KR20110075743A - 미백 복합물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔 추출물로 구성된 미백 복합물을 함유하는 미백 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명의 미백 복합물에 의하여 α-MSH/SCF의 활성 억제 효과가 우수하고, TRP-1, TRP-2의 유전자 억제 효과 및 티로시나제 활성 억제 효과와 멜라노좀 이동 저해 효과 및 각질탈락에 효과가 있을 뿐만 아니라 피부 턴오버를 촉진하여 멜라닌 형성의 모든 단계에 관여하여 미백에 우수한 효과를 보이는 화장료 조성물에 관한 것이다.

미백, 복합물, 멜라닌, 화장료

Description

미백 복합물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition containing whitening Composition for whitening Skin}

본 발명은 천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔 추출물로 구성된 미백 복합물을 함유하여 미백 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명의 미백 복합물에 의하여 α-MSH/SCF의 활성 억제 효과가 우수하고, TRP-1, TRP-2의 유전자 억제 효과 및 티로시나제 활성 억제 효과와 멜라노좀 이동 저해 효과 및 각질탈락에 효과가 있을 뿐만 아니라 피부 턴오버를 촉진하여 멜라닌 형성의 모든 단계에 관여하여 미백에 우수한 효과를 보이는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 미백 복합물을 함유하여 미백 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 천궁추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔추출물을 함유하여 미백에 우수한 효과를 보이는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경과 직접 접하면서 인체를 보호하며 생화학적이고 물리적인 기능을 가지고 있는 아주 중요한 조직이다. 이 조직은 크게 3가지 즉, 표 피(epidermis), 진피(dermis), 그리고, 피하(hypodermis)로 나누어진다.

멜라닌(Melanin)은 피부의 표피층에 존재하는 색소로서, 자외선으로 인한 피부 손상을 막아주며, 피부 생체 내에 생겨난 유해산소 및 프리라디칼 등을 잡아주는 등 외부 유해인자로부터 피부를 보호해주는 유용한 역할을 수행한다.

한편, 멜라닌은 표피의 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)로부터 만들어져 각질세포(keratinocyte)라는 표피 세포로 이동한다. 생체 내에는 멜라닌을 분해하는 효소가 없고, 다만 각질세포가 표피에서 떨어져나갈 때 같이 피부에서 떨어져나가는 것으로 제거된다.

멜라노사이트 내의 멜라노좀(Melanosome)이라는 소포체에는 멜라닌 합성 과정(melanogensis)에 3가지의 효소가 존재하는데, 먼저 가장 중요한 티로시나아제(Tyrosinase)라는 효소에 의해 티로신(Tyrosine)이 도파(L-3,4-dihydroxyphenylalanine; DOPA)를 거쳐 도파퀴논(DOPAquinone)으로 전환되고, 도파퀴논으로부터 자동 산화반응으로 도파크롬(DOPAchrome)이 된다. 다시 도파크롬은 도파크롬 타우토머라제 (DOPAchrome tautomerase)로 알려져 있는 TRP-2 (tyrosinase related protein-2)라는 효소에 의해 DHICA(Dihydroxy indole carboxylic acid)를 생성한다. 다시 DHICA는 DHICA 옥시다제(DHICA oxidase)라고 알려진 TRP-1 (tyrosinase related protein-1)에 의해 산화되어 Indole-5,6-quinone-carboxylic acid 생성되어며 이후 흑갈색의 유멜라닌(eumelanin)이 생성된다. 이렇게 생성된 멜라닌은 멜라노좀을 통해 각질세포로 옮겨지고 여기에서 약 28일간의 각화 과정을 거치면서 피부 표면으로 나와 각질과 함께 소실된다.

피부 조직에서는 자외선으로부터 몸을 보호하기 위해, 멜라닌을 합성하지만 멜라닌이 과도하게 합성되어 분비되거나 피부의 탈락 작용이 둔화되면 기미, 주근께, 점, 검버섯 등의 색소 침착이 일어나 피부노화 및 손상 등이 발생하게 된다.

피부에서 멜라닌의 합성을 촉진하게 되는 원인으로는, 우선 자외선 등의 외부 자극에 노출되는 경우 각질세포에서 α-MSH(α-melanocyte-stimulating hormone)와 SCF(Stem Cell Factor)를 분비하게 되고, 각질세포에서 분비된 α-MSH와 SCF는 멜라닌세포의 표면에 있는 MSH 수용체를 자극하여 멜라닌 색소를 생성하도록 유도한다. 두 번째로는 정신적 스트레스 및 상처로 인해 호르몬과 사이토카인의 분비가 증가되어 멜라노사이트에 영향을 주게 되며, 세 번째로는 임신, 질병 등이 영향을 주게 된다.

그리고 각질층의 세포들은 하루에도 수백만 개의 죽은 각질세포가 피부에서 떨어져 나가고 새 각질세포로 교체되는 세포 턴 오버 (turn over) 작용이 일어난다. 일반적으로 세포의 주기가 조절되면서 세포가 성장하고 분화되어 탈락되는 과정이 정상적인 비율로 이루어지게 되지만, 외부의 여러 환경 요인, 스트레스, 피부 노화 등에 의해 각질층의 탈락이 원활하게 이루어지지 않게 된다. 결국 노후화된 각질이 정상적으로 탈락되지 않게 되면 피부가 활성을 잃고, 피부표면에 남아 각질층은 두꺼워지며 피부톤이 어두워지고, 칙칙해지며, 피부표면이 거칠어지는 문제점을 가지게 된다.

오늘날 동양권의 여성들은 백옥같이 하얗고 깨끗한 피부를 선호하며 이를 미의 중요한 기준으로 삼고 있기 때문에 피부색소 이상침착의 치료 및 미용욕구 충족 을 위한 미백제에 대한 개발이 활발히 이루어지고 있다.

현재 피부미용을 위한 미백제의 개발에 있어서, 생성된 멜라닌 색소를 환원시켜 탈색하는 방법과 멜라닌 색소를 형성하는 효소인 티로시나제의 활성을 억제하는 방법이 알려져 있다. 그러나, 멜라닌 색소를 환원시키기 위해 사용되는 토코페롤이나 비타민류 등을 사용한 미백제는 멜라닌 색소의 탈색효과가 미미한 것으로 알려져 있다.

따라서, 티로시나제의 활성을 저해시킴으로써 멜라닌 색소의 생성을 억제하는 저해제가 주목받고 있다. 종래의 화장품 분야에서는 미백성분으로서, 예를 들면, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민-C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 사용되어 왔다. 그러나, 처방계 중에서의 안정성이 나빠 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.

또한, 멜라닌 합성의 여러 단계 중에서 한 과정만 저해하여 미백 효과를 얻고자 하는 방법이 일반적으로 연구되고 있어 멜라닌 합성의 전체의 과정을 저해하는 조성물은 알려져 있지 않아 아직 뛰어난 미백 효과를 나타내지도 못하고 있는 실정이다.

이에, 본 발명자들은 상기한 문제점을 해결하기 위하여 멜라닌 색소의 형성 과정을 5단계로 나누어 피부 미백을 증진하기 위하여 연구하였다.

그 결과, 천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔 추출물로 형성된 미백 복합물이 첫째 자외선에 의해 각질세포에서 분비되는 α-MSH/SCF의 활성을 억제하고, 둘째 티로시나아제, TRP-1 및 TRP-2의 발현을 억제하며, 셋째 티로시나아제의 활성을 억제하고, 넷째 멜라닌(멜라노좀)의 이동을 저해하며, 다섯째 각질박리를 촉진하고 각질층에 존재하는 단백질 가수분해효소의 활성을 증가시켜 피부의 턴오버를 촉진하여 매우 향상된 미백 효과를 나타낼 수 있음을 확임함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 멜라닌 생성의 모든 단계를 차단하여 미백 효과가 극대화된 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 상술한 과제를 해결하기 위하여 다음과 같은 수단을 포함할 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔 추출물로 형성된다.

한편, 화장료 총 중량에 대하여 상기 천궁 추출물은 0.001 ~ 5.0중량%, 소루쟁이 추출물은 0.001 ~ 5.0중량%, 하수오 추출물은 0.001 ~ 10.0중량%, 니아신아마 이드는 0.001 ~ 10.0중량%, 파파인은 0.01 ~ 1.0중량%, 노팔 추출물은 0.001 ~ 5.0중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기 조성물은 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

이상 하기의 제조예 및 실시예를 통하여 설명한 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔 추출물의 미백 복합물이 함유된 화장료에서 멜라닌 생성의 전 과정을 차단함으로써 미백효과가 매우 탁월한 피부 미백 화장료 조성물을 완성할 수 있었다.

이하, 본 발명을 구체적으로 살펴본다

본 발명은 미백 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 상기 미백 복합물은 천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인, 노파추출물로 형성된다.

본 발명의 화장료 조성물은 α-MSH/SCF의 활성 억제, 티로시나아제, TRP-1 및 TRP-2의 발현 억제, 티로시나아제의 활성 억제, 멜라닌 이동 억제, 각질 탈락 및 피부 턴오버 촉진을 통한 피부 미백 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 이용되는 천궁추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 5.0중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 0.1 ~ 2.0 중량%이며 상 기 천궁 추출물의 함량이 0.001중량% 미만일 경우에는 그 효과를 기대하기 어렵고, 5.0중량% 초과할 경우에는 함량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물의 유효 성분으로서, 소루쟁이 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 5.0중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 0.1 ~ 2.0 중량%이며 상기 소루쟁이 추출물의 함량이 0.001중량% 미만일 경우에는 그 효과를 기대하기 어렵고, 5.0중량% 초과할 경우에는 함량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물의 유효 성분으로서, 하수오 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 10.0중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 0.5 ~ 5.0 중량%이며 상기 하수오 추출물의 함량이 0.001중량% 미만일 경우에는 그 효과를 기대하기 어렵고, 10.0중량% 초과할 경우에는 함량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물의 유효 성분으로서, 니아신아마이드는 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 5.0중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 0.5 ~ 5.0 중량%이며 상기 니아신아마이드의 함량이 0.001중량% 미만일 경우에는 그 효과를 기대하기 어렵고, 10.0중량% 초과할 경우에는 함량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물의 유효 성분으로서, 파파인은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 ~ 1.0중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 한다. 상기 파파인은의 함 량이 0.01중량% 미만일 경우에는 그 효과를 기대하기 어렵고, 1.0중량% 초과할 경우에는 피부자극을 유발 할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 유효 성분으로서, 노팔 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 5.0중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 0.1 ~ 2.0 중량%이며 상기 노팔 추출물의 함량 0.001중량% 미만일 경우에는 그 효과를 기대하기 어렵고, 5.0중량% 초과할 경우에는 함량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않는다.

본 발명에서의 유효성분인 천궁 (Cnidium officinale)은 산형과에 속하는 다년초로 중국이 원산지이며, 높이는 30 ~ 60cm로 줄기가 갈라지고 곧게 선다. 뿌리는 비대하며 염주상이고, 잎은 깃꼴겹입이다. 꽃은 백색으로 8 ~ 9월에 피며 꽃잎은 5개이며 5개의 수술과 1개의 암술이 있다. 한방에서는 뿌리줄기를 약용으로 이용하며, 혈액순환을 돕고 두통, 지통, 진정, 항궤양, 혈압 조절, 항균, 보혈에 효과가 있는 것으로 알려져 있고, 특히 여성의 생리통, 산후복통에 많이 쓰이고 있다.

본 발명의 유효성분인 소루쟁이 (Rumex crispus)는 양제근, 솔쟁이, 송구지 등으로 불리며, 한여름이면 줄기가 다 말라 버렸다가 선선하면 다시 자라나는 여뀌과의 다년생 풀이다. 어린 잎은 나물로 먹기도 하며, 백선, 무좀, 습진 등에 효과가 있다고 한다. 예로부터 민간에서는 개선, 옴, 피부암 등의 피부병에 사용하였으며, 방광염, 대장염 등에도 달여서 사용했다고 한다. 가을에 뿌리를 깨서 둥글게 말아 햇볕에 말린 것을 양제근이라 고 한다.

본 발명의 유효성분인 하수오(Polygonum multiflorum)는 중국에서 들어온 것으로 알려져 있으며 오랫동안 재배되고 있는 덩굴성 약용식물이다. 키는 3~4m에 이르며 뿌리는 옆으로 길게 뻗어 종종 덩이뿌리를 형성한다. 붉은빛을 띤 갈색 덩이뿌리를 한방에서 하수오라고 하며 하수오는 신장기능을 튼튼하게 하여 정력을 높이고 머리카락을 검게 하며 병 없이 오래 살게 하는 약초로 이름이 높다. 또 하수오는 노인들의 기력을 돋구는 데 매우 좋은 약이다. 신장기능을 좋게 하여 머리카락이 희어지지 않게 하고 머리카락이 빠지지 않게 하며 중국 사람들은 하수오를 인삼, 구기자와 함께 3대 명약으로 여긴다.

본 발명의 유효성분인 니아신아마이드(Niacinamide)는 비타민 B3로 알려져 있으며, 피리딘-3-카르복실, 또는 니코틴아마이드라고도 불린다. 알려진 효과로는 세라마이드의 생합성 촉진, 보습, 항염증 등이 있다.

본 발명의 유효성분인 파파인은 남아메리카 지역에 자생하는 파파야 나무의 열매 과즙에 있는 단백질 가수분해효소로서 소화제, 연육용등에 사용되며, 화장품에서는 세정제로 사용되고 있다.

본 발명의 유효성분인 노팔(Opuntia ficus-indica L. var. saboten Makino)은 제주도를 중심으로 경작되는 선인장으로 줄기 모양이 손바닥처럼 넓적한 형상을 하고 있어 손바닥 선인장이라고 불리어지고 있으며, 제주도에서는 백년초라고도 불린다. 다년초로 높이가 2m에 달하며 주로 부채모양의 절간을 형성하며 신장하고 5-6월에 2~3cm 정도의 황색 꽃이 일시에 개화한다. 꽃받침 잎, 꽃잎, 수술은 다수이며 1개의 암술이 있고 꽃은 신경이 살아있어 건들면 오물아 든다. 꽃이 지면서 11 월경에 열매를 맺고 열매와 줄기 모두 식용으로 사용하고 있다.

본 발명의 추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다.

시중에서 구입한 천궁, 소루쟁이, 하수오, 노팔을 구입하여 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 천궁, 소루쟁이, 하수오, 노팔을 세절하여 추출용기에 넣고, 적당량의 추출 용매에 적절한 온도에서 일정 시간 추출한다. 추출물은 여과되고, 진공회전증발기 등을 이용하여 농축될 수도 있다.

상기 추출 용매로는 물(정제수), 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물이 효과적이고, 추출 용매의 양은 생약 건조 중량의 2 ~ 15 배로 한다. 상기 추출 방법은 중탕 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 환류냉각 추출방법으로 약 30 내지 80℃, 바람직하게는 약 50 내지 60℃에서 감압 농축하고, 추출 시간은 5 ~ 20 시간, 바람직하게는 10 시간 동안 행하는 것이 효과적이며, 동결 건조하여 얻는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 유효성분은 α-MSH/SCF의 활성 억제, 티로시나아제, TRP-1 및 TRP-2의 발현 억제, 티로시나아제의 활성 억제, 멜라닌 이동 억제, 각질 탈락 및 피부 턴오버 촉진효과가 있어 미백용 조성물로 효과적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 피부 미백 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 본 발명의 피부 미백용 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 유효성분인 천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인, 노파추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하여, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 함유제 등을 포함한다.

이하, 실시 예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[제조예 1]천궁 추출물의 제조

시중에서 구입한 천궁 50g을 분쇄기를 이용하여 가루로 간 뒤, 여기에 천궁 무게의 5배의 증류수를 가한 후 환류냉각 추출방법을 이용하여 추출하고, 400 메쉬 여과포로 여과하고 여액을 모아 감압 농축한 다음 동결 건조하여 추출물 4.8g을 얻었다.

[제조예 2]소루쟁이 추출물의 제조

시중에서 구입한 소루쟁이 50g을 분쇄기를 이용하여 가루로 간 뒤, 여기에 소루쟁이 무게의 5배의 증류수를 가한 후 환류냉각 추출방법을 이용하여 추출하고, 400 메쉬 여과포로 여과하고 여액을 모아 감압 농축한 다음 동결 건조하여 추출물 4.3g을 얻었다.

[제조예 3]하수오 추출물의 제조

시중에서 구입한 하수오 50g을 분쇄기를 이용하여 가루로 간 뒤, 여기에 하수오 무게의 5배의 증류수를 가한 후 환류냉각 추출방법을 이용하여 추출하고, 400 메쉬 여과포로 여과하고 여액을 모아 감압 농축한 다음 동결 건조하여 추출물 5.1g을 얻었다.

[제조예 4]노팔 추출물의 제조

시중에서 구입한 노팔 50g을 분쇄기를 이용하여 가루로 간 뒤, 여기에 노팔 무게의 5배의 증류수를 가한 후 환류냉각 추출방법을 이용하여 추출하고, 400 메쉬 여과포로 여과하고 여액을 모아 감압 농축한 다음 동결 건조하여 추출물 4.2g을 얻었다.

[실험예 1] 멜라닌 합성 억제 효과

상기 제조예 1 ~ 4에서 제조한 추출물과 니아신아마이드, 파파인 대하여 α-MSH/SCF의 활성 억제효과를 다음과 같이 실시하였다.

B16F1 멜라노마 세포는 10% 우태아혈청을 함유한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium) 배지에서 배양하고, 24-웰 컬처 플레이트에 웰당 2.5 x 10⁴ 세포를 분주하고, 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 배양하였다. 여기에 제조예 1 ~4의 추출물, 니아신아마이드, 파파인을 0.05%로 처리하였고, α-MSH(Sigma-Aldrich, USA)을 100nM, SCF(Vexxon,Korea)를 1ppm을 각각 첨가하여 α-MSH/SCF 처리군과 비처리군으로 나눈 다음, 2일간 배양하였다. 배양 2일 후 세포를 회수하고, 회수한 세포를 10% DMSO를 포함하는 1N NaOH를 가해 90℃에서 1 시간 반응시켜 멜라닌에 충분히 녹아나오도록 한 후, ELISA 리더(reader)를 이용하여 파장 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험 결과는 표 1에 나타내었다.

*멜라닌 생성 억제 효과

시료	멜라닌 생성도 (%)
	비처리군	α-MSH 처리군	SCF 처리군
대조군	100.0	100.0	100.0
제조예 1	88.3	33.4	42.5
제조예 2	85.1	41.7	31.6
제조예 3	46.1	50.6	51.4
제조예 4	94.5	95.3	97.3
니아신아마이드	96.8	96.8	95.6
파파인	99.0	99.0	98.1

상기 표 1의 결과로부터 알 수 있듯이 제조예 1, 2, 3에서 멜라닌 생성 억제 효과가 나타남을 알 수 있다. 제조예 1의 천궁 추출물의 경우, α-MSH 처리 시에 가장 우수한 멜라닌 생성 저해효과를, 제조예 2의 소루쟁이 추출물의 경우 SCF 처리 시에 가장 우수한 멜라닌 생성 저해 효과를, 비처리군에서는 하수오 추출물이 가장 우수한 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내었다. 또한 제조예 3인 하수오추출물의 경우, α-MSH/SCF 처리군에서도 모두 어느 정도 멜라닌 생성 저해 효과를 나타내고 있음을 확인할 수 있었다.

[실험예 2]유전자 발현 억제 효과

상기 제조예 1 ~ 4에서 제조한 추출물과 니아신아마이드, 파파인에 대하여 티로시나아제, TRP-1 및 TRP-2 유전자 발현 억제효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실시하였다.

B16F1 멜라노마 세포는 10% 우태아혈청을 함유한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium) 배지에서 배양하고, 1.6 x 10⁶/dish 세포를 분주하고, 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 배양하였다. 여기에 제조예 1 ~4의 추출물, 니아신아마이드, 파파인을 0.05%로 처리하였고, α-MSH(Sigma-Aldrich, USA)을 100nM을 처리하였다. 2일간 배양한 후 세포의 배양액을 제거한 다음, 트리졸 (Trizol, invitrogen, USA) 1ml을 첨가하여 인비트로젠 사의 RNA 분리법에 따라 분리하였다. cDNA를 만들기 위해 역전사 중합 반응 (Reverse transcription-polymerase chain reaction)을 실시하였으며, 역전사 중합 반응은 역전사 중합 반응 키트(All-in-one RT-PCR kit, SuperBio, Korea)를 사용하였고, 프라이머와 반응 조건은 Ho Min Kim, et al., Korean J. Oriental Physiology & Pathology 22(6):1444∼1448, 2008에서 보고하고 있는 조건을 따랐으며, 2% 아가로즈 젤에서 전기영동하여 정량하였다. 보정은 액틴으로 하였으며 그 결과는 하기표 2에 나타내었다.

시료	유전자 발현 정도
	티로시나아제	TRP-1	TRP-2
α-MSH	100.0	100.0	100.0
제조예 1+α-MSH	94.3	96.7	97.7
제조예 2 +α-MSH	92.1	94.8	92.4
제조예 3 +α-MSH	43.5	51.1	50.0
제조예 4 +α-MSH	99.6	97.4	97.5
니아신아마이드 +α-MSH	93.4	94.3	94.8
파파인 +α-MSH	99.9	99.9	99.4

상기 표 2의 결과로부터 알 수 있듯이 제조예 3인 하수오 추출물에서 티로시나아제, TRP-1, TRP-2의 유전자 발현 억제 효과가 있음을 알 수 있었다.

[실험예 3]티로시나아제 활성 저해 측정

상기 제조예 1 ~ 4에서 제조한 추출물과 니아신아마이드, 파파인에 대하여 티로시나아제 효소 활성에 영향을 끼치는지 알아보기 위하여 다음과 같이 실시하였다.

96웰 플래이트에 0.1M 포스페이트 완충용액(phosphate buffer : pH6.8)를 210㎕ 첨가하고 최종 농도 200㎍/㎖의 제조예 1 ~ 4에서 제조한 추출물과 니아신아마이드, 파파인 또는 증류수 30㎕를 첨가한 후 20㎕의 버섯유래 티로시나아제를 첨가한다. 기질로서 5mM의 L-DOPA40㎕를 첨가한 후, 37℃에서 10분간 반응시킨 다음, ELISA 리더(reader)를 이용하여 파장 475nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 증류수로 하였으며, 그 결과는 하기표 3에 나타내었다.

시료	티로시나아제 활성 (%)
대조군	100.0
제조예 1	94.5
제조예 2	96.4
제조예 3	50.1
제조예 4	95.1
니아신아마이드	94.0
파파인	99.8

상기 표3의 결과로부터 알 수 있듯이 제조예 3인 하수오 추출물에서 티로시나아제효소의 활성이 대조군에 비해 49.1% 저해되는 것을 알 수 있었다.

[실험예 4]멜라노좀 이동 저해 효과 측정

상기 제조예 1 ~ 4에서 제조한 추출물과 니아신아마이드, 파파인에 대하여 멜라노좀 이동 저해 효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실시하였다.

각질세포와 멜라노사이트는 각각 신생아의 포피로부터 분리하였다. 구체적으로, 0.25% 트립신을 처리하여 상기 포피 조직으로부터 표피를 분리한 다음, 7.5 ㎎/㎖ 소 뇌하수체 추출물, 0.1 ㎎/㎖ 사람표피성장인자(hEGF), 0.5 ㎎/㎖ 히드로코르티손(hydrocortisone), 50 ㎎/㎖ 겐타마이신(gentamicine), 50 ㎎/㎖ 암포테리신(amphotericin) 및 5 ㎎/㎖ 인슐린을 첨가한 KGM (Clonetics) 배지로 교반(vortex)하여 세포를 분리하고, T75 플라스크에서 배양하여 각질세포와 멜라노사이트를 각각 얻었다. 이때, 배양된 멜라노사이트는 멜라노좀을 분석하기 위하여 CFDA (carboxy fluorescein diacetate)로 염색하였다. 실험을 위하여 케라티노사이트와 멜라노사이트를 공동배양배지(KGM + (KGM-TPA-히드로코르티손))에서 공동 배양하였다. 그런 다음, 6일 동안 12시간 간격으로 공동 배양한 세포 에 시료를 0.05% 처리하였다. 그리고 아무것도 첨가하지 않은 것을 대조군으로 하였다. 시표를 처리한 세포를 항사이토케라틴(Zymed Laboratories, 미합중국)에 대한 쥐의 단일클론 항체와 배양하여 FACS (fluorescence activated cell sorting)에서 케라티노사이트를 분리하였고, 그 후 피코에리트린과 결합된 항마우스 IgG(Burlingame, 미합중국)와 상기 배양된 세포를 37℃에서 30분간 반응시켰다. 그런 다음, 스크래퍼를 이용하여 배양된 세포를 플라스크로부터 떼어낸 후 EPICSXL 플로우 사이토미터 (Coulter Cytometry, Coulter Corp., 미합중국)를 이용하여 FACS 분석하였다. 이때, FACS 분석에서는 575 ㎚에서 피코에리트린에 반응하는 케라티노사이트를 분석하였고, 525 ㎚에서 CFDA를 측정하여 케라티노사이트의 멜라노좀을 확인하였다. 공동배양에서 얻어진 결과는 Coulter XL 소프트웨어 (Coulter Corp.)를 이용하여 분석하였고 그 결과를 하기표 4에 나타내었다.

시료	멜라노좀 이동 저해도 (%)
대조군	0.0
제조예 1	0.9
제조예 2	1.1
제조예 3	1.3
제조예 4	0.7
니아신아마이드	62.1
파파인	0.0

상기 표4의 결과로부터 알 수 있듯이 니아신아마이드에서 멜라노좀 이동 저해 효과가 우수함을 알 수 있었다.

[실험예 5]트립신 활성 촉진 효과

상기 제조예 1 ~ 4에서 제조한 추출물과 니아신아마이드에 대하여 단백질 가수 분해 효소의 활성 증진 효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실시하였다.

BAPNA (N-벤조일-D,L-아르기닌- p-니트리드 하이드로클로라이드)는 트립신의 기질로 작용하여 트립신에 의해 가수분해가 되면 410 nm에서 최대 흡광도를 나타내는 p-니트로알라닌이 생성되게 된다. 이 방법을 이용하여 상기 제조예 1~4의 추출물 및 니아신아마이드에 대하여 트립신 활성 촉진효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

제조예 1 ~ 4에서 제조한 추출물과 니아신아마이드의 농도가 0.5%인 용액을 각각100㎕씩을 취하여 60 ㎍/㎖트립신 용액 100㎕와 50 mM CaCl2를 포함하는 50 mM Tris/HCl(pH 8.2) 200㎕에 넣고 37℃, 10분간 배양한 후 400㎍/㎖BAPNA 용액 600 ㎕를 가하여 다시 37℃, 2분간 배양하고 30% 아세트산을 가해 반응을 종결시켜 410nm에서 스펙트로포토미터기를 이용하여 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 증류수를 사용하였으며 그 결과는 하기표 5에 나타내었다.

*트립신 활성 촉진 효과

시료	트립신 활성 촉진 효과
대조군	0.0
제조예 1	1.1
제조예 2	0.8
제조예 3	0.9
제조예 4	41.8
니아신아마이드	0.9

상기 표5의 결과로부터 알 수 있듯이 제조예 4인 노팔 추출물에서 트립신 활성 촉진 효과가 있음을 알 수 있었다.

[제조예 5]

천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔 추출물의 미백 복합물을 함유한 화장료 조성물을 제조하였다.

성분	실시예1 (중량%)	실시예2 (중량%)	실시예3 (중량%)	실시예4 (중량%)	실시예5 (중량%)	실시예6 (중량%)	실시예7 (중량%)	비교예 (중량%)
천궁 추출물	1.0	6.0
소루쟁이 추출물	1.0		6.0
하수오 추출물	1.0			6.0
니아신아마이드	1.0				6.0
파파인	1.0					6.0
노팔 추출물	1.0						6.0
글리세린	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
유동파라핀	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0
폴리솔베이트60	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
솔비탄세스퀴롤 올레이트	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
스쿠알란	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
밀납	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0
트리에탄올아민	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
프로필렌 글리콜	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
카르복실비닐폴리머	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
향	미량	미량	미량	미량	미량	미량	미량	미량
방부제	미량	미량	미량	미량	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량	잔량
계	100	100	100	100	100	100	100	100

[실험예 6]미백효과

본 발명의 미백 효과를 측정하기 위해서, 건강한 30-40대 여성을 70명을 대상으로 실시예 1~7 및 비교예를 10명씩 8조로 나누어 매일 2회씩 12주간 도포하게 하였다. 도포하여 피부의 흑백정도를 색차계(미놀타 CR2002)를 사용하여 효과를 판정하였다. 색을 표시하는 데에는 L*,a*,b*표색계를 쓰며 본실험에서는 주로 L*값(명도)을 지표로 하였다. L*값은 검정색(L*=0)으로부터 흰색(L*=100) 까지를 나타내며 12주 후의 ΔL*를 구하여 다음의 표 7에 나타내었다.

시험 물질	ΔL*
실시예 1	44.5
실시예 2	8.3
실시예 3	7.9
실시예 4	9.4
실시예 5	8.0
실시예 6	7.9
실시예 7	7.4
비교예	1.12

상기 표 7에서 알 수 있듯이, 본 발명의 조성물을 함유한 실시예1 ~7에서 미백효과가 있음을 보여 주었으며, 특히 본 발명의 유효성분을 모두 함유한 실시예 1에서 가장 탁월한 미백효과를 볼 수 있었다.

이하, 본 발명의 화장료 제형예로서 본 발명의 유효성분인 천궁추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔추출물의 미백 복합물을 함유하는 유연 화장수, 에센스, 샴푸 및 보디 클린저등을 예시하고 있으나, 본 발명의 화장료의 제형이 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

[제형예 1]유연화장수

상기 유효성분을 함유하는 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료명	함량 (중량%)
천궁 추출물	2.0
소루쟁이 추출물	2.0
하수오 추출물	2.0
니아신아마이드	2.0
파파인	0.1
노팔 추출물	2.0
1,3-부틸렌글리콜	5.2
올레일알코올	1.5
에탄올	3.2
폴리솔베이트 20	3.2
벤조페논-9	2.0
카르복실비닐폴리머	1.0
글리세린	3.5
향	미량
방부제	미량
정제수	잔량
계	100

[제형예 2]에센스

상기 유효성분을 함유하는 에센스를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료명	함량 (중량%)
천궁 추출물	2.0
소루쟁이 추출물	2.0
하수오 추출물	2.0
니아신아마이드	2.0
파파인	0.1
노팔 추출물	2.0
세토스테아릴 알코올	1.0
글리세릴모노스테아레이트	0.8
소르비탄모노스테아레이트	0.3
포로필파라벤	0.1
폴리솔베이트 60	1.0
미네랄오일	5.0
사이크로메치콘	3.0
디메치콘	0.5
알란토인	0.1
글리세린	5.0
알코올	2
프로필렌글리콜	3.0
향	미량
방부제	미량
정제수	잔량
계	100

[제형예 3]샴푸

상기 유효성분을 함유하는 샴푸를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료명	함량 (중량%)
천궁 추출물	2.0
소루쟁이 추출물	2.0
하수오 추출물	2.0
니아신아마이드	2.0
파파인	0.1
노팔 추출물	2.0
알킬황산염 (30%)	25.0
알킬에텔황산염 (30%)	20.0
알킬아미도베타인 (30%)	5.0
프로필렌글리콜	3.0
라우라미드이에이	4.0
EDTA-2Na	0.1
폴리쿼터늄-10	0.05
NaCl	0.1
구연산	2.4
향	미량
방부제	미량
정제수	잔량
계	100

[제형예 4]바디 클렌저

상기 유효성분을 함유하는 바디 클렌저를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료명	함량 (중량%)
천궁 추출물	2.0
소루쟁이 추출물	2.0
하수오 추출물	2.0
니아신아마이드	2.0
파파인	0.1
노팔 추출물	2.0
알킬에텔당산염 (30%)	30.0
알킬에텔설포석신산염 (30%)	20.0
알킬아미도베타인 (30%)	5.0
프로필렌글리콜	5.0
베타인	5.0
라우라미드디이에이	4.0
셀룰로스검	0.05
가수분해단백질	0.1
구연산	미량
NaCl	미량
향	미량
방부제	미량
정제수	잔량
계	100

Claims (3)

1. 천궁 추출물, 소루쟁이 추출물, 하수오 추출물, 니아신아마이드, 파파인 및 노팔 추출물로 형성된 미백 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, 화장료 총 중량에 대하여 상기 천궁 추출물은 0.001 ~ 5.0중량%, 소루쟁이 추출물은 0.001 ~ 5.0중량%, 하수오 추출물은 0.001 ~ 10.0중량%, 니아신아마이드는 0.001 ~ 10.0중량%, 파파인은 0.01 ~ 1.0중량%, 노팔 추출물은 0.001 ~ 5.0중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 미백 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 미백 복합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.