KR20110117944A - 아스피린 과민성 천식 진단용 ｆｐｒ２ 유전자 다형성 마커 - Google Patents

Abstract

본 발명은 FPR2 유전자 다형성을 이용하는 아스피린 과민성 천식 진단용 마커, 아스피린 과민성 천식 진단용 일배체형 마커, 진단 키트 및 이를 이용한 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따라 아스피린 과민성 천식의 발생 위험을 예측할 수 있으며, 천식의 치료 분야에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

아스피린 과민성 천식 진단용 ＦＰＲ２ 유전자 다형성 마커{FPR2 GENE POLYMORPHISMS MARKER FOR DIAGNOSING ASPIRIN INTOLERANT ASTHMA}

본 발명은 아스피린 과민성 천식 진단용 마커, 아스피린 과민성 천식 진단용 일배체형 마커, 진단 키트 및 이를 이용한 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.

아스피린-과민성 천식(Aspirin-intolerant asthma :AIA)이란 아스피린 또는 다른 비-스테로이드성 항-염증 약물(NSAIDs)의 섭취 후에 천식환자들에게서 기관지수축이 발생하는 것이다. 비록 AIA의 병인이 완전히 규명되지는 않았지만, 호흡기 내부의 염증 세포상에서 시스테이닐 류코트리엔(CysLT) 생성 증가 및 CycLT 수용체의 과발현이 일어나는 것과 같은 2-구획 모델이 제안되었다. CysLTs는 이들이 점액 분비, 혈관 투과성, 및 세포 침윤을 증가시키는 한편 기관지수축을 매개하기 때문에 천식의 발생에서 중요한 염증성 매개체이다.

아스피린으로 자극된 15-에피머 내인성 이소폼과 리폭신(LX)은 아라키돈산 대사로부터 나온 내인성 항-염증제와 전해결(pro-resolution) 아이코사노이드이다. LXA4는 두 종류의 수용체에 바인딩되는데, 하나는 포르밀 펩티드 수용체(FPR)와 같은 7-막관통 G-단백질 커플링 수용체이고, 또 하나는 아릴 하이드로카본 수용체(AhR)와 같은 핵 리간드-활성 전사 인자이다.

포르밀 펩티드 수용체 2 cDNA는 초기에 오르판 수용체로 클로닝되었는데, 그 cDNA가 FPR와 70% 이상의 높은 DNA 상동성을 보이는 것으로 밝혀졌다. 그래서 DNA 서열의 상동성에 근거하여, 이 수용체를 FPRL1, FPRH1, FPR2 또는 RFP로 부르게 되었다. FPR과 FPRL1(FPR2)는 모두 식세포성 백혈구로 발현되고 비조혈 기원의 세포에서 탐지되었다. 그러나, FPR에 비하여 FPR2는 상피 세포, 휴지 T 림프구, 성상세포종 세포, 신경모세포종 세포, 및 미세혈관 내피 세포를 포함한 다양한 세포에서 발현된다. 인간 FPR과 마우스 상동성을 가진 FPR1의 식중독 세균(Listeria monocytogene)에 대한 감수성이 증가되는 것을 보면 FPR은 세균 감염에 대항한 호스트 방어에서 중요하다. 그러나 FPR2은 아직 생물학적인 역할이 명확하게 밝혀지지 않았다.

그래서, 본 발명자들은 FPR2의 유전적 다형성을 조사하고, FPR2의 서열 변이가 아스피린 과민성 천식에 미치는 영향을 조사하였다.

본 발명은 아스피린 과민성 천식 진단용 FPR2 유전자 다형성 마커, 일배체형 마커 및 진단 키트 및 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 34를 갖는 포르밀 펩티드 수용체 2(Formyl peptide receptor 2: 이하 FPR2) 게놈 유전자 내에서 선택되며, 상기 서열에서 3251번째 염기가 G 또는 T이고, 상기 3251번째 염기를 포함하는 20-100개의 연속적인 핵산분자로 구성된 폴리뉴클레오티드 중에서 선택된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드인 아스피린 과민성 천식(Aspirin Intolerant Asthma : AIA) 진단용 FPR2 유전자 다형성 마커 및 상기 다형성 마커를 검출할 수 있는 프로브나 이를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 34를 갖는 FPR2 게놈 유전자 내에서 선택되며, 상기 서열에서 4520번째 염기가 C 또는 T이고, 상기 4520번째 염기를 포함하는 20-100개의 연속적인 핵산분자로 구성된 폴리뉴클레오티드 중에서 선택된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드인 아스피린 과민성 천식 진단용 FPR2 유전자 다형성 마커 및 상기 다형성 마커를 검출할 수 있는 프로브나 이를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 34를 갖는 FPR2 게놈 유전자 내에서 선택되며, 상기 서열에서 1620번째 염기가 T, 3109번째 염기가 A, 3251번째 염기가 G, 4520번째 염기가 T, 5635번째 염기가 C, 5710번째 염기가 T, 6095번째 염기가 G, 6490번째 염기가 T, 6566번째 염기가 C, 7039번째 염기가 A 및 8774번째 염기가 A인 아스피린 과민성 천식 진단용 일배체형(haplotype) 마커 및 상기 일배체형 마커를 검출할 수 있는 프로브나 이를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 1) 피검체로부터 분리된 혈액 시료로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계; 2) 단계 1)의 게놈 DNA 상에 존재하는 제1항 또는 제2항의 폴리뉴클레오티드를 검출하는 단계; 및 3) 단계 2)의 검출 결과와 정상인의 다형성 부위 검출결과를 비교하는 단계;를 포함하는 아스피린 과민성 천식을 진단하기 위해 정보를 제공하는 방법을 제공한다.

상기와 같이 FPR2 유전자의 -4209 T>G, -2940 C>T 다형성 마커 및 일배체형 마커는 천식환자들에게 있어서 아스피린 과민성과 밀접한 관련이 있으므로, 이를 측정함으로써 아스피린 과민성 천식의 발생 위험을 예측할 수 있으며, 아스피린 과민성 천식의 예방 및 치료 분야에 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 염색체 19q13.3-q13.4에 위치한 FPR2 유전자의 다형성 부위를 나타낸 염색체 지도이다.
도 2는 FPR2의 일배체형을 나타낸 것이다.
도 3은 FPR2 다형성 사이의 연관 불평형 계수(LDs 및 r²)를 나타낸 것이다.
도 4는 천식환자에서 FPR2의 -4209T>G 다형성과 아스피린 시험 투여에 의해 유도된 FEV2(%) 감소와의 연관성을 나타낸 것이다. P값은 공변수로서 연령(연속 값), 성별(남성=0, 여성=1), 흡연 상태(비흡연자=0, 과거 흡연자=1, 흡연자=2), 아토피 상태(비아토비=0, 아토피=1) 및 BMI를 제어하는 선형 회귀 분석을 사용하여 얻었다.
도 5 내지 도 8은 천식환자의 혈액(peripheral blood) 세포에서의 FPR2 발현을 플로우 사이토메트릭 분석한 것이다. 도 5는 FSC와 SC를 사용하여 혈액 세포 중에 단핵구에 대한 관문(gating)을 나타낸 것이다. 도 6과 도 8은 TT, TG 및 GG 유전자형을 가지는 천식 환자들의 단핵구에서 FPR2의 발현 수준을 비교한 것이다. 플롯 1은 아이소타입 대조군이고, 플롯 2는 TT, 플롯 3은 GG, 플롯 4는 TG 유전자형이다. 도 7은 FPR2 발현 수준이 단핵구 게이트(gate)% 이었던 것을 나타낸 것이다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 아스피린 과민성 천식 진단용 FPR2 다형성 마커를 제공한다. FPR2 유전자의 다형성 마커가 될 수 있는 SNPs는 -5840G>T(서열번호 34의 1620번째 염기가 G 또는 T), -4351C>A(서열번호 34의 3109번째 염기가 C 또는 A), -4209G>T(서열번호 34의 3251번째 염기가 G 또는 T), -2940T>C(서열번호 34의 4520번째 염기가 T 또는 C), -1825C>G(서열번호 34의 5635번째 염기가 C 또는 G), -1750T>C(서열번호 34의 5710번째 염기가 T 또는 C), -1365G>A(서열번호 34의 6095번째 염기가 G 또는 A), -970T>C(서열번호 34의 6490번째 염기가 T 또는 C), -894C>A(서열번호 34의6566번째 염기가 C 또는 A), -421A>G(서열번호 34의 7039번째 염기가 A 또는 G), +1315A>G(서열번호 34의 8774번째 염기가 A 또는 G)다.

상기와 같이 동정된 FPR2 11개의 SNP[-5840G>T, -4351C>A, -4209G>T, -2940T>C, -1825C>G, -1750T>C, -1365G>A, -970T>C, -894C>A, -421A>G, +1315A>G]와 천식환자들 중에 아스피린 과민성과의 연관성을 비교 분석한 결과 -4209 T>G, -2940 C>T 가 밀접한 연관성을 보였다.

또한, 본 발명은 상기 다형성 마커 중 어느 하나 이상을 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 아스피린 과민성 천식 진단용 FPR2 일배체형 마커를 제공한다. 상기 FPR2 일배체형 마커는 서열번호 34를 갖는 FPR2 게놈 유전자 내에서 선택되며, 상기 서열에서 1620번째(번역개시점으로부터 -5840번째) 염기가 T, 3109번째(번역개시점으로부터 -4351번째) 염기가 A, 3251번째(번역개시점으로부터 -4209번째) 염기가 G, 4520번째(번역개시점으로부터 -2940번째) 염기가 T, 5635번째(번역개시점으로부터 -1825번째) 염기가 C, 5710번째(번역개시점으로부터 -1750번째) 염기가 T, 6095번째(번역개시점으로부터 -1365번째) 염기가 G, 6490번째(번역개시점으로부터 -970번째) 염기가 T, 6566번째(번역개시점으로부터 -894번째) 염기가 C, 7039번째(번역개시점으로부터 -421번째) 염기가 A 및 8774번째(번역개시점으로부터 +1315번째) 염기가 A인 것이다.

상기 번역개시점은 서열번호 34의 유전자 서열에서 7460번째 염기이다.

본 발명에서는 FPR2 다형성들의 유전자형 분석 및 일배체형 재구성을 통하여 일배체형을 분류한 후 이에 대한 분석을 수행하였고, 그 결과 ht3 만이 천식환자들 중에 아스피린 과민성과 유의적으로 연관되어 있음을 관찰하였다(표 3참조).

또한, 본 발명은 상기 일배체형 마커를 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 FPR2 유전자의 -4209 T>G 또는 -2940 C>T 다형성 부위를 검출할 수 있는 프로브 또는 상기 다형성 부위를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단 키트를 제공한다.

이 때 FPR2 -4209 T>G 를 증폭할 수 있는 프라이머 쌍은 서열번호 7과 8로 기재되는 염기서열일 수 있고, FPR2 -2940 C>T 를 증폭할 수 있는 프라이머 쌍은 서열번호 10과 11로 기재되는 염기서열일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 키트 내의 프로브도 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 아스피린 과민성 천식 진단용 FPR2 일배체형 마커를 검출할 수 있는 프로브 또는 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단 키트를 제공한다.

이 때 사용되는 키트 내의 프라이머쌍은 서열번호 1과 2; 서열번호 4와 5; 서열번호 7과 8; 서열번호 10과 11; 서열번호 13과 14; 서열번호 16과 17; 서열번호 19와 20; 서열번호 22와 23; 서열번호 25와 26; 서열번호 28과 29; 서열번호 31과 32로 기재되는 서열일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 키트 내의 프로브도 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 1) 피검체로부터 분리된 혈액 시료로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계; 2) 단계 1)의 게놈 DNA 상에 존재하는 제1항 또는 제2항의 폴리뉴클레오티드를 검출하는 단계; 및 3) 단계 2)의 검출 결과와 정상인의 다형성 부위 검출결과를 비교하는 단계를 포함하는 아스피린 과민성 천식을 진단하기 위해 정보를 제공하는 방법을 제공한다.

단계 2에 있어서, 다형성 부위를 검출하는 방법은, 시퀀싱 분석, 마이크로어레이(microarray)에 의한 혼성화 분석, 대립 유전자 특이적인 PCR(allele specific PCR) 분석, 다이나믹 대립유전자 혼성화(dynamic allele-specific hybridization, HASH) 분석, PCR 연장 분석 및 TaqMan 프로브 PCR 분석방법 중 어느 하나를 사용하여 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 방법들은 염기서열 결정을 위한 통상적인 방법을 사용할 수 있으며, 자동화된 유전자분석기를 이용하여 수행될 수 있다.

이하 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 피검자 선정

본 발명에서 피검자는 한국에 있는 순천향 대학 병원으로 이루어진 천식 유전체 연구 센터로부터 모집하였고, 439명의 천식환자 중 AIA 환자는 169명, ATA 환자는 270명이었다. AIA는 리신-아세틸 살리실산(L-ASA) 기관지유발시험(bronchoprovocation test)에 대한 양성 반응에 근거하여 진단하였다. 테스트에서 ASA(75-300mg/ml, 알타질(Althargyl), 아르트로메디카(Arthromedica), 스위스)의 복용량을 증가시켰다.

1초간 노력성 호기량(FEV1) 변화가 아스피린을 최종 투여한 후 5시간 동안 지속되었다. PC20 메타콜린을 25 mg/ml 이상 투여하였다. 아토피는 24가지 일반 흡입 알러젠(예를 들면, 먼지, 고양이털, 개털, 바퀴벌레, 풀, 나무, 두드러기 쑥 꽃가루와 같은)(Bencard Co. Ltd., Brentford, UK)에 대해 피부 테스트를 수행하였다. 총 IgE는 UniCAP시스템(Pharmacia Diagnostics, Uppsala, Sweden)에 의해 측정되었다. 아스피린으로 유도된 FEV1 변화는 [투여 전 FEV1]-[투여 후 FEV1]/[투여 전 FEV1]으로 계산하였다.

ATA와 AIA를 가진 피검자들의 임상학적인 차이를 표 1에 나타내었다.

<실시예 2> 사람 염색체 19q13.3~q13.4 내에 존재하는 FPR2 유전자의 유전자형 분석

본 발명자들은 한국인 피검자들 DNA 샘플에서 SNPs(single nucleotide polymorphism)를 발견하기 위해 GenBank 서열(NT_011109.16)에 기초하여 FPR2 유전자를 서열분석하였다.

본 발명자들은 단일 염기 연장에 의해 다형성 지점의 유전자형 분석을 위해 프라이머를 디자인하였다(표 2). 모든 프라이머 연장 반응은 SNaPshot ddNTP 프라이머 익스텐션 키스(applied Biosystem, Foster City, CA, USA)를 사용해서 수행하였고, 연장 프라이머는 연속적인 클린업을 위해 1U SAP(shrimp alkaline phosphateas)를 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 시킨 다음에 효소 불활성화를 위해 72℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 연장 산물이 포함된 DNA 샘플 및 Genescan 120 Liz 사이즈 스탠다드 용액을 제조사의 권고에 따라 Hi-Di 포름아미드(Applied Biosystem)에 첨가하였다. 상기 혼합물을 95℃에서 5분 동안 인큐베이션 시킨 다음 얼음상에서 5분 동안 인큐베이션시켰다. 그런 다음 ABI Prism 3100 Genetic Analyzer 를 사용하여 전기영동을 수행하였다. 이 결과를 ABI Prism GeneSacn 소프트웨어 및 Genotyper 시스템(Applied Biosystems)을 사용하여 분석하였다.

표 2는 단일 염기 연장 분석을 사용하기 위해 디자인한 프라이머를 나타낸 것이다.

<실시예 3> 통계적 분석

본 발명자들은 이대립유전자 좌위, 르원틴 D(Lewontin's D')(|D'|) 및 r²의 모든 쌍 사이에 연관 불평형에 대해 폭넓게 사용된 측정법을 이용하였다. 개체들의 일배체형을 EM 알고리즘(해플로뷰 버젼.2.05)을 사용하여 추론하였다. 유전자형 및 일배체형 분포를 연령(연속값), 성별(남성=0, 여성=1), 아토피 상태(비-아토피=0, 아토피=1), 및 흡연 상태(비흡연자=0, 금연자=1, 흡연자=2) 및 신체 비만지수(BMI)을 공변량으로 하여 로지스틱 회귀 모델을 사용하여 분석하였다. AIA 환자들 내의 표현형 특징의 유의미한 값의 차이는 ANOVA 테스트 및 t-테스트를 사용하여 비교하였다. 이 데이터를 SPSS 버전 11(SPSS Inc., 시카고, 일리노아주(IL), 미국) 소프트웨어 패키지를 사용하여 관리, 분석하였다.

<실시예 4> 유전자 다형성 빈도 분석

본 발명의 피검자들에서 FPR2 11개 SNP와 AIA 연관성 연구를 위해 유전자형을 분석하였다. 한국인 집단에서 11 SNPs의 열성 대립유전자 빈도 (MAFs)가 표 3에 나타나 있다. 전체 피검자 중에 FPR2 유전자 다형성의 빈도를 표 3에 나타내었다. 도 1에서 박스 안의 -4209T>G 가 타겟 SNP를 나타낸다. 모든 좌위의 분포는 하디-바인베르크 평형(P=0.001~0.318)(도 2)에 있었다. SNPs 사이의 연관 불평형 계수(｜D'｜) 및 r²가 모든 피검자에 대하여 계산되었고, SNPs(｜D'｜>0.97)사이에 강한 LDs가 관찰되었다(도 3).

<실시예 5> 아스피린 내성 천식(ATA)과 아스피린 과민성 천식(AIA) 사이의 아스피린의 유도에 대한 FPR2 다형성의 연관성 회귀 분석

단일 SNPs 와 4개의 일배체형의 천식환자에게 다중 로지스틱 회귀 분석 모델을 사용하여 아스피린 과민성의 위험과 연관성을 분석한 결과는 표 3에 있다. 그 결과 두개의 SNP인 -4209T>G와 -2940C>T가 현저하게 연관된 것으로 밝혀졌다(P=0.007 및 0.01). ATA 환자(P=0.03)에 비해 AIA 환자에서 -4209T>G의 GG 동형 접합 그룹의 빈도가 현저하게 더 낮음을 보여주었다. 대조적으로 -4209T>G 의 우성과 공동우성에서는 현저한 차이가 없었다. 아스피린 투여 후의 FEV1 감소 퍼센트가 아스피린 과민성 천식의 진단에 있어 중요한 파라미터가 되기 때문에 다중 선형 회귀 분석을 사용하여 아스피린 유발에 따른 FEV1 감소 퍼센트와 유전자형 또는 일배체형과의 연관성을 연구한 결과를 표 4에 나타내었다. -4209T>G 가 공동 우성과 우성 대립형질을 가진 천식환자가 희귀(rare) 대립형질을 가진 환자(P=0.04)보다 아스피린 유발에 의한 FEV1 감소가 훨씬 큰 것을 보여주었다(표 4). 도 2에도 나타내었다(6.24+/- 1.19% vs. 11.15+/- 1.04, P=0.04)

AIA 환자들은 FPR2 -4209 TT 유전자형의 빈도가 더 높았고, FPR2 -4209 TT 유전자형을 가진 AIA 환자들은 L-ASA 흡입에 더 큰 기관지유발 반응을 보였다.

<실시예 6> 천식환자의 CD14 포지티브 단핵구에서 FPR2 단백질 발현의 측정

플로우 사이토메트리를 위해, 퍼콜 구배(1.115, 1.100, 1.090, 1.070)를 사용하여 천식환자나 다른 폐질환을 가진 피검자의 헤파린 처리한 혈액에서 백혈구를 정제하였다. 래빗 항-인간 FPRL1 Ab(Abcam, Cambridge, MA)를 5×10⁵　PBMC 및 호중구와 함께 배양하고, PBS로 두번 세척한 후, FPR2 염색을 위해 고우트(Goat) 항-래빗 IgG(BD Pharmingen^TM; BD Biosciences, San Diego, CA) 50㎍과 함께 4℃에서 30분간 배양하였다. 그리고, PBMC를 FITC 마우스 항-인간 CD14(BD Biosciences, San Jose, CA) 50㎍과 배양하였다. 아이소타입-매치된(isotype-matched) 대조군으로, PE-결합된 마우스(0.5 mg, R&D Systems) 및 FITC-결합된 래빗 IgG(BD Biosciences, San Jose, CA)를 각 실험된 항체와 동일 농도로 사용하였다. 그리고, 세포들을 다시 세척하고 PBS에 다시 분산시켰다. 염색된 세포는 플로우 사이토미터((FACScan; Becton-Dickinson, Mountain View, CA)와 셀 퀘스트 소프트웨어(Counter Corporation, Miami, FL)를 사용하여 분석하였다.

FPR2 -4209T>G 의 서열 변이가 FPR2 단백질의 발현에 영향을 주는지를 알기 위해 천식환자의 CD12 포지티브 단핵구에서의 FPR2 발현을 측정하였다(도 5~8). FPR2 막단백질 발현의 수준은 -4209TT 대립형질(P=0.006)보다 -4209GG 대립형질을 가진 천식환자의 단핵구에서 더 높은 발현을 보였다.

이는 FPR2 단백질 발현이 대립형질 유전자형에 의존하고, FPR2의 TT 대립형질이 L-ASA 흡입시 기관지 유발 반응을 증대시켜서 AIA에 대한 감수성을 증가시킨다는 것을 보여준 것이다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> Soonchunhyang University Industry Academy Cooperation Foundation <120> FPR2 GENE POLYMORPHISMS MARKER FOR DIAGNOSING ASPIRIN INTOLERANT ASTHMA <130> 10P144IND <160> 34 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 acttcgtcag taacggacgt gcctgacagg accatgt 37 <210> 2 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 gagtcgaggt catatcgtgt gcctgacagg accatgg 37 <210> 3 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 cacaggttgt agagatagag atggcactac tattgggcga gttgaagagt ctgcctatag 60 tgagtc 66 <210> 4 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 acttcgtcag taacggacta gactgagggt caggggagga a 41 <210> 5 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 gagtcgaggt catatcgtta gactgagggt caggggagga c 41 <210> 6 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 ggctgaaaat ttcacatcta gttactaggc ggcatctctg agggagtctg cctatagtga 60 gtc 63 <210> 7 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 7 acttcgtcag taacggacgg ttactctact tctccagcgc acta 44 <210> 8 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 8 gagtcgaggt catatcgtgg ttactctact tctccagcgc actc 44 <210> 9 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 9 ctatcccaca ccttaattat ttcagggtat atgccaaaac ggacttgggt ctgcctatag 60 tgagtc 66 <210> 10 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 10 acttcgtcag taacggacgt gagggccaag agttcccat 39 <210> 11 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 11 gagtcgaggt catatcgtgt gagggccaag agttcccac 39 <210> 12 <211> 65 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 12 tgtcatagat atactcagtc tagccgttgc ctcaaagcta gggatcggtc tgcctatagt 60 gagtc 65 <210> 13 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 13 acttcgtcag taacggacgg agaatttgag aatcatctca gactggg 47 <210> 14 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 14 gagtcgaggt catatcgtgg agaatttgag aatcatctca gactggc 47 <210> 15 <211> 65 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 15 tattcagcat ctttaagaga aatagtctga acgcagtggg atagagcgtc tgcctatagt 60 gagtc 65 <210> 16 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 16 acttcgtcag taacggacgc ctggctttta cacatacaga ttctagaat 49 <210> 17 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 17 gagtcgaggt catatcgtgc ctggctttta cacatacaga ttctagaac 49 <210> 18 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 18 agatttatgg atataattgt ttttcacgac gacaatgttt ggtccgaggt ctgcctatag 60 tgagtc 66 <210> 19 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 19 acttcgtcag taacggactc cagttcaaca caaagtccca t 41 <210> 20 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 20 gagtcgaggt catatcgttc cagttcaaca caaagtccca c 41 <210> 21 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 21 tcacctgagc acattttctt atgaagccgt tgatccacag cttgctctgc ctatagtgag 60 tc 62 <210> 22 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 22 acttcgtcag taacggacgc gtaagggttt agaagtcaga ccat 44 <210> 23 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 23 gagtcgaggt catatcgtgc gtaagggttt agaagtcaga ccac 44 <210> 24 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 24 ccaaactgaa gtcctgaatc tatacaggct gggactgacg ctttagtctg cctatagtga 60 gtc 63 <210> 25 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 25 acttcgtcag taacggacca tttcacaatt gccctgagct tta 43 <210> 26 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 26 gagtcgaggt catatcgtca tttcacaatt gccctgagct ttc 43 <210> 27 <211> 67 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 27 tttattctaa tgaaaactag aagtaacaac agaccattac ttgcgggtcg tctgcctata 60 gtgagtc 67 <210> 28 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 28 acttcgtcag taacggacac atgctggcaa gctctgcaat 40 <210> 29 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 29 gagtcgaggt catatcgtac atgctggcaa gctctgcaac 40 <210> 30 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 30 tctttcagcc ccaggttctt cgaatagctt ttacggagtt ggcgtctgcc tatagtgagt 60 c 61 <210> 31 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 31 acttcgtcag taacggactt gggaaataca agaagagaaa gacca 45 <210> 32 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 32 gagtcgaggt catatcgttt gggaaataca agaagagaaa gaccg 45 <210> 33 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 33 tggggatttg taagacttag atgcaacttg tcctgtcgtg cctaacgtct gcctatagtg 60 agtc 64 <210> 34 <211> 9327 <212> DNA <213> Homo sapiens FPR2 <400> 34 gaagcacaca ggaaaaggag cttagctgct ggtaagttgg ggactgacaa tttaaaattt 60 atcaatggaa ctcctgctct ctgacaaaca cctcctaaat tctagagcag tgctgtaatg 120 gagcatccac ttgccacagg tggcttttga gtgcctatgt ttctatcttg atctgaaatg 180 tgcttaagtg taaaatatac ttagtgtagt ttaatcatta gtatgatcaa aataatacaa 240 tttatctcgt taataacttt cattttggta acgtgttcca atgatttttt ttatttgcgg 300 ggttaaatga aacatattat tataattaat ttctcccaat gattttactt ttttaacatg 360 gctactagaa agttgtaagt cacgtgtgtg gctggcattt agggcttgca ttaccctgtc 420 tctactaaaa atgcaaacaa caaactagcc aggcgtagtg gtgggagcct gtaatcccag 480 ctactcagga ggctgaggca ggagaatcgc ttgaacctag gaggccgagg ttgcagtgag 540 ccgatatcgt gccattgcac tccagcctgg gcaagaagag tgaaactcta actcaaagat 600 aaataaacat gtgaaggagc caagtgtgag gagcttaaga ggaagagcat ggtaggcaga 660 aggaacagag aaggcagaag ccccgagatg acaatgagct gcatgttcaa ggaatcagag 720 cccgttatgg gtggagccca gtgtgtccca cgagagtgca gagatgaggt ctgaggaatg 780 cacagggcag gtccaggggt acttgaggga acttaagata aggataagtt agaagtttgg 840 aagccattag aaggtgttga aaatagcatc accattttat tggacctttt tttttttttt 900 ttttgagaca gaatcttgct ctgtcgccca ggctgaagtg cagtggcgca gtctcggctc 960 actgcaaact ctgcctctca gggtcaagcg attctcctgc ctcagcctcc caagtagctg 1020 ggattacagg cacccgccat cacgcccagc taatttttgt gtttttttag tagagacggg 1080 gtttcatcat gttgggcagg ttggtcttga actcctgacc tcaggtgatc cacccacctc 1140 agcctcccaa agtgctggga ttacaggcat gagccactcc cggcccttat tggacttttt 1200 tttttttttt gagacagagt tttgctcttg ttgcccaggc tggagtgcaa tggcacgatc 1260 tcagctcact gcaacctccg cctccctggt tcaagcgatt ctcctgcgtc agcctcccga 1320 gcatctggaa ttacaggcac gtgccaccac gcccagctaa ttttgtattt ttagtagaga 1380 tggggtttct tcatgttggc caggttggtc tcgaactcct gacctctggt gacccacctg 1440 cctcggcctc ccaaagtgct gggattacag gtgtgagcca ctgcacctgg cccttattga 1500 actttttaaa agctcatttg gtttccttct ggagattgga ttgtagggca ggggaaagta 1560 ggaccaggaa caacctattt gcaaagttgg cgcaaacatt cctgcctgac aggaccatgg 1620 acacaggttg tagagataga gatggctctg gctgtgcatt cagcagattc tgtagataga 1680 attaatagga cttggatggg attgtggtga gagaaagtga aatgaaagat aagttctagt 1740 ttggaagttt taacaactga atgtttaaac tcaaatagac acaaaatatt ggaagagtgg 1800 caggtttggg aggatgagac aatcaactgt ttggttgagc cacgttaggt ttgaaatgtc 1860 tacgggactc ccgtggggag aggttatatc agactggagc accagagaga ggccaaggct 1920 gatagtttag atgaaaagag agcatgatat tttaagccct gagactggat aatatcacct 1980 atagaaagac tatatagaga taagagaggt ggggaacaag taaaagctgc gggacactcc 2040 taaatttaga gtcaaattta gagcagaaaa tactagcaaa ggggactgaa aagcggtggc 2100 caattgagct tcaaatgcaa gtgaaagtgt gttgtgtgta catttatcat ctcatggcac 2160 aggaaaaacg tgatttaagg agaaggaagc gatccaatgg gaagaagaga tccaatggat 2220 cctctatcac gaagatattg agataagaac caatatggat ttgcacccac tgcatttgca 2280 gccttgaggt cataagcatc ctcaggaaaa tgcaccaggt cagtgctaag gactggagtc 2340 aatacagact ggattcagga gaaaaagtga ggcagggaat caaagggagc aaacacagaa 2400 aactccttcc aaaatctggc tgcaaattct tttcatagaa agaattctct caggagaaat 2460 agggttaaca ccagaaagga atatagtcca agatcttttt ggttgttttt tgttttgttt 2520 tttggggtgg tttttatttt gtttttgttt agttttgttg ttgtttgttt gtttgttttt 2580 gagacggagt cactgttgcc caggctggag tgcagtggtg cgatctcagc tcactgcaac 2640 ctccgccttc cggtgttcaa gaggtcttcc tgcctcagct tcccaagtag ctgggattgc 2700 aagcgcgtgc catcacgtcc agctaatttt tgtattttta gtagagatga ggtttcacca 2760 tgttggccag tctggtctca aactcctggc ctcaagtgat ccacttgcct cagcttccct 2820 aaatgttggg attacaggtg tgagccacgg cacctggcca aggatggttt ctttttaaag 2880 ggaggggata tgatttatgt aatgtttatg taatagtgag aatgatctag tagaaataaa 2940 atcttgaggg tttgtttttg gcagaaaatg gaaggacaaa tgcaggggga aagtttgtgg 3000 gaagatgaga gggcatcctg ggccaatgca gggagggaaa ttattggaaa gaacaagaag 3060 tctttattca cagtgacaga ggcaggtaga ctgagggtca ggggaggacc ggctgaaaat 3120 ttcacatcta gttattacca ttttctcatt ataatgtcag tcaagggcat ctgctgagag 3180 tgggaaaaac agagtaaatg aggtactttt tggagaaagc aggactgaaa taattaaggt 3240 gtgggatagc gagtgcgctg gagaagtaga gtaacctaat gaggaactgc tgagttttca 3300 tttgaaatct gtggtcataa attcaattgc aaccctcgat aattgtgaaa gtcacttccg 3360 ctctctgagc cgtactttcc tacctgttac acaaggacag cacttgtccc aaagcaaggg 3420 tattgtaatc agagatgata aaatatatag tgactggcac atattaagga ctcaccaaat 3480 agcagacctc ataatcagta caggtatcat ctgtggttcg cagttctcct ccttacatta 3540 caactagggt ggacccaaaa ctttgcaatt tttgccttgt taatttgtcc tcacctgtca 3600 ttgcacaatc atccttcctt gttgcatcaa catttttttt tttctgagac agagtctcgc 3660 tctttcaccc aggctggagt gctgtggcac gatcttggct cactgcaacc tctgcctccc 3720 agactcaagt gattctcctg cctcagcctc ccaagtaact gggattacag gcacccacca 3780 ccatgcccag ctaatttttg tatttttagt agagacaggg tttcaccatg ttggccaggc 3840 tggtttcaaa ttcctggcct caagtgatcc acctgtcttg gcctcccaaa gtgctaggat 3900 tacaggcgtg agccactgcg cccagcctgt atcaacattt taaaatgaat ttgaaattat 3960 ggatagatca tgtcttctaa gtgtcttgta gaatgtttgg agtgtggata gagaaaatct 4020 gagtctgttg aggaactatg gggtggaaaa gggttaacag cacaattctg ttgtaatcaa 4080 tctggctgag ctccaattct gtctctactc tttctacctg gtaacgttga acaattaacg 4140 cagcccatct aagtcttaac ttcctcatct gtacaatggt tatactaatt atcaggctgc 4200 tgcaaaagta cttgtggttt ttgatattat tttcaatggc aaaaacagcg ttacttttgc 4260 accaacctaa tatcactaag attaatcaat attcactgtg tctcaggagt gctcagtgtt 4320 cacacatatt aacacagccc atccacagat cctgtgagag gcgttgatag ggttaaagga 4380 aaagctcttg gtgtgtgggt aatgttcata agtagaaaca actattgcta tgagcatcgt 4440 tcttgtcctg accttgaact tcataatgga ttgagcccca cgacacagca cacagcctgg 4500 tgagggccaa gagttcccat ttgtcataga tatactcagt ctagcctaaa agatttccac 4560 atctattctc acttaatcct cacctgaaag ttagacttca ccataaaatt gtcctcgttc 4620 tgcagagcag aaaactgagg ctcaaagaga tatcactgac taaaaactca tagtgaggag 4680 acatcacaga tgagattaga agagagatgt agctgacttc agagcccagt atatatatat 4740 attttagaca gagtctcgct ctgtccccca ggctggagtg cagtggcacg gctcactgca 4800 acctccgcct cccgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagta gctgggactg 4860 caagtgcatg ccaccaggcc cggctaattt tttgtatttt cggtagagac ggggcttcac 4920 cgtattgccc agggtggtct ggaactcctg acctcaggca atccaccccc cttggcctcc 4980 caaagtgttg ggattacagg cgtgagccac cgtatctggc tgagcccagt attctttgta 5040 acagtgactc tcaattgggg gtgactttgc ctccgagggg acctttgaca atgtttatgg 5100 aacctgttga ttgtcatttc tggagaagga gttgctactg gtgtctgtgg atagaggcca 5160 ggggggctgc tcaacatcct actgtgtcca gaacagtctg ccacaacgaa gaattaccca 5220 gacccagatg tcaaaggtgc caaggttgag aaaccctgag ctacattaaa taacgtccca 5280 tggaatacct cagtgaaact cactggtaat agcaggaaga aaaggaggaa ataaggaaaa 5340 ggaagaaggc taaaaatcac cagactgagg catagcccta tcctagtaat cttgggggaa 5400 tccctttcaa aggcaggact tccgtatgca aaggcagtgg ctctggagtt gttcatctcg 5460 gtttccgtat cttgctgcct ccactgactg gctgggcatg atgttgaaaa aaactacaga 5520 agtccccggg ccatgaattc ccccagatgt gatggctgtt tcccaatgtt attatgagca 5580 ttagatgtga acaagtgcta tggaattgct atttctctta aagatgctga atagcccagt 5640 ctgagatgat tctcaaattc tcatggccat agcaaatcat cctggctttt acacatacag 5700 attctagaat gagatttatg gatataattg tttttcattt ttattataag ttcaggggta 5760 tatgtgcagg tttgttatac aggtaaactt gtatcctggt gttttcttgt acagattatt 5820 tcatcactga gatattaagc ctaataccca ctacttattt ttcctgatcc tgtccctccc 5880 ctcaccctcc accttccggt aggccccagt gttcccctct ttgtgtccat gtgttctcat 5940 catttacctc ccatttgtaa atgagaacat gtggtatttg gttttctgtt cctgcattag 6000 tttgctaagg ataatgaata caattttaac aggcagcctg gatgtttctg ataaagtcca 6060 cagaccacgg cataagaaaa tgtgctcagg tgacgtggga ctttgtgttg aactggatac 6120 aaatattaca gatgtgatcc ggaccagagg cagggactac atgttttggg tttttgttct 6180 taaaagaaaa aaacaaaaac aaaaaaactt gatctgagaa gctctgaagg gtcatattct 6240 tacaatgtta ttgtccacaa tttagtcacg tgtccactac caaagcaatc ccttgcaaag 6300 taaaagggat tctggttagt gctaattaga ctagtcagga tttactccca acatggagaa 6360 aagacacctt ctctgcaggg tgagtaacta aacacaattg tggtttttca agcagagaag 6420 aatggggaac cgttgctggg tgggcaacca gcaatatctg tcaagcgtaa gggtttagaa 6480 gtcagaccat gccaaactga agtcctgaat ctattatcta ctacctaagt gaccttcaac 6540 acatttcaca attgccctga gctttcattt attctaatga aaactagaag taatgaatat 6600 tacatagcta ttacataggc caaaccggat cccatatgta gtaattaaca caatgcatag 6660 tctctaataa gaacttcaca agtattaata caacttatta ttcttatagt ctttatccca 6720 cagacaccaa agctatacaa atcggcactg attatttgca ttccaaacag agaagagctc 6780 cacatcaagc agggacaggg aaaagcagag ggtagaaagc agagatggaa ctctctttgc 6840 tgacttcctc tagtgcagaa tcctcaggat ataacatact actacatgtt accagtgact 6900 cctcaaaatt ctcttcaaca ataacctcaa gccaaaccct caaactttat cttgagtact 6960 agccaagcaa taggtcaagg gttctcacag tttgagggac aggagttggg agactggaag 7020 aacctggggc tgaaagagat tgcagagctt gccagcatgt ttgcattgaa tggtgggaga 7080 cacagatgtg agccttctga ttctgagtca tgtgccttcc tcacaatgct gaggctgcct 7140 atgctcaatt ttccattgtc catacaacat aagttcagta tgagccttgt aatcctcttg 7200 gtgaagtgat cagcccgata agcgaaatgc atattgataa tgatgggaat atggaggact 7260 atcccttccc aaaggagcat ccaagagaat gccaattcta tagcaccgtt gtcaacaagg 7320 cttggtagat agagtgggtc tcctggtagg agtgggagct ttagtggaag ttgatgtgag 7380 ctataaatac agatgctgta agatggttcc acagctgaga aatggccatt gttggaatgt 7440 ttcaggtgct gctggcaaga tggaaaccaa cttctccact cctctgaatg aatatgaaga 7500 agtgtcctat gagtctgctg gctacactgt tctgcggatc ctcccattgg tggtgcttgg 7560 ggtcaccttt gtcctcgggg tcctgggcaa tgggcttgtg atctgggtgg ctggattccg 7620 gatgacacgc acagtcacca ccatctgtta cctgaacctg gccctggctg acttttcttt 7680 cacggccaca ttaccattcc tcattgtctc catggccatg ggagaaaaat ggccttttgg 7740 ctggttcctg tgtaagttaa ttcacatcgt ggtggacatc aacctctttg gaagtgtctt 7800 cttgattggt ttcattgcac tggaccgctg catttgtgtc ctgcatccag tctgggccca 7860 gaaccaccgc actgtgagtc tggccatgaa ggtgatcgtc ggaccttgga ttcttgctct 7920 agtccttacc ttgccagttt tcctcttttt gactacagta actattccaa atggggacac 7980 atactgtact ttcaactttg catcctgggg tggcacccct gaggagaggc tgaaggtggc 8040 cattaccatg ctgacagcca gagggattat ccggtttgtc attggcttta gcttgccgat 8100 gtccattgtt gccatctgct atgggctcat tgcagccaag atccacaaaa agggcatgat 8160 taaatccagc cgtcccttac gggtcctcac tgctgtggtg gcttctttct tcatctgttg 8220 gtttcccttt caactggttg cccttctggg caccgtctgg ctcaaagaga tgttgttcta 8280 tggcaagtac aaaatcattg acatcctggt taacccaacg agctccctgg ccttcttcaa 8340 cagctgcctc aaccccatgc tttacgtctt tgtgggccaa gacttccgag agagactgat 8400 ccactccctg cccaccagtc tggagagggc cctgtctgag gactcagccc caactaatga 8460 cacggctgcc aattctgctt cacctcctgc agagactgag ttacaggcaa tgtgaggatg 8520 gggtcaggga tattttgagt tctgttcatc ctaccctaat gccagttcca gcttcatcta 8580 cccttgagtc atattgaggc attcaaggat gcacagctca agtatttatt caggaaaaat 8640 gcttttgtgt ccctgatttg gggctaagaa atagacagtc aggctactaa aatattagtg 8700 ttattttttg ttttttgact tctgcctata ccctggggta agtggagttg ggaaatacaa 8760 gaagagaaag accagtgggg atttgtaaga cttagatgag atagcgcata ataaggggaa 8820 gactttaaag tataaagtaa aatgtttgct gtaggttttt tatagctatt aaaaaaaatc 8880 agattatgga agttttcttc tatttttagt ttgctaagag ttttctgttt ctttttctta 8940 catcatgagt ggactttgca ttttatcaaa tgcattttct acatgtatta agatggtcat 9000 attattcttc ttcttttatg taaatcatta taaataatgt tcattaagtt ctgaatgtta 9060 aactactctt gaattcctgg aataaaccac acttagtcct gatgtacttt aaatatttat 9120 atctcacagg agttggttag aatttctgtg tttatgttta tatactgtta tttcactttt 9180 tctactatcc ttgctaagtt ttcatagaaa ataaggaaca aagagaaact tgtaatggtc 9240 tctgaaaagg aattgagaag taattcctct gattctgttt tctggtgtta tatctttatt 9300 aaatattcag aaaaattcac cagtgaa 9327

Claims (6)

1. 서열번호 34를 갖는 포르밀 펩티드 수용체 2(Formyl peptide receptor 2: 이하 FPR2) 게놈 유전자 내에서 선택되며, 상기 서열에서 3251번째 염기가 G 또는 T이고, 상기 3251번째 염기를 포함하는 20-100개의 연속적인 핵산분자로 구성된 폴리뉴클레오티드 중에서 선택된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드인 아스피린 과민성 천식(Aspirin Intolerant Asthma : AIA) 진단용 FPR2 유전자 다형성 마커.
   
2. 서열번호 34를 갖는 FPR2 게놈 유전자 내에서 선택되며, 상기 서열에서 4520번째 염기가 C 또는 T이고, 상기 4520번째 염기를 포함하는 20-100개의 연속적인 핵산분자로 구성된 폴리뉴클레오티드 중에서 선택된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드인 아스피린 과민성 천식 진단용 FPR2 유전자 다형성 마커.
   
3. 서열번호 을 갖는 FPR2 게놈 유전자 내에서 선택되며, 상기 서열에서 1620번째 염기가 T, 3109번째 염기가 A, 3251번째 염기가 G, 4520번째 염기가 T, 5635번째 염기가 C, 5710번째 염기가 T, 6095번째 염기가 G, 6490번째 염기가 T, 6566번째 염기가 C, 7039번째 염기가 A 및 8774번째 염기가 A 및 번째 염기가 A인 아스피린 과민성 천식 진단용 일배체형(haplotype) 마커.
   
4. 제1항 또는 제2항의 다형성 마커를 검출할 수 있는 프로브 또는 상기 다형성 마커를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단 키트.
   
5. 제3항의 일배체형 마커를 검출할 수 있는 프로브 또는 상기 일배체형 마커를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 포함하는 아스피린 과민성 천식 진단 키트.
   
6. 1) 피검체로부터 분리된 혈액 시료로부터 게놈 DNA를 추출하는 단계;
   2) 단계 1)의 게놈 DNA 상에 존재하는 제1항 또는 제2항의 폴리뉴클레오티드를 검출하는 단계; 및
   3) 단계 2)의 검출 결과와 정상인의 다형성 부위 검출결과를 비교하는 단계;를 포함하는 아스피린 과민성 천식을 진단하기 위해 정보를 제공하는 방법.

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