KR20120031477A - 펩타이드 혼합물을 분석하는 방법 - Google Patents

펩타이드 혼합물을 분석하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 질량 분광법 및 질량 분광 결과 분석을 위한 통계법에 의하여 펩타이드 또는 펩타이드 혼합물의 시료 또는 폴리펩타이드 성분을 포함하는 생분자를 특성화하고 분류하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 테트라부틸암모늄 하이드록사이드를 이용하여 글라티라머 아세테이트를 합성하는 방법을 개시한다.

Description

펩타이드 혼합물을 분석하는 방법{METHODS OF ANALYZING PEPTIDE MIXTURES}
관련 출원
본 출원은 2009년 5월 8일에 출원된 미국 가특허출원 일련번호 61/176,579로부터 우선권을 주장한다.
발명이 속하는 분야
본 발명은 질량 분광법에 의하여, 펩타이드, 펩타이드 혼합물, 폴리펩타이드의 혼합물 및 폴리펩타이드 성분을 포함하는 생분자(biomolecule)를 특성화하고, 포괄 및 분류하는 분석적 방법에 관한 것이다.
보다 상세하게는, 본 발명은 복합 펩타이드 혼합물, 여러 다른 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드 혼합물 또는 폴리펩타이드 성분을 포함하는 생분자를 특성화 및 분류하기 위한 분석적/통계적 방법을 제공한다.
코폴리머-1(Copolymer- 1)은 아미노산인 글루타민산, 라이신, 알라닌 및 타이로신의 폴리머화로부터 제조되는 폴리펩타이드들의 복합 혼합물이다.
코폴리머-1(Copolymer- 1)은 또한 글라티라머 아세테이트(Glatiramer acetate)로도 알려져 있으며 다음과 같은 구조식을 갖는다:
(Glu, Ala, Lys, Tyr)χ
Figure pct00001
χCH3COOH
(C5H9NO4
Figure pct00002
C3H7NO2
Figure pct00003
C6H14N2O2
Figure pct00004
C9H11NO3)χ
Figure pct00005
χC2H4O2
(PDR(Physician Desk reference), (2000))
글라티라머 아세테이트(GA)는 코팍손(COPAXONE？ Teva Pharmaceutical Industries Ltd., 이스라엘)의 활성성분인데, 이는 각각 0.141, 0.427, 0.095 및 0.338의 보고된 평균 몰분율(molar fraction)을 가지는 4가지 천연의 아미노산인 L-글루타민산, L-알라닌, L-타이로신 및 L-라이신을 포함하는 합성의 폴리펩타이드 혼합물의 아세트산 염을 포함한다. 코팍손？의 평균 분자량은 4,700 및 11,000 달톤 사이이다. 글라티라머 아세테이트는 다발성 경화증(multiple sclerosis, MS) 치료를 위해 승인된 약물이다. 글라티라머 아세테이트의 제조 과정은 미국 특허 제3,849,550호 및 제5,800,808호 및 PCT 국제공보 WO 00/05250호에 기술되어 있다.
유럽 특허출원 공개 제1 983 344 Al호는 단일 폴리펩타이드 표준을 트립신으로 소화시키고 그 단편을 MADLDI-TOF에 의하여 탐지하는 방법을 개시하고 있다. PCT 국제공보 WO 2008/135756호는 단일 펩타이드 표준을 트립신으로 소화시키는 것을 개시하고 있는데, 이는 탠덤 MS에 의하여 분석되어질 예상되는 트립신의 펩타이드 단편을 제공하였다.
선행기술과 대조적으로, 본 발명은 글라티라머 아세테이트(Glatiramer acetate)와 같은 폴리펩타이드의 복합 혼합물의 표준을 수개의 펩타이드 단편으로 소화하기 위하여 가수분해 효소가 사용됨을 보였다. 펩타이드 단편들은 질량 분광법(MS) 및 MS/MS에 의하여 분석된다. 각 시료의 질량 분광적 결과는 다른 시료와의 비교를 위한 지문으로서 사용된다. 두 개 시료의 소화물에 대해 얻어진 질량 스펙트럼은 각각 시료의 지문으로서 비교되고 제공된다.
첫 번째 질량 분석기에 의해 탐지된 각각의 펩타이드 단편을 선별하고 이에 대한 두 번째 질량 분광적 분석(소위 MS/MS 분석)을 하여 전구체 펩타이드 이온을 한층 더 작은 단편으로 쪼갠다. 각각의 펩타이드 단편의 서열을 획득하기 위하여 바이오툴스와 같은 소프트웨어를 사용하여 MS/MS 분석에서 얻어진 질량 스펙트럼을 분석한다. 그 결과는 첫 번째 질량 분석기에서 탐지된 펩타이드 이온의 조성 및 서열을 나타낸다. 마지막으로, 시료 소화물의 질량 스펙트럼을 통계적 테스트(t-테스트, ANOVA.,.)로부터 얻은 단변수(univariate) 피크 랭킹을 통한 분류(2D 피크 분포와 같은 것)를 위하여 통계적 소프트웨어(클린프로툴스(ClinProTools)과 같은 것)를 사용하여 분석한다. 상이한 시료들의 그룹화 또는 구별은 또한 다변수 통계법(주성분 분석법, PCA)에 의해 획득된다. 이러한 전략적 접근은 상이한 산물들의 질량 스펙트럼을 통계적으로 비교하고, 얻어진 분류 및 점의 위치에 근거하여 시료를 구별하기 위한 것이다.
도면에 있어서,
도 1: 효소 소화된 코팍손 및 코폴리머-1 간 비교를 위한 질량 스펙트럼
도 2a: 효소 소화된 코팍손 및 코폴리머-1으로부터 기록된 이온의 MS /MS 스펙트럼 - m/z 452.44
도 2b: m/z 452.44의 서열 및 단편 이온
도 3a: 효소 소화된 코팍손 및 코폴리머-1으로부터 기록된 m/z 509.385의 MS/MS 스펙트럼
도 3b: m/z 509.385(1)의 서열 및 단편 이온
도 3c: m/z 509.385(2)의 서열 및 단편 이온
도 4a: 효소 소화된 코팍손 및 코폴리머-1으로부터 기록된 m/z 603.515의 MS/MS 스펙트럼
도 4b: m/z 603.515의 서열 및 단편 이온
도 5a: 효소 소화된 코팍손 및 코폴리머-1으로부터 기록된 m/z 638.590의 MS/MS 스펙트럼
도 5b: m/z 638.590의 서열 및 단편 이온
도 6a: 효소 소화된 코팍손 및 코폴리머-1으로부터 기록된 m/z 674.880의 MS/MS 스펙트럼
도 6b: m/z 674.880의 서열 및 단편 이온
도 7a: 효소 소화된 코팍손 및 코폴리머-1으로부터 기록된 m/z 710.622의 MS/MS 스펙트럼
도 7b: m/z 710.622의 서열 및 단편 이온
도 8a: 효소 소화된 코팍손 및 코폴리머-1으로부터 기록된 m/z 745.568의 MS/MS 스펙트럼
도 8b: m/z 745.568의 서열 및 단편 이온
도 9: 효소 소화된 코팍손, 코폴리머-1, 사이토크롬 C, 라이소자임 및 HSA의 질량 스펙트럼
도 10: 효소 소화된 코팍손, 코폴리머-1, 사이토크롬 C, 라이소자임 및 HSA의 질량 스펙트럼에 대한 단변수 피크 랭킹에 근거한 첫 번째 두가지 피크로부터의 2D 피크 분포
도 11a: 코팍손, 코폴리머-1, 사이토크롬 C, 라이소자임 및 HSA의 PCA 분석 결과의 3D 패턴
도 11b: 코팍손, 코폴리머-1, 사이토크롬 C, 라이소자임 및 HSA의 PC2에 대한 PCl의 플롯
도 12: 효소 소화된 코팍손, 코폴리머-1 및 3-NCA의 질량 스펙트럼에 대한 단변수 피크 랭킹에 근거한 첫 번째 두 피크로부터의 2D 피크 분포
도 13: 코팍손, 코폴리머-1 및 3-NCA의 PC2에 대한 PCl의 플롯
본 발명은 고도로 복잡한 2개의 거대분자 간의 화학적 유사성을 평가하기 위한 접근법을 제공한다. 시료의 전처리 없이는, 복합 펩타이드 혼합물의 질량 스펙트럼은 시료 내 모든 분자의 평균 결과이고 비분해된 신호를 포함한다. 두 가지 복합 혼합물의 조성을 비교하기 위해 재현되고 명확하게 정의된 스펙트럼을 얻기 위하여, 화학반응 또는 효소적 반응에 의해 시료를 더 작은 단편으로 소화시킨다. 그 다음, 탠덤 MS 기능을 가진 질량분광기를 사용하여 소화된 시료를 특성화한다.
얻어진 질량 스펙트럼을 분류처리하기 위하여 다변수 통계치가 사용된다. 예를 들어, 단순하고 비-매개변수적 방법 다변수 통계치인 주성분분석법(principal component analysis, PCA)이 복합 데이터 세트를 분류하기 위해 수행된다. 다변수 통계치와 결합된 질량 스펙트럼은 복합 폴리펩타이드 분자들에 대한 상대적인 정보를 제공한다.
본 발명에 대한 이해를 돕기 위하여, 일련의 실험 결과를 기술하는 다음의 실시예가 포함되어 있다. 본 발명과 관련된 다음의 실시예는 물론 본 발명을 특히 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 그와 같은 변형은, 현재 알려져 있거나 또는 나중에 개발되었거나, 다음에서 청구되는 바와 같은 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 기술분야에서 숙련된 자가 여기는 범위에 속하는 것이다.
실시예 1:
보호된 코폴리머-1의 제조
L-알라닌의 N-카복시산무수물(carboxyanhydride)(4.0 g, 34.78 mmol), γ-벤질 L-글루타메이트의 N-카복시산무수물(3.0 g, 11.39 mmol), N-트리플루오로아세틸라이신의 N-카복시산무수물 (7.47 g, 27.97 mmol) 및 L-타이로신의 N-카복시산무수물(1.6 g, 7.73 mmol)을 자성 교반기와 함께 단일 목 플라스크에 두었다. 이 혼합물을 건조 다이옥산(289 mL)을 첨가하여 용해시켰다. 증류 디에틸아민(60 ㎕)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 상온에서 24 시간 동안 기계적으로 교반하였다. 혼합물에 아세톤(116 mL)을 첨가하고, 용액을 아세톤(173 mL) 및 물(578 mL)의 혼합물 속으로 천천히 부었다. 현탁물을 교반하고 여과하였다. 고체를 NMT 45℃에서 진공 하에서 건조시키어 보호된 코폴리머-1 12.02 g을 수득하였다(수율 94.7%).
실시예 2
폴리[L-Ala, 5-벤질-L-GIu, N6-TFA-L-Lys, L-Tyr]로부터 폴리[L-Ala, L-GIu, N6-TFA-L-Lys, L-Tyr]까지 벤질기의 탈보호화
실시예 1로부터 유래한 보호된 코폴리머-1 12.02 g을 33% HBr/HOAc 72 mL 중에 현탁시켰다. 혼합물을 상온에서 17시간 동안 교반하였고 용액은 깨끗해졌다. 혼합물을 추출하고 n-헵탄(190 mL)으로 세척하였다. 혼합물의 저층을 물(240 mL) 및 n-헵탄(120 mL)의 혼합물 속으로 이전시켰다. 침전물을 여과하고 건조시켜 흰색 고체로서의 트리플루오로아세틸-글라티라머를 수득하였다.
실시예 3
폴리[L-AIa, L-GIu, N6-TFA-L-Lys, L-Tyr]로부터 폴리[L-AIa, L-GIu, L-Lys, L-Tyr]까지 트리플루오로아세틸기의 탈보호화
실시예 2로부터 유래한 트리플루오로아세틸-글라티라머 9.5 g 을 상온에서 24시간 동안 물(120.2 mL) 및 물 중 40% 테트라부틸암모늄 하이드록사이드(52.2 mL, 3 eq)와 반응시켰다. 아세트산(20 mL)으로 혼합물의 pH를 3-4로 조절하여 글라티라머 아세테이트 용액을 수득하고 3 킬로달톤 막의 사용에 의해 초여과를 수행하여 저분자량 불순물을 제거하였다. 계속적 물 초여과의 2 사이클 후에, 얻어진 산물을 농축하고 냉동건조하여 글라티라머 아세테이트(코폴리머-1)을 순수한 백색 고체로서 수득하였다(4.7 g, 수율 60%).
실시예 4
펩타이드 표준 소화 및 MS 분석
80 mM NH4HCO3을 사용하여 코팍손을 0.04 mg/100 ㎕으로 희석하고 트립신(1 ㎍/100 ㎕)으로 30분 동안 57℃에서 소화시켰다. MALDI/TOF/TOF {Autoflex III, Bruker Daltonics Corp.). 소화된 코팍손 1 ㎕와 MALDI 기질 α-CHC의 용액 1 ㎕와의 건조되고 공동-결정화된 혼합물에 대하여 분석을 수행하였다. 질량 분광기에 있어 RP(Reflective positive) 모드 및 LP(linear positive) 모드를 펩타이드를 탐지하기 위하여 사용하였다. RP 모드의 고-해상 분석 결과에 근거하여, TOF/TOF 질량 분광 분석을 위한 전구체 이온을 선별한다. 이것이 다른 시료와의 비교를 위해 지문으로서의 펩타이드 단편을 제공하는 펩타이드 표준이다.
실시예 5
다른 펩타이드 분석에 대한 적용
상기 실시예로부터 합성된 코폴리머- 1, 3-NCA(N-카복시산무수물) 및 4-NCA 및 3가지 단백질 표준(사이토크롬 C, 리소자임 및 HSA)을 상기 실시예 4의 방법에 따라 또한 탐지 및 분석하였다. 3-NCA은 3.5 : 1.45 : 1.0의 등가 비율로 Lys, GIu 및 Tyr으로 이루어져 있다. 코팍손 및 코폴리머-1과 비교하여, 3-NCA은 아미노산 알라닌을 결여한다. 4-NCA은 4.0: 3.5 : 1.45 : 1.0의 등가 비율로 Phe, Lys, GIu 및 Tyr으로 이루어져 있다. 4-NCA에서 코팍손 중의 친수성 Ala는 소수성 Phe에 의해 치환되고, Phe는 조성 중 가장 높은 비율을 차지한다(40%). 따라서, 4-NCA은 거의 물에 녹지 않는다.
실시예 6
데이터 처리 및 통계적 분석
우선, 코팍손 및 코폴리머-1 시료의 첫번째 질량 및 이차 질량 분광기로부터 유래한 신호를 플랙스애널리시스 및 바이오툴스 질량 분광 소프트웨어(Flexanalysis and BioTools mass spectrometry software)에 의하여 비교한다(도 1-9). 두번째로, 통계적 테스트에 의한 단변수(univariate) 피크 랭킹에 근거한 분류를 진행하기 위하여 클린프로툴스(ClinProTools) 소프트웨어를 사용하였다(도 10 및 12). 마지막으로, 참고 표준 및 시료에 대한 질량 분광으로부터 유래한 결과의 통계적 분석 진행을 위하여 주성분 분석(Principal Component Analysis, PCA) 방법을 사용하였다(도 11 및 13). 분석적 소프트웨어는 아래와 같다:
(a) 플랙스애널리시스(Flexanalysis)
플랙스애널리시스는 MALDI-TOF 이미지 분석 및 처리를 위한 브루커 달토닉사( Bruker Daltonics Inc.)에서 유래한 소프트웨어이다.
(b) 바이오툴스(BioTools)TM
바이오툴스란 질량 분광-기반 프로테오믹스를 뒷받침하기 위한 브루커 달토닉사( Bruker Daltonics Inc.)에서 유래한 소프트웨어이다. 이것은 브루커 달토닉 ESI 및 MALDI 장비를 사용해 얻어진 단백질 소화물 또는 펩타이드에 대한 질량 스펙트럼의 해석을 위해 디자인된 것이다. 이것은 또한 데이타베이스 검색에 대한 중간면으로서 작용할 수 있다.
(c) 클린프로툴스(ClinProTools)
클린프로툴스는 MALDI/TOF 장비로부터 유래한 단백질 또는 펩타이드의 질량 스펙트럼을 주로 처리하기 위하여 브루커 달토닉사( Bruker Daltonics Inc.)에서 유래한 통계적 분석 소프트웨어이다. 클린프로툴스는 통계 및 분류에 대한 패턴 인식 모델을 발생시키기 위하여 다수의 수학적 알고리즘을 결합한다.

Claims (19)

  1. 질량 분광법 및 통계법을 사용하여, 펩타이드 또는 펩타이드 혼합물의 시료 또는 폴리펩타이드 성분을 포함하는 생분자(biomolecule)를 특성화하고, 포괄 및 분류하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 방법은
    (a) 적당한 효소 또는 화학약품을 사용하여 시료를 펩타이드 단편으로 소화 또는 분해하는 단계;
    (b) 질량 분광법에 의하여 펩타이드 단편을 분석하여 질량 스펙트럼을 산출하는 단계; 및
    (c) 질량 스펙트럼을 통계법으로 분석하여 상이한 시료를 분류 및 구별하는 단계
    를 포함하는 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 적당한 효소는 용액 중에 있거나 또는 지지체 상에 고정된 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 지지체는 마이크로 또는 나노미터 크기의 입자, 컬럼 내부의 코팅, 카트리지 중의 충전물(packing)로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  5. 제3항에 있어서, 지지체는 자성(magnetic) 또는 비자성 입자인 것인 방법.
  6. 제2항에 있어서, 적당한 효소는 트립신 또는 시료를 소화시킬 수 있는 능력이 있는 다른 효소인 것인 방법.
  7. 제6항에 있어서 효소는 용액 중에 용해되거나, 입자 상에 고정되거나, 컬럼의 내부 표면 상에 고정되거나 또는 카트리지 중의 충전물 상에 고정된 것인 방법.
  8. 제2항에 있어서, 시료를 분해하기 위하여 사용되는 화학약품은 유기 또는 무기의 산 또는 염기인 것인 방법.
  9. 제2항에 있어서, 시료는 폴리펩타이드 혼합물인 것인 방법.
  10. 제2항에 있어서, 시료는 코폴리머 혼합물인 것인 방법.
  11. 제2항에 있어서, 시료는 코팍손(Copaxone)인 것인 방법.
  12. 제2항에 있어서, 질량 분광계는 MS 및 MS/MS 분석을 수행할 능력이 있는 것인 방법.
  13. (a) 펩타이드 표준 및 펩타이드 시료를 제공하는 단계;
    (b) 시료 및 펩타이드 표준을 적당한 효소 또는 화학약품으로 소화시키는 단계;
    (c) 소화된 펩타이드 시료 및 펩타이드 표준을 질량 분광 분석을 받게 하여 두 가지 질량 스펙트럼을 산출하는 단계; 및
    (d) 두 가지 질량 스펙트럼을 통계법으로 비교 및 분석하는 단계
    를 포함하는 질량 분광법에 의하여 시료를 분석하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 통계법은 주성분 분석법(Principal Component Analysis)인 것인 방법.
  15. 제13항에 있어서, 시료는 폴리펩타이드 혼합물인 것인 방법.
  16. 제13항에 있어서, 시료는 코폴리머인 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 코폴리머의 조성은 10개 이하의 아미노산을 포함하는 것인 방법.
  18. 제16항에 있어서, 코폴리머는 글라티라머 아세테이트(Glatiramer acetate)인 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 글라티라머 아세테이트는 다음의 단계를 포함하는 공정에 의하여 제조되는 것인 방법:
    (a) 타이로신, 알라닌, γ-벤질 글루타메이트 및 N-트리플루오로아세틸 라이신의 N-카복시산무수물(carboxyanhydride)을 중합하여 보호된 폴리펩타이드의 혼합물을 형성시키는 단계;
    (b) 아세트산 중의 브롬화수소산 용액으로 보호된 폴리펩타이드를 탈보호화하여 트리플루오로아세틸 폴리펩타이드의 혼합물을 형성시키는 단계; 및
    (c) 트리플루오로아세틸 폴리펩타이드의 혼합물을 테트라부틸암모늄 하이드록사이드와 반응시켜, 각각 알라닌, 글루타민산, 타이로신 및 라이신으로 필수적으로 구성되는 수용성 폴리펩타이드 혼합물을 형성시키는 단계.
KR1020117029446A 2009-05-08 2010-05-07 펩타이드 혼합물을 분석하는 방법 KR101696948B1 (ko)

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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2010146489A (ru) 2008-04-16 2012-05-27 Момента Фармасьютикалз, Инк. (Us) Анализ композиций сополимера аминокислот
CN102112485B (zh) * 2008-08-07 2013-11-27 台湾神隆股份有限公司 乙酸格拉默(glatiramer acetate)的合成
WO2012123959A2 (en) 2011-02-14 2012-09-20 Usv Limited Copolymer-1, process for preparation and analytical methods thereof
WO2013009885A2 (en) 2011-07-11 2013-01-17 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Evaluation of copolymer diethylamide
EP3232189A4 (en) * 2014-12-08 2017-12-13 Shimadzu Corporation Multidimensional mass spectrometry data processing device
CN112649537B (zh) * 2015-04-28 2024-03-29 深圳翰宇药业股份有限公司 多肽混合物高效液相色谱分析方法
WO2019049038A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Alembic Pharmaceuticals Limited PROCESS FOR THE CHARACTERIZATION OF GLATIRAMERATE ACETATE
US20200075128A1 (en) * 2018-09-03 2020-03-05 Scinopharm Taiwan, Ltd. Analyzing High Dimensional Data Based on Hypothesis Testing for Assessing the Similarity between Complex Organic Molecules Using Mass Spectrometry
EP3877071A4 (en) * 2018-11-09 2022-08-03 Nx Prenatal Inc. PAIRED COLUMN CHEMISTRY IN TANDEM OF HIGH-THROUGHPUT EXOSOME PROTEOMIC ANALYSIS

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007127977A2 (en) * 2006-04-28 2007-11-08 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of evaluating peptide mixtures

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6486868A (en) * 1987-09-30 1989-03-31 Shimadzu Corp Column for hydrolyzing protein
US5885841A (en) * 1996-09-11 1999-03-23 Eli Lilly And Company System and methods for qualitatively and quantitatively comparing complex admixtures using single ion chromatograms derived from spectroscopic analysis of such admixtures
AU2003212580A1 (en) * 2003-03-25 2004-10-18 Institut Suisse De Bioinformatique Method for comparing proteomes
JP2006522340A (ja) * 2003-04-02 2006-09-28 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド 質量分析データの分析法
WO2006083853A2 (en) * 2005-01-31 2006-08-10 Insilicos, Llc Methods of identification of biomarkers with mass spectrometry techniques

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007127977A2 (en) * 2006-04-28 2007-11-08 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of evaluating peptide mixtures

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BRYANT, D. K. 외., "Principal component analysis of mass spectra of peptides generated from the tryptic digestion of protein mixtures", Rapid communications in mass spectrometry, 2001, Vol. 15, pp. 418* *

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