KR20120138766A - 복합 매트릭스로부터의 핵산 추출 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 대변 샘플 및 물 샘플과 같은 복합 매트릭스로부터 DNA 및 RNA와 같은 핵산을 추출하기 위한 흡착제 및 바람직한 프로토콜에 관한 것이다. 상기 흡착제는 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란, 및 코코넛 가루와 같은 물질로 코팅된 활성탄이다. 상기 흡착제는 마이크로센트리퓨즈 스핀 칼럼에서 사용될 수 있는데, 상기 흡착제는 마이크로센트리퓨즈 스핀 칼럼에서 저장용액에 슬러리로서 존재할 수 있다. 샘플은 버퍼용액에서 와류를 발생시켜 혼합하는 단계, 원심분리하는 단계, 상등액에 프로테아제를 첨가하는 단계, 및 코팅된 활성탄을 포함하는 마이크로센트리퓨즈 스핀 칼럼을 통하여 상등액을 통과시키는 단계에 의해 제조될 수 있다. 버퍼, 프로테아제 및 스핀 칼럼을 포함하는 주요 성분은 키트로 포장될 수 있다.

Description

복합 매트릭스로부터의 핵산 추출{NUCLEIC ACID EXTRACTION FROM COMPLEX MATRICES}
미국정부는 등록번호 1　U01 AI075396-01에 의하여 본 발명의 권리를 소유할 수 있다.
본 출원은 35 U.S.C. §119(e)에 의하여 2010년 2월 16일에 출원된 임시 미국특허출원번호 61/304,913을 우선권주장하며, 그 내용 전체는 명백하게 여기에 참조로 포함되었다.
본 발명은 주로 예를 들어 인간 검체 및 환경 샘플과 같은 시료로부터 DNA 및 RNA를 포함하는 전체 핵산을 정제하는 방법에 관한 것이다. 인간 검체의 예는, 오직 예시로서, 대변, 조직, 소변 및 다른 샘플을 포함한다. 환경 샘플의 예는, 오직 예시로서, 물, 토양 및 다른 샘플을 포함한다. 본 발명은 또한 농업, 수의학, 식품, 및 총 핵산 샘플이 추출될 수 있는 다른 어떤 샘플에도 적용가능하다. 보다 상세하게, 본 발명은 물질의 새로운 컬렉션과 그 사용절차에 관한 것이다.
인간 대변 검체는 보통 대장암, 바이러스 감염, 박테리아 감염 및 원생동물 감염을 포함하는 많은 질병을 진단하기 위하여 임상 검사실에서 사용된다. 미국에서 연간 총 6백십만 이상의 인비트로 진단(IVD)시험이 대변 검체에 수행되는 것으로 추산된다. 이 시험의 대부분은 직접 검경법, 배양 또는 면역학적 검정법과 같은 성숙 기술을 사용한다. 그러나, 현재 아데노바이러스, 엔테로바이러스, 노로바이러스, 로타바이러스, E. coli, 및 C. difficile을 포함하는 증가하는 수의 감염원이 분자법을 이용하여 검출된다.
대변은 대부분의 분자 검사법의 핵심의 PCR 검사법을 저해하는 많은 단백질, 다당류, 및 소분자를 함유하는 복잡한 매트릭스이다. 따라서, 검사실 직원은 분자 분석 전에 대변 검체의 DNA 및/또는 RNA를 분리해야 한다. 대변으로부터 DNA를 추출하기 위한 몇 제품도 존재한다. 이 중 가장 대중적인 것은 Qiagen사의 QIAamp Stool DNA Mini Kit이다. 이 제품은 마이크로센트리퓨즈(microcentrifuge) 스핀 칼럼을 이용하여 최종 DNA 분리주를 수집 및 세정하기 전에 사용자가 대변 검체를 세포 용해, 억제제 흡수, 및 단백질 소화하기의 단계를 통하여 처리하게 한다. 그 결과의 DNA는 대부분의 적용에 적합하다. 그러나, 추출절차가 길고, 복잡하며, 샘플 상호 오염의 위험을 증가시킨다. 다른 대안은 Roche Applied Science사의 MagNa Pure 라인의 도구와 같은 자동 DNA 추출 도구의 사용이다. 그러나, 이 도구는 상당한 자본 투자 및 대변과 사용하기 위한 추가적 전처리 단계를 필요로한다.
따라서, 보다 빠르고, 덜 복잡하고, 적은 자본 투자를 요구하고, 적은 전처리 단계를 요구하는 특성 중 적어도 하나를 만족하는, 샘플로부터 DNA 및/또는 RNA를 정제하는 방법의 필요가 존재한다.
본 발명은 상기 필요를 충족시키며, 속도, 민감도, 재현성의 상당한 개선 및 본 명세서를 통해 분명해질 다른 장점을 야기하는 분자법을 이용하여 Cryptosporidium 및 Giardia 종 등의 검출을 가능하게 한다.
본 발명은 인간 검체로부터 DNA 및 RNA를 포함하는 총 핵산을 정제하는 방법을 포함한다. 예를 들어 토양 샘플, 물 샘플, 수의 샘플, 농업 샘플 및 식품 샘플을 포함하는 다른 샘플 타입이 고려된다. 본 발명은 물질의 새로운 컬렉션 및 사용 절차를 포함한다. 핵산 추출 절차는 두 부분을 포함할 수 있다:
제 1부분 동안에는, 샘플을 버퍼에서 균질화하고 간단한 원심분리로 정제한다. 이어서, 프로테아제 효소를 이용하여 현탁 세포를 용해하고 샘플에 존재하는 단백질 PCR 저해제를 분해한다.
제 2부분 동안에는, 소화된 샘플을 새로운 흡착제를 함유하는 마이크로센트리퓨즈 칼럼에 통과시킨다. 이 흡착제는 정제된 DNA가 칼럼을 통하여 수집 튜브로 흘러가게 하는 동시에 샘플로부터 소분자 PCR 저해제를 제거하는 폴리비닐피롤리돈으로 코팅된 활성탄을 포함한다.
본 발명의 한 측면에 따르면, 샘플로부터 핵산을 추출하는 방법은 버퍼에서 샘플의 일부를 균질화하는 단계, 균질화된 샘플을 원심분리하여 펠릿 및 상등액을 얻는 단계, 펠릿으로부터 상등액을 분리하는 단계, 상등액에 프로테아제 효소를 첨가하는 단계, 및 코팅된 활성탄을 포함하는 흡착제에 상등액을 통과시키는 단계를 포함한다.
샘플은 대변 샘플, 조직 샘플, 소변 샘플, 혈액 샘플, 물 샘플, 토양 샘플, 농업 샘플, 수의 샘플 또는 식품 샘플 중 하나일 수 있다. 샘플은 0.2g의 질량 또는 0.2㎕의 부피를 가질 수 있다. 상등액은 배양될 수 있다. 활성탄은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란, 또는 코코넛 가루로 코팅될 수 있다. 코팅된 활성탄은 활성탄 슬러리로 존재할 수 있다. 슬러리의 중량/부피비는 약 5% 내지 약 20%일 수 있으며, 슬러리는 약 1% 내지 약 10% 중량/부피의 코팅 물질을 포함할 수 있으며, 상기 코팅 물질은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란 및 코코넛 가루 중 하나일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 샘플로부터 핵산을 추출하는 키트는 버퍼용액의 컨테이너, 프로테아제 효소의 컨테이너, 및 하나 이상의 스핀 칼럼(spin column)을 포함한다. 스핀 칼럼은 코팅된 활성탄을 함유한다.
코팅된 활성탄은 활성탄 슬러리를 포함할 수 있다. 활성탄은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란, 또는 코코넛 가루로 코팅될 수 있다. 슬러리의 중량/부피비는 약 5% 내지 약 20%일 수 있으며, 슬러리는 약 1% 내지 약 10% 중량/부피의 코팅 물질을 포함할 수 있으며, 상기 코팅 물질은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란 및 코코넛 가루 중 하나일 수 있다. 버퍼용액은, 샘플의 일부를 버퍼에 배치하고 와류를 발생시켜 혼합(vortex)할 때, 샘플을 균질화하는데 사용될 수 있다. 코팅된 활성탄은 핵산을 결합되지 않게 하면서 오염물질을 결합하게 하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 흡착제는 코팅 물질로 코팅된 활성탄 슬러리를 포함한다. 슬러리의 중량/부피비는 약 5% 내지 약 20%일 수 있으며, 슬러리는 약 1% 내지 약 10% 중량/부피의 코팅 물질을 포함할 수 있으며, 상기 코팅 물질은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란 및 코코넛 가루 중 하나일 수 있다. 마이크로센트리퓨즈 칼럼은 저장용액에 흡착제를 포함할 수 있다. 저장용액은 약 0.1% 내지 약 10%의 중량/부피비의 코팅 물질을 포함할 수 있다.
본 발명의 추가적 특정, 장점 및 실시예는 하기의 발명의 상세한 설명 및 청구항에 의해 분명해질 것이다. 또한, 본 발명의 상기 요약 및 하기의 상세한 설명은 본보기이고, 청구된 본 발명의 범위를 제한하지 않으며 추가적 설명을 위한 것임을 인지하여야 한다.
본 발명은 보다 나은 DNA 질 및 양을 제공하며, 적은 단계 및 시간을 필요로한다.
수반하는 도면은 본 발명의 이해를 위해 포함되며, 본 명세서의 일부로 포함되고, 발명의 상세한 설명과 함께 본 발명의 실시예를 분명히 보여주고 본 발명의 원리를 설명하는 역할을 한다. 본 발명 및 발명을 실시할 수 있는 다양한 방법의 기본적 이해에 필요할 수 있는 것 외의 상세한 구조적 사항은 보여주려고 하지 않는다.
도 1은 본 발명에 의한 핵산 추출방법의 모범적 흐름도이다.
도 2는 DNA 및 휴믹산의 코팅된 활성탄 및 코팅되지 않은 활성탄에의 흡착성을 나타낸다.
본 발명의 실시예 및 다양한 특징 및 그 장점을 하기의 설명에 기재된 제한하지 않는 실시예를 참고로 보다 자세히 설명할 것이다. 한 실시예의 특징은, 따로언급되지 않았더라도 당업자라면 알 수 있듯이, 다른 실시예와 함께 사용될 수 있다는 점을 인지해야 한다. 주지의 성분 및 처리기술의 설명은 본 발명의 실시예를 불필요하게 모호하게 하지 않기 위하여 생략될 수 있다. 여기에 사용된 실시예는 본 발명이 실시될 수 있는 방법의 이해를 돕고, 나아가 당업자가 본 발명의 실시예를 실시할 수 있게 하기 위한 것에 불과하다. 따라서, 이 명세서에 기재되는 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 이해되어서는 안 된다. 본 발명의 범위는 수반하는 청구항 및 준거법에 의해서만 정의된다.
핵산 추출 방법은 하기의 단계를 포함할 수 있다:
샘플은 버퍼에서 균질화할 수 있고 간단한 원심분리에 의해 정제할 수 있다. 이어서, 프로테아제 효소를 이용하여 현탁 세포를 용해하고 샘플에 존재하는 단백질 PCR 저해제를 분해한다. 그러나, 다른 효소가 본 발명에서의 사용에 고려된다.
소화된 샘플은 새로운 흡착제를 함유하는 마이크로센트리퓨즈 칼럼을 통과할 수 있다. 이 흡착제는 정제된 핵산이 칼럼을 통하여 수집 튜브로 흐르게 하는 동시에, 샘플로부터 소분자 PCR 저해제를 제거하는 폴리비닐피롤리돈으로 코팅된 활성탄을 포함할 수 있다. 다른 흡착제가 고려되며 본 발명의 요지 및 범위 내이다.
하기의 성분을 함유하는 관련 추출 제품이 시중에서 구입가능하다:
ㆍ25 내지 50mL의 버퍼를 함유하는 하나의 60mL 병
ㆍ100 내지 260㎕의 효소를 함유하는 하나의 마이크로센트리퓨즈 튜브
ㆍ50개의 마이크로센트리퓨즈 스핀 칼럼을 포함하는 하나의 재밀봉가능 플라스틱 백.
상기 성분은 하기의 모범적 절차에서 복수의 0.2g 또는 0.2㎕의 인간 대변 검체로부터 DNA를 추출하기 위해 사용될 수 있다:
1. 0.2g 또는 0.2㎕의 대변 샘플을 마이크로센트리퓨즈 튜브에 배치한다.
2. 0.5 mL의 버퍼를 튜브에 첨가한다. 튜브를 2분 동안 또는 샘플이 완전히 균질화될 때까지 와류를 발생시켜 혼합한다.
3. 200×g에서 30초 동안 튜브를 원심분리하여 고형물로 만든다.
4. 45㎕의 각 샘플 상등액을 깨끗한 마이크로센트리퓨즈 튜브로 옮긴다.
5. 각 샘플에 5㎕의 효소를 첨가한다. 짧게 혼합한다.
6. 75℃에서 15분 동안 샘플을 배양하여 세포를 용해하고 단백질 저해제를 소화시킨다.
7. 샘플 배양 동안에, 적절한 수의 스핀 칼럼을 새로운 마이크로센트리퓨즈 튜브에 배치한다. 칼럼을 8,000×g에서 3분 동안 원심분리하여 저장용액을 제거한다. 칼럼을 새로운 마이크로센트리퓨즈 튜브에 배치한다.
8. 배양 후, 소화된 샘플을 준비된 스핀 칼럼의 상부로 옮긴다.
9. 스핀 칼럼을 8,000×g에서 1분 동안 원심분리하여, DNA 추출물이 마이크로센트리퓨즈 튜브의 하부를 통하여 흐르게 한다.
상술한 횟수 및 양은 본보기이다. 다른 횟수 및 양이 본 발명에 의해 고려된 상술한 단계보다 더 많은 단계 또는 더 적은 단계와 함께 사용될 수 있다.
버퍼 및 프로테아제 효소는 현탁 세포를 용해하고 샘플에 존재하는 단백질 PCR 저해제를 분해하는데 사용될 수 있다. 빈 마이크로센트리퓨즈 칼럼 및 캡은 제 3의 판매자에 의해 공급될 수 있다.
마이크로센트리퓨즈 칼럼에 들어있는 흡착제는 저장용액에 5 내지 20% 중량/부피(w/v)의 활성탄(100-400메쉬) 슬러리를 포함할 수 있다. 슬러리는 0.1 내지 10% w/v의 HEPES 및/또는 코팅 물질을 함유하는 증류수에서 제조될 수 있다. 적절한 코팅 물질은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란, 코코넛 가루 등을 포함한다.
실시예 1
폴리비닐피롤리돈은 1 내지 10% (w/v)에서 활성탄을 코팅하는데 사용되었고, 7.0 내지 8.0 범위의 적절한 pH에서 제조되었다. 코팅된 활성탄은 핵산을 온전하고 결합되지 않게 하는 동시에 오염물질 및 다른 PCR 저해제에 효과적으로 결합한다. 도 2에서 도시하듯이, 코팅되지 않은 탄의 DNA 및 휴믹산 흡착은 탄의 양이 증가함에 따라 증가한다. 그러나, 활성탄을 PVP로 코팅하면, DNA 흡착은 감소하는 반면, 휴믹산 흡착은 코팅되지 않은 탄(charcoal)과 비슷하게 유지된다.
실시예 2
본 발명은 제조사가 추천한 미생물의 DNA 추출 방법을 이용하는 QIAamp Stool DNA Mini kit를 벤치마킹하였다. 여섯개의 0.2g 인간 대변 샘플에 Cryptosporidium parvum 및 Giardia lamblia의 약 1 x 105 미생물을 섞었다. 샘플을 -20℃에서 5달 동안 저장하였다. 세 샘플을 본 발명을 이용하여 처리하였고, 남은 세개를 QIAamp 방법을 이용하여 처리하였다. 정제된 DNA 추출물을 Cryptosporidium 또는 Giardia 게놈 DNA용 인하우스 PCR 검사법을 이용하여 분석하였다. 하기의 결과가 수득되었다:
본 발명 QIAamp
Cryptosporidium 수율 (Ct) 30.55 ±0.50 29.96 ±0.52
Giardia 수율 (Ct) 26.84 ±0.62 26.00 ±0.51
추출 안정성 (ΔCt) 0.79 0.42
6 샘플의 시간 (분) 30 94
절차적 단계 8-10 32
샘플 이동의 수 2 4
본 발명 및 QIAamp의 재현성은 6x Ct 값 간에 %CV가 10% 미만으로 비슷하였다. 본 발명 및 QIAamp 추출물의 추출 안정성은 -20℃에서 2주 동안 저장한 후 ΔCt를 수득함으로써 테스트하였다. 두 방법을 사용하여 수득된 추출물에 큰 차이가 없었다.
DNA 수율은 형광 신호가 기준치 위로 상승한 추정된 반응 사이클을 나타내는PCR 사이클 임계(Ct) 값으로 제공된다. 낮은 Ct 값은 샘플에 보다 많은 목표 DNA가 존재함을 나타낸다.
본 발명은 QIAamp 방법과 같거나 보다 나은 DNA 질 및 양을 제공하였고, QIAamp 방법보다 적은 단계 및 적은 시간을 요구하였다.
실시예 3
본 발명은 Kingfisher 자동화 플랫폼에서 Ambion MagMax-96 Viral RNA kit에 대하여 테스트되었다. 두 프로토콜을 이용하여 열개의 임상 대변 샘플에서 Norovirus RNA를 추출하였고, 추출물을 LightCycler 플랫폼에서 PCR 증폭에 의해 분석하였다.
하기의 결과를 수득하였다:
Kingfisher 수율 (Ct) 본 발명 수율(Ct) ΔCt (Kingfisher - 본 발명)
V-S-001 25.79 22.83 2.97
V-S-003 25.32 23.79 1.53
V-S-007 34.68 32.96 1.72
V-S-009 35.89 36.97 -1.08
V-S-011 25.79 23.03 2.76
V-S-033 25.32 15.10 10.22
V-S-038 28.06 16.07 11.99
V-S-056 34.68 36.63 -1.95
V-S-064 35.89 35.67 0.22
본 발명은 높은 RNA 질 및 양을 생산하였다. 몇 경우에는, 본 발명이 자동화 Kingfisher 추출 방법보다 결과가 좋았다.
실시예 4
본 발명을 MoBio Laboratories Inc. 사의 UltraCleanⓒ Soil DNA Isolation kit에 대하여 지표수(surface water) 및 폐수에 테스트하였다. 10L 및 1L의 물을 Envirocheck 및 원심분리 방법에 의해 농축하였다. DNA 추출은 본 발명의 방법 및 MoBio 산물을 따로 사용하여 각 샘플 당 중복으로 수행하였다. iCycler (Biorad) 플랫폼에서 SYBR Green을 이용하여 DNA 추출물 당 3중 증폭을 수행하였다.
하기의 결과를 수득하였다:
샘플
번호 		설명 부피 농축 방법 DNA 추출방법
C T-value C T-value ΔC T (본 발명-MoBio)
본 발명 MoBio
1 파툼타니(Pathumthani) 정수처리장, 유입수, 건기 10L Envirocheck 37.8±1.4 39.2±2.7 -1.4
2 파툼타니 정수처리장, 유입수, 우기 10L Envirocheck 35.9±2.1 40.1±2.5 -4.2
3 파툼타니 정수처리장, 유출수, 건기 10L Envirocheck 신호없음 신호없음 신호없음
4 파툼타니 정수처리장, 유출수, 우기 10L Envirocheck 신호없음 신호없음 신호없음
5 방켄(Bangkhen) 정수처리장, 유입수, 건기 10L Envirocheck 39.3±1.7 43.5±1.3 -4.2
6 방켄 정수처리장, 유입수, 우기 10L Envirocheck 37.4±1.9 41.3±2.1 -3.9
7 방켄 정수처리장, 유출수, 건기 10L Envirocheck 신호없음 신호없음 신호없음
8 방켄 정수처리장, 유출수, 우기 10L Envirocheck 신호없음 신호없음 신호없음
9 운하 1 지표수 (관개/자치) 10L Envirocheck 32.2±2.3 37.8±3.7 -5.6
10 운하 2 지표수 (관개/자치) 10L Envirocheck 36.3±1.5 39.7±2.1 -3.4
11 운하 3 지표수 (관개/자치) 10L Envirocheck 37.5±2.5 41.6±2.2 -4.1
12 운하 4 지표수 (관개/자치) 10L Envirocheck 35.6±0.9 40.5±1.4 -4.9
13 운하 5 지표수 (관개/자치) 10L Envirocheck 39.8±1.1 44.3±0.9 -4.5
14 AIT 폐수처리시설, 유입수, 우기 10L Envirocheck 33.9±2.3 39.6±3.2 -5.7
15 AIT 폐수처리시설, 유출수, 우기 10L Envirocheck 36.2±1.3 42.1±2.2 -5.9
16 AIT 주요 라군 지표수, 우기 10L Envirocheck 신호없음 신호없음 신호없음
17 운하 1 지표수, 샘플링 포인트 1 1L 원심분리 35.1±0.9 41.8±3.4 -6.7
18 운하 1 지표수, 샘플링 포인트 2 1L 원심분리 37.7±1.7 44.1±0.5 -6.4
19 운하 1 지표수, 샘플링 포인트 3 1L 원심분리 43.1±1.2 신호없음 -
20 운하 4 지표수, 샘플링 포인트 1 1L 원심분리 44.4±1.3 신호없음 -
21 운하 4 지표수, 샘플링 포인트 2 1L 원심분리 37.8±2.8 43.7±1.1 -5.9
22 운하 4 지표수, 샘플링 포인트 3 1L 원심분리 42.4±0.9 신호없음 -
23 운하 프렘프라차콘(Premprachakorn) 지표수, 샘플링 포인트 1 1L
 원심분리 42.5±1.2 신호없음 -
24 운하 프렘프라차콘 지표수, 샘플링 포인트 2 1L
 원심분리 신호없음 신호없음 신호없음
25 운하 프렘프라차콘 지표수, 샘플링 포인트 3 1L
 원심분리 신호없음 신호없음 신호없음
본 발명이 DNA의 질 및 양에 있어서 MoBio 산물보다 나은 결과를 냈다.
본 발명을 본보기 실시예를 들어 설명하였으나, 당업자는 수반하는 본 발명을 청구항의 요지 및 범위 내에서 변경하여 실시할 수 있음을 알 것이다. 상기의 예는 오직 설명을 위한 것이며 본 발명의 모든 가능한 디자인, 실시예, 적용 또는 변경을 열거한 것은 아니다.

Claims (22)

  1. 버퍼에서 샘플의 적어도 일부를 균질화하는 단계;
    상기 균질화된 샘플의 일부를 원심분리하여, 펠릿 및 상등액을 얻는 단계;
    상기 펠릿으로부터 상등액을 분리하는 단계;
    상기 상등액에 프로테아제 효소를 첨가하는 단계; 및
    코팅된 활성탄을 포함하는 흡착제에 상등액을 통과시키는 단계를 포함하는, 샘플로부터 핵산을 추출하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 샘플은 대변 샘플, 조직 샘플, 소변 샘플, 혈액 샘플, 물 샘플, 토양 샘플, 농업 샘플, 수의 샘플 및 식품 샘플로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 샘플의 일부는 적어도 0.2g의 질량 또는 0.2㎕의 부피 중 하나를 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 상등액을 배양하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 활성탄은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란 및 코코넛 가루로 구성된 군으로부터 선택되는 물질로 코팅되는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 코팅된 활성탄은 활성탄 슬러리를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 슬러리의 중량/부피비는 약 5% 내지 20%인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 6항에 있어서, 상기 슬러리는 약 1% 내지 약 10% 중량/부피의 코팅 물질을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 코팅 물질은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란 및 코코넛 가루로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 버퍼용액의 컨테이너;
    프로테아제 효소의 컨테이너; 및
    코팅된 활성탄을 포함하는 적어도 하나의 스핀 칼럼을 포함하는,
    샘플로부터 핵산을 추출하는 키트.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 코팅된 활성탄은 활성탄 슬러리를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  12. 제 11항에 있어서, 상기 슬러리의 중량/부피비는 약 5% 내지 약 20%인 것을 특징으로 하는 키트.
  13. 제 11항에 있어서, 상기 슬러리는 약 1% 내지 약 10% 중량/부피의 코팅 물질을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  14. 제 13항에 있어서, 상기 코팅물질은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란 및 코코넛 가루로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 키트.
  15. 제 10항에 있어서, 상기 활성탄은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란 및 코코넛 가루로 구성된 군으로부터 선택되는 물질로 코팅되는 것을 특징으로 하는 키트.
  16. 제 10항에 있어서, 상기 버퍼용액은, 샘플의 일부를 버퍼에 배치하고 와류를 발생시켜 혼합할 때, 샘플을 균질화하도록 구성되는 것을 특징으로 하는 키트.
  17. 제 10항에 있어서, 상기 코팅된 활성탄은 핵산을 결합되지 않게 하는 동시에 오염물질에 결합되도록 구성되는 것을 특징으로 하는 키트.
  18. 코팅 물질로 코팅된 활성탄 슬러리를 포함하는 흡착제.
  19. 제 18항에 있어서, 상기 슬러리의 중량/부피비는 약 5% 내지 약 20%인 것을 특징으로 하는 흡착제.
  20. 제 18항에 있어서, 상기 코팅 물질은 폴리비닐피롤리돈, 덱스트란 및 코코넛 가루로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 흡착제.
  21. 저장용액에 제 18항의 흡착제를 포함하는 마이크로센트리퓨즈 칼럼.
  22. 제 21항에 있어서, 상기 저장용액은 약 0.1% 내지 약 10%의 중량/부피비의 코팅 물질을 포함하는 것을 특징으로 하는 마이크로센트리퓨즈 칼럼.
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