KR20120016861A - Pharmaceutical composition comprising the extract paeonia lactiflora, fraction thereof or compound isolated therefrom as an active ingredient - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: A pharmaceutical composition containing Paeonia lactiflora seed extract, fraction thereof, or compound isolated from the same is provided to suppress BACE-1 activity and to treat and prevent neurodegenerative diseases. CONSTITUTION: A pharmaceutical composition for preventing or treating neurodegenerative diseases contains Paeonia lactiflora seed extract as an active ingredient. The neurodegenerative diseases include Alzheimer's dieses, Parkinsons's disease, progressive supranuclear palsy. The extract is prepared using water, alcohol of C1-C4, or mixture solvent thereof. The pharmaceutical composition contains Paeonia lactiflora seed fraction as an active ingredient. The pharmaceutical composition also contains compounds as an active ingredient. The method for preparing the compounds comprises: a step of adding water, C1-C3 alcohol, or mixture thereof to the Paeonia lactiflora seeds to prepare Paeonia lactiflora seed extract; a step of fractioning the extract with water, dichloromethane, and ethyl acetate to prepare a fraction; a step of performing silicagel column chromatography of the fraction.

Description

작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition comprising the extract paeonia lactiflora, fraction thereof or compound isolated therefrom as an active ingredient}Pharmaceutical composition comprising the extract paeonia lactiflora, fraction particular or compound isolated there from as an active ingredient

본 발명은 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 건강식품에 관한 것이다.
The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease, or health food, comprising a peony seed extract, a fraction thereof, or a compound separated therefrom as an active ingredient.

본 발명은 알츠하이머 병 등 노인성 치매를 유발하는 원인물질로 잘 알려진 베타-아밀로이드의 생성을 촉진하는 효소 BACE-1(베타-시크리타제)의 활성을 저해하는 작약종자의 유기용매 추출물 및 이로부터 분리정제된 활성물질 트랜스-레스베라트롤(trans-resveratrol), 시스-입신론-비니페린(cis-ε-viniferin), 7a,8a-시스-입신론-비니페린(7a,8a-cis-ε-viniferin), 비티시놀 C(vitisinol C), 비티시놀 F(vitisinol F), 그네틴 H(gnetin H), 서프루티코솔 A(suffruticosol A) 및 서프루티코솔 B(suffruticosol B)를 유효성분으로 함유하는 BACE-1 저해제에 관한 것이다.The present invention is an organic solvent extract of Peony seed, which inhibits the activity of the enzyme BACE-1 (beta-secretase), which promotes the production of beta-amyloid, which is well known as a causative agent of senile dementia such as Alzheimer's disease, and is isolated from it. Active substance trans-resveratrol, cis- epson-viniferin, 7a, 8a-cis- epson-viniferin, 7a, 8a-cis-ε-viniferin, BACE-1 containing vitisinol C, vitisinol F, gnetin H, suffruticosol A and suffruticosol B as active ingredients It relates to an inhibitor.

치매(dementia)는 일상생활에 장애를 주는 기억과 인지 능력의 점차적인 악화로 정의되며, 크게 혈관성 치매와 알츠하이머형 치매로 나눌 수 있다. 혈관성 치매는 주로 혈관 내에 형성된 혈전에 의해 뇌경색 또는 뇌졸중 등이 발생하는 경우에 해당되며 발병 주변의 뇌세포가 손상을 입어 기억력 상실 등의 증상이 유발되는 것으로 알려져 있다. 반면, 혈관성 치매보다 훨씬 더 많은 비중을 차지하고 있는 알츠하이머형 치매(Alzheimer's Diseases : AD)는 서서히 진행되는 뇌 질환으로서 처음에는 기억력 감퇴, 성격의 변화 그리고 사고력이 감소하는 질병으로서 대부분의 환자는 8-10년 내에 폐렴 등으로 사망한다. 전 세계적으로 65세 이상의 노인 중 3.5-10% 가량이 이 질환을 앓고 있으며 미국에서만 400만 명의 환자가 있는 것으로 추정된다. 이 질환을 치료하기 위하여 소요되는 사회적 비용만도 미국에서만 연 1000억불이 지출되고 있는 노인의 대표적인 질병이다. 알츠하이머형 치매의 특징적인 병변으로 뇌조직 중에 베타-아밀로이드가 포함된 아밀로이드 플라크(amyloid plaques), 신경섬유 농축체(neurofibrillary tangles) 등이 형성되어 면역세포에 염증반응을 일으키고, Ca2 + 채널을 파괴할 뿐 아니라, 신경전달물질인 아세틸콜린의 양을 감소시킴으로써 기억력, 인지기능의 감퇴증상이 서서히 나타나는 것으로 보고되고 있으나 아직 정확한 병인이나 치료법은 알려지지 않고 있는 실정이다. 또한, 최근의 역학 연구에 의하면 고혈압, 당뇨병, 고지혈증 및 심장질환 등 뇌혈관 질환의 위험인자들이 혈관성 치매뿐만 아니라 알츠하이머형 치매의 발병율을 증가시킨다는 보고도 있다.Dementia is defined as the gradual deterioration of memory and cognitive abilities that impair everyday life, and can be divided into vascular dementia and Alzheimer's dementia. Vascular dementia mainly corresponds to a case in which cerebral infarction or stroke occurs due to a blood clot formed in a blood vessel, and is known to cause symptoms such as memory loss due to damage to brain cells around the onset. On the other hand, Alzheimer's disease (AD), which accounts for far more than vascular dementia, is a progressive, progressive brain disease that initially causes memory loss, personality changes, and decreased thinking. Dies of pneumonia within a year; It is estimated that 3.5-10% of senior citizens over 65 years of age suffer from the disease, with an estimated 4 million patients in the United States alone. The social cost of treating the disease alone is a major illness for seniors who spend $ 100 billion annually in the United States alone. Alzheimer ' s in the brain tissue with the characteristic lesions of dementia beta- like the amyloid plaques containing amyloid (amyloid plaques), nerve fiber enriched material (neurofibrillary tangles) is formed causes an inflammatory response in immune cells destroy the Ca 2 + channel In addition, by reducing the amount of acetylcholine, a neurotransmitter, memory and cognitive decline have been reported, but the exact etiology or treatment is still unknown. In addition, recent epidemiologic studies have reported that risk factors for cerebrovascular diseases such as hypertension, diabetes, hyperlipidemia and heart disease increase the incidence of Alzheimer's disease as well as vascular dementia.

알츠하이머형 치매(AD)로 인한 인지기능저하현상에 대한 현대 의학적 관점은 대부분 뇌 콜린성 신경세포의 광범위한 변성 및 소실을 인지기능감퇴의 가장 주요한 원인으로 간주하고 있으며, 이를 극복하기 위한 방편으로 손상되지 않고 남아있는 콜린성 신경계의 활성을 증가시켜 손상된 인지기능을 부분적으로 회복시킬 수 있는 약물들을 개발하고자 하는 연구가 주종을 이루고 있다. 현재 미국 식품의약국(FDA)으로부터 알츠하이머형 치매의 치료제로 공인 받은 네가지 약물(타크린, 리바스티그민, 도네페질, 갈란타민) 모두 아세틸콜린 분해 효소의 활성을 저해함으로써 인지기능을 항진시키고자하는 일명 아세틸콜린에스테라제 저해제(acetylcholinesterase inhibitors)들이다.  The modern medical view of cognitive decline caused by Alzheimer's dementia (AD) considers the widespread degeneration and loss of brain cholinergic neurons as the main cause of cognitive decline and is not compromised as a means to overcome this. Research is focused on developing drugs that can partially restore damaged cognitive function by increasing the activity of the remaining cholinergic nervous system. All four drugs (tacrine, rivastigmine, donepezil, and galantamine), currently recognized by the US Food and Drug Administration (FDA) as a treatment for Alzheimer's dementia, aim to enhance cognitive function by inhibiting the activity of acetylcholinease. Also known as acetylcholinesterase inhibitors.

실제로 지금까지 알려진 알츠하이머형 치매의 치료제로 승인된 의약품은 아세틸콜린에스테라제 저해제가 유일한 실정이나, 이들 약제들은 일부 알츠하이머형 치매 환자(40-50%)에서 일시적인 병증 완화 효과만을 보이고 그 약효 역시 오래 지속되지 못하는 단점이 있다. 또한 질환의 특성상 장기 복용을 요하는데, 지금까지 개발된 아세틸콜린에스테라제 저해제는 간독성을 비롯한 여러 가지 부작용을 수반하는 것 또한 문제점으로 드러나고 있다. 알츠하이머형 치매에 대한 치료제의 개발이 힘들었던 가장 큰 이유는 알츠하이머형 치매의 발병원인이 정확히 밝혀지지 않았기 때문이다. 그러나 최근의 유전학적, 세포생물학적 및 분자생물학적의 진보에 따라, 알츠하이머형 치매의 발병 기전에 대한 가설로서 아밀로이드 가설이 제시되고 있다. 즉, 아밀로이드 전구 단백질(APP)에서 베타-아밀로이드가 유리되고 유리된 베타-아밀로이드는 서로 응집되어 불용성 아밀로이드 플라크를 생성하는데, 이 베타-아밀로이드의 응집 및 아밀로이드 플라크의 생성이 신경 세포의 퇴행을 일으키게 되고, 그 결과로 이차적으로 신경섬유 농축체(neurofibrillary tangle)의 생성이 유발된다는 것이다. 이와 같이 베타-아밀로이드의 뇌내 축적과 그로 인한 신경독성이 알츠하이머형 치매의 매우 중요한 발병원인으로 작용하고 있음이 밝혀짐에 따라 BACE-1 저해제와 같이 베타-아밀로이드의 생성저지, 응집저지 또는 독성저지 효과를 지니면서 상대적으로 부작용이 적은 물질의 탐색연구가 전 세계적으로 집중적으로 연구되어지고 있다. Indeed, acetylcholinesterase inhibitors are the only drugs that have been approved to treat Alzheimer's dementia, but these drugs have only temporary relief in some patients with Alzheimer's dementia (40-50%). There is a drawback that it cannot last. In addition, due to the nature of the disease requires long-term administration, the acetylcholinesterase inhibitors that have been developed so far have been accompanied by various side effects, including hepatotoxicity has also been revealed as a problem. The main reason why the development of a cure for Alzheimer's dementia has been difficult is that the cause of Alzheimer's dementia is not known. However, according to recent genetic, cellular, and molecular biological advances, the amyloid hypothesis has been proposed as a hypothesis for the pathogenesis of Alzheimer's dementia. In other words, beta-amyloid is released from the amyloid precursor protein (APP) and freed beta-amyloid aggregates with each other to produce insoluble amyloid plaques. As a result, the production of neurofibrillary tangles is secondary. As it has been found that the accumulation of beta-amyloid in the brain and its neurotoxicity are a very important cause of Alzheimer's dementia, it is possible to inhibit the production, coagulation or toxicity of beta-amyloid like BACE-1 inhibitors. Investigations of substances with relatively low side effects have been intensively studied worldwide.

베타-아밀로이드는 아밀로이드 단백질의 전구체인 APP(베타-아밀로이드 전구 단백질)가 감마-시크리타제 및 베타-시크리타제라는 단백분해효소들의 작용을 받아 생성된 아밀로이드 전구 단백질의 절편이다. 또, 베타-아밀로이드의 생성에 가장 주요한 역할을 하고 있는 효소 베타-시크리타제는 일반적으로 BACE로 불리우고 있으며 BACE-1과 BACE-2 두 개의 타입이 알려져 있다. 이 중 BACE-1은 베타-시크리타제의 대부분의 활성 (약 90%)을 지니고 있어 베타-아밀로이드 생성과정에 있어 BACE-2에 비하여 훨씬 더 중요한 역할을 담당하고 있다고 알려져 있다. 따라서 BACE-1의 활성을 선택적으로 저해하는 물질들은 알츠하이머형 치매의 유발물질인 베타-아밀로이드의 생성과정을 근원적으로 차단하므로서 알츠하이머형 치매의 치료제로 활용될 수 있는 가치를 충분히 인정받고 있다.
Beta-amyloid is a fragment of amyloid precursor protein produced by the action of proteases called gamma-secretase and beta-secretase by APP (beta-amyloid precursor protein), which is a precursor of amyloid protein. The enzyme beta-secretase, which plays a major role in the production of beta-amyloid, is generally called BACE and two types of BACE-1 and BACE-2 are known. Among them, BACE-1 has most of the activity of beta-secretase (about 90%) and is known to play a much more important role than BACE-2 in the production of beta-amyloid. Thus, substances that selectively inhibit the activity of BACE-1 is sufficiently recognized the value that can be used as a therapeutic agent for Alzheimer's dementia by blocking the production process of beta-amyloid, which is the cause of Alzheimer's dementia.

한편, 작약 (Paeonia lactiflora)는 작약과에 속하는 작약속의 여러해살이풀이며, 작약의 꽃은 아름다워 관상용으로 재배되고 있다. 뿌리는 한방에서 사용하는 약재(백작약, 적작약)로 빈혈, 진통제, 혈압 및 해열제로 이용한다. 그러나 현재까지 작약속 식물 추출물에서 BACE-1 저해활성과 관련된 연구는 거의 없는 실정이다.
Meanwhile, Peony ( Paeonia lactiflora ) is a perennial herb of the genus Peony, belonging to the peony family. Peony flowers are beautiful and are grown for ornamental purposes. Root is a herbal medicine used in Korean medicine (Baekak, Jeokpak) and used as anemia, analgesic, blood pressure and antipyretic. However, there are few studies related to BACE-1 inhibitory activity in the extracts of the peony plant.

이에, 본 발명자들은 작약 종자의 추출물 및 이의 분획물이 BACE-1 저해효과를 나타냄을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.Thus, the present inventors completed the present invention by revealing that the extract of Peony seed and fractions thereof exhibit BACE-1 inhibitory effect.

본 발명의 목적은 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease, which contains a peony seed extract, a fraction thereof or a compound separated therefrom as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 데 있다. It is another object of the present invention to provide a health food composition for preventing or improving degenerative brain disease, which contains a peony seed extract, a fraction thereof or a compound separated therefrom as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 작약 종자 추출물로부터 분리된 신규 화합물을 제공하는 데 있다.Another object of the present invention is to provide a novel compound isolated from the peony seed extract.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규 화합물의 제조방법을 제공하는 데 있다.
Another object of the present invention is to provide a method for preparing the novel compound.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 작약 종자의 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of degenerative brain disease, containing as an active ingredient extracts, fractions thereof or compounds isolated from the peony seed.

또한, 본 발명은 작약 종자의 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다.The present invention also provides a health food for preventing or improving degenerative brain disease, which contains an extract of a peony seed, a fraction thereof or a compound separated therefrom as an active ingredient.

나아가, 본 발명은 하기 화학식 1 및 화학식 2로 표시되는 작약 종자 추출물로부터 분리된 신규 화합물을 제공한다:Furthermore, the present invention provides a novel compound isolated from the peony seed extract represented by the following formula (1) and (2):

[화학식 1][Formula 1]

Figure pat00001
Figure pat00001

[화학식 2][Formula 2]

Figure pat00002

Figure pat00002

또한, 본 발명은 작약 종자를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합물을 가하여 작약 종자 추출물을 수득하는 단계(단계 1);In addition, the present invention comprises the steps of adding a peony seed water, C 1 ~ C 4 alcohol or a mixture thereof to obtain a peony seed extract (step 1);

상기 단계 1에서 수득한 추출물을 물, 다이클로로메탄 및 에틸아세테이트로 분획하여 분획물을 얻는 단계(단계 2) 및;Fractionating the extract obtained in step 1 with water, dichloromethane and ethyl acetate to obtain a fraction (step 2);

상기 단계 2에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 신규 화합물을 분리하고 정제하는 단계(단계 3)를 포함하는 상기 신규한 화합물의 제조방법을 제공한다.
The ethyl acetate fraction obtained in step 2 is subjected to silica gel column chromatography to provide a method for preparing the new compound, which comprises the step of separating and purifying the new compound (step 3).

본 발명에 따른 작약 종자의 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물은 BACE-1 저해효과를 나타내므로, 알츠하이머형 치매, 파킨슨 병, 진행성 핵상마비와 같은 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
The extract of the peony seed, fractions thereof or compounds isolated therefrom according to the present invention have a BACE-1 inhibitory effect, and thus are useful for the prevention or treatment of degenerative brain diseases such as Alzheimer's dementia, Parkinson's disease and advanced nuclear palsy. Can be.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 작약 종자 추출 및 분획에 관한 모식도이다.1 is a schematic diagram of the extract and fraction of peony seed according to an embodiment of the present invention.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 작약(Paeonia lactiflora) 종자의 추출물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease, which contains an extract of Paeonia lactiflora seed as an active ingredient.

본 발명에 따른 조성물에 있어서, 작약 종자는 재배한 것, 채취한 것 또는 시판되는 것 등이 제한 없이 사용될 수 있다. In the composition according to the present invention, peony seed can be used without limitation, such as cultivated, harvested or commercially available.

본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 작약 종자 추출시 추출 용매는 메탄올, 메탄올 수용액, 에탄올, 에탄올 수용액, 부탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 80 내지 100%의 에탄올이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. In the composition according to the present invention, the extraction solvent for extracting the peony seed is preferably used methanol, methanol aqueous solution, ethanol, ethanol aqueous solution, butanol or a mixed solvent thereof, more preferably 80 to 100% ethanol, but It is not limited.

상기 추출 용매의 양은 작약 종자 중량의 2 내지 200배로 함이 바람직하고, 10 내지 30배로 하는 것이 더 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. The amount of the extraction solvent is preferably 2 to 200 times the weight of the peony seed, more preferably 10 to 30 times, but is not limited thereto.

상기 작약 종자의 추출물을 추출하는 방법은 열수 추출, 침지 추출, 초임계 추출, 아임계 추출, 고온 추출, 고압 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 추출장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착 수지를 이용하는 방법 등 당 업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며, 가온하며 환류 추출 또는 상온에서 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출 시 온도는 10 내지 30 ℃인 것이 바람직하고, 상기 추출 시간은 1일 내지 20일인 것이 바람직하며, 5 내지 10일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
The extract of the peony seed extract is a method using an extraction device such as hot water extraction, dipping extraction, supercritical extraction, subcritical extraction, high temperature extraction, high pressure extraction, reflux cooling extraction and ultrasonic extraction or XAD and HP-20 Conventional extraction methods in the art may be used, such as a method using an adsorption resin, and the like, but is preferably heated and extracted at reflux or at room temperature, but is not limited thereto. When the extraction temperature is preferably 10 to 30 ℃, the extraction time is preferably 1 day to 20 days, more preferably 5 to 10 days, but is not limited thereto.

또한, 본 발명은 작약 종자의 분획물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease, which contains a fraction of peony seed as an active ingredient.

본 발명에 따른 분획물은Fractions according to the invention

작약 종자를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합물을 가하여 작약 종자 추출물을 수득하는 단계(단계 1); 및Adding peony seed to water, C 1 to C 4 alcohol or a mixture thereof to obtain a peony seed extract (step 1); And

상기 단계 1에서 수득한 추출물을 물, 다이클로로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 분획물을 얻는 단계(단계 2)를 포함하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.
The extract obtained in step 1 may be prepared by a method comprising the step (step 2) of obtaining a fraction by sequentially fractionating with water, dichloromethane and ethyl acetate.

이하, 본 발명에 따른 상기 제조방법을 도 1을 참조하여 단계별로 더욱 구체적으로 설명한다.
Hereinafter, the manufacturing method according to the present invention will be described in more detail step by step with reference to FIG. 1.

먼저, 본 발명에 따른 상기 단계 1은 추출용매로 작약 종자 추출물을 수득하는 단계이다. First, step 1 according to the present invention is a step of obtaining peony seed extract as an extraction solvent.

상기 작약 종자 추출물은 상술한 방법으로 제조될 수 있다.
The peony seed extract may be prepared by the method described above.

다음으로, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 수득한 추출물을 물, 다이클로로메탄 및 에틸아세테이트로 분획하여 분획물을 수득하는 단계이다. Next, step 2 is a step of obtaining a fraction by fractionating the extract obtained in step 1 with water, dichloromethane and ethyl acetate.

구체적으로, 상기 분획물은 상기 단계 1에서 얻은 작약 종자 추출물을 물에 현탁 시킨 후, 다이클로로메탄을 첨가하여 물층과 유기층으로 분리한 다음 유기층을 감압 농축 및 건조시켜 다이클로로메탄 분획물을 수득하고, 상기 물층에 에틸아세테이트를 첨가하여 물층과 유기층으로 분리한 다음 유기층을 감압 농축 및 건조하여 에틸아세테이트 분획물을 수득하는 것이 바람직하다.Specifically, the fraction was suspended in water, the peony seed extract obtained in step 1, separated into water and organic layers by adding dichloromethane, the organic layer was concentrated under reduced pressure and dried to obtain a dichloromethane fraction, Ethyl acetate is added to the water layer to separate the water layer and the organic layer, and the organic layer is preferably concentrated under reduced pressure and dried to obtain an ethyl acetate fraction.

이 때, 상기 감압 농축은 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압 건조, 진공 건조, 비등 건조, 분무 건조, 상온 건조 또는 동결 건조를 하는 것이 바람직하고 동결 건조를 하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
At this time, the vacuum concentration is preferably a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto. In addition, drying is preferably carried out under reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying, room temperature drying or freeze drying, more preferably freeze drying, but not always limited thereto.

나아가, 본 발명은 화학식 1 내지 화학식 8의 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.Furthermore, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease, which contains at least one compound selected from the group consisting of the compounds of Formulas 1 to 8 as an active ingredient.

Figure pat00003
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상기 화학식 1 내지 화학식 2의 화합물은 상기 단계 2에서 수득한 분획물을 실라카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계를 추가로 진행하여 이루어지는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.Compounds of Chemical Formulas 1 to 2 may be prepared by a method of producing the fraction obtained in Step 2 by performing silica gel column chromatography to separate and purify the compound.

구체적으로, 상기 실리카겔 컬럼 크로마토그래피는 역상 또는 실라카겔 컴럼 크로마토그래피를 1 내지 수회 수행하는 것이 바람직하다. 이동상으로는 다이클로로메탄 : 메탄올 (40 : 1 - 1 : 1) 또는 메탄올 : 물 (1 : 5 - 1 : 0)을 사용할 수 있다. 이 때, 사용한 용매는 비극성에서 극성 또는 극성에서 비극성으로 순차적으로 올려주는 농도구배 용출방식으로 용출 분리하며, 수집된 분리물의 BACE-1 저해효과를 측정하여 원하는 활성 분획을 얻는다.
Specifically, the silica gel column chromatography is preferably performed one to several times of reverse phase or silica gel column chromatography. As the mobile phase, dichloromethane: methanol (40: 1-1: 1) or methanol: water (1: 1-5-1: 1) can be used. At this time, the solvent used is eluted by a concentration gradient elution method which is sequentially raised from nonpolar to polar or from polar to nonpolar, and the desired active fraction is obtained by measuring the BACE-1 inhibitory effect of the collected isolates.

또한, 본 발명은 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 작약 종자 추출물로부터 분리된 신규 화합물을 제공한다.The present invention also provides a novel compound isolated from the peony seed extract represented by the formula (1) or (2).

[화학식 1][Formula 1]

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[화학식 2][Formula 2]

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상기 작약 종자 추출물로부터 분리된 신규 화합물은 상술한 방법으로 제조될 수 있다.
The novel compound isolated from the peony seed extract may be prepared by the method described above.

본 발명에 따른 상기 작약 종자 추출물, 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물은 BACE-1에 대한 억제 활성 값(IC50)이 0.34~11.90 ㎍/㎖로 나타나(표 5 참조) BACE-1 활성을 효과적으로 저해시키므로 상기 BACE-1로부터 유도되는 알츠하이머형 치매 등의 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
The peony seed extract, fractions or compounds isolated therefrom according to the present invention exhibit an inhibitory activity value (IC 50 ) of 0.34 to 11.90 μg / ml for BACE-1 (see Table 5) to effectively inhibit BACE-1 activity. Therefore, it can be usefully used for the prevention or treatment of degenerative brain diseases such as Alzheimer's dementia derived from BACE-1.

상기 본 발명의 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The peony seed extract, fractions thereof, or compound separated therefrom of the present invention preferably comprises 0.1 to 50% by weight of the peony seed extract, fractions thereof, or compound separated therefrom, based on the total weight of the composition, but is not limited thereto. Do not.

본 발명의 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.The composition of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of a medicament.

본 발명에 따른 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
The compositions according to the invention can be used in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral formulations, external preparations, suppositories and sterile injectable solutions, respectively, according to conventional methods. have. Carriers, excipients and diluents that may be included in the compositions of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. When formulated, diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants are usually used. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient in the composition of the present invention, for example, starch, calcium carbonate, sucrose (sucrose), lactose (lactose), gelatin, etc. are mixed and prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. . Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories. As the non-aqueous solvent and suspending agent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used. Examples of the suppository base include witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin and the like.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태, 체중, 연령, 성별, 식이, 배설율, 질환의 중증도, 약물형태, 투여시간, 투여방법, 투여경로 및 투여기간 등에 따라 그 범위가 다양하다. 1일 투여량은 본 발명에 따른 추출물, 분획물을 동결건조하였을 때의 양으로 0.0001 ㎎/㎏ 내지 500 ㎎/㎏, 바람직하게는 0.001 ㎎/㎏ 내지 100 ㎎/㎏ 이며, 필요에 따라 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.The compositions of the present invention can be administered orally or parenterally (eg, applied intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) according to the desired method, and the dosage is based on the patient's condition, weight, age, sex, The range varies depending on the diet, the rate of excretion, the severity of the disease, the form of the drug, the time of administration, the method of administration, the route of administration and the duration of administration. The daily dose is 0.0001 mg / kg to 500 mg / kg, preferably 0.001 mg / kg to 100 mg / kg, when the extract or fraction according to the present invention is lyophilized, once daily if necessary. To several doses.

본 발명의 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
The composition of the present invention may be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers.

또한, 본 발명은 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다. The present invention also provides a health food for preventing or improving degenerative brain disease, which contains a peony seed extract, a fraction thereof or a compound separated therefrom as an active ingredient.

본 발명의 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물이 알츠하이머 형 노인성 치매를 유발하는 원인 물질인 베타-아밀로이드 생성을 억제함으로써 BACE-1 저해효과를 가져와 노인성 치매 등 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 개선용 건강식품으로 사용될 수 있다.Peony seed extract, fractions or compounds isolated therefrom of the present invention inhibits the production of beta-amyloid, which is the cause of Alzheimer's type senile dementia, which has a BACE-1 inhibitory effect, preventing or improving degenerative brain diseases such as senile dementia. It can be used as health food.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of food. Examples of foods to which the above-mentioned substances may be added include dairy products including drinks, meat, sausages, breads, biscuits, rice cakes, chocolates, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums and ice cream, various soups, Beverages, alcoholic beverages, vitamin complexes, and the like, and include all healthy foods in the conventional sense.

본 발명의 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.Peony seed extract, fractions thereof, or compounds separated therefrom of the present invention may be added to foods as is or used with other foods or food ingredients, and may be suitably used according to conventional methods. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to its use purpose (for prevention or improvement). In general, the amount of the extract in the dietary supplement may be added to 0.1 to 90 parts by weight of the total food weight. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control purposes, the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.The health functional beverage composition of the present invention has no particular limitation on the other ingredients other than the above-mentioned extract as an essential ingredient in the indicated ratio, and may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient such as ordinary beverages. Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. The proportion of said natural carbohydrates is generally about 1-20 g, preferably about 5-12 g per 100 ml of the composition of the present invention.

상기 외에 본 발명의 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 대황 추출물, 이의 분획물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 작약 종자 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
In addition to the above, the peony seed extract of the present invention, its fractions or compounds separated therefrom are various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors such as flavoring agents, colorants and neutralizing agents (cheese, chocolate, etc.) ), Pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks and the like. In addition, the rhubarb extract of the present invention, fractions thereof may contain natural fruit juice and pulp for the preparation of fruit juice beverages and vegetable beverages. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is generally selected from the range of 0.1 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the peony seed extract, fractions thereof or compounds isolated therefrom.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다,
Hereinafter, the present invention will be described in detail by Examples and Experimental Examples.

단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples are merely to illustrate the present invention, but the content of the present invention is not limited by the following examples.

<< 실시예Example 1> 작약 종자 추출물의 제조 1> Preparation of Peony Seed Extract

건조된 작약종자 2 kg을 상온에서 에탄올 20 ℓ에 일주일간 냉침시킨 후 여과하고 여액을 감압 농축하여 에탄올 추출물 214 g을 얻었다.
2 kg of dried peony seeds were cooled to 20 l of ethanol at room temperature for 1 week, filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain 214 g of ethanol extract.

<< 실시예Example 2> 작약 종자  2> Peony Seed 분획물의Fraction 제조 Produce

상기 실시예 1의 에탄올 추출물을 증류수 10 ℓ에 현탁시킨 후, 동량의 다이클로로메탄을 첨가하여 물층과 유기층으로 분리하여 다이클로로메탄 분획물을 21.9 g 수득하였다. 상기 물층을 10 ℓ의 에틸아세테이트로 분획하고 얻은 분획액을 감압 농축하여 에틸아세테이트 분획물 128.6 g을 수득하였으며, 남은 물층을 동결 건조시켰다.
The ethanol extract of Example 1 was suspended in 10 L of distilled water, and then an equal amount of dichloromethane was added to separate the water and organic layers to obtain 21.9 g of a dichloromethane fraction. The water layer was partitioned with 10 L of ethyl acetate, and the obtained fraction was concentrated under reduced pressure to give 128.6 g of ethyl acetate fraction, and the remaining water layer was freeze-dried.

<< 실험예Experimental Example 1> 작약 종자 추출물의  1> Peony Seed Extract BACEBACE -1 저해효과 측정-1 inhibitory effect measurement

BACE-1 저해효과는 BACE-1 FRET Assay Kit (PanVera?)를 이용하여 측정하였으며, 자세한 시험 방법은 하기와 같다. 먼저, 10 ㎕의 BACE-1 기질 용액 (최종농도 250 nM)에 10 ㎕의 에탄올 추출물을 가하고 BACE-1 효소 (최종농도 0.3 unit/mL) 용액 10 ㎕를 첨가한 후 실온에서 60분간 인큐베이션을 하였다. 인큐베이션 완료 후 즉시, 반응액에 10 ㎕의 고정 용액 (stop solution)을 가한 후 플렉스테이션 (FlexStation)을 이용하여 545 nm (excitation) 및 585 nm (emission)에서 그 형광을 측정하여 효소 활성도를 측정하였다. 반응 혼합물의 총 부피는 40 ㎕이며 384 블랙 마이크로웰 접시 (black microwell plate)상에서 실시하였다. 실험에 사용된 효소, 기질 및 시험 버퍼 (assay buffer) 등의 자세한 조성은 하기 표 1에 나타내었다.BACE-1 inhibitory effect was measured using a BACE-1 FRET Assay Kit (PanVera®), detailed test methods are as follows. First, 10 μl of ethanol extract was added to 10 μl of BACE-1 substrate solution (final concentration 250 nM), 10 μl of BACE-1 enzyme (final concentration 0.3 unit / mL) solution was added, and then incubated at room temperature for 60 minutes. . Immediately after completion of the incubation, 10 μl of a stop solution was added to the reaction solution, and the fluorescence was measured at 545 nm (excitation) and 585 nm (emission) using a FlexStation to measure enzyme activity. . The total volume of the reaction mixture was 40 μl and run on 384 black microwell plates. Detailed compositions of enzymes, substrates, and assay buffers used in the experiments are shown in Table 1 below.

조성물Composition BACE-1 효소BACE-1 Enzyme 인형 재조합 BACE-1 (0.3 U/㎖)Doll Recombinant BACE-1 (0.3 U / ml) BACE-1 기질BACE-1 Substrate 로다민(Rhodamine)-EVNLDAEFK-퀘엔쳐(Quencher) 250 nMRhodamine-EVNLDAEFK-Quencher 250 nM BACE-1 고정 용액BACE-1 fixative solution 2.5 M 소듐 아세테이트2.5 M Sodium Acetate BACE-1 시험 버퍼BACE-1 test buffer 50 mM 소듐 아세테이트(pH 4.5)50 mM sodium acetate (pH 4.5)

BACE-1 효소활성은 효소반응 종료 시 기질이 분해된 양을 형광분석법으로 측 정하였으며 검체를 첨가하지 아니한 대조군의 효소활성과 검체를 첨가한 시험군의 효소활성을 비교하여 검체의 효소저해율을 환산하였다. 먼저 10 ug/ml 및 100 ug/ml 농도에서 검체의 BACE-1 저해율을 측정하고, 각 농도에서 50% 이상의 저해효과를 나타낸 검체에 대해서는 검체를 단계적으로 희석하여 7-8단계의 농도 구배에 따른 효소저해율를 구하였으며, 용량-반응 곡선에 대한 선형회귀분석을 통하여 각 검체의 IC50 (50% 효소저해농도) 값을 구하였다. 작약 종자 에탄올 추출물의 IC50 값은 하기 표 2에 나타내었다.BACE-1 enzyme activity was measured by fluorescence analysis of the amount of substrate degradation at the end of the enzyme reaction, and the enzyme inhibition rate of the sample was calculated by comparing the enzyme activity of the control group without the sample and the enzyme activity of the test group without the sample. It was. First, measure the BACE-1 inhibition rate of the sample at the concentration of 10 ug / ml and 100 ug / ml, and dilute the sample step by step in the concentration gradient of 7-8 steps for the sample showing 50% or more inhibitory effect at each concentration The enzyme inhibition rate was determined, and the IC 50 (50% enzyme inhibition concentration) value of each sample was determined by linear regression analysis on the dose-response curve. IC 50 values of Peony seed ethanol extract are shown in Table 2 below.

성분ingredient IC50 (㎍/ml)IC 50 (μg / ml) 작약 종자 에탄올 추출물Peony Seed Ethanol Extract 18.018.0

표 2에 나타난 바와 같이,As shown in Table 2,

작약 종자 에탄올 추출물의 IC50의 값은 18.0 ㎍/ml으로 나타나는 것을 확인하였다.
It was confirmed that the IC 50 value of the peony seed ethanol extract was 18.0 µg / ml.

<< 실험예Experimental Example 2> 작약 종자  2> Peony Seed 분획물의Fraction BACEBACE -1 저해효과 측정-1 inhibitory effect measurement

에틸아세테이트 분획물 10 ㎕를 가한 것을 제외하고는 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 수행하여 에틸아세테이트 분획물의 IC50 값을 구하여 하기 표 3에 나타내었다.An IC 50 value of the ethyl acetate fraction was obtained in the same manner as in Experimental Example 1, except that 10 μl of the ethyl acetate fraction was added.

성분ingredient IC50 (㎍/ml)IC 50 (占 퐂 / ml) 에틸아세테이트 분획물Ethyl acetate fraction 10.210.2

표 3에서 나타난 바와 같이,As shown in Table 3,

작약 종자의 에틸아세테이트 분획물은 IC50의 값이 10.2 ㎍/ml로 나타나는 것을 확인하였다.
The ethyl acetate fraction of the peony seed was confirmed that the IC 50 value was 10.2 μg / ml.

<< 실시예Example 3> 작약 종자의 에틸아세테이트  3> Peony Seed Ethyl Acetate 분획물로부터From fractions 다이클로로메탄Dichloromethane /메탄올 Methanol 분획물의Fraction 제조 Produce

상기 실시예 2에서 수득한 에틸아세테이트 분획물 128.6 g을 다이클로로메탄/메탄올 혼합용액을 이동상으로 사용하여 3 ㎖/분의 유속으로 흘려주면서 다이클로로메탄/메탄올의 혼합비를 20:1에서부터 1:1까지 순차적으로 올려주는 농도구배 용출방식의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 실시하여 총 6개의 분획(분획물 A 내지 F)으로 나누었다.
128.6 g of the ethyl acetate fraction obtained in Example 2 was flowed at a flow rate of 3 ml / min using a dichloromethane / methanol mixed solution as a mobile phase, and the mixing ratio of dichloromethane / methanol was changed from 20: 1 to 1: 1. Concentration gradient eluted silica gel column chromatography was performed sequentially and divided into a total of six fractions (fractions A to F).

<< 실시예Example 4> 작약 종자의  4> Peony Seeds 다이클로로메탄Dichloromethane /메탄올 Methanol 분획물로부터From fractions 화합물의 제조 Preparation of compounds

상기 실시예 3에서 얻은 6개의 분획물 중 분획물 B 및 C로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상으로서 다이클로로메탄/메탄올 40:1 - 1:1, 유속 3 ㎖/분)를 실시하여 트렌스-레스베라트롤(B1), 비티시놀 C(B2), 비티시놀 F(B3), 시스-입신론-비니페린(B4), 7a, 8a-시스-입신론-비니페린(B5)을 분리하였다. 신규한 화합물인 7a, 8a-시스-입신론-비니페린 및 비티시놀 F는 1H-NMR, 13C-NMR, HMQC, HMBC, DEPT 및 NOE를 사용하여 구조를 동정하였으며 화학식 1 및 화학식 2로 나타내었다.Of the six fractions obtained in Example 3, fractions B and C were subjected to silica gel column chromatography (dichloromethane / methanol 40: 1-1: 1 as a mobile phase, flow rate 3 ml / min) to give trans-resveratrol (B 1 ), Bitisinol C (B 2 ), bitisinol F (B 3 ), cis-epsinon-viniferin (B 4 ), 7a, 8a-cis-gypsin-vinifrine (B 5 ). The novel compounds 7a, 8a-cis-cintron-viniprine and bitycinol F were identified using 1 H-NMR, 13 C-NMR, HMQC, HMBC, DEPT, and NOE to formulas 1 and 2 Indicated.

또한 분획물 D 및 E로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피와 RP-18 컬럼 크로마토그래피 기법을 이용하여 서프루티코솔 A(D1), 서프루티코솔 B(D2) 및 그네틴 H(D3)를 분리하였다. Fractions D and E were also used to separate serupruticol A (D 1 ), surfruticol B (D 2 ) and gretin H (D 3 ) using silica gel column chromatography and RP-18 column chromatography.

상기 분획물 B, C, D 및 E로부터 분리한 화합물들의 1H-NMR, 13C-NMR 분석 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 1 H-NMR, 13 C-NMR analysis of the compounds isolated from the fractions B, C, D and E are shown in Table 4 below.

화합물 구조Compound structure 데이터data

Figure pat00013

[화학식 1]
Figure pat00013

[Formula 1] 1H-NMR (500 MHz, acetone-d6) : δ 7.04 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2a, 6a), 6.63 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-3a, 5a), 5.87 (1H, d, J = 8.0 Hz, H7a), 4.70 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-8a), 5.82 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-10a), 5.98 (1H, t, J = 2.1 Hz, H-12a), 5.82 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-14a), 7.24 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2b, 6b), 6.78 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-3b, 5b), 6.78 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-7b), 6.97 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-8b), 6.39 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-12b), 6.75 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-13b).
13C-NMR (125MHz, acetone-d6) : δ 162.5 (C-11b), 159.9 (C-11a, 13a), 159.6 (C-13b), 158.2 (C-4b), 158.2 (C-4a), 147.5 (C-9a), 134.4 (C-9b), 133.9 (C-1a), 130.1 (C-7b), 129.9 (C-1b), 128.7 (C-2b, 6b), 128.0 (C-2a, 6a), 123.5 (C-8b), 119.9 (C-10b), 116.3 (C-3b, 5b), 116.2 (C-3a, 5a), 107.0 (C-10a, 14a), 104.4 (C-14b), 102.1 (C-12a), 96.8 (C-12b), 93.9 (C-7a), 57.1 (C-8a).
1 H-NMR (500 MHz, acetone-d 6 ): δ 7.04 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2a, 6a), 6.63 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-3a, 5a) , 5.87 (1H, d, J = 8.0 Hz, H7a), 4.70 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-8a), 5.82 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-10a), 5.98 (1H , t, J = 2.1 Hz, H-12a), 5.82 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-14a), 7.24 (2H, d, J = 8.6 Hz, H-2b, 6b), 6.78 (2H , d, J = 8.6 Hz, H-3b, 5b), 6.78 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-7b), 6.97 (1H, d, J = 16.4 Hz, H-8b), 6.39 (1H , d, J = 2.0 Hz, H-12b), 6.75 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-13b).
13 C-NMR (125 MHz, acetone-d 6 ): δ 162.5 (C-11b), 159.9 (C-11a, 13a), 159.6 (C-13b), 158.2 (C-4b), 158.2 (C-4a) , 147.5 (C-9a), 134.4 (C-9b), 133.9 (C-1a), 130.1 (C-7b), 129.9 (C-1b), 128.7 (C-2b, 6b), 128.0 (C-2a , 6a), 123.5 (C-8b), 119.9 (C-10b), 116.3 (C-3b, 5b), 116.2 (C-3a, 5a), 107.0 (C-10a, 14a), 104.4 (C-14b ), 102.1 (C-12a), 96.8 (C-12b), 93.9 (C-7a), 57.1 (C-8a).
Figure pat00014

[화학식 2]
Figure pat00014

(2)
1H-NMR (300 MHz, acetone-d6) δ: 7.36 (2H, d, J=8.5 Hz, H-2b, 6b), 6.99 (1H, d, J=16.0 Hz, H-8a), 6.94 (2H, d, J=8.5 Hz, H-3b, 5b), 6.82 (2H, d, J=8.5 Hz, H-2a, 6a), 6.71 (1H, d, J=16.0 Hz, H-7a), 6.68 (2H, d, J=8.5 Hz, H-3a, 5a), 6.34 (1H, s, H-3), 6.11 (2H, d, J=2.0 Hz, H-2c, 6c), 6.10 (1H, d, J=2.0 Hz, H-4c), 4.17 (1H, br s, H-1), 3.86 (1H, d, J=11.0 Hz, H-7), 3.15 (1H, t, J=11.0 Hz, H-6), 2.95 (1H, dd, J=11.0, 17.5 Hz, H-5a), 2.27 (1H, d, J=17.5 Hz, H-5b), 1.23 (5H, t, J=7.2 Hz, -OCH2CH3).
13C-NMR (125 MHz, acetone-d6) d: 201.6 (C-4), 173.3 (C=O), 159.3 (C-4a), 159.3 (C-3c), 159.3 (C-5c), 156.7 (C-4b), 148.7 (C-2), 147.4 (C-1c), 136.6 (C-1b), 135.2 (C-7a), 131.8 (C-3), 129.8 (C-2a), 129.8 (C-6a), 129.7 (C-8a), 129.4 (C-1a), 129.3 (C-2b), 129.3 (C-6b), 116.6 (C-3a), 116.6 (C-5a), 116.0 (C-3b), 116.0 (C-5b), 107.4 (C-2c), 107.4 (C-6c), 101.9 (C-4c), 62.3 (-OCH2), 45.5 (C-7), 48.9 (C-5), 53.3 (C-6), 50.8 (C-1), 14.5 (-CH3)
1 H-NMR (300 MHz, acetone-d 6 ) δ: 7.36 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2b, 6b), 6.99 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8a), 6.94 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3b, 5b), 6.82 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2a, 6a), 6.71 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7a) , 6.68 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3a, 5a), 6.34 (1H, s, H-3), 6.11 (2H, d, J = 2.0 Hz, H-2c, 6c), 6.10 ( 1H, d, J = 2.0 Hz, H-4c), 4.17 (1H, br s, H-1), 3.86 (1H, d, J = 11.0 Hz, H-7), 3.15 (1H, t, J = 11.0 Hz, H-6), 2.95 (1H, dd, J = 11.0, 17.5 Hz, H-5a), 2.27 (1H, d, J = 17.5 Hz, H-5b), 1.23 (5H, t, J = 7.2 Hz, -OCH 2 CH 3 ).
13 C-NMR (125 MHz, acetone-d 6 ) d: 201.6 (C-4), 173.3 (C = O), 159.3 (C-4a), 159.3 (C-3c), 159.3 (C-5c), 156.7 (C-4b), 148.7 (C-2), 147.4 (C-1c), 136.6 (C-1b), 135.2 (C-7a), 131.8 (C-3), 129.8 (C-2a), 129.8 (C-6a), 129.7 (C-8a), 129.4 (C-1a), 129.3 (C-2b), 129.3 (C-6b), 116.6 (C-3a), 116.6 (C-5a), 116.0 ( C-3b), 116.0 (C-5b), 107.4 (C-2c), 107.4 (C-6c), 101.9 (C-4c), 62.3 (-OCH 2 ), 45.5 (C-7), 48.9 (C -5), 53.3 (C-6), 50.8 (C-1), 14.5 (-CH 3 )
Figure pat00015

[화학식 3]
Figure pat00015

(3)
1H-NMR (300 MHz, acetone-d6) : δ 7.33 (2H, d, J = 8.5, H-2', 6'), 6.94 (2H, d, J = 16.5, H-7'), 6.79 (2H, d, J = 16.5, H-8'), 6.75 (2H, d, J = 8.5, H-3', 5'), 6.43 (2H, d, J = 2.5, H-2, 6), 6.14 (2H, d, J = 2.5, H-4).
13C-NMR (75MHz, acetone-d6) : δ 159.7 (C-3, 5), 158.4 (C-10), 141.3 (C-1), 131.4 (C-7), 130.4 (C-13), 129.4 (C-8), 128.8 (C-12), 127.0 (C-14), 116.5 (C-11), 115.8 (C-9), 108.2 (C-6), 105.8 (C-2), 102.6 (C-4).
1 H-NMR (300 MHz, acetone-d 6 ): δ 7.33 (2H, d, J = 8.5, H-2 ', 6'), 6.94 (2H, d, J = 16.5, H-7 '), 6.79 (2H, d, J = 16.5, H-8 '), 6.75 (2H, d, J = 8.5, H-3', 5 '), 6.43 (2H, d, J = 2.5, H-2, 6 ), 6.14 (2H, doublet, J = 2.5, H-4).
13 C-NMR (75 MHz, acetone-d 6 ): δ 159.7 (C-3, 5), 158.4 (C-10), 141.3 (C-1), 131.4 (C-7), 130.4 (C-13) , 129.4 (C-8), 128.8 (C-12), 127.0 (C-14), 116.5 (C-11), 115.8 (C-9), 108.2 (C-6), 105.8 (C-2), 102.6 (C-4).
Figure pat00016

[화학식 4]
Figure pat00016

[Chemical Formula 4]
1H-NMR (300 MHz, acetone-d6) δ: 7.12 (2H, d, J=8.0 Hz, H-2, 6), 7.09 (2H, d, J=8.0 Hz, H-2', 6'), 6.74 (2H, d, J=8.0 Hz, H-3, 5), 6.64 (3H, br s, H-10, 12, 14), 6.35 (1H, d, J=1.8 Hz, H-14'), 6.31 (1H, d, J=4.0 Hz, H-7'), 6.07 (1H, d, J=4.0 Hz, H-8'), 6.04 (1H, d, J=1.8 Hz, H-12'), 5.33 (1H, d, J=5.3 Hz, H-7), 4.09 (1H, J=5.3 Hz, H-8).
13C-NMR (75 MHz, acetone-d6) δ: 161.9 (C-11b), 158.9 (C-11a, 13a), 158.9 (C-13b), 157.5 (C-4b), 157.0 (C-4a), 146.4 (C-9a), 136.4 (C-9b), 133.1 (C-1a), 130.6 (C-7b), 130.3 (C-2b), 130.3 (C-6b), 128.7 (C-1b), 127.6 (C-2), 127.6 (C-6), 125.5 (C-8b), 119.4 (C-10b), 115.4 (C-3), 115.4 (C-5), 115.2 (C-3b), 115.2 (C-5b), 107.8 (C-14b), 106.2 (C-10), 106.2 (C-14), 101.2 (C-12), 96.0 (C-12b), 93.5 (C-7), 56.3 (C-8).
1 H-NMR (300 MHz, acetone-d 6 ) δ: 7.12 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-2, 6), 7.09 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-2 ′, 6 '), 6.74 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-3, 5), 6.64 (3H, br s, H-10, 12, 14), 6.35 (1H, d, J = 1.8 Hz, H- 14 '), 6.31 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-7'), 6.07 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-8 '), 6.04 (1H, d, J = 1.8 Hz, H -12 '), 5.33 (1H, d, J = 5.3 Hz, H-7), 4.09 (1H, J = 5.3 Hz, H-8).
13 C-NMR (75 MHz, acetone-d 6 ) δ: 161.9 (C-11b), 158.9 (C-11a, 13a), 158.9 (C-13b), 157.5 (C-4b), 157.0 (C-4a ), 146.4 (C-9a), 136.4 (C-9b), 133.1 (C-1a), 130.6 (C-7b), 130.3 (C-2b), 130.3 (C-6b), 128.7 (C-1b) , 127.6 (C-2), 127.6 (C-6), 125.5 (C-8b), 119.4 (C-10b), 115.4 (C-3), 115.4 (C-5), 115.2 (C-3b), 115.2 (C-5b), 107.8 (C-14b), 106.2 (C-10), 106.2 (C-14), 101.2 (C-12), 96.0 (C-12b), 93.5 (C-7), 56.3 (C-8).
Figure pat00017

[화학식 5]
Figure pat00017

[Chemical Formula 5]
1H-NMR (300 MHz, acetone-d6) δ: 7.38 (2H, d, J=8.5 Hz, H-2b, 6b), 6.93 (1H, d, J=16.0 Hz, H-8a), 6.90 (2H, d, J=8.5 Hz, H-2a, 6a), 6.83 (2H, d, J=8.5 Hz, H-3b, 5b), 6.80 (1H, d, J=16.0 Hz, H-7a), 6.67 (2H, d, J=8.5 Hz, H-3a, 5a), 6.64 (1H, s, H-3), 6.16 (2H, d, J=2.0 Hz, H-2c, 6c), 6.13 (1H, m, H-4c), 3.21-3.00 (6H, m, H-1, 5, 6, 7).
13C-NMR (125 MHz, acetone-d6) δ: 201.7 (C-4), 159.2 (C-4a, 3c), 156.6 (C-5c), 155.2 (C-4b, 2), 148.8 (C-1c), 136.9 (C-1b), 135.6 (C-7a), 131.7 (C-3), 129.8 (C-2a, 6a), 129.5 (C-2b, 6b, 1a), 129.3 (C-8a), 116.5 (C-3a, 5a), 115.8 (C-3b, 5b), 107.2 (C-2c, 6c), 101.6 (C-4c), 52.6 (C-7), 50.5 (C-5), 46.5 (C-6), 34.7 (C-1).
1 H-NMR (300 MHz, acetone-d 6 ) δ: 7.38 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2b, 6b), 6.93 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8a), 6.90 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2a, 6a), 6.83 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3b, 5b), 6.80 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7a) , 6.67 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3a, 5a), 6.64 (1H, s, H-3), 6.16 (2H, d, J = 2.0 Hz, H-2c, 6c), 6.13 ( 1H, m, H-4c), 3.21-3.00 (6H, m, H-1, 5, 6, 7).
13 C-NMR (125 MHz, acetone-d 6 ) δ: 201.7 (C-4), 159.2 (C-4a, 3c), 156.6 (C-5c), 155.2 (C-4b, 2), 148.8 (C -1c), 136.9 (C-1b), 135.6 (C-7a), 131.7 (C-3), 129.8 (C-2a, 6a), 129.5 (C-2b, 6b, 1a), 129.3 (C-8a ), 116.5 (C-3a, 5a), 115.8 (C-3b, 5b), 107.2 (C-2c, 6c), 101.6 (C-4c), 52.6 (C-7), 50.5 (C-5), 46.5 (C-6), 34.7 (C-1).
Figure pat00018

[화학식 6]
Figure pat00018

[Formula 6]
1H-NMR (300 MHz, acetone-d6) δ : 7.28 (4H, dd, J = 1.8, 8.6 Hz, H-2a, 6a, 2c, 6c), 6.90 (2H, dd, J = 1.8, 8.7 Hz, H-2b, 6b), 6.86 (4H, dd, J = 1.8, 8.6 Hz, H-3a, 5a, 3c, 5c), 6.64 (2H, dd, J = 1.8, 8.7Hz, H-3b, 5b), 6.63 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-7b), 6.55 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-8b), 6.49 (1H, s, H-12b), 6.26 (4H, d, J = 2.1 Hz, H-10a, 14a, H-10c, 14c), 6.22 (2H, d, J = 2.1 Hz, H-12a, 12c), 5.48 (2H, d, J = 5.1 Hz, H-7a, H-7c), 4.57 (2H, d, J = 5.1 Hz, H-8a, 8c).
13C-NMR (75MHz, acetone-d6) δ : 161.9 (C-11a, 11c, 13b), 159.1 (C-4a, 13a, 4c, 13c), 157.4 (C-4b, 11b), 146.8 (C-9a, 9c), 133.5 (C-9b), 133.3 (C-7b), 132.5 (C-1a, 1c), 129.7 (C-1b), 128.1 (C-2a, 6a, 2c, 6c), 127.5 (C-2b, 6b), 121.7 (C-8b), 119.5 (C-10b, 14b), 115.8 (C-3a, 5a, 3b, 5b, 3c, 5c), 106.7 (C-10a, 14a, C-10c, 14c), 101.7 (C-12a, 12c), 93.4 (C-8c), 93.4 (C-8a), 91.0 (C-12b), 57.4 (C-7a, 7c).
1 H-NMR (300 MHz, acetone-d 6 ) δ: 7.28 (4H, dd, J = 1.8, 8.6 Hz, H-2a, 6a, 2c, 6c), 6.90 (2H, dd, J = 1.8, 8.7 Hz, H-2b, 6b), 6.86 (4H, dd, J = 1.8, 8.6 Hz, H-3a, 5a, 3c, 5c), 6.64 (2H, dd, J = 1.8, 8.7 Hz, H-3b, 5b), 6.63 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-7b), 6.55 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-8b), 6.49 (1H, s, H-12b), 6.26 (4H, d, J = 2.1 Hz, H-10a, 14a, H-10c, 14c), 6.22 (2H, d, J = 2.1 Hz, H-12a, 12c), 5.48 (2H, d, J = 5.1 Hz, H -7a, H-7c), 4.57 (2H, d, J = 5.1 Hz, H-8a, 8c).
13 C-NMR (75 MHz, acetone-d 6 ) δ: 161.9 (C-11a, 11c, 13b), 159.1 (C-4a, 13a, 4c, 13c), 157.4 (C-4b, 11b), 146.8 (C -9a, 9c), 133.5 (C-9b), 133.3 (C-7b), 132.5 (C-1a, 1c), 129.7 (C-1b), 128.1 (C-2a, 6a, 2c, 6c), 127.5 (C-2b, 6b), 121.7 (C-8b), 119.5 (C-10b, 14b), 115.8 (C-3a, 5a, 3b, 5b, 3c, 5c), 106.7 (C-10a, 14a, C -10c, 14c), 101.7 (C-12a, 12c), 93.4 (C-8c), 93.4 (C-8a), 91.0 (C-12b), 57.4 (C-7a, 7c).
Figure pat00019

[화학식 7]
Figure pat00019

[Formula 7]
1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ : 7.10 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2'', 6''), 6.95 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2, 6), 6.68 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3' ',5''), 6.48 (2H, d, J = 8.8 Hz ,2', 6'), 6. 37 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3, 5), 6.25 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-12''), 6.19 (1H, d, J = 0.8 Hz, H-12'), 6.12 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3', 5'), 6.06 (1H, t, J = 2.2 Hz, H-12), 5.98 (2H, d, J = 2.2 Hz, H-10, 14), 5.93 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-14''), 5.68 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-7''), 4.23 (1H, d, J = 3.2 Hz, H-7'), 4.74 (1H, s, H-8), 4.35 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-8''), 3.93 (1H, m, H-8'), 3.68 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-7).
13C-NMR (75MHz, CD3OD) δ : 160.2 (C-11'), 159.3 (C-11, 13), 158.9 (C-4''), 156.7 (C-13''), 156.5 (C-4), 155.1 (C-13'), 154.9 (C-11''), 154.5 (C-4'), 148.4 (C-9), 144.7 (C-9'), 141.8 (C-9''), 135.5 (C-1), 133.9 (C-1'), 130.8 (C-1''), 130.7 (C-2', 6'), 130.7 (C-2, 6), 130.5 (C-2'', 6''), 126.9 (C-10''),123.0 (C-14'), 117.3 (C-10'), 116.2 (C-3'', 5''), 115.4 (C-3, 5), 114.2 (C-3', 5'), 106.8 (C-10, 14), 105.9 (C-14''), 101.9 (C-12''), 101.4 (C-12), 96.2 (C-12'), 91.5 (C-7''), 61.0 (C-7), 54.6 (C-8), 48.8 (C-8''), 48.6 (C-8'), 39.8 (C-7').
1 H-NMR (300 MHz, CD 3 OD) δ: 7.10 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2``, 6 ''), 6.95 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2 , 6), 6.68 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3 '', 5 '), 6.48 (2H, d, J = 8.8 Hz, 2', 6 '), 6. 37 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3, 5), 6.25 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-12 ''), 6.19 (1H, d, J = 0.8 Hz, H-12 '), 6.12 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3 ', 5'), 6.06 (1H, t, J = 2.2 Hz, H-12), 5.98 (2H, d, J = 2.2 Hz, H-10, 14), 5.93 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-14``), 5.68 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-7``), 4.23 (1H, d, J = 3.2 Hz, H-7 '), 4.74 (1H, s, H-8), 4.35 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-8``), 3.93 (1H, m, H-8'), 3.68 (1H , d, J = 8.0 Hz, H-7).
13 C-NMR (75 MHz, CD 3 OD) δ: 160.2 (C-11 '), 159.3 (C-11, 13), 158.9 (C-4``), 156.7 (C-13''), 156.5 ( C-4), 155.1 (C-13 '), 154.9 (C-11``), 154.5 (C-4'), 148.4 (C-9), 144.7 (C-9 '), 141.8 (C-9 ''), 135.5 (C-1), 133.9 (C-1 '), 130.8 (C-1''), 130.7 (C-2', 6 '), 130.7 (C-2, 6), 130.5 ( C-2 '', 6 ''), 126.9 (C-10 ''), 123.0 (C-14 '), 117.3 (C-10'), 116.2 (C-3 '', 5 ''), 115.4 (C-3, 5), 114.2 (C-3 ', 5'), 106.8 (C-10, 14), 105.9 (C-14``), 101.9 (C-12 ''), 101.4 (C- 12), 96.2 (C-12 '), 91.5 (C-7``), 61.0 (C-7), 54.6 (C-8), 48.8 (C-8''), 48.6 (C-8') , 39.8 (C-7 ').
Figure pat00020

[화학식 8]
Figure pat00020

[Chemical Formula 8]
1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ : 7.58 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2'', 6''), 6.92 (2H, brd, 2', 6'), 6.91 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3'', 5''), 6.50 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3', 5'), 6.29 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3, 5), 6.27 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2, 6), 6.24 (1H, s, H-10), 6.23 (1H, s, H-14), 6.22 (1H, s, H-12'), 6.18 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-12''), 6.15 (1H, t, J = 2.2Hz, H-12), 5.95 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-14''), 5.86 (1H, d , J = 11.2 Hz, H-7''), 5.09 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-8''), 4.23 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-7'), 4.10 (1H, m, H-8'), 4.09 (1H, s, H-8), 3.81 (1H, d, J = 6.0 Hz, H-7).
13C-NMR (75MHz, CD3OD) δ : 160.2 (C-11'), 159.4 (C-11, 13), 159.1 (C-4''), 158.4 (C-13''), 157.2 (C-11''), 156.1 (C-4'), 156.0 (C-4), 155.7 (C-13'), 147.5 (C-9'), 147.5 (C-9), 142.4 (C-9''), 135.5 (C-1), 133.8 (C-1'), 133.0 (C-2', 6'), 130.9 (C-1''), 130.5 (C-2'', 6''), 129.5 (C-2, 6), 123.6 (C-14'), 122.9 (C-10''), 118.5 (C-10'), 116.5 (C-3'', 5''), 115.2 (C-3, 5), 114.7 (C-3', 5'), 107.4 (C-10, 14), 105.0 (C-12''), 103.7 (C-14''), 101.5 (C-12), 96.3 (C-12'), 91.1 (C-7''), 63.1 (C-7), 56.9 (C-8), 49.1(C-8''), 47.8 (C-8'), 46.5 (C-7').
1 H-NMR (300 MHz, CD 3 OD) δ: 7.58 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2``, 6 ''), 6.92 (2H, brd, 2 ', 6'), 6.91 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3``, 5 ''), 6.50 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3 ', 5'), 6.29 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3, 5), 6.27 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-2, 6), 6.24 (1H, s, H-10), 6.23 (1H, s, H-14), 6.22 (1H, s, H-12 '), 6.18 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-12``), 6.15 (1H, t, J = 2.2 Hz, H-12), 5.95 (1H, d , J = 2.4 Hz, H-14``), 5.86 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-7 ''), 5.09 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-8 ''), 4.23 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-7 '), 4.10 (1H, m, H-8'), 4.09 (1H, s, H-8), 3.81 (1H, d, J = 6.0 Hz, H-7).
13 C-NMR (75 MHz, CD 3 OD) δ: 160.2 (C-11 ′), 159.4 (C-11, 13), 159.1 (C-4``), 158.4 (C-13``), 157.2 ( C-11 ''), 156.1 (C-4 '), 156.0 (C-4), 155.7 (C-13'), 147.5 (C-9 '), 147.5 (C-9), 142.4 (C-9 ''), 135.5 (C-1), 133.8 (C-1 '), 133.0 (C-2', 6 '), 130.9 (C-1''), 130.5 (C-2'',6'' ), 129.5 (C-2, 6), 123.6 (C-14 '), 122.9 (C-10''), 118.5 (C-10'), 116.5 (C-3``, 5 ''), 115.2 (C-3, 5), 114.7 (C-3 ', 5'), 107.4 (C-10, 14), 105.0 (C-12``), 103.7 (C-14 ''), 101.5 (C- 12), 96.3 (C-12 '), 91.1 (C-7''), 63.1 (C-7), 56.9 (C-8), 49.1 (C-8''), 47.8 (C-8') , 46.5 (C-7 ').

<< 실험예Experimental Example 3> 작약 종자  3> Peony Seed 분획물로부터From fractions 얻은 화합물들의  Of the obtained compounds BACEBACE -1 저해 효과 측정-1 inhibition effect measurement

상기 실시예 4에서 얻은 트랜스-레스베라트롤 (trans-resveratrol), 시스-입신론-비니페린 (cis-ε-viniferin), 7a,8a시스입신론비니페린 (7a,8a-cis-ε-viniferin), 비티시놀시 (vitisinol C), 비티시놀에프 (vitisinol F), 그네틴에이치 (gnetin H), 서프루티코솔에이 (suffruticosol A) 및 서프루티코솔비 (suffruticosol B) 각각의 BACE-1 저해효과를 측정하였다. Trans-resveratrol obtained in Example 4, cis- epson-viniferin, 7a, 8a cissintron viniferin (7a, 8a-cis-ε-viniferin), Determination of BACE-1 inhibitory effects of vitisinol C, vitisinol F, gnetin H, suffruticosol A and suffruticosol B It was.

에탄올 추출물 대신 각 화합물들을 10 ㎕씩 사용한 것을 제외하고는 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 수행하여 각 화합물들의 IC50 값을 구하여 하기 표 5에 나타내었다.Except for using 10 μl of each compound instead of ethanol extract was carried out in the same manner as in Experimental Example 1 to obtain the IC 50 value of each compound is shown in Table 5 below.

성분ingredient IC50 (㎍/ml)IC 50 (μg / ml) 7a, 8a-시스-입신론-비니페린 (화학식 1)7a, 8a-cis- epsonology-viniferin (Formula 1) 11.9011.90 비티시놀 F (화학식 2)Biticinol F (Formula 2) 2.212.21 트랜스-레스베라트롤 (화학식 3)Trans-Resveratrol (Formula 3) 1.291.29 시스-입신론-비니페린 (화학식 4)Cis-Adrenalism-Viniferin (Formula 4) 4.014.01 비티시놀 C (화학식 5)Biticinol C (Formula 5) 1.431.43 그네틴 H (화학식 6)Swingin H (Formula 6) 0.340.34 서프루티코솔 A (화학식 7)Surfactose A (Formula 7) 5.995.99 서프루티코솔 B (화학식 8)Surfacticosol B (Formula 8) 0.880.88

표 5에 나타난 바와 같이, As shown in Table 5,

작약 종자 분획물로부터 얻어진 화합물인 트랜스-레스베라트롤, 시스-입신론-비니페린, 7a,8a-시스-입신론-비니페린, 비티시놀 C, 비티시놀 F, 그네틴 H, 서프루티코솔 A, 서프루티코솔 B는 IC50의 값은 18.0 ㎍/ml 이하로 모두 BACE-1 활성을 농도 의존적으로 저해하고 있는 것으로 나타났다. 특히, 그네틴 H, 서프루티코솔 B의 경우 1 이하의 IC50값을 가지는 매우 좋은 활성을 나타내었고, 신규한 화합물인 7a,8a-시스-입신론-비니페린 및 비티시놀 F 또한 각각 IC50값이 1.29, 1,43로 좋은 활성을 나타내었다. 따라서, 상기 화합물들은 BACE-1 활성을 저해하는 능력이 뛰어나므로 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.
Compounds obtained from Peony seed fractions are trans-resveratrol, cis-epsinon-viniferin, 7a, 8a-cis-epsinon-viniferin, bitisinol C, bitisinol F, gretinine H, serruticosol A, supruti Corsol B was found to inhibit BACE-1 activity in a concentration-dependent manner with an IC 50 value of 18.0 μg / ml or less. In particular, in the case of Swingin H, surfrutisol B showed a very good activity with an IC 50 value of 1 or less, and the novel compounds 7a, 8a-cis- epson-viniprine and Vitisinol F also showed IC 50, respectively. Values of 1.29 and 1,43 showed good activity. Therefore, the compounds have excellent ability to inhibit BACE-1 activity, and thus may be usefully used as a preventive and therapeutic agent for degenerative brain diseases.

<제제예 1> 약학적 제제의 제조 Formulation Example 1 Preparation of Pharmaceutical Formulation

1-1. 1-1. 산제의Powder 제조 Produce

작약 종자 추출물 500 ㎎Peony seed extract 500 mg

유당 100 ㎎Lactose 100 mg

탈크 10 ㎎
Talc 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
The above ingredients are mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.

1-2. 정제의 제조1-2. Manufacture of tablets

작약 종자 추출물 500 ㎎Peony seed extract 500 mg

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎
2 mg magnesium stearate

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
After mixing the above components, tablets are prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.

1-3. 캅셀제의 제조1-3. Manufacture of capsules

작약 종자 추출물 500 ㎎Peony seed extract 500 mg

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎
2 mg magnesium stearate

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
The above components are mixed according to a conventional capsule preparation method and filled in gelatin capsules to prepare capsules.

1-4. 주사제의 제조1-4. Injection preparation

작약 종자 추출물 500 ㎎Peony seed extract 500 mg

주사용 멸균 증류수 적량Sterile sterilized water for injection

pH 조절제 적량
pH adjuster

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
According to the conventional method for preparing an injection, the amount of the above ingredient is prepared per ampoule (2 ml).

1-5. 1-5. 액제의Liquid 제조 Produce

작약 종자 추출물 100 ㎎Peony seed extract 100 mg

이성화당 10 g10 g of isomerized sugar

만니톨 5 g5 g of mannitol

정제수 적량
Purified water

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액체를 제조한다.
According to the conventional method of preparing a liquid solution, each component is added to the purified water to dissolve, the lemon flavor is added appropriately, the above components are mixed, purified water is added, the whole is adjusted to 100 ml by the addition of purified water, and then filled into a brown bottle. The liquid is prepared by sterilization.

제조예2Preparation Example 2 : 건강식품의 제조: Manufacture of health food

작약 종자 추출물 1000 ㎎Peony Seed Extract 1000mg

비타민 혼합물 적량Vitamin mixture proper amount

비타민 A 아세테이트 70 ㎍70 μg of Vitamin A Acetate

비타민 E 1.0 ㎎Vitamin E 1.0 mg

비타민 0.13 ㎎0.13 mg of vitamin

비타민 B2 0.15 ㎎0.15 mg of vitamin B 2

비타민 B6 0.5 ㎎0.5 mg of vitamin B 6

비타민 B12 0.2 ㎍Vitamin B 12 0.2 g

비타민 C 10 ㎎Vitamin C 10 mg

비오틴 10 ㎍10 μg biotin

니코틴산아미드 1.7 ㎎Nicotinic Acid 1.7 mg

엽산 50 ㎎Folic acid 50 mg

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎Calcium Pantothenate 0.5mg

무기질 혼합물 적량Mineral mixture

황산제1철 1.75 ㎎Ferrous Sulfate 1.75 mg

산화아연 0.82 ㎎Zinc Oxide 0.82 mg

탄산마그네슘 25.3 ㎎Magnesium carbonate 25.3 mg

제1인산칼륨 15 ㎎Potassium monophosphate 15 mg

제2인산칼슘 55 ㎎Dibasic calcium phosphate 55 mg

구연산칼륨 90 ㎎Potassium Citrate 90 mg

탄산칼슘 100 ㎎Calcium Carbonate 100 mg

염화마그네슘 24.8 ㎎
Magnesium chloride 24.8 mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
The composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is mixed with a composition suitable for a health food in a preferred embodiment, but the compounding ratio may be arbitrarily modified. The granules may be prepared and used for preparing a health food composition according to a conventional method.

제조예Manufacturing example 3: 건강 음료의 제조 3: manufacture of health drinks

작약 종자 추출물 1000 ㎎Peony Seed Extract 1000mg

구연산 1000 ㎎Citric acid 1000 mg

올리고당 100 g100 g oligosaccharides

매실농축액 2 gPlum concentrate 2 g

타우린 1 g1 g of taurine

정제수를 가하여 전체 900 ㎖
Add 900 ml of purified water

통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.The above components were mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and the mixture was stirred and heated at 85 for about 1 hour. The resulting solution was filtered and sterilized in a sterilized 2 liter container, And used for manufacturing.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Although the composition ratio is a composition that is relatively suitable for a preferred beverage in a preferred embodiment, the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage.

제조예Manufacturing example 4: 기타 건강식품의 제조 4: Manufacture of Other Health Foods

4-1. 음료의 제조4-1. Manufacturing of beverages

꿀 522 ㎎522 mg of honey

치옥토산아미드 5 ㎎Chioctosanamide 5 mg

니코틴산아미드 10 ㎎Nicotinamide 10 mg

염산리보플라빈나트륨 3 ㎎Riboflavin Sodium Hydrochloride 3 mg

염산피리독신 2 ㎎Pyridoxine hydrochloride 2 mg

이노시톨 30 ㎎Inositol 30 mg

오르트산 50 ㎎Orthoic acid 50 mg

작약 종자 추출물 0.48~1.28 ㎎Peony Seed Extract 0.48 ~ 1.28 mg

물 200 ㎖
200 ml of water

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
A beverage was prepared using the above-mentioned composition and content by a conventional method.

4-2. 4-2. 츄잉껌의Of chewing gum 제조 Produce

껌베이스 20 %Gum base 20%

설탕 76.36~76.76 %Sugar 76.36-76.76%

작약 종자 추출물 0.24~0.64 %Peony Seed Extract 0.24 ~ 0.64%

후르츠향 1 %1% fruit flavor

물 2 %
Water 2%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.Chewing gum was prepared using conventional methods using the above composition and content.

4-3. 캔디의 제조4-3. Manufacture of candy

설탕 50~60 %50-60% sugar

물엿 39.26~49.66 %Starch syrup 39.26 ~ 49.66%

작약 종자 추출물 0.24~0.64 %Peony Seed Extract 0.24 ~ 0.64%

오렌지향 0.1 %
Orange flavor 0.1%

상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.
The composition and the content of the candy were prepared using a conventional method.

4-4. 밀가루 식품의 제조4-4. Manufacture of flour food products

작약 종자 추출물 0.5 내지 5 중량부를 밀가루 100 중량부에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
0.5 to 5 parts by weight of Peony seed extract was added to 100 parts by weight of wheat flour, and the mixture was used to prepare bread, cake, cookies, crackers, and noodles to prepare health promoting food.

4-5. 유제품(4-5. dairy product( dairydairy productsproducts )의 제조Manufacturing

작약 종자 추출물 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
5 to 10 parts by weight of peony seed extract was added to 100 parts by weight of milk, and the milk was used to prepare various dairy products such as butter and ice cream.

4-6. 4-6. 선식의Solar 제조 Produce

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화 시켜서 건조한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다. 검은콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다. 상기에서 제조한 곡물류 및 종실류와 본 발명의 작약 종자 추출물을 다음과 같은 비율로 배합하여 제조하였다.
Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were alphanated by a known method to distribute the dried ones, and then prepared into a powder having a particle size of 60 mesh. Black soybeans, black sesame seeds, and perilla were also steamed and dried in a known manner to prepare a powder having a particle size of 60 mesh using a grinder. The grains and seeds prepared above and the peony seed extract of the present invention were prepared by combining the following ratios.

현미 30 % Brown Rice 30%

율무 15 %15% rate

보리 20 %Barley 20%

들깨 7 % Perilla 7%

검정콩 7 % Black Bean 7%

검은깨 7 %Black sesame 7%

작약 종자 추출물 3 %Peony Seed Extract 3%

영지 0.5 %Ganoderma 0.5%

지황 0.5 %
Foxglove 0.5%

Claims (24)

작약(Paeonia lactiflora) 종자의 추출물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
Peeonia lactiflora ) A pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease, containing the extract of the seed as an active ingredient.
제 1항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머형 치매(AD), 파킨슨 병, 진행성 핵상마비인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease according to claim 1, wherein the degenerative brain disease is Alzheimer's dementia (AD), Parkinson's disease, or advanced nuclear palsy.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 작약 종자를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
[Claim 2] The pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease according to claim 1, wherein the extract is extracted from peony seeds with water, C 1 -C 4 alcohol or a mixed solvent thereof.
제 3항에 있어서, 상기 C1~C4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease according to claim 3, wherein the C 1 to C 4 alcohol is methanol or ethanol.
작약 종자의 분획물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease, which contains a fraction of peony seed as an active ingredient.
제 5항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머형 치매(AD), 파킨슨 병, 진행성 핵상마비인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
6. The pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease according to claim 5, wherein the degenerative brain disease is Alzheimer's dementia (AD), Parkinson's disease, or advanced nuclear palsy.
제 6항에 있어서, 상기 분획물은 제 1항의 작약 종자의 추출물을 다이클로로메탄, 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻는 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
7. The pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease according to claim 6, wherein the fraction is obtained by sequentially dividing the extract of the peony seed of claim 1 with dichloromethane and ethyl acetate.
제 1항의 작약 종자 추출물로부터 분리된 하기 화학식 1 내지 화학식 8의 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
[화학식 1]
Figure pat00021


[화학식 2]
Figure pat00022


[화학식 3]
Figure pat00023


[화학식 4]
Figure pat00024


[화학식 5]
Figure pat00025


[화학식 6]
Figure pat00026


[화학식 7]
Figure pat00027


[화학식 8]
Figure pat00028

A pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease, comprising as an active ingredient at least one compound selected from the group consisting of compounds of the following Chemical Formulas 1 to 8 isolated from the peony seed extract of claim 1.
[Formula 1]
Figure pat00021


(2)
Figure pat00022


(3)
Figure pat00023


[Chemical Formula 4]
Figure pat00024


[Chemical Formula 5]
Figure pat00025


[Formula 6]
Figure pat00026


[Formula 7]
Figure pat00027


[Chemical Formula 8]
Figure pat00028

작약 종자를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합물을 가하여 작약 종자 추출물을 수득하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 수득한 추출물을 물, 다이클로로메탄 및 에틸아세테이트로 분획하여 분획물을 얻는 단계(단계 2) 및;
상기 단계 2에서 수득한 분획물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계(단계 3)를 포함하는 제 8항의 화학식 1 냐지 화학식 8 화합물의 제조방법.
Adding peony seed to water, C 1 to C 4 alcohol or a mixture thereof to obtain a peony seed extract (step 1);
Fractionating the extract obtained in step 1 with water, dichloromethane and ethyl acetate to obtain a fraction (step 2);
A method for preparing the compound of Formula 1 or Formula 8 according to claim 8, comprising performing the silica gel column chromatography on the fraction obtained in step 2 to separate and purify the compound (step 3).
제 9항에 있어서, 상기 단계 1의 C1~C4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease according to claim 9, wherein the C 1 to C 4 alcohol of step 1 is methanol or ethanol.
작약 종자의 추출물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
Health food for the prevention or improvement of degenerative brain disease, containing the extract of peony seed as an active ingredient.
제 11항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머형 치매(AD), 파킨슨 병, 진행성 핵상마비인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
12. The healthy food for preventing or improving degenerative brain disease according to claim 11, wherein the degenerative brain disease is Alzheimer's dementia (AD), Parkinson's disease, or advanced nuclear palsy.
제 11항에 있어서, 상기 추출물은 작약 종자를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
The method for preventing or improving degenerative brain disease according to claim 11, wherein the extract is extracted from peony seeds with water, C 1 to C 4 alcohols, or a mixed solvent thereof.
제 13항에 있어서, 상기 C1~C4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
According to claim 13, wherein the C 1 ~ C 4 alcohol is methanol or ethanol, characterized in that degenerative brain disease prevention or improvement health foods.
작약 종자의 분획물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
Health food for preventing or improving degenerative brain disease, containing fractions of peony seeds as active ingredients.
제 15항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머형 치매(AD), 파킨슨 병, 진행성 핵상마비인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
16. The healthy food for preventing or improving degenerative brain disease according to claim 15, wherein the degenerative brain disease is Alzheimer's dementia (AD), Parkinson's disease, or advanced nuclear palsy.
제 15항에 있어서, 상기 분획물은 제 11항의 작약 종자의 추출물을 다이클로로메탄, 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻는 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
The health food for preventing or improving degenerative brain disease according to claim 15, wherein the fraction is obtained by sequentially dividing the extract of the peony seed of claim 11 with dichloromethane and ethyl acetate.
하기 화학식 1 내지 화학식 8의 화합물 중에서 선택되는 1 이상의 작약 종자 추출물로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
[화학식 1]
Figure pat00029


[화학식 2]
Figure pat00030


[화학식 3]
Figure pat00031


[화학식 4]
Figure pat00032


[화학식 5]
Figure pat00033


[화학식 6]
Figure pat00034


[화학식 7]
Figure pat00035


[화학식 8]
Figure pat00036

A health food for preventing or improving degenerative brain disease, which contains a compound isolated from at least one peony seed extract selected from the compounds of Formulas 1 to 8 as an active ingredient.
[Formula 1]
Figure pat00029


(2)
Figure pat00030


(3)
Figure pat00031


[Chemical Formula 4]
Figure pat00032


[Chemical Formula 5]
Figure pat00033


[Formula 6]
Figure pat00034


[Formula 7]
Figure pat00035


[Chemical Formula 8]
Figure pat00036

작약 종자를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합물을 가하여 작약 종자 추출물을 수득하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 수득한 추출물을 물, 다이클로로메탄 및 에틸아세테이트로 분획하여 분획물을 얻는 단계(단계 2) 및;
상기 단계 2에서 수득한 분획물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계(단계 3)를 포함하는 방법으로 제조되는 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
Adding peony seed to water, C 1 to C 4 alcohol or a mixture thereof to obtain a peony seed extract (step 1);
Fractionating the extract obtained in step 1 with water, dichloromethane and ethyl acetate to obtain a fraction (step 2);
The fraction obtained in step 2 is subjected to silica gel column chromatography to separate and purify the compound (step 3) characterized in that it is prepared by a method comprising a step for preventing or improving degenerative brain disease.
제 19항에 있어서, 상기 단계 1의 C1~C4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
20. The method of claim 19, wherein the C 1 ~ C 4 alcohol of step 1 is methanol or ethanol, characterized in that degenerative brain disease prevention or improvement health foods.
제 19항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머형 치매(AD), 파킨슨 병, 진행성 핵상마비인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 개선용 건강식품.
20. The method for preventing or improving degenerative brain disease according to claim 19, wherein the degenerative brain disease is Alzheimer's dementia (AD), Parkinson's disease, or advanced nuclear palsy.
하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 신규 화합물:
[화학식 1]
Figure pat00037


[화학식 2]
Figure pat00038
.
New compounds represented by the following general formula (1) or (2):
[Formula 1]
Figure pat00037


(2)
Figure pat00038
.
작약 종자를 물, C1~C4의 알코올 또는 이들의 혼합물을 가하여 작약 종자 추출물을 수득하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 수득한 추출물을 물, 다이클로로메탄 및 에틸아세테이트로 분획하여 분획물을 얻는 단계(단계 2) 및;
상기 단계 2에서 수득한 분획물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계(단계 3)를 포함하는 제 23항의 화학식 1 또는 화학식 2 화합물의 제조방법.
Adding peony seed to water, C 1 to C 4 alcohol or a mixture thereof to obtain a peony seed extract (step 1);
Fractionating the extract obtained in step 1 with water, dichloromethane and ethyl acetate to obtain a fraction (step 2);
A method for preparing the compound of Formula 1 or Formula 2 according to claim 23 comprising performing the silica gel column chromatography on the fraction obtained in step 2 to separate and purify the compound (step 3).
제 23항에 있어서, 상기 단계 1의 C1~C4의 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition for preventing or treating degenerative brain disease according to claim 23, wherein the alcohol of C 1 to C 4 of step 1 is methanol or ethanol.
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