KR20120078064A

KR20120078064A - 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20120078064A
Application number: KR1020100140237A
Authority: KR
Inventors: 이정노; 박선희; 이강태; 이건국
Original assignee: 주식회사 코리아나화장품
Priority date: 2010-12-31
Filing date: 2010-12-31
Publication date: 2012-07-10
Also published as: KR101248549B1

Abstract

본 발명은 항염 및 항균 성능이 있고 피부노화 또는 피부주름을 방지할 수 있으며 피부 미백 효과도 있는 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물{Salvia plebeia extract, 3′,4′,5,6,7-pentahydroxyflavanone and Method for manufacturing the same, Cosmetic composition produced therefrom}

본 발명은 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 항염 및 항균 성능이 있고 피부노화를 방지하며 피부 미백을 증진시킬 수 있는 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부의 노화는 활성화된 자유 라디칼에 의해 생체 내에 존재하는 항산화 방어막이 파괴되고, 그로 인해 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화됨으로써 피부 세포 및 조직이 파괴되어 발생할 수 있다.

이러한 피부 노화를 방지하기 위해서는 여러 원인에 의해 발생하는 자유 라디칼을 소거함으로써 피부 손상을 방지하고 활발한 신진 대사를 통해 이미 손상된 세포를 재생 및 증식시켜 피부를 회복시켜야 한다.

또한, 피부 노화는 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해효소(Matrix Metalloproteinase, 이하 "MMP"라 한다)에 의해서 촉진될 수 있다. 즉, 노화가 진행되면 콜라겐 합성이 감소하고 콜라겐 분해효소인 MMP의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 생기게 된다. 따라서, 피부 노화 및 주름발생을 방지하기 위해서는 세포 내에서 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제해야 한다.

한편, 피부 노화와 별개로 피부색이 변화하는 문제가 있는데, 이러한 피부색변화의 주요 원인은 색소 침착이다. 일반적으로, 피부색에 영향을 미치는 색소는 멜라닌, 멜라노이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데, 이중 멜라닌은 자체적으로 활성 산소를 발생시키고 멜라닌 구조 내의 카테콜 또는 퀴논에 의해서 다른 물질을 환원 또는 산화시키며 자체적으로 자유 라디칼의 성질을 나타내기도 한다. 따라서, 피부 변색을 방지하기 위해서는 멜라닌 생성을 억제할 필요가 있다.

이에 따라 피부 노화를 방지하고 피부 미백을 향상시키기 위한 새로운 물질의 개발이 절실한 상태이다.

본 발명은 상기 문제점을 해결하고자 하는 것으로서, 항염 및 항균 성능이 있고 피부노화 또는 피부주름을 방지할 수 있으며 피부 미백 효과도 있는 곰보 배추 추출물, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 그 제조방법, 이로부터 제조된 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위한 일 측면으로서 본 발명은, 다음 화학식으로 표시되는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(pentahydroxyflavanone)을 포함하는 곰보 배추 추출물을 제공한다.

[화학식]

다른 측면으로서 본 발명은, 상기 곰보 배추 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 또는 피부주름 개선용 또는 피부 미백용 또는 항염 또는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.

또 다른 측면으로서 본 발명은, 곰보 배추 추출물로부터 추출되고 상기 화학식으로 표시되는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(pentahydroxyflavanone)을 제공한다.

또 다른 측면으로서 본 발명은, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 또는 피부주름 개선용 또는 피부 미백용 또는 항염 또는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.

또 다른 측면으로서 본 발명은, 곰보 배추에 알코올을 첨가하고 교반하여 여액을 얻는 공정; 및 상기 여액을 감압 건조하는 공정을 포함하는 곰보 배추 추출물의 제조방법을 제공한다.

또 다른 측면으로서 본 발명은, 상기 곰보 배추 추출물을 제조하는 공정; 상기 곰보 배추 추출물을 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 차례로 분획하여 분획물을 제조하는 공정; 상기 분획물 중 디클로로메탄 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매 및 230-400 메쉬가 충진된 컬럼에서 크로마토그래피를 수행하여 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 제조하는 공정; 상기 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 얇은 막크로마토그래피를 수행하여 Rf가 0.43 내지 5.0까지 분획된 농축물을 제조하는 공정; 상기 농축물을 트리클로로메탄/메탄올 혼합용매에서 크로마토그래피를 수행하여 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 제조하는 공정; 및 상기 클로로메탄/메탄올 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매를 이용하여 재결정하는 공정을 포함하는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 제조방법을 제공한다.

본 발명은 다음과 같은 효과가 있다.

첫째, 본 발명에 따른 곰보 배추 추출물 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물과 곰보 배추 추출물로부터 분리된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 MMP-1의 생성을 억제하고 콜라겐의 합성을 증진시킴으로써 피부노화 또는 피부주름을 방지할 수 있다.

둘째, 본 발명에 따른 곰보 배추 추출물 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물과 곰보 배추 추출물로부터 분리된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 멜라닌 생성을 억제할 수 있기 때문에 피부 미백 효과가 있다.

셋째, 본 발명에 따른 곰보 배추 추출물 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물과 곰보 배추 추출물로부터 분리된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 자외선조사에 의한 염증성 사이토카인 발현을 억제함으로써 항염 효과 및 곰팡이 및 박테리아 등에 대해 항균 효과가 있다.

도 1은 실험예 2의 자유 라디칼 소거율 실험에서 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 농도에 따른 자유 라디칼 소거율을 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명에 대해서 상세히 설명하기로 한다.

먼저, 본 발명의 곰보 배추 추출물 및 이로부터 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논에 대해서 상세히 설명하기로 한다.

본 발명의 곰보 배추 추출물은 다음 화학식으로 표시되는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함한다.

[화학식]

또한 본 발명의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 상기 곰보 배추 추출물로부터 추출되고 상기 화학식으로 표시된다.

본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 피부노화방지 또는 피부주름방지 용도로 사용될 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 후술하는 실험예 1 및 2에서 알 수 있듯이 항산화 효과를 나타냄에 따라 피부노화방지 용도로 사용될 수 있고, 후술하는 실험예 3 및 실험예 4에서 알 수 있듯이 MMP-1 생성 억제 효과와 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄에 따라 피부주름개선 용도로 사용될 수 있다.

즉, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 1 및 2에서 나타낸 바와 같이, 활성산소 또는 자유 라디칼을 소거함으로써 피부 세포 및 조직의 산화를 방지함에 따라 피부 노화를 방지할 수 있다. 또한, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 3에서 나타낸 바와 같이, MMP-1 생성을 억제함으로써 콜라겐의 분해를 방지함에 따라 피부 탄력 저하 및 피부 주름 생성을 방지할 수 있다. 또한, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 4에서 나타낸 바와 같이, 콜라겐 합성을 증진시킴으로써 피부 탄력 저하 및 피부 주름 생성을 방지할 수 있다.

본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 피부 미백 용도로 사용될 수 있다.

구체적으로, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 후술하는 실험예 5에서 알 수 있듯이, 멜라닌 생성을 억제함에 따라 피부 미백 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

즉, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 5에서 나타낸 바와 같이, 색소 침착을 일으킬 수 있는 멜라닌 색소의 생성을 억제함으로써 피부 변색을 방지할 수 있다.

본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 항염증 용도로 사용될 수 있다.

구체적으로, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 6에서 나타낸 바와 같이, 자외선조사에 의한 염증성 사이토카인 발현을 억제함으로써 항염 효과를 나타낼 수 있기 때문에 항염 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 항균 용도로 사용될 수 있다.

구체적으로, 상기 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은, 실험예 10에서 나타낸 바와 같이 상기 곰보 배추 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료가 항균 효과를 나타냄에 따라 이로부터 간접적으로 항균 효과가 있다는 것을 알 수 있다.

다음, 본 발명의 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 제조방법에 대해서 상세히 설명한다.

우선, 본 발명의 곰보 배추 추출물은 다음의 공정을 통해 제조된다.

상기 곰보 배추 추출물은, 곰보 배추에 알코올을 첨가하고 교반하여 여액을 얻은 후, 상기 여액을 감압 건조시켜 제조한다.

상기 추출용 용매인 알코올은 메탄올, 에탄올 또는 이들 혼합물을 사용할 수 있다.

상기 본 발명의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 다음의 공정을 통해 제조된다.

상술한 방법에 의해 곰보 배추 추출물을 제조한다.

이어서, 상기 곰보 배추 추출물을 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 차례로 분획하여 분획물을 제조한다.

이어서, 상기 분획물 중 디클로로메탄 분획물을 전개용매인 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매에서 크로마토그래피를 수행하여 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 제조한다. 이때, 크로마토그래피는 230-400 메쉬가 충진된 컬럼을 이용하여 수행하고, 상기 에틸아세테이트/메탄올을 30:1에서 0:1의 구배로 흘려주면서 소정의 양씩 분획하여 수행할 수 있다.

이어서, 상기 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 얇은 막크로마토그래피를 수행하여 Rf가 0.43 내지 5.0까지 분획된 농축물을 제조한다.

이어서, 상기 농축물을 트리클로로메탄/메탄올 혼합용매에서 크로마토그래피를 수행하여 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 제조한다. 이때, 상기 크로마토그래피는 세파덱스(sepadex) 20이 충진된 컬럼에서 수행될 수 있다.

이어서, 상기 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매를 이용하여 재결정하여 최종적으로 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논이 완성된다.

다음, 본 발명의 화장료 조성물에 대해 상세히 설명한다.

상기 화장료 조성물은 상술한 곰보 배추 추출물 또는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함한다.

상기 곰보 배추 추출물의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.000001 내지 30.0 중량%로 포함될 수 있다.

상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.000001 내지 30.0 중량%로 포함될 수 있고, 바람직하게는 0.0001 내지 10.0 중량%로 포함될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.001 내지 5.0 중량%로 포함될 수 있다. 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 함량이 0.000001 중량% 미만일 경우에는 상술한 바와 같은 효능이 미미하게 발현될 수 있고, 상기 3’,4’,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 함량이 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 효능이 뚜렷하게 향상되지 않기 때문에 경제성이 떨어질 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 유효 성분인 곰보 배추 추출물 또는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하는데, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제와 담체를 포함한다.

상기 화장료 조성물은 상술한 곰보 배추 추출물 또는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함함에 따라 피부노화 및 피부주름개선 효능이 있고, 피부미백 효능이 있으며, 항염 및 항균 효능이 있다.

예를 들어, 상기 화장료 조성물은, 실험예 7에서 알 수 있듯이, 자외선조사에 의한 염증성 사이토카인 발현을 억제함으로써 항염 효과를 나타낼 수 있기 때문에 피부 항염 용도로 유용하게 사용될 수 있다. 또한 상기 화장료 조성물은, 실험예 10에서 알 수 있듯이, 항균 효과를 나타내기 때문에 항균 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 상술한 효능 외에도, 후술하는 실험예 8에서 알 수 있듯이, 피부 자극을 완화시키는 효과가 있고, 또한 후술하는 실험예 9에서 알 수 있듯이, 보습 효과가 있다.

이와 같이 상기 화장료 조성물은 상술한 노화방지와 같은 특정 효능 이외에도 피부보습과 같은 다양한 효능을 보유하고 있기 때문에 유용한 화장재료로써 사용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클린징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액파운데이션, 왁스파운데이션, 팩, 맛사지크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제형화될 수 있다.

구체적으로는, 상기 화장료 조성물은, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

상기 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

상기 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로는 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

상기 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로는 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용된다.

상기 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로는 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

상기 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로는 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 구체적인 제조예를 통하여 본 발명에 대해서 보다 상세히 설명하기로 한다. 이들 제조예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 제조예로 한정되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명할 것이다.

제조예 1 : 곰보 배추 추출물 및 이로부터 추출된 3′,4′,5,6,7- 펜타하이드록시플라바논의 제조

음건한 곰보 배추 약 1.0 ㎏에 70% 에탄올 5L를 가하여 환류 교반시킨 후 여과하여 여액을 얻고 상기 여액을 감압 건조하였는데, 이러한 공정을 2회 반복하여 약 230g의 곰보 배추 추출물을 얻었다. 얻어진 곰보 배추 추출물을 증류수에 녹인 후, n-헥산, 디클로로메탄(CH₂Cl₂), 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 분획하여 분획물을 얻고, 이들 중 디클로로메탄층을 실리카 230-400 메쉬가 충진된 컬럼에 로드하고 전개용매로서 에틸아세테이트와 메탄올을 30:1에서 0:1 구배로 흘러주면서 20 ㎖씩을 분획하여 에틸아세테이트와 메탄올 분획물을 얻었다. 얻어진 에틸아세테이트와 메탄올 분획물을 얇은 막 크로마트그래프을 이용하여 Rf=0.43-5.0까지 분획을 농축하였으며, 얻어진 농축물을 세파덱스(sepadex)20이 충진된 컬럼에서 트리클로로메탄:메탄올(1:1)로 분획하여 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 얻었다. 이후 얻어진 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올로 재결정하여 약 100 ㎎의 재결정물을 얻었다.

얻어진 상기 재결정물은 NMR 및 Mass 분석기를 이용하여 구조를 분석하였다. 아래 분석결과와 같이 상기 재결정물의 구성성분은 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논으로 확인되었다.

yellow powder ESI-MS m/z: 305 [M+H]+ 1H-NMR (MeOD- d4, 400 MHz): 6.97 (1H, d, J = 1.6Hz, H-2'), 6.85 (1H, dd, J = 1.6 Hz, H-6'), 6.79 (1H, d, J = 8.0 Hz H-5'), 5.94 (1H, s, H-8), 5.33(1H, dd, J = 12.4, 2.8 Hz, H-2), 3.13 (1H, dd, J = 12.4, 17.2 Hz, H-3), 2.74 (1H, dd, J = 17.2, 3.2 Hz, H-3) 13C-NMR (MeOD- d4,, 100 MHz): 79.77 (C-2), 43.04 (C-3), 196.78 (C-4), 149.23 (C-5), 125.57 (C-6), 156.84 (C-7), 95.44 (C-8), 156.36 (C-9), 101.97 (C-10), 130.56 (C-1'), 113.81 (C-2'), 145.30 (C-3'), 145.77 (C-4'), 115.05(C-5'), 118.39 (C-6')

실험예 1. NBT 법을 이용한 항산화 효과 측정

상기 제조예 1에 따라 제조된 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 항산화 효과는 NBT법을 이용하여 측정하였다.

즉, 곰보 배추 추출물 및 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 항산화 효과는 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성 산소를 NBT법에 의해 측정하고 이러한 활성 산소에 대한 소거율을 통해 평가하였다. 이러한 활성 산소 소거율은 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성 산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응함으로써 생성된 청색을 560 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하여 얻었다.

구체적인 측정방법은 다음과 같다.

1) 바이알병에 2.4㎖의 0.05M Na₂CO₃, 0.1㎖의 3mM 크산틴 용액, 0.1㎖의 3mM EDTA 용액, 0.1㎖의 BSA 용액, 및 0.1㎖의 0.72mM NBT 용액을 가하고, 여기에 곰보 배추 추출물 또는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료 0.1㎖를 첨가한 후 25℃에서 10분간 방치한다. 그 후, 0.1㎖의 크산틴 옥시다제 용액을 가하여 고속으로 교반하고 25℃에서 20분간 배양한다. 그 후, 0.1㎖의 6mM CuCl₂ 용액을 가하여 반응을 정지시키고 560 ㎚에서의 흡광도(St)를 측정한다.

2) 시료의 블랭크(Blank)는 상기 1)에서 0.1㎖의 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 1)과 동일하게 조작하여 흡광도(So)를 측정하여 얻는다.

3) 공시험은 상기 1)에서 상기 시료 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 1)과 동일하게 조작하여 흡광도(Bt)를 측정하여 얻는다.

4) 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 3)에서 0.1㎖의 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 3)과 동일하게 조작하여 흡광도(Bo)를 측정하여 얻는다.

상기 활성 산소 소거율은 하기 수학식 1에 의하여 산출하였고, 그 결과는 하기 표 1과 같다.

[수학식 1]

활성 산소 소거율(%) = [1-(St-So)/(Bt-Bo)]×100

상기 수학식 1에서, St는 시료의 효소 반응 후 560 ㎚의 파장에서 흡광도이고, Bt는 공시험의 효소 반응 후 560 ㎚의 파장에서 흡광도이고, So는 시료의 효소 무첨가시 반응 전의 560 ㎚의 파장에서 흡광도이며, Bo는 공시험의 효소 무첨가시 반응 전의 560 ㎚의 파장에서 흡광도이다.

처리 농도(ppm)	활성 산소 소거율(%)
곰보배추 추출물(1 ppm)	30.7
곰보배추 추출물(2 ppm)	42.8
곰보배추 추출물(5 ppm)	82.4
곰보배추 추출물(10 ppm)	85.6
곰보배추 추출물(20 ppm)	92.7
3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(1 ppm)	47.1
3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(2 ppm)	65.1
3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(5 ppm)	91.1
3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(10 ppm)	93.5
3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(20 ppm)	96.7

위 표 1에서 알 수 있듯이, 곰보 배추 추출물과 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 농도의존적으로 항산화력이 증가하였다. 특히, 곰보 배추 추출물 농도가 20ppm 이상, 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 농도가 5 ppm 이상인 경우에는 항산화력이 90% 이상이었다. 상기 곰보 배추 추출물에서 분리한 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 항산화력이 상기 곰보 배추 추출물보다 우수하다는 것을 알 수 있다. 이에 따라, 아래 모든 실험에서는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 이용하여 실험하였다.

실험예 2 : DPPH 법을 이용한 항산화 활성 측정

상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 항산화 활성은 DPPH법을 이용하여 측정하였다.

이러한 DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 프리 라디칼의 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정하는 것이다. 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료의 항산화 활성은 시료에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 560 ㎚의 파장에서 흡광도를 측정하여 자유 라디칼 소거율을 측정하여 얻는다.

이때, 시약으로는 DPPH 프리 라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76, 0.1 mM 용액) 61.88 ㎎을 메탄올에 용해하여 100㎖로 만든 것을 사용하였다.

구체적인 측정방법은 다음과 같다.

1) 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15㎖ 및 시료 0.15㎖를 가하여 고속에서 교반하고 25℃에서 10분간의 배양한다. 그 후, 560 ㎚의 파장에서 흡광도(St')를 측정한다.

2) 시료의 블랭크(Blank)는 상기 1)에서 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고 상기 1)과 동일한 방법으로 흡광도(So')를 측정한다.

3) 공시험은 상기 1)에서 시료 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고 상기 1)과 동일한 방법으로 흡광도(Bt')를 측정한다.

4) 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 3)에서 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용한 것을 제외하고 상기 3)과 동일한 방법으로 흡광도(Bo')를 측정한다.

상기 자유 라디칼 소거율은 하기 수학식 2에 의하여 산출하였다.

[수학식 2]

자유 라디칼 소거율(%) = [1-(St'-So')/(Bt'-Bo')]×100

도 1에서 알 수 있듯이, DPPH에 의한 자유 라디칼 소거시험에서 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 농도의존적으로 항산화력이 증가하였고, 5 ppm의 농도에서 90% 이상의 자유 라디칼을 소거하였다.

실험예 3 : MMP -1 생성 억제 효과

상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성 억제 효과는 다음의 방법을 통해 측정하였다.

인간 정상 피부 세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1×10⁶세포가 되도록 접종하고, 37℃의 온도 및 DMEM 배지(Sigma, 미합중국)에서 24시간 동안 배양한 후, 실험군으로 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 상기 시료가 포함하지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.

추가 배양된 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 상기 실험군 및 대조군의 MMP-1의 양(ng/㎖)을 각각 측정하고, 하기 수학식 3에 따라 MMP-1 생성 억제율을 계산하고, 그 결과는 표 2에 나타내었다.

[수학식 3]

MMP-1 생성 억제율(%) = [1-(실험군의 MNP-1의 양/대조군의 MMP-1의 양)]×100

처리 농도(ppm)	MMP-1 생성 억제율(%)
1	5.55
2.5	19.12
5	45.78
10	75.35
25	86.69

위 표 2에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 농도 의존적으로 MMP-1의 활성을 감소시켰다.

실험예 4 : 콜라겐 합성 증진 효과

상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 콜라겐 합성 증진 효과는 다음의 방법을 통해 측정하여 확인하였다.

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰 당 1× 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 실험군으로 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료를 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 상기 시료를 포함하지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.

추가 배양된 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐(procollagen) 타입 IC-펩타이드(PICP) 양을 측정하고 이를 ng/㎖ 단위로 환산하여 실험군 및 대조군의 콜라겐 양을 측정하였다.

상기 콜라겐 생성 증가율은 하기 수학식 4에 따라 계산하였고, 그 결과는 표 3에 나타내었다.

[수학식 4]

콜라겐 생성 증가율(%) = [(실험군의 콜라겐 양/대조군의 콜라겐 양)-1]×100

처리 농도(ppm)	콜라겐 생성 증가율(%)
1	2.1
2.5	43.4
5	63.5
10	109.2
25	145.5

위 표 3에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 콜라겐 생성 증가율이 농도의존적으로 증가하였다.

실험예 5 : B16F1 멜라닌 형성 세포를 이용한 멜라닌 생성 억제 효과

상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 피부 미백 효과는 B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 측정하여 판단하였다.

실험예 5에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포 균주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포로서, ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다. 상기 멜라닌 생성 억제 효과는 상기 세포의 인공 배양 중에 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료를 처리하여 멜라닌 색소가 감소하는 정도를 비교 평가하여 확인하였다.

상기 B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생합성 억제 효과는 다음과 같은 방법을 통해 확인하였다.

B16F1 멜라닌 형성 세포를 6 웰 플레이트에 각 웰 당 2×10⁵ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 이렇게 부착된 세포를 독성을 유발하지 않는 농도로 상기 시료로 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 이렇게 배양된 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 회수된 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980) 방법을 약간 변형하여 수행하였다. 구체적으로, 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1㎖를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 상기 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 ㎚의 파장에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다.

상기 B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 5에 의하여 계산하였고, 그 결과는 표 4에 나타내었다.

표 4에서 IC₅₀값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도를 의미한다. 이때 비교군으로는 멜라닌 생성 저해 효과가 있는 것으로 알려진 하이드로퀴논 및 알부틴을 사용하였다.

[수학식 5]

멜라닌 생성 저해율(%) =[(A-B)/A]×100

이때, 상기 A는 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양이고, 상기 B는 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양이다.

시료명	IC₅₀
3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논	0.00025%
하이드로퀴논	0.001%
알부틴	0.02%

위 표 4에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 B16F1 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 크게 저해하고, 특히 양성대조군으로 사용된 알부틴이나 하이드로퀴논보다 더 적은 농도에서 멜라닌 생성을 저해하였다.

실험예 6 : 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과

상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과는 다음의 방법으로 평가하였다.

사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5×10⁴개씩 넣고 24 시간 동안 부착시킨 후, 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이러한 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다. 이러한 세포배양 배지가 첨가된 각 웰에 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 시료를 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양된 각 웰의 상층액을 150㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로써 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. 이때, 상기 IL-1α의 양은 효소 면역 분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였다.

상기 염증성 사이토카인(IL-1α)의 발현 억제율은 하기 수학식 6에 의해 계산하였고, 그 결과는 표 5에 나타내었다.

[수학식 6]

염증성 사이토카인 발현 억제율(%) = [1-(St"-Bo")/(Bt"-Bo")]×100

이때, 상기 Bo"은 자외선을 조사하지 않고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량이고, 상기 Bt"는 자외선을 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량이며, 상기 St"는 자외선을 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α생성량이다.

처리 농도(ppm)	염증성 사이토카인 발현 억제율(%)
1	11.99
5	25.78
10	51.33
50	59.65
100	78.80

위 표 5에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 억제하였다.

제조예 2 : 실시예 1 및 비교예 1~2의 화장료 조성물 제조

상기 제조예 1에 따라 제조된 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함하는 화장료에 대한 효과를 측정하기 위해, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하는 화장료 조성물(실시예 1), 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 대신에 보습제로서 글리세린, 1,3-부틸렌글리콜 및 솔비톨을 포함하는 화장료 조성물(비교예 1) 및 이들 모두를 포함하지 않는 화장료 조성물(비교예 2)을 하기 표 6과 같은 함량으로 제조하였다. 이때, 상기 표 6에서의 함량 단위는 중량%이다.

성분	실시예 1	비교예 1	비교예 2
3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논	5.0	-	-
글리세린	-	5.0	-
1,3부틸렌글리콜	--	2.5	-
솔비톨	-	2.5	-
EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02
정제수	to 100	to 100	to 100
세토스테아릴알코올	2.0	2.0	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5
마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7
스쿠알란	5.0	5.0	5.0
유동파라핀	3.0	3.0	3.0
트리옥타노인	5.0	5.0	5.0
폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5
토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2
사이클로메치콘	3.0	3.0	3.0
BHT	0.05	0.05	0.05
향,방부제	적량	적량	적량

실험예 7 : 화장료 조성물의 항염증 효과(귀 부종 실험)

상기 제조예 2에서 제조한 화장료 조성물(실시예1 및 비교예 1,2)의 항염증 효과는 다음과 같이 측정하였다.

건강한 쥐 16마리를 대상으로 4그룹으로 나누어 1개 시료당 4마리씩 실험하였다. 우선 쥐의 양쪽 귀를 에탄올로 잘 닦고, 상기 화장료 조성물 시료를 각각 4 ㎕씩 바른 다음, 1시간 경과 후 실험군으로 왼쪽 귀에는 아세톤 20 ㎕를 발라주고 대조군으로 오른쪽 귀에는 염증유발 양성대조 물질인 아라키돈산을 발라주었다. 다시 1시간 경과 후 마이크로미터를 이용하여 양쪽 귀의 두께를 2회씩 반복 측정하여 그 평균치를 구한 후, 하기 수학식 7에 따라 항염증 효과를 계산하였고, 그 결과를 표 7에 나타내었다.

[수학식 7]

항염증 효과(%) = (B-A) / B × 100

이때, A는 실험군에서 귀의 부풀은 두께이고, B는 대조군에서 귀의 부풀은 두께이었다.

시료	부풀은 정도		항염증 효과(%)
시료	증가된 두께	대조군과의 차이(B-A)	항염증 효과(%)
대조군(정제수)	2.87(B)	-	-
비교예 1	2.85(A)	0.02	0.69
비교예 2	2.70(A)	0.17	5.92
실시예 1	1.71(A)	1.16	40.42

위 표 7에서 알 수 있듯이, 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하는 실시예 1의 화장료 조성물이 비교예 1,2의 화장료 조성물보다 월등히 우수한 항염 효과를 나타내었다.

실험예 8 : 피부 자극성 시험

상기 제조예 2에서 제조한 화장료 조성물(실시예1 및 비교예 1,2)의 피부 자극성 시험은 다음의 방법으로 측정하였다.

실시예 1, 비교예 1,2 에 따른 화장료 조성물에 자극원으로써 락틱산 0.3%를 첨가하여 pH가 5.5가 되도록 시료를 준비한 다음, 건강한 성인 남,여 30명을 대상으로 양팔 하박부의 5 × 20 ㎝ 부위에 0.3% 락틱산 용액 단독 및 상기 준비한 시료 0.1 g을 각각 24시간 동안 첩포한 후 제거하고 1시간 및 24시간이 경과한 다음, 하기의 판정 기준에 의하여 육안으로 피부 상태 변화를 판독하였다.

상기 자극률은 하기 수학식 8에 따라 계산하였고, 그 결과는 하기 표 8에 나타내었다.

판정기준

-: 홍반이나 특이한 현상 없음

+-: 주위보다 약간 붉어짐

+: 주위보다 현저히 붉어짐

++: 주위보다 심하게 붉어지고 부풀음

[수학식 8]

자극률(%) = [(+-)수×1 + (+)수×2 + (++)수×3]/[(전체수)×3]×100

시료	판정결과				자극률(%)
시료	++	+	+-	-	자극률(%)
실시예 1+락틱산 0.3%	-	3	7	20	14.4
비교예 1+락틱산 0.3%	3	15	11	1	56.66
비교예 2+락틱산 0.3%	3	15	11	1	56.66
락틱산0.3%	7	15	8	-	65.55

위 표 8에서 알 수 있듯이, 락틱산에 의한 자극 완화 효과 실험에서 본 발명의 실시예 1의 화장료 조성물은 대조군 대비 자극율이 감소하였다.

실험예 9 : 보습 효과

상기 제조예 2에서 제조한 화장료 조성물(실시예 1 및 비교예 1,2 )에 대한 보습 효과는 다음과 같은 방법으로 측정하였다.

설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 100 명을 무작위로 20 명씩 3개 그룹(A, B, C)으로 나눈 후, 각각 실시예 1 및 비교예 1, 2의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다.

상기 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820(Corage+Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였고, 그 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

시료	사용전	사용 2주 후	사용 4주 후
실시예 1	23.2	39.7	46.8
비교예 1	24.5	32.9	34.8
비교예 2	22.8	30.5	31.9

위 표 9에서 알 수 있듯이, 본 발명의 실시예 1의 화장료가 일반적인 보습제를 포함한 화장료(비교예 1,2)보다 보습효과가 더 우수하였다.

제조예 3 : 실시예 2~5 및 비교예 3~4 조성물 제조

하기 표 10의 조성과 같이, 실시예 1의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하는 화장료(실시예 2~5), 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하지 않는 화장료(비교예 3), 및 상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논 대신에 방부제로써 메칠파라벤과 이미다졸리디닐우레탄을 포함하는 화장료(비교예 4)를 각각 제조하였다. 이때, 표 10에서 각 조성 성분의 함량 단위는 중량%이었다.

성분	실시예				비교예
성분	2	3	4	5	3	4
정제수	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100
글리세린	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
부틸렌글라이콜	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
프로필렌글라이콜	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
폴리소르베이트 60	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
밀납	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
마카데미아넛 오일	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
스쿠알란	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
향료	미량	미량	미량	미량	미량	미량
3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논	0.1	0.5	1.0	2.0	-	-
메칠파라벤	-	-	-	-	-	0.2
이미다졸리디닐우레아	-	-	-	-	-	0.2

실험예 10 : 항균력 실험

상기 제조예 3에 따른 제조된 화장료 조성물의 박테리아 및 곰팡이에 대한 항균 효과는 다음의 방법으로 측정하였다.

먼저, 박테리아의 경우, 상기 실시예 2-5의 화장료 조성물, 비교예 3-4의 화장료 조성물 20-30g에 대장균(Escherichia coli ; ATCC 8739), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa ; ATCC9027) 및 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus ; ATCC6538)의 혼합 균액을 시료당 초기 농도가 10⁷cfu/g 되도록 첨가 혼합하였다. 이들을 30-32℃ 항온조에서 4주간 배양하면서 1, 7, 14, 21 및 28일 간격으로 각 화장료를 1 g씩 취하여 생균수를 측정하였다.

다음, 곰팡이의 경우, 칸디다 알비칸스(Candida albicans ;ATCC10231), 페니실리움 씨트리눔(Penicillium citrinum ; KCTC2123) 및 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger ; ATCC16404)의 혼합균액을 시료당 10⁷cfu/g이 되도록 첨가 혼합한 후 25℃ 항온조에서 배양하면서 7일 간격으로 변취 유무와 시료표면의 균사 및 포자발생 유무를 관찰하였다.

그 결과를 하기의 표 11에 나타내었다.

시료	박테리아(cfu/g)						곰팡이
시료	초기균수	1일차	7일차	14일차	21일차	28일차	곰팡이
실시예 2	1×10⁷	41000	500	250	<250	<250	-
실시예 3	1×10⁷	45000	300	200	<100	<100	-
실시예 4	1×10⁷	44000	150	<100	<100	<100	-
실시예 5	1×10⁷	45000	<100	<100	<100	<100	-
비교예 3	1×10⁷	54000000	30000000	>1×10⁸	>1×10⁸	>1×10⁸	+++
비교예 4	1×10⁷	40000	300	<100	<100	<100	-

- : 8주간 변취 및 균사와 포자 발생이 없고 양호

+ :４주 이내에 기벽이나 뚜껑에 곰팡이 발생

++ :４주 이내에 변취 및 표면 일부에 곰팡이 발생

+++ :　4주 이내에 변취 및 표면 전체에 곰팡이 발생

위 표 11에서 알 수 있듯이, 방부제를 사용하지 않은 비교예 3의 화장료 조성물은 4주 이내에 변취 및 표면 전체에 곰팡이가 발생하고, 1일만 지나도 박테리아 균이 현저하게 증가하였다. 그러나, 본 발명의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 포함하는 실시예 2-5의 화장료 조성물은 박테리아 및 곰팡이에 대해 농도의존적으로 항균효과를 나타내었으며, 약 28일이 경과한 후에는 2.0%의 함량으로 사용했을 때 기존의 방부제(비교예 4)와 유사하거나 더 우수한 방부력을 나타내었고, 배양일 전체로 판단했을 때에도 0.5% 이상의 함량으로 사용했을 때 기존의 방부제에 비해 훨씬 우수한 방부력을 나타내었다.

실험예 11 : 피부 주름 개선효과

상기 실시예 1에 따른 제조된 화장료 조성물의 피부 주름 개선효과에 대한 임상 실험을 실시하였다. 이러한 임상실험은 하기와 같이 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

실험자 (20세 - 35세의 여성) 30명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 1의 화장료 조성물을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

실험 완료 후 피부 주름 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후의 각 피검자의 주름 개선 효과를 숙련된 의사의 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 12에 나타내었다.

시료	주름개선효과			유효율(%)
시료	우수	약간	없음	유효율(%)
실시예1	25	4	1	96.6
비교예1	4	5	21	30

위 표 12에서 알 수 있듯이, 본 발명의 실시예 1에 따른 화장료 조성물이 비교예 1에 따른 화장료 조성물에 비하여 높은 주름개선 효과를 보여주었다. 또한 본 발명의 실시예 1에 따른 화장료 조성물을 피부에 도포한 피검자들의 피부에서는 피부자극을 관찰할 수 없었다.

Claims

다음 화학식으로 표시되는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(pentahydroxyflavanone)을 포함하는 곰보 배추 추출물:
[화학식]
제1항의 곰보 배추 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제1항의 곰보 배추 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
제1항의 곰보 배추 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제1항의 곰보 배추 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 또는 항균용 화장료 조성물.
곰보 배추 추출물로부터 추출되고 다음 화학식으로 표시되는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논(pentahydroxyflavanone):
[화학식]
제6항의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제6항의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함하는 피부주름 개선용 화장료 조성물.
제6항의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
제6항의 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논을 유효성분으로 포함하는 항염 또는 항균용 화장료 조성물.
제7항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논은 상기 화장료 조성물 전체 함량에 대해서 0.000001 내지 30 중량%로 포함된 화장료 조성물.
곰보 배추에 알코올을 첨가하고 교반하여 여액을 얻는 공정; 및
상기 여액을 감압 건조하는 공정을 포함하는 곰보 배추 추출물의 제조방법.
제12항에 따라 곰보 배추 추출물을 제조하는 공정;
상기 곰보 배추 추출물을 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, n-부탄올, 물로 차례로 분획하여 분획물을 제조하는 공정;
상기 분획물 중 디클로로메탄 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매 및 230-400 메쉬가 충진된 컬럼에서 크로마토그래피를 수행하여 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 제조하는 공정;
상기 에틸아세테이트/메탄올 분획물을 얇은 막크로마토그래피를 수행하여 Rf가 0.43 내지 5.0까지 분획된 농축물을 제조하는 공정;
상기 농축물을 트리클로로메탄/메탄올 혼합용매에서 크로마토그래피를 수행하여 트리클로로메탄/메탄올 분획물을 제조하는 공정; 및
상기 클로로메탄/메탄올 분획물을 에틸아세테이트와 메탄올의 혼합용매를 이용하여 재결정하는 공정을 포함하는 3′,4′,5,6,7-펜타하이드록시플라바논의 제조방법.