KR20120082171A - Ｈｖｅｍ 억제제를 유효성분으로 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

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울산대학교 산학협력단
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Abstract

본 발명은 HVEM 억제제를 유효성분으로 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제를 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 갱년기 또는 폐경기 질환의 발병을 예측 또는 진단하는 방법, 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법 및 갱년기 또는 폐경기 질환 치료방법에 관한 것이다. 본 발명에 의하면, 동물모델을 대상으로 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자가 결핍된 마우스에서, HVEM이 발현되고 있는 마우스에 비해 갱년기 또는 폐경기로 발생하는 체중, 피하지방 및 내장지방의 증가가 감소되고, 지방 세포수가 감소되며, 혈청 H2O2 및 혈액 글루코스 농도 또한 감소하는 것을 확인함으로써 본 발명에 따른 HVEM 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

ＨＶＥＭ 억제제를 유효성분으로 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating menopause comprising inhibitor of HVEM as active ingredient}
본 발명은 HVEM 억제제를 유효성분으로 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 이를 이용한 갱년기 또는 폐경기 질환의 치료제를 스크리닝하는 방법에 관한 것이다.
과학과 문명의 발달로 점차 인간의 평균 수명이 연장되어 노년층 인구의 증가와 함께 중년이후의 삶이 길어지고 있고 실질적으로 현대 여성의 삶 중에서 1/3을 폐경전후로 오는 갱년기로 보내게 되므로 이 시기의 삶의 질을 향상시키기 위한 노력들이 이루어지고 있다.
갱년기는 난소기능의 전반적이고 점진적인 감소가 일어나 생리적 기능 및 성기능이 감소 내지 소실되는 과도기를 말하며, 갱년기의 한 과정으로 난소기능이 정지된 후에 일어나는 생리의 영구적인 정지인 폐경(menopause)이 오게 된다. 폐경이 오게 되면 에스트로겐 생성의 감소, 난포자극호르몬(folliclular stimulating hormone, FSH) 및 황체호르몬(luteininzing hormone, LH)의 상승 등 호르몬의 변화에 따른 여러 질환이 발생하게 된다.
상기 호르몬 변화에 따른 질환을 갱년기 질환(climacteric disorder), 폐경기 질환(postmenopausal syndrome) 또는 폐경기 증후군이라고도 불리며, 40대 내지 50대 여성에서 주로 나타난다. 즉, 갱년기 질환은 난소의 노화로 인한 에스트로겐(여성호르몬)의 분비 감소에 기인하며 폐경을 전후로 약 2년 내지 10년에 걸쳐 나타난다.
갱년기는 내분비 증후군의 일종으로 분리되며 난소기능의 전반적이고 점진적인 감소가 일어나 생리적 기능 및 성기능이 감소 내지 소실되는 과도기를 말하며, 갱년기질환의 경우 주로 다섯가지 증상이 나타난다: i) 혈관성 변화에 의한 증상, ii) 근골격계 변화에 의한 증상, iii) 비뇨생식기 변화에 의한 증상, iv) 뇌신경계 변화에 의한 증상 및 v) 일반적 변화에 의한 증상으로 나누어진다. 상기 혈관성 변화에 의한 증상은 주로 안면홍조, 빈맥, 발한 또는 두통 등이 있으며, 상기 근골격계 변화에 의한 증상은 근육통, 관절통 또는 요통 등이 있고, 상기 비뇨생식기 변화에 의한 증상은 빈뇨 또는 요실금 등이 있으며, 상기 뇌신경계 변화에 의한 증상은 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴 및 현기증 등이 있으며, 상기 일반적 변화에 의한 증상은 시력감퇴 또는 피부 및 모발의 변화 등이 있다.
상기 증상들은 정도의 차이가 있으나 폐경 전후 여성의 약 80%가 경험하고 있다고 보고되고 있다. 무엇보다도 주목할 만한 사실은 상기 갱년기 질환은 여성의 생명 및 건강에 영향을 미치는 중요한 변화가 장기간 걸쳐 진행됨으로써 여성의 건강에 치명적인 질환 즉, 골다공증이나 심혈관계질환 등의 발생 위험성이 증가된다는 것이다.
따라서, 중년 여성들의 신체적, 정신적 건강 증진 및 삶의 질의 개선을 위하여 상기 갱년기 질환의 치료제의 개발이 요구되고 있다.
종래 이러한 갱년기 장애 치료를 위하여, 호르몬 대체요법, 비스테로이드계 제제 등의 약물치료법이 개발되었고, 지금까지 가장 효과적으로 알려진 방법은 호르몬 대체요법이다. 그러나, 끊임없이 제기되는 암 발생에 관한 논쟁, 두통, 체중 증가 등의 부작용과 월경 재개 등의 부작용으로 인하여 호르몬 대체요법에 대한 거부감이 증대되면서 이를 대체할 수 있는 치료법의 개발이 요구되고 있다.
한편, HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자는 RANK와 같이 TNFR의 패밀리(family) 구성원 중 하나로서, Herpes simplx virus(HSV) 1DML 수용체로 동정되었다. 그러나 HVEM는 대부분의 TNFR 패밀리와는 달리 TNF 패밀리 리간드, LIGHT 또는 림포톡신 알파(lymphotoxiz a) 뿐만 아니라 면역글로블린 도메인을 갖는 HSV 타입 1 글리코프로테인 D(HSV 1gD), B 또는 T-lynphocyte attenuator(BTLA)와 상호작용하는 것으로 알려져 있다. 또한 LIGHT는 HVEM, 림포톡신 베타 수용체 또는 decot 수용체(DcR3/TR6)와 결합하는 다수의 파트너를 가지고 있으며, 이때 DcR3의 과발현은 골질량을 감소시키며, LIGHT는 골파괴를 촉진시키는 작용을 한다고 밝혀진 바 있다.
그러나 아직까지 HVEM(Herpesvirus-entry mediator)이 갱년기 또는 폐경기 질환 예방 또는 치료에 효과가 있음에 대하여는 구체적으로 알려진 바가 없다.
이에 본 발명자들은 동물모델을 대상으로 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자가 결핍된 마우스에서, HVEM이 발현되고 있는 마우스에 비해 갱년기 또는 폐경기로 발생하는 체중, 피하지방 및 내장지방의 증가가 감소되고, 지방세포수 감소, 혈청 H2O2 및 혈액 글루코스 농도 또한 감소하는 것을 확인하고, 이에 따라 HVEM의 발현을 억제시킬 수 있는 물질의 경우, 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 알아내고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제를 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제를 이용하여 갱년기 또는 폐경기 질환을 예측 또는 진단하는 방법을 제공하는 것이다.
나아가, 본 발명의 또 다른 목적은 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제를 이용하여 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 인간을 제외한 포유동물의 갱년기 또는 폐경기 질환의 치료방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제를 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은
(a) 생물학적 시료에 존재하는 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현양 또는 HVEM 단백질의 양을 측정하는 단계; 및
(b) 상기 (a) 단계의 측정결과를 대조군 시료의 HVEM 유전자의 발현양 또는 HVEM 단백질의 양과 비교하는 단계를 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환의 발병을 예측 또는 진단하는 방법을 제공한다.
나아가, 본 발명은
(a) HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자 또는 HVEM 단백질을 포함하는 세포에 분석하고자 하는 시료를 접촉시키는 단계;
(b) 상기 HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성을 측정하는 단계; 및
(c) 상기 (b) 단계의 측정 결과, HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성이 감소되는 경우에 상기 시료는 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 물질로 판정하는 단계를 포함하는, 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 인간을 제외한 포유동물의 갱년기 또는 폐경기 질환의 치료방법을 제공한다.
본 발명에 의하면, 동물모델을 대상으로 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자가 결핍된 마우스에서, HVEM이 발현되고 있는 마우스에 비해 갱년기 또는 폐경기로 발생하는 체중, 피하지방 및 내장지방의 증가가 감소되고, 지방 세포수가 감소되며, 혈청 H2O2 및 혈액 글루코스 농도 또한 감소하는 것을 확인함으로써 본 발명에 따른 HVEM 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1a는 난소 적제술(OVX) 또는 가식(sham) 수술을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 체중 증가 정도를 나타내는 그래프이다.
도 1b는 난소 적제술(OVX) 또는 가식(sham) 수술을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 피하 지방 질량을 나타내는 그래프이다.
도 1c는 난소 적제술(OVX) 또는 가식(sham) 수술을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 내장 지방 질량을 나타내는 그래프이다.
도 2a는 난소 적제술(OVX)을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 지방 세포수를 나타내는 도면이다.
도 2b는 난소 적제술(OVX)을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 혈청 H2O2의 농도를 나타내는 그래프이다.
도 2c는 난소 적제술(OVX) 또는 가식(sham) 수술을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 혈액 글루코스 농도를 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제를 포함하는 갱년기 또는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 갱년기 또는 폐경기 질환의 치료방법을 찾기 위해 연구하던 중, 동물모델, 즉 마우스를 대상으로 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현을 결핍시켰을 경우, HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자가 발현되는 대조군 마우스에 비해 갱년기 또는 폐경기 질환 증상이 억제된다는 사실을 규명하였다.
본 발명에서 관심대상이 된 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 경우, 이는 RANK와 같이 TNFR의 패밀리(family) 구성원 중 하나로서, Herpes simplx virus(HSV) 1DML 수용체로 동정되었다. 그러나 HVEM는 대부분의 TNFR 패밀리와는 달리 TNF 패밀리 리간드, LIGHT 또는 림포톡신 알파(lymphotoxiz a) 뿐만 아니라 면역글로블린 도메인을 갖는 HSV 타입 1 글리코프로테인 D(HSV 1gD), B 또는 T-lynphocyte attenuator(BTLA)와 상호작용하는 것으로 알려져 있다. 또한 LIGHT는 HVEM, 림포톡신 베타 수용체 또는 decot 수용체(DcR3/TR6)와 결합하는 다수의 파트너를 가지고 있으며, 이때 DcR3의 과발현은 골질량을 감소시키며, LIGHT는 골파괴를 촉진시키는 작용을 한다고 밝혀진 바 있다.
그러나 아직까지 HVEM(Herpesvirus-entry mediator)이 갱년기 또는 폐경기 질환과 관련하여 구체적으로 알려진 바가 없다.
따라서 본 발명의 일실시예에서는 갱년기 또는 폐경기 질환에서 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 역할을 규명하기 위해, HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자가 결핍된 마우스 동물모델을 제작한 후, HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자가 발현되는 대조군 마우스와 함께 난소절제술을 통하여 폐경기의 환경을 조성한 후, 체중, 피하 지방, 내장 지방, 지방 세포수, 혈청 H2O2 및 혈액 글루코스 농도에 대하여 측정한 결과, 도 1a~도 1c에 나타낸 바와 같이, HVEM 결핍 마우스에서 난소 적제술(OVX)에 의하여 유발되는 체중 증가, 피하 지방 및 내장 지방이 감소하는 것으로 나타났으며, 도 2a~도 2c에 나타낸 바와 같이, HVEM이 발현되는 정상 마우스에서는 난소 적제술(OVX)에 의하여 지방 세포수가 증가하고, 혈청 H2O2의 농도 및 혈액 글루코스 농도가 증가하였으나, HVEM 결핍 마우스에서는 난소 적제술(OVX)로 폐경기 또는 갱년기 질환을 유발하였으나 지방 세포수, 혈청 H2O2의 농도 및 혈액 글루코스 농도가 난소 적제술을 하지 않은 정상군과 같은 수준으로 감소하는 것으로 나타났다.
따라서, HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현을 억제할 수 있는 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성을 억제할 수 있는 억제제의 경우 갱년기 증후군에 의하여 발생하는 증상을 억제시킬 수 있다는 사실을 확인함으로써, 본 발명은 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질 활성 억제제를 포함하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명에서 상기 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것일 수 있으며, 상기 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제는 서열번호 1로 표시되는 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA 또는 shRNA을 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 "폐경기 또는 갱년기 질환"이란, 난소의 노화 또는 기능상실로 인한 에스트로겐(여성호르몬)의 분비 감소에 따라 나타나는 하기와 같은 증상, 또는 이로부터 유발되는 질환을 의미한다: i) 혈관성 변화에 의한 증상, ii) 근골격계 변화에 의한 증상, iii) 비뇨생식기 변화에 의한 증상, iv) 뇌신경계 변화에 의한 증상 및 v) 일반적 변화에 의한 증상. 상기 혈관성 변화에 의한 증상은 주로 안면홍조, 빈맥, 발한 또는 두통 등이 있으며, 상기 근골격계 변화에 의한 증상은 근육통, 관절통 또는 요통 등이 있고, 상기 비뇨생식기 변화에 의한 증상은 빈뇨 또는 요실금 등이 있으며, 상기 뇌신경계 변화에 의한 증상은 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴 및 현기증 등이 있으며, 상기 일반적 변화에 의한 증상은 시력감퇴 또는 피부 및 모발의 변화 등을 들 수 있다.
또한, 상기 본 발명에 따른 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 폐경기 또는 갱년기 질환의 치료효과를 극대화할 수 있는 부가의 화학물질, 뉴클레오티드 또는 천연물 추출물을 더 포함할 수 있다.
또한, 상기 본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 약학적으로 허용되는 담체로는 예를 들면, 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등과 같은 경구 투여용 담체 및 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등과 같은 비경구 투여용 담체 등이 있으며 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르 브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995). 본 발명에 따른 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 적합한 형태로 제형화 될 수 있다. 즉, 본 발명의 약학적 조성물은 공지의 방법에 따라 다양한 비경구 또는 경구 투여용 형태로 제조될 수 있으며, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것으로는 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. 주사용 제형은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 당업계에 공지된 기술에 따라 제조할 수 있다. 예를 들면, 각 성분을 식염수 또는 완충액에 용해시켜 주사용으로 제형화될 수 있다. 또한, 경구 투여용 제형으로는, 이에 한정되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 환약 및 캡슐 등이 있다.
상기와 같은 방법으로 제형화된 약학적 조성물은 유효량으로 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있는데, 상기 "투여"란 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 물질의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다.
또한, 상기에서 "유효량"이란 환자에게 투여하였을 때, 예방 또는 치료 효과를 나타내는 양을 말한다. 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여량은 환자의 질환 종류 및 중증도, 연령, 성별, 체중, 약물에 대한 민감도, 현재 치료법의 종류, 투여방법, 표적 세포 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 종래의 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 바람직하게는 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1~10000㎍/체중kg/day, 더욱더 바람직하게는 10~1000㎎/체중kg /day의 유효용량으로 하루에 수회 반복 투여될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함될 수 있는 유효성분인 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 단백질의 발현 억제제는 바람직하게 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 이의 기능적 동등물의 억제, 감소 또는 방해 활성을 갖는 물질이라면 모두 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 "기능적 동등물"이란, 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 보다 바람직하게는 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로서 본 발명의 HVEM과 실질적으로 동질의 활성을 나타내는 폴리펩티드를 말한다. 여기서, "실질적으로 동질의 활성"이란 상기에서 기재한 HVEM의 활성을 의미한다. 상기 기능적 동등물에는, 예를 들어, 본 발명에 따른 HVEM의 아미노산 서열의 아미노산 중 일부가 치환되거나, 결실 또는 부가된 아미노산 서열 변형체가 포함될 수 있다. 아미노산의 치환은 바람직하게는 보존적 치환일 수 있으며, 천연에 존재하는 아미노산의 보존적 치환의 예는 다음과 같다; 지방족 아미노산(Gly, Ala, Pro), 소수성 아미노산(Ile, Leu, Val), 방향족 아미노산(Phe, Tyr, Trp), 산성 아미노산 (Asp, Glu), 염기성 아미노산 (His, Lys, Arg, Gln, Asn) 및 황함유 아미노산(Cys, Met). 아미노산의 결실은 바람직하게는 본 발명의 lin-28의 활성에 직접 관여하지 않는 부분에 위치할 수 있다. 또한 상기 기능적 동등물의 범위에는 HVEM의 기본 골격 및 이의 생리 활성을 유지하면서 폴리펩티드의 일부 화학 구조가 변형된 폴리펩티드 유도체도 포함될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드의 안정성, 저장성, 휘발성 또는 용해도 등을 변경시키기 위한 구조변경 및 생리활성을 유지하면서 다른　단백질과 융합으로 만들어진　융합단백질 등이 이에 포함될 수 있다.
또한, 본 발명은 HVEM 유전자를 이용하여 폐경기 또는 갱년기 질환의 발병을 예측 또는 진단할 수 있는 방법을 제공할 수 있는데, 바람직하게 본 발명에 따른 폐경기 또는 갱년기 질환 발병 예측 또는 진단방법은,
(a) 생물학적 시료에 존재하는 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현양 또는 HVEM 단백질의 양을 측정하는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 측정결과를 대조군 시료의 HVEM 유전자의 발현양 또는 HVEM 단백질의 양과 비교하는 단계를 포함할 수 있다.
여기서 상기 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현양을 측정하는 방법은 바람직하게 HVEM 유전자가 발현된 mRNA 수준, 즉, mRNA의 양을 측정하는 방법일 수 있으며, 상기 수준을 측정할 수 있는 물질로는 HVEM 유전자에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함할 수 있다. 본 발명에서 상기 HVEM 유전자에 특이적인 프라이머 또는 프로브는 서열번호 1로 나타내는 HVEM 유전자 전체 또는 유전자의 특정 영역을 특이적으로 증폭할 수 있는 프라이머 또는 프로브일 수 있으며, 상기 프라이머 또는 프로브는 당업계에 알려진 방법을 통해 디자인할 수 있다.
본 발명에서 상기 "프라이머"란 용어는 적합한 온도 및 적합한 완충액 내에서 적합한 조건(즉, 4종의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 중합반응 효소) 하에서 주형-지시 DNA 합성의 개시점으로 작용할 수 있는 단일-가닥 올리고뉴클레오타이드를 의미한다. 프라이머의 적합한 길이는 다양한 요소, 예컨대, 온도와 프라이머의 용도에 따라 변화가 있을 수 있다. 또한, 프라이머의 서열은 주형의 일부 서열과 완전하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, 주형과 혼성화되어 프라이머 고유의 작용을 할 수 있는 범위 내에서의 충분한 상보성을 가지면 충분하다. 따라서 본 발명에서의 프라이머는 주형인 HVEM 유전자의 뉴클레오타이드 서열에 완벽하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, 이 유전자 서열에 혼성화되어 프라이머 작용을 할 수 있는 범위 내에서 충분한 상보성을 가지면 충분하다. 또한, 본 발명에 따른 프라이머는 유전자 증폭 반응에 이용될 수 있는 것이 바람직하다.
상기 "증폭 반응"은 핵산 분자를 증폭하는 반응을 말하며, 이러한 유전자의 증폭 반응들에 대해서는 당업계에 잘 알려져 있고, 예컨대, 중합효소 연쇄반응(PCR), 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR), 리가아제 연쇄반응(LCR), 전자 중재 증폭(TMA), 핵산 염기서열 기판 증폭(NASBA) 등이 포함될 수 있다.
본 발명에서, 상기 "프로브"라는 용어는 자연의 또는 변형된 모노머 또는 연쇄(linkages)의 선형 올리고머를 의미하며, 디옥시리보뉴클레오타이드 및 리보뉴클레오타이드를 포함하고 타켓 뉴클레오타이드 서열에 특이적으로 혼성화할 수 있으며, 자연적으로 존재하거나 또는 인위적으로 합성된 것을 말한다. 본 발명에 따른 프로브는 단일쇄일 수 있으며, 바람직하게는 올리고디옥시리보뉴클레오티드일 수 있다. 본 발명의 프로브는 자연 dNMP(즉, dAMP, dGMP, dCMP 및 dTMP), 뉴클레오타이드 유사체 또는 유도체를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 프로브는 리보뉴클레오타이드도 포함할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 프로브는 골격 변형된 뉴클레오타이드, 예컨대, 펩타이드 핵산 (PNA) (M. Egholm et al., Nature, 365:566-568(1993)), 포스포로티오에이트 DNA, 포스포로디티오에이트 DNA, 포스포로아미데이트 DNA, 아마이드-연결된 DNA, MMI-연결된 DNA, 2'-O-메틸 RNA, 알파-DNA 및 메틸포스포네이트 DNA, 당 변형된 뉴클레오타이드 예컨대, 2'-O-메틸 RNA, 2'-플루오로 RNA, 2'-아미노 RNA, 2'-O-알킬 DNA, 2'-O-알릴 DNA, 2'-O-알카이닐 DNA, 헥소스 DNA, 피라노실 RNA 및 안히드로헥시톨 DNA, 및 염기 변형을 갖는 뉴클레오타이드 예컨대, C-5 치환된 피리미딘(치환기는 플루오로-, 브로모-, 클로로-, 아이오도-, 메틸-, 에틸-, 비닐-, 포르밀-, 에티틸-, 프로피닐-, 알카이닐-, 티아조릴-, 이미다조릴-, 피리딜- 포함), C-7 치환기를 갖는 7-데아자퓨린 (치환기는 플루오로-, 브로모-, 클로로-, 아이오도-, 메틸-, 에틸-, 비닐-, 포르밀-, 알카이닐-, 알켄일-, 티아조릴-, 이미다조릴-, 피리딜-), 이노신 및 디아미노퓨린을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 HVEM 단백질의 양을 측정할 수 있는 물질로는 HVEM 단백질에 대해 특이적으로 결합할 수 있는 다클론 항체, 단일클론 항체 및 재조합 항체 등의 "항체"를 포함할 수 있다.
상기 HVEM 단백질의 양을 측정할 수 있는 HVEM 단백질에 대한 항체의 경우, 시중에서 판매하고 있는 HVEM 단백질에 대한 항체라면 모두 사용 가능하며 또는 상기 항체를 제조하여 사용할 수 있는데, 항체 제조 방법은 당해 기술분야의 일반적 기술자가 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 예컨대, 다클론 항체의 경우에는 HVEM 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 생산할 수 있으며, 이러한 다클론 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조가능하다. 단일클론 항체의 경우에는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마(hybridoma) 방법(Kohler et al., European Jounral of Immunology, 6, 511-519, 1976)을 이용하여 제조할 수 있거나 또는 파지 항체 라이브러리(Clackson et al, Nature, 352, 624-628, 1991, Marks et al, J. Mol. Biol., 222:58, 1-597, 1991) 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 기능적인 단편을 포함할 수 있다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며, Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등이 있다.
이와 같이, HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현양 또는 HVEM단백질의 양의 측정은 앞서 기재된 HVEM에 대한 프라이머, 프로브 및 항체와 같은 물질을 이용하여 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 면역침전분석법(immunoprecipitation assay) 및 면역조직 화학적 분석(immunohistochemical analysis)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 방법을 이용하여 측정할 수 있다.
바람직하게, 상기 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현양을 측정하는 방법은 바람직하게는 mRNA의 수준을 측정하는 것이며, mRNA의 수준을 측정하는 방법으로는 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소연쇄반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏 및 DNA 칩 등이 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
또한, 상기 HVEM 단백질 수준의 측정은 항체를 이용할 수 있는데, 이러한 경우, 생물학적 시료 내의 HVEM 단백질과 이에 특이적인 항체 결합물, 즉, 항원-항체 복합체를 형성하며, 항원-항체 복합체의 형성양은 검출 라벨(detection label)의 시그널의 크기를 통해서 정량적으로 측정할 수 있다. 이러한 검출 라벨은 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 레독스 분자 및 방사선 동위원소로 이루어진 그룹 중에서 선택할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
단백질 수준을 측정하기 위한 분석 방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 웨스턴 블랏, ELISA, 방사선면역분석, 방사선 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법, 보체 고정분석법, FACS, 단백질 칩 등을 사용할 수 있다.
나아가 본 발명은,
(a) HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자 또는 HVEM 단백질을 포함하는 세포에 분석하고자 하는 시료를 접촉시키는 단계; (b) 상기 HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성을 측정하는 단계; 및 (c) 상기 (b) 단계의 측정 결과, HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성이 감소되는 경우에 상기 시료는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 또는 치료용 물질로 판정하는 단계를 포함하는, 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법을 제공할 수 있다.
본 발명의 방법에 따르면, 먼저 HVEM 유전자 또는 HVEM 단백질을 포함하는 세포에 분석하고자 하는 시료를 접촉시킬 수 있다. 여기서 상기 "시료"는 HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성에 영향을 미치는지 여부를 검사하기 위하여 스크리닝에서 이용되는 미지의 물질을 의미한다. 상기 시료는 화학물질, 뉴클레오티드, 안티센스-RNA, siRNA(small interference RNA) 및 천연물 추출물을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 이후, 시료가 처리된 세포에서 HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성을 측정할 수 있으며, 측정 결과, HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성이 감소된 것이 측정되면 상기 시료는 폐경기 또는 갱년기 질환을 치료 또는 예방할 수 있는 물질로 판정될 수 있다.
상기에서 HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성을 측정하는 방법은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 수행될 수 있는데, 예를 들면, 이에 제한되지는 않으나, 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블랏, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 면역침전분석법(immunoprecipitation assay) 및 면역조직화학적 분석(immunohistochemical analysis)등을 이용하여 수행할 수 있다.
뿐만 아니라 본 발명은 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 인간을 제외한 포유동물의 폐경기 또는 갱년기 질환의 치료방법을 제공할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자가 결핍된 마우스는 HVEM 유전자가 발현되는 마우스에 비해 폐경기 또는 갱년기 질환으로 발생되는 체중 증가, 피하지방 증가, 내장지방 증가, 지방 세포수 증가, H2O2 농도 증가, 혈액 글루코스 농도 증가 등의 현상이 감소되는 것으로 나타났다.
따라서 상기 HVEM 유전자의 발현을 저해하면 폐경기 또는 갱년기 질환을 예방 또는 치료할 수 있다.
본 발명에 따른 치료방법은 본 발명의 일실시예에서 수행한 방법 이외에도 시험관 내에서 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현을 억제할 수 있는 당업계에 공지된 방법, 예컨대 HVEM에 대한 siRNA 또는 안티센스올리고뉴클레오티드의 사용 등과 같은 방법을 이용할 수 있으며, 또는 시험관 내에서 HVEM 단백질의 활성을 억제 또는 감소할 수 있는 물질을 처리하는 방법을 통해서도 수행할 수 있으며, 이에 제한되지는 않는다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1>
HVEM 의 유무에 의한 폐경기 또는 갱년기 증상의 영향 측정
<1-1> HVEM 결핍 마우스의 제작
폐경기 또는 갱년기 증후군에 HVEM이 어떠한 역할을 하는지 알아보기 위해 먼저 다음과 같이 HVEM이 결핍된 마우스를 제작하였다.
6주령 된 C57BL/6J (B/6) 마우스를 잭슨 실험실에서 구입하여, 울산 대학교 내 면역조절 연구 센터(Immunomodulation Research Center; IRC)에서 사육하였으며, 상기 6주령 된 C57BL/6 마우스를 기반으로 울산 대학교 내 면역조절 연구 센터에 의해 HVEM-/- (KO) 마우스가 제공되었다.
구체적으로, HVEM mRNA 서열로부터 유래된 HVEM 특이 프로브를 이용하여 129/SvEv 박테리오파지 라이브러리로부터 HVEM 좌위(locus)를 함유한 마우스 게놈성 클론을 분리하였다. 이후, 이러한 클론을 갖는 타겟 벡터에서 인트론 4에 존재하는 KpnI 제한효소 사이트에서부터 인트론 9에 존재하는 HindIII 제한효소 사이트를 이용하여 4.8Kb의 절편을 잘라낸 후, 그 부위에 pJNS에 존재하는 neo gene으로 치환시켰다. 이렇게 제작된 재조합 플라스미드는 전기천공법(electroporate)을 이용하여 배아세포인 ES 세포에 도입시킨 후, 네오마이신 및 간시클로빌(ganciclovir)을 처리하여 이에 대한 저항성을 갖는 균주를 동정하였다. 이후, 저항성을 갖는 클론으로부터 DNA를 추출한 후, KpnI 제한효소로 DNA를 절단한 다음, HVEM 유전자의 하위에 존재하는 프로브를 이용하여 서던 블럿을 수행함으로써 HVEM 유전자의 파괴(결핍)를 확인하였고, HVEM-타겟된 ES 세포주로부터 키메라 마우스를 생산하였으며, 번식시켜 B6D2 마우스를 생산하였다. 자손 마우스의 유전자형은 상기 기술된 프로브를 이용하여 꼬리의 DNA를 대상으로 서던블럿을 통해 분석하였으며, 이형 마우스는 12번 역교배시켜 HVEM이 결핍된 C57BL/6 마우스를 생산하였다. 또한, 하기 실시예들에서 대조군으로는 HVEM이 결핍되지 않은 마우스를 사용하였다.
<1-2> 체중, 피하 지방, 내장 지방 측정
HVEM 유전자가 폐경기 또는 갱년기 증후군에 의한 체중 변화에 어떠한 영향을 미치는지 확인하기 위해, 상기 (1)에서 제작한 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스(실험에 사용한 마우스들은 모두 면역조절연구센터의 무균 동물 사육실에서 사육하였으며, 실험동물운영위원회에서 제공하는 규칙에 따라 취급하였음)에 난소 적제술(OVX)(n = 5-6) 또는 가식(sham) 수술(n = 5)을 수행하여 폐경기 또는 갱년기 증후군을 발생시켰다. 이후 마우스들은 마우스들은 칼슘(1.75%, w/w)의 양을 함유한 비정제된 식이를 8주 동안 섭취한 후, 분석되었다.
이후, 상기 마우스로부터 대퇴골과 경골을 분리하였는데 이때 부착된 연조직이 없도록 절개하였고 무균상태로 분리하였다.
마우스를 사망시킬 때, 복강내, 복강외 및 골반 지방 조직을 포함하는 피하 및 내장 지방은 각 마우스마다 자유롭게 공동으로 절개되었고, 무게를 잰 다음 추가 사용을 위하여 냉동 보관하였다.
모든 측정값은 평균±SEM로 표현되었다. 실시예의 시료와 대응되는 대조군 사이의 차이를 평가하기 위하여 학생 t-테스트(Students t-test)가 사용되었다.
각 군 간의 차이는 2-방식 ANOVA, 이후 Bonferroni posttests에 의해 평가되었다. P 값은 0.05 미만인 경우 통계적으로 유의한 것으로 고려되었다.
측정 결과를 도 1a~도 1c에 나타내었다. 여기서 도 1a는 난소 적제술(OVX) 또는 가식(sham) 수술을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 체중 증가 정도를 나타내는 그래프이고, 도 1b는 난소 적제술(OVX) 또는 가식(sham) 수술을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 피하 지방 크기를 나타내는 그래프이고, 도 1c는 난소 적제술(OVX) 또는 가식(sham) 수술을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 내장 지방 크기를 나타내는 그래프이다.
도 1a~도 1c에 나타낸 바와 같이, HVEM 결핍 마우스에서 난소 적제술(OVX)에 의하여 유발되는 체중 증가, 피하 지방 및 내장 지방이 감소하는 것으로 나타났다.
따라서, HVEM의 억제는 갱년기 증후군에 의하여 발생하는 증상을 억제시키므로 갱년기 증후군의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
<1-3> 지방세포, 혈청 H 2 O 2 및 혈액 글루코스 측정
HVEM 유전자가 폐경기 또는 갱년기 증후군에 의한 증상에 어떠한 영향을 미치는지 확인하기 위해, 상기 (1)에서 제작한 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스(실험에 사용한 마우스들은 모두 면역조절연구센터의 무균 동물 사육실에서 사육하였으며, 실험동물운영위원회에서 제공하는 규칙에 따라 취급하였음)에 난소 적제술(OVX)(n = 5-6) 또는 가식(sham) 수술(n = 5)을 수행하여 폐경기 또는 갱년기 증후군을 발생시켰다. 이후 마우스들은 마우스들은 칼슘(1.75%, w/w)의 양을 함유한 비정제된 식이를 8주 동안 섭취한 후, 분석되었다.
혈액을 마우스 꼬리 정맥을 통해 수집한 다음 혈액 글루코스 모니터링 시스템(i-SENS, Inc., Seoul, Korea)을 이용하여 글루코스 모니터링을 수행하였다.
혈청 과산화수소를 Amplex Red 과산화수소 측정 키트(Invitrogen Corp.)를 이용하여 측정하였다.
매개체(vehicle) 또는 커큐민이 처리된 가식(sham) 및 OVX 마우스로부터 내장 지방 및 경골을 절개하여 45 mM NaCl, 5.7 mM 인산나트륨, 4.86 mM KCl, 0.54 mM CaCl2, 1.22 mM MgSO4, 및 5.5. mM 글루코스가 함유된 Krebs-Ringer 포스페이트 완충액(pH 7.4)에 넣었다. 이후 내장 지방 및 경골을 2 mm 사각형 조각으로 자른 후 37 ℃에서 90분 동안 배양하였다. 각 조직으로부터 방출되는 H2O2를 Amplex Red hydrogen peroxide assay kit(Invitrogen Corp.)를 이용하여 측정하였다.
모든 측정값은 평균±SEM로 표현되었다. 실시예의 시료와 대응되는 대조군 사이의 차이를 평가하기 위하여 학생 t-테스트(Students t-test)가 사용되었다.
각 군 간의 차이는 2-방식 ANOVA, 이후 Bonferroni posttests에 의해 평가되었다. P 값은 0.05 미만인 경우 통계적으로 유의한 것으로 고려되었다.
측정 결과를 도 2a~도 2c에 나타내었는데, 도 2a는 난소 적제술(OVX)을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 지방 세포수를 나타내는 도면이고, 도 2b는 난소 적제술(OVX)을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 혈청 H2O2의 농도를 나타내는 그래프이고, 도 2c는 난소 적제술(OVX) 또는 가식(sham) 수술을 받은 HVEM 결핍 마우스와 HVEM 발현 대조군 마우스의 혈액 글루코스 농도를 나타내는 그래프로서, 상기 분석 결과에 따르면, 도 2a~도 2c에 나타낸 바와 같이, HVEM이 발현되는 정상 마우스에서는 난소 적제술(OVX)에 의하여 지방 세포수가 증가하고, 혈청 H2O2의 농도 및 혈액 글루코스 농도가 증가하였으나, HVEM 결핍 마우스에서는 난소 적제술(OVX)로 폐경기 또는 갱년기 질환을 유발하였으나 지방 세포수, 혈청 H2O2의 농도 및 혈액 글루코스 농도가 난소 적제술을 하지 않은 정상군과 같은 수준으로 감소하는 것으로 나타났다.
따라서, HVEM의 억제는 갱년기 증후군에 의하여 발생하는 증상을 억제시키므로 갱년기 증후군의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
<110> Industry Academic Cooperation Foundation of Ulsan University <120> Pharmaceutical composition for preventing or treating menopause comprising inhibitor of HVEM as active ingredient <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1730 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HVEM cDNA sequence <400> 1 ccttcatacc ggcccttccc ctcggctttg cctggacagc tcctgcctcc cgcagggccc 60 acctgtgtcc cccagcgccg ctccacccag caggcctgag cccctctctg ctgccagaca 120 ccccctgctg cccactctcc tgctgctcgg gttctgaggc acagcttgtc acaccgaggc 180 ggattctctt tctctttctc tttctcttct ggcccacagc cgcagcaatg gcgctgagtt 240 cctctgctgg agttcatcct gctagctggg ttcccgagct gccggtctga gcctgaggca 300 tggagcctcc tggagactgg gggcctcctc cctggagatc cacccccaaa accgacgtct 360 tgaggctggt gctgtatctc accttcctgg gagccccctg ctacgcccca gctctgccgt 420 cctgcaagga ggacgagtac ccagtgggct ccgagtgctg ccccaagtgc agtccaggtt 480 atcgtgtgaa ggaggcctgc ggggagctga cgggcacagt gtgtgaaccc tgccctccag 540 gcacctacat tgcccacctc aatggcctaa gcaagtgtct gcagtgccaa atgtgtgacc 600 cagccatggg cctgcgcgcg agccggaact gctccaggac agagaacgcc gtgtgtggct 660 gcagcccagg ccacttctgc atcgtccagg acggggacca ctgcgccgcg tgccgcgctt 720 acgccacctc cagcccgggc cagagggtgc agaagggagg caccgagagt caggacaccc 780 tgtgtcagaa ctgccccccg gggaccttct ctcccaatgg gaccctggag gaatgtcagc 840 accagaccaa gtgcagctgg ctggtgacga aggccggagc tgggaccagc agctcccact 900 gggtatggtg gtttctctca gggagcctcg tcatcgtcat tgtttgctcc acagttggcc 960 taatcatatg tgtgaaaaga agaaagccaa ggggtgatgt agtcaaggtg atcgtctccg 1020 tccagcggaa aagacaggag gcagaaggtg aggccacagt cattgaggcc ctgcaggccc 1080 ctccggacgt caccacggtg gccgtggagg agacaatacc ctcattcacg gggaggagcc 1140 caaaccactg acccacagac tctgcacccc gacgccagag atacctggag cgacggctgc 1200 tgaaagaggc tgtccacctg gcggaaccac cggagcccgg aggcttgggg gctccgccct 1260 gggctggctt ccgtctcctc cagtggaggg agaggtgggg cccctgctgg ggtagagctg 1320 gggacgccac gtgccattcc catgggccag tgagggcctg gggcctctgt tctgctgtgg 1380 cctgagctcc ccagagtcct gaggaggagc gccagttgcc cctcgctcac agaccacaca 1440 cccagccctc ctgggccagc ccagagggcc cttcagaccc cagctgtctg cgcgtctgac 1500 tcttgtggcc tcagcaggac aggccccggg cactgcctca cagccaaggc tggactgggt 1560 tggctgcagt gtggtgttta gtggatacca catcggaagt gattttctaa attggatttg 1620 aattcggctc ctgttttcta tttgtcatga aacagtgtat ttggggagat gctgtgggag 1680 gatgtaaata tcttgtttct cctcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1730 <210> 2 <211> 283 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HVEM amino acid sequence <400> 2 Met Glu Pro Pro Gly Asp Trp Gly Pro Pro Pro Trp Arg Ser Thr Pro 1 5 10 15 Lys Thr Asp Val Leu Arg Leu Val Leu Tyr Leu Thr Phe Leu Gly Ala 20 25 30 Pro Cys Tyr Ala Pro Ala Leu Pro Ser Cys Lys Glu Asp Glu Tyr Pro 35 40 45 Val Gly Ser Glu Cys Cys Pro Lys Cys Ser Pro Gly Tyr Arg Val Lys 50 55 60 Glu Ala Cys Gly Glu Leu Thr Gly Thr Val Cys Glu Pro Cys Pro Pro 65 70 75 80 Gly Thr Tyr Ile Ala His Leu Asn Gly Leu Ser Lys Cys Leu Gln Cys 85 90 95 Gln Met Cys Asp Pro Ala Met Gly Leu Arg Ala Ser Arg Asn Cys Ser 100 105 110 Arg Thr Glu Asn Ala Val Cys Gly Cys Ser Pro Gly His Phe Cys Ile 115 120 125 Val Gln Asp Gly Asp His Cys Ala Ala Cys Arg Ala Tyr Ala Thr Ser 130 135 140 Ser Pro Gly Gln Arg Val Gln Lys Gly Gly Thr Glu Ser Gln Asp Thr 145 150 155 160 Leu Cys Gln Asn Cys Pro Pro Gly Thr Phe Ser Pro Asn Gly Thr Leu 165 170 175 Glu Glu Cys Gln His Gln Thr Lys Cys Ser Trp Leu Val Thr Lys Ala 180 185 190 Gly Ala Gly Thr Ser Ser Ser His Trp Val Trp Trp Phe Leu Ser Gly 195 200 205 Ser Leu Val Ile Val Ile Val Cys Ser Thr Val Gly Leu Ile Ile Cys 210 215 220 Val Lys Arg Arg Lys Pro Arg Gly Asp Val Val Lys Val Ile Val Ser 225 230 235 240 Val Gln Arg Lys Arg Gln Glu Ala Glu Gly Glu Ala Thr Val Ile Glu 245 250 255 Ala Leu Gln Ala Pro Pro Asp Val Thr Thr Val Ala Val Glu Glu Thr 260 265 270 Ile Pro Ser Phe Thr Gly Arg Ser Pro Asn His 275 280

Claims (11)

  1. HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제 또는 HVEM 단백질의 활성 억제제를 포함하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현 억제제는 서열번호 1로 표시되는 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA 또는 shRNA인 것을 특징으로 하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 HVEM 단백질은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  5. (a) 생물학적 시료에 존재하는 HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현양 또는 HVEM 단백질의 양을 측정하는 단계; 및
    (b) 상기 (a) 단계의 측정결과를 대조군 시료의 HVEM 유전자의 발현양 또는 HVEM 단백질의 양과 비교하는 단계를 포함하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 발병을 예측 또는 진단하는 방법.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 HVEM 유전자는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 발병을 예측 또는 진단하는 방법.
  7. 제5항에 있어서,
    상기 HVEM 단백질은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 발병을 예측 또는 진단하는 방법.
  8. 제5항에 있어서,
    상기 측정은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 면역침전분석법(immunoprecipitation assay) 및 면역조직 화학적 분석(immunohistochemical analysis)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 발병을 예측 또는 진단하는 방법.
  9. (a) HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자 또는 HVEM 단백질을 포함하는 세포에 분석하고자 하는 시료를 접촉시키는 단계;
    (b) 상기 HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성을 측정하는 단계; 및
    (c) 상기 (b) 단계의 측정 결과, HVEM 유전자의 발현양, HVEM 단백질의 양 또는 HVEM 단백질의 활성이 감소되는 경우에 상기 시료는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 또는 치료용 물질로 판정하는 단계를 포함하는, 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 (b) 단계의 측정은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 면역침전분석법(immunoprecipitation assay) 및 면역조직화학적 분석(immunohistochemical analysis)으로 이루어진 군중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 폐경기 또는 갱년기 질환의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법.
  11. HVEM(Herpesvirus-entry mediator) 유전자의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 인간을 제외한 포유동물의 폐경기 또는 갱년기 질환의 치료방법.
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