란스페라아제 억제제(예를들어, 티피파르니브, (Zarnestra™); 기질 금속단백질 분해효소 억제제(예를들어, BAY 12-9566; 황산화 다당류 테코갈란); 혈관형성 억제제(예를들어, Avastin.™(베바시주마브)); TNP-4와 같은 푸마길린의 유도체; 카르복시아미노트리아졸; BB-94와 BB-2516; 탈리도미드; 인터류킨-12; 리노미드; 펩티드 단편; 혈관 성장인자와 혈관 성장인자 수용체에 대한 항체; 혈소판 유도 성장인자 수용체 억제제; 단백질 키나아제 C억제제, 미토겐-활성화 키나아제 억제제, 미토겐-활성화 단백질 키나아제 키나아제 억제제, 라우스 육종 바이러스 형질전환 암유전자(SRC)억제제, 히스톤데아세틸라아제 억제제, 소 저산소증-유도성인자 억제제, 헤지호그 억제제와 TGF-β, 신호 억제제를 포함한다. 더우기, 면역요법제에서는 선택적 치료요법을 고려하여야한다. 예를들면, 케모킨, 케모탁신, 시토킨, 인터류킨, 또는 조직인자가 있다. 또한 적당한 면역요법제에는 전성 항체를 함유하는 혈청 또는 감마 글로불린; 비특이성 면역자극 보조제; 활성 특이적 면역요법과 양자 면역요법이 있다. 더불어, 선택적 치료에는 안티센스분자, 폴리펩티, 항생물질, 유전자 요법 벡터 등을 포함한 폴리뉴클레오티드와 같은 기타 생물학적-기초 화학적 구성물이 있다. 이와 같은 선택적 치료는 단독으로 또는 조합하여, 또는 여기에 기술된 다른 치료요법과 조합하여 투여할 수 있다. 선택적 치료요법에 사용된 이들 제제의 교호명과 상품명 및 선택적 치료요법에 사용된 제제의 부가적 예와 투약과 투여요법을 포함한 이들의 사용 방법은 이 분야의 전문 의사에게 알려져 있다. 더우기 화학요법제의 사용 방법과 투약 및 투여 요법을 포함한 조합 치료에서의 선택적 치료요법에 사용되는 기타 약제는 이 분야의 전문가에게 알려져 있다.
특히, 적당한 선택적 치료요법은 한정되는 것은 아니나 Her2(예를들어, 트라스투루마브), EGF 또는 EGF수용체, VEGF(예를들어, 베바시주마브) 또는 VEGF수용체, CD20 등에 대한 항체와 같은 암세포 표면상의 분자에 대한 항체를 포함한다. 치료제는 하나 그 이상의 보체 활성화, 세포 매개 세포독성, 세포 자연사 유도, 세포 괴사 유도와 옵신화를 매개하는 어떠한 항체 또는 항체 단편을 함유할 수 있다. 예를들어 이와 같은 항체단편은 전체 또는 부분적 Fc영역을 가질 수 있다.
여기에 사용된 "조직학적 절편"이란 용어는 현미경 슬라이드에 설치하는데와 어떠한 적당한 프로토콜로 염색하는데 적합한 조직 시료의 엷은 절편을 뜻한다. 여기에 사용된 "조직학적 절편의 항체 염색"이란 세포내 기질인 세포 성분에 항체의 결합으로 나오는 조직학적 절편의 세포내 기질과 세포의 염색을 뜻한다. 여기에 사용된 "우세하게" 또는 "바람직하게"란 구조체, 예를들어 섬유아세포 상의 암세포를 염색하는 것이고, 조직학적 절편에서 바람직하게 염색된 구조체의 항체 염색은 이 분야의 전문가가 현미경으로 관찰했을때 예를들어 3/3을 포함하는 어떠한 적당한 시스템에 의하여 병리학자에 의한 등급의 강도를 가져야하고, 모든 다른 구조체는 1/3의 강도만으로 염색되거나 0/3(염색없음)을 나타낸다.
여기에 사용된 "에피토프"란 용어는 항체에 의하여 결합된 삼차원 구조, 특히 항체에 의하여 표적된 아미노산 서열을 뜻한다. 여기에 사용된 "MAB941 단클론 항체에 의하여 인식되는 에피토프"란 용어는 MAB941 단클론 항체에 의하여 결합된 SPARC의 아미노산 서열을 뜻한다(SPARC 단클론 항체 (R&D Systems, Minneapolis, MN), 카달로그 # MAB941).
여기에 사용된 "면역우세 에피토프"란 다클론 항혈청의 항체에 의하여 최대의 집단 결합 활성과 결합된 삼차원 구조체를 뜻한다. 특히, 에피토프는 다클론 항혈청을 사용한 항체 염색 프로토콜에서 염색 패턴을 가질 수 있다. 여기에 사용된 "AF941 다클론 항체에 의하여 인식되는 면역우세 SPARC 에피토프"란 용어는 AF941 다클론 항혈청에 의하여 최대의 결합 활성을 갖는 것으로 알려진 SPARC 펩티드와 아미노산 서열을 뜻한다. 따라서, 이들 SPARC 펩티드와 아미노산 서열의 결합과 염색을 가져오고 대부분의 항체 염색이 관찰된다(SPARC 다클론 항체((R&D Systems, Minneapolis, MN), 카달로그 # AF941).
또한, 에피토프 지도작성은 이 분야에 알려져 있는 표준 방법을 사용하여 행할 수 있다. 예를들면, "Epitope Mapping," Chapter 11, in Using Antibodies by Ed Harlow and David Lane. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA, 1999에서 나온 프로토콜이 있으며, 이는 여기에 전체가 참고적으로 혼입되어 있다. 에피토프 지도작성에 따라, 에피토프-특이적 항체는 표준 방법으로 쉽게 발생 될 수 있다.
여기서 "항체"란 한정되어 있는 것은 아니나, 단클론 항체, 다클론 항체, 이량체, 다량체, 다특이성 항체(예를들어, 이특이성 항체)를 뜻한다. 항체는 다른 종에서 교화, 키메라 또는 유도된 마우스, 사람일 수 있다. 항체는 특이한 항원으로 인식 및 결합할 수 있는 면역계에 의하여 발생 되는 단백질이다. 일반적으로 표적 항원은 다수 항체상에서 CDRs에 의하여 인식되는 에피토프라 불리우는 여러결합 부위를 갖는다. 다른 에피토프에 특이하게 결합하는 각 항체는 다른 구조를 갖는다. 따라서, 하나의 항원은 하나의 대응하는 항체보다 더 많이 가질 수 있다.
항체는 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉. 관련 표적의 항원 또는 이들의 부분이 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함한다. 표적물에는 자가 면역 질병과 연관되는 자가 면역 항체를 생성시키는 암세포 또는 다른 세포들이 있다.
여기에 기술된 면역글로불린은 면역글로불린 분자 중 어떠한 종류(예를들어, IgG, IgE, IgM, IgD 과 IgA) 또는 아류(예를들어 IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl 과 IgA2)일 수 있다. 면역글로불린은 어떠한 종에서 유도될 수 있다.
"항체 단편"은 원하는 생물학적 활성을 유지하는 전장 항체의 일부분을 함유한다. 통상 "항체 단편"은 항원 결합 또는 이들의 가변성 영역이다. 항체 단편의 예를들면, Fab, Fab', F(ab')2와 Fv단편; 디아보디; 선형항체; Fab 발현 라이브러리에 의하여 생성되는 단편, 항- 이디오타입성(항-Id)항체, CDR(상보성 측정 영역)과, 암세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원, 단일-쇄 항체 분자에 면역특이적으로 결합하는 상기 중 어느 하나의 에피토프-결합 단편; 항체 단편에서 형성된 다특이성 항체가 있다.
단클론 항체는 중쇄 와/또는 경쇄의 일부분이 특별한 종에서 유도된 항체의 대응하는 서열과 동일하거나 동종이거나 또는 특별한 항체류 또는 아류에 속하고, 쇄의 나머지는 다른 종에서 유도된 항체의 대응하는 서열과 동일하거나 동종이거나 또는 다른 항체류 또는 아류에 속하는 "키메라"항체는 물론, 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는한 이와 같은 항체의 단편을 포함한다(미국 특허번호 4,816,567), 여기서 중요 키메라 항체에는 비-사람 영장류에서 유도된 가변성 영역 항원-결합 서열(예를들어, Old World Monkey 또는 Ape)과 사람 불변영역 서열을 함유하는 "프라이머타이즈드(primatized)"항체가 포함된다.
"항체-의존성 세포-매개 세포독성"과 "ADCC"란 Fc수용체(FcRs)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포(예를들어, Natural Killer(NK)세포, 뉴트로필과, 대식세포)가 표적 세포상에 결합되는 항체를 인식한 다음 표적 세포의 용해를 일으키는 세포-매개 반응을 뜻한다. ADCC, NK 세포를 매개하는 1차 세포는 Fc.
Figure pct00001
.RIII 만을 발현하고, 반면에 단세포는 Fc
Figure pct00002
RI, Fc
Figure pct00003
RII과 Fc
Figure pct00004
RIII을 발현한다. 중요 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위하여, 생체외 ADCC 검정을 행한다(미국 특허번호5,003,621; 미국 특허번호 5,821,337). 이와 같은 검정에 유용한 효과 세포에는 말초혈 단핵세포(PBMC)와 내츄럴 킬러(NK)세포가 있다.
"세포 사멸 유도" 항체는 생존가능한 세포가 비 생존가능한 세포로 되는 것이다. 생체외 세포사멸은 보체와 면역 효과 세포 없이 측정하여 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC) 또는 보체 의존성 세포독성(CDC)에 의하여 유도되는 세포 사멸을 구별할 수 있다. 따라서, 세포사멸에 대한 검정은 열 비활성화 혈청(즉 보체없이)을 사용하여 면역 효과 세포없이 행할 수 있다. 항체가 세포 사멸을 유도할 수 있는지 여부를 측정하기 위하여, 요오드 프로피듐(PI), 트리판 블루 또는 7AAD의 섭취량에 따라 평가되는 막 보존성 손실은 미반응 세포와 비교하여 평가될 수 있다. 세포 사멸-유도항체는 BT474 세포의 PI 섭취량 검정에서 PI 섭취량을 유도하는 것이다.
"세포 자연사 유도" 항체는 아넥신 V의 결합, DNA의 단편화, 세포수축, 소포체의 이완, 세포 단편화 와/또는 막 소포의 형성(세포 자연사 몸체)에 의하여 측정되는 계획된 세포 사멸을 유도하는 것이다.
여기서 사용된 "화학감작제" 또는 "감작제"란 화학요법제, 방사선 치료요법 또는 선택적 치료요법의 치료효과를 강화하는 약물을 뜻하며, 그러므로, 이와 같은 치료 또는 제제의 효능을 개량한다. 또한 종양 또는 암세포의 치료에 대한 감수성 또는 내성은 예를들어, 일정기간 이상 종양크기, 종양 덩어리 또는 전이 발생율을 측정하여, 사람 또는 설치류 같은 동물에서 측정한다. 예를들면, 사람에 대하여는 약2, 약3, 약4 또는 약6개월과 마우스에 대하여는 약2-4, 약3-5, 또는 약4-6주 측정한다. 조성물 또는 치료방법은 치료 감수성의 증가 또는 내성의 감소가 이러한 조성물 또는 방법 없이 치료한 감수성 또는 내성에 비하여 약 2-배, 약3-배, 약4-배, 약10-배, 약15-배, 약20-배 또는 그 이상으로 약 10% 또는 그 이상, 예를들어 약 30%, 약40%, 약50%, 약60%, 약70%, 약80% 또는 그 이상이면 치료요법에 대한 종양 또는 암세포의 반응을 감작시킨다. 치료요법에 대한 감수성 또는 내성의 결정은 이 분야에서와 이 분야의 전문가에게는 일반적인 것이다.
"펩티드", "폴리펩티드"와 "단백질"이란 용어는 서로 교체하여 사용할 수 있고, 펩티드 결합 또는 수식된 펩티드결합, 예를들어, 증가된 반감기와 같이, 펩티드에 대하여 부가적으로 원하는 성질을 제공하는 펩티드 등입체(수식된 펩티드 결합)에 의하여 공유 결합되는 최소한 두개의 아미노산 잔기로 구성되는 화합물을 뜻한다. 펩티드는 최소한 두개의 아미노산을 함유한다. 또한 여기에 기술된 펩티드 또는 단백질을 함유하는 아미노산은 번역 후 과정과 같은 자연 과정에 의하여 아니면, 이 분야에 잘 알려져 있는 화학적 수식법에 의하여 수식될 수 있다. 수식은 펩티드 주쇄, 아미노산 측쇄와 아미노 또는 카르복실 말단을 포함하여, 펩티드 어느 곳에서나 일어날 수 있다. 동일한 형의 수식은 주어진 펩티드의 몇몇 부위에서 동일 또는 변화한 정도로 존재할 수 있다.
SPARC 미세환경 시그니처(SMS)를 측정하는 방법론은 제일 항-SPARC 항체가 종양세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하는 제일 항-SPARC 항체와, 제이 항-SPARC 항체가 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하는 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하는 것이 있다. SPARC 발현의 7가지 성분은 두 다른 성분: 종양내에서 종양세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질(스트로마), 혈관, 신경과 기타 정상 해부로 측정된다. 각 부분에 염색된 세포 퍼센트, 각 종양 성분에 대한 염색 강도(0~4)와 전체 스코어(종속성 변수)를 측정한다(환자당 전체 변수: 7성분×2항체×3스코어 = 42변수 스코어).
이 발명의 모든 방법에 있어, 적당한 항-SPARC 항체는 조직 미세검정과 같은, 이 분야의 통상의 기술자에게 알려져 있는 어떠한 적당한 방법을 사용하여 확인하여 종양과 섬유아세포 SPARC 염색의 정확한 분포를 검정할 수 있다. 이 분야에 알려져 있는 표준 방법으로 만든 단클론 및 다클론항체를 사용할 수 있다. 특히 바람직한 항-SPARC 항체의 하나는 바람직하게 항체 염색 종양 세포에 사용될 수 있는 AF 941 다클론항체에 의하여 인식되는 면역성 에피토프를 인식하는 항체이다.
선택된 블록으로부터 중복 0.6-mm 코어를 함유하는 조직 미세검정은 Beecher Instruments Micro Tissue Arrayer를 사용하여 구성할 수 있다. 4개- 마이크로미터-두께 절편은 완성된 검정 블록에서 절단하여 실란화된 유리 슬라이드로 옮긴다. 다음 이들 검정에서 나온 절편을 헥사토실린과 에오신으로 염색하여 적당히 평가할 수 있다. 마이크로파 항원 검색은 가압용기(Nordic Ware)에 10mm 시트르산염 완충제(pH 6.0)의 슬라이드를 넣고 4분동안 압력하에 완충제가 비등할 때까지 고출력으로 마이크로파하여 할 수 있다. 이 점에서, 마이크로파를 중단하고 슬라이드를 20분동안 더 가압용기에서 배양한 후, 이들을 제거하여 세척한다. 단백질 분해 효소 항원 검색은 공급자가 권장한 프로토콜에 따라 프로테아제-1 용액(Ventana)에서 4-분동안 배양하는 것이다.]
하나의 구성으로, 이 발명은 다음과 같이 이루어지는 화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법을 제공한다:
(a). SPARC 미세환경 시그니처를 얻기위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조,
(b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색과 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내에서 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색을 측정하고,
(e). 기정 SMS가 항체 염색에 의하여 나타나면, 치료적 유효량의 화학요법제를 투여한다.
이 발명은 화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법에 사용하는 몇몇 예시한 기정 SMS's를 제공한다. 기정 SMS의 하나를 예시하면, 제일 항체로 최소한 70%의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와, 최소한 70%의 혈관 및 스트로마를 양성 염색하여서하는 항체 염색이 있다.
화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법에 사용하는 다른 기정 SMS의 예로는 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성염색하여서 하는 항체 염색이 있다.
화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법에 사용하는 다른 기정 SMS를 예시하면 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게하는 항체 염색이 있다.
화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법에 사용하는 다른 SMS를 예시하면, 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게하고; 제일 항체로 양성 염색한 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포; 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로한 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖는 항체 염색이 있다.
화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법 중 바람직한 구성으로는, 종양이 유방암이고, 기정 SMS가 제일 항체로 최소한 70%의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성염색하고 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관 및 스트로마를 양성염색하여 항체 염색하는 것이다.
화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법 중 다른 바람직한 구성으로는, 종양이 유방암이고 기정 SMS가 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성염색하고, 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성염색하여 항체 염색하는 것이다. 특히 바람직한 구성으로는 종양이 Her2 음성 유방암이고 화학요법이 nad-파클리탁셀(175mg/㎡), 겜시타빈(2000mg/㎡)과 에피루비신(50mg/㎡)으로 14일의 6주기로 이루어지는 수술 전 요법과 (14일의 4주기)와 nab-파클리탁셀(220mg/㎡)+겜시타빈(2000mg/㎡)으로 이루어지는 수술 후 요법이 있다.
화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법 중 특히 바람직한 다른 구성으로는, 종양이 Her2 유방암이고, 기정 SMS가 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성염색하고, 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성염색하여 항체 염색하는 것이고, 화학요법은 (a) 각 28일 주기 중 1, 8, 15일에 125mg/㎡로 신보조 nab-파클리탁셀; (b) 각 28일 주기 중 1일에 카르보플라틴 AUC6; (c) 4mg/kg 하중 다음 2mg/kg/주로 트라스투주마브; (d) 5m/kg/주로 베바시주마브의 여섯 주기로 이루어진다; 이때 여섯 주기에 일차 종양을 수술 제거한 다음, 차례로 52주 동안 치료적 유효량의 트라스투주마브와 베바시주마브를 사용한다.
화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법 중 다른 바람직한 구성으로는, 종양이 췌장암이고, 화학요법이 nab-파클리탁셀로 이루어지고, 기정 SMS이 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성염색하고, 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성염색하고 혈관이 제이 항체로 최소한 중간 양성 스코어를 갖게 하여 항체 염색하는 것이다.
화학요법으로 동물의 종양을 치료하는 방법 중 다른 바람직한 구성으로는, 종양이 흑색종이고, 화학요법이 nab-파클리탁셀로 이루어지고, 기정 SMS 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게하고; 제일 염색체로 약 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포를 양성 염색하고; 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 세포로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖는 항체 염색을 하는 것이다.
다른 구성으로, 이 발명은 화학요법으로 동물의 종양에 대한 반응을 예측하는 다음과 같은 방법을 제공한다:
(a). SPARC 미세환경 시그니처를 얻기위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조,
(b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색과 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내에서 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색을 측정하고,
(e). 기정 SMS가 항체 염색에 의하여 나타나면 화학요법에 대한 양성 반응으로 예측한다.
또한, 이 발명은 화학요법으로 다음과 같은 동물의 종양의 반응을 예측하는 방법을 제공한다:
AF 941 다클론 항체에 의하여 인식되는 면역우성 에피토프를 인식하는 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하고, 항-SPARC 항체로 조직학적 절편의 종양세포가 염색되면, 화학요법에 대한 양성 반응을 예측하는 방법을 제공하며, 여기서 화학요법은 알부민 결합 나노입자 파클리탁셀과 겜시타빈을 투여하는 것을 뜻한다.
또한, 이 발명은 화학요법으로 동물의 종양의 반응을 예측하는 방법을 제공하며, "반응"이란 한정되는 것은 아니나, 병리학적 반응, 전체 생존율, 또는 진행 무 생존율을 뜻한다. 방법은 항-SPARC 항체가 MAB 941 단클론 항체에 의하여 인식되는 에피토프를 인식하는, 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체염색하고, 항-SPARC 항체로 조직학적 절편의 종양세포가 염색되면, 화학요법에 대한 불량한 반응을 예측한다. 특히 발명은 화학요법으로 췌장암의 반응을 예측하는 방법을 제공하며, 여기서 화학요법을 알부민 결합 나노입자 파클리탁셀과 겜시타빈을 투여하는 것으로 이루어진다.
이 발명은 화학요법으로 동물의 종양의 반응을 예측하는데 사용하는 몇가지 예시한 기장 SMS를 제공한다. 기정 SMS의 하나를 예시하면 제일 항체로 최소한 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고, 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관과, 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어진다.
화학 요법으로 동물의 종양의 반응을 예측하는 방법에 사용하는 다른 기정 SMS을 예시하면, 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 것이다.
화학 요법으로 동물의 종양의 반응을 예측하는 방법에 사용하는 다른 기정 SMS을 예시하면, 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고, 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고, 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게 하여서 하는 항체 염색으로 이루어지는 것이다.
화학 요법으로 동물의 종양의 반응을 예측하는 방법에 사용하는 다른 SMS를 예시하면, 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게 하고; 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포를 양성 염색하고; 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와, 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖게하는 항체 염색으로 이루어지는 것이다.
다른 구성으로, 이 발명은 종양을 갖는 동물이 낮은 위험의 그 종양의 진행을 갖는지 여부를 예측하여 다음과 같은 방법을 제공한다:
(a). SPARC 미세환경 시그니처를 얻기위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조,
(b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색과 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내에서 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색을 측정하고,
(e). 기정 SMS가 항체 염색에 의하여 나타나면 낮은 위험의 종양 진행을 예측한다.
이 발명은 종양을 갖는 동물이 낮은 위험의 그 종양 진행을 갖는지 여부를 예측하는데 사용하는 몇몇의 예시한 기정 SMS를 제공한다. 이와 같은 예정된 SMS 중 하나를 예시하면, 제일 항체로 70% 이하의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고, 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관 및 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 것이다.
종양을 갖는 동물이 낮은 위험의 그 종양 진행을 갖는지 여부를 예측하는 방법에 사용하는 다른 기정 SMS를 예시하면 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양 세포를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 것이다. 바람직한 구성으로는 이 기정 SMS를 갖는 종양이 유방암 일 때이다.
종양을 갖는 동물이 낮은 위험의 그 종양진행을 갖는지 여부를 예측하는 방법에 사용하는 다른 기정 SMS를 예시하면 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고, 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게하는 항체 염색으로 이루어지는 것이다. 바람직한 구성으로는, 이 기정 SMS를 갖는 종양이 췌장암 일 때이다.
종양을 갖는 동물이 낮은 위험의 그 종양 진행을 갖는지를 예측하는 방법에 사용하는 다른 SMS를 예시하면 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게 하고; 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와, 섬유아세포를 양성 염색하고; 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지않는 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 것이다. 바람직한 구성으로는 이 기정 SMS을 갖는 종양이 흑색종일 때이다.
종양을 갖는 동물이 종양이 유방암인 낮은 위험의 그 종양 진행을 갖는지를 예측하는 방법의 바람직한 구성으로는 기정 SMS가 제일 항체로 약 70% 이하의 종양세포, 섬유아세포, 혈관 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관과 , 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 것이다.
종양을 갖는 동물이 낮은 위험의 그 종양 진행을 갖는지를 예측하는 방법에 화학요법을 동물에 투여하는 것을 더 함유할 수 있다. 바람직한 구성으로는, 화학요법에 파클리탁셀을 함유하는 것이다.
다른 구성으로, 이 발명은 종양을 갖는 동물이 낮은 위험의 그 종양으로 부터의 치사를 갖는지를 예측하는 다음과 같은 방법을 제공한다:
(a). SPARC 미세환경 시그니처를 얻기위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조,
(b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색과 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내에서 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색을 측정하고,
(e). 기정 SMS가 항체 염색에 의하여 나타나면 동물이 종양으로부터 낮은 위험의 치사를 갖는 것을 예측한다.
이 발명은 종양을 갖는 동물이 그 종양으로부터 낮은 위험의 치사를 갖는지를 예측하는데 사용하는 몇몇의 예시한 기정 SMS를 제공한다. 종양을 갖는 동물이 종양이 유방암인 그 종양으로부터 낮은 위험의 치사를 갖는지를 예측하는 방법 중 바람직한 구성으로는 제일 항체로 약 70% 이하의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고, 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관, 및 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 기정 SMS가 있다.
종양을 갖는 동물이 종양이 유방암인 종양으로부터 낮은 위험의 치사를 갖는지를 예측하는 다른 바람직한 방법의 구성으로는 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 기정 SMS가 있다.
종양을 갖는 동물이 종양이 췌장암인 그 종양으로부터 낮은 위험의 치사를 갖는지를 예측하는 방법 중 다른 바람직한 구성으로는 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 기정 SMS가 있다.
종양을 갖는 동물이 종양이 흑색종인 그 종양으로부터 낮은 위험의 치사를 갖는지를 예측하는 방법 중 다른 바람직한 구성으로는 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게 하고; 제일 항체로 약 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포를 양성 염색하고 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 기정 SMS가 있다.
종양을 갖는 동물은 그 종양으로부터 낮은 위험의 치사를 갖는지를 예측하는 방법에는 동물에 화학요법을 투여하는 것을 더 함유할 수 있다. 바람직한 구성으로는, 화학요법에 파클리탁셀을 함유하는 것이다.
또한 이 발명은 화학 요법으로 동물의 종양 반응을 예측하는 다음과 같은 키트를 제공한다:
(a). 제일 항-SPARC 항체로 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
(b). 제이 항-SPARC 항체로 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색한다.
이 발명 방법은 제한없이 종양이 구강종양, 인두종양, 소화계종양, 호흡계종양, 골종양, 연골종양, 골전이병, 육종, 피부종양, 흑색종, 유방종양, 생식계종양, 요로종양, 안구공종양, 뇌와 중추신경계종양, 교세포종, 내분비계종양, 갑상선종양, 식도종양, 위종양, 소장종양, 결장종양, 직장종양, 항문종양, 간종양, 담낭종양, 췌장종양, 후드종양, 폐종양, 기관지종양, 비-소세포 폐암종, 소세포 폐암종, 자궁경관종양, 자궁내분비 선종양, 난소종양, 음부종양, 질종양, 전립선암종, 고환종양, 음경종양, 방광종양, 신장종양, 신우종양, 요관종양, 머리와 목종양, 부갑상선 암, 호지킨 병, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병과 항문 종양과 같은 종양형인 구성을 포함한다.
이 발명의 바람직한 구성에 있어, 종양이 유방암, 췌장암, 폐암 또는 흑색종일 때이다. 특히 바람직한 구성으로는, 종양이 유방암일 때이다.
이 발명 방법에 동물이 포유류인 것을 포함한다. 더욱 바람직하기로는 동물이 사람일 때이다.
이 발명에 사용되는 화학요법은 이 분야의 기술자에게 알려져 있는 어떠한 적당한 요법일 수 있다. 바람직한 화학요법으로는 파클리탁셀로 치료하는 것이다. 더욱 더 바람직한 화학요법은 나노입자 알부민 결합 파클리탁셀로 치료하는 것이다. 더우기, 이 분야의 기술자는 화학요법에 조합요법을 포함할 수 있음을 알 것이다. 바람직한 조합물에는 제한없이, nab-파클리탁셀, 겜시타빈과 에피루비신; nab-파클리탁셀과 카르보플라틴; nab-파클리탁셀과 트라추주마브; nab-파클리탁셀과 베바시주마브가 있다.
특히 바람직한 화학요법에는 다음 중 어느 하나가 있다:
(a) 6주기로 매 14일 동안 175mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀, 2000mg/㎡으로 겜시타빈, 50mg/㎡으로 에피루비신, 다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음, 후-수술: 4주기로 14일 동안 220mg/㎡으로 nab-파클리탁셀과 2000mg/㎡으로 겜시타빈;
(b) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100-150mg/㎡)과 매 4주 중 연속 3주 동안 주 겜시타빈(1000mg/㎡); 또는
(c) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100mg/㎡)과 매 4주 중 연속 3주 동안 주 카르보플라틴(AUC 2)
다른 바람직한 화학요법은 다음 여섯 주기로 이루어진다:
(a) 각 28일 주기 중 1, 8, 15일에 125mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀; (b) 각 28일 주기 중 1일에 카르보플라틴 AUC 6; (c) 4mg/kg 하중 다음 2mg/kg/주로 트라추주마브; (d) 5mg/kg/주로 베바시주마브, 여섯주기는 일차 종양을 수술 제거한 다음, 이를 차례로 52주 동안 치료적 유효량의 트라추주마브와 베바시주마브로 치료한다;
이 발명을 다음 실시예로 더 예시하며, 그러나, 이 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 않된다.
이 연구의 목적은 종양 미세환경에서 SPARC 이소형과 기능이 환자에 있어 성과가 있는지를 평가하고, 특히 SPARC 항체 염색의 패턴과 나노 입자 알부민-결합(nab) 파클리탁셀(Abraxane®)의 환자 성과 사이의 상호 관계 여부를 측정하는데 있다.
SPARC는 유방, 췌장, 전립선, 폐, 흑색종과, 머리 및 목 암을 포함한 다수의 종양형에서 불량한 예후 인자를 갖고 증가된 종양 맥관 형성, 침입과 전이와 연관된다. nab-파클리탁셀은 내피세포 gp60-알부민 수용체 운반을 포함하고 종양에 의하여 분비되는 SPARC에 결합하는 종양 세포에 들어가기 위한 알부민 운반의 내인성 경로에 이용할 수 있다. 머리와 목의 초기 후임상 시험과 작은 후향적 임상 시험은 종양 조직에서 증가 된 내인성 SPARC가 nab-파클리탁셀 처리에 좋은 반응을 예측할 수 있음을 예상하게 한다(Desai 등. 2009, Trans One. 2, 59-64).
네가지 전향적 연구에서는 SPARC 종양 항체 염색 패턴, 즉 "SPARC 미세환경 시그니처(SMS)"가 nab-파클리탁셀 요법으로 치료했을때 높고 낮은 재발 위험을 갖는 환자를 판별할 수 있는지 여부를 시험했다.
네가지 임상 시험에서 나온 환자의 성과를 평가했다(표1)
표본과 성과 데이타를 제공한 임상 시험
연구 표 시 상 Pts번호 SPARC IHC를 갖는 Pts번호 요 법
N057E 비절제단계
Ⅳ
흑색종		 Ⅱ 76 40 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100-150mg/㎡)
매 4주 중 연속 3주 동안 주 카르보플라틴(AUC 2)
CA040 전이 췌장암 Ⅰ/Ⅱ 63 37 매 4주 중 약하게 nab-파클리탁셀(100-150mg/㎡)
매 4주 중 연속 3주 동안 겜시타빈(1000mg/㎡)
BRE73 신보조제
유방암
(HER2-)		 Ⅱ 123 83 수술전:
(14일의 6주기)
nab-파클리탁셀(175㎎/㎡)+겜시타빈(2000㎎/㎡)+에피루비신(50㎎/㎡)
수술후: (14일의 4주기)
nab-파클리탁셀(220㎎/㎡)+겜시타빈(2000㎎/㎡)
BRE83 신보조제
유방암
(HER2+)		 Ⅱ 30 30 수술전:
(28일의 6주기)매 4주 중 연속 3주 동안 주nab-파클리탁셀(100㎎/㎡) 카르보플라틴(AUC6)+트라스투주마브(4㎎/㎏하중, 다음 2㎎/㎏/주)+베바시주마브(5㎎/㎏/주)
수술후:
유지(1yr):
트라스투주마브(6㎎/㎏) q3주
베바시주마브(15㎎/㎏) q3주
전체적으로, 이 방법은 (1)위치하는 항원에 대한 일차 항체, (2)바이오틴화 결합 항체, (3)효소-결합 스트렙타비딘과, (4)기질 색소체(DAB)의 연속적 사용을 기초로 한다: 슬라이드를 리차드-알란 헤마톡실린(Kalamazoo, MI)에서 대조염색한 다음, 등급 에탄올 용액으로 탈수하고, 덮개 유리로 덮는다. 모든 슬라이드를 자동 염색장치(Dako Cytomation Autostainer, Dako, Carpinteria, CA)를 사용하여 염색한다.
이 실시예에서 항체 염색은 하술한 바와 같이 행한다. 일련의 항체를 SPARC에 대하여 평가한다. 상세한 면역조직학적 평가는 미국 병리학국에 의하여 인정된 병리학자가 행한다. 염색 스코어는 0~4의 스케일로 표시하고, 4+가 가장 양성이다. 종양 성분이 SPARC 활성에 대한 중요성이 알려져 있지 않기 때문에, 종양, 혈관, 섬유아세포, 기질세포, 염증성 세포와 정상 해부의 염색을 포함한, 여러가지 성분의 분석을 행한다.
포르말린-고정, 파라핀-포매 종양 블록으로부터 조직 코어(블록당 가장 대표적인 부분에서 2코어)를 배열하여(Beecher Instruments, Silver Spring, Md) 각 2.0mm로 측정하는 코어의 조직 마이크로어레이를 일으키고 양전하된 슬라이드에 놓는다. 표본을 갖는 슬라이드를 1시간 동안 60℃ 오븐에 넣고, 냉각하고, 탈파라핀하고, 키실렌과 등급 에탄올 수용액으로 재수화한다. 모든 슬라이드를 3% 과산화수소 수용액에서 5분 동안 급냉하여 내인성 과산화 효소 블록으로 한다.
항원 회수는 염색이 관찰되지 않을때 내부 양성 조절로 작용하는 동일한 분야에서 정상 조직의 염색으로 행한다. 항원 회수는 표본을 채소 증기 가열기를 사용하여 94℃에서 20분 동안 pH 6.1의 시트르산 용액(code SI 699, Dako, Carpinteria, CA)에 넣은 다음 15분 동안 냉각하는 가열 방법으로 행한다. 이때 슬라이드는 적당한 항체를 이용하는 면역조직화학에 사용하는 Dako cytomation Autostainer (Dako, Carpinteria, CA)와 같은 항색 염색 장치에 넣는다.
SPARC에 대하여 다른 친화력을 갖는 두 항체는 이 연구에서 단클론성 항체(이후 "M"라 표시한다)(SPARC 단클론성 항체(R&D Systems, Minneapolis, MN), catalog # MAB941 Lot # ECH045011 트리스주재 희석제로 1:100 희석)와 다클론성 항체(이후 "P"라 표시한다)(SPARC 다클론성 항체(R&D Systems, Minneapolis, MN), catalog # AF941 Lot # EWN04 트리스주재 희석제로 1:50 희석)를 동정한다. 종양의 조직학적 절편을 슬라이드상에서 제조하고 표준 항체 염색 프로토콜을 사용하여 염색한다.
모든 슬라이드를 3% 과산화수소 수용액에서 5분 동안 급냉하여 내인성 관산화효소의 블록으로 한다. 완충제로 세척한 후, 30분 동안 항체 M과 음성 대조 시약으로 슬라이드를 배양한다. 마우스 고추냉이 과산화효소 중합체 키트(Mouse MACH 3 HRP Polymer Kit, Biocare Medical, Concord, CA)를 시약당 20분 동안 배양하고, DAB 색소체(Dako, Carpinteria, CA)를 10분 동안 사용한다. 헤마톡실린을 사용하여 슬라이드를 대조 염색한다. 시약당 15분 동안 배양된 아비딘-바이오틴 검출 키트(Biocare Medical, Concord, CA)를 HRP 검출 키트 대신에 사용하더라도, 동일한 프로토콜을 항체 P로 표본을 항체 염색하는데 사용한다.
일련의 종양에서 SPARC 발현의 상세한 병리학적 평가는 광범위하게 인정된 병리학자가 행한다. 면역조직화학에 의하여 측정된, SPARC 발현 수준은 다른 종양 성분에 대하여 기록한다. 스코어는 이 분야에서 통상적으로 행하고 있고 이 분야의 전문가에게 잘 알려져 있는 바와 같이, 0-3의 스케일로 SPARC 발현 수준을 지정하고, 3은 최대의 양성 스코어이다. 사용된 단클론성과 다클론성 항체는 다음 표 2에 표시된 바와 같이 SPARC 발현의 다른 패턴으로 검출되었다.
M과 P 항체 염색 프로파일
종 양 섬유아세포
항체 P 항체 M 항체 P 항체 M
유방 30/106 35/106 p = ns 82/107 26/107 p < 0.0001
췌장 20/36 7/36 p = 0.0031 18/29 5/29 p = 0.0011
흑색종 30/41 20/41 p = 0.0408 19/33 14/33 p = ns
다클론성 항체는 섬유아세포 관련 SPARC를 바람직하게 염색함을 입증하였고, 반면에 단클론성 항체는 종양 관련 SPARC를 바람직하게 염색하였다. 이들 바람직한 염색으로부터 일련의 종양에서 그들의 예측치에 대하여 분석하여 다음과 같은 패턴(A 내지 E로 표시)을 설정한다:
A, 3+가 어느 성분에서 발견되었을때
B, 3+가 단클론성 항-SPARC 항체를 갖는 어느 성분에서 발견되었을 때,
C, 3+가 다클론성 항-SPARC 항체를 갖는 어느 성분에서 발견되었을 때,
D, 3+가 두 항-SPARC 항체를 갖는 종양 세포에서 발견되었을 때,
E, 3+가 두 항-SPARC 항체를 갖는 섬유아세포에서 발견되었을 때,
로지스틱 회귀와 비례 위험율을 사용하여 여러 종양에서 SPARC 염색 패턴에 대한 SMS와 반응, 진행 무생존(PFS)과, 전체 생존(OS)사이의 소정의 상관 관계를 동정한다. 다음은 큰 수의 조직 시료가 이들 구조물: 염증성 세포, 혈관, 신경세포, 스트로마, 정상 조직 해부를 함유하지 않으므로 불충분한 시료 크기로 인하여 통계적 분석에서 배제된다.
종양 세트 중 하나는 비절제성 단계 Ⅳ 흑색종을 갖는 환자의 카르보플라틴과 nab-파클리탁셀(ABI-007)의 상Ⅱ 실험이다(상기한 N057E 시험). nab-파클리탁셀(100mg/㎡)과 카르보플라틴(AUC2)은 28일 주기 중 1, 8과 15일에 투여된다. "D" 패턴과 전체 생존 존재 사이의 상관 관계는 통계학적으로 탁월하게 나타났다.
Abraxane 투약량(100-150mg/㎡)과 겜시타빈(1000mg/㎡)으로 처리한 진전된 췌장 선암종을 갖는 환자로부터 나온 다른 종양에 28일 주기 중 1, 8과 15일에 투여한다(상기한 A040 시험). 이들 환자들 중에서 다음 반응이 관찰되었다.
반응율
반 응 CR PR SD PD
32Pts의 N 2
(6%)		 14
(44%)		 14
(44%)		 2
(6%)
(※ CR, 완전한 반응; PR, 부분반응; SD, 무반응과 안정성 질병; PD, 무반응과 진행성 질병)
다클론성 염색으로 종양 염색은 이러한 두번째 종양 세트(진전된 췌장)의 치료에 대한 반응성을 예측되게 했다(하나의 테일 t-시험, P=0.027) 더불어, 단클론성 항체로 종양 세포의 염색을 더 불량한 전체 생존과 진행 무 생존을 예측하게 했다. 또한, B 패턴 염색은 췌장 선암종을 갖는 이들 환자의 이와 같은 요법에 있어 가장 불량한 진행 무 생존을 예측하게 했다.
이 실시예는 SPARC 면역조직화학이 nab-파클리탁셀을 기초로한 화학요법에 대한 반응을 예측하는 효과적인 방법임을 증명한다.
SPARC 항체 염색에서 나온 염색 패턴 데이타의 더 큰 계통 분석을 취하여 예후 정보를 가져오는 패턴을 동정하고, 실시예 1에서 시험된 동일한 종양 세트로부터 나온 염색 패턴 데이타로 여러가지 형태의 균주군 분석을 주의하여 사용하여 여러가지 종양의 SPARC 염색 패턴에 대한 반응, 진행 무 생존(PFS)과, 전체 생존(OS)에 대하여 SPARC 발현(항체 염색 패턴으로 표시)의 가장 구별 가능한 성분을 동정한다. 상기한 바와 같이, 예후적으로 현저하게 발생되는 패턴은 "SPARC 미세환경 시그니처("SMS")라 한다.
상기 시험에서 얻은 시료에서 취한 일곱가지 종양 성분에서 SPARC 발현은 두 다른 항체, M과 P(실시예 1 참조)로 항체 염색한 특징을 갖는다. 이들 종양 성분은 종양 내의 종양세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질(스트로마), 혈관, 신경과, 기타 정상해부이다. 각 부분에서 염색된 세포의 퍼센트, 염색의 강도(0-4)와 전체 스코어(변수에 의함)는 각 종양 성분에 대하여 측정한다(환자당 전체 변수: 7성분×2항체×3스코어 = 42변수 스코어).
"스코어"는 양성 세포의 퍼센트와 염색 강도를 조합한 것이다. 스코어는 세포가 없으면 "음성"이고 또는 염색된 성분이 없으면 양성이다. 스코어는 10%의 세포가 양성이고, 강도가 2+ 또는 그 이하이고 <20%의 세포가 양성이면 "약한 양성"이고, 또는 ≤30%의 세포가 양성이고 강도가 1+ 또는 그 이하이면 "약한 양성"이다. 스코어는 강도가 4+이고 10-40%의 세포가 양성이고, 강도가 3+이고 10-50%의 세포가 양성이고, 강도가 2+이고 20-70%의 세포가 양성이고, 또는 강도가 4+ 또는 그이하이고 20-40%의 세포가 양성이거나 강도가 1+ 또는 그이하이고 >30%의 세포가 양성이면 "중간 양성"이다. 스코어는 강도가 4+ 이고 >40%의 세포가 양성이거나, 또는 강도가 3+이고 >50%의 세포가 양성이고, 강도가 2+이고 >70%의 세포가 양성이면 "강한 양성"이다. 이 시스템은 다음 표4에 요약했다.
SMS 스코어 시스템
SPARC 염색의 강도 0+ 1+ 2+ 3+ 4+
SPARC에 대한 양성 %
0 음성 약 약 약 약
10 음성 약 약 중간 중간
20 음성 약 중간 중간 중간
30 음성 중간 중간 중간 중간
40 음성 중간 중간 중간 강
50 음성 중간 중간 강 강
60 음성 중간 중간 강 강
70 음성 중간 중간 강 강
80 음성 중간 중간 강 강
90 음성 중간 중간 강 강
이 데이타는 Genespring 소프트웨어 슈위트와 Nexus 배열 분석프로그램에서 균주군 형성 프로그램을 주의하여 사용한 것이다. 더불어, ANOVA 또는 t-시험(홀수) 통계로 균주군 형성이 여러가지 성과 파라미터에 대한 판별력을 갖는 것으로 예상되는 파라미터에 대하여 측정한다. 균주군 형성 프로그램의 분석에 있어, 항체 염색 결과는 0+=0, 1+=25, 2+=50, 3+=75, 4+=100, 음성=0, 약=3, 중간=66, 강=100으로 표준화하고, %는 병리학자에 의하여 보고된 %이다. 이러한 프로토콜을 사용하여 통계학적으로 현저한 예후 정보를 제공하는 SMS 성분을 어떠한 종양/요법 조합에 대하여 동정할 수 있다. 유방암, 흑색종과 췌장암에 대한 결과는 다음 표 5-7에 예시하여 표시했다.
통계적으로 현저한 예후 정보를 제공하는 유방암 SMS 성분(계층적 균주군 형성, BRE 73 연구, 38 고위험, 30 저위험 환자, 전체 생존)
SMS 성분 SPARC 고위험 SPARC 저위험 균주군 P-값
P 종양 % 79.80 47.50 5.89E-08
P 염증성 세포 스코어 72.96 51.58 5.11E-06
P 섬유아세포 강도 86.02 66.67 5.48E-06
M 염증성 세포 스코어 75.82 54.20 2.03E-05
P 혈관 스코어 68.29 48.83 2.99E-05
P 염증성 세포 강도 87.70 71.22 4.92E-05
M 섬유아세포 스코어 44.24 28.24 1.47E-04
P 종양 스코어 73.24 55.70 2.90E-04
P 혈관 % 82.11 67.82 3.06E-04
P 스트로마 % 64.87 49.67 1.19E-03
P 섬유아세포 스코어 80.79 64.33 1.36E-03
M 섬유아세포 90.83 80.73 1.75E-03
P 스트로마 스코어 62.50 46.67 1.76E-03
M 스트로마 스코어 67.41 56.73 2.77E-03
P 섬유아세포 % 62.59 50.22 6.10E-03
M 혈관 강도 69.21 55.33 6.42E-03
P 스트로마 강도 40.80 29.67 7.05E-03
M 혈관 스코어 32.41 25.90 1.31E-02
M 스트로마 % 68.33 58.45 1.88E-02
M 염증성 세포 강도 79.08 66.67 2.20E-02
P 염증성 세포 34.87 27.62 3.46E-02
M 종양 강도 58.82 48.00 4.17E-02
통계적으로 현저한 예후 정보를 제공하는 흑색종 SMS 성분(계층적 균주군 형성, ABX 054 연구, 31 고위험, 9 저위험 환자, 전체 생존)
SPARC 성분 SPARC 고위험 SPARC 저위험 고위험 대 저위험 균주군 P-값
M 혈관스코어 71.85 29.44 5.51E-08
M 종양 스코어 85.77 47.89 4.14E-05
M 혈관 % 55.65 22.50 3.40E-04
M 종양 % 75.16 46.11 5.31E-04
M 염증성 세포 스코어 67.32 35.00 6.94E-04
M 섬유아세포 스코어 79.79 49.72 6.95E-04
M 종양 강도 44.35 25.11 2.78E-03
M 혈관 강도 35.48 22.33 5.27E-03
M 스트로마 스코어 58.02 42.17 5.31E-03
M 염증성 세포 53.23 28.06 6.78E-03
P 혈관 강도 32.26 47.22 1.10E-02
M 섬유아세포 % 69.92 48.33 1.31E-02
M 스트로마 % 48.31 26.11 1.54E-02
M 섬유아세포 강도 41.53 29.17 2.11E-02
M 염증성 세포 강도 33.87 23.72 2.69E-02
P 혈관 스코어 65.10 81.11 3.89E-02
P 종양 스코어 86.87 100.00 4.57E-02
통계학적으로 현저한 예후 정보를 제공하는 췌장암 SMS 성분(계층적 균주군 형성, CA040 연구, 16고위험, 20저위험 환자, 전체 생존)
SMS 성분 SPARC 고위험 SPARC 저위험 고위험 대 저위험 균구군 P-값
폴리 섬유아세포 스코어 66.52 86.83 1.01E-06
폴리 섬유아세포 강도 40.63 67.81 1.57E-04
폴리 종양 강도 25.84 48.80 2.27E-04
Mab 스트로마 % 61.88 82.00 3.28E-03
폴리 염증성 세포 강도 25.84 42.26 4.29E-03
폴리 염증성 세포 스코어 49.05 67.14 7.49E-03
폴리 혈관 % 50.94 68.00 8.09E-03
폴리 Tum 또는 스코어 54.72 75.55 8.10E-03
폴리 혈관 강도 32.81 45.96 9.44E-03
폴리 섬유아세포 % 54.06 70.63 1.37E-02
폴리 혈관 강도 63.52 75.03 2.02E-02
폴리 염증성 세포 42.66 58.50 2.81E-02
폴리 스트로마 스코어 61.88 50.55 5.00E-02
표 5-7에서 확인된 SPARC SMS 성분 중 어느 하나를 사용하여 연구된 특정 요법으로 연구된 특정 종양의 반응을 예측하더라도, 특정 종양과 특정 요법에 해당하는 표에서 확인된 여러가지 또는 모든 SPARC SMS 성분을 조합한 사용은 특정요법으로 특정 종양의 반응을 실질적으로 더 정확하게 예측함을 제공한다. 따라서, 주어진 종양/요법에 한쌍에 대한 표에서 모든 성분의 표준화된 스코어의 총합을 사용하여 고위험 또는 저위험으로 환자를 분류할 수 있다. 컷오프 값은 표 5-7 또는 컬럼 총합에 표시되어 있다.
확인된 SMS 중에 제일 항체로 최소한 70%의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관, 및 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색인 것이다. 다른 SMS는 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 50%이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어진다. 다른 SMS는 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대한 2+ 이하의 강도를 갖고; 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와, 섬유아세포를 양성 염색하고; 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖게 하는 항체 염색을 갖는다.
이 실시예에서, 유방 종양의 SMS는 임상적 성과와 성호 관련된다.
국부적으로 진전된 유방암(LABC)을 갖는 123명의 환자를 6주기의 겜시타빈 2000mg/㎡, 에비루비신 50mg/㎡와, nab-파클리탁셀 175mg/㎡ q14일로 치료한 다음 수술한다(도 1 참조). 수술 후 환자에게 4주기의 겜시타빈 2000mg/㎡와 nab-P220mg/㎡ q14일을 받게 한다(도 1 참조). "병리학적 완전 반응"(PCR)에서는 유방(pT0)와 겨드랑 림프절(pN0)에서 잔존 침입성 암이 없는 것으로 정의했다. "완전 반응" (CR)에서는 유방에서만 병리학적 완전 반응으로 정의했다.
SPARC 면역조직화학(IHC)성분 스코어 작성은 선처리 종양 시료에서 행한다. 종양 생검체에서 SPARC 항체 염색은 7가지 종양성분: 종양 내의 종양세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경조직, 정상조직에 대하여 두 다른 항체(항체 M과 P)로 SPARC 발현을 측정하는 이 발명에 의하여 확인된 IHC 프로토콜을 사용하여 병리학자가 증명한 2 판지로 독립적으로 채점한다. 이 스코어 작성에는 각 부분에 염색된 세포 퍼센트, 염색의 강도와 전체 스코어(변수에 따름)의 측정이 포함된다. 따라서, 42 변수는 환자마다 측정된다(7 성분, 2 항체와 3 스코어). 데이타의 분석/균주군 형성(SOM, 계층적, K-수단과 연결)은 Partek 배열 분석 프로그램을 사용하여 행한다: 예를들어 진행 무 생존(PFS)과 같은 성공적 계량물은 표준 통계적 방법을 사용하는 SMS와 상호 관련된다.
SPARC IHC는 76 환자에 있어 진행 또는 치사를 갖는 18/76(24%)에서 발생했다(놀랍게도 더 높은 SPARC를 갖는 환자는 더 양호한 상태를 나타내고, -반면에 특별한 이론에 의하여 제한되는 것을 원치 않으며, 이들 데이타는 nab-파클리탁셀에 의한 표적이 예상된다).
균주군 분석 단일 SMS를 기초로 하여 고위험(HR)그룹(n=41, 24mos에서 PFS 65%), P=0.02와 저위험(LR)그룹(n=35, 24mos에서 PFS 81%)를 구별하는 것을 확인했다. LR 그룹에서 PCR과 HR 그룹(P=ns)에서 5PCR을 갖는 3 환자가 있었다. TN 단계, 삼중-음성 상태, ER(에스트로겐 수용체)상태와 PR(프로게스테론 수용체) 상태는 2그룹 사이가 유사하다.

 ER-neg PR-neg Triple-neg
(N=31) (N=35) (N=26)
예후 인자를 갖는 # SPARC HR 종양 13/30(43%) 15/30(50%) 11/30(39%)
예후 인자를 갖는 # SPARC LR 종양 18/38(47%) 20/38(53%) 15/38(39%)
통 계(CHi2) P=ns P=ns P=ns
SPARC SMS의 예후력은 이를 TN, ER-, PR-과 조합하면 개량된다. 예를들면, 24개월에서 PFS는 93%(n=24, non=TN, SPARC LR), 93%(n=21, ER+, SPARC LR)과 92%(n=20, PR+, SPARC LR)대 33%(n=15, TN, SPARC HR), 40%(n=20, ER-, SPARC HR)과, 51%(n=22, PR-, SPARC HR), 각각 P<0.0001, P=0.0001, P=0.002이다. 중앙치 PFS는 HR SMS가 TN, ER-와 PR-과 조합되었을 때 TN, ER-, PR-에 있어 22.7, 30.0과 22.7개월에서 19.5, 24.2와 14.3으로 감소했다.
신보조 유방암 시험(N=107)에서 HER2- 음성 환자의 전체 PFS와 OS는 도 3과 4에 표시했다(중앙치 PFS와 OS는 이 환자군에 도달하지 않았다). 종양반응(CR과 PCR)은 더 양호한 PFS와 OS를 향한 경향을 나타냈지만 통계적으로 중요하지는 않았다.이들 HER-2-음성 환자 68에서 나온 SPARC SMS는 PFS와 생존과 상호 관련이 있다.
최상
반응		 HER2-음성 Pts(N=107) SPARC 데이타를 갖는 HER-2neg Pts(n=68)
# Pts % Pts #Pts %Pts
PCR 20 18.7% 11 16.2%
CR 6 5.6% 4 1.5%
PR 67 62.6% 40 58.8%
SD 7 6.5% 7 10.3%
PD 2 1.9% 2 2.9%
UE 5 4.7% 4 5.9%
공지의 예후 인자(ER, PR과 삼중 음성)의 상태는 IHC에 의하여 조사되었고 이용가능한 SPARC SMS 데이타(로그급 시험)에서 68 HER2-음성 환자의 PFS와 OS와 상호 관계가 있다. 예후 인자는 PFS와 OS에 있어 현저한 P값을 갖는 것으로 기대되는 환자를 등급별로 분류했다.
예후 인자로서 SPARC는 ER, PR와 삼중 음성 종양 상태와 관계없다. 다른 예후 인자에 SMS 위험 균주군을 부가하면 단축 PFS에 있어 저위험(0 위험인자), 중간위험(1 위험인자)과, 고위험(2 위험인자)을 갖는 종양과 더 구별된다(위험 0: SPARC LR과, 알려지지 않은 위험인자; 위험 1: SPARC HR, 또는 ER-neg(A), PR-neg(B), 삼중-neg(C); 위험 2: SPARC HR 플러스 알려진 위험인자)(도 5). 다른 예후 인자에 SMS 위험 균주군을 부가하면 단축 OS에 있어 저위험(0 위험인자), 중간위험(1 위험인자)와, 고위험(2 위험인자)을 갖는 종양과 더 구별된다(도 6).
따라서, 이 실시예는 SPARC 미세환경 시그니처 단독으로 OS에 있어 저위험과 고위험 종양 사이를 구별할 수 있음을 나타낸다.
여기에서 인용된, 공보, 특허출원과 특허를 포함한, 모든 참고 문헌은 각 참고 문헌이 개별적으로 특별하게 표시되어 참고적으로 혼입되고 그들이 전체가 여기에 설명되는 것과 같이 동일한 범위로 여기에 참고적으로 혼입된다.
이 발명을 기술한 문맥에서(특히 다음 특허 청구 범위의 문맥에서) "a" 및 "an"과 "the"와 유사한 지시 대상의 용어 사용은 여기서 다른 표시가 없거나 문맥에 분명한 부인이 없는 한 단수와 복수를 둘 다 커버 하는 것으로 해석된다. "포함하는(comprising)", "갖는(having)", "포함하는(including)", "함유하는(containing)"이란 용어는 다른 언급이 없는 한 제한 없는 용어(즉, "포함하나 이에 한정되지 않는(including, but not limited to)"의 의미)로 해석된다. 여기에서 값 범위의 기술은 다른 언급이 없는한, 범위에 들어가는 각 분리된 값으로 개별적으로 나타내는 속기 방법으로 단지 표시하고자 하는 것이고 각 분리된 값은 여기서 개별적으로 열거된 것과 같이 명세서에 혼입된다. 여기에 기술된 모든 방법은 여기에 다른 언급이 없거나 문맥에서 다른 분명한 부인이 없으면 어떠한 적당한 순서로 행할 수 있다. 여기에서 제공된 소정의 및 모든 실시예, 또는 예시한 언어(예를들어, "와 같은")의 사용은 다른 청구가 없는한, 이 발명을 단지 더 좋게 예시한 것이고 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다. 명세서의 언어는 발명의 실시에 필수적인 소정의 특허 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 않된다.
이 발명의 바람직한 구성은 발명을 행하는 발명자에게 알려져 있는 가장 좋은 방법을 포함하여, 여기에 기술되어 있다. 이들 바람직한 구성의 변경은 전술한 설명의 판독에 따라 이 분야의 통상의 숙련자는 분명하게 알 수 있을 것이다. 발명자는 이러한 적당한 변경을 사용하는 숙련자를 예상하고 발명자는 여기에 특별히 기술된 것 이상의 다른 방법으로 발명을 실시하고자 할 것이다. 따라서, 이 발명에는 적용법에서 허용되는 첨부된 특허 청구 범위에 열거된 동등한 주제와 모든 수정이 포함된다. 더우기, 이의 모든 가능한 변경에 있어 상술한 요소의 소정의 조합은 여기 다른 언급이 없거나 문맥에 다른 분명한 부인이 없으면 이 발명에 포함된다.

Claims (57)

  1. (a). SPARC 미세환경 시그니처(SMS)를 얻기 위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조하고;
    (b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하고, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며;
    (c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하고, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며;
    (d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경조직과 정상 해부의 염색과, 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직과 정상 해부의 염색을 측정하고,
    (e). 기정 SMS가 항체 염색에 의하여 나타나면 치료적 유효량의 화학요법제를 투여하는 것으로 이루어지는,
    화학요법으로 포유류의 종양을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 기정 SMS가 제일 항체로 최소한 70%의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관과, 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  3. 제1항에 있어서,
    기정 SMS가 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  4. 제1항에 있어서,
    기정 SMS가 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성염색하고 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 혈관이 최소한 중단 양성 스코어를 갖게하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  5. 제1항에 있어서,
    기정 SMS가 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게하고; 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포를 양성 염색하고 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 종양을 구강종양, 인두종양, 소화계종양, 호흡계종양, 골종양, 연골종양, 골전이병, 육종, 피부종양, 흑색종, 유방종양, 생식계종양, 요로종양, 안구공종양, 뇌와 중추신경계종양, 교세포종, 내분비계종양, 갑상선종양, 식도종양, 위종양, 소장종양, 결장종양, 직장종양, 항문종양, 간종양, 담낭종양, 췌장종양, 후드종양, 폐종양, 기관지종양, 비-소세포 폐암종, 소세포 폐암종, 자궁경관종양, 자궁내분비 선종양, 난소종양, 음부종양, 질종양, 전립선암종, 고환종양, 음경종양, 방광종양, 신장종양, 신우종양, 요관종양, 머리와 목종양, 부갑상선 암, 호지킨 병, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병과 항문 종양에서 선택하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 종양이 유방암, 췌장암, 폐암 또는 흑색종인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 종양이 유방암인 방법.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 포유류가 사람인 방법.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화학요법에 파클리탁셀을 함유하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 화학요법에 nab-파클리탁셀을 함유하는 방법.
  12. 제11항에 있어서,
    화학요법이 다음의 어느 것으로 이루어지는 방법:
    (a) 6주기로 매 14일 동안 175mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀, 2000mg/㎡으로 겜시타빈, 50m/㎡으로 에피루비신, 다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음, 4주기로 14일 동안 220mg/㎡으로 nab-파클리탁셀과 2000mg/㎡으로 겜시타빈을 후-수술 투여
    (b) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100-150mg/㎡)과 매 4주 중 연속 3주 동안 주 겜시타빈(1000mg/㎡); 또는
    (c) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100mg/㎡)과 매 4 주 중 연속 3주 동안 주 카르보플라틴(AUC2)
  13. 제11항에 있어서,
    화학요법이 다음의 여섯주기로 이루어지는 방법:
    (a) 각 28일 주기 중 1, 8, 15일에 125mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀,
    (b) 각 28일 주기 중 1일에 카르보플라틴 AUC6,
    (e) 4mg/㎡하중 다음 2mg/kg/주로 트라추주마브,
    (d) 5mg/kg/주로 베바지수마브,
    다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음,
    52주 동안 치료적 유효량의 트라추주마브와 베바시주마브
  14. 제1항에 있어서,
    종양이 유방암이고, 기정 SMS가 제일 항체로 최소한 70%의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관과, 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  15. 제1항에 있어서,
    종양이 유방암이고 기정 SMS이 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  16. 제15항에 있어서,
    종양이 Her2 양성 유방암이고 화학요법이 다음의 여섯 주기로 이루어지는 치료방법:
    (a) 각 28일 주기 중 1, 8, 15일에 125mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀,
    (b) 각 28일 주기 중 1일에 카르보플라틴 AUC6,
    (c) 4mg/kg하중 다음 2mg/kg/주로 트라추주마브,
    (d) 5mg/kg/주로 베바시주마브,
    다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음,
    52주 동안 치료적 유효량의 트라추주마브와 베바시주마브
  17. 제15항에 있어서,
    종양이 Her2 음성 유방암이고, 화학요법이 14일의 6주기로 nab-파클리탁셀(175mg/㎡), 겜시타빈(2000mg/㎡)과 에피루비신(50mg/㎡)으로 이루어지는 수술 전 요법과(14일의 4주기)와 nab-파클리탁셀(220mg/㎡)과 겜시타빈(2000mg/㎡)으로 이루어지는 수술 후 요법으로 이루어지는 치료방법.
  18. 제1항에 있어서,
    종양이 췌장암이고, 화학요법에 nab-파클리탁셀을 함유하고, 기정 SMS가 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  19. 제1항에 있어서,
    종양이 흑색종이, 화학요법에 nab-파클리탁셀을 함유하고 기정 SMS가 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게하고, 제일 항체로 약 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포를 양성 염색하고, 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  20. (a). SPARC 미세환경 시그니처(SMS)를 얻기 위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조하고;
    (b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하고, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며;
    (c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색하고, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며;
    (d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경조직과 정상 해부의 염색과, 제이 항체로 종양 혈관, 종양 스트로마의 염색을 측정하고;
    (e). 기정 SMS가 항체 염색에 의하여 나타나면 화학 요법에 대한 양성 반응을 예측하는 것을 포함하는 화학요법으로 포유류의 종양 반응을 예측하는 방법.
  21. 제20항에 있어서,
    기정 SMS가 제일 항체로 최소한 70% 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고, 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관과, 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  22. 제20항에 있어서,
    기정 SMS가 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  23. 제20항에 있어서,
    기정 SMS가 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 50%의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  24. 제20항에 있어서,
    기정 SMS가 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게하고; 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와, 섬유아세포를 양성 염색하고; 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 치료방법.
  25. 제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 종양을 구강종양, 인두종양, 소화계종양, 호흡계종양, 골종양, 연골종양, 골전이병, 육종, 피부종양, 흑색종, 유방종양, 생식계종양, 요로종양, 안구공종양, 뇌와 중추신경계종양, 교세포종, 내분비계종양, 갑상선종양, 식도종양, 위종양, 소장종양, 결장종양, 직장종양, 항문종양, 간종양, 담낭종양, 췌장종양, 후드종양, 폐종양, 기관지종양, 비-소세포 폐암종, 소세포 폐암종, 자궁경관종양, 자궁내분비 선종양, 난소종양, 음부종양, 질종양, 전립선암종, 고환종양, 음경종양, 방광종양, 신장종양, 신우종양, 요관종양, 머리와 목종양, 부갑상선 암, 호지킨 병, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병과 항문 종양에서 선택하는 방법.
  26. 제25항에 있어서,
    종양이 유방종양, 췌장종양 또는 흑색종인 방법.
  27. 제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유류가 사람인 방법.
  28. 제27항에 있어서,
    화학요법에 파클리탁셀을 포함하는 방법.
  29. 제28항에 있어서,
    화학요법에 nab-파클리탁셀을 포함하는 방법.
  30. 제29항에 있어서;
    화학요법이 다음의 어느 것으로 이루어지는 방법:
    (a) 6주기로 매 14일 동안 175mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀, 2000mg/㎡으로 겜시타빈, 50m/㎡으로 에피루비신, 다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음, 4주기로 14일 동안220mg/㎡으로 nab-파클리탁셀과 2000mg/㎡으로 겜시타빈을 후-수술 투여
    (b) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100-150mg/㎡)과 매 4주 중 연속 3주 동안 주 겜시타빈(1000mg/㎡); 또는
    (c) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100mg/㎡)과 매 4주 중 연속 3주 동안 주 카르보플라틴(AUC2)
  31. 제29항에 있어서,
    화학요법이 다음의 여섯주기로 이루어지는 방법:
    (a) 각 28일 주기 중 1, 8, 15일에 125mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀,
    (b) 각 28일 주기 중 1일에 카르보플라틴 AUC6,
    (e) 4mg/㎡하중 다음 2mg/kg/주로 트라추주마브,
    (d) 5mg/kg/주로 베바지수마브,
    다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음,
    52주 동안 치료적 유효량의 트라추주마브와 베바시주마브
  32. (a). 제일 항-SPARC 항체로 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
    (b). 제이 항-SPARC 항체로 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색한다,
    으로 이루어지는 화학요법으로 동물의 종양반응을 예측하는 키트
  33. (a). SPARC 미세환경 시그니처(SMS)를 얻기 위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조하고;
    (b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며;
    (c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며;
    (d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경조직과 정상 해부의 염색과, 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직과 정상 해부의 염색을 측정,
    (e). 기정 SMS가 항체 염색에 의하여 나타나면 저위험의 진행을 예측으로 이루어지는 종양을 갖는 동물이 그 종양의 저위험 진행을 갖는지를 예측하는 방법.
  34. 제33항에 있어서,
    종양이 유방암이고 기정 SMS가 제일 항체로 약 70% 이하의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관과, 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 방법.
  35. 제33항에 있어서,
    종양이 유방암이고 기정 SMS가 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 방법.
  36. 제33항에 있어서,
    종양이 췌장암이고 기정 SMS가 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고, 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고, 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 방법.
  37. 제33항에 있어서,
    종양이 흑색종이고, 기정 SMS가 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게 하고; 제일 항체로 약 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와, 섬유아세포를 양성 염색하고; 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 방법.
  38. 제33항에 있어서, 종양을 구강종양, 인두종양, 소화계종양, 호흡계종양, 골종양, 연골종양, 골전이병, 육종, 피부종양, 흑색종, 유방종양, 생식계종양, 요로종양, 안구공종양, 뇌와 중추신경계종양, 교세포종, 내분비계종양, 갑상선종양, 식도종양, 위종양, 소장종양, 결장종양, 직장종양, 항문종양, 간종양, 담낭종양, 췌장종양, 후드종양, 폐종양, 기관지종양, 비-소세포 폐암종, 소세포 폐암종, 자궁경관종양, 자궁내분비 선종양, 난소종양, 음부종양, 질종양, 전립선암종, 고환종양, 음경종양, 방광종양, 신장종양, 신우종양, 요관종양, 머리와 목종양, 부갑상선 암, 호지킨 병, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병과 항문 종양에서 선택하는 방법.
  39. 제38항에 있어서,
    종양이 유방암, 췌장암, 폐암 또는 흑색종인 방법.
  40. 제39항에 있어서,
    종양이 유방암인 방법.
  41. 제38항에 있어서,
    포유류가 사람인 방법.
  42. 제38항에 있어서,
    파클리탁셀을 포함하는 화학요법으로 포유류를 치료하는 방법.
  43. 제42항에 있어서,
    화학요법에 nab-파클리탁셀을 포함하는 방법.
  44. 제43항에 있어서,
    화학요법이 다음의 어느 것으로 이루어지는 방법:
    (a) 6주기로 매 14일 동안 175mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀, 2000mg/㎡으로 겜시타빈, 50m/㎡으로 에피루비신, 다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음, 4주기로 14일 동안 220mg/㎡으로 nab-파클리탁셀과 2000mg/㎡으로 겜시타빈을 후-수술 투여
    (b) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100-150mg/㎡)과 매 4주 중 연속 3주 동안 주 겜시타빈(1000mg/㎡); 또는
    (c) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100mg/㎡)과 매 4 주 중 연속 3주 동안 주 카르보플라틴(AUC2)
  45. 제43항에 있어서,
    화학요법이 다음의 여섯주기로 이루어지는 방법:
    (a) 각 28일 주기 중 1, 8, 15일에 125mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀,
    (b) 각 28일 주기 중 1일에 카르보플라틴 AUC6,
    (e) 4mg/㎡하중 다음 2mg/kg/주로 트라추주마브,
    (d) 5mg/kg/주로 베바지수마브,
    다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음,
    52주 동안 치료적 유효량의 트라추주마브와 베바시주마브
  46. (a). SPARC 미세환경 시그니처(SMS)를 얻기 위하여 복수의 종양의 조직학적 절편을 제조,
    (b). 제일 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제일 항-SPARC 항체는 종양 세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
    (c). 제이 항-SPARC 항체로 종양의 조직학적 절편을 항체 염색, 여기서 제이 항-SPARC 항체는 섬유아세포에서 SPARC를 우선적으로 염색하며,
    (d). 제일 항-SPARC 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경조직과 정상 해부의 염색과, 제이 항체로 종양 또는 이들의 조합물 내의 종양 세포, 섬유아세포, 염증성 세포, 무세포성 스트로마/기질, 혈관, 신경 조직, 정상 해부의 염색을 측정,
    (e). 기정 SMS가 항체 염색으로 나타나면 종양에서 저위험의 치사가 있는 것으로 예측.
    으로 이루어지는, 종양을 갖는 동물이 종양에서 저위험의 치사를 갖는 지를 예측하는 방법.
  47. 제46항에 있어서,
    종양이 유방암이고 기정 SMS가 제일 항체로 약 70% 이하의 종양세포, 섬유아세포, 혈관, 스트로마와 염증성 세포를 양성 염색하고 제이 항체로 최소한 50%의 염증성 세포와 최소한 70%의 혈관과, 스트로마를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 방법.
  48. 제46항에 있어서,
    종양이 유방암이고 기정 SMS가 제일 항체로 최소한 60%의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성염색하고 제이 항체로 최소한 60%의 종양세포를 양성 염색하는 항체 염색으로 이루어지는 방법.
  49. 제46항에 있어서,
    종양이 췌장암이고 기정 SMS가 제일 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과 스트로마를 양성 염색하고, 제이 항체로 50% 이하의 종양세포, 혈관과, 스트로마를 양성 염색하고, 제이 항체로 혈관이 최소한 중간 양성 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 방법.
  50. 제46항에 있어서,
    종양이 흑색종이고, 기정 SMS가 제일 항체로 종양세포, 혈관, 염증성 세포와 섬유아세포에 대하여 2+ 이하의 강도를 갖게 하고; 제일 항체로 약 50% 이하의 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와, 섬유아세포를 양성 염색하고; 종양세포, 혈관, 염증성 세포, 스트로마와 섬유아세포에 대하여 제일 항체로 약한 양성보다 더 높지 않은 스코어를 갖게 하는 항체 염색으로 이루어지는 방법.
  51. 제46항에 있어서, 종양을 구강종양, 인두종양, 소화계종양, 호흡계종양, 골종양, 연골종양, 골전이병, 육종, 피부종양, 흑색종, 유방종양, 생식계종양, 요로종양, 안구공종양, 뇌와 중추신경계종양, 교세포종, 내분비계종양, 갑상선종양, 식도종양, 위종양, 소장종양, 결장종양, 직장종양, 항문종양, 간종양, 담낭종양, 췌장종양, 후드종양, 폐종양, 기관지종양, 비-소세포 폐암종, 소세포 폐암종, 자궁경관종양, 자궁내분비 선종양, 난소종양, 음부종양, 질종양, 전립선암종, 고환종양, 음경종양, 방광종양, 신장종양, 신우종양, 요관종양, 머리와 목종양, 부갑상선 암, 호지킨 병, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병과 항문 종양에서 선택하는 방법.
  52. 제51항에 있어서,
    종양이 유방암, 췌장암, 폐암 또는 흑색종인 방법.
  53. 제46항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    포유류가 사람인 방법.
  54. 제46항에 있어서,
    파클리탁셀을 포함하는 화학요법으로 포유류를 치료하는 방법.
  55. 제54항에 있어서,
    화학요법에 nab-파클리탁셀을 포함하는 방법.
  56. 제54항에 있어서,
    화학요법이 다음의 어느 것으로 이루어지는 방법:
    (a) 6주기로 매 14일 동안 175mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀, 2000mg/㎡으로 겜시타빈, 50m/㎡으로 에피루비신, 다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음, 4주기로 14일 동안 220mg/㎡으로 nab-파클리탁셀과 2000mg/㎡으로 겜시타빈을 후-수술 투여
    (b) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100-150mg/㎡)과 매 4주 중 연속 3주 동안 주 겜시타빈(1000mg/㎡); 또는
    (c) 매 4주 중 연속 3주 동안 주 nab-파클리탁셀(100mg/㎡)과 매 4 주 중 연속 3주 동안 주 카르보플라틴(AUC2)
  57. 제54항에 있어서,
    화학요법이 다음의 여섯주기로 이루어지는 방법:
    (a) 각 28일 주기 중 1, 8, 15일에 125mg/㎡으로 신보조 nab-파클리탁셀,
    (b) 각 28일 주기 중 1일에 카르보플라틴 AUC6,
    (e) 4mg/㎡하중 다음 2mg/kg/주로 트라추주마브,
    (d) 5mg/kg/주로 베바지수마브,
    다음 일차 종양을 수술로 제거한 다음,
    52주 동안 치료적 유효량의 트라추주마브와 베바시주마브
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