KR20120119262A

KR20120119262A - 혈소판 농축혈장 생성방법

Info

Publication number: KR20120119262A
Application number: KR1020110037071A
Authority: KR
Inventors: 김홍; 이호준; 김오진; 송영욱; 홍성덕
Original assignee: (주) 글로텍
Priority date: 2011-04-21
Filing date: 2011-04-21
Publication date: 2012-10-31

Abstract

본 발명은 혈소판 농축혈장 생성방법에 관한 것으로서, 특히, 고농도의 PRP(platelet rich plasma)를 추출하여 다양한 의료분야에 치료제로 사용할 수 있을 뿐만 아니라 치료효과를 높일 수 있는 혈소판 농축혈장 생성방법에 관한 것이다.
본 발명의 구성은, 채혈단계; 적어도 한 번의 원심분리를 통해 상기 채혈된 혈액으로부터 RBC(red blood cell)를 분리하는 RBC(red blood cell) 분리단계; 및 상기 RBC가 분리된 혈액으로부터 PRP(platelet rich plasma)를 생성하는 PRP 생성단계를 포함하며, 상기 PRP 생성단계에서 생성된 PRP에는 원심분리 후 상층에 형성된 RBC가 소정량 포함된 혈소판 농축혈장 생성방법을 개시한다.
더욱 구체적으로, 제1주사기를 이용하여 혈액을 수집하는 채혈단계; 상기 제1주사기에 RBC(red blood cell) 제1수거부를 결합하는 RBC 제1수거부 결합단계; 상기 RBC 제1수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제1원심분리단계; 원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제1수거부를 제거하는 RBC 제1수거부 제거단계; 상기 제1주사기에 남아있는 RBC를 0㎖눈금까지 제거하는 RBC 제거단계; 및 RBC가 제거된 상기 제1주사기로부터 PRP를 생성하는 PRP 생성단계를 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법을 개시한다.
이때, 상기 RBC 제거단계 이후, 상기 제1주사기에 RBC 제2수거부를 결합하는 RBC 제2수거부 결합단계; 상기 RBC 제2수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제2원심분리단계; 및 원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제2수거부를 제거하는 RBC 제2수거부 제거단계를 더 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법을 개시한다.

Description

혈소판 농축혈장 생성방법{PRODUCTING METHOD OF PLATELET RICH PLASMA}

본 발명은 혈소판 농축혈장 생성방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 채혈된 혈액(전혈)으로부터 고농도의 혈소판 농축혈장(Platelet Rich Plasma)을 얻을 수 있는 혈소판 농축혈장 생성방법에 관한 것이다.

일반적으로, 의학기술이 발달함에 따라 줄기세포(stem cell)나 혈소판(platelet) 등 신체조직에 존재하는 유익한 성분을 이용하여 병을 치료하거나 이를 응용하여 시술하고 있다.

상기 줄기세포는 알려진 바와 같이, 배아 줄기세포와 성체 줄기세포로 나뉘며, 성체 줄기세포는 골수나 제대혈, 지방조직 등에 분포한다고 알려져 있다.

이러한 줄기세포는 세포를 반복하여 분열하는 자기재생(self renewal)과 여러 조직으로 분화하는 다분화능(multipotency), 모든 종류의 세포로 분화하는 전능성(pluripotency)을 가진 세포로 정의된다.

또한, 혈소판(platelet)은 상처를 입었을 때 특히, 지혈 과정에서 일련의 연쇄과정(cascade process)을 통해 성장인자를 분비한다.

보다 구체적으로, 상기 혈소판은 전혈(whole blood)에 포함된 혈소판 농축혈장(PRP : platelet rich plasma)인 것으로서, 전혈을 원심 분리하여 얻어질 수 있다.

이러한 혈소판 농축혈장(PRP)은 혈소판 유래 성장인자(PDGF)와 형질전환 성장인자(TGF), 상피 성장인자(EGF) 등을 포함하고 있다.

또한, 이러한 성장인자는 치유 과정시 조직의 재생에 필수적인 신생혈관의 촉진, 세포의 화학주성 및 분열촉진, 줄기세포의 자극 및 증식, 기질 합성 등을 조절하는 인자로 관여하는 것으로 알려져 있다.

이에, 상기 줄기세포 및 혈소판 농축혈장을 이용하여 각 분야별로 임상에서의 활용이 늘어나고 있는 추세이다.

현재 줄기세포에서 타켓 세포를 추출하거나, 전혈에서 혈소판 자체나 혈소판 농축혈장을 효율적으로 획득하기 위하여 다양한 방법이 실시되고 있다.

한편, 치료제로 사용되는 혈소판 농축혈장의 혈소판 수치는 높으면 높을수록 그 치료효과가 높아진다고 할 수 있다.

그러나, 현재 사용되고 있는 실험방법으로 추출해낸 혈소판 농축혈장은 혈소판의 수치가 낮다는 문제점이 제기되고 있다.

본 발명은 상기와 같은 종래의 문제점을 해결하기 위하여 창안된 것으로서, 본 발명의 주된 목적은 종래에 비하여 고농도의 혈소판 농축혈장을 얻을 수 있는 혈소판 농축혈장 생성방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 고농도의 혈소판 농축혈장을 이용하여 다양한 의료분야에 치료제로 사용할 수 있을 뿐만 아니라 치료효과를 개선할 수 있는 혈소판 농축혈장 생성방법을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명인 혈소판 농축혈장 생성방법은, 채혈단계; 적어도 한 번의 원심분리를 통해 상기 채혈된 혈액으로부터 RBC(red blood cell)를 분리하는 RBC(red blood cell) 분리단계; 및 상기 RBC가 분리된 혈액으로부터 PRP(platelet rich plasma)를 생성하는 PRP 생성단계를 포함하며, 상기 PRP 생성단계에서 생성된 PRP에는 원심분리 후 상층에 형성된 RBC가 소정량 포함된 것을 특징으로 한다.

더욱 구체적으로, 제1주사기를 이용하여 혈액을 수집하는 채혈단계; 상기 제1주사기에 RBC(red blood cell) 제1수거부를 결합하는 RBC 제1수거부 결합단계; 상기 RBC 제1수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제1원심분리단계; 원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제1수거부를 제거하는 RBC 제1수거부 제거단계; 상기 제1주사기에 남아있는 RBC를 0㎖눈금까지 제거하는 RBC 제거단계; 및 RBC가 제거된 상기 제1주사기로부터 PRP를 생성하는 PRP 생성단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

이때, 상기 RBC 제거단계 이후, 상기 제1주사기에 RBC 제2수거부를 결합하는 RBC 제2수거부 결합단계; 상기 RBC 제2수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제2원심분리단계; 및 원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제2수거부를 제거하는 RBC 제2수거부 제거단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

이상에서 상술한 본 발명에 따르면, 원심분리 후 상층부에 형성된 RBC(Red Blood Cell)가 소정량 포함되도록 하여 혈소판 농축혈장(PRP)을 생성함으로써 고농도의 혈소판 농축혈장을 얻을 수 있으며, 고농도의 혈소판 농축혈장을 치료제로 사용할 수 있어 치료 효과를 더욱 높일 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 일실시예에 의한 도면,
도 2는 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 일실시예에 의한 RBC 제1수거부 결합단계를 나타낸 도면,
도 3은 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 일실시예에 의한 RBC 제1수거부 제거단계를 나타낸 도면,
도 4는 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 다른 실시예에 의한 도면,
도 5는 RBC 제3수거부 결합단계를 나타낸 도면,
도 6 내지 도 21은 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 일실시예 및 다른 실시예에 의한 실험방법을 나타낸 도면대용 사진,
도 22는 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 싱글 스핀 실험에서 원심분리 조건에 따른 PLT수 및 농축배수를 나타낸 실험 데이터 도면,
도 23은 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 싱글 스핀 실험에서 사람에 다른 PLT수 및 농축배수를 나타낸 실험 데이터 도면,
도 24는 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 싱글 스핀 실험에서 PRP 추출량에 따른 PLT 수를 나타낸 실험 데이터 도면,
도 25는 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 더블 스핀 실험에서 원심분리 조건에 따른 PLT 수를 나타낸 실험 데이터 도면,
도 26은 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 더블 스핀 실험에서 PRP 추출량에 따른 PLT 수 및 농축배수를 나타낸 실험 데이터 도면,
도 27은 본 발명에 따른 혈소판 농축혈장 생성방법의 더블 스핀 실험을 통해 생성된 PRP와 일반적인 실험을 통해 생성된 PRP의 PLT수치를 나타낸 실험 데이터 도면.

본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 설명하고자 한다.

그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 각 도면을 설명하면서 유사한 참조부호를 유사한 구성요소에 대해 사용하였다.

제2, 제1 등과 같이 서수를 포함하는 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되지는 않는다.

상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 권리 범위를 벗어나지 않으면서 제2 구성요소는 제1 구성요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제1 구성요소도 제2 구성요소로 명명될 수 있다. 및/또는 이라는 용어는 복수의 관련된 기재된 항목들의 조합 또는 복수의 관련된 기재된 항목들 중의 어느 항목을 포함한다.

어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "연결되어" 있다거나 "접속되어" 있다고 언급된 때에는, 그 다른 구성요소에 직접적으로 연결되어 있거나 또는 접속되어 있을 수도 있지만, 중간에 다른 구성요소가 존재할 수도 있다고 이해되어야 할 것이다. 반면에, 어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "직접 연결되어" 있다거나 "직접 접속되어" 있다고 언급된 때에는, 중간에 다른 구성요소가 존재하지 않는 것으로 이해되어야 할 것이다.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

본 발명을 설명하기에 앞서 일반적으로 혈소판 농축혈장(PRP : platelet rich plasma)은 혈소판 수치(농도)에 따라, 농도가 낮은 것(PLT 수 : 500~1,000×10³/㎕, PLT 농축배수 : 2~5배 미만)은 미용 및 피부치료제로 사용하고, 농도가 높은 것(PLT 수 : 1,000×10³/㎕ 이상, PLT 농축배수 : 5~9배)은 통증치료제로 사용한다.

본 발명은 고농도의 혈소판 농축혈장을 생성하는 방법에 관한 것으로, 혈소판 농축혈장의 혈소판 수치(농도)는 사람, 생성량 및 원심분리 조건에 따라 달라지는 것이며, 본 발명에서는 원심분리단계를 한 번 실시한 것(single spin)과 두 번 실시한 것(double spin)으로 나누어 실험하였다.

그 결과 원심분리단계를 한 번 실시한 경우보다 두 번 실시한 경우에 고농도의 혈소판 농축혈장이 생성되었으며, 두 경우 모두 종래의 혈소판 농축혈장 생성방법으로 추출한 것에 비하여 보다 고농도의 혈소판 농축혈장을 생성할 수 있었다.

이하, 첨부된 도면을 참조로 본 발명의 실시예를 SINGLE SPIN방법 과 DOUBLE SPIN 방법으로 나누어 설명하면 다음과 같다.

먼저, 도 1 내지 도 3은 원심분리단계를 한 번 실시한 방법을 나타낸 도면이며, 도 4 및 도 5는 원심분리단계를 두 번 실시한 방법을 나타낸 도면이다.

▶ SINGLE SPIN 방법

도 1에 도시된 바와 같이, 제1주사기를 이용하여 혈액을 수집하는 채혈단계(S100); 상기 제1주사기에 상기 RBC(red blood cell) 제1수거부를 결합하는 RBC 제1수거부 결합단계(S211); 상기 RBC 제1수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제1원심분리단계(S220); 원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제1수거부를 제거하는 RBC 제1수거부 제거단계(S230); 상기 제1주사기에 남아있는 RBC를 0㎖눈금까지 제거하는 RBC 제거단계(S240); 및 RBC가 제거된 상기 제1주사기로부터 PRP를 생성하는 PRP 생성단계(S300)를 포함하여 이루어진다.

채혈단계(S100)에서는 도 6 및 도 7에 도시된 바와 같이, 10㎖의 상기 제1주사기에 ACD-A 항응고제 1.5㎖를 채운 후, 상기 항응고제를 채운 상기 제1주사기를 사용하여 환자로부터 8.5㎖의 혈액을 채취한다.

이때, 항응고제 및 혈액은 3:17의 비율로 하는 것이 바람직하다.

한편, 도 8에 도시된 바와 같이 상기 제1주사기의 바늘 연결부위에 상기 RBC 제1수거부를 결합하는 RBC 제1수거부 결합단계(S210)는, 도 9에 도시된 바와 같이 상기 제1주사기의 플런저(Plunger)를 제거하는 플런저 제거단계(S211)를 포함한다.

이때, 상기 플런저는 poly olefin 재질의 플런저 커넥터와 나선결합되어 있어, 정역회전에 의해 결합 및 분리될 수 있다.

제1원심분리단계(S220)에서는 도 10 및 도 11에 도시된 바와 같이, 상기 플런저가 제거된 상기 제1주사기를 원심분리기에 넣고, RCF(relative centrifuge force, 상대원심력)를 370g~400g로 19~20분간 동작시킨다.

제1원심분리단계(S220)가 끝나면, 도 12 및 도 13에 도시된 바와 같이 RBC 제1수거부 제거단계(S230)를 거치며, 이때, 상기 플런저를 재결합하는 플런저 결합단계(S231)가 포함된다.

다음으로, 도 14에 도시된 바와 같이, 상기 플런저를 이용하여 상기 제1주사기에 남아있는 RBC를 0㎖ 눈금까지 제거하는 RBC 제거단계(S240)를 수행한다.

이때, RBC를 0㎖ 눈금까지 제거하여도, 도 14에 도시된 바와 같이 상기 제1주사기의 하부에 형성된 바늘 결합부에는 원심분리 후, 분리된 RBC의 상단부에 형성된 소정량의 RBC가 남게 된다.

즉, 종래에는 RBC(Red Blood Cell)를 모두 제거하였지만, 본 발명에서는 원심분리 후 분리된 RBC의 상부에 남아있는 소정량의 RBC를 포함하여 혈소판 농축혈장을 추출하는 것이다.

다음으로, RBC가 제거된 상기 제1주사기로부터 PRP를 생성하는 PRP 생성단계(S300)로 구성된다.

PRP 생성단계(S300)는 도 18에 도시된 바와 같이 RBC가 제거된 상기 제1주사기에 커플러를 연결하는 커플러 연결단계(S310); 도 19에 도시된 바와 같이 상기 커플러에 제2주사기를 연결하는 제2주사기 연결단계(S320); 및 도 20 및 도 21에 도시된 바와 같이 상기 제1주사기에 있는 PRP를 상기 제2주사기로 이송시키는 PRP 이송단계(S330)를 포함하여 구성된다.

이때, 상기 제2주사기는 용량이 1㎖인 것을 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 제2주사기에 생성한 PRP의 용량은 최대 0.6~0.8㎖로 하는 것이 바람직하다.

즉, 상기 제1주사기에 결합된 상기 플런저를 눌러 0.6~0.8㎖의 PRP를 상기 제2주사기로 이송시킨다.

이때, 소정량의 RBC가 포함되므로, 이송되는 과정에서 상기 제2주사기에는 붉은색의 PRP가 생성된다.

한편, 상기 싱글 스핀 회전 실험방법에서는 400g의 RCF(relative centrifuge force, 상대원심력) 조건으로, 도 22에 도시된 바와 같이 19분간 원심분리를 수행하였을 때 최적의 혈소판 수치가 높게 나왔다.

	A-Person		B-Person		C-Person
	PLT [10³/㎕]	RBC [10⁶/㎕]	PLT [10³/㎕]	RBC [10⁶/㎕]	PLT [10³/㎕]	RBC [10⁶/㎕]
Before Centrifuge	258	4.41	225	5.39	244	4.53
370g, 19min	941	2.01	869	2.84	986	2.17
370g, 20min	1078	1.70	964	2.72	1042	2.66
370g, 21min	649	1.32	502	1.81	924	2.88

또한, 상기 [표 1]과 같이 사람에 따른 혈소판 수치 및 농축배수를 측정하였을 때, 도 23에 도시된 바와 같이 370g의 상대원심력 조건으로 20분간 수행하였을 때, 최적의 혈소판 수치가 나왔다.

따라서, 상기 싱글 스핀 회전 실험방법에서는 제1원심분리단계의 최적의 조건은 370g~400g의 상대원심력으로 19~20분간 수행하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 싱글 스핀 회전 실험방법에서는 PRP의 생성량에 따라서도 혈소판 수치가 좌우되었으며, 도 24에 도시된 바와 같이, 0.6㎖의 PRP 생성시 혈소판 수치가 가장 높게 형성되었다.

▶ DOUBLE SPIN 방법

먼저, 도 4에 도시된 바와 같이, 제1주사기를 이용하여 혈액을 수집하는 채혈단계(S100); 상기 제1주사기에 RBC(red blood cell) 제1수거부를 결합하는 RBC 제1수거부 결합단계(S210); 상기 RBC 제1수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제1원심분리단계(S220); 원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제1수거부를 제거하는 RBC 제1수거부 제거단계(S230); 상기 제1주사기에 남아있는 RBC를 0㎖눈금까지 제거하는 RBC 제거단계(S240); 상기 제1주사기에 RBC 제2수거부를 결합하는 RBC 제2수거부 결합단계(S250); 상기 RBC 제2수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제2원심분리단계(S260); 원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제2수거부를 제거하는 RBC 제2수거부 제거단계(S270); 및 RBC가 제거된 상기 제1주사기로부터 PRP를 생성하는 PRP 생성단계(S300)를 포함하여 구성된다.

채혈단계(S100)부터 RBC 제거단계(S240)까지는 하기 상기 싱글 스핀 회전 실험방밥과 동일하다.

다만, 상기 [표 2]에 기재된 바와 같이, 제1차원심분리단계(S220) 및 제2차원심분리단계(S260)의 실험 조건만을 달리하였다.

제1차원심분리단계(S220)에서는 1800g(3,000rpm)의 상대원심력으로 3분간 작동시켰다.

다음으로, 도 14에 도시된 바와 같이, RBC를 0㎖눈금까지 제거한 후에는 도 15에 도시된 바와 같이, RBC 제2수거부를 결합하는 RBC제2수거부 결합단계(S250)를 수행한다.

이때, RBC 제2수거부 결합단계(S250)는, 도 5에 도시된 바와 같이 상기 제1주사기의 플런저(Plunger)를 제거하는 플런저 제거단계(S251)를 포함한다.

다음으로, 도 16에 도시된 바와 같이, 제2원심분리단계(S260)는, 상기 플런저가 제거된 상기 제1주사기를 1,800g(3,000rpm)의 상대원심력으로 상기 원심분리기를 6~7분간 동작시킨다.

구분	1차원심분리조건	2차원심분리조건	총 소요시간	PLT(10³/㎕)
분리전	-	-	-	255
1	3000RPM, 3min	3000RPM, 4min	10	326
2	3000RPM, 3min	3000RPM, 6min	12	1427
3	3000RPM, 3min	3000RPM, 6min 30sec	12.5	2236
4	3000RPM, 3min	3000RPM, 7min	13	441

상기 [표 2]에는 제1차원심분리단계(S220) 및 2차원심분리단계(S260)의 실험 조건을 표시하였다.

모두 1,800g의 상대원심력의 조건으로 수행하였으며, 도 25 및 도 27에 도시된 바와 같이, 제2차원심분리단계(S260)는 6.5분간 수행하였을 때 최적의 혈소판 수치가 생성되었다.

제2차원심분리단계 이후 도 17에 도시된 바와 같이, 결합된 RBC 제2수거부를 제거하는 RBC 제2수거부 제거단계(S270)를 수행한다.

이후, PRP 생성단계는 상기 싱글 스핀 실험 조건과 동일하다.

또한, 더블 스핀 실험 조건에서도 도 26에 도시된 바와 같이, PRP 생성단계에서 생성된 PRP의 양은 0.6㎖로 하는 것이 바람직하다.

또한, 싱글 스핀 시험 조건과 같이 상기 제1주사기는 용량이 10㎖이고, 상기 제2주사기는 용량이 1㎖인 것을 사용하는 것이 바람직하다.

이상에서 본 발명에 따른 싱글 회전 방법과 더블 회전 방법에 의한 고농도의 혈소판 농축혈장 생성방법에 대해여 설명하였다.

본 발명은 도 1 및 도 4에 도시된 바와 같이, 채혈단계(S100); 적어도 한 번의 원심분리를 통해 상기 채혈된 혈액으로부터 RBC(red blood cell)를 분리하는 RBC(red blood cell) 분리단계(S200); 및 상기 RBC가 분리된 혈액으로부터 PRP(platelet rich plasma)를 생성하는 PRP 생성단계(S300)를 포함하며, 상기 PRP 생성단계(S300)에서 생성된 PRP에는 원심분리 후 상층에 형성된 RBC를 소정량 포함시키는 것이 핵심이라 할 수 있다.

또한, 제1원심분리단계(S220) 및 제2원심분리단계(S260)의 조건과 상기 실험방법을 통해 최종 생성되는 PRP의 양을 0.6㎖로 한정하는 것이 본 발명의 핵심이라 할 수 있을 것이다.

S100 : 채혈단계
S200 : RBC 분리단계 S210 : RBC 제1수거부 결합단계
S211, S251 : 플런저 제거단계
S220 : 제1원심분리단계 S230 : RBC 제1수거부 제거단계
S231 : 플런저 결합단계 S240 : RBC 제거단계
S250 : RBC 제2수거부 결합단계

Claims

채혈단계;
적어도 한 번의 원심분리를 통해 상기 채혈된 혈액으로부터 RBC(red blood cell)를 분리하는 RBC(red blood cell) 분리단계; 및
상기 RBC가 분리된 혈액으로부터 PRP(platelet rich plasma)를 생성하는 PRP 생성단계를 포함하며,
상기 PRP 생성단계에서 생성된 PRP에는 원심분리 후 상층에 형성된 RBC가 소정량 포함된 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제1항에 있어서, 상기 원심분리 절차가 한 번 수행되는 경우에,
원심분리단계에서 RCF(relative centrifuge force, 상대원심력)를 370~400g로 19~20분간 동작시키는 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제1항에 있어서, 상기 원심분리 절차가 두 번 수행되는 경우에,
제1원심분리단계에서는 상대원심력을 1,800g(3,000rpm)로 3분간 동작시키는 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제3항에 있어서, 제2원심분리단계에서는,
상대원심력을 1,800g(3,000rpm)로 6분~6분 30초간 동작시키는 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 PRP 생성단계에서 생성된 PRP의 양은 0.6㎖인 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제1주사기를 이용하여 혈액을 수집하는 채혈단계;
상기 제1주사기에 RBC(red blood cell) 제1수거부를 결합하는 RBC 제1수거부 결합단계;
상기 RBC 제1수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제1원심분리단계;
원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제1수거부를 제거하는 RBC 제1수거부 제거단계;
상기 제1주사기에 남아있는 RBC를 0㎖눈금까지 제거하는 RBC 제거단계; 및
RBC가 제거된 상기 제1주사기로부터 PRP를 생성하는 PRP 생성단계를 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제6항에 있어서,상기 채혈단계에서는,
상기 제1주사기에 항응고제 및 혈액을 3:17의 비율로 채우는 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제6항에 있어서, 상기 RBC 제1수거부 결합단계는,
상기 제1주사기의 플런저(Plunger)를 제거하는 플런저 제거단계를 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제8항에 있어서, 상기 제1원심분리단계는,
상기 플런저가 제거된 상기 제1주사기를 원심분리기에 넣고, 상대원심력 370~400g로 19~20분간 동작시키는 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제9항에 있어서, 상기 RBC 제1수거부 제거단계는,
상기 플런저를 재결합하는 플런저 결합단계를 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제1주사기를 이용하여 혈액을 수집하는 채혈단계;
상기 제1주사기에 RBC(red blood cell) 제1수거부를 결합하는 RBC 제1수거부 결합단계;
상기 RBC 제1수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제1원심분리단계;
원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제1수거부를 제거하는 RBC 제1수거부 제거단계;
상기 제1주사기에 남아있는 RBC를 0㎖눈금까지 제거하는 RBC 제거단계;
상기 제1주사기에 RBC 제2수거부를 결합하는 RBC 제2수거부 결합단계;
상기 RBC 제2수거부가 결합된 상기 제1주사기로부터 RBC를 분리하는 제2원심분리단계;
원심분리를 통해 RBC가 수거된 상기 RBC 제2수거부를 제거하는 RBC 제2수거부 제거단계; 및
RBC가 제거된 상기 제1주사기로부터 PRP를 생성하는 PRP 생성단계를 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제11항에 있어서, 상기 전혈채취단계에서는,
상기 제1주사기에 항응고제 및 피를 3:17의 비율로 채우는 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제11항에 있어서, 상기 RBC 제1수거부 결합단계는,
상기 제1주사기의 플런저(Plunger)를 제거하는 플런저 제거단계를 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제13항에 있어서, 상기 제1원심분리단계는,
상기 플런저가 제거된 상기 제1주사기를 원심분리기에 넣고, 상대원심력 1,800g(3,000rpm)로 3분간 동작시키는 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제14항에 있어서, 상기 RBC 제1수거부 제거단계는,
상기 플런저를 재결합하는 플런저 결합단계를 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제15항에 있어서, 상기 RBC 제2수거부 결합단계는,
상기 제1주사기의 플런저(Plunger)를 제거하는 플런저 제거단계를 포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제16항에 있어서, 상기 제2원심분리단계는,
상기 플런저가 제거된 상기 제1주사기를 상대원심력 1,800g(3,000rpm)로 상기 원심분리기를 6분~6분 30초간 동작시키는 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제6항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PRP 생성단계는,
RBC가 제거된 상기 제1주사기에 커플러를 연결하는 커플러 연결단계;
상기 커플러에 제2주사기를 연결하는 제2주사기 연결단계; 및
상기 제1주사기에 있는 PRP를 상기 제2주사기로 이송시키는 PRP 이송단계를포함하는 혈소판 농축혈장 생성방법.
제6항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1주사기는 용량이 10㎖이고, 상기 제2주사기는 용량이 1㎖인 것을 특징으로 하는 혈소판 농축혈장 생성방법.