KR20120027063A - 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절 및 이의 의학적 용도 - Google Patents

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김영환
한일용
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인제대학교 산학협력단
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Abstract

본 발명은 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절 및 이의 의학적 용도에 관한 것으로, 나이브(naive) 인간 항체 파아지 디스플레이 라이브러리 기법을 이용하여 종양 증식 또는 전이에 관련된 uPA유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절을 발견함에 따라 상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절을 암세포 표적화 진단 또는 치료 컨쥬게이트로서 활용하여 암을 효과적으로 진단하거나 치료할 수 있으며, 더나아가 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절 자체를 항암제로서 사용할 수도 있다.

Description

유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절 및 이의 의학적 용도{Human monoclonal antibody scFv to urokinase plasminogen activator and medical use thereof}
본 발명은 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제(uPA)에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절 및 이의 의학적 용도에 관한 것이다.
유로키네이즈 플라스미노겐 활성화계(uPAS)는 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제(uPA), 관련 세포막 수용체(uPAR) 및 2개의 주요 억제제인 플라스미노겐 활성화제 억제제-1(PAI-1) 및 PAI-2로 구성된다. uPAS는 비활성 플라스미노겐을 플라스민으로 변화시키는 세포외 변환과 관련되어 메트릭스 메탈로프로테이네이즈(MMP)의 활성화를 통한 세포외 매트릭스(ECM)와 기저막(BM)의 리모델링에 필요하다. 플라스미노겐 활성화제는 포유동물에서 조직형 플라스미노겐(tPA)과 유로키네이즈 플라스미노겐(uPA)와 같은 2개 유형이 존재한다. 전신 순환에서는 주로 tPA에 의해 수행되는 반면, uPA 시스템은 조직 리모델링에 중요한 ECM의 분해를 제어한다.
인간 uPA의 지모겐형(pro-uPA)은 411 잔기의 53kDa 단일 멀티도메인 글리코단백질이다. pro-uPA와 uPA는 글리코실포스파티딜 이노시톨(GPI) 엥커 글리코단백질인 uPAR/CD87과 높은 친화력으로 결합한다. uPA 결합에 의한 uPAR의 활성화는 Ras/세포외 신호 조절 카이네이즈 경로의 활성화를 초래하여 세포 증식, 이주 및 침윤을 야기한다. uPAR은 인테그린과 결합하여 이들의 활성화에 관여함으로써 이주 및 침윤에 기여한다. 또한, 세포외 매트릭스의 한 구성성분인 비트로넥틴은 uPAR과 결합하여 작은 GTPase Rac1을 활성화하여 세포 증식 및 이주를 조절하는 것으로 알려져 있다. 이러한 역할로 인하여 uPA 및 uPAR은 종양 진전 및 전이의 중요한 매개자로서 알려져 있다. uPA 및 uPAR의 발현은 교모세포종, 전립선암, 신장암, 유방암, 대장암, 간세포암 및 췌장성암을 포함한 많은 유형의 종양들에서 관찰되어 왔다. 게다가, 고농도의 uPA 및 uPAR는 췌장암을 포함한 다양한 악성 종양에서 나쁜 예후와 관련되어 왔다. 따라서, uPAS는 항암 치료를 위한 좋은 표적으로 인식되어 왔으며, uPAS 기능을 억제하기 위한 몇가지 치료 전략들 즉, (1) uPAS 구성성분 발현의 억제, (2) uPA, uPAR 및 PAI-1 활성 억제 및 (3) uPA/uPAR 상호작용 억제 등이 알려져 있다.
한편, 치료적 용도를 위하여, 온전한 인간 또는 인간화 항체가 인간 항-마우스 항체(HAMA) 및 인간 항-키메라 항체(HACA) 반응와 같은 부작용을 감소시키는 데에 가장 좋은 형태이며, 큰 사이즈의 인간 항체 라이브러리는 폭넓은 항원에 대한 온전한 인간 항체를 제조할 수 있는 방안으로 고려될 수 있다.
이에, 본 발명자는 비면역 인간 단쇄-Fv(scFv) 라이브러리로부터 uPA에 대한 온전한 인간 단일클론 항체 분절을 제조하여 유세포 분석법을 통해 종양 표적으로 사용가능성을 검토하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 나이브(naive) 인간 항체 파아지 디스플레이 라이브러리 기법을 이용하여 스크리닝한 종양 증식 또는 전이에 관련된 uPA에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 제공하는 데에 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 이용한 암세포 표적화 진단 또는 치료 컨쥬게이트를 제공하는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 제공한다.
상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)은 402 bp의 중쇄 가변(VH) 부위, 324 bp의 경쇄 가변(VL) 부위 및 중쇄 가변(VH) 부위와 경쇄 가변(VL) 부위를 연결하는 링커를 포함한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 코딩하는 유전자를 제공한다. 상기 유전자는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진다.
또한, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 유효성분으로 포함하는 항암제를 제공한다.
상기 암으로는 간암, 폐암, 대장암, 유방암, 전립선암, 백혈병, 림파종 및 췌장암으로부터 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 포함하고, 상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)에 하나 또는 둘 이상의 진단제 또는 항암제를 결합시킨 암세포 표적화 진단 또는 치료 컨쥬게이트를 제공한다.
상기 진단제로는 방사성핵종, 상자성 금속이온, 초상자성 나노입자, 발색효소, 크로모포어, 발광물질 및 형광물질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나를 사용할 수 있으며, 상기 조영제는 CT 조영제, MRI 조영제, 및 광학 조영제, 및 초음파 조영제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
상기 항암제로는 종래 암의 치료에 사용되는 것이라면 제한없이 사용될 수 있으며, 예를들면 시스플라틴, 5-플로오우라실, 아드리아마이신, 메토트렉세이트, 빈블라스틴, 부설판, 클로람부실, 시클로포스파미드, 멜팔란, 니트로겐 무스타드, 니트로소우레아, 탁솔, 파클리탁셀, 도세탁셀, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 블레오마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 하이드록시우레아, 또는 이들의 조합 등을 사용할 수 있다. 항암제와 본 발명의 scFv 간의 연결은 당업계에 공지된 방법, 예컨대, 공유 결합, 가교 등을 통해 수행될 수 있다.
또한, 상기 항암제로는 치료용 방사성 핵종, 예를들어 32P, 47Sc, 64Ga, 64Cu, 66Cu, 67Cu, 89Sr, 90Y, 91Y, 103Pd, 103mRh, 105Rh, 111Ag, 111In, 117mSn, 125I, 131I, 145Sm, 149Pm, 153Sm, 165Dy, 166Ho, 169Er, 176Lu, 177Lu, 182Ta, 186Re, 188Re, 188W, 192Ir, 195mPt, 198Au, 199Au, 211At, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 225Ac, 230U, 252Cf 또는 이들의 조합 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 암세포 표적화 치료 컨쥬게이트에 포함되는 본 발명의 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)의 양은 결합되는 항암제의 종류 및 양에 따라 달라질 수 있다. 바람직하게는 치료를 위해 투여되는 양의 항암제를 표적 암질환 부위에 충분히 전달할 수 있는 양일 수 있다. 그러나, 약물은 그 투여 경로 및 치료 횟수뿐 만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 항암제와 결합시켜 암질환을 치료하기 위한 용도에 따른 적절한 유효량을 결정할 수 있을 것이다.
본 발명의 암세포 표적화 치료 컨쥬게이트에는 상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)의 안정성을 유지/보존하기 위한 적당한 완충용액이 포함될 수 있다. 본 발명의 암세포 표적화 치료 컨쥬게이트는 본 발명에서 원하는 효과를 나타내는 한, 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다. 예컨대, 본 발명의 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)은 피하 주사, 근육내 주사, 정맥 주사, 요도 주입, 기관지내 흡입, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사 등과 같이 비경구로 투여될 수 있다.
이외에도 본 발명의 암세포 표적화 치료 컨쥬게이트에는 일반적인 약학조성물에 통상적으로 첨가되는 약제학적으로 허용가능한 담체가 추가로 포함될 수 있다. 상기 "약제학적으로 허용가능"이란 생리학적으로 허용되고 사람이나 동물에 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말한다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 주사제의 경우에는, 예컨대 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제 및 안정화제를 사용할 수 있다. 이와 같이 본 발명의 암세포 표적화 치료 컨쥬게이트의 제형은 상술한 바와 같은 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 포함제 형태로 제조할 수 있다.
본 발명에 따르면, 나이브(naive) 인간 항체 파아지 디스플레이 라이브러리 기법을 이용하여 종양 증식 또는 전이에 관련된 uPA유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절을 스크리닝 함에 따라 상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절을 암세포 표적화 진단 또는 치료 컨쥬게이트로서 활용하여 암을 효과적으로 진단하거나 치료할 수 있으며, 더나아가 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절 자체를 항암제로서 사용할 수도 있다.
도 1은 BIAcore panning으로부터 파아지 항체를 선별하여 uPA 특이적 scFv 클론을 스크리닝한 것이고,
도 2는 선별된 파아지 항체의 암세포 결합 활성을 스크리닝 하기 위한 유세포 분석 결과이고,
도 3은 본 발명에 따른 uPA 특이적 scFv 클론인 A8의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 나타낸 것이고,
도 4는 본 발명에 따른 uPA 특이적 scFv 클론인 A8의 SDS-PAGE 사진을 나타낸 것이고,
도 5는 본 발명에 따른 uPA 특이적 scFv 클론인 A8의 농도별 결합 친화력을 측정한 것이고,
도 6은 본 발명에 따른 uPA 특이적 scFv 클론인 A8의 경쟁적 세포 결합능력을 검토한 것이다.
이하, 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 다만, 이러한 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 파아지 항체 스크리닝
1. 파아지 증폭
본 실시예에서 사용된 인간 나이브 항체 디스플레이 파아지 라이브러리 (1.1×1010 cfu)는 공동연구진(Antiviral Res, 68: 109-115, 2005)으로부터 제공받았다. Escherichia coli ER2537에 용출된 파아지를 감염시키고 파아지를 VCSM13으로 증폭시켰다. 증폭된 파아지를 재조합 E. coli의 세포 상등액으로부터 수집하여 이전에 알려진 방법(Viral Immunol, 19: 115-123, 2006)에 따라 20% PEG/2.5M NaCl로 침전시켰다. 파아지 펠렛을 트리스-완충 생리식염수 (TBS; 50mM Tris-HCl, 150mM NaCl[pH 7.5])에 용해된 1%(w/v) 소혈청알부민(BSA) 2mL에서 다시 용해시킨 후, 0.45㎛ 필터를 통해 여과하였다.
2. 파아지 항체 스크리닝
BIAcore 2000 기기(Biacore AB, Uppsala, Sweden)를 이용하여 (1) 라이브러리로부터 파아지를 선별하고, (2) 높은 결합 친화력을 스크리닝하고, (3) scFvs의 동적 특성을 분석하였다. 10mM 소듐 아세테이트(pH 5.0)에 용해된 50㎍/mL의 uPA을 주입함으로써 uPA를 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드 하이드로클로라이드/ N-하이드록시숙신이미드-활성화 CM5 센서 칩에 고정시켜 파아지 선별 및 스크리닝용 5500 공명 유니트(RU)를 준비하였고, 또한 동적 분석용 1000 RU를 준비하였다. 파아지 선별을 위하여, 100㎕의 파아지 라이브러리(1×1012 콜로니-형성 단위 [cfu]/mL)를 1㎕/min의 속도로 주입한 후, 센서 칩을 HBS-EP 완충액(0.01M HEPES [pH 7.4], 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.005% 계면활성제 P20; Biacore AB)을 6시간 동안 연속적으로 흘러주면서 세정하였고, uPA에 결합된 파아지 항체를 재생 완충액으로 용출시키고, ER2537에서 증폭시켰다. 2차 BIAcore panning 후, 회수된 파아지 항체를 96 딥웰 박테리아 배양 플레이트를 이용하여 각 클론을 분리하여 증폭시켰다. 증폭된 파아지 항체를 uPA 고정된 CM5 칩과 반응시켜 스크리닝 하였다. 대조군과 비교하여 도 1과 같이 3개의 클론 A2, E4 및 A8을 선별하였다.
<실시예 2> 유세포 분석
앞서 선별된 파아지 항체 A2, E4 및 A8이 암세포(Hep3 및 HT1080) 표면 상의 uPA를 인지하는 여부를 파아지 항체 FACS를 통해 검토하였다.
즉, 총 5×105 세포를 실온에서 1시간 동안 다양한 농도의 정제 scFv로 배양시켰다. 그후, 항-HA 마우스 단일클론 항체 및 FITC-접합 항-마우스 IgG( Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA)로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 결합 또는 표지 단계 사이에 세포를 FACS 완충액(1% BSA, 0.1% NaN3 in PBS)으로 2회 세정하였고, FACSort 유세포 분석기(BD Biosciences, San Jose, CA)를 이용하여 분석하였다.
그 결과, 도 2와 같이 A8 클론은 uPA 발현 암세포주(Hep3 및 HT1080) 표면에 결합한 반면, E4는 약하게 결합하였고 A2는 결합하지 않았다.
<실시예 3> 뉴클레오타이드 서열 결정
BigDye Terminator Ready Reaction Kit (Applied Biosystem, Foster, CA)를 이용하여 A8 클론을 코딩하는 DNA를 시퀀싱하였다. 선별된 클론의 플라스미드를 QIAprep Spin Miniprep Kit (Qiagen, Hilden, Germany)를 이용하여 준비하였다. 서열번호 3의 HRML-F (5'-GGTGGTTCCTCTAGATCTTCC-3') 및 서열번호 4의 ompseq(5'-AAGACAGCTATCGCGATTGCAG-3') 프라이머를 이용하여 A8 클론을 코딩하는 DNA 서열을 결정하였다.
그 결과, 도 3과 같이 A8의 항체 유전자는 840bp로서, 324bp의 경쇄, 402bp의 중쇄 및 76bp의 링커로 구성되었다. 각 경쇄 및 중쇄의 CDR 영역은 National Center for Biotechnology Information ( IgBlast를 통해 확인하였다.
<실시예 4> 용해성 scFv의 발현 및 정제
1. 용해성 scFv의 발현 및 정제
친화도 측정을 위하여, A8의 용해성 scFv 항체 단편을 이전에 알려진 방법(Viral Immunol, 19: 115-123, 2006)에 따라 다음과 같이 발현 유도하였다. 즉, 세포가 대수기로 성장하기 전 E. coli의 Top10F' 균주를 선별된 파아지로 감염시켰고, 0.1mM 이소프로필-β-D-치오갈락토피라노사이드(IPTG) 밤샘 유도하여 용해성 scFv를 생산하였다. 제조자 지침(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)에 따라 발현된 scFv를 AKTA explore FPLC system을 이용하여 Ni2+-전하 HP 킬레이팅 컬럼을 갖는 IMAC으로 정제하였다.
이합체성 scFv로부터 단량체 scFv를 분리하기 위하여, 샘플을 Superdex 75 컬럼 상에서 분획화하였고, 최종물의 순도를 12% SDS-PAGE를 통해 분석하였다. 단백질 밴드를 쿠마쉬 염색으로 검출하였으며, 단백질 농도를 브래드포드 시약을 이용하여 제조자 지침에 따라 측정하였다.
그 결과, 도 4와 같이 정제된 scFv는 12% SDS-PAGE에서 단일 밴드를 나타내었다.
2. 용해성 scFv의 결합 동적 특성
재생 완충액(50mM NaOH, 1M NaCl)에 용출된 파아지의 결합 동적 특성을 실시예 1에서 준비된 uPA-고정된 센서 칩을 이용하여 2㎕/min의 속도에서 분석하였다. 100개 샘플 이상의 분석 후 얻어진 센서 기준선에서의 의미있는 변화 없이 재생 완충액의 연속적인 주입을 이용하여 샘플 간의 플로우 셀을 재생시켰다. 용해성 scFv의 동적 분석을 위하여, 30㎕/min의 유속에서 측정을 수행하였다.
정제된 scFv를 단계별 희석하여 uPA 고정된 CM5 칩(1000 RU)과 반응시켜 결합속도상수(kon) 및 해리속도상수(koff)를 측정하였다. 이때, 해리상수(KD)는 결합속도상수 및 해리속도상수의 비(kon/koff)로부터 산출하였고, 센서그램은 BIAevaluation 2.1 소프트웨어(Biacore)를 이용하여 측정하였으며, 잔류 scFv는 각 측정 후 50mM NaOH로 제거하였다. 결합속도 및 해리속도를 각 scFv 농도의 센서그램으로부터 산출하였다.
그 결과, 도 5와 같이 A8 scFv의 친화력(KD)은 1.44×10-8 M-1(kon: 2.72×105 M-1, koff: 3.91×10-3 S-1)으로 나타났다.
3. 용해성 scFv의 특이적 결합 특성
암세포 표면 상에 결합된 uPA에 대한 A8 scFv의 특이적 결합을 검토하기 위하여, 10㎍의 정제된 A8 scFv를 다양한 농도의 uPA 단백질과 먼저 혼합시킨 후, 실온에서 30분 동안 배양하였다. 상기 반응혼합물을 HT1080과 4℃에서 30분 동안 반응시킨 후, 세포와 결합된 A8 scFv를 항-HA 마우스 항체 및 FITC-접합 항-마우스 IgG로 검출하였다. 그 결과, 도 6과 같이 A8 scFv의 결합은 uPA의 농도에 의존하여 감소하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> INJE UNIVERSITY INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION <120> Human monoclonal antibody scFv to urokinase plasminogen activator and medical use thereof <130> DP-2010-0452 <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 280 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ala Glu Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr 20 25 30 Ala Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile 35 40 45 Tyr Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala 65 70 75 80 Met Asp Glu Ala Asp Tyr Cys Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala 85 90 95 His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly 100 105 110 Ser Ser Arg Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 130 135 140 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 145 150 155 160 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 165 170 175 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 180 185 190 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 195 200 205 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 210 215 220 Ala Lys Gly Gly Gly Ser Gly Trp Tyr Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Thr 245 250 255 Ser Gly Gln Ala Gly Gln His His His His His His Gly Ala Tyr Pro 260 265 270 Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser 275 280 <210> 2 <211> 902 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 gccgagctcg tgctgactca gccaccttca gtgtccgtgt ccccaggaca gacagccagc 60 atcacctgct ctggagataa attgggggat aaatatgctt gctggtatca gcagaagcca 120 ggccagtccc ctgtgctggt catctatcaa gatagcaagc ggccctcagg gatccctgag 180 cgattctctg gctccaactc tgggaacaca gccactctga ccatcagcgg gacccaggct 240 atggatgagg ctgactattg ctgtcaggcg tgggacagca gcactgccca tgtggtattc 300 ggcggaggca ccaagctgac cgtcctaggc ggtggttcct ctagatcttc ctcctctggt 360 ggcggtggct cgggcggtgg tggggaggtg cagctgttgg agtctggggg aggcgtggtc 420 cagcctggga ggtccctgag actctcctgt gcagcctctg gattcacctt cagtagctat 480 ggcatgcact gggtccgcca ggctccaggc aaggggctgg agtgggtggc agttatatca 540 tatgatggaa gtaataaata ctatgcagac tccgtgaagg gccgattcac catctccaga 600 gacaattcca agaacacgct gtatctgcaa atgaacagcc tgagagctga ggacacggct 660 gtgtattact gtgcgaaagg aggtggcagt ggctggtacc ccgactactg gggccaggga 720 accctggtca ccgtctcctc agggagtgca tccgccccaa cccttactag tggccaggcc 780 ggccagcacc atcaccatca ccatggcgca tacccgtacg acgttccgga ctacgcttct 840 taggagggtg gtggctctga gggtggcggt tctgagggtg gcggctctga gggaggcggt 900 tc 902 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HRML-F primer <400> 3 ggtggttcct ctagatcttc c 21 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ompseq primer <400> 4 aagacagcta tcgcgattgc ag 22

Claims (9)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv).
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)은 402 bp의 중쇄 가변(VH) 부위, 324 bp의 경쇄 가변(VL) 부위 및 중쇄 가변(VH) 부위와 경쇄 가변(VL) 부위를 연결하는 링커를 포함하는 것을 특징으로 하는 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv).
  3. 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 코딩하는 유전자.
  4. 청구항 3에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 것을 특징으로 하는 유전자.
  5. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 유효성분으로 포함하는 항암제.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 암은 간암, 폐암, 대장암, 유방암, 전립선암, 백혈병, 림파종 및 췌장암으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항암제.
  7. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 유로키네이즈 플라스미노겐 활성화제에 특이적인 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)을 포함하고, 상기 인간 단일클론 항체 단쇄가변 분절(scFv)에 하나 또는 둘 이상의 진단제 또는 항암제를 결합시킨 암세포 표적화 진단 또는 치료 컨쥬게이트.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 진단제는 방사성핵종, 상자성 금속이온, 초상자성 나노입자, 발색효소, 크로모포어, 발광물질 및 형광물질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 암세포 표적화 진단 또는 치료 컨쥬게이트.
  9. 청구항 7에 있어서, 상기 항암제는 시스플라틴, 5-플로오우라실, 아드리아마이신, 메토트렉세이트, 빈블라스틴, 부설판, 클로람부실, 시클로포스파미드, 멜팔란, 니트로겐 무스타드, 니트로소우레아, 탁솔, 파클리탁셀, 도세탁셀, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 블레오마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 하이드록시우레아 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암세포 표적화 진단 또는 치료 컨쥬게이트.
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