KR20120140097A

KR20120140097A - 암 진단 및 치료용 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20120140097A
Application number: KR1020110059757A
Authority: KR
Inventors: 김현기; 김진우
Original assignee: 김현기
Priority date: 2011-06-20
Filing date: 2011-06-20
Publication date: 2012-12-28

Abstract

본 발명은 암 진단 및 치료용 조성물 및 방법에 관한 것으로 더욱 상세하게는 세포 막에 존재하는 인간 암관련 단백질의 특정 부위에 특이적인 항체를 이용한 암 진단 및 치료용 조성물 및 그 방법에 관한 것이다.

Description

암 진단 및 치료용 조성물 및 방법{COMPOSITION AND METHOD FOR DIAGNOSIS AND TREATMENT OF HUMAN CANCER}

본 발명은 암 진단 및 치료용 조성물 및 방법에 관한 것으로 더욱 상세하게는 인간 암관련 단백질의 특정 부위에 특이적인 항체를 이용한 암 진단 및 치료용 조성물 및 그 방법에 관한 것이다.

항체를 질환 특히 암치료제로 사용하기 위해서는 우선 특정 질환에서 치료용 항체의 표적이 될 수 있는 신규 타겟 혹은 표적분자를 규명하고 발굴하는 연구가 필수적으로 선행되어야 한다 [(Belda-Iniesta, C. et al., Clin Transl Oncol, 13(2): 84-87 (2011); Garrett, J.T. and Arteaga, C.L., Cancer Biol Ther, 11(9): 793-800 (2011)].

치료용 항체의 타겟은 대부분 세포에서 외부로 분비되는 분자 또는 세포막에 존재하는 분자로 모두 세포 외부에 존재하는 분자이다 [(Alduaij, W. and Illidge, T.M., Blood, 117(11): 2993-3001 (2011); Mayes, S. et al., Expert Opin Biol Ther, 11(5):623-640 (2011)].

타겟이 세포 밖으로 분비되는 사이토카인(cytokine) 혹은 바이러스인 경우는 이러한 타겟들의 기능을 중화시키거나 이 타겟들이 세포 수용체와 결합하는 것을 저해하는 중화 항체의 개발이 목표가 된다. 반면 암 세포에서와 같이 타겟 분자가 세포막에 존재할 경우는 막단백질(membrane proteins)인 타겟 분자와 ligand와의 결합을 억제하거나, 타겟 분자를 발현하고 있는 세포를 ADCC 혹은 CDC 등 항체의 실행자 기능을 통하여 파괴하는 항체의 개발이 목표가 된다.

그러나 특정 질환에서 치료용 항체의 타겟이 되는 분자를 발굴하는 것은 유전체(genomics) 및 단백질체(proteomics) 등의 학문 분야에서 tissue microarray(TMA) 혹은 고속 검색(high throughput screening; HTS)분석 등의 연구가 매우 심도 있게 진행되어야 하며, 타겟 분자와 특정 인체 질환과의 연계성을 증명하기 위한 생물학, 기초의학, 임상의학, 임상병리학 연구 등이 융합된 높은 수준의 기초 연구 필요하고, 따라서 동시에 매우 긴 시간과 엄청난 연구개발비가 수반된다. 현재는 항체가 제약 산업의 가장 뜨거운 이슈가 되어 다국적 거대 제약사의 70% 이상이 치료용 항체(therapeutic antibody) 개발에 많은 연구와 투자를 아끼지 않고 있다.

따라서 항체는 향 후 20여 년 이상 제약 산업의 핵심으로 자리 잡을 것이며, 이에 많은 국내 제약사들도 치료용 항체 사업 분야에 뛰어들고 있다.

한편, Human genome project가 발표되면서, 쉽게 사람의 유전자를 발견하고 이를 특허화 할 수 있는 구체적 로드맵이 형성되었다. 이 로드맵에 따라서 상업적으로 유용한 유전자들이 발견됨으로서, 이러한 유전자의 기능을 발견한 특허권자에게 이러한 인간의 유전자를 배타적으로 이용할 수 있는 특허권을 부여하게 되었다.

특허화 된 유전자는 특허권자에게 배타적인 사용이 허가됨으로 특허권자의 허가가 없이 특허권자가 아닌 기업 혹은 개인이 이러한 유전자 혹은 유전자 산물 (단백질)을 이용한 약품 개발, 진단제제 개발이 원천적으로 봉쇄되게 되었다.

따라서 재조합 항체 치료제를 개발하려는 기업은 항체 개발의 목표 분자를 획득하기 위하여 다음의 3가지 방법을 이용할 수밖에 없게 되었다.

1) 이미 특허권이 소멸된 기존의 항원을 이용하여 항체를 개발(예 : EGF, EGF receptor 등을 이용하는 방법)하는 방법으로 Abgenix, Imclone 등이 관련기업이다.

2) 현재 특허권이 확보되어 있는 항원을 이용하지 않고, 이러한 항원에 대한 항체를 제조하고, 유용한 항체가 결합하는 항원을 동정함. 이후 이 항체와 항원을 동시에 특허화하는 것으로, 예를 들어, 암세포를 면역하고, 암세포에 결합하는 항체를 찾아낸 후, 나중에 항원을 동정하는 방법으로, 관련기업은 Raven Biotechnology, Alexion 등이 있다.

3) 세포막에 존재하거나 세포 외로 분비되는 단백질을 코딩하는 새로운 유전자를 찾아낸 후, 이를 특허화 하고 이에 대한 치료용 항체를 생산하는 방법으로, 관련기업으로 Genenetch 등이 있다.

실제로 Genetech은 1997년부터 약 세포막에 존재하거나 세포외로 분비되는 폴리펩타이드와 이를 코딩하고 있는 유전자에 대한 특허를 신청하기 시작하여 현재 1,700개에 대한 특허를 신청한 단계이며, 그러나 이중 단 10개의 폴리펩타이드에 대한 특허를 획득하였으며, 2개의 폴리펩타이드에 대한 항체를 개발하여 특허를 획득하고 있다.

현재 항체를 이용한 약품 개발에 진입하고 있는 대한민국의 경우 특허권이 소멸되어 모두에게 개방되어있는 항원에 대한 항체를 개발하는 것은 이미 대부분의 중요 기술을 확보하고 있는 선진국의 거대 제약 기업과 경쟁할 수 없음이 자명하다.

따라서 상기 방법 2) 와 방법 3)을 집중적으로 개발하여 독점적인 실시권이 있는 유용한 항원을 확보하는 것이 우리나라의 상황에 적합한 것으로 보이며, 본 발명은 실제로 방법 2)와 3)을 모두 확보하여 이루어진 것이다.

따라서, 세포막에 존재하거나 세포 외로 분비되는 단백질을 코딩하는 새로운 유전자를 찾아낸 후, 이를 특허화하고 이에 대한 치료제 (치료용 항체 등)를 생산하는 것은 암의 치료 연구에 중요한 역할을 하며, 이를 밝히는 것이 요구되고 있다.

본 발명은 상기의 필요성에 의하여 안출된 것으로서, 따라서, 본 발명의 목적은 암 관련 단백질 또는 그의 단편에 대한 항체를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 암진단용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 암 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 암 진단을 위한 정보를 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 서열번호 1의 36-59번 아미노산 잔기, 또는 112-194번 아미노산 잔기의 펩티드; 서열번호 2의 1-24번 아미노산 잔기, 또는 131-255번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 3의 1-645번 아미노산 잔기, 또는 796-1210번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 4의 41-54번 아미노산 잔기, 또는 118-126번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 5의 111-129번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 6의 1-19번 아미노산 잔기, 또는 126-296번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 7의 1-645번 아미노산 잔기, 또는 796-1210번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 8의 1-175번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 9의 1-56번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 10의 1-113번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 11의 1-184번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 12의 1-172번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 13의 1-64번 아미노산 잔기의 펩티드;서열번호 14의 1-321번 아미노산 잔기의 펩티드; 및 서열번호 15의 1-175번 아미노산 잔기의 펩티드로 구성된 군으로부터 선택된 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다.

본 발명의 항체의 면역원은 정제 단백질 또는 재조합 단백질을 입수하던가 cDNA(complementary DNA) 염기서열로부터 추정되는 단백질의 일차구조에 기초하여 면역원이 되는 peptide를 합성하여 조제할 수 있다.

합성 peptide의 경우 cDNA 염기서열로부터 추정되는 일차구조를 기초로 면역원이 되는 peptide를 자유자재로 합성할 수 있다. 따라서 면역에 필요한 양의 단백질을 정제할 수 없는 경우 또는 DNA 염기서열을 극히 일부밖에 알지 못하는 경우에도 응용가능하다.

정제 단백질 또는 재조합 단백질은 어느 단백질에 대한 항체를 얻고자 하는 경우 가장 확실한 면역원이다. 이를 위해서 면역에 필요한 단백질을 정제하던가 클론화한 cDNA를 발현벡터에 도입하여 재조합 단백질을 얻어야 한다.

본 발명의 항체는 제작 방법에 따라 다클론항체(polyclonal antibody)와 단클론항체(monoclonal antibody) 등으로 제작하여 사용할 수 있다.

다클론 항체는 단클론 항체보다 빠르고 간편하게 제작할 수 있다. 항원 중의 여러 가지 항원결정기(epitope)에 대한 항체를 포함하고 있기 때문에 western blot, 면역 세포 염색 등에 사용할 수 있는 항체를 얻기에 용이하다.

단클론 항체는 항원 중의 1개의 에피토프를 인식하므로 특이성이 뛰어나다. 이 특성 때문에 연구, 진단, 치료 목적에 알맞다. 다클론 항체로부터 단클론 항체는 생화학적으로 직접 정제할 수 있다. 활성화된 B 세포를 골수종세포(종양성 형질세포)와 융합하여 잡종세포주(hybridoma)라 불리는 잡종세포를 생성한다. 이 세포는 골수종세포의 성질인 죽지 않고 계속 성장하는 성질을 가지며, B세포에 의해 생겨난 항체를 분비한다. 그 결과로 생겨난 잡종세포주 클론은 대량의 단클론 항체를 분비하며 무한정으로 배양될 수 있다. 배양상층을 대량으로 얻을 수 있기 때문에 장기간 대량으로 균일한 성질의 항체를 실험에 이용할 수 있다. 목적에 따라 다르나 대부분의 경우 하이브리도마 중의 배양상층 또는 복수를 그대로 이용할 수 있다.

일반적으로 단시간에 실험결과를 얻고 싶은 경우에는 다클론 항체가 적당하며 장기간에 걸쳐 균일한 lot로 실험한 결과를 얻고 싶은 경우에는 단클론 항체가 유용하다. 보편적으로 다클론 항체 제작을 우선적으로 하고 그 후 단클론 항체를 제작하는 것이 일반적이다.

또 본 발명은 상기 본 발명의 항체를 포함하는 암 진단용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 항체 및 약학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 암은 폐암, 유방암, 간암, 자궁경부암, 피부암, 대장암, 신장암, 난소암, 두경부암, 전립선암, 또는 췌장암인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

본 발명의 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 약학적으로 허용되는 담체는 결합 단백질의 저장 수명 또는 유효성을 증가시키는 습윤제 또는 유화제, 방부제 또는 완충액과 같은 최소량의 보조 물질로 구성될 수 있다.

또한 본 발명의 암 치료용 조성물은 하나 또는 그 이상의 항암제와 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 암 치료용 조성물은 예를 들어 당업자에게 잘 알려진 화학요법약제(chemotherapeutic agent), 예컨대, 사이클로포스파마이드, 아지리딘, 알킬알콘설포네이트, 나이트로소우레아, 다카르바진, 카르보플라틴, 시스플라틴 등과 같은 알킬화제(alkylating agent), 마이토마이신 C, 안트라사이클린, 독소루비신(아드리아마이신) 등과 같은 항생제, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라신, 시타라빈 등과 같은 항대사제(antimetabolitic agent), 빈카 알칼로이드와 같은 식물유래 약제 및 호르몬 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 암 치료용 조성물은 상기 유효 성분 외에도 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 포함할 수 있으며, 이러한 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제, 가용화제 등이 있다.

또한 본 발명의 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 조성물의 약제 제제 형태는 과립제, 산제, 피복정, 정제, 캡슐제, 좌제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 및 활성 화합물의 서방출형 제제 등이 될 수 있다.

본 발명의 조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 복강내, 흉골내, 경피, 비측내, 흡입, 국소, 직장, 경구, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.

본 발명의 치료 방법에 있어서, "유효량"은 암을 억제하는 효과를 이루는데 요구되는 양을 의미한다. 따라서,본 발명의 유효 성분의 "유효량"은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 성인의 경우, 상기 조성물을 1일 1회 내지 수회 투여시, 항체일 경우 0.1ng/kg~10㎎/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.

또 본 발명은 상기 본 발명의 항체를 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다.

또한 본 발명은 a) 분석할 생물학적 시료를 제공하는 단계;b) 상기 시료와 제 1항의 항체를 접촉시키는 단계;c) 항원-항체 복합체를 정량 검출하는 단계; 및 d) 상기 c) 단계 검출 결과를 정상 대조군과 비교하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 시료는 조직, 세포, 뇨, 혈액, 혈청 및 혈장 중에서 선택되는 생물학적 시료인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.

본 발명에서 용어 "진단을 위한 정보제공방법"은 진단을 위한 예비적 단계로서 암의 진단을 위하여 필요한 객관적인 기초정보를 제공하는 것이며 의사의 임상학적 판단 또는 소견은 제외된다.

또한 본 발명의 항체들을 이용하여 당분야에 공지된 효소 면역측정법(enzyme linked immunosorbent assay; ELISA), 방사선면역측정법(radioimmunoassay; RIA), 샌드위치 측정법(sandwich assay), 폴리아크릴 겔상의 웨스턴 블롯 또는 면역 블롯 등의 방법에 의해 대상자의 체액 시료 중에 상기 세포막단백질이 발현되었는지를 확인함으로써 암을 진단할 수 있다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

1. GIG 2

본 발명의 세포막위치 유전자인 GIG2 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY423720 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 X60111 호인 Homo sapiens mRNA for motility-related protein (MRP-1) 및 NM_001769호인 Homo sapiens CD9 antigen (p24) (CD9) 유전자와 서열이 일치하는 유전자로 즉 제 X60111 호인 Homo sapiens mRNA for motility-related protein (MRP-1) 유전자는 세포의 이동과 관계가 있다고 보고되고 있다 (Miyake, M., et al., J. Exp. Med ., 174, 1347-1354 (1991)). 또한 NM_001769호인 Homo sapiens CD9 antigen (p24) (CD9) 유전자도 유방암 (Sauer, G. et al., Oncol. Rep., 10, 405-410 (2003)) 과 폐암 (Funakoshi, T. et al., Oncogene, 22, 674-687 (2003)).에서 세포의 이동 및 침습능에 관여한다고 보고되고 있다. 그러나 기 보고된 세포의 이동과 침습능과는 달리 금번 연구 결과 폐암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 GIG2 단백질은 228 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 1의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 25 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

도 2a는 GIG2 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2a에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 각각의 GIG 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2a에서 보듯이, 발현된 GIG2 단백질의 크기는 약 25 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

본 발명자들은 폐암의 발생기전을 암관련 유전자 수준에서 접근한 결과, 인간 GIG2 유전자 (GenBank No.: AY423720)로 명명된 암관련 유전자가 폐암세포에 발현이 된다는 것을 밝혀내었다. 상기 암관련유전자는 폐암과 같은 다양한 암의 진단, 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

2. GIG 11

본 발명의 세포막위치 유전자인 GIG 11 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY451236 호로 등록되어 있으며, 이 데이터베이스에 등록된 제 CR614679 호인 full-length cDNA clone CS0DD008YG11 of Neuroblastoma Cot 50-normalized of Homo sapiens (human)유전자와 이 데이터베이스에 등록된 제 BC000666 호인 Homo sapiens thioredoxin-related transmembrane protein 2 유전자 및 이 데이터베이스에 등록된 제 AF132965 호인 Homo sapiens CGI-31 protein mRNA 유전자들과는 서열이 일부 일치하나 단백질은 서로 다른 유전자들이다. 제 CR614679 호인 full-length cDNA clone CS0DD008YG11 of Neuroblastoma Cot 50-normalized of Homo sapiens (human)유전자, 제 BC000666 호인 Homo sapiens thioredoxin-related transmembrane protein 2 유전자 및 제 AF132965 호인 Homo sapiens CGI-31 protein mRNA 유전자들은 아직까지 기능이 규명되어있지 않다.

그러나 GIG 11 단백질은 금번 연구 결과 유방암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 단백질은 250 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 2의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 29 kDa이다.

그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

GIG 11 염기서열은 250 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 2와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 29 kDa이다.

얻어진 GIG 11 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG 11 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2b는 GIG 11 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2b에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2b열은 IPTG에 의해 GIG 11 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2b에서 보듯이, 발현된 GIG 11 단백질의 크기는 약 29 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

3. GIG 40

본 발명의 세포막위치 유전자인 GIG40 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY550966 호로 등록되어 있으며 , 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_005228호인 Homo sapiens 상피 세포 성장 인자 수용 체(erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian) (EGFR) 등과 유전자서열이 유사한 것으로 밝혀졌다.

그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 인간 종양에서는 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 GIG 40단백질은 1210 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 3의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 134 kDa이다.그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.또 GIG40 염기서열은 1210 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 134 kDa이다.

얻어진 GIG40 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG40 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2c는 GIG40 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2c에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG40 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2c에서 보듯이, 발현된 GIG40 단백질의 크기는 약 134 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

4. HCC9

본 발명의 세포막위치 유전자인 HCC9 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY071927 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 기존의 보고된 원암유전자와는 전혀 상동성을 나타내지 않으며 암전이 유발능을 나타내는 신규 원암유전자 및 이에 의해 코드되는 단백질에 관한 것이다. 그러나 기 보고된 것과 달리 금번 연구 결과 자궁경부암을 포함한 인간에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 원암유전자로부터 발현되는 HCC9단백질은 157개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호: 4로 기재되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 17 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

HCC9 염기서열은 157 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 4와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 17 kDa이다.

얻어진 HCC9 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 HCC9 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2d는 HCC9 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2d에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 HCC9 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2d에서 보듯이, 발현된 HCC9 단백질의 크기는 약 17 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

5. PIG17

본 발명의 세포막위치 유전자인 PIG17 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY336092 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_016454 호인 Homo sapiens hypothetical protein LOC51234 (LOC51234) 유전자, 제 CR858446 호인 Pongo pygmaeus mRNA; cDNA DKFZp468K0411 (from clone DKFZp468K0411) 유전자 및 제 AF151018 호인 Homo sapiens HSPC184 mRNA 유전자들과 유전자 염기서열이 일치함이 확인되었다. HSPC184 유전자는 CD34+ hematopoietic stem/progenitor cell 들에 존재한다고 밝혀져있으며 그 기능은 아직 보고되지 않고 있다 (Zhang, Q-H., et al., Genome Res., 10, 1546-1560 (2000)). 금번 연구 결과 폐암을 포함한 인간 종양조직에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 PIG 17 단백질은 183 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 5의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 20 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

또 PIG17 염기서열은 183 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 5와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 20 kDa이다.

얻어진 PIG17 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG17 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2e는 PIG17 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2e에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG17 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2e에서 보듯이, 발현된 PIG17 단백질의 크기는 약 20 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

6. PIG 26

본 발명의 세포막위치 유전자인 PIG-26 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY451237 호로 등록되어 있으며, 이 데이터베이스에 등록된 제 CR614679 호인 full-length cDNA clone CS0DD008YG11 of Neuroblastoma Cot 50-normalized of Homo sapiens (human)유전자와 이 데이터베이스에 등록된 제 BC000666 호인 Homo sapiens thioredoxin-related transmembrane protein 2 유전자 및 이 데이터베이스에 등록된 제 AF132965 호인 Homo sapiens CGI-31 protein mRNA 유전자들과는 서열이 일부 일치하나 단백질은 서로 다른 유전자들이다. 제 CR614679 호인 full-length cDNA clone CS0DD008YG11 of Neuroblastoma Cot 50-normalized of Homo sapiens (human)유전자, 제 BC000666 호인 Homo sapiens thioredoxin-related transmembrane protein 2 유전자 및 제 AF132965 호인 Homo sapiens CGI-31 protein mRNA 유전자들은 아직까지 기능이 규명되어있지 않다.

그러나 PIG-26 유전자는 금번 연구 결과 유방암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 296 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 6의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 34 kDa이다.

또 PIG-26 염기서열은 296 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 6과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 34 kDa이다.

얻어진 PIG-26 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG-26 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2f는 PIG-26 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2f에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG-26 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2f에서 보듯이, 발현된 PIG-26 단백질의 크기는 약 34 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

7. PIG61

본 발명의 세포막위치 유전자인 PIG 61 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 DQ088980호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_005228 호인 Homo sapiens epidermal growth factor receptor (erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian) (EGFR), transcript variant 1 유전자 및 제 NM_201284 호인 Homo sapiens epidermal growth factor receptor (erythroblastic leukemia viral (v-erb-b) oncogene homolog, avian) (EGFR), transcript variant 4 유전자들과는 서열이 유사한 유전자이다. 이들 유전자들의 기능은 암과 관련하여 일부 밝혀져 있지 않다 (Huang, P.H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104, 12867-72 (2007); Suehisa, H. et al., J. Clin. Oncol., 25, 3952-7 (2007)). 이 단백질은 protein kinase superfamily의 member 로서 transmembrane glycoprotein 이며, epidermal growth factor family의 수용체이다. EGFR은 cell surface protein으로 epidermal growth factor에 결합하며 이단백질이 ligand에 결합하게되면 receptor dimerization과 tyrosine autophosphorylation을 일으켜서 결국cell proliferation을 유도한다.

그러나 기 보고된 receptor dimerization과 tyrosine autophosphorylation과는 달리 금번 연구 결과 간암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 1210 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 7의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 134 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

또 PIG61 염기서열은 1210 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 7과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 134 kDa이다.

얻어진 PIG61 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG61 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2g는 PIG61 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2g에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG61 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2g에서 보듯이, 발현된 PIG61 단백질의 크기는 약 134 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

8. TRG7

본 발명의 세포막위치 유전자인 TRG7의 염기서열은 미국 국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY191223 호로 등록되었으며, 염기서열 분석결과 이 데이터베이스에 등록된 제 AK074557호인 Homo sapiens cDNA FLJ90076 fis, 클론 HEMBA1004444 등과 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 자궁경부암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 175 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 8의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 20 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

또 TRG7 염기서열은 175 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 8과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 20 kDa이다.

얻어진 TRG7 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 TRG7 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2h는 TRG7 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2h에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 TRG7 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2h에서 보듯이, 발현된 TRG7 단백질의 크기는 약 20 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

9. TRG 10

본 발명의 세포막위치 유전자인 TRG10 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY277593 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_033346호인 Homo sapiens bone morphogenetic protein receptor, type II (serine/threonine kinase) (BMPR2), 전사 변이체 2 유전자 등과 유전자 서열이 유사하다. 이유전자는 transmembrane serine/threonine kinases의 bone morphogenetic protein (BMP) receptor family를 encode하며 이 receptor의 ligand들은 TGF-beta superfamily의 member들인 BMPs이다. BMP들은 endochondrial bone formation과 embryogenesis 에 관여하고 있다고 보고되고 있다 (Kawabata, M. et al., J. Biol. Chem., 270(10), 5625-5630 (1995); Rosenzweig,B.L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 92(17), 7632-7636 (1995)).

그러나 기 보고된 endochondrial bone formation과 embryogenesis과는 달리 금번 연구 결과 자궁경부암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 56 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 9의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 6 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

또 TRG10 염기서열은 56 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 9와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 6 kDa이다.

얻어진 TRG10 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 TRG 10 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2i는 TRG10 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2i에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 각각의 TRG10 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2i에서 보듯이, 발현된 TRG10 단백질의 크기는 약 6 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

10. GIG44

본 발명의 세포막위치 유전자인 GIG44 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY971350 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 BC042127호인 Homo sapiens 추정 인슐린-유사 성장 인자 II 관련 단백질 유전자 등과 서열이 유사한 유전자이다.

그러나 GIG44 유전자는 기 보고된 인슐린성장인자 기능과는 달리 금번 연구 결과 피부암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 113 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 10의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 12 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

또 GIG44 염기서열은 113 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 10과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 12 kDa이다.

얻어진 GIG44 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG44 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2j는 GIG44 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2j에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG44 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2j에서 보듯이, 발현된 GIG44 단백질의 크기는 약 12 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

11. PIG 2

본 발명의 세포막위치 유전자인 PIG2 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY232290 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_013372 호인 Homo sapiens gremlin 1 (GREM1), transcript variant 1, mRNA 유전자와 서열이 유사하는 유전자로 즉 제 NM_013372 호인 Homo sapiens gremlin 1 (GREM1) 유전자는 BMP (bone morphogenic protein) antagonist family 의 member를 coding 하는 유전자로 알려져있다 Hsu,D.R.,et al., Mol. Cell, 1(5), 673-683 (1998)). 그러나 기 보고된 BMP (bone morphogenic protein) antagonist의 기능과는 달리 금번 연구 결과 폐암을 포함한 인간 종양조직에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 184 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 11의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 21 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

또 PIG2 염기서열은 184 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 11과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 21 kDa이다.

얻어진 PIG2 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG2 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2k는 PIG2 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2k에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG2 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2k에서 보듯이, 발현된 PIG2 단백질의 크기는 약 21 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

12. GIG 47

본 발명의 세포막위치 유전자인 GIG47 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY762102 호로 등록되어 있으며,

이 등록된 AY762102 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 제ACCESSION NM_013349호인 호모사피엔스 뉴런유도 신경 영양성 인자(Homo sapiens neuron derived neurotrophic factor, NENF), mRNA 유전자, 제ACCESSION AF173937호인 호모사피엔스 기능불명 분비단백질(Homo sapiens secreted protein of unknown function, SPUF), mRNA, 컴피트(compete) cds 유전자, 제ACCESSION AK223135호인 호모사피엔스 SCIRPIO-관련 단백질 변이체 mRNA(Homo sapiens mRNA for SCIRP10-related protein variant)(클론: KAT11637) 유전자들과 서열의 유사성이 있다. 그러나, 이들 유전자들의 기능 또는 암 등의 질병과의 관련성에 대해 아직 밝혀지거나 보고된 바 없다. 이에, 본 발명자들은 본 발명에 따른 원암 유전자 즉, AY762102 유전자는 폐암을 비롯한 인간의 각종 암의 발생과정에 깊이 관련되어 있는 것으로 확인하였다. 달리 금번 연구 결과 폐암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 원암 유전자로부터 발현되는 단백질은 172개의 아미노산으로 이루어져 있고 서열번호 12로 표시되는 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 19 kDa이다.

또 GIG47 염기서열은 172 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 12와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 19 kDa이다.

얻어진 GIG47 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG47 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2l은 GIG47 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2l에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 GIG47 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2l에서 보듯이, 발현된 GIG47 단백질의 크기는 약 19 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

13. MIG 20

본 발명의 세포막위치 유전자인 MIG20 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY871271 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 BX537651호인 Homo sapiens mRNA; cDNA DKFZp686C0390 유전자 등과 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 간암을 포함한 인간 종양에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 64 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 13의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 7 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

또 MIG20 염기서열은 64 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 13과 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 7 kDa이다.

얻어진 MIG20 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 MIG20 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2m은 MIG20 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2m에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 각각의 MIG20 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2m에서 보듯이, 발현된 MIG20 단백질의 크기는 약 7 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

14. PIG 28

본 발명의 세포막위치 유전자인 PIG28 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY453398 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_001153호인 Homo sapiens annexin A4 (ANXA4) 유전자와 제 BC000182호인 Homo sapiens annexin A4 유전자와 유전자 염기서열이 유사함이 확인되었다. 그러나 금번 연구 결과 대장암을 포함한 인간 종양에서 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 321 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 14의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 36 kDa이다.

또 PIG28 염기서열은 321 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 14와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 36 kDa이다.

얻어진 PIG28 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG28 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2n은 PIG28 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2n에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG28 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2n에서 보듯이, 발현된 PIG28 단백질의 크기는 약 36 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

15. PIG 34

본 발명의 세포막위치 유전자인 PIG34 유전자의 전체 염기서열은 미국국립보건원의 진뱅크(NIH GenBank) 데이터베이스에 등록번호 제 AY544128 호로 등록되어 있으며, 이 등록된 유전자는 데이터베이스에 등록된 제 NM_138938 호인 Homo sapiens regenerating islet-derived 3 alpha (REG3A), transcript variant 2, mRNA 유전자와 서열이 유사한 유전자로 즉 제 NM_138938 호인 Homo sapiens regenerating islet-derived 3 alpha (REG3A) 유전자는 세포의 증식과 분화에 관여하는 pancreatic secretory protein 이며 발현이 증가하는 경우는 췌장의 염증이거나 간암형성시에 관찰된다고 보고되고 있다 ((Orelle,B., et al., J. Clin. Invest., 90 (6), 2284-2291 (1992)).그러나 기 보고된 세포의 증식과 분화능과는 달리 금번 연구 결과 간암을 포함한 인간 종양조직에서는 오히려 발현이 세포막에 국한되어 있는 것을 확인하게 되었다.

본 발명의 유전자로부터 발현되는 단백질은 175 개 아미노산 잔기로 이루어져 있고 서열번호: 15의 아미노산 서열을 가지며 크기는 약 19 kDa이다. 그러나 상기 단백질의 아미노산 서열에서도 역시 단백질의 기능에 영향을 미치지 않는 범위내에서 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 이루어질 수 있으며, 목적에 따라 단백질의 일부만이 사용될 수도 있다. 그러한 변형된 아미노산 서열 역시 본 발명의 범위에 포함된다. 따라서 본 발명은 상기 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그의 단편을 역시 포함하며, 실질적으로 동일한 폴리펩티드란80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것들을 의미한다.

또 PIG34 염기서열은 175 개 아미노산 잔기를 코딩하는 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 이로부터 유추된 아미노산 서열은 서열번호: 15와 같다. 또한 유추된 단백질의 분자량은 약 19 kDa이다.

얻어진 PIG34 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 PIG34 유전자를 발현시켰다. 이 배양액으로부터 문헌(Sambrook, J. et al.,Molecular Cloning: A Laboratory mannual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory (1989))의 방법에 따라 단백질 시료를 얻어 SDS-PAGE를 실시하였다.

도 2o는 PIG34 각각의 유전자 산물의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여주는 사진이다. 도 2o에서 제1열은 IPTG에 의한 유도 전의 단백질 시료이고, 제2열은 IPTG에 의해 PIG34 유전자의 발현을 유도한 후의 단백질 시료이다.

도 2o에서 보듯이, 발현된 PIG34 단백질의 크기는 약 19 kDa으로서 이는 염기서열로부터 유추된 것과 일치한다.

본 발명을 통해서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 세포막위치 암관련 항원을 타깃으로 하는 항체는 암진단제 및 암치료제에 효과적으로 이용될 수 있는 효과가 있다.

도 1a는 GIG2 항체를 이용한 폐암조직의 면역조직학적 염색사진:
폐암 세포막 (lung cancer cell membrane)과 일부 세포질 (lung cancer cytoplasm)에 weakly positive 하게 염색이 됨(X200).
도 1b는 GIG-11 항체를 이용한 유방암조직의 면역조직학적 염색사진:
유방암 세포막 (breast cancer cell membrane)과 일부 세포질 (breast cancer cytoplasm)에 weakly positive 하게 염색이 됨(X200).
도 1c는 GIG40 항체를 이용한 간암조직의 면역조직학적 염색사진:
간암 세포막 (liver cancer cell membrane)과 일부 세포질 (liver cancer cytoplasm)에 weakly positive 하게 염색이 됨(X200)
도 1d는 HCC 9 항체를 이용한 자궁경부암조직의 면역조직학적 염색사진:
자궁경부암 세포막 (cervical cancer cell membrane)에 positive 하게 염색이 됨(X400)
도 1e는 PIG17 항체를 이용한 폐암조직의 면역조직학적 염색사진:
폐암 세포막 (lung cancer cell membrane)과 일부 세포질 (lung cancer cytoplasm)에 weakly positive 하게 염색이 됨(X200)
도 1f는 PIG-26 항체를 이용한 유방암조직의 면역조직학적 염색사진:
유방암 세포막 (breast cancer cell membrane)과 일부 세포질 (breast cancer cytoplasm)에 weakly positive 하게 염색이 됨(X200)
도 1g는 PIG 61 항체를 이용한 간암조직의 면역조직학적 염색사진:
간암 세포막 (liver cancer cell membrane)에 positive 하게 염색이 됨(X400)
도 1h는 TRG 7 항체를 이용한 자궁경부암조직의 면역조직학적 염색사진:
자궁경부암 세포막 (cervical cancer cell membrane)과 일부 세포질 (cervical cancer cytoplasm)에 weakly positive 하게 염색이 됨(X200)
도 1i는 TRG10 항체를 이용한 자궁경부암조직의 조직학적 염색사진: 자궁경부암의 세포막 (uterine cervical cancer cell membrane)과 일부 세포질 (cervical cancer cytoplasm)에 positive 하게 염색이 됨 (X400).
도 1j는 GIG44 항체를 이용한 피부암 (악성흑색종)조직의 면역조직학적 염색사진:
피부암 세포막 (skin cancer cell membrane)과 일부 세포질 (skin cancer cytoplasm)에 염색이 됨(X200)
도 1k는 PIG2 항체를 이용한 폐암조직의 면역조직학적 염색사진:
폐암 세포막 (lung cancer cell membrane)과 일부 세포질 (lung cancer cytoplasm)에 positive 하게 염색이 됨(X400)
도 1l은 GIG47 항체를 이용한 폐암조직의 면역조직학적 염색사진:
폐암 세포막 (lung cancer cell membrane)에 염색이 됨(X400)
도 1m은 MIG20 항체를 이용한 간암조직의 면역조직학적 염색사진:간암 세포막 (liver cancer cell membrane)에 weakly positive 하게 염색이 됨(X200)
도 1n은 PIG28 항체를 이용한 대장암조직의 면역조직학적 염색사진:
대장암 세포막 (colon cancer cell membrane)과 일부 세포질 (colon cancer cytoplasm)에 positive 하게 염색이 됨 (X400)
도 1o는 PIG34 항체를 이용한 간암조직의 면역조직학적 염색사진:
간암 세포막 (liver cancer cell membrane)과 일부 세포질 (liver cancer cytoplasm)에 weakly positive 하게 염색이 됨(X200)
도 2a는 GIG2, 2b는 GIG 11, 2c는 GIG40, 2d는 HCC9, 2e는 PIG 17, 2f는 PIG 26, 2g는 PIG 61, 2h는 TRG 7, 2i는 TRG 10, 2j는 GIG 44, 2k는 PIG2, 도 2l은 GIG47, 2m은 MIG20, 2n은 PIG 28, 2o는 PIG 34 다클론항체를 생산하기 위하여 각각의 암관련 유전자를 대장균에 형질도입시킨 후 IPTG 유도 이전 및 이후에 발현되는 단백질의 크기를 나트륨 도데실 설페이트(SDS)-폴리아크릴아마이드 겔(PAGE)에서 전기영동한 결과이다.
도 3a는 GIG2 3b는 GIG 11, 3c는 GIG40, 3d는 HCC9 단백질, 3f는 PIG 26 3g는 PIG 61,3h는 TRG 7, 3i는 TRG 10,3j는 GIG 44,도 3k는 PIG2,도 3l은 GIG47, 3m은 MIG20, 3n은 PIG 28, 3o는 PIG 34의 세포막 위치 사진이다.
도 4a는 GIG2, 4b는 GIG 11, 4c는 GIG40, 4d는 HCC9, 4e는 PIG 17, 4f는 PIG 26, 4g는 PIG 61, 4h는 TRG 7, 4i는 TRG 10,4j는 GIG 44, 도 4k는 PIG2,도 4l은 GIG47, 4m은 MIG20, 4n은 PIG 28, 4o는 PIG 34 단백질의 세포막 위치 정보를 나타낸다.

실시예1 : 단백질의 세포막위치, 세포밖 및 세포내위치 결정.

1. GIG 2

초기에 컴퓨터를 이용하여 막단백질을 예측하기 위해 단백질 서열의 소수성에 근거한 hydropathy를 분석하여 수행했다. 지질이중막 사이에 삽입되는 단백질 서열은 소수성을 띤 약 20 아미노산 길이의 alpha-helix를 이루는 성질이 있다는 사실에 근거한 것이다. 하지만 이 방법은 구상단백질의 내부로 들어가는 alpha-helix를 TM-helix로 잘못 예측하는 경향이 있다. 이를 보완하기 위해 1998년 hidden-markov model을 적용하여 helix와helix사이 loop의 교차패턴을 분석하는 기법 (예:TMHMM) 이 개발되어 정확도가 획기적으로 높아졌으나, N-말단의 signal peptide를 TM-helix로 잘 못 예측하는 단점이 있다. 최근 TMHMM2.0의 대를 잇는 Phobius가 개발되어 이러한 단점이 상당히 개선되었다. http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/

http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/TMHMM2.0.guide.html#output

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 GIG2 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 36-59번 아미노산, 112-194번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices) 은 13-35번 아미노산, 60-82번 아미노산, 89-111번 아미노산, 195-217번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 1-12 번 아미노산, 83-88 번 아미노산 , 및 218-228번 아미노산이 위치하는 것으로 예측되었다(도 3a, 4a).

2. GIG 11

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 GIG 11 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-24번 아미노산, 131-255번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices) 은 25-44번 아미노산, 108-130번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 45-107 번 아미노산이 위치하는것으로 예측되었다(도 3b, 4b).

3. GIG 40

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 GIG40 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-645번 아미노산, 796-1210번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices) 은 646-668번 아미노산, 773-795번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 669-772 번 아미노산이 위치하는것으로 예측되었다. (도 3c, 4c).

4. HCC9

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 HCC9 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 41-54번 아미노산, 118-126번 아미노산이 위치하고 있으며,세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices) 은 21-40번 아미노산, 55-74번 아미노산, 95-117번 아미노산, 127-149번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 1-20 번 아미노산, 75-94 번 아미노산, 및 150-157번 아미노산이 위치하는 것으로

예측되었다.

5. PIG 17

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 PIG17 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 111-129번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices) 은 88-110번 아미노산, 130-149번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 1-87 번 아미노산, 150-183 번 아미노산 이 위치하는것으로 예측되었다.

6. PIG 26

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 PIG-26 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-19번 아미노산, 126-296번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices) 은 20-39번 아미노산, 103-125번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 40-102 번 아미노산이 위치하는것으로 예측되었다.

7. PIG 61

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 PIG61 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-645번 아미노산, 796-1210번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices) 은 646-668번 아미노산, 773-795번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 669-772 번 아미노산이 위치하는것으로 예측되었다.

8. TRG7

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 TRG7 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-175번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices) 과 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 아미노산이 위치하지 않는것으로 예측되었다.

9. TRG 10

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 TRG10 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-56번 아미노산이 위치하고 있으며, 세포막단백질 (세포막관통 단백질; transmembrane protein, transmembrane helices)과 세포막 안쪽 (세포내단백질, 세포질쪽 단백질; INNER MEMBRANE PROTEIN) 에는 아미노산이 위치하지 않는것으로 예측되었다.

10. GIG44

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 GIG44 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에

1-113번 아미노산이 위치하는 것으로 예측되었다.

11. PIG 2

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 PIG2 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에

1-184번 아미노산이 위치하는것으로 예측되었다.

12. GIG 47

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 GIG47 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막 바깥쪽(바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-172번 아미노산이 위치한다고 예측하고 있다.

13. MIG 20

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 MIG20 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-64번 아미노산이 위치하는 것으로 예측되었다.

14. PIG 28

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 PIG28 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에 1-321번 아미노산이 위치하는 것으로 예측되었다.

15. PIG 34

본 발명은 상기 프로그램들을 이용하여 PIG34 유전자를 분석한 결과 TMHMM program 에서는 세포막의 바깥쪽 (바깥쪽 단백질, 세포외단백질; outermembrane protein)에

1-175번 아미노산이 위치하는것으로 예측되었다.

실시예 2:정상 및 암 세포 막항원 진단용 다클론 및 단 클론 항체제작

2.1 다클론 ( 폴리크로날 ) 항체의 생산

1) GIG 2

얻어진 GIG2 전장 cDNA 클론을 진핵생물 발현용 벡터 pcDNA3.1 (Invitrogen, USA)에 삽입한 후 대장균 DH5α에 형질전환시켰으며, 형질전환된 대장균을 LB 브로쓰에서 배양한 후 0.2 M의 엘-아라비노즈 (L-arabinose, Sigma, USA)를 배양액에 첨가하여 37℃에서 3 시간 동안 반응시킴으로써 GIG2 유전자를 발현시켰다. 형질감염된 대장균 DH5α 균주로부터 분리된 25kDa의 융합단백질을 His-Hind 키트(Novagen)으로 정제하였다. 정제된 펩티드를 면역블롯팅한 결과 해당 단백질이 다량 함유되어 있음을 확인하였다(도 2).

이어서, 2 마리의 6주령 스프라그-돌리 래트(체중 약 150g)에 상기에서 얻은 펩티드 1㎎을 1주일에 1회씩 3회 복강내 투여하였다. 이와 같이 면역화된 래트로부터 혈액 시료를 취하여 원심분리시켜 폴리클로날 혈청을 얻었다. 상기 폴리클로날 항체의 항 GIG2 활성은 효소면역측정법(ELISA)으로 확인하였다(1:10,000)

2) GIG 11

상기 1)의 과정과 동일하고, 해당 유전자만 다르게 수행하였다.

3) GIG 40

4) HCC 9

5) PIG 17

6) PIG 26

7) PIG 61

8) TRG 7

9) TRG 10

10) GIG 44

11) PIG 2

12) GIG 47

13) MIG 20

14) PIG 28

15) PIG 34

2.2 단클론 ( 모노크로날 ) 항체의 생산

암세포막 진단을 위한 종양표지물질의 개발은 단클론 항체를 생산하여 이루어질 수 있으며 그 방법은 Kohler와 Milstein의 체세포를 융합하여 항체를 생산하는 융합세포주 방식을 채택하였다.

(A) 면역원

GIG 2

면역원은 발굴된 폐암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 1의 36-59번 아미노산, 112-194번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

GIG 11

면역원은 발굴된 유방암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 2의 1-24번 아미노산, 131-255번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

GIG 40

면역원은 발굴된 간암 세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 3의 1-645번 아미노산, 796-1210번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

HCC 9

면역원은 발굴된 자궁경부암 세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 4의 41-54번 아미노산, 118-126번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

PIG 17

면역원은 발굴된 폐암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 5의 111-129번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

PIG 26

면역원은 발굴된 유방암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 6의 1-19번 아미노산, 126-296번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

PIG 61

면역원은 발굴된 간암 세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 7의 1-645번 아미노산, 796-1210번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

TRG 7

면역원은 발굴된 자궁경부암 세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 8의 1-175번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

TRG 10

면역원은 발굴된 자궁경부암 세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 9의 1-56번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

GIG 44

면역원은 발굴된 피부암 세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 10의 1-113번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

PIG 2

면역원은 발굴된 폐암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 11의 1-184번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

GIG 47

면역원은 발굴된 폐암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 12의 1-172번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

MIG 20

면역원은 발굴된 간암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 13의 1-64번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

PIG 28

면역원은 발굴된 대장암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 14의 1-321번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

PIG 34

면역원은 발굴된 간암세포막 특이 유전자가 발현하는 서열번호 15의 1-175번 아미노산 잔기의 펩티드를 이용하였다.

(B) 면역조치

펩티드를 생후 5-6 주된 Balb/c 마우스의 복강내로 2주 간격으로 2회 면역시키며, 항체 생성의 유무를 파악하고자 마지막 boosting 직전에 마우스 혈청중의 항체 역가를 효소면역 측정법(enzyme linked immunosorbent assay: ELISA)으로 측정하여 음성 대조군보다 5배 이상의 역가를 나타내는 경우 boosting하고 3일후 융합(fusion) 실험을 실시하였다.

(C) 세포 융합실험

세포 융합실험에 사용한 마우스 형질 골수종세포는 P3-x63-Ag8 세포주이며, 최종면역 후 3일이 경과된 Balb/c 마우스로 부터 비장을 적출하여 세척한 다음 비장 세포액을 Tris-NH₄Cl 용액(Tris 20.6g/1, NH₄Cl 8.3 g/1)에 노출시켜 적혈구를 용해시킨 후, 배양액으로 3회 원침세척 후 세포수를 약 1 x10⁸/ml로 조정함. 또한, 마우스의 안와정맥총으로부터 1.5 cc의 혈액을 채취하여 추후 검색 실험시에 양성 대조군으로 사용. 세포 융합방법은 50%(W/V) polyethylene glycol 1500(Borhinger Mannheim Co., Germany)을 이용하여 P3-x63-Ag8 형질 골수종 세포와 비장세포를 1:10의 비율로 혼합하여 융합시킨 후, 융합된 세포만을 선택하기 위하여 세포를 15% 우태아 혈청과 HAT(50 μM hypoxanthine, 0.4 μM aminopterin, 16 μM thymidine) 용액이 함유된 Waymouth 배양액으로 부유시킨 다음, 96 well plate (Corning Co., USA)에 well 당 100μL씩 분주한 후 37℃, 5% CO₂, 포화습도하에서 배양하였다.

(D) 검색 및 클로닝

융합 후 10일째부터 세포가 증식하는 well의 배양 상청액을 채취하여 폐암 세포막에 대한 특이항체의 생성여부를 효소면역 측정법으로 검색하며, 골수종 세포의 배양액을 음성대조군으로 하여 이보다 5배 이상의 역가를 나타내는 well의 세포를 선택하여 24 well culture plate 및 25 ml culture flask(Corning Co., USA)로 옮겨 증식시킴. 이 과정 중에서 3회 이상의 검색실험을 실시하여 동일한 항체 역가를 유지하는 well의 세포는 클로닝을 시작하며, 일부는 -130℃에 저장. 또한, 항체를 생산하는 융합세포는 3회에 걸친 클로닝을 통해 지속적으로 높은 항체 역가를 유지하면서 세포의 증식이 활발한 융합 세포만을 선택하여 이를 증식 배양한 다음 단클론 항체로 이용함. 클로닝은 무한대 희석법(limiting dilution method)을 이용하며, 클로닝하려는 융합세포의 수를 산정하여 4.6 ml의 배양액 당 230 개의 융합세포가 포함되도록 조정한 후 96 well plate의 36개의 well에 0.1 ml(5 cell/well)씩 분주하고, 나머지 1 ml는 4 ml의 배양액과 혼합하여 나머지 36개의 well에 0.1 ml(1 cell/well)씩 분주함. 마지막으로 남은 1.4 ml의 세포부유액에는 동량의 배양액을 혼합하여 24개의 well에 0.1 ml(0.5 cell/well)씩 분주함. 14일후 클론이 충분히 자라면 배양 상청액으로 부터 다시 항체 생성여부를 확인한 후 이중 6개의 양성 클론을 24 well plate에 옮겨 배양한 후 1주일 후에 항체 생성여부를 다시 최종 확인한 후 양성 클론만을 25 ml culture flask로 옮겨 배양하여 대량생산에 들어가며 일부는 -130℃ liquid nitrogen tank 에 저장함.

(E) 효소면역 측정법

폐암, 유방암, 간암, 자궁경부암, 피부암 세포막에 대한 특이 항체 생성여부를 조사하기 위한 검색 방법은 효소면역 측정법을 이용하였다.

실시예 3: 면역조직화학 분석 및 염색 해석

선택된 항체를 이용하여 폐암, 유방암, 간암, 자궁경부암, 피부암, 대장암 조직들을 각각 면역 조직 화학적으로 관찰하기 위하여 avidin-biotin-peroxidase complex (ABC)법을 이용하였고 면역 조직 화학염색을 위한 신선 종양조직들은 수술적 처치시에 채취하였으며 조직들은 liquid nitrogen에 급속 냉동시킨후 -70℃에 보관하였다.

-130℃에 저장한 신선동결 조직절편을 5 μm 두께로 절단하여 -20℃ acetone에 고정시킨후 0.5% methanolic hydrogen peroxide 용액에 30분간 방치하여 endogenous peroxidase activity를 제거시킨 후 tris buffered saline(TBS)으로 세척하였고, 비특이적 면역반응을 막기 위하여 정상 마혈청(Vector Lab., USA)에 조직절편을 30분간 노출시킨후 1차 항체로는 희석된 여러 농도의 GIG2, GIG 11 항체를 가하여 24시간 동안 4℃에 방치하였으며, 이후 TBS로 세척시킨후 이차항체로 biotinylated horse antimouse IgG(Vector Lab., USA)용액을 첨가한 후 1시간동안 방치하였다.

다시 TBS 용액으로 세척한 후 3차 항체로 avidin-biotin-peroxidase complex(Vector Lab., USA)를 가하여 40분간 방치한 후 충분히 세척하였으며 과산화수소 및 3, 3 diaminobenzidine tetrahydrochloride가 함유된 기질용액에 노출시켜 현미경으로 발색 유무를 관찰시켰다. 이후 폐암, 유방암, 간암 조직 표본에서 GIG2, GIG11, GIG 40, HCC9, PIG17, PIG 26, PIG61, TRG7, TRG10, GIG44,PIG 2, GIG 47, MIG 20.PIG 28, 또는 PIG 34 진단항체에 반응하는 세포의 출현여부와 분포상태를 파악해내기 위하여 면역염색이 끝난 절편들은 hematoxylin 으로 counter-staining 시킨후 광학 현미경으로 관찰하였다.

병리학 전문의가 가장 강하게 염색된 세포막 영역에서 적어도 500 세포를 계수하였다.

포지티브 염색은 세포막 염색에 의하여 정의되었다. 가장 많이 인정하고 있는 컷오프 값에 따라, 세포들의 10%포지티브 염색을 세포막염색에 대한 포지티브 결과로 채택하였다. GIG2, GIG 11, GIG 40, HCC9, PIG17, PIG 26, PIG61, TRG7, TRG10, GIG44, PIG 2,GIG 47, MIG 20.PIG 28, 또는 PIG 34 면역화학 염색 결과들을 염색 기준에 따라 정의하였다. GIG2, GIG 11, GIG 40, HCC9, PIG 17, PIG26, PIG61, TRG7, TRG10, GIG44,PIG 2,GIG 47, MIG 20.PIG 28,또는 PIG 34에 대한 포지티브 염색은 막(membrane) 염색에 의하여 정의되었다. 원형질 염색은 포지티브로 간주하지 않았다.

면역반응성이 없거나(스코어 0) 또는 불완전하거나 희미한 막 염색(스코어 1+)을 보이는 세포들을 네거티브로 간주하였다. GIG2, GIG 11, GIG 40, HCC9, PIG 17,PIG 26, PIG61, TRG7, TRG10, GIG44,PIG 2,GIG 47, MIG 20,PIG 28, 또는 PIG 34는 전체적으로 약한 염색 내지 중간 정도의 막 염색(약한 포지티브;스코어 2+) 또는 전체적으로 강한 막 염색(강한 양성; 스코어 3+)이 10% 이상의 세포들에서 관찰될 경우에 포지티브로 정의하였다.

<110> KIM, HYUN KEE <120> COMPOSITION AND METHOD FOR DIAGNOSIS AND TREATMENT OF HUMAN CANCER <160> 15 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 228 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Val Lys Gly Gly Thr Lys Cys Ile Lys Tyr Leu Leu Phe Gly 1 5 10 15 Phe Asn Phe Ile Phe Trp Leu Ala Gly Ile Ala Val Leu Ala Ile Gly 20 25 30 Leu Trp Leu Arg Phe Asp Ser Gln Thr Lys Ser Ile Phe Glu Gln Glu 35 40 45 Thr Asn Asn Asn Asn Ser Ser Phe Tyr Thr Gly Val Tyr Ile Leu Ile 50 55 60 Gly Ala Gly Ala Leu Met Met Leu Val Gly Phe Leu Gly Cys Cys Gly 65 70 75 80 Ala Val Gln Glu Ser Gln Cys Met Leu Gly Leu Phe Phe Gly Phe Leu 85 90 95 Leu Val Ile Phe Ala Ile Glu Ile Ala Ala Ala Ile Trp Gly Tyr Ser 100 105 110 His Lys Asp Glu Val Ile Lys Glu Val Gln Glu Phe Tyr Lys Asp Thr 115 120 125 Tyr Asn Lys Leu Lys Thr Lys Asp Glu Pro Gln Arg Glu Thr Leu Lys 130 135 140 Ala Ile His Tyr Ala Leu Asn Cys Cys Gly Leu Ala Gly Gly Val Glu 145 150 155 160 Gln Phe Ile Ser Asp Ile Cys Pro Lys Lys Asp Val Leu Glu Thr Phe 165 170 175 Thr Val Lys Ser Cys Pro Asp Ala Ile Lys Glu Val Phe Asp Asn Lys 180 185 190 Phe His Ile Ile Gly Ala Val Gly Ile Gly Ile Ala Val Val Met Ile 195 200 205 Phe Gly Met Ile Phe Ser Met Ile Leu Cys Cys Ala Ile Arg Arg Asn 210 215 220 Arg Glu Met Val 225 <210> 2 <211> 250 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ala Val Leu Ala Pro Leu Ile Ala Leu Val Tyr Ser Val Pro Arg 1 5 10 15 Leu Ser Arg Trp Leu Ala Gln Pro Tyr Tyr Leu Leu Ser Ala Leu Leu 20 25 30 Ser Ala Ala Phe Leu Leu Val Arg Lys Leu Pro Pro Leu Cys His Gly 35 40 45 Leu Pro Thr Gln Arg Glu Asp Gly Asn Pro Cys Asp Phe Asp Trp Arg 50 55 60 Glu Val Glu Ile Leu Met Phe Leu Ser Ala Ile Val Met Met Lys Asn 65 70 75 80 Arg Arg Ser Ile Thr Val Glu Gln His Ile Gly Asn Ile Phe Met Phe 85 90 95 Ser Lys Val Ala Asn Thr Ile Leu Phe Phe Arg Leu Asp Ile Arg Met 100 105 110 Gly Leu Leu Tyr Ile Thr Leu Cys Ile Val Phe Leu Met Thr Cys Lys 115 120 125 Pro Pro Leu Tyr Met Gly Pro Glu Tyr Ile Lys Tyr Phe Asn Asp Lys 130 135 140 Thr Ile Asp Glu Glu Leu Glu Arg Asp Lys Arg Val Thr Trp Ile Val 145 150 155 160 Glu Phe Phe Ala Asn Trp Ser Asn Asp Cys Gln Ser Phe Ala Pro Ile 165 170 175 Tyr Ala Asp Leu Ser Leu Lys Tyr Asn Cys Thr Gly Leu Asn Phe Gly 180 185 190 Lys Val Asp Val Gly Arg Tyr Thr Asp Val Ser Thr Arg Tyr Lys Val 195 200 205 Ser Thr Ser Pro Leu Thr Lys Gln Leu Pro Thr Leu Ile Leu Phe Gln 210 215 220 Gly Gly Lys Arg Gln Cys Gly Gly His Arg Leu Thr Arg Lys Asp Gly 225 230 235 240 Leu Ser His Gly Pro Ser Leu Arg Arg Met 245 250 <210> 3 <211> 1210 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala 1 5 10 15 Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln 20 25 30 Cys Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe 35 40 45 Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn 50 55 60 Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys 65 70 75 80 Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val 85 90 95 Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr 100 105 110 Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn 115 120 125 Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu 130 135 140 His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu 145 150 155 160 Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met 165 170 175 Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro 180 185 190 Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln 195 200 205 Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg 210 215 220 Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys 225 230 235 240 Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp 245 250 255 Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro 260 265 270 Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly 275 280 285 Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His 290 295 300 Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu 305 310 315 320 Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val 325 330 335 Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn 340 345 350 Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp 355 360 365 Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr 370 375 380 Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu 385 390 395 400 Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp 405 410 415 Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln 420 425 430 His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu 435 440 445 Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser 450 455 460 Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu 465 470 475 480 Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu 485 490 495 Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro 500 505 510 Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn 515 520 525 Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly 530 535 540 Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro 545 550 555 560 Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro 565 570 575 Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val 580 585 590 Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp 595 600 605 Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys 610 615 620 Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly 625 630 635 640 Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu 645 650 655 Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His 660 665 670 Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu 675 680 685 Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu 690 695 700 Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser 705 710 715 720 Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu 725 730 735 Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser 740 745 750 Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser 755 760 765 Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser 770 775 780 Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp 785 790 795 800 Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn 805 810 815 Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg 820 825 830 Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro 835 840 845 Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala 850 855 860 Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp 865 870 875 880 Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp 885 890 895 Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser 900 905 910 Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu 915 920 925 Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr 930 935 940 Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys 945 950 955 960 Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln 965 970 975 Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro 980 985 990 Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp 995 1000 1005 Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe 1010 1015 1020 Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Ala 1025 1030 1035 1040 Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln 1045 1050 1055 Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Tyr Ser Ser Asp 1060 1065 1070 Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro 1075 1080 1085 Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser 1090 1095 1100 Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser 1105 1110 1115 1120 Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro 1125 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Lys Asp Ile Val Tyr 115 120 125 Pro Gly Ile Ala Val Phe Phe Gln Asn Ala Phe Ile Phe Phe Gly Gly 130 135 140 Leu Val Phe Lys Phe Gly Arg Thr Glu Asp Leu Trp Gln 145 150 155 <210> 5 <211> 183 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Thr Ala Gln Gly Gly Leu Val Ala Asn Arg Gly Arg Arg Phe Lys 1 5 10 15 Trp Ala Ile Glu Leu Ser Gly Pro Gly Gly Gly Ser Arg Gly Arg Ser 20 25 30 Asp Arg Gly Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu Tyr Pro Val Gly His Leu 35 40 45 Asp Lys Gln Val Pro Asp Thr Ser Val Gln Glu Thr Asp Arg Ile Leu 50 55 60 Val Glu Lys Arg Cys Trp Asp Ile Ala Leu Gly Pro Leu Lys Gln Ile 65 70 75 80 Pro Met Asn Leu Phe Ile Met Tyr Met Ala Gly Asn Thr Ile Ser Ile 85 90 95 Phe Pro Thr Met Met Val Cys Met Met Ala Trp Arg Pro Ile Gln Ala 100 105 110 Leu Met Ala Ile Ser Ala Thr Phe Lys Met Leu Glu Ser Ser Ser Gln 115 120 125 Arg Phe Leu Gln Gly Leu Val Tyr Leu Ile Gly Asn Leu Met Gly Leu 130 135 140 Ala Leu Ala Val Tyr Lys Cys Gln Ser Met Gly Leu Leu Pro Thr His 145 150 155 160 Ala Ser Asp Trp Leu Ala 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Cys Thr Gly Leu Asn Phe Gly 180 185 190 Lys Val Asp Val Gly Arg Tyr Thr Asp Val Ser Thr Arg Tyr Lys Val 195 200 205 Ser Thr Ser Pro Leu Thr Lys Gln Leu Pro Thr Leu Ile Leu Phe Gln 210 215 220 Gly Gly Lys Glu Ala Met Arg Arg Pro Gln Ile Asp Lys Lys Gly Arg 225 230 235 240 Ala Val Ser Trp Thr Phe Ser Glu Glu Asn Val Ile Arg Glu Phe Asn 245 250 255 Leu Asn Glu Leu Tyr Gln Arg Ala Lys Lys Leu Ser Lys Ala Gly Asp 260 265 270 Asn Ile Pro Glu Glu Gln Pro Val Ala Ser Thr Pro Thr Thr Val Ser 275 280 285 Asp Gly Glu Asn Lys Lys Asp Lys 290 295 <210> 7 <211> 1210 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala 1 5 10 15 Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln 20 25 30 Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe 35 40 45 Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn 50 55 60 Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys 65 70 75 80 Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val 85 90 95 Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr 100 105 110 Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn 115 120 125 Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu 130 135 140 His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu 145 150 155 160 Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met 165 170 175 Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro 180 185 190 Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln 195 200 205 Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg 210 215 220 Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys 225 230 235 240 Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp 245 250 255 Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro 260 265 270 Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly 275 280 285 Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His 290 295 300 Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu 305 310 315 320 Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val 325 330 335 Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn 340 345 350 Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp 355 360 365 Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr 370 375 380 Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu 385 390 395 400 Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp 405 410 415 Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln 420 425 430 His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu 435 440 445 Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser 450 455 460 Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu 465 470 475 480 Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu 485 490 495 Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro 500 505 510 Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn 515 520 525 Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly 530 535 540 Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro 545 550 555 560 Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro 565 570 575 Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val 580 585 590 Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp 595 600 605 Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys 610 615 620 Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly 625 630 635 640 Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu 645 650 655 Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His 660 665 670 Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu 675 680 685 Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu 690 695 700 Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser 705 710 715 720 Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu 725 730 735 Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser 740 745 750 Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser 755 760 765 Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser 770 775 780 Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp 785 790 795 800 Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn 805 810 815 Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg 820 825 830 Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro 835 840 845 Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala 850 855 860 Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp 865 870 875 880 Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp 885 890 895 Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser 900 905 910 Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu 915 920 925 Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr 930 935 940 Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys 945 950 955 960 Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln 965 970 975 Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro 980 985 990 Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp 995 1000 1005 Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe 1010 1015 1020 Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Ala 1025 1030 1035 1040 Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln 1045 1050 1055 Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Tyr Ser Ser Asp 1060 1065 1070 Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro 1075 1080 1085 Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Pro 1090 1095 1100 Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser 1105 1110 1115 1120 Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro 1125 1130 1135 Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp 1140 1145 1150 Ser Pro Ala His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp 1155 1160 1165 Asn Pro Asp Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn 1170 1175 1180 Gly Ile Phe Lys Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val 1185 1190 1195 1200 Ala Pro Gln Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala 1205 1210 <210> 8 <211> 175 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Gly Arg Gln Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Cys Ala Thr Gly Ala 1 5 10 15 Gln Gly Leu Tyr Phe His Ile Gly Glu Thr Glu Lys Arg Cys Phe Ile 20 25 30 Glu Glu Ile Pro Asp Glu Thr Met Val Ile Gly Asn Tyr Arg Thr Gln 35 40 45 Met Trp Asp Lys Gln Lys Glu Val Phe Leu Pro Ser Thr Pro Gly Leu 50 55 60 Gly Met His Val Glu Val Lys Asp Pro Asp Gly Lys Val Val Leu Ser 65 70 75 80 Arg Gln Tyr Gly Ser Glu Gly Arg Phe Thr Phe Thr Ser His Thr Pro 85 90 95 Gly Asp His Gln Ile Cys Leu His Ser Asn Ser Thr Arg Met Ala Leu 100 105 110 Phe Ala Gly Gly Lys Leu Arg Val His Leu Asp Ile Gln Val Gly Glu 115 120 125 His Ala Asn Asn Tyr Pro Glu Ile Ala Ala Lys Asp Lys Leu Thr Glu 130 135 140 Leu Gln Leu Arg Ala Arg Gln Leu Leu Asp Gln Val Glu Gln Ile Gln 145 150 155 160 Lys Glu Gln Asp Tyr Gln Arg Ala Ser Ala Tyr Leu Leu Val Ile 165 170 175 <210> 9 <211> 56 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Met Val Ala Arg Ala Cys Ser Pro Ser Tyr Ser Gly Gly Arg Asp Arg 1 5 10 15 Arg Ile Val Cys Thr Arg Glu Ala Glu Val Val Ala Val Ser Arg Asp 20 25 30 Arg Ala Asn Ala Leu Gln Pro Gly Leu Gln Ser Glu Thr Pro Ser Gln 35 40 45 Lys Lys Thr Lys Lys Ile Thr Ser 50 55 <210> 10 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Met Thr Pro Gly Val Val His Ala Ser Pro Pro Gln Ser Gln Arg Val 1 5 10 15 Pro Arg Gln Ala Pro Cys Glu Trp Ala Ile Arg Asn Ile Gly Gln Lys 20 25 30 Pro Lys Glu Pro Asn Cys His Asn Cys Gly Thr His Ile Gly Leu Arg 35 40 45 Ser Lys Thr Leu Arg Gly Thr Pro Asn Tyr Leu Pro Ile Arg Gln Asp 50 55 60 Thr His Pro Pro Ser Val Ile Phe Cys Leu Ala Gly Val Gly Val Pro 65 70 75 80 Gly Gly Thr Cys Arg Pro Ala Pro Cys Val Pro Arg Phe Ala Ala Leu 85 90 95 Pro Trp Ala Thr Asn His Pro Gly Pro Gly Cys Leu Ser Asp Leu Arg 100 105 110 Ala <210> 11 <211> 184 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Met Ser Arg Thr Ala Tyr Thr Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Thr Leu Leu Pro Ala Ala Glu Gly Lys Lys Lys Gly Ser Gln Gly Ala 20 25 30 Ile Pro Pro Pro Asp Lys Ala Gln His Asn Asp Ser Glu Gln Thr Gln 35 40 45 Ser Pro Gln Gln Pro Gly Ser Arg Asn Arg Gly Arg Gly Gln Gly Arg 50 55 60 Gly Thr Ala Met Pro Gly Glu Glu Val Leu Glu Ser Ser Gln Glu Ala 65 70 75 80 Leu His Val Thr Glu Arg Lys Tyr Leu Lys Arg Asp Trp Cys Lys Thr 85 90 95 Gln Pro Leu Lys Gln Thr Ile His Glu Glu Gly Cys Asn Ser Arg Thr 100 105 110 Ile Ile Asn Arg Phe Cys Tyr Gly Gln Cys Asn Ser Phe Tyr Ile Pro 115 120 125 Arg His Ile Arg Lys Glu Glu Gly Ser Phe Gln Ser Cys Ser Phe Cys 130 135 140 Lys Pro Lys Lys Phe Thr Thr Met Met Val Thr Leu Asn Cys Pro Glu 145 150 155 160 Leu Gln Pro Pro Thr Lys Lys Lys Arg Val Thr Arg Val Lys Gln Cys 165 170 175 Arg Cys Ile Ser Ile Asp Leu Asp 180 <210> 12 <211> 172 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Met Val Gly Pro Ala Pro Arg Arg Arg Leu Arg Pro Leu Ala Ala Leu 1 5 10 15 Ala Leu Val Leu Ala Leu Ala Pro Gly Leu Pro Thr Ala Arg Ala Gly 20 25 30 Gln Thr Pro Arg Pro Ala Glu Arg Gly Pro Pro Val Arg Leu Phe Thr 35 40 45 Glu Glu Glu Leu Ala Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Glu Asp Gln Pro Ile 50 55 60 Tyr Leu Ala Val Lys Gly Val Val Phe Asp Val Thr Ser Gly Lys Glu 65 70 75 80 Phe Tyr Gly Arg Gly Ala Pro Tyr Asn Ala Leu Thr Gly Lys Asp Ser 85 90 95 Thr Arg Gly Val Ala Lys Met Ser Leu Asp Pro Ala Asp Leu Thr His 100 105 110 Asp Thr Thr Gly Leu Thr Ala Lys Glu Leu Glu Ala Leu Asp Glu Val 115 120 125 Phe Thr Lys Val Tyr Lys Ala Lys Tyr Pro Ile Val Gly Tyr Thr Ala 130 135 140 Arg Arg Ile Leu Asn Glu Asp Gly Ser Pro Asn Leu Asp Phe Lys Pro 145 150 155 160 Glu Asp Gln Pro His Phe Asp Ile Lys Asp Glu Phe 165 170 <210> 13 <211> 64 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Met Ala Thr Lys Ser Leu Ile Ile Ser Arg Ile Tyr Arg Pro Gly Ile 1 5 10 15 Cys His Pro Ser Leu Ser Phe Leu Val Arg Leu Leu Ser Ser Gly Ser 20 25 30 Ala Tyr Gly Arg Ser Leu Met Phe Leu His Leu Gln Glu Asp Ala Asp 35 40 45 Pro Tyr Phe Cys Trp Glu Ile Leu Leu Asn Arg Asn Val Thr Phe Leu 50 55 60 <210> 14 <211> 321 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Met Ala Met Ala Thr Lys Gly Gly Thr Val Lys Ala Ala Ser Gly Phe 1 5 10 15 Asn Ala Met Glu Asp Ala Gln Thr Leu Arg Lys Ala Met Lys Gly Leu 20 25 30 Gly Thr Asp Glu Asp Ala Ile Ile Ser Val Leu Ala Tyr Arg Asn Thr 35 40 45 Ala Gln Arg Gln Glu Ile Arg Thr Ala Tyr Lys Ser Thr Ile Gly Arg 50 55 60 Asp Leu Ile Asp Asp Leu Lys Ser Glu Leu Ser Gly Asn Phe Glu Gln 65 70 75 80 Val Ile Val Gly Met Met Thr Pro Thr Val Leu Tyr Asp Val Gln Glu 85 90 95 Leu Arg Arg Ala Met Lys Gly Ala Gly Thr Asp Glu Gly Cys Leu Ile 100 105 110 Glu Ile Leu Ala Ser Arg Thr Pro Glu Glu Ile Arg Arg Ile Ser Gln 115 120 125 Thr Tyr Gln Gln Gln Tyr Gly Arg Ser Leu Glu Asp Asp Ile Arg Ser 130 135 140 Asp Thr Ser Phe Met Phe Gln Arg Val Leu Val Ser Leu Ser Ala Gly 145 150 155 160 Gly Arg Asp Glu Gly Asn Tyr Leu Asp Asp Ala Leu Val Arg Gln Asp 165 170 175 Ala Gln Asp Leu Tyr Glu Ala Gly Glu Lys Lys Trp Gly Thr Asp Glu 180 185 190 Val Lys Phe Leu Thr Val Leu Cys Ser Arg Asn Arg Asn His Leu Leu 195 200 205 His Val Phe Asp Glu Tyr Lys Arg Ile Ser Gln Lys Asp Ile Glu Gln 210 215 220 Ser Ile Lys Ser Glu Thr Ser Gly Ser Phe Glu Asp Ala Leu Leu Ala 225 230 235 240 Ile Val Lys Cys Met Arg Asn Lys Ser Ala Tyr Phe Ala Glu Lys Leu 245 250 255 Tyr Lys Ser Met Lys Gly Leu Gly Thr Asp Asp Asn Thr Leu Ile Arg 260 265 270 Val Met Val Ser Arg Ala Glu Ile Asp Met Leu Asp Ile Arg Ala His 275 280 285 Phe Lys Arg Leu Tyr Gly Lys Ser Leu Tyr Ser Phe Ile Lys Gly Asp 290 295 300 Thr Ser Gly Asp Tyr Arg Lys Val Leu Leu Val Leu Cys Gly Gly Asp 305 310 315 320 Asp <210> 15 <211> 175 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Met Leu Pro Pro Met Ala Leu Pro Ser Val Ser Trp Met Leu Leu Ser 1 5 10 15 Cys Leu Met Leu Leu Ser Gln Val Gln Gly Glu Glu Pro Gln Arg Glu 20 25 30 Leu Pro Ser Ala Arg Ile Arg Cys Pro Lys Gly Ser Lys Ala Tyr Gly 35 40 45 Ser His Cys Tyr Ala Leu Phe Leu Ser Pro Lys Ser Trp Thr Asp Ala 50 55 60 Asp Leu Ala Cys Gln Lys Arg Pro Ser Gly Asn Leu Val Ser Val Leu 65 70 75 80 Ser Gly Ala Glu Gly Ser Phe Val Ser Ser Leu Val Lys Ser Ile Gly 85 90 95 Asn Ser Tyr Ser Tyr Val Trp Ile Gly Leu His Asp Pro Thr Gln Gly 100 105 110 Thr Glu Pro Asn Gly Glu Gly Trp Glu Trp Ser Ser Ser Asp Val Met 115 120 125 Asn Tyr Phe Ala Trp Glu Arg Asn Pro Ser Thr Ile Ser Ser Pro Gly 130 135 140 His Cys Ala Ser Leu Ser Arg Ser Thr Ala Phe Leu Arg Trp Lys Asp 145 150 155 160 Tyr Asn Cys Asn Val Arg Leu Pro Tyr Val Cys Lys Phe Thr Asp 165 170 175

Claims

서열번호 1의 36-59번 아미노산 잔기, 또는 112-194번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 2의 1-24번 아미노산 잔기, 또는 131-255번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 3의 1-645번 아미노산 잔기, 또는 796-1210번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 4의 41-54번 아미노산 잔기, 또는 118-126번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 5의 111-129번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 6의 1-19번 아미노산 잔기, 또는 126-296번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 7의 1-645번 아미노산 잔기, 또는 796-1210번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 8의 1-175번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 9의 1-56번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 10의 1-113번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 11의 1-184번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 12의 1-172번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 13의 1-64번 아미노산 잔기의 펩티드;
서열번호 14의 1-321번 아미노산 잔기의 펩티드; 및
서열번호 15의 1-175번 아미노산 잔기의 펩티드로 구성된 군으로부터 선택된 펩디드에 결합하는 항체.
제 1항의 항체를 포함하는 암 진단용 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 암은 폐암, 유방암, 간암, 자궁경부암, 피부암, 대장암, 신장암, 난소암, 두경부암, 전립선암, 또는 췌장암인 것을 특징으로 하는 암 진단용 조성물.
제 1항의 항체 및 약학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 암은 폐암, 유방암, 간암, 자궁경부암, 피부암, 대장암, 신장암, 난소암, 두경부암, 전립선암, 또는 췌장암인 것을 특징으로 하는 치료 또는 예방용 약학 조성물.
제 1항의 항체를 포함하는 암 진단용 키트.
a) 분석할 생물학적 시료를 제공하는 단계;b) 상기 시료와 제 1항의 항체를 접촉시키는 단계;c) 항원-항체 복합체를 정량 검출하는 단계; 및 d) 상기 c) 단계 검출 결과를 정상 대조군과 비교하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보제공방법.
제 7항에 있어서, 상기 시료는 조직, 세포, 뇨, 혈액, 혈청 및 혈장 중에서 선택되는 생물학적 시료인 것을 특징으로 하는 와 접촉시키는 단계를 포함하는 암 진단을 위한 정보제공방법.