KR20110086580A

KR20110086580A - 골 관련 질환 예방 및 치료를 위한 치환된 벤즈푸로크로멘 및 관련 화합물

Info

Publication number: KR20110086580A
Application number: KR1020117012523A
Authority: KR
Inventors: 아툴 고엘; 아미트 쿠마르; 수미트 차우라시아; 디비야 씽; 아브니쉬 쿠마르 가우탐; 라시미 팬디; 리투 트리베디; 만 모한 씽; 나이브디야 쨔또빠댜이; 라크시미 마닉카바사잠; 기리쉬 쿠마르 자인; 아닐 쿠마르 드위베디
Original assignee: 카운슬 오브 사이언티픽 앤드 인더스트리얼 리서치
Priority date: 2008-11-06
Filing date: 2009-05-14
Publication date: 2011-07-28
Also published as: JP2012507578A; KR101686607B1; JP5719775B2; CN102264716A; US8686028B2; WO2010052734A1; CN102264716B; EP2346844B1; EP2346844A1; US20120003273A1

Abstract

본 발명은 일반식 I 및 상기 일반식 I의 염과 키랄, 아키랄 유도체를 갖는 신규한 치환된 벤즈푸로크로멘 및 관련 화합물에 관한 것으로서; 여기서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 니트릴, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되나, 이에 한정되지 않고; 상기 일반식 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디하이드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위를 통해 연결될 수 있고; 상기 일반식 I에서 X는 선택적으로 케톤기, 선택적으로 메틸렌기, 선택적으로 치환된 메틸렌기, 선택적으로 치환된 알켄으로 이루어진 유닛(unit)으로부터 선택되고; 상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 단일결합이라는 조건 하에서 Y와 Z는 CH, C-OH, C-Me, C-OMe으로 이루어진 유닛으로부터 선택되고; 상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 이중결합이라는 조건 하에서 Y 및 Z는 탄소 원자일 수 있다. 상기 일반식에 의한 화합물은 골 관련 질환의 예방 및 치료에 유용하다.

Description

골 관련 질환 예방 및 치료를 위한 치환된 벤즈푸로크로멘 및 관련 화합물{Substituted Benzfurochromenes and Related Compounds for the Prevention and Treatment of Bone Related Disorders}

본 발명은 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병 또는 증후군과 관련된 다양한 의학적 적응증의 예방 또는 치료, 바람직하게는 인간 및 동물에 발병하는 질병 및 증후군의 예방 또는 치료를 위한 치료제로서 사용되는, 명세서에 첨부된 도면에 도시된 일반식 I의 치환된 벤조크로멘 및 관련 화합물 개발에 관한 것이다.

특히 본 발명은 일반식 I의 화합물에 관한 것이다:

일반식 I

상기 일반식 I에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 니트릴, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되나, 이에 한정되지 않고;

상기 일반식 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디히드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위(moiety)를 통해 연결될 수 있고;

상기 일반식 I에서 X는 선택적으로 케톤기, 선택적으로 메틸렌기, 선택적으로 치환된 메틸렌기, 선택적으로 치환된 알켄으로 이루어진 유닛으로부터 선택되고;

상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 단일결합이라는 조건 하에서 Y와 Z는 CH, C-OH, C-Me, C-OMe으로 이루어진 유닛으로부터 선택되고;

상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 이중결합이라는 조건 하에서 Y 및 Z는 탄소 원자일 수 있고;

특히, 본 발명은 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병이나 증후군과 관련된 다양한 의학적 적응증의 예방 또는 치료, 바람직하게는 인간 및 동물에게 발병되는 질병 및 증후군, 특히: 골다공증, 골 손실, 골 형성; 타입 II/연령 관련/노령 골다공증 진행 중의 골형성, 발달 및 성장 기간 중 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 절골 치료, 손상된 골 대체를 위한 인 비트로(in vitro)/인 비보(in vivo)에서의 새로운 골 형성 촉진; 에스트로겐 관련 질병 또는 증후군, 바람직하게는 포유동물의 에스트로겐 결핍 상태로 야기된 질병 또는 증후군; 심혈관적 효과 특히, 고지혈증, 혈전증, 혈관운동신경 시스템; 뇌경색, 노인성 치매-알츠하이머 타입(senile dementia-Alzheimer type) 및 파킨슨병과 같은 퇴행성신경질환적 효과; 홍조, 비뇨생식기 위축, 우울증, 조증, 정신분열증 및 유사 질환, 요실금, 월경통 완화를 포함하는 폐경 증후군; 자궁출혈증상 완화, 난소 발달 도움, 여드름 및 다모증 치료; 전립선암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암 및 대장암과 같은 암 질환; 인간 및 다른 동물의 생식력 조절 및 통제; 절박 또는 습관성 유산의 예방을 위한 사용; 산후 수유 억제; 비만, 우울증 등과 같은 생리적 질환의 예방 또는 치료에 유용한 선택적으로 치환된 벤조크로멘, 및 관련 화합물, 상기 화합물과 그의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

“낮은 골 질량(mass) 상태”로 정의되어 온, 골다공증은 우리 노령화 사회의 주요 문제들 중 하나이다. 골다공증은 노년층에서 골 취약성(fragility)의 증가 및 결과적인 골절 위험의 증가를 초래하는 골 조직의 마이크로 구조상(micro architectural)의 퇴보를 특징으로 하는 질환이다. 50세 이상 여성의 50%와 50세 이상 남성의 30% 보다 많은 인원이 영향을 받는 것으로 알려져 있다. 여성에게는 폐경기 직후 또는 그 후 가변년수 동안 골 손실의 속도가 가속화된다.

이러한 위험요소와 골절 발생률을 감소시키기 위한 노력이 골 흡수 방지 및/또는 골 형성 강화에 의하여 골격 질량(skeletal mass)을 보존하는 화합물 개발로 이어졌다(Dwivedy I, Ray S, 1995 "Recent developments in the chemotherapy of osteoporosis" Progress in Drug Research 45, 289-338, Editor E Jucker,'Birkhauser Vela; Marshall DH, Horsmann A, Nordin BEC, 1977, "The prevention and management of post-menopausal osteoporosis" Acta Obstet Gynecol Scand (Suppl) 65:49-56; Hutchinson TA, Polansky SM, Feinstein AR, 1979, "Postmenopausal estrogen protect against fractures of hip and distal radius: A care-control study" Lancet 2:705-709. Estrogen replacement therapy also has positive effect on CVS & CNS related disorders (Lobo RA, 1990, "Cardiovascular implication of estrogen replacement therapy" Obstetrics & Gynaecology 75:185-245; Mendelson ME, Karas RH, 1994, "Estrogen and the blood vessel wall" Current opinion in Cardiology 1994:619-626; Stampfer MJ, Colditz GA, 1991, "Estrogen replacement therapy and coronary heart disease: a quantitative assessment of the epidemiological evidence" Preventive Medicine 20:47-63).

임상적으로 사용될 수 있는 칼슘, 비타민 D 및 그의 유사체, 에스트로겐, 칼시토닌, 비스포스포네이트, 랄록시펜(raloxifene) 등과 같은 약리제의 대부분은 골 흡수율을 감소시켜, 골 손실율을 늦추는 것에 의해 작용한다. 이러한 항흡수제의 적시투여는 골 손실을 예방한다. 그러나, 골은 일단 손실되면 그러한 항흡수제의 사용에 의해서도 회복될 수 없다.

전통적인 치료제 중에서, 골 질병을 치료하는 가능성을 가진 천연의 조 약제(crude drug)들이 많이 존재한다. 그러나, 이러한 적응증에 임상적으로 사용되어온, 이프리플라본(ipriflavone), 이소플라보노이드(isoflavonoid)를 제외하고는, 그들의 가능한 개발 및 사용을 평가하는 실험실의 연구가 많이 보고되지는 않았다.

본 특허에 포함된 화합물은 인 비트로(in vitro)에서 진행된 여러 분석에서 골모세포(osteoblast)의 증식 및 분화, 기질 성장과 무기질화(mineralization)를 촉진하고, 인 비보(in vivo)까지 연장된 치료로 이어지는 골 무기질 밀도 및 골의 기계적 강도를 증가시키는 것을 보여주었고, 신속한 절골 치료 및 연령-관련(타입-II) 골다공증 관리에 광범위하게 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 성장 및 발달 기간 중에 투여될 경우 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성을 돕고, 손상된 골 대체를 위한 인 비트로(in vitro)/인 비보(in vivo)에서의 새로운 골 형성 촉진과 폐경기 후의 골다공증을 포함하는 에스트로겐 결핍 상태에 있어서의 흡수 방지를 촉진할 수 있다. 본 발명의 화합물 중 일부는 그의 약물통태학적 성질과 상관관계를 이루면서 실험 동물에 있어서 좋은 생물학적 이용가능성을 보여주고 있다.

현재 골 형성 작용을 보여주는 것으로 보고된 유일한 물질들은 (a) 비경구적으로 투여되며, 더 높은 양에 있어서 골 흡수를 증가시키는 부갑상선 호르몬(parathyroid hormone), (b) 과도하게 섭취할 경우 역시 골다공증을 초래하는 것으로도 알려진 플루오라이드, 그리고 (c)동화작용을 가진 안드로겐이 있다. 이것은 천연 원료로부터 유래된 종류 중 1차적 물질이며, 인간의 사용과 편의를 위해 경구형 제제로 개발될 수 있다.

벤조크로멘은 천연 이소플라보노이드(isoflavonoid) 중 두번째로 큰 그룹을 구성하는데, 이것은 4-와 2'- 위치 사이의 에테르 연결고리에 의하여 이소플라보노이드 골격으로부터 유도된 4환고리계를 포함한다[(a) Dewich, P. M. In Harborne, J. B., Ed.; The Flavanoids: Advances in Research Since 1986; Chapman and Hall: London, 1994; (b) Tanaka, H.; Oh-Uchi, T.; Etoh, H.; Shimizu, H.; Tateishi, Y. Phytochemistry 2002, 60, 789]. 이 화합물은 다양한 생물학적 활성을 갖는데, 이는 강력한 피토알렉신(phytoalexin)(Mansfield, J. W. In Phytoalexins; Bailey, J. A., Mansfield, J. W., Eds.; Glasgow, 1982.), 항독소(antitoxin) 및 항바이러스성(antiviral) (Nakagawa, M.; Nakanishi, K.; Darko, L. L.; Vick, J. A. Tetrahedron Lett. 1982, 23, 3855.), 항진균성(antifungal)((a) Maximo, P.; Lourenc,o, A. Phytochemistry 1998, 48, 359; (b) Perrin, D. R. Tetrahedron Lett. 1964, 1, 29.), 그리고 항박테리아성(antibacterial)(Ingham, J. L. In Progress in the Chemistry of Organic Natural Products; Herz, W., Grisebach, H., Kirby, G. W., Eds.; Springer: New York, 1983; Vol. 43, pp 1-266.) 특성을 포함한다. 본 발명자는 플라보노이드(flavonoid), 테르펜(terpene) 및 관련된 생물학적으로 중요한 산소 헤테로사이클과 같은 천연 물질을 합성하고, 다양한 내부 선별 모형(in-house screening model)에 있어서 그들의 생물학적 특성을 평가하고 있다. 최근 본 발명자는 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병 또는 증후군과 관련된 다양한 의학적 적응증, 바람직하게는 인간 및 동물에게 발병되는 질병 및 증후군, 특히: 골다공증, 골 손실, 골 형성; 타입 II/연령 관련/노령 골다공증 진행 중의 골 형성, 발달 및 성장 기간 중 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 절골 치료, 손상된 골 대체를 위한 인 비트로(in vitro)/인 비보(in vivo)에서의 새로운 골 형성 촉진의 예방 또는 치료를 위한 일련의 벤조크로멘과 관련 화합물을 제조하였다.

새로 합성된 벤조크로멘의 일부, 특히 3-알릴옥시-4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘(S-007-1500)은 반복된 선별(screening)에서 10^-12M 내지 10^-6M의 농도에서 두개관 유도 골모세포(calvarial derived osteoblast)에서의 알칼리성 인산분해효소(alkaline phosphatase, ALP) 활성을 자극하는 것을 보여주었다. 이러한 고무적인 결과를 통해 본 발명자는 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병 또는 증후군과 관련된 다양한 의학적 적응증의 예방 또는 치료, 바람직하게는 인간 및 동물에게 발병되는 질병 및 증후군의 예방 또는 치료를 위한 몇가지 천연물-유사 벤조크로멘 및 그의 관련 화합물을 제조하였다. 합성된 화합물에 대한 상세한 생물학적 연구(인 비트로 및 인 비보)들은 본 명세서의 생물학적 평가 부분에 기재되어 있다.

골다공증은 우리 노령화 사회에 있어서 주요한 문제점 중 하나이다. 골다공증은 노년층, 특히 폐경기 이후의 여성들에게 골절을 초래한다. 전통적인 치료제 중, 골 질병을 치료하는 가능성을 가진 천연의 조 약제(crude drug)들이 많이 존재한다. 지금까지, 골형성(osteogenic)과 항-파골세포형성(anti-osteoclastogenic) 작용을 보여주는 약물은 없었다. 따라서, 이상적인 약리작용을 가지고 새로운 골 형성을 촉진하는 약물에 대한 발견 및 개발이 시급히 필요하다.

발명의 목적

본 발명의 주요한 목적은 골 관련 질환의 예방 및 치료를 위한 치환된 벤조푸로크로멘 및 관련 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 치환된 벤조푸로크로멘 및 관련 화합물의 제조 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 골 형성/강화 작용을 갖는 화합물을 제공하는 것이다.

발명의 요약

따라서, 본 발명은 일반식 I, 일반식 I의 염과 키랄, 아키랄 유도체를 갖는 치환된 신규한 벤조푸로크로멘 및 관련 화합물을 제공한다;

일반식 I

상기 일반식 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디하이드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위(moiety)를 통해 연결될 수 있고;

상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 이중결합이라는 조건 하에서 Y 및 Z는 탄소 원자일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서, 일반식 I을 갖는 특히 바람직한 신규한 화합물은 템플릿 I에 의하여 더욱 상세하게 기술된다;

템플릿 I

상기 템플릿 I에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 니트릴, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되나, 이에 한정되지 않고;

상기 템플릿 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디하이드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5원자고리나 6원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위를 통해 연결될 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에서, 템플릿 I의 일반식을 갖는 신규한 화합물 전구체는 템플릿 II에 의하여 더욱 상세히 기술된다;

템플릿 II

상기 템플릿 II에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 니트릴, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되나, 이에 한정되지 않고;

상기 템플릿 II에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디하이드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위를 통해 연결될 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 대표적인 화합물은 다음을 포함하나, 이들 예에 한정되지 않는다;

i. 3-알릴옥시-4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘

ii. 4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올

iii. 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올

iv. (4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-일옥시)-아세토니트릴

v. 3-이소프로폭시-6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘

vi. 3-(알릴옥시)-6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘

vii. 1-(2-(6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘-3-일옥시)에틸)피페리딘

viii. 3-하이드록시-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘-6-온

ix. 7,8-디하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온

x. 7,8-디하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온

xi. 6-클로로-7-하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온

xii. 6-클로로-7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온

xiii. 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-8-메틸-크로멘-4-온

xiv. 7-하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온

xv. 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온

xvi. 3-(2,4-디메톡시-페닐)-7-하이드록시-크로멘-4-온

xvii. 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-4-메톡시-페닐)-크로멘-4-온

본 발명의 또 다른 실시예에서 상기 화합물은 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병이나 증후군과 관련된 다양한 의학적 적응증의 예방 또는 치료, 바람직하게는 인간 및 동물에게 발병되는 질병 및 증후군, 특히: 골다공증, 골 손실, 골 형성; 타입 II/연령 관련/노령 골다공증 진행 중의 골 형성, 발달 및 성장 기간 중 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 절골 치료, 손상된 골 대체를 위한 인 비트로(in vitro)/인 비보(in vivo)에서의 새로운 골 형성 촉진; 에스트로겐 관련 질병 또는 증후군, 바람직하게는 포유동물의 에스트로겐 결핍 상태로 야기된 질병 또는 증후군; 심혈관적 효과 특히, 고지혈증, 혈전증, 혈관운동신경 시스템; 뇌경색, 노인성 치매-알츠하이머 타입 및 파킨슨병과 같은 퇴행성 신경질환적 효과; 홍조, 비뇨생식기 위축, 우울증, 조증, 정신분열증 및 유사 질환, 요실금, 월경통 완화를 포함하는 폐경 증후군; 자궁출혈증상 완화, 난소 발달 도움, 여드름 및 다모증 치료; 전립선암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암 및 대장암과 같은 암 질환; 인간 및 다른 동물의 생식력 조절 및 통제; 절박 또는 습관성 유산의 예방을 위한 사용; 산후 수유 억제; 비만, 우울증과 같은 생리적 질환의 예방 및 치료에 유용하다. 본 발명의 일 실시예에서 상기 화합물은 18d 골수배양액의 10^-12M 및 10^-10M에서 대조군에 비해 신생 칼슘 침착의 무기질화(mineralization)에 있어서 상당한 증가를 보여주었다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 화합물은 10^-12M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 골모세포의 ALP 활성을 보여주었다.

본 발명의 일 실시예에서 상기 화합물은 서로 다른 농도 즉 10^-12M 내지 10^-10M 범위에서 지방생성을 상당히 억제하였다.

본 설명의 일 실시예에서 상기 화합물은 1.0 내지 10mg/kg 사이의 정량에서 인 비보(in vivo) 골밀도(BMD)를 상당히 증가시킨다.

본 발명의 또 다른 실시예에서 일반식 I 및 상기 일반식 I의 염과 키랄, 아키랄 유도체,

일반식 I

상기 일반식 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디하이드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위를 통해 연결될 수 있고;

여기서 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(S-006-1709)와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 모든 알려진 천연 및 합성 테로카판류 화합물과 신규한 이소플라본 및 관련 화합물은 골다공증, 골 손실, 골 형성; 타입 II/연령 관련/노령 골다공증 진행 중의 골형성, 발달 및 성장 기간 중 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 절골 치료 또는 그 밖의 골 질환 치료에 유용하다.

따라서, 본 발명은 일반식 I, 상기 일반식 I의 염과 유도체를 갖는 제1항의 치환된 벤즈푸로크로멘과 관련 화합물을 제조하는 방법에 관한 것으로서;

(i) 일반식 A를 갖는 화합물을 루이스산, 바람직하게는 보론트리플루오라이드 에테레이트 존재 하에서 일반식 B의 치환된 2'-메톡시페닐아세트산과 25℃ 내지 150℃ 온도에서 1시간 내지 20시간 동안, 명세서에 첨부된 도면에 도시된 대로 반응시키되, 여기서 치환체 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오로라이드, 니트로 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 단계;

(ii) 명세서에 첨부된 도면에 도시된 대로 일반식 C 화합물을 크로마토그래피 기법으로 분리하여 정제하는 단계;

(iii) 산성 배지(medium)에서 일반식 C 화합물을 메탄술포닐 클로라이드와 반응시키고, 25℃ 내지 100℃의 온도에서 1 내지 10시간 동안 가열하는 단계;

(iv) 일반식 D 화합물을 명세서에 첨부된 도면에 도시된 대로 분리하되, 여기서 치환체 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 화학식 D 화합물을 크로마토그래피 기법으로 정제하는 단계;

(v) 일반식 D 화합물을 THF, DMF, 에탄올, 아세토니트릴, 디클로로메탄과 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 프로톤성 또는 비프로톤성 용매에서 보론 트리브로마이드나 알루미늄 트리클로라이드 중 하나와 -40℃ 내지 150℃에서 1 내지 20시간 동안 반응시키되, 여기서 치환체 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 일반식 E를 크로마토그래피 기법으로 분리하여 정제하는 단계;

(vi) 일반식 E 화합물을 DMSO, 에탄올, 메탄올, THF, DMF 등과 같은 프로톤성 또는 비프로톤성 용매에서 리튬 알루미늄 하이드라이드, 소듐 보로하이드라이드와 같은 환원제와 0℃ 내지 150℃에서 1 내지 20시간 동안 명세서에 첨부된 도면에 도시된 대로 반응시키되, 여기서 치환체 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 화학식 F 화합물을 크로마토그래피 기법으로 분리하여 정제하는 단계;

를 포함한다.

본 발명의 일 실시예에서 상기 화합물은 하이드로클로라이드, 포메이트, 아세테이트, 페닐 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 아크릴레이트, 아스코르베이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 브로모벤조에이트, 요오도벤조에이트, 니트로벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 알킬벤조에이트, 알킬옥시벤조에이트, 알콕시카보닐벤조에이트, 나프탈렌-2 벤조에이트, 부티레이트, 페닐부티레이트, 하이드록시부티레이트, 카프레이트, 카프릴레이트, 시나메이트, 만델레이트, 메실레이트, 시트레이트, 타르타레이트, 푸마레이트, 헵타노에이트, 히푸레이트, 락테이트, 말레이트, 말리에이트, 말로네이트, 니코티네이트, 이소니코티네이트, 옥살레이트, 소듐, 포타슘, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 프로피올레이트, 프로피오네이트, 페닐프로피오네이트, 살리실레이트, 세바케이트, 숙시네이트, 수베레이트, 술페이트, 바이술페이트, 피로술페이트, 술파이트, 바이술파이트, 술포네이트, 벤젠 술포네이트, 브로모벤젠 술포네이트, 클로로벤젠 술포네이트, 에탄 술포네이트, 메탄 술포네이트, 나프탈렌 술포네이트, 톨루엔 술포네이트 및 유사 물질을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있다.

본 발명은 골다공증, 골 손실, 골 형성, 절골 치료, 성장 기간 중에 투여될 경우 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 새로운 골 형성 촉진에 의해 발병된 질병 및 증후군의 예방 또는 치료를 위한 일반식 I의 화합물 또는 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(S-006-1709)과 같은 테로카판을 포함하는 약제학적 조성물로서, 약제학적으로 허용가능한 담체나 희석제 또는 부형제와 선택적으로 함께 또는 이를 제외하고 제공된다.

본 발명의 일 실시예에서, 일반식 I 또는 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(S-006-1709)과 같은 테로카판과 약제학적으로 허용가능한 담체나 희석제 또는 부형제의 비율은 바람직하게는 충전 약물 각 mg당 핵심 재료 1-20%와 비이온 계면활성제 10-40% 사이의 범위이고, 표면 개질을 위해 반대 전하를 가진 10-60%의 고분자전해질과 10-30%의 담즙산염으로 캡슐화 된다.

본 발명은 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병이나 증후군과 관련된 다양한 의학적 적응증의 예방 또는 치료, 바람직하게는 인간 및 동물에게 발병되는 질병 및 증후군, 특히: 골다공증, 골 손실, 골 형성; 타입 II/연령 관련/노령 골다공증 진행 중의 골형성, 발달 및 성장 기간 중 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 절골 치료, 손상된 골 대체를 위한 인 비트로(in vitro)/인 비보(in vivo)에서의 새로운 골 형성 촉진; 에스트로겐 관련 질병 또는 증후군, 바람직하게는 포유동물의 에스트로겐 결핍 상태로 야기된 질병 또는 증후군; 심혈관적 효과 특히, 고지혈증, 혈전증, 혈관운동신경 시스템; 뇌경색, 노인성 치매-알츠하이머 타입 및 파킨슨병과 같은 퇴행성 신경질환적 효과; 홍조, 비뇨생식기 위축, 우울증, 조증, 정신분열증 및 유사 질환, 요실금, 월경통 완화를 포함하는 폐경 증후군; 자궁출혈증상 완화, 난소 발달 도움, 여드름 및 다모증 치료; 전립선암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암 및 대장암과 같은 암 질환; 인간 및 다른 동물의 생식력 조절 및 통제; 절박 또는 습관성 유산의 예방을 위한 사용; 산후 수유 억제; 비만, 우울증과 같은 생리적 질환 등의 예방 또는 치료에 유용한 조성물과 일반식의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

주요한 실시예에 따르면, 본 발명은 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병이나 증후군과 관련된 다양한 의학적 적응증의 예방 또는 치료, 바람직하게는 인간 및 동물에게 발병되는 질병 및 증후군의 예방 및 치료에 유용한 벤조푸로크로멘과 관련 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 및 조성물을 제공한다.

중요한 실시예에서, 본 발명은 벤조푸로크로멘과 관련 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 및 조성물 하나만으로, 혼합물 형태로 또는 약리적으로 활성 또는 비활성인 물질 또는 그 두가지 모두와 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와의 배합에 있어서의 치료적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

또 다른 실시예에서, 본 발명은 벤조푸로크로멘 및 관련 화합물, 그의 약제학적으로 허용가능한 염 및 이들 또는 다른 천연 원료로부터 분리하거나 합성한 순수 화합물, 그의 약제학적으로 허용 가능한 염과 조성물을 이용한 의학적 방법과, 포유동물 및 동물에 있어서 에스트로겐 의존 또는 비의존 상태의 증후군, 특히 골다공증, 골 손실, 골 형성과 심혈관적 효과 그리고 에스트로겐 의존 또는 에스트로겐 비의존 암의 예방 또는 치료를 위한 그리고, 인간 및 다른 동물의 생식력 조절 및 통제를 포함하는 내인성(endogenous) 에스트로겐에 대한 비정상적인 생리적 반응과 관련된 질병 상태 또는 질환의 치료를 위한 물질의 사용 방법을 제공한다.

중요한 실시예에서, 본 발명은 실험동물에 대하여 본 발명의 S006-1709 화합물 중 하나의 생물학적 이용가능성을 보여준다.

이하 참조 도면/표에 의하여 본 발명을 보다 명확히 이해할 수 있다:
도 1a는 골모세포 증식에 대한 S006-1709 화합물의 효과를 도시하고 있다.
도 1b는 골모세포 증식에 대한 S006-1710 화합물의 효과를 나타내고 있다.
도 1c는 골모세포 증식에 대한 S006-1711 화합물의 효과를 도시하고 있다.
도 2a는 골모세포 증식에 대한 S006-1713 화합물의 효과를 도시하고 있다.
도 2b는 골모세포 증식에 대한 S006-1714 화합물의 효과를 도시하고 있다.
도 3a는 10^-16M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 연구된 골모세포 ALP 활성에 대한 S006-1709 화합물의 효과를 도시하고 있다.
도 3b는 두개관 및 골수 골모세포 양쪽에서의 골모세포 분화에 대한 S006-1710 화합물의 효과를 도시하고 있다.
도 3c는 두개관 및 골수 유도 골모세포에서의 S006-1711의 ALP 활성을 도시하고 있다.
도 4a는 S006-1713의 ALP 활성을 도시하고 있다.
도 4b는 S006-1714의 ALP 활성을 도시하고 있다.
도 5는 두개관 골모세포의 무기질화(mineralization)에 있어서의 S006-1709 내지 S006-1711의 효과를 도시하고 있다.
도 6은 골수 골모세포의 무기질화에 있어서의 S006-1709 내지 S006-1711의 효과를 도시하고 있다.
도 7은 10^-12M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 연구된 S006-1351, S006-1352, S006-1353, S006-1495, S006-1500에 의한 골모세포 ALP 활성을 도시하고 있다.
도 8a는 실험 8일째 말기에 형성된 지방세포를 묘사하고 있다.
도 8b는 서로 다른 농도에서의 지방생성에 대한 S006-1709, S006-1495 및 S007-1500 화합물의 효과를 나타내고 있다.
표 1은 화합물 S006-1709 화합물의 에스트로겐성 및 비-에스트로겐성 활성을 나타내고 있다.
표 2는 S006-1709의 인 비보(in vivo) 효능을 나타내고 있다.
표 3은 S006-1500의 인 비보(in vivo) 효능을 나타내고 있다.
표 4는 S006-1709의 약물동태학적 파라미터(parameter)의 측정치를 나타내고 있다.

본 발명은 일반식 I 화합물에 대한 것으로;

일반식 I

상기 일반식 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디히드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위(moiety)을 통해 연결될 수 있고;

상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 이중결합이라는 조건 하에서 Y 및 Z는 탄소 원자일 수 있고, 인간 및/또는 동물에게 발병된 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병 또는 증후군과 관련된 다양한 의학적 증후군의 예방 또는 치료를 위한 일반식 I 및 일반식 I의 약제학적으로 허용가능한 염과 화합물과 그 물질의 사용 방법에 관한 것이다.

본 명세서와 첨부된 청구범위에 사용된 “약제학적으로 허용 가능한 염”이라는 용어는 Berge et al. (J. Pharmaceutical Sciences, 66(1), 1-19, 1977)의 논문에 개시된 종류의 염을 의미한다. 적합한 약제학적으로 허용가능한 염은 염산, 브롬화 수소산, 요오드화 수소산, 질산, 황산, 인산, 하이포인산, 및 그의 유사물와 같은 무기산에 의하여 형성된 염을 포함하며, 마찬가지로 지방족 모노(aliphatic mono) 및 디카르복실산, 페닐 치환 알칸산(alkanoic acid), 방향족 산, 지방족 및 방향족 술폰산과 같은 유기산에 의하여 형성된 염을 포함한다. 이러한 약제학적으로 허용가능한 산 첨가 염은 포메이트, 아세테이트, 페닐 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 아크릴레이트, 아스코르베이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 브로모벤조에이트, 요오도벤조에이트, 니트로벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 알킬벤조에이트, 알킬옥시벤조에이트, 알콕시카보닐벤조에이트, 나프탈렌-2 벤조에이트, 부티레이트, 페닐부티레이트, 하이드록시부티레이트, 카프레이트, 카프릴레이트, 시나메이트, 만델레이트, 메실레이트, 시트레이트, 타르타레이트, 푸마레이트, 헵타노에이트, 히푸레이트, 락테이트, 말레이트, 말리에이트, 말로네이트, 니코티네이트, 이소니코티네이트, 옥살레이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 프로피오레이트, 프로피오네이트, 페닐프로피오네이트, 살리실레이트, 세바케이트, 숙시네이트, 수베레이트, 술페이트, 바이술페이트, 피로술페이트, 술파이트, 바이술파이트, 술포네이트, 벤젠 술포네이트, 브로모벤젠 술포네이트, 클로로벤젠 술포네이트, 에탄 술포네이트, 메탄 술포네이트, 나프탈렌 술포네이트, 톨루엔 술포네이트 및 이와 유사한 물질을 포함한다. 가장 바람직한 염은 푸마레이트 또는 아스코르베이트 또는 하이드로클로라이드이다.

본 명세서와 첨부된 청구범위에 사용된 “약제학적으로 허용 가능한 조성물”이라는 용어는 당업계에 알려진 약제학적으로 허용가능한 부형제를 사용하여 당업계에 알려진 과정을 통해 제공될 수 있다.

본 명세서에 언급된 질환 또는 질병 상태를 예방하거나 치료하는 방법은 하나 이상의 본 발명 또는 본 발명의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 등을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 본 발명의 조성물의 치료적 유효량을 그와 같은 치료가 필요한 인간 개인 또는 다른 포유동물 또는 다른 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명의 물질 또는 본 발명의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 본 발명의 조성물의 투여 요법 및 투여 방식은 본 명세서에 기재된 질환 또는 질병 상태의 종류에 따라 다양해질 수 있고, 담당 의료진의 판단에 따라야 할 것이다.

본 발명의 물질 또는 본 발명의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 등을 포함하는 약제학적으로 허용 가능한 본 발명의 조성물은 0.1mg 내지 5000mg, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 1000mg 또는 보다 더 바람직하게는 1mg 내지 500mg의 범위의 투여량으로 매주 또는 2주마다 또는 매일 또는 1일 2회 또는 1일 3회 또는 보다 더 분할된 양으로 효과적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 물질 또는 본 발명의 약제학적으로 허용 가능한 본 발명의 조성물의 치료적 유효량은 젤라틴 캡슐로 에워싸거나 또는 정제 또는 알약으로 압축되거나, 로겐지(logenge) 형태로 만들어지거나, 사이클로덱스트린(cyclodextrin) 유도체와의 복합체를 포함하거나, 주사 제제 형태, 에어로졸(aerosol), 과립, 분말, 또는 경구 액제, 점막 부착 제제, 겔 제제, 구내정(troches), 엘릭시르제(elixirs), 서스펜션(suspensions), 시럽, 웨이퍼(wafer), 리포솜 전달 시스템(liposomal delivery systems), 임플란트, 좌약, 페서리(pessary), 마이크로에멀전(microemulsion), 나노에멀전(nanoemulsion), 극미립자(micro particle), 나노입자(nano particle), 방출 제어 전달 시스템(controlled release delivery system), 경피 투여 전달 시스템(transdermal delivery system), 단일클론항체나 다른 적절한 담체 부위와의 결합체와 같은 표적지향형 전달 시스템(targeted delivery system)의 형태로 만들어 질 수 있다.

이러한 투여는 임의의 적절한 경로로, 예를 들어 경구, 전신적, 국소적 또는 국부 전달, 예를 들어 정맥내, 동맥내, 근육내, 피하, 복강내, 진피내(intra-demal), 구강(buccal), 비강내, 흡입, 질, 직장, 경피 또는 다른 적절한 수단에 의해, 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 등을 포함하는 약제학적으로 허용 가능한 본 발명의 조성물의 통상적인 전달, 제어된 전달 또는 표적지향형 전달을 달성하기 위한 임의의 통상적인 액체 또는 고체 투여 형태로서 투여될 수 있다.

본 발명의 물질 또는 본 발명의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 본 발명의 약제학적으로 허용 가능한 조성물의 바람직한 투여 방식은 경구 투여이다.

경구 조성물은 일반적으로 본 발명의 물질 또는 본 발명의 약제학적으로 허용 가능한 조성물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다.

정제, 알약, 분말, 과립 및 그와 유사한 물질과 같은 경구 조성물은 다음의 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다:

1. 락토오즈, 매니톨, 소르비톨, 미정질(microcrystalline) 셀룰로오스, 수크로오즈, 소듐 시트레이트, 디칼슘 포스페이트, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 희석제;

2. 검 트래거캔스(gun tragacanth), 검 아카시아, 메틸 셀룰로오즈, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 전분 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 결합체(binder);

3. 아가-아가(agar-agar), 칼슘 카보네이트, 소듐 카보네이트, 실리케이트, 알긴산, 옥수수 전분, 감자 타피오카 전분, 프리모겔(primogel) 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 붕해제(disintegrating agent);

4. 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 또는 스테오로트, 탈크, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 윤활제;

5. 이산화규소 콜로이드, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그것의 적절한 배합과 같은 활택제;

6. 수크로오즈, 사카린, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 감미제;

7. 페퍼민트, 메틸 살리실레이트, 오렌지 향미제, 바닐라 향미제, 또는 다른 약제학적으로 허용 가능한 향미제 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 향미제;

8. 세틸 알코올, 글리세릴 모노스테아레이트, 또는 다른 약제학적으로 허용 가능한 향미제 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 습윤제;

9. 카올린, 벤토나이트 점토, 또는 다른 약제학적으로 허용 가능한 향미제 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 흡수제;

10. 왁스, 파라핀, 또는 다른 약제학적으로 허용 가능한 향미제 하나 또는 그의 적당한 배합과 같은 용액 완연제(solution retarding agents).

하기의 예시는 설명을 위해 제공되며, 본 발명의 범위로 해석되어서는 안된다.

벤조푸로크로멘과 관련 화합물의 예시:

예시-1

3- 알릴옥시 -4- 메틸 -6a,11a- 디하이드로 -6H- 벤조[4,5]푸로 [3,2-c] 크로멘 (S-007-1500):

DMF(5ml)과 NaH(8.1mg, 0.34 mmol)에 용해시킨 4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(100mg, 0.34 mmol)을 실온에서 용액에 첨가한 후, 뒤이어 알릴 브로마이드(0.06ml, 0.68mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반한 후 얼음물에 부어 백색 침전물을 얻을 때까지 10% HCl로 중화시켰다. 침전물을 물로 세척한 후 헥산-클로로포름을 용리액(eluent)으로 사용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 3-이소프로폭시-6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘(58mg, 50%)을 얻었다.

백색 고체; mp 100-102 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.13 (s, 3H, CH₃), 3.53-3.73 (m, 2H, H- 6β + H-6a), 4.32 (dd, J= 4.4, 5.9 Hz, 1H, H-6α), 4.56 (d, J= 5.0 Hz, 2H, CH₂), 5.27 (dd, J= 1.4, 10.5 Hz, IH, CH), 5.42 (dd, J= 1.5, 17.3 Hz, 1H, CH), 5.53 (d, J= 6.6 Hz, 1H, H-11a), 5.97-6.11 (m, 1H, CH), 6.62 (d, J= 8.6 Hz, 1H, ArH), 6.84 (d,.J= 8.0 Hz, 1H, ArH), 6.89-6.94 (m, 1H, ArH), 7.13-7.19 (m, 1H, ArH), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H, ArH), 7.33 (d, J= 8.5 Hz, 1H, ArH); ¹³C NMR (75.5 MHz, CDCl₃) δ 7.10, 38.98, 65.26, 67.86, 77.10, 104.59, 108.84, 111.46, 113.47, 115.77, 119.49, 123.45, 126.07, 127.06, 127.84, 132.18, 153.06, 156.32, 158.14; MS (ESI) 295(M⁺+1); HRMS calcd. for C₁₉H₁₈O₃294.1256, found: 294.1241.

예시-2

1-(2-(6a,11a- 디하이드로 -6H- 벤조푸로[3,2-c]크로멘 -3- 일옥 시)에틸)피페리딘(S-008-0399):

DMF(5ml)과 NaH(10mg, 0.42 mmol)에 용해시킨 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(100mg, 0.42 mmol)을 실온에서 용액에 첨가한 후, 뒤이어 1-(2-클로로에틸)피페리딘 하이드로클로라이드(366mg, 0.84 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반한 후 얼음물에 부어 백색 침전물을 얻을 때까지 10% HCl로 중화하였다. 침전물을 물로 세척한 후 헥산-클로로포름을 용리액(eluent)으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 1-(2-(6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘-3-일옥시)에틸)피페리딘 (102mg, 70%)을 얻었다.

백색 고체; mp 202-204 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.44-1.72 (m, 6H, 3CH₂), 1.88-2.20 (m, 4H, 2CH₂), 3.28-3.40 (m, 2H, CH₂), 3.55-3.73 (m, 2H, H-6β + H-6a), 4.29 (dd, J= 3.6, 9.7 Hz, 1H, H-6α), 4.46-4.58 (m, 2H, CH₂), 5.50 (d, J= 6.3 Hz, 1H, H-11a), 6.47 (d, J= 2.4 Hz, 1H, ArH), 6.63 (dd, J= 2.5, 8.5 Hz, 1H, ArH), 6.81-6.95 (m, 2H, ArH), 7.10-7.28 (m, 2H, ArH), 7.46 (d, J = 6.5 Hz, 1H, ArH); MS (ESI) 352(M⁺+1).

예시-3

4- 메틸 -6a,11a- 디하이드로 -6H- 벤조[4,5]푸로 [3,2-c] 크로멘 -3-올(S-007-1499):

0℃에서 무수에틸알콜(30ml)과 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-8-메틸-크로멘-4-온(3mg, 11.2mmol)의 혼합용액에 NaBH₄(2.6mg, 67.2mmol)을 첨가하였다. 이후 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 얼음으로 냉각시킨 물을 가하여 반응을 중단시키고, 백색 침전물을 얻기 위하여 10% HCl로 상기 용액을 중화시켰다. 백색 침전물을 물로 세척하고, 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(1.56mg, 55%)를 얻었다.

백색 고체: mp 160-162 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.12 (s, 3H, CH₃), 3.52-3.75 (m, 2H, H- 6β + H-6a), 4.33 (dd, J= 4.5, 5.8 Hz, 1H, H-6α), 4.87 (s, 1H, OH, D₂O exchange), 5.52 (d, J= 6.6 Hz, 1H, H-11a), 6.55 (d, J= 8.34 Hz, 1H, ArH), 6.81-6.94 (m, 2H, ArH), 7.13-7.23 (m, 1H, ArH), 7.24-7.30 (m, 2H, ArH); IR (KBr) 1479, 1552, 1599, 3383, 3407 cm^-1 (OH); MS (ESI) 255 (M⁺+1).

예시-4

3- 이소프로폭시 -6a,11a- 디하이드로 -6H-벤조푸로[3,2-c] 크로멘 (S-008-0398):

DMF(5ml)과 NaH(10mg, 0.42 mmol)에 용해시킨 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(100mg, 0.42mmol) 화합물을 실온에서 용액에 첨가한 후, 뒤이어 이소프로필 요오다이드(149mg, 0.84mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간동안 교반한 후 얼음물에 붓고, 백색 침전물을 얻기 위해 10% HCl로 중화시켰다. 침전물을 물로 세척하고, 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 3-이소프로폭시-6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘 (60mg, 51%)를 얻었다.

백색 고체: mp 96-98 °C; ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃) δ 1.33 (d, J= 6 Hz, 6H, 2CH₃) 3.51-3.75 (m, 2H, H-6β + H-6a), 4.28 (dd, J= 3.3, 9.8 Hz, 1H, H-6α),4.42-4.64 (m, 1H, CH), 5.50 (d, J= 6.3 Hz, 1H, H-11a), 6.46 (d, J= 2.4 Hz, 1H, ArH), 6.62 (dd, J= 2.4, 8.4 Hz, 1H, ArH), 6.81-6.96 (m, 2H, ArH), 7.13-7.29 (m, 2H, ArH), 7.43 (d, J= 8.5 Hz, 1H, ArH); ¹³C-NMR (75.5 MHz, CDCl₃) δ 22.00, 40.15, 66.36, 66.99, 77.78, 103.50, 110.21, 110.73, 112.00, 120.8, 124.72, 127.20, 129.19, 131.88, 156.55, 159.40; IR (KBr) 744, 784, 876, 928, 981, 1038, 1132,1174, 1229, 1279, 1371, 1461, 1502, 1577, 1625, 2925, 2977, 3052 cm^-1 MS (ESI) 283(M⁺+1).

예시-5

3-( 알릴옥시 )-6a,11a- 디하이드로 -6H-벤조푸로[3,2-c] 크로멘 (S-008-0625):

DMF(5ml)과 NaH(10mg, 0.42 mmol)에 용해시킨 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(100mg, 0.42mmol) 화합물을 실온에서 용액에 첨가한 후, 뒤이어 알릴 브로마이드(0.07ml, 0.84mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반한 후 얼음물에 부어 백색 침전물을 얻기 위해 10% HCl로 중화시켰다. 침전물을 물로 세척한 후 헥산-클로로포름를 용리액으로 사용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체의 3-(알릴옥시)-6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘(58mg, 50%)을 얻었다.

백색 고체: mp 72-74 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 3.56-3.72 (m, 2H, H-6β + H-6a), 4.27 (dd, J= 4.3, 5.9 Hz, 1H, H-6α), 4.52 (d, J= 5.2 Hz, 2H, CH₂), 5.28 (dd, J= 1.2, 10.5 Hz, 1H, CH), 5.40 (dd, J= 1.4, 17.3 Hz, 1H, CH), 5.49 (d, J= 6.4 Hz, 1H, H-11a), 5.96-6.06 (m, 1H, CH), 6.48 (d, J= 6.5 Hz,1H, ArH), 6.66 (dd, J= 2.4, 8.5 Hz, 1H, ArH), 6.81-6.94 (m, 2H, ArH), 7.13-7.22 (m, 1H, ArH), 7.22-7.28 (m, 1H, ArH), 7.43 (d, J=8.6 Hz, 1H, ArH); ¹³C NMR (75.5 MHz, CDCl₃) δ 40.12, 66.36, 68.87, 77.7, 102.56, 109.83, 110.22, 112.42, 117.89, 120.88, 124.74, 127.25, 129.23, 131.91, 132.95, 156.52, 159.35, 160.00; IR(KBr) 757, 803, 833, 869, 888, 907, 931, 995, 1033, 1086, 1111, 1178, 1230, 1266, 1304, 1337, 1385, 1432, 1461, 1478, 1504, 1585, 1619, 2898, 2925, 2989, 3016, 3050 cm^-1; MS (ESI) 280(M⁺+1).

예시-6

(4- 메틸 -6a,11a- 디하이드로 -6H- 벤조[4,5]푸로 [3,2-c] 크로멘 -3- 일옥시 )- 아세토니트릴 (S-007-1501):

DMF(5ml)과 NaH(8.1mg, 0.34 mmol)에 용해시킨 4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(100mg, 0.34mmol) 화합물을 실온에서 용액에 첨가한 후, 뒤이어 2-브로모아세토니트릴(0.05ml, 0.68mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반한 후 얼음물에 부어 백색 침전물을 얻기 위해 10% HCl로 중화시켰다. 침전물을 물로 세척한 후 헥산-클로로포름를 용리액으로 사용한 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체의 3-이소프로폭시-6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘(63.5mg, 55%)을 얻었다.

백색 고체: mp 130-132 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 2.12 (s, 3H, CH₃), 3.56-3.74 (m, 2H, H- 6β + H-6a), 4.35 (dd, J= 4.0, 6.0 Hz, 1H, H-6α), 4.79 (s, 2H, OH, CH₂), 5.53 (d, J= 6.5 Hz, 1H, H- 11a), 6.69 (d, J= 8.6 Hz, 1H, ArH), 6.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H, ArH), 6.87-6.96 (m, 1H, ArH), 7.14- 7.23 (m, 1H, ArH), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H, ArH), 7.41 (d, J= 8.6 Hz, 1H, ArH); ¹³C NMR (75.5 MHz, CDCl₃) δ 7.12, 38.89, 52.88, 65.29, 76.60, 104.54, 108.89, 113.90, 114.70, 119.67, 123.47, 125.73, 127.51, 127.97, 153.48, 154.22, 156.11, 158.01; IR (KBr) 753, 798, 825, 891, 934, 986, 1018, 1121, 1176, 1234, 1277, 1316, 1352, 1390, 1481, 1612 cm^-1, 2273 cm^-1 (CN); MS (ESI) 293, 269 (M⁺, M⁺+1-CN).

예시-7

6a,11a- 디하이드로 -6H- 벤조[4,5]푸로 [3,2-c] 크로멘 -3-올(S-006-1709):

0℃에서 무수에틸알콜(30ml)과 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온(3mg, 11.8mmol)의 혼합용액에 NaBH₄(2.7mg, 70.8mmol)을 첨가하였다. 이후 반응 혼합물을 실온에서 24시간동안 교반하였다. 얼음으로 냉각시킨 물을 가하여 반응을 중단시키고, 백색 침전물을 얻기 위하여 10% HCl로 상기 용액을 중화시켰다. 백색 침전물을 물로 세척하고, 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(1.6mg, 57%)를 얻었다.

백색 고체: mp 148-152 °C; ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃) δ 3.57-3.74 (m, 2H, H-6β + H-6a), 4.22- 4.33 (m, 1H, H-6α), 5.19 (s, 1H, OH, D₂O exchange), 5.49 (d, J = 6.2 Hz, IH, H-Ha), 6.42 (d, J = 2.4 Hz, IH, ArH), 6.56 (dd, J= 2.4, 8.4 Hz, IH, ArH), 6.81-6.96 (m, 2H, ArH), 7.17 (d, J= 7.76 Hz, IH, ArH), 7.22-7.30 (m, IH, ArH), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, IH, ArH) ; IR (KBr) 1017, 1082, 1122, 1170, 1222, 1259, 1289, 1351, 1381, 1476, 1516, 1597, 3396 cm ^-1 (OH); MS (ESI) 241(-VT+1).

예시-8

3- 하이드록시 -6H- 벤조푸로[3,2-c]크로멘 -6-온(S-008-400):

6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(100mg, 0.42mmol) 화합물을 톨루엔(10ml)에서 DDQ(190.7mg, 0.84mmol)로 10시간 동안 환류시켰다. 침전된 하이드로퀴논을 여과시킨 후, 여과액으로부터 상기 용매를 제거하였다. 잔류물을 클로로포름-메탄올을 용리액으로 이용하여 실리카겔 컬럼을 통과시켜 정제하였다.

백색고체: mp 170-172 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.90-6.97 (m, 2H, ArH), 7.40-7.47 (m, 2H, ArH), 7.60-7.68 (m, 1H, ArH), 7.87 (d, J= 8.2 Hz, 1H, ArH), 8.02-8.10 (m, 1H, ArH); IR (KBr) 746, 773, 807, 855, 951, 1000, 1122, 1264, 1309, 1372, 1440, 1610, 1730 (CO), 2927, 3085 cm^-1; MS (ESI) 252(M⁺+1).

신규 이소플라본 전구체:

예시-9

7,8- 디하이드록시 -3-(2- 메톡시 - 페닐 )- 크로멘 -4-온(S-007-1352):

0℃에서 DMF에서 BF₃-OEt₂ 복합체(7ml, 56mmol)를 2-(2-메톡시-페닐)-1-(2,3,4-트리하이드록시-페닐)-에탄온(3.8mg, 14mmol) 용액에 점진적으로 첨가하였다. 결과용액을 30분 동안 교반하였다. 50℃에서 메시틸 클로라이드(1.5ml, 42mmol)을 상기 용액에 점진적으로 첨가하였다. 이후 상기 용액을 5시간동안 110℃까지 가열하였다. 그리고나서 혼합물을 농축하였다. 그 잔여물을 얼음으로 처리하여 얻은 고체를 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 7,8-디하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온(0.98mg, 25%)를 얻었다.

백색 고체: mp 220-222 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃ + DMSO) δ 3.10 (s, 3H, OCH₃), 6.94-7.05 (m, 3H, ArH), 7.25-7.38 (m, 2H, ArH), 7.55-7.65 (m, 1H, ArH), 7.98 (s, 1H, CH), 8.74 (s, 1H, OH), 9.54 (s, 1H, OH); ¹³C NMR (50 MHz, CDCl₃ + DMSO) δ 60.85, 110.37, 119.53, 121.53, 123.21, 125.53, 126.46, 126.69, 134.77, 136.96, 138.08, 152.23, 154.99, 158.81, 162.73, 180.92; IR(KBr) 1629 cm^-1 (CO); MS (ESI) 285 (M⁺+1).

예시-10

7,8- 디하이드록시 -3-(2- 하이드록시 - 페닐 )- 크로멘 -4-온(S-007-1351):

-80℃에서 건조 CH₂Cl₂(50ml)와 7,8-디하이드록시-3-(2-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(2mg, 7.1mmol)의 혼합물에 BBr₃ (1.4ml in DCM, 14.2mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -80℃에서 1시간, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이 후 반응을 얼음-냉각수로 중단시켰다. 그리고 나서 상기 반응 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하고, 유기층을 분리하여 브라인(brine)으로 세척한 후 Na₂SO₄로 건조하여 수분을 증발시킨다. 상기 잔여물을 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 7,8-디하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온 (0.95mg, 50%)를 얻었다.

백색 고체: mp 240-242 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃ + DMSO) δ 6.91-7.00 (m, IH, ArH), 7.01- 7.13 (m, 2H, ArH), 7.21 (d, J= 7.6 Hz, IH, ArH), 7.25-7.35 (m, IH, ArH), 7.72 (d, J= 7.6 Hz, IH, ArH), 8.18 (s, IH, CH)₅ 9.17 (s, IH, OH); IR (KBr) 1723 cm⁴ (CO); MS (ESI) 271 (M÷+l).

예시-11

6- 클로로 -7- 하이드록시 -3-(2- 메톡시 - 페닐 )- 크로멘 -4-온(S-007-1355):

0℃에서 DMF에서 BF₃-OEt₂ 복합체(7ml, 56mmol)를 1-(5-클로로-2,4-디하이드록시-페닐)-2-(2-메톡시-페닐)-에탄온(4.1mg, 14mmol) 용액에 점진적으로 첨가하였다. 결과용액을 30분 동안 교반하였다. 50℃에서 메시틸 클로라이드(1.5ml, 42mmol)을 상기 용액에 점진적으로 첨가하였다. 이후 상기 용액을 5시간 동안 110℃까지 가열하였다. 그리고 나서 혼합물을 농축하였다. 그 잔여물을 얼음으로 처리하여 얻은 고체를 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 6-클로로-7-하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온(2.5mg, 60%)를 얻었다.

백색 고체: mp 228-230 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃+ DMSO) δ 3.79 (s, 3H, OCH₃), 6.95-7.09 (m, 3H, ArH), 7.24-7.40 (m, 2H, ArH), 7.91 (s, 1H, ArH), 8.13 (s, 1H, CH), 10.85 (s, 1H, OH); ¹³ C NMR (75.5 MHz, CDCl₃ + DMSO) δ 59.16, 107.43, 114.68, 121.50, 123.75, 123.90, 124.32, 125.70, 130.29, 133.23, 135.11, 157.33, 159.60, 160.96, 161.45, 178.50; IR (KBr) 1625 cm^-1 (CO); MS (ESI) 303 (M⁺+1).

예시-12

6- 클로로 -7- 하이드록시 -3-(2- 하이드록시 - 페닐 )- 크로멘 -4-온(S-007-1354):

-80℃에서 건조 CH₂Cl₂(25ml)와 6-클로로-7-하이드록시-3-(2-메톡시페닐)-4H-크로멘-4-온(2.5mg, 8.3mmol)의 혼합물에 BBr₃ (1.6ml in DCM, 16.6mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -80℃에서 1시간, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이 후 반응을 얼음-냉각수로 중단시켰다. 그리고 나서 상기 반응 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하고, 유기층을 분리하여 브라인(brine)으로 세척한 후 Na₂SO₄로 건조하여 수분을 증발시킨다. 상기 잔여물을 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 6-클로로-7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온 (1.4mg, 60%)를 얻었다.

백색 고체: mp>250 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃ + DMSO) δ 6.95-7.04 (m, 3H, ArH), 7.20-7.32 (m, 2H, ArH), 8.11 (s, 1H, ArH), 8.20 (s, 1H, CH), 9.05 (s, 1H, OH); IR (KBr) 1625 cm^-1 (CO); MS (ESI) 289 (M⁺+1).

예시-13

7- 하이드록시 -3-(2- 하이드록시 - 페닐 )-8- 메틸 - 크로멘 -4-온(S-007-1498):

-80℃에서 건조 CH₂Cl₂(50ml)와 7-하이드록시-3-(2-메톡시페닐)-8-메틸-4H-크로멘-4-온(5mg, 17.7mmol)의 혼합물에 BBr₃ (3.4ml in DCM, 35.4mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -80℃에서 1시간, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이 후 반응을 얼음-냉각수로 중단시켰다. 그리고 나서 상기 반응혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하고, 유기층을 분리하여 브라인(brine)으로 세척한 후 Na₂SO₄로 건조하여 수분을 증발시킨다. 상기 잔여물을 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-8-메틸-크로멘-4-온 (3.5mg, 72%)를 얻었다.

백색 고체: mp 196-198 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃ + DMSO) δ 2.34 (s, 3H, CH₃), 6.90-7.06 (m, 3H, ArH), 7.22-7.32 (m, 2H, ArH), 7.95-8.04 (m, 1H, ArH), 8.18 (s, 1H, CH), 10.18 (s, 1H, OH, D₂O exchange); IR (KBr) 1625 cm^-1 (CO); MS (ESI) 269 (M⁺+1).

알려진 이소플라본 전구체:

예시-14

7- 하이드록시 -3-(2- 메톡시 - 페닐 )- 크로멘 -4-온(S-006-1710):

0℃에서 DMF에서 BF₃-OEt₂ 복합체(14ml, 112mmol)를 1-(2,4-디하이드록시-페닐)-2-(2-메톡시-페닐)-에탄온(7.2mg, 28mmol) 용액에 점진적으로 첨가하였다. 결과용액을 30분 동안 교반하였다. 50℃에서 메시틸 클로라이드(6.5ml, 84mmol)을 상기 용액에 점진적으로 첨가하였다. 이후 상기 용액을 5시간 동안 110℃까지 가열하였다. 그리고 나서 혼합물을 농축하였다. 그 잔여물을 얼음으로 처리하여 얻은 고체를 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 7-하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온(5.6mg, 75%)를 얻었다.

백색 고체: mp 222-224 °C; ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃ + CD₃OD) δ3.80 (s, 3H, OCH₃), 6.85-7.07 (m, 4H, ArH), 7.23-7.41 (m, 2H, ArH), 7.96 (s, 1H, CH), 8.08 (d, J= 8.8 Hz, 1H, ArH); IR (KBr) 1628 cm^-1 (CO); MS (ESI) 269 (M⁺+1).

예시-15

7- 하이드록시 -3-(2- 하이드록시 - 페닐 )- 크로멘 -4-온(S-006-1711):

-80℃에서 건조 CH₂Cl₂(50ml)와 7-하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온(5mg, 18.7mmol)의 혼합물에 BBr₃ (3.6ml in DCM, 37.4mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -80℃에서 1시간, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이 후 반응을 얼음-냉각수로 중단시켰다. 그리고 나서 상기 반응 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하고, 유기층을 분리하여 브라인(brine)으로 세척한 후 Na₂SO₄로 건조하여 수분을 증발시킨다. 상기 잔여물을 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온 (3.8mg, 80%)를 얻었다.

백색 고체: mp 196-198 °C; ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃ + CD₃OD) δ 6.89-7.05 (m, 4H, ArH), 7.20- 7.36 (m, 2H, ArH), 8.12 (s, 1H, CH), 8.15 (d, J= 9.04 Hz, 1H, ArH); IR (KBr) 1621 cm^-1 (CO); MS (ESI) 255 (M⁺+1).

예시-16

3-(2,4- 디메톡시 - 페닐 )-7- 하이드록시 - 크로멘 -4-온(S-006-1713):

0℃에서 DMF에서 BF₃-OEt₂ 복합체(14ml, 112mmol)를 1-(2,4-디하이드록시-페닐)-2-(2,4-디메톡시-페닐)-에탄온(8.1mg, 28mmol) 용액에 점진적으로 첨가하였다. 결과용액을 30분 동안 교반하였다. 50℃에서 메시틸 클로라이드(6.5ml, 84mmol)을 상기 용액에 점진적으로 첨가하였다. 이후 상기 용액을 5시간 동안 110℃까지 가열하였다. 그리고 나서 혼합물을 농축하였다. 그 잔여물을 얼음으로 처리하여 얻은 고체를 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 3-(2,4-디메톡시-페닐)-7-하이드록시-크로멘-4-온 (5.9mg, 70%)를 얻었다.

백색 고체: mp 238-240 °C; ¹H NMR (200 MHz, CDCl₃ + CD₃OD) δ 3.78 (s, 3H, OCH₃), 3.85 (s, 3H, OCH₃), 6.53-6.59 (m, 2H, ArH), 6.83-6.98 (m, 2H, ArH), 7.20 (d, J= 8.9 Hz, 1H, ArH) 7.92 (s, 1H, CH), 8.08 (d, J= 8.8 Hz, 1H, ArH); IR (KBr) 1621 cm^-1 (CO); MS (ESI) 299 (M⁺+1).

예시-17

7- 하이드록시 -3-(2- 하이드록시 -4- 메톡시 - 페닐 )- 크로멘 -4-온(S-006-1714):

CH₃CN(25ml) 및 AlCl₃(2.6mg, 20mmol)에서 용해한 3-(2,4-디메톡시-페닐)-7-하이드록시-크로멘-4-온(2mg, 6.7mmol)을 0℃에서 용액에 첨가하였다. 이후 상기 반응을 10시간 동안 환류하였다. 상기 혼합물을 냉각하여 얼음-냉각수에 부었다. 침전된 고체를 여과하여 물로 세척한 후 헥산-클로로포름을 용리액으로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-4-메톡시-페닐)-크로멘-4-온 (0.95mg, 50%)를 얻었다.

백색 고체: mp 210-212 °C; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃ + CD₃OD) δ 3.86 (s, 3H, OCH₃), 6.51-6.65

(m, 2H, ArH), 6.90 (d, J= 1.9 Hz, IH, ArH), 7.03 (dd, J= 2.2, 10.28 Hz, 1H, ArH), 7.13 (d, J= 8.4 Hz₅ 1H, ArH), 8.07 (s, 1H, CH), 8.15 (d, J= 8.9 Hz, 1H, ArH); IR (KBr) 1619 cm-¹ (CO); MS(ESI) 285 (M⁺+1).

생물학적 평가

포유 동물에 있어서 에스트로겐 결핍 또는 부족 상태 특히, 인간 및 다른 동물에서의 골다공증, 골 형성, 골 손실를 포함하는 에스트로겐 결핍 또는 부족 증후군의 예방 또는 치료, 골 형성 강화에 사용하기 위하여 본 발명의 순수한 화합물을 평가하였다. 본 발명의 분리된 화합물의 평가를 위한 상세한 과정을 이 후에 기술한다. 본 발명의 화합물 S006-1709의 약물동태학적 평가를 실험동물에 수행하여, 그 상세한 과정을 기술한다. 그러나 하기의 실시예에서 기술되는 활성 테스트는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않는다.

골형성 ( osteogenic ) 또는 뼈 형성( bone forming ) 활성의 측정을 위한 테스트 과정

본 발명의 테스트 화합물의 테스트 용액을 10^-14M 내지 10^-6M 범위의 농도의 임의의 용매에서 제조하였다. 각 농도의 2μl를 인 비트로에서 골 형성 평가를 위하여 사용하였다. 대조군 실험에서동량의 임의의 용매를 테스트 물질 대신 사용하였다.

골모세포 세포 배양

골모세포는 다능성 중간엽 줄기 세포(pluripotent mesenchymal stem cell)로부터 발생한다. 전구-골모세포(pre-osteoblast)의 가장 풍부한 자원은 갓 태어난 쥐 또는 생쥐의 두개관이다. 골모세포는 또한 골수에도 존재한다. 배양 과정 중, 전구-골모세포는 단계 특이적 유전자의 발현과 함께 세 개의 특징적인 단계를 거친다. 이는 다음과 같다:

- 증식 & 분화 : 1 - 12일

유전자-알칼리성 인산분해효소, 콜라겐-I, 오스테릭스(osterix), cbfa1

- 세포외기질 성숙: 12 - 18일

유전자-오스테오칼신(osteocalcin), 오스테오폰틴(osteopontin), 섬유결합소(fibronectin)

- 무기질화(mineralization) : 14 - 35일

특징 - 석회화 (결절(nodule) 형성)

신생 쥐 두개관 세포 배양물을 이전에 기술된 대로(Endocrinology 145:3451) 약간의 변형을 적용하여 준비하였다. 요약하면, 일차 골모세포 배양을 위하여 신생 스프라그-도레이 쥐(1-3일령)의 전두골 및 두정골(frontal and parietal bone)을 α-MEM 중의 0.1% 콜라게나제/0.1% 디스파제에서 소화시켜 5개의 순차적인 소화물(digest)을 얻었다. 두 번째부터 다섯 번째의 소화물을 혼합하여 37℃, 공기 중의 5% CO₂에서, 10% 소태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS), 2mM 글루타민, 100 U/ml 페니실린-스트렙토마이신, 비-필수 아미노산 용액과 소듐 피루베이트로 보충된 α-MEM에서 컨플루언스(confluence)까지 성장시켰다.

순수한 화합물을 골모세포 및 용골세포(osteoclasts)에서 테스트하였다.

MTT 세포 증식 분석

원리

1983년 Mosmann에 의하여 처음으로 기술된, MTT[3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드] 분석은 엷은 노란색 MTT의 테트라졸륨 고리를 절단하여 세포막을 거의 통과하지 못하는 어두운 푸른색의 포르마잔(formazan) 결정을 형성하고, 결국 건강한 세포 내에 축적하게 만드는 살아있는 세포의 미토콘드리아 탈수소효소의 활성에 근거한다. 세제(detergent)를 첨가하여 세포를 용해화시키면 용해된 결정이 유리된다. 살아남은 세포의 수는 생성된 포르마잔 수치에 직접적으로 비례한다. 간단한 비색 분석(colorimetric assay)을 이용하여 색깔을 수량화 시킬 수 있다. 그 결과를 분광 비색계(multiwell scanning spectrophotometer) (Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983 Dec 16; 65(l-2):55-63)로 읽을 수 있다.

실험재료 및 방법

두개관 골모세포를 96-웰 플레이트에서 2.0x10³세포/200ul 밀도로 평판 배양시켰다. 세포들을 60% 컨플루언시까지 성장시키고, 10^-10M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 S006-1709, S006-1710, S006-1711, S006-1713 및 S006-1714 화합물로 24시간 동안 처리하였다. 처리 배지를 제거하고 10mM MTT를 페놀 레드 프리 DMEM 배지 용액에 첨가하였다, 4시간 동안 배양한 후에 MTT 용액을 제거하였다. DMSO에 용해된 푸른색의 결정이 형성되었고, 570nm 파장에서 ELISA 평판 판독기로 그 흡광도를 측정하였다.

결과- 화합물 S006-1709은 골모세포 증식에 아무 영향을 미치지 못하였다( 도1 a).

골모세포 분화를 위한 알칼리성 인산분해효소 활성

70 내지 80% 컨플루언트(confluent) 두개관 골모세포를 아스코르베이트와 글리세로포스페이트의 존재 하에서 μM S006-1709로 48시간 동안 처리하였다. 배양기간이 끝날 무렵에 총 ALP 활성을 P-니트로페닐포스페이트(PNPP)를 기질로 사용하는 방법으로 측정하였다. 반응 혼합물을 디에탄올아민 완충용액(1mol/L, pH 9.8), 0.5 mmol/L MgCl₂·6H₂0 및 10mmol/L PNPP에 넣어두었다. 405nm에서 PNPP의 인산기 이탈반응(dephosphorylation)에 의하여 형성된 색깔이 있는 생성물 양의 OD를 수집하여 ALP 활성을 측정하였다. 운반체 대조군과 비교해봤을 때, 그 결과는 연구가 진행된 10^-16M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 S006-1709 처리에 의하여 ALP 활성에 상당한 증가가 있었음을 보여주었다(도3a). 아울러, 두개관 골모세포의 무기질화에 관하여 S006-1709의 효과도 연구되었다. 데이터는 10^-12M과 10^-10M에서 알리자린 레드 추출물(Alizarin red extraction)에 의해 신생 칼슘 침착의 무기질화(mineralization)가 대조군에 비하여 상당히 증가했음을 나타내었다(도5).

최근 보고는 두개관 골모세포가 다양한 성장 인자에 따라 골수 골모세포에 대해 서로 다르게 반응하는 것을 보여준다. 명백하게, S006-1709는 두개관 골모세포에서 성장- 및 기능- 촉진 물질로서 작용하고 있다. 폐경기 이후 및 다른 연령 관련 골 손실에서, 골수와 함께 지주골(trabecular bone)도 영향을 받는다. 골수에서 골모세포는 뼈가 손실되는 속도로 뼈를 생성하지 못한다. 따라서, 골모세포의 뼈 형성 기능을 강화하는 것을 골 손실 질환의 치료방식으로 가장 선호하고 있다.

아울러, 골수 골모세포의 무기질화에 대한 S006-1709의 영향 역시 연구되었다. 데이터는 18d 골수 배양액 10^-12M과 10^-10M에서 알리자린 레드 추출물(Alizarin red extraction)에 의해 신생 칼슘 침착의 무기질화(mineralization)가 대조군에 비하여 상당히 증가했음을 나타내었다(도6).

S006 -1710 - S006-1709에서 설계된 것과 유사한 연구를 수행했을 때, 본 발명자는 S006-1710의 골모세포 증식 활동을 관찰할 수 없었다(도1b).

이어 본 발명자는 두개관 및 골수 골모세포 모두에 대한 골모세포 분화에 있어서의 영향을 연구하였다. 컨플루언트 두개관 골모세포(70 내지 80%)를 아스코르베이트와 글리세로포스페이트 존재 하에 48시간 동안 10^-16M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 S006-1710으로 처리하였다. 배양이 끝날 무렵, p-니트로페닐포스페이트(PNPP)를 기질로 사용하여 이전에 수행한 것과 동일한 방법으로 총 ALP 활성을 측정하였다. 운반체 대조군과 비교해봤을 때, 그 결과는 연구가 진행된 모든 농도에서의 S006-1710 처리에 의하여 골모세포 ALP 활성에 상당한 증가가 있었음을 보여주었다(도3b).

S006-1710는 침착된 신생 칼슘량의 측정 기준이 되는 알리자린 레드 착색으로 평가해볼 때 10^-12M과 10^-10M 농도에서 두개관 및 골수 골모세포의 무기질화를 촉진시키는 것을 발견하였다. 그 효과는 S006-1709의 효과와 유사함을 발견하였다(도5).

아울러, 골수 골모세포의 무기질화에 대한 S006-1710의 효과도 연구하였다.

데이터는 18d 골수 배양액에서 10^-12M과 10^-10M에서의 알리자린 레드 추출물(Alizarin red extraction)에 의해 S006-1710에 의한 신생 칼슘 침착의 무기질화(mineralization)가 대조군에 비하여 상당히 증가함을 나타내었다(도6).

S006 -1711- S006-1711은 골모세포 증식에 아무런 영향을 미치지 않았으나(도1c), 10^-16M 내지 10^-6M 농도에서 두개관 및 골수 유래 골모세포에서의 ALP 활성을 촉진시켰다(도3c). 또한 S006-1711은 10^-12M 내지 10^-10M 농도에서 두개관 및 골수 골모세포의 무기질화를 촉진시켰다(도5 및 도6).

S006 -1713- S006-1713은 골모세포 증식에 아무런 영향을 미치지 않았고(도2a), ALP 활성의 촉진 작용 역시 거의 일어나지 않았다(도4a).

S006 -1714- S006-1714은 골모세포 증식에 아무런 영향을 미치지 않았고(도2b), ALP 활성의 촉진 작용 역시 거의 일어나지 않았다(도4b).

골모세포 분화를 위한 알칼리성 포스페이트 활성

S007 -1351

70 내지 80% 컨플루언트(confluent) 두개관 골모세포를 아스코르베이트와 글리세로포스페이트의 존재 하에서 48시간 동안 S007-1351로 처리하였다. 배양기간이 끝날 무렵에 총 ALP 활성을 P-니트로페닐포스페이트(PNPP)를 기질로 사용하는 방법으로 측정하였다. 상기 반응 혼합물을 디에탄올아민 완충용액(1mol/L, pH 9.8), 0.5 mmol/L MgCl₂·6H₂0, 및 10mmol/L PNPP에 담가두었다. PNPP의 인산기 이탈반응에 의하여 형성된 색깔이 있는 생성물 양의 OD를 수집하여 405nm에서 ALP 활성을 측정하였다. 운반체 대조군과 비교해봤을 때, 그 결과는 연구가 진행된 10^-12M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 S007-1351 처리에 의하여 골모세포 ALP 활성에 상당한 증가가 있음을 보여주었다(도7).

S007 -1352

70 내지 80% 컨플루언트(confluent) 두개관 골모세포를 아스코르베이트와 글리세로포스페이트의 존재 하에서 48시간 동안 10^-12M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 S007-1352로 처리하였다. 배양이 끝날 무렵, p-니트로페닐포스페이트(PNPP)를 기질로 사용하여 이전에 수행한 것과 동일한 방법으로 총 ALP 활성을 측정하였다. 운반체 대조군과 비교해봤을 때, 그 결과는 연구가 진행된 모든 농도에서 S007-1352 처리에 의하여 골모세포 ALP 활성에 상당한 증가가 있음을 보여주었다(도7).

S007 -1353 S007-1353은 10^-12M 내지 10^-6M 농도에서 두개관 유래 골모세포에서의 ALP 활성을 촉진시켰다(도7).

S007 -1495- S007-1495는 10^-12M 내지 10^-6M 농도에서 두개관 유래 골모세포에서의 ALP 활성을 촉진시켰다(도7).

S007 -1500- S007-1500은 10^-12M 내지 10^-6M 농도에서 두개관 유래 골모세포에서의 ALP 활성을 촉진시켰다(도7).

S007 -1354, S007 -1355, S007 -1496, S007 -1497, S007 -1498, S007 -1499 및 S007-1501- 이들 화합물의 ALP활성 촉진은 거의 일어나지 않았다.

다양하게 합성된 화합물의 항-지방생성 효과

원리: 본 실험의 목적은 인 비보에서 골 손실을 촉진하는 것으로 알려진 지방 생성 증가를 억제하는 합성 화합물을 발견하는 것이다. 인 비트로에서 지방 생성의 가장 특징적인 모델은 3T3-L1 세포주, 스위스 3T3 생쥐 세포주의 아주(substrain)이다. 정상 조건 하에서 번식된 3T3-L1 세포들은 섬유모세포의 형질(fibroblastic phenotype)을 가지고 있다. 그러나, 덱사메타손 조합체(dexamethasone combination)로 처리했을 때, 이소부틸메틸잔틴(IBMX 또는 MIX) 및 인슐린, 3T3-L1 세포들은 둥근 형질을 채택하여 5일 내 지질 방울의 형태로 세포 내에서 지질을 축적하기 시작한다.

방법:

지방 생성 과정(인 비트로)

3T3-L1 세포를 48-웰 플레이트에서 40,000개의 세포/웰로 평판 배양시켰다. 세포들을 신생우아혈청(fetal calf serum)을 포함하는 DMEM에서 컨플루언트가 될 때까지 2일동안 배양시킨다. 그리고나서 세포들을 37℃, 5% CO₂에서, 10% FCS, IBMX 및 덱사메타손과 함께 DMEM을 포함하는 지방생성 개시 배지에서 48시간동안 배양하였다. 2일 후 배지를 DMEM/10% FCS 및 인슐린을 포함하는 지방 생성 진행 배지로 교체하고, 48시간 동안, 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 다시 지방 생성 유지 배지로 조심스럽게 교체하고, 48시간 동안, 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 실험 8일째 말기에 세포를 고정하고 나서 지질 방울을 착색시키는 오일 레드 오(oil red o)로 착색시켰다. 착색물을 추출하여 96-웰 플레이트로 이동시킨 후 추출된 오일 레드 오의의 흡광도를 490nm의 플레이트 판독기로 측정하였다.

결과:

S006-1709, S007-1351-53, S007-1495 및 S007-1500의 화합물을 3T3L1 세포주에서 10^-10M 및 10^-12M 두 농도에서 인 비트로로 테스트하였다. 도8a는 실험 8일째 말기에 형성된 지방 세포를 보여주고 있다. 고정된 세포를 오일 레드 오로 착색하였다. 착색물을 추출한 후 정량화시켰다. 모든 화합물 중에 S006-1709, S007-1495 및 S007-1500는 서로 다른 농도에서 지방생성을 상당히 억제하였다(도8B). 화합물 S007-1353은 10^-10M에서 지방 생성을 억제하나 통계적으로 의미있는 정도는 아니었다. 다른 화합물 S007-1351(양쪽 농도에서), S007-1352(양쪽 농도에서) 및 10^-12M의 농도에서의 S007-1353은 항-지방생성이 되는 대신에 지방생성을 유도하였다.

에스트로겐성 및 항- 에스트로겐성

폐경기 후 여성의 암을 유발하도록 촉진하는 에스트로겐의 역할을 이러한 여성들에 있어서 에스트로겐 치료를 중단하게 만드는 주요 문제점으로 고려해볼 때, 본 발명자는 활성 순수 화합물의잠재적 에스트로겐성을 테스트하였다.

21일령의 미성숙 암컷 쥐(25-30g)의 난소를 적출하고 7일 동안의 수술 후 회복기간을 제공하였다. 이후 그 쥐들을 테스트 물질(몸무게 1Kg당 10mg) 또는 운반체 또는 에티닐 에스트라디올(Ethynyl Estradiol) 로 경구 처리하고, 3일 연속으로 표준 시료로 처리하였다. 항-에스트로겐성을 위해, 테스트 화학물질 이외에 테스트 화학물질 처리 전 15분 간격으로 에티닐 에스트라디올(0.01mg/kg)을 투여하였다. 마지막 처리 후 24시간 내로 부검을 실시하고, 바로 자궁의 무게를 측정하였다.

S006-1710과 S006-1711이 에스트로겐성인 반면, S006-1709 화합물은 비-에스트로겐성이었다(표1). S006-1710 및 S006-1711이 항-에스트로겐성이 아닌 반면, 화합물 S006-1709는 항-에스트로겐성이었다(표1).

처리	투여량 mg/Kg	에스트로겐 활성	항-에스트로겐 활성
운반체		16.46
에티닐 에스트라디올	0.01	98.3
S006-1709	10	15.8 -	96.86 -1.5%
S006-1710	10	89.96 446%	79.9 19%
S006-1711	10	48.13 192%	85.16 13%

S006 -1709 및 S007 -1500의 인 비보 효능

S006-1709 및 S007-1500이 골포세포 기능의 모든 단계, 즉 증식, 분화 및 무기질화에 있어서 촉진 활동을 가하는 것과, 아울러 에스트로겐성이 전혀 없다는 것이 밝혀졌기 때문에 본 발명자는 S006-1709(표2) 및 S007-1500(표3)을 인 비보 효능을 평가하였다.

미성숙 21일령 암컷 SD 쥐 모델을 선택하여, 네 그룹으로 무작위로 나눈후, 테스트 물질 또는 운반체를 매일 정량으로 한 달동안 투여한 후 31일째에 부검하였다.

부검 하루전, 적응을 위해 동물들을 음식 및 물과 함께 24시간 동안 대사 우리(metabolic cage)에 가두었다. 적응이 완료된 동물들을 음식없이 물만 제공하면서 다시 24시간 동안 대사 우리에 가두었다. 24시간 후 혈액과 소변 샘플을 수집하였다. 혈청 칼슘, 혈청 인, 혈청 오스테오칼신, 혈청 알카린 포스패타제(ALP)와 같은 다양한 생화학적 파라메터들을 평가하였다. 31일째에 동물들을 부검하고, 요추, 대퇴골, 및 경골을 분리하여, 세척하고 식염수에서 70% 에탄올에서 고정하고 BMD측정할 때까지 4℃에서 저장하였다. 부검시 초기 및 말기 몸무게와 자궁 무게를 기록하였다. 관심 부위(요추: 전체, L1-L4; 대퇴골: 전체, 목과 간부(mid-shaft); 경골: 전체, 중심부 및 경골-비골 결합점)의 BMD 측정을 소형 동물의 체내 골 밀도측정과 체조성 측정이 가능한 팬-빔 DXA 시스템(Fan-Beam DXA system)을 위한 상업적으로 이용 가능한 소프트웨어(QDR 4500 ACCLAIM series)와 연동된 골 밀도측정기(bone densitometer)(Model 4500 Elite, Hologic)를 사용하여 수행하였다.

결과: S006-1709에 대하여 10mg/kg 투여량에서 BMD가 상당히 증가하였고 S007-1500에 대하여 대퇴골 및 경골에서 1.0 및 5.0mg/kg 두 투여량 모두에서 BMD가 상당히 증가하였다.

그룹	허위수술 대조군(control sham intact)와 비교했을 때 BMD에서의 변화
	대퇴골			경골			요추
	전체	목	간부	전체	머리	TFSP	전체	LV1	LV2	LV3	LV4
운반체	100	100	100	100	100	100	100	100	100	100	100
S006-1709 10mg/kg	138.75 ***	141 ***	167 ***	133 ***	115	124 ***	120 *	126 **	124 *	90.3	125

(***-p<0.001, **-p<0.01, *-p<0.05 sham의 BMD와 비교했을 때)

화합물 코드 일일 투여량 (mg/Kg)	대퇴골			경골			요추
화합물 코드 일일 투여량 (mg/Kg)	전체	목	간부	전체	중심부	TFSP	전체	L-1	L-2	L-3	L-4
S007-1500 (1mg/kg)	+27% *	+16% *	+35% *	+35% **	+16.5% *	+70% ***	+13% *	+6%	+21%	+5.5%	-8.5%
S007-1500 (5mg/kg)	+25% *	+26% *	+30% *	+37% **	+33% **	+69% ***	+17%	+7%	+14.5%	+25%	+14%

데이터는 운반체 대조군에 대한 % 증가 표시

(***-p<0.001, **-p<0.01, *-p<0.05 sham의 BMD와 비교했을 때)

약물동태학적 연구:

본 발명의 S006-1709 화합물의 약물동태학적 평가를 실험동물에 대하여 수행하였고, 그 데이터(표4) 및 상세 과정은 하기와 같다:

5mg/kg의 정량을 스프라그 도레이 쥐에게 경구 투여하여 생체 내에서 약물동태학적 파라메터를 생성하였다. 혈액 샘플을 0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 4.0, 6, 8, 10, 12, 18, 24, 28, 36 및 48시간에 추출하여, 액체 크로마토그래피-질량 분석기(LC-MS)로 처리 및 분석하였다. 혈장 농도 시간 프로필(plasma concentration time profile)을 제공하기 위해 서로 다른 시점에서의 혈장농도를 도표로 전개하고, Win NonLin 5.1 버전 소프트웨어를 사용하여 데이터를 비구획적으로 산정한 후, 동태학적 파라메터 측정치를 SD 평균치로 유도하였다. 최대 혈장 농도(C_max), 최대 혈장 농도를 얻기 위한 시간(t_max), 정규 곡선하 영역(Area under curve, AUC), 제거 반감기(elimination half life, T₁ _/2) 및 평균체류시간(mean residence time, MRT)은 각각 17.533 ± 1.76, 15분, 32.12 ± 12.0 hr.ng/ml, 2.5hr, 3.5hr인 것을 알아내었다.

5mg/kg을 경구 투여한 SD 쥐에서의 S006-1709의 약물동태학적 측정치

PK 파라메터	5mg/kg을 경구 투여한 SD 쥐에서의 S006-1709
C_max	17.533 ± 1.76
T_max	15min
AUC	32.12 ± 12.0
T₁ _/2	2.5h
MRT	3.5h

Claims

일반식 I 및 상기 일반식 I의 염과 키랄, 아키랄 유도체를 갖는 치환된 신규한 벤즈푸로크로멘 및 관련 화합물로서,

일반식I
상기 일반식 I에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 니트릴, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되나, 이에 한정되지 않고;

상기 일반식 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디하이드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위(moiety)를 통해 연결될 수 있고;

상기 일반식 I에서 X는 선택적으로 케톤기, 선택적으로 메틸렌기, 선택적으로 치환된 메틸렌기, 선택적으로 치환된 알켄으로 이루어진 유닛으로부터 선택되고;

상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 단일결합이라는 조건 하에서 Y와 Z는 CH, C-OH, C-Me, C-OMe으로 이루어진 유닛(unit)으로부터 선택되고;

상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 이중결합이라는 조건 하에서 Y 및 Z는 탄소 원자일 수 있는 화합물.
제1항에 있어서, 상기 일반식 I을 갖는 특히 바람직한 신규한 화합물은 템플릿 I에 의하여 더욱 상세하게 기술되고;

템플릿 I
상기 템플릿 I에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 니트릴, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되나, 이에 한정되지 않고;

상기 템플릿 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디하이드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위를 통해 연결될 수 있는 화합물.
제1항에 있어서, 템플릿 I의 일반식을 갖는 신규한 화합물 전구체는 템플릿 II에 의하여 특히 상세히 기술되고;

템플릿II
상기 템플릿 II에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 니트릴, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되나, 이에 한정되지 않고;

상기 템플릿 II에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디히드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위를 통해 연결될 수 있는 화합물.
제1항에 있어서, 대표 화합물은 다음을 포함하나, 이에 한정되지 않는 신규한 화합물.
xviii. 3-알릴옥시-4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘
xix. 4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올
xx. 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올
xxi. (4-메틸-6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-일옥시)-아세토니트릴
xxii. 3-이소프로폭시-6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘
xxiii. 3-(알릴옥시)-6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘
xxiv. 1-(2-(6a,11a-디하이드로-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘-3-일옥시)에틸)피페리딘
xxv. 3-하이드록시-6H-벤조푸로[3,2-c]크로멘-6-온
xxvi. 7,8-디하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온
xxvii. 7,8-디하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온
xxviii. 6-클로로-7-하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온
xxix. 6-클로로-7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온
xxx. 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-8-메틸-크로멘-4-온
xxxi. 7-하이드록시-3-(2-메톡시-페닐)-크로멘-4-온
xxxii. 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-페닐)-크로멘-4-온
xxxiii. 3-(2,4-디메톡시-페닐)-7-하이드록시-크로멘-4-온
xxxiv. 7-하이드록시-3-(2-하이드록시-4-메톡시-페닐)-크로멘-4-온
제1항에 있어서, 상기 화합물은 에스트로겐 비의존 또는 의존 질병이나 증후군과 관련된 다양한 의학적 적응증의 예방 또는 치료, 바람직하게는 인간 및 동물에게 발병되는 질병 및 증후군 특히: 골다공증, 골 손실, 골 형성; 타입 II/연령 관련/노령 골다공증 진행 중의 골 형성, 발달 및 성장 기간 중 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 절골 치료, 손상된 골 대체를 위한 인 비트로(in vitro)/인 비보(in vivo)에서의 새로운 골 형성 촉진; 에스트로겐 관련 질병 또는 증후군, 바람직하게는 포유동물의 에스트로겐 결핍 상태로 야기된 질병 또는 증후군; 심혈관적 효과 특히, 고지혈증, 혈전증, 혈관운동신경 시스템; 뇌경색, 노인성 치매-알츠하이머 타입 및 파킨슨병과 같은 퇴행성신경질환적 효과; 홍조, 비뇨생식기 위축, 우울증, 조증, 정신분열증 및 유사 질환, 요실금, 월경통 완화를 포함하는 폐경 증후군; 자궁 출혈 증상, 난소 발달 도움, 여드름 및 다모증의 치료; 전립선암, 유방암, 자궁암, 자궁경부암 및 대장암과 같은 암 질환; 인간 및 다른 동물의 생식력 조절 및 통제; 절박 또는 습관성 유산의 예방을 위한 사용; 산후 수유 억제; 비만, 우울증과 같은 생리적 질환이 예방 및 치료에 유용한 것인 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 18d 골수배양액의 10^-12M 및 10^-10M에서 대조군에 비해 신생 칼슘 침착의 무기질화(mineralization)에 있어서 상당한 증가를 보여주는 것인 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 10^-12M 내지 10^-6M 범위의 농도에서 골모세포의 ALP의 활성을 보이는 것인 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 서로 다른 농도 즉 10^-12M 내지 10^-10M 범위에서 지방생성을 상당히 억제하는 것인 화합물.
제1항에 있어서, 상기 화합물은 1.0 내지 10mg/kg 사이의 정량에서 인 비보(in vivo) BMD를 상당히 증가시키는 것인 화합물.
일반식 I 및 상기 일반식 I의 염과 키랄, 아키랄 유도체 화합물의 용도로서,

일반식 I
상기 일반식 I에서 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 니트릴, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되나, 이에 한정되지 않고;

상기 일반식 I에서 R¹R² 또는 R²R³ 또는 R⁶R⁷은 연결되어 선택적으로 치환된 푸란, 선택적으로 치환된 디하이드로푸란, 선택적으로 치환된 피란과 같은 5 원자고리나 6 원자고리를 형성하거나; 메틸렌디옥시 부위를 통해 연결될 수 있고;

상기 일반식 I에서 X는 선택적으로 케톤기, 선택적으로 메틸렌기, 선택적으로 치환된 메틸렌기, 선택적으로 치환된 알켄으로 이루어진 유닛 으로부터 선택되고;

상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 단일결합이라는 조건 하에서 Y와 Z는 CH, C-OH, C-Me, C-OMe으로 이루어진 유닛으로부터 선택되고;

상기 일반식 I에서 Y와 Z 사이 결합이 이중결합이라는 조건 하에서 Y 및 Z는 탄소 원자일 수 있고;

상기 일반식 I에서 골다공증, 골 손실, 골 형성; 타입 II/연령 관련/노령 골다공증 진행 중의 골형성, 발달 및 성장 기간 중 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 절골 치료 및 그 밖의 골 질환 치료에 유용한 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(S-006-1709)와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 모든 알려진 천연 및 합성 테로카판류 화합물과 신규한 이소플라본 및 관련 화합물의 용도.
일반식 I, 상기 일반식 I의 염과 키랄, 아키랄 유도체 화합물를 갖는 제1항의 치환된 벤즈푸로크로멘과 관련 화합물을 제조하는 방법으로서,
(i) 일반식 A를 갖는 화합물을 루이스산, 바람직하게는 보론트리플루오라이드 에테레이트 존재 하에서 일반식 B의 치환된 2'-메톡시페닐아세트산과 25℃ 내지 150℃ 온도에서 1시간 내지 20시간 동안, 명세서에 첨부된 도면에 도시된 대로 반응시키되, 여기서 치환체 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오로라이드, 니트로 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 것인 단계;
(ii) 일반식 C 화합물을 명세서에 첨부된 도면에 도시된 대로 크로마토그래피 기법으로 분리하여 정제하는 단계;
(iii) 산성 배지(medium)의 존재 하에서 일반식 C 화합물을 메탄술포닐 클로라이드와 반응시키고, 25℃ 내지 100℃의 온도에서 1 내지 10시간 동안 가열하는 단계;
(iv) 일반식 D 화합물을 명세서에 첨부된 도면에 도시된 대로 분리하되, 여기서 치환체 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 일반식 D 화합물을 크로마토그래피 기법으로 정제하는 단계;
(v) 일반식 D 화합물을 THF, DMF, 에탄올, 아세토니트릴, 디클로로메탄과 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 프로톤성 또는 비프로톤성 용매에서 보론 트리브로마이드나 알루미늄 트리클로라이드 중 하나와 -40℃ 내지 150℃에서 1 내지 20시간 동안 반응시키되, 여기서 치환체 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 일반식 E 화합물을 크로마토그래피 기법으로 분리하여 정제하는 단계;
(vi) 일반식 E 화합물을 DMSO, 에탄올, 메탄올, THF, DMF 등과 같은 프로톤성 또는 비프로톤성 용매에서 리튬 알루미늄 하이드라이드, 소듐 보로하이드라이드와 같은 환원제와 0℃ 내지 150℃에서 1 내지 20시간 동안 명세서에 첨부된 도면에 도시된 대로 반응시키되, 여기서 치환체 R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸은 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 선택적으로 치환된 알케닐, 선택적으로 치환된 알콕시, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 알킬티오, 선택적으로 치환된 아미노, 선택적으로 치환된 아실아미노, 선택적으로 치환된 아릴아미노, 선택적으로 치환된 아실티오, 선택적으로 치환된 아실, 선택적으로 치환된 아로일, 선택적으로 치환된 아실옥시, 선택적으로 치환된 티오아미도, 할로겐, 에스테르, 하이드록시, 머캅토, 카본트리플루오라이드, 니트로 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 일반식 F 화합물을 크로마토그래피 기법으로 분리하여 정제하는 단계;
를 포함하는 제조 방법.
제10항에 있어서, 상기 화합물이 하이드로클로라이드, 포메이트, 아세테이트, 페닐 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 아크릴레이트, 아스코르베이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 브로모벤조에이트, 요오도벤조에이트, 니트로벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 알킬벤조에이트, 알킬옥시벤조에이트, 알콕시카보닐벤조에이트, 나프탈렌-2 벤조에이트, 부티레이트, 페닐부티레이트, 하이드록시부티레이트, 카프레이트, 카프릴레이트, 시나메이트, 만델레이트, 메실레이트, 시트레이트, 타르타레이트, 푸마레이트, 헵타노에이트, 히푸레이트, 락테이트, 말레이트, 말리에이트, 말로네이트, 니코티네이트, 이소니코티네이트, 옥살레이트, 소듐, 포타슘, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 프로피오레이트, 프로피오네이트, 페닐프로피오네이트, 살리실레이트, 세바케이트, 숙시네이트, 수베레이트, 술페이트, 바이술페이트, 피로술페이트, 술파이트, 바이술파이트, 술포네이트, 벤젠 술포네이트, 브로모벤젠 술포네이트, 클로로벤젠 술포네이트, 에탄 술포네이트, 메탄 술포네이트, 나프탈렌 술포네이트, 톨루엔 술포네이트 및 유사 물질을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있는 화합물 제조 방법.
골다공증, 골 손실, 골 형성, 절골 치료, 성장 기간 중에 투여될 경우 더 높은 최대 골 질량(peak bone mass) 달성, 새로운 골 형성 촉진에 의해 발병된 질병 및 증후군의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 조성물로서, 약제학적으로 허용가능한 담체나 희석제 또는 부형제와 선택적으로 함께 또는 이를 제외한 제1항의 화합물 또는 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(S-006-1709)과 같은 테로카판을 포함하는 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 일반식 I 또는 6a,11a-디하이드로-6H-벤조[4,5]푸로[3,2-c]크로멘-3-올(S-006-1709)과 같은 테로카판과 약제학적으로 허용가능한 담체나 희석제 또는 부형제의 비율은 바람직하게는 충전 약물 각 mg당 핵심 재료 1-20%와 비이온 계면활성제 10-40% 사이의 범위이고, 표면 개질을 위해 반대 전하를 가진 10-60%의 고분자전해질과 10-30%의 담즙산염으로 캡슐화되는 것인 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 알려진, 알려지지 않은 벤즈푸로크로멘(테로카판) 및 관련 화합물의 배합은 다양한 비율로 사용되거나, 몰농도, 퍼센트 수율, 바람직하게는 동량에 근거한 것인 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 약제학적 희석제는 락토오즈, 매니톨, 소르비톨, 미정질(microcrystalline) 셀룰로오스, 수크로오즈, 소듐 시트레이트, 디칼슘 포스페이트, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그것의 적절한 배합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 약제학적 부형제는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 약제학적 조성물.
i. 락토오즈, 매니톨, 소르비톨, 미정질(microcrystalline) 셀룰로오스, 수크로오즈, 소듐 시트레이트, 디칼슘 포스페이트, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그것의 적절한 배합과 같은 희석제;
ii. 검 트래거캔스(gun tragacanth), 검 아카시아, 메틸 셀룰로오스, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 전분 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 결합체(binder);
iii. 아가-아가(agar-agar), 칼슘 카보네이트, 소듐 카보네이트, 실리케이트, 알긴산, 옥수수 전분, 감자 타피오카 전분, 프리모겔(primogel), 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그것의 적절한 배합과 같은 붕해제(disintegrating agent);
iv. 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 또는 스테오로트, 탈크, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그것의 적절한 배합과 같은 윤활제;
v. 이산화규소 콜로이드, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그것의 적절한 배합과 같은 활택제;
vi. 수크로오즈, 사카린, 또는 유사한 특성의 다른 성분 하나 또는 그것의 적절한 배합과 같은 감미제;
vii. 페퍼민트, 메틸 살리실레이트, 오렌지 향미제, 바닐라 향미제, 또는 다른 약제학적으로 허용가능한 향미제 하나 또는 그들의 적절한 배합과 같은 향미제;
viii. 세틸 알코올, 글리세릴 모노스테아레이트, 또는 다른 약제학적으로 허용가능한 향미제 하나 또는 그의 적절한 배합과 같은 습윤제;
ix. 카올린, 벤토나이트 점토, 또는 다른 약제학적으로 허용가능한 향미제 하나 또는 그들의 적절한 배합과 같은 흡수제; 그리고
x. 왁스, 파라핀, 또는 다른 약제학적으로 허용가능한 향미제 하나 또는 그의 적당한 배합과 같은 용액 완연제(solution retarding agents).
제12항에 있어서, 상기 조성물의 유효량이 체중 1kg 당 0.1 내지 5000mg의 범위, 바람직하게는 체중 1kg 당 1mg 내지 500mg의 범위로 매일, 2주마다, 매주 또는 그 이상으로 분할된 투여량인 것인 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 상기 조성물은 경구, 경피, 근육내, 복강내, 정맥내, 국소적 경로에 의해 투여될 수 있는 것인 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 상기 조성물은 정제, 시럽, 분말, 캡슐, 서스펜션, 용액, 연고, 혼합물의 형태로 사용되는 것인 약제학적 조성물.