KR20130083259A - 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기는 레이저 광을 출하는 레이저 광원, 상기 레이저 광원에서 출사되는 광을 콜리메이팅(collimating) 시키는 콜리메이터(collimator), 상기 콜리메이터를 통해 평행광이 된 광을 반사시키는 이색거울(dichroic mirror), 상기 이색거울에서 반사된 광을 반사시키는 접이거울(folding mirror), 상기 접이거울에서 반사된 광을 마이크로채널 내에 존재하는 시료의 DNA 검출을 위한 대상물로 조사하는 대물렌즈 및 상기 대상물에 조사되어 반사된 형광신호를 다수의 채널을 가지는 광전자 증배기로 파장별로 입사받는 분광 광학계를 포함하는 것을 특징으로 한다. 이와 같이 구성되는 본 발명은 전기영동과 레이저 유도 형광 방식을 통해 DNA의 특성을 효과적으로 검출할 수 있는 장점이 있다.
Description
본 발명은 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기에 관한 것으로, 좀 더 상세하게는 마이크로채널 내에서 모세관 전기영동(Capillary electrophoresis) 기술과 레이저 유도 형광(Laser-induced Fluorescence) 방식을 접목하여 DNA의 특성을 고속으로 측정할 수 있는 형광 검출기에 관한 것이다.
모세관 겔 전기영동 (Capillary Gel Electrophoresis: CGE) 기술과 레이저 유도 형광(Laser-induced Fluorescence : LIF) 방식의 결합은 마이크로채널 내에서 DNA의 특성을 분석하기 위해 많이 응용되고 있다.
특히, 인간 유전자 STR 분석을 빠르고 간편하게 할 수 있기 때문에 DNA 샘플 유전자 분석비용이 크게 절감된다. 또한 마이크로 칩 상에서 작업이 진행됨으로 형광 검출 장비 및 전원 공급 장치의 소형화가 가능하게 될 경우 휴대성이 높아지므로 현장에서 얻은 샘플을 빠르게 진단할 수 있다는 장점이 있다.
전 세계적으로 형광 검출 장비의 소형화를 위해서 다양한 시도들이 진행되고 있다. 형광 검출 장비의 경우 광원의 소형화, 분광 시스템의 소형화, 광섬유를 기반으로 한 시스템 소형화, 그리고 검출기의 소형화가 진행되고 있다. 광원의 경우 부피가 큰 gas laser를 소형 diode laser 및 LED lamp가 대체하고 있고, 광섬유를 기반으로 한 시스템의 경우 공간 활용도가 매우 뛰어나지만 광섬유의 형광 신호 손실이 있다는 단점이 있다. 마지막으로 형광 검출 장비의 가장 큰 부피를 차지하는 분광 시스템은 이색거울(dichroic mirror)의 조합을 이용하여 순차적으로 짧은 파장의 형광 대역부터 걸러내는 방식으로 연구가 진행되고 있다. 하지만 검출할 파장 형광 파장 영역의 수 만큼 이색 거울과 검출기의 개수가 증가해야 하므로 공간상의 제약 및 크기에 제약이 따르므로 소형화의 어려움이 있다. 최근에 광 검출기의 크기의 소형화를 위하여 2개 이상의 채널을 가지는 다채널 검출기의 개발이 진행되고 있는 실정이다. 하지만 이색 거울을 기반으로 하는 분광시스템의 경우 다채널 검출기의 사용은 불가능하다. 그러므로 소형화를 위해서 다채널 검출기를 활용한 분광 시스템의 개발이 필요하다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 본 발명은 마이크로채널 내에서 전기영동 및 레이저 유도 형광에 의해 방출되는 DNA의 다양한 형광 신호를 소형화된 다채널 검출기로 동시에 검출할 수 있는 다채널 형광 검출기를 제공하고자 하는데 그 목적이 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 레이저 광을 출하는 레이저 광원, 상기 레이저 광원에서 출사되는 광을 콜리메이팅(collimating) 시키는 콜리메이터(collimator), 상기 콜리메이터를 통해 평행광이 된 광을 반사시키는 이색거울(dichroic mirror)ㅍㅍ, 상기 이색거울에서 반사된 광을 반사시키는 접이거울(folding mirror), 상기 접이거울에서 반사된 광을 마이크로채널 내에 존재하는 시료의 DNA 검출을 위한 대상물로 조사하는 대물렌즈 및 상기 대상물에 조사되어 반사된 형광신호를 다수의 채널을 가지는 광전자 증배기로 파장별로 입사받는 분광 광학계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 레이저 빔은, 파장값이 488nm를 가지는 다이오드 레이저로 구성되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 분광 광학계는, 상기 대상물에서 반사되는 형광 광을 회절시키는 회절격자, 상기 회절격자에서 회절된 형광 광을 전달하는 집광 광학계 및 상기 집광 광학계에서 투과된 형광 광을 파장별로 입사받는 다채널 광전자 증배기를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 집광 광학계는, 색수차를 제거하고, 상기 광전 증배기의 입사면에 대해 수직하게 광을 전달하는 상기 제 1렌즈, 제 2렌즈, 설계렌즈를 포함하여 구성되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 다채널 광전자 증배기는, 500 ~ 530nm, 530 ~ 560nm, 560 ~ 590nm, 590 ~ 620nm 파장을 각각 입사받는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 집광 광학계의 유효초점거리(effective focal length)는, 상기 광전자 증배기의 각 채널의 크기와 채널별 검출 파장 영역에 따라 결정되는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 다채널 광전자 증배기는, 각 채널의 전체 피치(pitch)는 1mm이며, 유효한 채널의 크기는 800umm 인 것을 특징으로 한다.
상기와 같이 구성되고 작용되는 본 발명은 마이크로채널 내에서 전기 영동 및 레이저 유도 형광에 의해 방출되는 DNA의 다양한 형광 신호를 소형화된 다채널 검출기로 동시에 검출하기 위한 시스템으로써, 다채널 형광 검출기는 마이크로채널 내에서 모세관 전기영동(Capillary electrophoresis) 기술과 레이저 유도 형광 (Laser-induced Fluorescence) 방식을 적용하면 DNA의 특성을 분석 할 수 있는 이점이 있다.
또한, 공명 에너지 전이(FRET)기술을 이용하면 단일 레이저 파장으로 4개의 서로 다른 방출(emission) 파장을 가지는 dye들을 동시에 여기(excitation)시켜 다양한 형광 신호를 동시에 얻을 수가 있고, 이에 따라 빠르고 효과적인 DNA 분석이 가능하다.
이를 위해서 형광 검출기 역시 서로 다른 파장 대역을 가진 형광 신호를 동시에 분리하여 검출하여야 하는데, 본 발명은 회절격자를 이용하여 공간적으로 형광 신호를 분리하고, 4개 dye들의 형광 대역이 다채널 광전자 증배기(Photomultiplier Tube)의 각 채널에 맞게 검출되도록 설계함으로써 고속으로 검출할 수 있는 장점이 있다.
도 1은 본 발명에 따른 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기의 개략적인 구성도,
도 2는 본 발명에 따른 다채널 형광 검출기의 분광 광학계를 도시한 도면,
도 3은 본 발명에 따른 분광 광학계의 상세 구성도.
도 2는 본 발명에 따른 다채널 형광 검출기의 분광 광학계를 도시한 도면,
도 3은 본 발명에 따른 분광 광학계의 상세 구성도.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기의 바람직한 실시예를 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명에 따른 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기는, 레이저 광을 출하는 레이저 광원, 상기 레이저 광원에서 출사되는 광을 콜리메이팅(collimating) 시키는 콜리메이터(collimator), 상기 콜리메이터를 통해 평행광이 된 광을 반사시키는 이색거울(dichroic mirror), 상기 이색거울에서 반사된 광을 반사시키는 접이거울(folding mirror), 상기 접이거울에서 반사된 광을 마이크로채널 내에 존재하는 시료의 DNA 검출을 위한 대상물로 조사하는 대물렌즈 및 상기 대상물에 조사되어 반사된 형광신호를 다수의 채널을 가지는 광전자 증배기로 파장별로 입사받는 분광 광학계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기는, 공명 에너지 전이(FRET)기술을 이용하면 단일 레이저 파장으로 4개의 서로 다른 방출(emission) 파장을 가지는 dye들을 동시에 여기(excitation)시켜 다양한 형광 신호를 동시에 얻을 수 있는 다채널 형광 검출기를 제공하고자 하는데 그 목적이 있다.
도 1은 본 발명에 따른 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기의 개략적인 구성도이다.
마이크로 칩(150)의 상부에서 온도 조절 및 전기영동을 실시하기 위한 장치를 거치해야 하므로 현광 검출은 마이크로 칩의 하부에서 이루어져야 한다. 따라서 형광 검출 장비는 도립(inverted)시스템이 되어야 한다. 488nm 파장을 가지는 광섬유 다이오드 레이저빔(100)은 콜리메이터(110 ; collimator)를 통과하면서 평행광이 된다.
490nm 이하의 파장을 가지는 빔은 반사시키고, 이상의 파장을 가지는 빔은 투과를 시키는 이색거울(120)은 488nm의 레이저 빔을 반사시킨다. 도립 시스템을 구현하기 위해서 빔의 경로를 위로 향하게 하는 접이거울(130 ; folding mirror)을 구비한다.
상기 접이거울에서 반사된 레이저 빔은 대물렌즈로 입사되는데, 상기 대물렌즈(140)는 마이크로 칩(150)의 두께 이상의 작동 거리(working distance)를 가지도록 바람직하게 20배율의 대물렌즈를 사용한다. 대물렌즈(140)를 통과한 빔은 마이크로 칩(150)의 마이크로 채널(151) 내에 초점이 맺히게 된다. 마이크로 채널(151) 내의 dye가 입사된 레이저 빔에 의해 여기가 되고 형광을 방출한다.
대물렌즈(140)에 의해서 집광된 형광 빛은 집이거울(130)을 지나 이색거울(120)을 투과한다. 형광 빛은 490nm 이상이기 때문에 이색거울에 의해 투과가 되고 투과된 빛은 분광 광학계(200)에 입사되어서 검출이 된다. 상기 분광 광학계(200)에 대한 자세한 설명은 도 2, 3에서 하도록 하겠다.
도 2는 본 발명에 따른 다채널 형광 검출기의 분광 광학계를 도시한 도면이다. 일반적으로 다채널 광전자 증배기를 이용하는 집광 광학계의 경우 회절격자 혹은 프리즘(prism)을 지나 분리된 형광을 각 채널에 맞게 입사시켜주기 위해서 필요한 경로를 여러 개의 거울로 반사면 만들어 만들어준다. 이러한 기존의 방식은 분광을 위해 사용된 반사 거울의 배치로 인해서 소형화에 적합하지 않으며, 이 때 분광 광학계에 입사시켜줄 수 있는 빔의 직경은 매우 작다. 또한 직경이 큰 빔에 적합한 광학계를 구성하기 위해서 사용되는 오목 거울의 경우 구조의 복잡성으로 인해서 소형화가 어렵다는 단점이 있다. 본 발명에서는 마이크로 채널(151) 내에서 방출되는 형광의 양을 최대로 받아들이기 위해서 수치구경(numerical aperture)이 큰 대물렌즈(140)를 사용하므로 이색거울(120)을 지난 형광 빔의 직경이 8mm로 매우 크다. 따라서 형광 신호의 손실 없이 큰 직경의 빔에 대해서 분광 및 소형화를 가능하게 위해서 거울을 이용하지 않고 렌즈를 이용한 광학계를 구성하였다. 넓은 파장 대역을 가지는 형광 빛은 일차원 회절격자(grating ; 210)를 통과하게 된다.
상기 회절격자(210)는 특정 공간 주파수(lpmm)와 설계된 중심 파장을 가진다. 따라서 입사 각, 그리고 형광 빛의 파장에 따라서 회절각이 결정되고, 선형적으로 분산된다. 광전자 증배기(230)의 각 채널의 크기와 채널별로 검출할 파장 영역에 따라 집광 광학계(220)의 유효초점거리(effective focal length)가 정해진다. 상기 집광 광학계(220)는 2개의 이중렌즈(doublet ; 221, 223)와 설계렌즈(222)를 이용한다. 집광 광학계(220)를 통과하게 되면 모든 형광 빛이 각 채널에 수직으로 입사한다. 상기 집광 광하계는 입사되는 광의 색수차를 제거하고, 최종 광이 입사되는 광전자 증배기의 입사면에 수직하도록 만들어 주기 위함이다.
도 3은 본 발명에 따른 분광 광학계의 상세 구성도이다. 도시된 바와 같이 집광 광학계(220)로부터 다채널 광전자 증배기(230)의 각 채널에 입사되는 형광 빛을 나타내고 있다. 집광 광학계(220)의 최종 렌즈인 이중 렌즈(223)를 통과하게 되면 모든 형광 빛의 주광선은 다채널 광전자 증배기(230)의 입사면과 수직을 이루게 된다. 각 채널의 전체 피치(pitch)는 1mm이고 유효한 채널의 크기는 800um이다. 200um는 각 채널을 구분하기 위한 공간이다. 공명 에너지 전이 기술을 이용하여 제작한 형광 dye의 경우 488nm 파장의 레이저 빔에 여기되고, 500~530nm / 530~560nm / 560~590nm / 590~620nm의 서로 다른 파장 영역의 형광 빛을 방출한다. 따라서 4채널의 광전자 증배기(230)를 사용한다.
도 3에서 300 ~ 330은 각각 500, 530, 560, 590, 620nm 즉, 각 채널에 입사되는 형광 파장의 경계값이다. 분광 광학계(8)에 사용된 검출기인 다채널 광전자 증배기(230)는 16채널을 가지고 있으며, 분광 광학계(200)의 선형화된 설계에 의해서 형광 dye가 추가되더라도 최대 8채널 즉, 740nm까지 광학계의 설계 및 구조의 변경 없이 사용 가능하다.
회절격자, telecentric 광학계 및 다채널 광전자 증배기를 이용하여 동시에 다양한 dye의 형광신호를 분리, 검출 할 수 있는 측정 시스템을 구현하기 위한 방법 및 구조에 관한 것이다.
이와 같이 구성되는 본 발명은 전기영동 기술과 레이저 유도 형광 방식을 접목하여 DNA 특성을 고속으로 측정할 수 있으며, 더불어 다채널 광전자 증배기를 이용함으로써 광신호 분리 및 검출을 빠르게 실시할 수 있는 장점이 있다.
이상, 본 발명의 원리를 예시하기 위한 바람직한 실시예와 관련하여 설명하고 도시하였지만, 본 발명은 그와 같이 도시되고 설명된 그대로의 구성 및 작용으로 한정되는 것이 아니다. 오히려, 첨부된 청구범위의 사상 및 범주를 일탈함이 없이 본 발명에 대한 다수의 변경 및 수정이 가능함을 당업자들은 잘 이해할 수 있을 것이다. 따라서 그러한 모든 적절한 변경 및 수정과 균등물들도 본 발명의 범위에 속하는 것으로 간주되어야 할 것이다.
100 : 레이저빔
110 : 콜리메이터
120 : 이색거울
130 : 접이거울
140 : 대물렌즈
150 : 마이크로칩
151 : 마이크로 채널
200 : 분광 광학계
210 : 회절격자
220 : 집광 광학계
221 : 제 1렌즈
222 : 설계렌즈
223: 제 2렌즈
230 : 다채널 광전자 증배기
110 : 콜리메이터
120 : 이색거울
130 : 접이거울
140 : 대물렌즈
150 : 마이크로칩
151 : 마이크로 채널
200 : 분광 광학계
210 : 회절격자
220 : 집광 광학계
221 : 제 1렌즈
222 : 설계렌즈
223: 제 2렌즈
230 : 다채널 광전자 증배기
Claims (10)
- 레이저 광을 출하는 레이저 광원;
상기 레이저 광원에서 출사되는 광을 콜리메이팅(collimating) 시키는 콜리메이터(collimator);
상기 콜리메이터를 통해 평행광이 된 광을 반사시키는 이색거울(dichroic mirror);
상기 이색거울에서 반사된 광을 반사시키는 접이거울(folding mirror);
상기 접이거울에서 반사된 광을 마이크로채널 내에 존재하는 시료의 DNA 검출을 위한 대상물로 조사하는 대물렌즈; 및
상기 대상물에 조사되어 반사된 형광신호를 다수의 채널을 가지는 광전자 증배기로 파장별로 입사받는 분광 광학계;를 포함하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기. - 제 1항에 있어서, 상기 레이저 빔은,
파장값이 488nm를 가지는 다이오드 레이저로 구성되는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기. - 제 1항에 있어서, 상기 분광 광학계는,
상기 대상물에서 반사되는 형광 광을 회절시키는 회절격자;
상기 회절격자에서 회절된 형광 광을 전달하는 집광 광학계; 및
상기 집광 광학계에서 투과된 형광 광을 파장별로 입사받는 다채널 광전자 증배기;를 포함하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기. - 제 3항에 있어서, 상기 집광 광학계는,
색수차를 제거하고, 상기 광전 증배기의 입사면에 대해 수직하게 광을 전달하는 상기 제 1렌즈, 제 2렌즈, 설계렌즈를 포함하여 구성되는 것을 특징으로 하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기. - 제 1항에 있어서, 상기 다채널 광전자 증배기는,
500 ~ 530nm, 530 ~ 560nm, 560 ~ 590nm, 590 ~ 620nm 파장을 각각 입사받는 것을 특징으로 하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기. - 제 1항에 있어서, 상기 집광 광학계의 유효초점거리(effective focal length)는, 상기 광전자 증배기의 각 채널의 크기와 채널별 검출 파장 영역에 따라 결정되는 것을 특징으로 하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기.
- 제 1항에 있어서, 상기 다채널 광전자 증배기는,
각 채널의 전체 피치(pitch)는 1mm이며, 유효한 채널의 크기는 800umm 인 것을 특징으로 하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기. - 레이저 광을 출하는 레이저 광원;
상기 레이저 광원에서 출사되는 광을 콜리메이팅(collimating) 시키는 콜리메이터(collimator);
상기 콜리메이터를 통해 평행광이 된 광을 반사시키는 이색거울(dichroic mirror);
상기 이색거울에서 반사된 광을 반사시키는 접이거울(folding mirror);
상기 접이거울에서 반사된 광을 마이크로채널 내에 존재하는 시료의 DNA 검출을 위한 대상물로 조사하는 대물렌즈;
상기 대상물에서 반사되는 형광 광을 회절시키는 회절격자;
상기 회절격자에서 회절된 형광 광을 전달하는 집광 광학계; 및
상기 집광 광학계에서 투과된 형광 광을 파장별로 입사받는 다채널 광전자 증배기;를 포함하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기. - 제 8항에 있어서, 상기 다채널 광전자 증배기는,
500 ~ 530nm, 530 ~ 560nm, 560 ~ 590nm, 590 ~ 620nm 파장을 각각 입사받는 것을 특징으로 하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기. - 제 8항에 있어서, 상기 다채널 광전자 증배기는,
각 채널의 전체 피치(pitch)는 1mm이며, 유효한 채널의 크기는 800umm 인 것을 특징으로 하는 레이저 유발 형광을 이용한 모세관 전기영동을 위한 다채널 형광 검출기.
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