KR20110048536A - 자가면역 질병에서 ｉｌ－２２, ｉｌ－１７ 및 ｉｌ－１ 패밀리 시토킨의 용도 - Google Patents

자가면역 질병에서 ｉｌ－２２, ｉｌ－１７ 및 ｉｌ－１ 패밀리 시토킨의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20110048536A
KR20110048536A KR1020117004589A KR20117004589A KR20110048536A KR 20110048536 A KR20110048536 A KR 20110048536A KR 1020117004589 A KR1020117004589 A KR 1020117004589A KR 20117004589 A KR20117004589 A KR 20117004589A KR 20110048536 A KR20110048536 A KR 20110048536A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
leu
protein
expression
disease
Prior art date
Application number
KR1020117004589A
Other languages
English (en)
Inventor
이준 캐리어
학-링 마
키리아키 두누시-조아노폴로스
퀸투스 지. 메들리
Original Assignee
와이어쓰 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 와이어쓰 엘엘씨 filed Critical 와이어쓰 엘엘씨
Publication of KR20110048536A publication Critical patent/KR20110048536A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39566—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against immunoglobulins, e.g. anti-idiotypic antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/245—IL-1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
    • Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]

Abstract

IL-1 이소형을 사용하여 염증성 질환을 검출하는 방법을 제공한다. 항-IL-1 항체를 사용하여 염증성 질환을 치료하는 방법을 또한 제공한다. 항-IL-1 항체 및 항-IL-22 항체, 항-IL-17 항체, 또는 항-TNFα 항체 중 적어도 하나를 사용하여 염증성 질환을 치료하는 방법을 또한 제공한다.
<대표도>
도 1a 및 도 1b

Description

자가면역 질병에서 ＩＬ－２２, ＩＬ－１７ 및 ＩＬ－１ 패밀리 시토킨의 용도{USES OF IL-22, IL-17, AND IL-1 FAMILY CYTOKINES IN AUTOIMMUNE DISEASES}
본원은 각각 모든 목적을 위해 본원에 참고로 포함되는, 2008년 8월 28일 출원된 미국 특허 가출원 61/092,743, 및 2008년 10월 27일 출원된 미국 특허 가출원 61/193,087에 관련된다.
IL-1 이소형을 사용하여 염증성 질환을 검출하는 방법을 제공한다. 항-IL-1 항체를 사용하여 염증성 질환을 치료하는 방법을 또한 제공한다. 항-IL-1 항체 및 적어도 하나의 항-IL-22 항체, 항-IL-17 항체, 또는 항-TNFα 항체를 사용하여 염증성 질환을 치료하는 방법을 또한 제공한다.
전통적인 인터루킨-1 (IL-1) 패밀리 시토킨인 IL-1α, IL-1β 및 IL-18은 염증에서 핵심적인 역할을 한다. IL-1 상동체에 대한 DNA 데이타베이스 탐색으로부터 IL-1 패밀리의 시토킨의 몇몇 신규한 멤버가 확인되었다. IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9는 각질형성세포에 의해 생산될 수 있고 염증이 생긴 피부에서 상향조절된다. IL-22 (Th17 세포-유래된 염증유발성 시토킨)은 각질형성세포에 대해 작용하고, 항미생물 펩티드 및 염증유발성 시토킨 유전자 발현을 모두 유도한다.
인터루킨 22 (IL-22)는 타입 II 시토킨의 인터루킨 10 (IL-10)-유사 하위군의 멤버이다 (Renauld, J. -C. Nature Reviews Immunology 3, 667-76 (2003)). 상기 하위군의 멤버 (즉, IL-10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-24 및 IL-26)는 인터페론과도 공유되는 보존된 6개의 α-나선 구조 및 기능성 단위를 갖는 것으로 제안된다 ([Renauld et al. Nature Reviews Immunology 3, 667-76 (2003)] 및 [Langer et al. Cytokine & Growth Factor Reviews 15, 33-48 (2004)]). IL-22는 활성화된 T 헬퍼 (Th) 17 CD4+ 림프구 및 단핵구에 의해 생산되고, 그의 발현은 IL-23에 고도로 의존한다 ([Liang, S. C. et al. Journal of Experimental Medicine 203, 2271-9 (2006)] 및 [Zheng, Y. et al. Nature 445, 648-51 (2007)]). IL-22는 비-면역 세포에 대해서만 작용하면서 국소 조직 염증을 조절하는 것으로 알려져 있고, 점막 면역성 및 자가면역 질병에서 관찰되는 조절곤란한 염증에서 중요한 역할을 한다 ([Wolk, K. et al. Immunity 21, 241-54 (2004)]; [Wolk et al., Cytokine & Growth Factor Reviews 17, 367-80 (2006)]; [Wolk et al. Journal of Immunology 168, 5397-402 (2002)]; [Pan et al. Cellular & Molecular Immunology 1, 43-9 (2004)]; [Zenewicz et al. Immunity 27, 647-59 (2007)]; [Aujla, S.J. et al. Nature Medicine 14, 275-81 (2008)]; 및 [Zheng, Y. et al. Nature Medicine 14, 282-89 (2008)]). 최근의 임상 및 전-임상 연구에서는 건선 (피부의 인간 자가면역 질병)의 진행에서 Th17 세포 및 IL-22 활성을 강하게 시사한다 ([Zheng et al. Nature 445, 648-51 (2007)]; [Nickoloff et al. Nature Medicine 13, 242-244 (2007)]; [Zaba et al. Journal of Experimental Medicine 204, 3183-94 (2007)]; [Ma et al. Journal of Clinical Investigation in press (2008)]; [Lowes et al. Nature 445, 866-73 (2007)]; 및 [Wolk et al. European Journal of Immunology 36, 1309-23 (2006)]). IL-22의 투여는 피부 각질형성세포의 과다증식 및 그 결과 표피의 비후화 (둘 모두 건선 병변의 특징임)를 유도하는 것으로 나타났다 (Boniface et al. Journal of Immunology 174, 3695-702 (2005)). 또한, IL-22의 투여는 면역 세포의 동원 및 건선성 조직 염증의 유지에 관여하는 것으로 나타나는 각질형성세포로부터 유전자 발현을 유도하는 것으로 나타났다 ([Wolk et al. European Journal of Immunology 36, 1309-23 (2006)]; [Boniface et al. Journal of Immunology 174, 3695-702 (2005)]; 및 [Sa et al. Journal of Immunology 178, 2229-40 (2007) [erratum appears in J Immunol. 2007 Jun 1;178(11):7487]).
IL-22의 발현은 IL-9 또는 ConA에 의해 T 세포에서 상향조절된다 (Dumoutier L. et al. (2000) Proc Nail Acad Sci USA 97(18):10144-9). 추가의 연구에서는 IL-22 mRNA의 발현이 LPS 투여에 반응하여 생체 내에서 유도되고, IL-22는 급성기 반응을 표시하는 파라미터를 조절하는 것을 보여주었다 ([Dumoutier L. et al. (2000) 상기 문헌]; [Pittman D. et al. (2001) Genes and Immunity 2: 172]). 함께 살펴보면, 이들 관찰은 IL-22가 염증에서 중요한 역할을 하는 것을 나타낸다 (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13(3):223-40).
IL-22의 세포 표면 수용체는 IL-22 수용체 (IL-22R) 및 IL-22 수용체 2 (IL-10R2) 서브유닛 (이들은 각각 타입 II 시토킨 수용체 패밀리 (CRF2)의 멤버이다)으로 구성되는 수용체 복합체인 것으로 생각된다 ([Xie M.H. et al. (2000) J Biol Chem 275(40):31335-9]; [Kotenko S.V. et al. (2001) J Biol Chem 276(4):2725-32]). CRF2 멤버는 IFNα/β, IFNγ, 응고 인자 VIIa, IL-10 및 IL-10 관련 단백질 IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, IL-26, 및 최근에 확인된 IFN-유사 시토킨, IL-28 및 IL-29에 대한 수용체이다 ([Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13(3):223-40]; [Kotenko, S.V. et al. (2000) Oncogene 19(21):2557-65]; [Sheppard, P. et al. (2003) Nature Immunology 4(1):63-8]; [Kotenko, S.V. et al. (2003) Nature Immunology 4(1):69-77]). IL-22 수용체 복합체의 각각의 서브유닛 또는 사슬은 다양한 조직 내에서 상피세포 및 일부 섬유모세포 상에 존재한다 ([Wolk et al. Journal of Immunology 168, 5397-402 (2002)]; [Xie et al. Journal of Biological Chemistry 275, 31335-9 (2000)]; [Kotenko et al. Journal of Biological Chemistry 276, 2725-32 (2001)]; [Ikeuchi et al. Arthritis & Rheumatism 52, 1037-46 (2005)]; [Andoh et al. Gastroenterology 129, 969-84 (2005)]). IL-22 수용체 복합체의 두 사슬은 또한 많은 장기에서 구성적으로 발현되고, 이들 장기로부터 유래된 상피 세포주는 시험관 내에서 IL-22에 반응성인 것으로 나타났다 (Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13(3):223-40).
IL-22R 및 IL-10R2 서브유닛은 개별적으로 다른 타입 II 시토킨에 대한 상이한 수용체 복합체의 형성에 기여하지만, 서브유닛들은 함께 IL-22에 대해 특이적인 단일 수용체 복합체를 형성한다. IL-22는 IL-22R의 세포외 도메인 (ECD)에 먼저 결합하는 것으로 생각된다 ([Logsdon et al. Journal of Interferon & Cytokine Research 22, 1099-112 (2002)] 및 [Li et al. International Immunopharmacology 4, 693-708 (2004)]). IL-22에서 제안된 IL-22R-유도된 입체형태적 변화로 인해, IL-10R2는 IL-22/IL-22R 표면에 결합할 수 있다 ([Li et al. International Immunopharmacology 4, 693-708 (2004)] 및 [Logsdon et al. Journal of Molecular Biology 342, 503-14 (2004)]). 생성되는 IL-22/IL-22R/IL-10R2 복합체는 그의 이종삼량체 또는 다량체로서, JAK/STAT 및 MAPK (예를 들어, ERK) 신호전달 경로를 통해 세포 내로 신호를 전달한다 ([Dumoutier et al. Journal of Immunology 164, 1814-9 (2000)], [Dumoutier et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 97, 10144-9 (2000)]; 및 [Lejeune et al. Journal of Biological Chemistry 277, 33676-82 (2002)]). IL-22는 JAK/STAT3 및 MAPK (예를 들어, ERK) 경로, 및 다른 MAPK 경로의 중간체의 활성화를 유도한다 ([Dumoutier L. et al. (2000) 상기 문헌]; [Xie M.H. et al. (2000) 상기 문헌]; [Dumoutier L. et al. (2000) J Immunol 164(4): 1814-9]; [Kotenko S.V. et al. (2001) J Biol Chem 276(4):2725-32]; [Lejeune, D. et al. (2002) J Biol Chem 277(37):33676-82]).
IL-22R 및 IL-10R2 사이의 상호작용은 비오티닐화된 시토킨 및 수용체 세포외 도메인 (ECD) Fc 융합 이량체를 사용하는 ELISA-기반 형식에서 특성이 결정되었다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 2005-0042220을 참조한다. IL-22는 IL-22R의 ECD에 대한 측정가능한 친화도를 갖고, IL-10R2 단독에 대해서는 검출가능한 친화도를 갖지 않는 것으로 나타났다. IL-22는 또한 Fc 이종이량체로서 제시된 IL-22R/IL-10R2 ECD에 대해 실질적으로 보다 큰 친화도를 갖는 것으로 나타났다. IL-10R2는 IL-22 및 IL-22R 사이의 회합에 의해 생성된 표면에 결합하는 것으로 보이고, 이것은 IL-10R2 ECD가 그의 시토킨 수용체 복합체 내에서 IL-22의 회합을 더욱 안정화시킴을 제안한다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 2005-0042220을 참조한다.
IL-22 수용체 복합체에 대한 결합에 추가로, IL-22는 또한 IL-22에 특이적인 분비형 '수용체'이고 IL-22R의 세포외 도메인 (ECD)에 33％ 1차 서열 동일성을 갖는 IL-22 결합 단백질 (IL-22BP)에 결합한다 ([Dumoutier, L., Lejeune, D., Colau, D. & Renauld, J.C. Cloning and characterization of IL-22 binding protein, a natural antagonist of IL-10-related T cell-derived inducible factor/IL-22. Journal of Immunology 166, 7090-5 (2001)). 세포 표면형의 IL-22BP는 구체적으로 확인되지 않았지만, 시험관 내에서, IL-22BP는 decoy 수용체로서 작용하고, 세포 내로 IL-22 신호전달을 차단하는 것으로 나타났다 ([Dumoutier et al. Journal of Immunology 166, 7090-5 (2001)] 및 [Xu et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 98, 9511-6 (2001)]).
중화 항-IL-22 항체가 생성되고 그들의 결합 특이성, 친화도 및 IL-22 중화 활성의 면에서 특성이 결정되었다 (예를 들어, 미국 특허 출원 공개 2005-0042220 참조). 생체 내에서 IL-22의 투여는 급성기 반응의 파라미터를 유도하는 것으로 나타났고, 중화 항-IL-22 항체의 투여는 IL-22 활성을 감소시키고 마우스 콜라겐-유도된 관절염 (CIA) 모델에서 염증 증상을 개선하는 것으로 나타났다 (예를 들어, 미국 특허 출원 공개 2005-0042220 참조). 또한, IL-22 mRNA의 발현은 염증이 생긴 영역 내에서 상향조절되는 것으로 나타났다. 따라서, IL-22 길항제, 예를 들어, 중화 항-IL-22 항체 및 그의 단편은 생체 내에서 면역 억제를 유도하기 위해 사용될 수 있고, 다양한 염증성 및/또는 자가면역 질환의 치료에 대한 유망한 방안을 제공한다.
Th17 세포는 IL-17A 및 IL-17F를 발현하는 그들의 능력에 의해 규정된다 ([Aggarwal et al., J. Biol. Chem., (2003) 278:1910-14]; [Langrish et al., J. Exp. Med., (2005) 201:233-40]; [Harrington et al., Nat. Immunol., (2005) 6: 1123-32]; [Park et al., Nat. Immunol., (2005) 6:1133-41]; [Veldhoen et al., Immunity, (2006) 24:179-89]; [Mangan et al., Nature, (2006) 441:231-34]; [Bettelli et al., Nature, (2006) 441:235-38]). Th17 세포 분화는 염증유발성 시토킨, 특히 IL-6 및 또한 IL-1β 및 TNF-α의 맥락에서 TGF-β 신호전달에 의해 개시된다. 이와 반대로, Th17 세포의 유지 및 생존은 IL-23 (IL-12p40 및 IL-23p19 서브유닛으로 구성된 IL-12 패밀리 멤버)에 의존적이다. IL-23 결핍 마우스는 몇몇 쥐 질병 및 감염 모델에서 유의하게 적은 IL-17을 생산한다 ([Langrish et al., J. Exp. Med., (2005) 201:233-40]; [Murphy et al., J. Exp. Med., (2003) 198:1951-57]; [Happel et al., J. Exp. Med., (2005) 202:761-69]; [Khader et al., J. Immunol., (2005) 175:788-95]). 따라서, Th17 분화는 TGF-β 및 염증유발성 시토킨에 의해 개시되고, 후속적으로 IL-23에 의해 유지된다.
IL-17 패밀리는 17 내지 55％의 상대적인 상동성을 공유하는 5개의 패밀리 멤버 (IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E (IL-25) 및 IL-17F)로 구성된다 ([Aggarwal et al., Cytokine Growth Factor Rev., (2003) 14:155-74]; [Kolls et al., Immunity, (2004) 21:467-76]). IL-17 패밀리 멤버의 발현은 매우 다양하다. IL-17A 및 IL-17F는 가장 상동성 (55％)이고, 인간 염색체 1 상에서 서로 인접하게 위치한다. IL-17A 및 IL-17F mRNA는 Th1 또는 Th2 세포에 비해 Th17 세포에서 더 높은 수준으로 발현된다. 이와 달리, IL-17B, IL-17C 및 IL-17D는 비-림프 조직에서 주로 발현된다. IL-17E (IL-25)는 Th2 세포에서 발현된다 (Fort et al., Immunity, (2001) 15:985-95). IL-17A 및 IL-17F에 추가로, TNF-α, IL-6, 및 GM-CSF가 또한 IL-23에 의해 유도되고 Th17 세포에 의해 강하게 발현되는 유전자로서 확인되었다 ([Langrish et al., J. Exp. Med., (2005) 201:233-40]; [Infante-Duarte et al., J. Immunol., (2000) 165:6107-15]). 그러나, Th1 세포는 TNF-α를 발현할 수 있고 Th2 세포는 IL-6 및 GM-CSF를 발현할 수 있기 때문에, IL-6, TNF-α 및 GM-CSF의 발현은 Th17 계열에 제한되지 않는다. 이와 달리, Th17 세포는 계열 특이적인 방식으로 IL-17A 및 IL-17F를 생산하는 것으로 생각된다.
CD4 효과기 세포의 하위세트는 많은 상이한 질병에 관여된다. 일부 경우에, 그들의 활성은 유기체에 도움이 된다. 그러나, 다른 질병에서 그들의 활성은 바람직하지 않거나 심지어 유해하다. 특정 병상에 책임있는 CD4 효과기 집단 내의 세포의 하위세트의 확인은 다른 CD4 효과기 세포의 불필요한 억제 없이 그 세포의 표적화된 조절을 허용한다. 유사하게, 세포 하위세트에 의해 생산된 시토킨 및 이들 시토킨이 상호작용하는 방식을 아는 것이 이들 시토킨을 관련시키는 질병의 개선된 관리를 제공하는 포괄적인 치료법의 개발을 위한 전제조건이다.
IL-22는 또한 IL-17A 또는 IL-17F와 협동적으로 및 일부 경우에 상승적으로 작용할 수 있는 Th17 시토킨이다 (미국 특허 출원 공개 20080031882 참조). 또한, IL-23에 의한 IL-22 유도가 입증되었다 (상기 문헌).
<발명의 개요>
특정 실시태양에서, 염증성 질환의 검출 방법을 제공한다. 특정 실시태양에서, 염증성 질환의 검출 방법은 환자에서 (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 상향조절을 확인하는 것을 포함하고, 여기서 IL-1의 적어도 하나의 이소형은 IL-1F6, IL-1F8 또는 IL-1F9이다. 특정 실시태양에서, 염증성 질환은 건선, 루푸스 또는 관절염이다. 특정 실시태양에서, (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 상향조절은 mRNA 수준의 검출에 의해 결정된다. 특정 실시태양에서, (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 상향조절은 단백질 수준의 검출에 의해 결정된다. 특정 실시태양에서, (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 2개의 상향조절의 검출은 (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 단백질 수준의 검출에 의해, 및 (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 mRNA 수준의 검출에 의해 결정된다. 환자에서 (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 발현은 대조군 샘플에서의 발현 수준에 비교될 수 있고, 여기서 대조군 샘플에서의 발현에 비해 환자에서 IL-1의 적어도 하나의 이소형 또는 IL-1Rrp2의 발현 증가는 환자에서 염증성 질환의 존재를 나타낸다.
특정 실시태양에서, IL-22 연관 질환의 치료 방법을 제공한다. 특정 실시태양에서, IL-22 연관 질환의 치료 방법은 적어도 하나의 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9 중 적어도 하나의 억제제를 상기 IL-22 연관 질환이 있는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시태양에서, 적어도 하나의 억제제는 항-IL-1F6 항체이다. 특정 실시태양에서, 적어도 하나의 억제제는 항-IL-1F8 항체이다. 특정 실시태양에서, 적어도 하나의 억제제는 항-IL-1F9 항체이다. 특정 실시태양에서, 적어도 하나의 억제제는 항-IL-1Rrp2 항체이다.
특정 실시태양에서, IL-1 연관 질환의 치료 방법을 제공한다. 특정 실시태양에서, IL-1 연관 질환의 치료 방법은 IL-22의 억제제를 상기 IL-1 연관 질환이 있는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시태양에서, IL-22의 억제제는 항-IL-22 항체이다.
특정 실시태양에서, 염증성 질환의 치료 방법을 제공한다. 특정 실시태양에서, 염증성 질환의 치료 방법은 염증성 질환이 있는 환자에게 (a) (i) 항-IL-1F6 항체, (ii) 항-IL-1F8 항체, (iii) 항-IL-1F9 항체, 및 (iv) 항-IL-1Rrp2 항체 중 적어도 하나; 및 (b) 항-IL-22 항체 또는 IL-22 길항제의 조합물을 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시태양에서, 염증성 질환의 치료 방법은 염증성 질환이 있는 환자에게 항-IL-1 항체, 예를 들어 항-IL-1F6 항체, 항-IL-1F8 항체, 또는 항-IL-1F9 항체, 및 항-IL-17A 항체 또는 IL-17A 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시태양에서, 염증성 질환의 치료 방법은 염증성 질환이 있는 환자에게 (a) (i) 항-IL-1F6 항체, (ii) 항-IL-1F8 항체, (iii) 항-IL-1F9 항체, 및 (iv) 항-IL-1Rrp2 항체 중 적어도 하나; (b) 항-IL-22 항체 또는 IL-22 길항제; 및 (c) 항-IL-17A 항체 또는 IL-17A 길항제의 조합물을 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시태양에서, 염증성 질환의 치료 방법은 환자에게 (a) (i) 항-IL-1F6 항체, (ii) 항-IL-1F8 항체, (iii) 항-IL-1F9 항체, 및 (iv) 항-IL-1Rrp2 항체 중 적어도 하나; 및 (b) 항-TNFα 항체 또는 TNFα 길항제의 조합물을 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시태양에서, 염증성 질환은 건선, 루푸스 또는 관절염이다.
특정 실시태양에서, 대상에서의 염증성 질환의 치료, 감소, 예방 및/또는 개선에 있어 치료제의 유효성을 결정하는 방법을 제공한다. 특정 실시태양에서, 치료제의 유효성을 결정하는 방법은 대조군 샘플에서의 유전자 발현 수준에 비해 대상에서의 유전자 발현 수준을 검출하는 것을 포함하고, 여기서 검출된 유전자 발현은 IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, IL-1Rrp 중 적어도 하나로부터의 유전자 발현이고; 대조군에 비해 대상에서의 보다 낮은 유전자 발현 수준은 대상에서의 염증성 질환의 치료, 감소, 예방 및/또는 개선에 있어 치료제의 유효성을 나타낸다.
도 1은 건선-유사 마우스 귀 조직에서 IL-1 시토킨 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9 및 그들의 수용체 IL-1Rrp2의 증가된 발현을 보여준다. 야생형 CD4+CD25- CD45RBhi T 세포의 입양 전달 (adaptive transfer)에 의해 scid / scid 마우스에서 건선 (Pso.)을 유도한 반면, 대조군 (Cont.) 마우스에는 염수 주사를 하였다. 마우스 귀를 주사 70일 후에 수거하였다. 도 1(a) 및 (c)는 정량적 RT-PCR에 의해 평가된 IL-1 시토킨 및 그들의 수용체 IL-1Rrp2의 전사체 수준을 보여준다. Y 축은 세포당 1,000 카피의 GAPDH mRNA를 가정하면서 하우스키핑 (housekeeping) 유전자 GAPDH에 비해 상대적인 mRNA 카피의 나타낸 유전자를 나타낸다. 통계 분석은 언-페어드 (un-paired) 투 테일 t 테스트 (two tail t test)을 이용하여 수행하였다. "*"는 통계적 유의성 (p<0.001)을 나타낸다. 도 1(b)는 웨스턴 블롯 (western blot)에서 각각의 단백질에 대한 항체 (알앤디 시스템즈 (R&D systems))에 의해 검출된 개별 귀 샘플 내의 IL-1F6 및 β-액틴 단백질을 보여준다.
도 2는 전신 IL-22 중화 후에 건선-유사 마우스 귀 조직에서 IL-1 시토킨의 감소된 발현을 보여준다. CD4+CD25- CD45RBhi T 세포 수여체 마우스 (n=5)에게 16 mg/kg의 IL-22 (IL22-104, 와이어쓰 (Wyeth), 검게 표시된 기호) 또는 이소형 대조군 (빈 원) 항체를 11주 동안 매주 1회 복강내 투여하였다. 마지막 처리의 48시간 후에, 마우스 귀를 수거하고, 나타낸 유전자의 전사체 카피를 평가하고 GAPDH에 대한 상대적인 발현으로서 나타냈다. "*"는 통계적 유의성 (p<0.01)을 나타낸다.
도 3은 IL-22로 처리한 마우스 귀에서 IL-1 시토킨 및 그들의 수용체 IL-1Rrp2의 증가된 발현을 보여준다. BALB/c 마우스 (n=4)의 귀에 500 ng의 재조합 마우스 IL-22 (비디 바이오사이언시스 (BD Biosciences)) 또는 염수를 20 ㎕의 총 부피로 2주 동안 이틀마다 피부내 주사하였다. 마지막 처리의 6시간 후에, 마우스 귀를 수거하고, 나타낸 유전자의 전사체 수준을 평가하고 GAPDH에 대한 상대적인 발현으로서 나타냈다. "*"는 통계적 유의성 (p<0.1)을 나타낸다.
도 4는 48시간 동안 지시된 양의 재조합 인간 IL-22로 처리한 후 1차 인간 각질형성세포 내의 IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, 및 수용체 IL-1Rrp2의 전사체 수준을 보여준다. RNA를 세포 용해물로부터 정제하고, 나타낸 유전자의 전사체 카피를 평가하고 GAPDH에 대한 상대적인 발현으로서 나타냈다. 도 4(a) 및 4(b)의 데이타는 독립 실험을 나타낸다
도 5는 IL-22가 IL-17A와 상승작용하여 인간 1차 각질형성세포에서 IL-1 이소형 유전자 발현을 유도함을 보여준다. 세포는 비처리, 200 ng/ml의 재조합 인간 IL-22 (와이어쓰) 단독, 20 ng/ml의 재조합 인간 IL-17A (와이어쓰) 단독, 또는 200 ng/ml의 IL-22 및 20 ng/ml의 IL-17A 투여 48hr 후에 수거하였다. 도 5(a) 및 5(c)는 세포 용해물 내의 IL-1F6, IL-1F8, 및 IL-1F9의 전사체 수준을 보여준다. 도 5(b)는 각각의 단백질에 대한 항체 (알앤디 시스템즈)를 사용하는 웨스턴 블롯에 의해 평가된 세포 용해물 내의 IL-1F9 및 β-액틴의 단백질 수준을 보여준다.
도 6은 건선 환자의 짝을 이룬 비-병변 및 병변 피부 샘플에서 IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, 및 수용체 IL-1Rrp2의 전사체 수준을 보여준다. RNA를 동결된 조직 생검으로부터 정제하고, 유전자 발현을 정량적 RT-PCR에 의해 평가하였다. 도 6(a)는 군 당 나타낸 유전자 전사체의 평균 카피±표준 편차 (n=11)을 보여준다. 통계적 유의성은 각각의 플롯에 도시된 p 값에 의해 표시된다. 도 6(b) 및 6(c)는 개별 환자로부터의 비-병변 및 병변 샘플에서 유전자 발현을 보여준다.
도 7은 IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, 및 Th17 시토킨 IL-22 및 IL-17A 사이의 선형 유전자 발현 상관성을 보여준다. 인간 환자의 병변 피부 생검으로부터 IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, 및 수용체 IL-1 IL-1Rrp2의 전사체 카피를 동일한 조직 샘플 내의 IL-22 및 IL17A의 전사체 카피에 대해 플로팅하였다. 도 7(a)는 건선성 피부 병변에서 IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, 및 IL-22 또는 IL-17A의 유전자 발현 사이의 양성 상관성을 보여준다. 결정 계수 (R squared) 및 P 값이 또한 각각의 플롯에 표시된다. 도 7(b)는 건선성 피부 병변에서 수용체 IL-1Rrp2 및 IL-22 또는 IL-17A의 유전자 발현 사이에 상관성이 없음을 보여준다. 결정 계수 및 P 값이 또한 각각의 플롯에 표시된다.
도 8은 인간 건선 피부 병변에서 IL-1F6, IL-1F8, 및 IL-1F9, 및 다른 염증유발성 생체마커 사이의 유전자 발현 상관성의 요약이다. 통계 분석은 95％ 신뢰 구간으로 투-테일드 피어슨 (Pearson) 테스트를 이용하여 수행하였다. 상관성은 p<0.05일 때 유의한 것으로 간주되었다.
도 9는 콜라겐 유도된 관절염 마우스의 백혈구에서 검출된 증가된 IL-1F8 및 IL-1F9 유전자 발현을 보여준다. DBA1 마우스를 CFA 내에 유화시킨 200 ng의 소 타입 II 콜라겐 (콘드렉스 (Chondrex))으로 피부내로 면역화시켰다. 제21일에, 모든 마우스에게 IFA 중의 200 ng의 콜라겐의 추가접종을 투여하였다. 제35일에, 마우스를 희생시키고, 유전자 발현 분석을 위해 혈액을 수집하였다. QIAGEN RNeasy® 혈액 미니 키트 (퀴아겐 (QIAGEN))를 사용하여 백혈구로부터 RNA를 정제하고, IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9의 mRNA 수준을 RT-PCR로 평가하였다. 군 당 IL-1F8 및 IL-1F9의 상대적인 전사체 카피±표준 편차 (n=5)를 도시한다. IL-1F6 mRNA 수준은 검출 한계 미만이었다. 도 9의 데이타는 2개의 독립 실험 중 하나를 보여준다.
도 10은 건선-유사 마우스의 백혈구에서 검출된 증가된 IL-1F6 및 IL-1F9 유전자 발현을 보여준다. 건선을 도 1에 기재된 바와 같이 마우스에서 유도시켰다. 마우스 혈액을 입양 T 세포 전달 후 제70일에 수집하고, 도 9에 기재된 바와 같이 유전자 발현을 분석하였다. 군 당 IL-1F6, IL-1F9 및 수용체 IL-1Rrp2의 상대적인 전사체 카피±표준 편차 (n=5)를 도시하였다. IL-1F8 mRNA 수준은 검출 한계 미만이었다. 도 10의 데이타는 2개의 독립 실험 중 하나를 보여준다.
도 11은 루푸스 경향 (prone) NZBWF/1 마우스의 백혈구에서 검출된 증가된 수용체 IL-1Rrp2, IL-1F6 및 IL-1F9 시토킨 유전자 전사체를 보여준다. 자발적 루푸스 발병에 유전적으로 감수성인 10주령 및 7월령 NZBWF/1 동물주의 마우스로부터 혈액을 수집하였다. 자발적 루푸스 발병에 감수성이 아닌 10주령 나이브 (naive) C57BL/6 마우스를 대조군으로서 사용하였다. 군 당 IL-1F6, IL-1F9 및 수용체 IL-1Rrp2의 상대적인 전사체 카피±표준 편차 (n=5)를 도시하였다. IL-1F8 mRNA 수준은 검출 한계 미만이었다. 도 11의 데이타는 2개의 독립 실험 중 하나를 보여준다.
도 12는 인간 IL-22 뉴클레오티드 서열 및 인간 IL-22 아미노산 서열을 보여준다.
도 13은 마우스 IL-22 뉴클레오티드 서열 및 마우스 IL-22 아미노산 서열을 보여준다.
도 14는 인간 IL-1F6 뉴클레오티드 서열 및 인간 IL-1F6 아미노산 서열을 보여준다.
도 15는 인간 IL-1F8 뉴클레오티드 서열 및 인간 IL-1F8 아미노산 서열을 보여준다.
도 16은 인간 IL-1F9 뉴클레오티드 서열 및 인간 IL-1F9 아미노산 서열을 보여준다.
도 17은 인간 IL-1Rrp2 뉴클레오티드 서열 및 인간 IL-1Rrp2 아미노산 서열을 보여준다.
도 18은 인간 IL-17A mRNA 뉴클레오티드 서열 및 인간 IL-17A 아미노산 서열을 보여준다.
도 19는 20 ng/ml의 TNF-α 및 IL-22 (200 ng/ml) 및 TNF-α (20 ng/ml)의 조합물과 함께 48시간 인큐베이션한 후에 각질형성세포에서 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9 발현의 증가 배수를 보여준다. 3마리의 공여체로부터의 데이타를 모으고, 평균±SD를 제시한다.
도 20은 20 ng/ml의 IFN-γ와 함께 또는 그 없이 표시된 농도의 IL-12와 함께 48시간 인큐베이션한 후에 각질형성세포에서 IL-1F8 및 IL-1F9 발현의 증가 배수를 보여준다. IL-1F6 발현의 배수 증가는 검출되지 않았다. 5마리의 공여체로부터의 데이타를 모으고, 평균±SD를 제시한다
도 21은 20 ng/ml의 IL-17A, 20 ng/ml의 IFN-γ, 또는 둘의 조합물과 함께 48시간 인큐베이션한 후에 각질형성세포에서 IL-1F8 발현의 증가 배수를 보여준다. 3마리의 공여체로부터의 데이타를 모으고, 평균±SD를 제시한다.
도 22는 200 ng/ml의 IL-21, 또는 200 ng/ml의 IL-21 및 200 ng/ml의 IL-22의 조합물과 함께 48시간 인큐베이션한 후에 각질형성세포에서 GAPDH에 상대적인 IL-1F8 및 IL-1F9의 발현을 보여준다. 2마리의 개별 공여체로부터의 데이타를 제시한다.
도 23은 IL-22 (200 ng/ml), IL-17A (20 ng/ml), IL-22 (200 ng/ml) + IL-17A (20 ng/ml), IL-12 (200 ng/ml), IFN-γ (20 ng/ml), 또는 IL-12 (200 ng/ml) + IFN-γ (20 ng/ml)와 함께 48시간 인큐베이션한 후에 각질형성세포에서 il1a 및 il1b 발현의 증가 배수를 보여준다. 5마리의 공여체로부터의 데이타를 모으고, 평균±SD를 제시한다.
도 24는 1000 ng/ml의 IL-1F6, F8 및 F9, 또는 IL-17A (20 ng/ml), IFN-γ (20 ng/ml) 또는 TNF-α (20 ng/ml)의 조합물과 함께 72시간 인큐베이션한 후에 각질형성세포에서 IL1α (a), IL1β (b), IL-1F6 (c) 및 IL-1F9 (d) 발현의 증가 배수를 보여준다. 1마리의 공여체로부터의 데이타를 제시한다.
도 25는 1000 ng/ml의 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9 단독으로, 또는 IL-17A (20 ng/ml), IFN-γ (20 ng/ml) 또는 TNF-α (20 ng/ml)와 조합물과 함께 6시간 또는 72시간 (G - il6에 대해서만) 인큐베이션한 후에 각질형성세포에서 saa1 /2 (a), serpin e1 (b), plau (c), plat (d), tnfa (e) 및 il6 (f) 발현의 증가 배수를 보여준다. 1마리의 공여체로부터의 데이타를 제시한다.
도 26은 1000 ng/ml의 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9 단독, 또는 IL-17A (20 ng/ml), IFN-γ (20 ng/ml) 또는 TNF-α (20 ng/ml)의 조합물과 함께 72시간 인큐베이션한 후에 각질형성세포에서 GAPDH에 상대적인 s100a7 및 def4의 발현 (a) 및 (c), 또는 s100a7 및 def4 유전자 발현의 증가 배수 (b) 및 (d)를 보여준다. 1마리의 공여체로부터의 데이타를 제시한다.
달리 규정하지 않으면, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 학술 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 특허청구범위의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질을 아래에 기재한다. 본원에 언급된 모든 공개, 특허 출원, 특허, 및 다른 참조문은 그 전문이 참고로 포함된다. 상충하는 경우에는 정의를 포함한 본 명세서가 우선할 것이다. 또한, 물질, 방법, 및 실시예는 단지 예시적이고, 제한되는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명을 보다 쉽게 이해할 수 있기 위해, 특정 용어를 먼저 정의한다. 추가의 정의는 상세한 설명 전체에 기재된다. 구체적인 정의를 제공하지 않으면, 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의학 및 제약 화학과 연관하여 사용되는 명명법 및 그의 실험 절차 및 기술은 당업계에 잘 알려져 있고 일반적으로 사용되는 것이다. 화학 합성, 화학 분석, 제약 제제, 제형화, 전달 및 환자의 치료를 위한 표준 기술이 사용될 수 있다.
본원에서, 단수형의 사용은 달리 구체적으로 진술하지 않으면 복수형을 포함한다. 본원에서, "또는"의 사용은 달리 진술하지 않으면 "및/또는"을 의미한다. 다수 종속항의 문맥에서 "또는"의 사용은 단지 선택사항으로 하나 초과의 선행 독립항 또는 종속항을 다시 인용한다. 또한, 용어 "포함하는" 및 다른 형태, 예를 들어 "포함한다" 및 "포함된"의 사용은 제한적인 의미가 아니다. 또한, "요소" 또는 "성분"과 같은 용어는 달리 구체적으로 진술하지 않으면 하나의 단위를 포함하는 요소 및 성분, 및 하나 초과의 서브유닛을 포함하는 요소 및 성분을 모두 포함한다.
다른 특징 및 잇점은 하기 상세한 설명 및 청구의 범위로부터 자명할 것이다.
본원은 적어도 부분적으로는, IL-22, 특히, 인간 IL-22에 높은 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체 및 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 특정 실시태양에서, 항-IL-22 항체 또는 그의 단편은 IL-22 연관 질환 및/또는 염증성 질환, 예를 들어, 자가면역 질환, 예를 들어, 관절염 (류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 루푸스 연관 관절염 또는 강직성 척추염 포함), 경피증, 전신 홍반성 루푸스, HIV, 쇼그렌 (Sjogren) 증후군, 혈관염, 다발성 경화증, 자가면역 갑상선염, 피부염 (아토피성 피부염 및 습진성 피부염 포함), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론 (Crohn)병, 결장염, 당뇨병 (타입 I); 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머 (Alzheimer) 병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염) 및 췌장 (예를 들어, 췌장염)의 염증성 병태; 심혈관 질환, 예를 들어, 콜레스테롤 대사 질환, 산소 유리 라디칼 손상, 허혈; 상처 치유와 연관된 질환; 호흡기 질환, 예를 들어, 천식 및 COPD (예를 들어, 낭성 섬유증); 급성 염증성 병태 (예를 들어, 내독소혈증, 패혈증 (sepsis) 및 패혈병 (septicaemia), 독성 쇼크 증후군 및 감염성 질병); 이식 거부 및 알레르기의 진단, 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 한 실시태양에서, IL-22 연관 질환은 관절염 질환, 예를 들어 류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 또는 강직성 척추염 중의 하나 이상으로부터 선택되는 질환; 호흡기 질환 (예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 또는 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염), 췌장 (예를 들어, 췌장염), 및 위장관 장기의 염증성 병태, 예를 들어, 결장염, 크론병 및 IBD이다.
용어 "인터류킨-22" 또는 "IL-22"는 IL-22R 및/또는 IL-22R 및 IL-10R2의 수용체 복합체에 결합할 수 있는 II형 사이토킨 (포유동물성일 수 있다)을 나타내고 하나 이상의 하기 특징을 갖는다: (1) 천연 생성 포유동물 IL-22 폴리펩티드 (전장 또는 성숙 형태)의 아미노산 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 1 (인간) 또는 서열 3 (쥐)으로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편; (2) 서열 1로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 아미노산 34-179 (인간) 또는 서열 3으로 나타낸 아미노산 서열 (쥐) 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 아미노산 서열; (3) 천연 생성 포유동물 IL-22 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편 (예를 들어, 서열 2 또는 뉴클레오티드 71 내지 610 (인간) 또는 서열 4 (쥐) 또는 그의 단편)에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (4) 서열 2로 나타낸 뉴클레오티드 서열 또는 그의 뉴클레오티드 71 내지 610 (인간) 또는 서열 4 (쥐)로 나타낸 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (5) 천연 생성 IL-22 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 2 (인간) 또는 서열 4 (쥐) 또는 그의 단편에 대해 축퇴성인 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; 또는 (6) 엄격한 조건, 예를 들어, 고도의 엄격한 조건 하에서 상기 뉴클레오티드 서열 중의 하나와 혼성화하는 뉴클레오티드 서열. IL-22는 포유동물 기원, 예를 들어, 인간 또는 마우스의 IL-22R 및/또는 IL-22R과 IL-10R2의 수용체 복합체와 결합할 수 있다.
인간 IL-22 cDNA는 부다페스트 조약 하에 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (American Type Culture Collection, 미국 20110-2209 버지니아주 매나서스 유니버시티 불러바드 10801)에 1999년 4월 28일에 기탁하고, 기탁 번호 ATCC 207231이 부여되었다.
구문 "IL-22 활성" 또는 "IL-22 연관 활성"은 IL-22 폴리펩티드, 예를 들어, 성숙 IL-22 폴리펩티드 (예를 들어, 포유동물, 예를 들어 각각 서열 2 및 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 인간 또는 쥐 IL-22)의 하나 이상의 생물학적 활성을 나타내고, 다음을 포함하고, 이로 제한되지 않는다: (1) IL-22 수용체 (예를 들어, 바람직하게는 포유동물, 예를 들어, 쥐 또는 인간 기원의 IL-22R 또는 IL-10R2 또는 그의 복합체)와의 상호작용, 예를 들어 결합; (2) 하나 이상의 신호전달 분자와의 회합; (3) 단백질 키나제, 예를 들어, JAK/STAT3, ERK, 및 MAPK의 인산화 및/또는 활성화의 자극; (4) IL-22 반응 세포, 예를 들어 신장, 간, 결장, 소장, 갑상선, 췌장, 피부로부터의 상피 세포의 증식, 분화, 효과기 세포 기능, 세포용해 (cytolytic) 활성, 시토킨 또는 케모킨 분비 및/또는 생존의 조절, 예를 들어 자극 또는 감소; (5) 급성기 반응의 적어도 하나의 파라미터, 예를 들어 대사, 간, 조혈 (예를 들어, 빈혈, 혈소판 증가) 또는 신경내분비 변화, 또는 변화 (예를 들어, 급성기 단백질의 증가 또는 감소, 예를 들어 피브리노겐 및/또는 혈청 아밀로이드 A의 증가, 또는 알부민의 감소)의 조절; 및/또는 (6) 염증성 상태의 적어도 하나의 파라미터의 조절, 예를 들어, 시토킨-매개된 전염증성 (proinflammatory) 작용 (예를 들어, 열 및/또는 프로스타글란딘 합성, 예를 들어 PGE2 합성)의 조절, 세포성 면역 반응의 조절, 시토킨, 케모킨 (예를 들어, GRO1), 또는 림포킨 생산 및/또는 분비 (예를 들어, 전염증성 시토킨의 생산 및/또는 분비)의 조절.
본원은 적어도 부분적으로는, IL-1F6, 특히, 인간 IL-1F6에 높은 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체 및 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 특정 실시태양에서, 항-IL-1F6 항체 또는 그의 단편은 IL-1F6 연관 질환 및/또는 염증성 질환, 예를 들어, 자가면역 질환, 예를 들어, 관절염 (류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 루푸스 연관 관절염 또는 강직성 척추염 포함), 경피증, 전신 홍반성 루푸스, HIV, 쇼그렌 증후군, 혈관염, 다발성 경화증, 자가면역 갑상선염, 피부염 (아토피성 피부염 및 습진성 피부염 포함), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론병, 결장염, 당뇨병 (타입 I); 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염) 및 췌장 (예를 들어, 췌장염)의 염증성 병태; 심혈관 질환, 예를 들어, 콜레스테롤 대사 질환, 산소 유리 라디칼 손상, 허혈; 상처 치유와 연관된 질환; 호흡기 질환, 예를 들어, 천식 및 COPD (예를 들어, 낭성 섬유증); 급성 염증성 병태 (예를 들어, 내독소혈증, 패혈증 및 패혈병, 독성 쇼크 증후군 및 감염성 질병); 이식 거부 및 알레르기의 진단, 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 한 실시태양에서, IL-1F6 연관 질환은 관절염 질환, 예를 들어 류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 또는 강직성 척추염 중의 하나 이상으로부터 선택되는 질환; 호흡기 질환 (예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 또는 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염), 췌장 (예를 들어, 췌장염), 및 위장관 장기의 염증성 병태, 예를 들어, 결장염, 크론병 및 IBD.
용어 "IL-1F6"은 IL-1 시토킨을 나타내고, 하나 이상의 하기 특징을 갖는다: (1) 천연 생성 포유동물 IL-F6 폴리펩티드 (전장 또는 성숙 형태)의 아미노산 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 6으로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편; (2) 서열 6으로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 아미노산 서열; (3) 천연 생성 포유동물 IL-1F6 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편 (예를 들어, 서열 5 또는 그의 단편)에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (4) 서열 5로 나타낸 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (5) 천연 생성 IL-1F6 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 5 또는 그의 단편에 대해 축퇴성인 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; 또는 (6) 엄격한 조건, 예를 들어, 고도의 엄격한 조건 하에서 서열 5와 혼성화하는 뉴클레오티드 서열.
본원은 적어도 부분적으로는, IL-1F8, 특히, 인간 IL-1F8에 높은 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체 및 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 특정 실시태양에서, 항-IL-1F8 항체 또는 그의 단편은 IL-1F8 연관 질환 및/또는 염증성 질환, 예를 들어, 자가면역 질환, 예를 들어, 관절염 (류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 루푸스 연관 관절염 또는 강직성 척추염 포함), 경피증, 전신 홍반성 루푸스, HIV, 쇼그렌 증후군, 혈관염, 다발성 경화증, 자가면역 갑상선염, 피부염 (아토피성 피부염 및 습진성 피부염 포함), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론병, 결장염, 당뇨병 (타입 I); 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염) 및 췌장 (예를 들어, 췌장염)의 염증성 병태; 심혈관 질환, 예를 들어, 콜레스테롤 대사 질환, 산소 유리 라디칼 손상, 허혈; 상처 치유와 연관된 질환; 호흡기 질환, 예를 들어, 천식 및 COPD (예를 들어, 낭성 섬유증); 급성 염증성 병태 (예를 들어, 내독소혈증, 패혈증 및 패혈병, 독성 쇼크 증후군 및 감염성 질병); 이식 거부 및 알레르기의 진단, 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 한 실시태양에서, IL-1F8 연관 질환은 관절염 질환, 예를 들어 류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 또는 강직성 척추염 중의 하나 이상으로부터 선택되는 질환; 호흡기 질환 (예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 또는 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염), 췌장 (예를 들어, 췌장염), 및 위장관 장기의 염증성 병태, 예를 들어, 결장염, 크론병 및 IBD이다.
용어 "IL-1F8"은 IL-1 시토킨을 나타내고, 하나 이상의 하기 특징을 갖는다: (1) 천연 생성 포유동물 IL-F8 폴리펩티드 (전장 또는 성숙 형태)의 아미노산 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 8로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편; (2) 서열 8로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 아미노산 서열; (3) 천연 생성 포유동물 IL-1F8 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편 (예를 들어, 서열 7 또는 그의 단편)에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (4) 서열 7로 나타낸 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (5) 천연 생성 IL-1F8 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 7 또는 그의 단편에 대해 축퇴성인 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; 또는 (6) 엄격한 조건, 예를 들어, 고도의 엄격한 조건 하에서 서열 7과 혼성화하는 뉴클레오티드 서열.
본원은 적어도 부분적으로는, IL-1F9, 특히, 인간 IL-1F9에 높은 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체 및 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 특정 실시태양에서, 항-IL-1F9 항체 또는 그의 단편은 IL-1F9 연관 질환 및/또는 염증성 질환, 예를 들어, 자가면역 질환, 예를 들어, 관절염 (류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 루푸스 연관 관절염 또는 강직성 척추염 포함), 경피증, 전신 홍반성 루푸스, HIV, 쇼그렌 증후군, 혈관염, 다발성 경화증, 자가면역 갑상선염, 피부염 (아토피성 피부염 및 습진성 피부염 포함), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론병, 결장염, 당뇨병 (타입 I); 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염) 및 췌장 (예를 들어, 췌장염)의 염증성 병태; 심혈관 질환, 예를 들어, 콜레스테롤 대사 질환, 산소 유리 라디칼 손상, 허혈; 상처 치유와 연관된 질환; 호흡기 질환, 예를 들어, 천식 및 COPD (예를 들어, 낭성 섬유증); 급성 염증성 병태 (예를 들어, 내독소혈증, 패혈증 및 패혈병, 독성 쇼크 증후군 및 감염성 질병); 이식 거부 및 알레르기의 진단, 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 한 실시태양에서, IL-1F9 연관 질환은 관절염 질환, 예를 들어 류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 또는 강직성 척추염 중의 하나 이상으로부터 선택되는 질환; 호흡기 질환 (예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 또는 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염), 췌장 (예를 들어, 췌장염), 및 위장관 장기의 염증성 병태, 예를 들어, 결장염, 크론병 및 IBD이다.
용어 "IL-1F9"는 IL-1 시토킨을 나타내고, 하나 이상의 하기 특징을 갖는다: (1) 천연 생성 포유동물 IL-F9 폴리펩티드 (전장 또는 성숙 형태)의 아미노산 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 10으로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편; (2) 서열 10으로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 아미노산 서열; (3) 천연 생성 포유동물 IL-1F9 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편 (예를 들어, 서열 9 또는 그의 단편)에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (4) 서열 9로 나타낸 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (5) 천연 생성 IL-1F9 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 9 또는 그의 단편에 대해 축퇴성인 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; 또는 (6) 엄격한 조건, 예를 들어, 고도의 엄격한 조건 하에서 서열 9와 혼성화하는 뉴클레오티드 서열.
본원은 적어도 부분적으로는, IL-1Rrp2, 특히, 인간 IL-1Rrp2에 높은 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체 및 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 특정 실시태양에서, 항-IL-1Rrp2 항체 또는 그의 단편은 IL-1Rrp2 연관 질환 및/또는 염증성 질환, 예를 들어, 자가면역 질환, 예를 들어, 관절염 (류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 루푸스 연관 관절염 또는 강직성 척추염 포함), 경피증, 전신 홍반성 루푸스, HIV, 쇼그렌 증후군, 혈관염, 다발성 경화증, 자가면역 갑상선염, 피부염 (아토피성 피부염 및 습진성 피부염 포함), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론병, 결장염, 당뇨병 (타입 I); 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염) 및 췌장 (예를 들어, 췌장염)의 염증성 병태; 심혈관 질환, 예를 들어, 콜레스테롤 대사 질환, 산소 유리 라디칼 손상, 허혈; 상처 치유와 연관된 질환; 호흡기 질환, 예를 들어, 천식 및 COPD (예를 들어, 낭성 섬유증); 급성 염증성 병태 (예를 들어, 내독소혈증, 패혈증 및 패혈병, 독성 쇼크 증후군 및 감염성 질병); 이식 거부 및 알레르기의 진단, 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 한 실시태양에서, IL-1Rrp2 연관 질환은 관절염 질환, 예를 들어 류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 또는 강직성 척추염 중의 하나 이상으로부터 선택되는 질환; 호흡기 질환 (예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 또는 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염), 췌장 (예를 들어, 췌장염), 및 위장관 장기의 염증성 병태, 예를 들어, 결장염, 크론병 및 IBD이다.
용어 "IL-1Rrp2"는 IL-1 시토킨 수용체 (인터루킨 1 수용체-유사 2 (IL-1RL2))를 나타내고, 하나 이상의 하기 특징을 갖는다: (1) 천연 생성 포유동물 IL-Rrp2 폴리펩티드 (전장 또는 성숙 형태)의 아미노산 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 12로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편; (2) 서열 12로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 아미노산 서열; (3) 천연 생성 포유동물 IL-1Rrp2 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편 (예를 들어, 서열 11 또는 그의 단편)에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (4) 서열 11로 나타낸 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (5) 천연 생성 IL-1Rrp2 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 11 또는 그의 단편에 대해 축퇴성인 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; 또는 (6) 엄격한 조건, 예를 들어, 고도의 엄격한 조건 하에서 서열 11과 혼성화하는 뉴클레오티드 서열.
본원은 적어도 부분적으로는, IL-17A, 특히, 인간 IL-17A에 높은 친화도 및 특이성으로 결합하는 항체 및 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 특정 실시태양에서, 항-IL-17A 항체 또는 그의 단편은 IL-17A 연관 질환 및/또는 염증성 질환, 예를 들어, 자가면역 질환, 예를 들어, 관절염 (류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 루푸스 연관 관절염 또는 강직성 척추염 포함), 경피증, 전신 홍반성 루푸스, HIV, 쇼그렌 증후군, 혈관염, 다발성 경화증, 자가면역 갑상선염, 피부염 (아토피성 피부염 및 습진성 피부염 포힘), 중증 근무력증, 염증성 장 질병 (IBD), 크론병, 결장염, 당뇨병 (타입 I); 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염) 및 췌장 (예를 들어, 췌장염)의 염증성 병태; 심혈관 질환, 예를 들어, 콜레스테롤 대사 질환, 산소 유리 라디칼 손상, 허혈; 상처 치유와 연관된 질환; 호흡기 질환, 예를 들어, 천식 및 COPD (예를 들어, 낭성 섬유증); 급성 염증성 병태 (예를 들어, 내독소혈증, 패혈증 및 패혈병, 독성 쇼크 증후군 및 감염성 질병); 이식 거부 및 알레르기의 진단, 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 한 실시태양에서, IL-17A 연관 질환은 관절염 질환, 예를 들어 류마티스 관절염, 연소성 류마티스 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 또는 강직성 척추염 중의 하나 이상으로부터 선택되는 질환; 호흡기 질환 (예를 들어, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 또는 염증성 병태, 예를 들어, 피부 (예를 들어, 건선), 심혈관계 (예를 들어, 죽상경화증), 신경계 (예를 들어, 알츠하이머병), 간 (예를 들어, 간염), 신장 (예를 들어, 신장염), 췌장 (예를 들어, 췌장염), 및 위장관 장기의 염증성 병태, 예를 들어, 결장염, 크론병 및 IBD이다.
용어 "IL-17A"는 IL-17 시토킨을 나타내고, 하나 이상의 하기 특징을 갖는다: (1) 천연 생성 포유동물 IL-17A 폴리펩티드 (전장 또는 성숙 형태)의 아미노산 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 14로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편; (2) 서열 14로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 아미노산 서열; (3) 천연 생성 포유동물 IL-17A 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편 (예를 들어, 서열 13 또는 그의 단편)에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (4) 서열 13으로 나타낸 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편과 실질적으로 동일한, 예를 들어 적어도 85％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; (5) 천연 생성 IL-17A 뉴클레오티드 서열 또는 그의 단편, 예를 들어, 서열 13 또는 그의 단편에 대해 축퇴성인 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열; 또는 (6) 엄격한 조건, 예를 들어, 고도의 엄격한 조건 하에서 서열 13과 혼성화하는 뉴클레오티드 서열.
용어 "시토킨 활성"은, 일반적으로 사용되거나 또는 특정 시토킨, 예를 들어 IL-22, IL-17A, IL-1F6, IL-1F8 또는 IL-1F9 (이로 제한되지 않음)에 적용되거나에 상관없이, 세포 상의 그의 수용체(들)에 대한 시토킨의 결합의 결과로서 개시되거나 방해되는 적어도 하나의 세포 과정을 의미한다. IL-22에 대한 시토킨 활성은 다음 중 적어도 하나를 포함하고, 이로 제한되지 않는다: (1) 세포 수용체 서브유닛 또는 복합체, 예를 들어 IL-22R1, IL-10R2, 또는 IL-22R1/IL-10R2에 대한 결합; (2) 신호전달 분자 (예를 들어, JAK-1)와의 회합; (3) STAT 단백질 (예를 들어, STAT5, STAT3, 또는 그의 조합물)의 인산화 자극; (4) STAT 단백질의 활성화; (5) 급성기 반응물 (예를 들어, 혈청 아밀로이드 A, 피브리노겐, 합토글로빈, 또는 혈청 알부민) 및 세포 (예를 들어, 호중구, 혈소판, 또는 적혈구)의 조절을 포함하여 급성기 반응을 표시하는 파라미터의 유도; 및 (6) 상피세포, 섬유모세포, 또는 면역 세포의 증식, 분화, 효과기 세포 기능, 세포용해 활성, 시토킨 분비, 생존, 또는 그의 조합의 조절 (예를 들어, 증가 또는 감소). 상피세포는 피부, 소화관, 간, 및 신장의 피부, 및 내피 세포를 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 섬유모세포는 활막 섬유모세포를 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 면역 세포는 CD8+ 및 CD4+ T 세포, NK 세포, B 세포, 대식세포, 거핵구, 및 특화된 (specialized) 또는 조직 면역 세포, 예를 들어 염증 조직에서 발견되는 세포 또는 IL-22 수용체를 발현하는 세포를 포함할 수 있다.
IL-17A 및 IL-17F에 대한 시토킨 활성은 다음 중 적어도 하나를 포함하고, 이로 제한되지 않는다: (1) 세포 수용체, 예를 들어 IL-17R, IL-17A, IL-17RC, IL-17RH1, IL-17RL, IL-17RD, 또는 IL-17RE에 대한 결합; (2) 혈관신생의 억제; (3) 조혈 세포 또는 연골, 뼈, 반월판, 뇌, 신장, 폐, 피부 및 장에 존재하는 세포의 증식, 분화, 효과기 세포 기능, 세포용해 활성, 시토킨 분비, 생존, 또는 그의 조합의 조절 (예를 들어, 증가 또는 감소); (4) IL-6 및/또는 IL-8의 생산 유도; 및 (5) 산화질소 생산의 자극.
예를 들어 두 상태 사이의 정량적 차이를 나타내는 용어 "유도하다", "감소시키다", "억제하다", "증강시키다", "상승시키다", "증가시키다", "감소시키다" 등은 두 상태 사이의 적어도 통계상 유의한 차이를 의미한다.
용어 "특이적인 결합" 또는 "특이적으로 결합하다"는 생리학적 조건 하에서 비교적 안정한 복합체를 형성하는 2개의 분자를 의미한다. 특이적 결합은 보통 중간 정도 내지 고도의 능력과 함께 친화도가 낮은 비특이적 결합과 구별되는, 낮은 정도 내지 중간 정도의 능력 및 고친화도를 특징으로 한다. 일반적으로, 결합은 회합 상수 KA가 106 M-1보다 높은 경우 특이적인 것으로서 간주된다. 필요한 경우, 비특이적 결합은 결합 조건을 다양하게 하여 실질적으로 특이적인 결합에 영향을 주지 않고 감소될 수 있다. 항체의 농도, 용액의 이온 강도, 온도, 결합을 위해 허용되는 시간, 차단제 (예를 들어, 혈청 알부민, 우유 카제인)의 농도 등과 같은 적절한 결합 조건은 통상적인 기술을 사용하여 당업자에 의해 최적화될 수 있다.
용어 "특이적 결합제"는 표적에 특이적으로 결합하는 천연 또는 비-천연 분자를 의미한다. 특이적 결합제의 예는 단백질, 펩티드, 핵산, 탄수화물, 지질, 및 소분자 화합물을 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 특정 실시태양에서, 특이적 결합제는 항체이다. 특정 실시태양에서, 특이적 결합제는 항원 결합 구역이다.
용어 "구조"는 생물학적 물질의 구조 (비제한적인 예로서, 항체 및 그의 단편) 및 소분자를 모두 포함한다.
용어 "항체"는 면역글로불린 또는 그의 단편, 예를 들어 전체 항체의 변형에 의해 생산될 수 있는 Fab, Fab', F(ab')2, Fc, Fd, Fd', Fv, 단일쇄 항체 (예를 들어 scFv), 단일 가변 도메인 항체 (Dab), 디아바디 (diabody) (2가 및 이중특이적), 및 키메라 (chimera) (예를 들어, 인간화) 항체, 또는 재조합 DNA 기술을 사용하여 새로 합성된 것을 의미한다. 이들 기능성 항체 단편은 그 각각의 항원 또는 수용체에 선택적으로 결합하는 능력을 보유한다. 항체 및 항체 단편은 IgG, IgA, IgM, IgD, 및 IgE를 포함하고, 이로 제한되지 않는 임의의 항체 클래스, 및 항체의 임의의 하위클래스 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4)일 수 있다. 본 발명의 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날 항체일 수 있다. 또한, 항체는 단일특이적, 다중특이적, 비-특이적, 인간화, 인간, 단일쇄, 키메라, 합성, 재조합, 하이브리드, 돌연변이된, CDR-그라프팅된 및/또는 시험관 내에서 생성된 항체일 수 있다. 항체는 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4로부터 선택된 중쇄 불변 구역을 가질 수 있다. 또한, 항체는 예를 들어 카파 또는 람다로부터 선택된 경쇄를 가질 수 있다. 항체의 불변 구역은 항체의 특성을 변경하기 위해서 (예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과기 세포 기능, 또는 보체 기능 중의 하나 이상의 증가 또는 감소를 위해) 변경, 예를 들어, 돌연변이될 수 있다. 일반적으로, 항체는 소정의 항원, 예를 들어 질환, 예를 들어 신경변성, 대사, 염증성, 자가면역 및/또는 악성 질환에 연관된 항원에 특이적으로 결합한다. 단어 "무손상"이 앞에 오지 않으면, 용어 "항체"는 완전 항체 분자 이외에, 항체 단편, 예를 들어 Fab, F(ab')2, Fv, scFv, Fd, dAb, 및 항원-결합 기능을 보유하는 다른 항체 단편을 포함한다. 일반적으로, 상기 단편은 항원-결합 도메인을 포함한다.
항체는 각각 면역글로불린 중쇄 및 경쇄를 형성하기 위해 중쇄 및 경쇄 불변 구역을 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시태양에서, 항체는 2개의 면역글로불린 중쇄 및 2개의 면역글로불린 경쇄로 구성된 사량체이고, 여기서 면역글로불린 중쇄 및 경쇄는 예를 들어 디술피드 결합에 의해 서로 연결된다. 중쇄 불변 구역은 CH1, CH2 및 CH3의 3개의 도메인으로 이루어진다. 경쇄 불변 구역은 CL의 1개의 도메인으로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄의 가변 구역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 포함한다. 항체의 불변 구역은 일반적으로 항체의 숙주 조직 또는 인자, 예를 들어 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 효과기 세포) 및 전통적인 보체 시스템의 제1 성분 (C1q)에 대한 결합을 매개한다.
용어 "항원-결합 도메인" 및 "항원 결합 단편"은 항체와 항원 사이의 특이적인 결합을 담당하는 아미노산을 포함하는 항체 분자를 의미한다. 항체에 의해 특이적으로 인식되고 결합되는 항원 부분은 "에피토프"로서 언급된다. 항원 결합 도메인은 항체 경쇄 가변 구역 (VL) 및 항체 중쇄 가변 구역 (VH)을 포함할 수 있지만 둘다를 포함할 필요는 없다. 예를 들어, Fd 단편은 2개의 VH 구역을 갖고 종종 무손상 항원 결합 도메인의 일부 항원 결합 기능을 보유한다. 항체의 항원 결합 단편의 예는 (1) VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 갖는 1가 단편인 Fab 단편; (2) 힌지 구역에서 디술피드 다리에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 갖는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (3) 2개의 VH 및 CH1 도메인을 갖는 Fd 단편; (4) 항체의 단일 아암 (arm)의 VL 및 VH 도메인을 갖는 Fv 단편, (5) VH 도메인을 갖는 dAb 단편 (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); (6) 단리된 상보성 결정 구역 (CDR) 및 (7) 단일쇄 Fv (scFv)를 포함한다. Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH가 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들이 단일 단백질 사슬로서 제조될 수 있도록 하는 합성 링커에 의한 재조합 방법을 사용하여 이들은 연결될 수 있고, 이때, VL 및 VH 구역은 쌍을 이루어 1가 분자 (단일쇄 Fv (scFv)로서 공지됨; 예를 들어 문헌 [Bird et al. (1988) Science 242:423-426]; 및 [Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조)를 형성한다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득되고, 단편은 무손상 항체에 대한 것과 동일한 방식으로 기능에 대해 평가한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "면역글로불린"은 실질적으로 면역글로불린 유전자에 의해 코딩되는 하나 이상의 폴리펩티드로 구성되는 단백질을 의미한다. 인식되는 인간 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파 (IgA1 및 IgA2), 감마 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타, 엡실론 및 뮤 불변 구역 유전자, 및 무수한 면역글로불린 가변 구역 유전자를 포함한다. 전장 면역글로불린 "경쇄" (약 25 Kd 또는 214개의 아미노산)는 NH2-말단의 가변 구역 유전자 (약 110개의 아미노산) 및 COOH-말단의 카파 또는 람다 불변 구역 유전자에 의해 코딩된다. 전장 면역글로불린 "중쇄" (약 50 Kd 또는 446개의 아미노산)는 유사하게 가변 구역 유전자 (약 116개의 아미노산) 및 다른 상기한 불변 구역 유전자 중의 하나, 예를 들어, 감마 (약 330개의 아미노산을 코딩)에 의해 코딩된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "이소형"은 중쇄 불변 구역 유전자에 의해 코딩되는 항체 클래스 (예를 들어, IgM 또는 IgG1)를 의미한다.
용어 "인간 항체"는 예를 들어 카바트(Kabat) 등의 문헌 [Kabat, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242]에 기재된 것들을 포함하여 당업자에게 공지된 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 실질적으로 대응하는 가변 및 불변 구역을 갖는 항체를 포함한다. 특정 실시태양에서, 인간 항체는 예를 들어 CDR, 특히 CDR3에서 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관 내에서 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이 유발 또는 생체 내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기로 대체된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 이상의 위치를 가질 수 있다.
용어 "단리된"은 그의 천연 환경으로부터 실질적으로 유리된 분자를 의미한다. 예를 들어, 단리된 단백질에는 이것이 유래되는 세포 또는 조직 공급원의 세포 물질 또는 다른 단백질이 실질적으로 존재하지 않는다. 이 용어는 또한 단리된 단백질이 제약 조성물용으로 충분히 순수하거나; 또는 적어도 70-80％ (w/w) 순수하거나, 적어도 80-90％ (w/w) 순수하거나, 적어도 90-95％ 순수하거나, 적어도 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 100％ (w/w) 순수한 제제를 의미한다.
용어 "치료제"는 의학적 질환을 치료하거나 이의 치료를 돕는 물질이다. 치료제는 항-IL-22 항체의 IL-22 활성을 보완하는 방식으로 면역 세포 또는 면역 반응을 조절하는 물질을 포함하고, 이로 제한되지 않는다. 치료제의 비제한적인 예 및 용도는 본원에 기재되어 있다.
용어 "치료"는 치료 또는 예방 수단을 의미한다. 치료제는 의학적 질환을 갖는 대상 또는 궁극적으로 질환에 걸릴 수 있는 대상에 투여하여 질환 또는 재발성 질환의 하나 이상의 증상을 예방하거나, 치유하거나, 지연시키거나, 심도를 감소시키고/시키거나 개선할 수 있거나 또는 상기 치료제의 부재시 예상되는 것보다 대상의 수명을 연장시킬 수 있다.
용어 "유효량"은 임상 증상을 개선하거나 요구되는 생물학적 결과, 예를 들어, 감소된 T 세포 및/또는 B 세포 활성, 자가면역성의 억제, 이식 거부의 억제 등을 달성하기 위해 활성을 조절하기에 충분한 용량 또는 양을 의미한다.
두 물질을 사용한 치료의 맥락에서 용어 "조합으로"는 동시에 또는 순차적으로 실질적으로 동시에 투여된다. 순차적으로 투여될 경우, 제2 화합물의 투여 개시시에, 두 화합물 중의 제1 화합물은 치료 부위에 유효 농도로 계속 검출가능한 것이 바람직하다.
구문 "동일한 비율" 또는 "동일성 비율"은 적어도 2개의 상이한 서열 사이의 유사성을 의미한다. 상기 동일성 비율은 표준 정렬 알고리즘, 예를 들어 문헌 [Altshul et al. (1990) J. Mol. Biol., 215: 403-410]에 기재된 Basic Local Alignment Tool (BLAST); 문헌 [Needleman et al. (1970) J. Mol. Biol., 48: 444-453]의 알고리즘; 또는 문헌 [Meyers et al. (1988) Comput. Appl. Biosci., 4: 11-17]의 알고리즘에 의해 결정할 수 있다. 파라미터 세트는 갭 페널티가 12이고 갭 연장 페널티가 4이며 판독 전이 갭 페널티가 5인 Blosum 62 스코어링 매트릭스일 수 있다. 2개의 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열 사이의 동일성 비율은 또한 PAM120 가중 잔기 표를 사용하고 갭 길이 페널티가 12이고 갭 페널티가 4인 ALIGN 프로그램 (버젼 2.0)에 도입된 문헌 [E. Meyers and W. Miller (1989) CABIOS, 4:11-17]의 알고리즘을 사용하여 측정될 수 있다. 동일성 비율은 대체로 유사한 길이의 서열을 비교함으로서 계산된다.
특정 실시태양에서, 개시된 서열에 유사한 또는 상동성 (예를 들어, 적어도 약 85％의 서열 동일성)인 서열이 제공된다. 특정 실시태양에서, 서열 동일성은 약 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％ 이상일 수 있다. 별법으로, 실질적인 동일성은 핵산 세그먼트가 선택적 혼성화 조건 (예를 들어, 고도의 엄격한 혼성화 조건) 하에서 가닥의 보체에 혼성화할 때 존재한다. 핵산은 전체 세포에, 세포 용해물에, 또는 부분적으로 정제된 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다.
단리된 폴리뉴클레오티드는 개시된 폴리뉴클레오티드를 코딩하는 것과 동일하거나 유사한 서열을 갖는 핵산의 확인 및 단리를 위한 혼성화 프로브 및 프라이머로서 사용될 수 있다. 상기 방식으로 단리된 폴리뉴클레오티드는 예를 들어 IL-22 또는 다른 IL-10-유사 시토킨에 대한 항체를 생산하거나 또는 상기 항체를 발현하는 세포를 확인하기 위해 사용될 수 있고, 이로 제한되지 않는다. 핵산을 확인하고 단리하기 위한 혼성화 방법은 서던 (Southern) 혼성화, 계내 (in situ) 혼성화 및 노던 (Northern) 혼성화를 포함하고, 당업자에게 공지되어 있다.
혼성화 반응은 상이한 엄격성 조건 하에 수행할 수 있다. 바람직하게는, 각각의 혼성화 폴리뉴클레오티드는 감소된 엄격한 조건, 보다 바람직하게는 엄격한 조건, 가장 바람직하게는 고도의 엄격한 조건 하에 그의 대응하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화한다. 엄격한 조건의 예는 하기 표 1에 제시되고, 고도의 엄격한 조건은 적어도 예를 들어 조건 A-F만큼 엄격하고; 엄격한 조건은 적어도 예를 들어 조건 G-L만큼 엄격하고; 감소된 엄격한 조건은 적어도 예를 들어 조건 M-R만큼 엄격하다.
Figure pct00001
1 하이브리드 길이는 혼성화하는 폴리뉴클레오티드의 혼성화된 구역(들)에 대해 예상된 것이다. 폴리뉴클레오티드를 미지 서열의 표적 폴리뉴클레오티드에 혼성화시킬 때, 하이브리드 길이는 혼성화하는 폴리뉴클레오티드의 길이로 가정된다. 기지 서열의 폴리뉴클레오티드가 혼성화될 때, 하이브리드 길이는 폴리뉴클레오티드의 서열을 정렬하고 최적 서열 상보성의 구역 또는 구역들을 확인함으로써 결정될 수 있다.
2 SSPE (1xSSPE는 0.15 M NaCl, 10 mM NaH2PO4, 및 1.25 mM EDTA, pH 7.4이다)가 혼성화 및 세척 버퍼 내의 SSC (1xSSC는 0.15 M NaCl 및 15 mM 시트르산나트륨이다)를 대체할 수 있고; 세척은 혼성화 완료 후에 15분 동안 수행된다.
TB * - TR *: 길이가 50 염기쌍 미만인 것으로 예상되는 하이브리드에 대한 혼성화 온도는 하이브리드의 융점 (Tm)보다 5-10℃ 더 낮아야 하고, 여기서 Tm은 다음 식에 따라 결정된다. 길이가 18 염기쌍 미만인 하이브리드의 경우, Tm(℃) = 2(A + T 염기의 #) + 4(G + C 염기의 #). 길이가 18 내지 49 염기쌍인 하이브리드의 경우, Tm(℃) = 81.5 + 16.6(log10Na+) + 0.41(％G + C) - (600/N) (여기서, N은 하이브리드 내의 염기의 수이고, Na+은 혼성화 버퍼 내의 나트륨 이온의 농도이다 (1X SSC의 Na+ = 0.165 M).
폴리뉴클레오티드 혼성화에 대한 엄격한 조건의 추가의 예는 본원에 참고로 포함되는 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Chs. 9 & 11, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)], 및 [Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Sects. 2.10 & 6.3-6.4, John Wiley & Sons, Inc. (1995)]에 제시되어 있다.
단리된 폴리뉴클레오티드는 개시된 폴리뉴클레오티드의 대립유전자 변이체를 코딩하는 서열을 갖는 DNA의 확인 및 단리를 위한 혼성화 프로브 및 프라이머로서 사용될 수 있다. 대립유전자 변이체는 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드와 동일하거나 유의한 유사성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 개시된 폴리뉴클레오티드의 천연 생성 대체 형태이다. 바람직하게는, 대립유전자 변이체는 개시된 폴리뉴클레오티드와 적어도 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 서열 동일성을 갖는다.
또한, 단리된 폴리뉴클레오티드는 개시된 폴리뉴클레오티드에 상동성인 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 갖는 DNA의 확인 및 단리를 위한 혼성화 프로브 및 프라이머로서 사용될 수 있다. 상기 상동체는 개시된 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드와 상이한 종으로부터, 또는 동일한 종 내에서 단리되지만, 개시된 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드에 유의한 서열 유사성을 갖는 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드이다. 특정 실시태양에서, 폴리뉴클레오티드 상동체는 개시된 폴리뉴클레오티드와 적어도 50％, 75％, 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성을 갖지만, 폴리펩티드 상동체는 개시된 항체/폴리펩티드와 적어도 30％, 45％, 또는 60％의 동일성을 갖는다. 특정 실시태양에서, 개시된 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 상동체는 포유동물 종으로부터 단리된 것이다.
또한, 단리된 폴리뉴클레오티드는 항체를 포함하여 단백질을 발현하는 세포 및 조직 및 이들이 발현되는 조건을 확인하기 위한 혼성화 프로브 및 프라이머로서 사용될 수 있다.
폴리펩티드 및 길항제, 예를 들어, 항체에는 그들의 기능에 대해 실질적인 효과를 갖지 않는 추가의 보존적 또는 비-필수적 아미노산 치환이 존재할 수 있음이 이해된다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에서 규정되었다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄 (예를 들어, 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다.
IL-22 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 미국 특허 7,307,161에 기재되어 있고, 아래에 제공된다. 또한, 각각의 클론의 뉴클레오티드 서열은 공지의 방법에 따라 기탁된 클론의 서열을 결정함으로써 결정될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "분비된" 단백질은 적합한 숙주 세포에서 발현될 때 그의 아미노산 서열 내의 신호 서열에 의한 수송을 포함하여 막을 가로지르거나 막을 통해 수송되는 것이다. "분비된" 단백질은 그가 발현되는 세포로부터 완전히 (예를 들어, 가용성 단백질) 또는 부분적으로 (예를 들어, 수용체) 분비된 단백질을 포함하고 이로 제한되지 않는다. "분비된" 단백질은 또한 소포체의 막을 가로질러 수송되는 단백질을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
전장보다 작은 임의의 형태의 IL-22 단백질이 본 발명의 청구 범위의 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. IL-22 단편, 예를 들어 전장보다 작은 IL-22 단백질은 숙주 세포에서 전장 IL-22 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 대응하는 단편을 발현시킴으로써 생산될 수 있다. 상기 설명된 변형된 폴리뉴클레오티드는 표준 분자 생물학 기술, 예를 들어 적절한 요구되는 결실 돌연변이체의 제조, 부위 지정 돌연변이 유발 방법에 의해, 또는 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 중합효소 연쇄 반응에 의해 제조할 수 있다.
전장보다 작은 임의의 형태의 IL-1F6 단백질이 본원의 청구범위의 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. IL-1F6 단편, 예를 들어 전장보다 작은 IL-1F6 단백질은 숙주 세포에서 전장 IL-F6 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 대응하는 단편을 발현시킴으로써 생산될 수 있다. 상기 설명된 변형된 폴리뉴클레오티드는 표준 분자 생물학 기술, 예를 들어 적절한 요구되는 결실 돌연변이체의 제조, 부위 지정 돌연변이 유발 방법에 의해, 또는 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 중합효소 연쇄 반응에 의해 제조할 수 있다.
전장보다 작은 임의의 형태의 IL-1F8 단백질이 본 발명의 청구 범위의 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. IL-1F8 단편, 예를 들어 전장보다 작은 IL-1F8 단백질은 숙주 세포에서 전장 IL-1F8 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 대응하는 단편을 발현시킴으로써 생산될 수 있다. 상기 설명된 변형된 폴리뉴클레오티드는 표준 분자 생물학 기술, 예를 들어 적절한 요구되는 결실 돌연변이체의 제조, 부위 지정 돌연변이 유발 방법에 의해, 또는 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 중합효소 연쇄 반응에 의해 제조할 수 있다.
전장보다 작은 임의의 형태의 IL-1F9 단백질이 본 발명의 청구 범위의 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. IL-1F9 단편, 예를 들어 전장보다 작은 IL-1F9 단백질은 숙주 세포에서 전장 IL-1F9 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 대응하는 단편을 발현시킴으로써 생산될 수 있다. 상기 설명된 변형된 폴리뉴클레오티드는 표준 분자 생물학 기술, 예를 들어 적절한 요구되는 결실 돌연변이체의 제조, 부위 지정 돌연변이 유발 방법에 의해, 또는 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 중합효소 연쇄 반응에 의해 제조할 수 있다.
전장보다 작은 임의의 형태의 IL-1Rrp2 단백질이 본 발명의 청구 범위의 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. IL-1Rrp2 단편, 예를 들어 전장보다 작은 IL-1Rrp2 단백질은 숙주 세포에서 전장 IL-1Rrp2 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 대응하는 단편을 발현시킴으로써 생산될 수 있다. 상기 설명된 변형된 폴리뉴클레오티드는 표준 분자 생물학 기술, 예를 들어 적절한 요구되는 결실 돌연변이체의 제조, 부위 지정 돌연변이 유발 방법에 의해, 또는 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 중합효소 연쇄 반응에 의해 제조할 수 있다.
전장보다 작은 임의의 형태의 IL-17A 단백질이 본 발명의 청구 범위의 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. IL-17A 단편, 예를 들어 전장보다 작은 IL-17A 단백질은 숙주 세포에서 전장 IL-17A 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 대응하는 단편을 발현시킴으로써 생산될 수 있다. 상기 설명된 변형된 폴리뉴클레오티드는 표준 분자 생물학 기술, 예를 들어 적절한 요구되는 결실 돌연변이체의 제조, 부위 지정 돌연변이 유발 방법에 의해, 또는 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 중합효소 연쇄 반응에 의해 제조할 수 있다.
단백질의 단편은 선형 형태일 수 있거나, 또는 예를 들어 모두 본원에 참고로 포함되는 문헌 [H.U. Saragovi, et al., Bio/Technology 10, 773-778 (1992)] 및 [R.S. McDowell, et al., J. Amer. Chem. Soc. 114, 9245-9253 (1992)]에 기재된 공지의 방법을 사용하여 고리화될 수 있다. 그러한 단편은 단백질 결합 부위의 수를 증가시키는 것을 포함하는 많은 목적을 위해 담체 분자, 예를 들어 면역글로불린에 융합될 수 있다. 예를 들어, 단백질의 단편은 "링커" 서열을 통해 면역글로불린의 Fc 부분에 융합될 수 있다. 단백질의 2가 형태를 위해, 융합은 IgG 분자의 Fc 부분에서 이루어질 수 있다. 다른 면역글로불린 이소형이 상기 융합체를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 단백질-IgM 융합체를 사용하여 10가 형태의 단백질을 생성할 수 있다.
IL-22 단백질 및 그의 단편은 아미노산 서열 길이가 개시된 단백질의 길이의 적어도 25％ (보다 바람직하게는 적어도 50％, 가장 바람직하게는 적어도 75％)인 단백질을 포함하고, 개시된 단백질과 적어도 60％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는, 단편의 길이를 따라 적어도 75％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％의 동일성)을 갖고, 여기서 서열 동일성은 서열 갭을 최소화하면서 중첩과 동일성을 최대화하도록 정렬될 때 단백질의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된다. 특정 실시태양에서, 단백질 및 단백질 단편은 임의의 개시된 단백질의 임의의 상기 세그먼트와 적어도 75％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는 적어도 85％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성)을 공유하는 8개 이상의 (보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 30개 이상의) 연속적인 아미노산을 포함하는 세그먼트를 함유한다.
IL-1F6 단백질 및 그의 단편은 아미노산 서열 길이가 개시된 단백질의 길이의 적어도 25％ (보다 바람직하게는 적어도 50％, 가장 바람직하게는 적어도 75％)인 단백질을 포함하고, 개시된 단백질과 적어도 60％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는, 단편의 길이를 따라 적어도 75％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％의 동일성)을 갖고, 여기서 서열 동일성은 서열 갭을 최소화하면서 중첩과 동일성을 최대화하도록 정렬될 때 단백질의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된다. 특정 실시태양에서, 단백질 및 단백질 단편은 임의의 개시된 단백질의 임의의 상기 세그먼트와 적어도 75％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는 적어도 85％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성)을 공유하는 8개 이상의 (보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 30개 이상의) 연속적인 아미노산을 포함하는 세그먼트를 함유한다.
IL-1F8 단백질 및 그의 단편은 아미노산 서열 길이가 개시된 단백질의 길이의 적어도 25％ (보다 바람직하게는 적어도 50％, 가장 바람직하게는 적어도 75％)인 단백질을 포함하고, 개시된 단백질과 적어도 60％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는, 단편의 길이를 따라 적어도 75％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％의 동일성)을 갖고, 여기서 서열 동일성은 서열 갭을 최소화하면서 중첩과 동일성을 최대화하도록 정렬될 때 단백질의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된다. 특정 실시태양에서, 단백질 및 단백질 단편은 임의의 개시된 단백질의 임의의 상기 세그먼트와 적어도 75％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는 적어도 85％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성)을 공유하는 8개 이상의 (보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 30개 이상의) 연속적인 아미노산을 포함하는 세그먼트를 함유한다.
IL-1F9 단백질 및 그의 단편은 아미노산 서열 길이가 개시된 단백질의 길이의 적어도 25％ (보다 바람직하게는 적어도 50％, 가장 바람직하게는 적어도 75％)인 단백질을 포함하고, 개시된 단백질과 적어도 60％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는, 단편의 길이를 따라 적어도 75％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％의 동일성)을 갖고, 여기서 서열 동일성은 서열 갭을 최소화하면서 중첩과 동일성을 최대화하도록 정렬될 때 단백질의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된다. 특정 실시태양에서, 단백질 및 단백질 단편은 임의의 개시된 단백질의 임의의 상기 세그먼트와 적어도 75％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는 적어도 85％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성)을 공유하는 8개 이상의 (보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 30개 이상의) 연속적인 아미노산을 포함하는 세그먼트를 함유한다.
IL-1Rrp2 단백질 및 그의 단편은 아미노산 서열 길이가 개시된 단백질의 길이의 적어도 25％ (보다 바람직하게는 적어도 50％, 가장 바람직하게는 적어도 75％)인 단백질을 포함하고, 개시된 단백질과 적어도 60％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는, 단편의 길이를 따라 적어도 75％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％의 동일성)을 갖고, 여기서 서열 동일성은 서열 갭을 최소화하면서 중첩과 동일성을 최대화하도록 정렬될 때 단백질의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된다. 특정 실시태양에서, 단백질 및 단백질 단편은 임의의 개시된 단백질의 임의의 상기 세그먼트와 적어도 75％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는 적어도 85％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성)을 공유하는 8개 이상의 (보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 30개 이상의) 연속적인 아미노산을 포함하는 세그먼트를 함유한다.
IL-17A 단백질 및 그의 단편은 아미노산 서열 길이가 개시된 단백질의 길이의 적어도 25％ (보다 바람직하게는 적어도 50％, 가장 바람직하게는 적어도 75％)인 단백질을 포함하고, 개시된 단백질과 적어도 60％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는, 단편의 길이를 따라 적어도 75％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 90％, 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％, 또는 100％의 동일성)을 갖고, 여기서 서열 동일성은 서열 갭을 최소화하면서 중첩과 동일성을 최대화하도록 정렬될 때 단백질의 아미노산 서열을 비교함으로써 결정된다. 특정 실시태양에서, 단백질 및 단백질 단편은 임의의 개시된 단백질의 임의의 상기 세그먼트와 적어도 75％의 서열 동일성 (보다 바람직하게는 적어도 85％의 동일성; 가장 바람직하게는 적어도 91％, 92％, 93％, 94％, 95％, 96％, 97％, 98％, 또는 99％의 동일성)을 공유하는 8개 이상의 (보다 바람직하게는 20개 이상, 가장 바람직하게는 30개 이상의) 연속적인 아미노산을 포함하는 세그먼트를 함유한다.
재조합 폴리뉴클레오티드는 단백질을 재조합 방식으로 생산하기 위해 발현 제어 서열, 비제한적인 예를 들어 문헌 [Kaufman et al., Nucleic Acids Res. 19, 4485-4490 (1991)]에 개시된 pMT2 또는 pED 발현 벡터에 작동가능하게 연결될 수 있다. 많은 적합한 발현 제어 서열이 당업계에 공지되어 있다. 또한, 재조합 단백질을 발현하는 일반적인 방법이 공지되어 있고, 문헌 [R. Kaufman (1990) Methods in Enzymology 185, 537-566]에 예시되어 있다. 본원에서 규정되는 바와 같이, "작동가능하게 연결된"은 라이게이션된 폴리뉴클레오티드/발현 제어 서열로 형질전환된 (형질감염된) 숙주 세포에 의해 단백질이 발현되도록, 단리된 폴리뉴클레오티드 및 발현 제어 서열이 벡터 또는 세포 내에 위치함을 의미한다.
용어 "벡터"는 본원에서 사용되는 바와 같이 그가 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 나타내고자 한 것이다. 벡터의 한 종류는 추가의 DNA 세그먼트가 그 내부에 라이게이션될 수 있는 환상 이중가닥 DNA 루프를 의미하는 "플라스미드"이다. 다른 종류의 벡터는 추가의 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈 내로 라이게이션될 수 있는 바이러스 벡터이다. 특정 벡터는 벡터가 그 내부에 도입되는 숙주 세포에서 자동 복제할 수 있다 (예를 들어, 세균 복제 기점을 갖는 세균 벡터 및 에피좀 포유동물 벡터). 다른 벡터 (예를 들어, 비-에피좀 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로 도입시에 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있고, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 또한, 특정 벡터는 벡터가 작동가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" (또는 간단히 "발현 벡터")로 언급된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태로 존재한다.
본원에서 사용될 때 용어 "조절 서열"은 프로모터, 인핸서 및 항체 사슬 유전자의 전사 또는 번역을 제어하는 다른 발현 제어 요소 (예를 들어, 폴리아데닐화 신호)를 포함한다. 상기 조절 서열은 예를 들어 문헌 [Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)]에 기재되어 있다. 당업자는 조절 서열의 선택을 포함하는 발현 벡터의 설계가 형질전환되는 숙주 세포의 선택, 요구되는 단백질의 발현 수준 등과 같은 요인에 따라 결정될 수 있음을 이해할 것이다. 포유동물 숙주 세포 발현에 대한 조절 서열은 포유동물 세포에서 단백질 발현의 높은 수준을 지시하는 바이러스 요소, 예를 들어 FF-1a 프로모터 및 BGH 폴리A, 사이토메갈로바이러스 (CMV) (예를 들어, CMV 프로모터/인핸서), 원숭이 바이러스 40 (SV40) (예를 들어 SV40 프로모터/인핸서), 아데노바이러스, (예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터 (AdMLP)) 및 폴리오마로부터 유도된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 바이러스 조절 요소, 및 그의 서열의 추가의 설명에 대해서는, 예를 들어, 미국 특허 5,168,062 (Stinski), 미국 특허 4,510,245 (Bell et al.) 및 미국 특허 4,968,615 (Schaffner et al.)를 참조한다.
특정 실시태양에서, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열 (예를 들어, 복제 기점) 및 선택가능한 마커 유전자와 같은 추가의 서열을 보유할 수 있다. 선택가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다 (예를 들어, 미국 특허 4,399,216, 4,634,665 및 5,179,017 (모두 Axel et al.) 참조). 예를 들어, 일반적으로 선택가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에 약물, 예를 들어 G418, 히그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한다. 선택가능한 마커 유전자는 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 유전자 (메토트렉세이트 선택/증폭과 함께 dhfr 숙주 세포에 사용하기 위한) 및 neo 유전자 (G418 선택을 위한)를 포함한다.
많은 종류의 세포가 단백질 (또는 융합 단백질)의 발현을 위한 적합한 숙주 세포로서 작용할 수 있다. 기능성 IL-22 단백질을 발현할 수 있는 임의의 세포 종류가 사용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포는 예를 들어 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 인간 신장 293 세포, 인간 표피 A431 세포, 인간 Colo205 세포, 3T3 세포, CV-1 세포, 다른 형질전환된 영장류 세포주, 정상적인 이배체 세포, 1차 조직의 시험관 내 배양액으로부터 유도된 세포 주, 1차 체외이식편 (explant), HeLa 세포, 마우스 L 세포, BHK, HL-60, U937, HaK, Rat2, BaF3, 32D, FDCP-1, PC12, M1x 또는 C2C12 세포를 포함한다.
특정 실시태양에서, 단백질 또는 융합 단백질은 또한 단리된 폴리뉴클레오티드를 하나 이상의 곤충 발현 벡터 내의 적합한 조절 서열에 작동가능하게 연결하고 곤충 발현 시스템을 사용함으로써 생성시킬 수 있다. 바큘로바이러스/곤충 세포 발현 시스템용 물질 및 방법은 키트 형태로, 예를 들어 인비트로겐 (Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌 디에고)으로부터 상업적으로 입수가능하고 (MaxBac® 키트), 그 방법은 본원에 참고로 포함되는 문헌 [Summers and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 (1987)]에 기재된 바와 같이 당업계에 공지되어 있다. 또한, IL-22 단백질의 가용성 형태는 상기한 바와 같이 적절한 단리된 폴리뉴클레오티드를 사용하여 곤충 세포에서 생산될 수 있다.
별법으로, 단백질 또는 융합 단백질은 하등 진핵생물, 예를 들어 효모 또는 원핵생물, 예를 들어 세균에서 생산될 수 있다. 적합한 효모 주는 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae), 쉬조사카로마이세스 폼베 (Schizosaccharomyces pombe), 클루이베로마이세스 (Kluyveromyces) 주, 칸디다 (Candida), 또는 이종성 단백질을 발현할 수 있는 임의의 효모 주를 포함한다. 적합한 세균 균주는 에스체리키아 콜라이 (Escherichia coli), 바실러스 섭틸리스 (Bacillus subtilis), 살모넬라 티피무리움 (Salmonella typhimurium), 또는 이종성 단백질을 발현할 수 있는 임의의 세균 균주를 포함한다.
세균 내의 발현은 재조합 단백질을 포함하는 봉입체를 형성시킬 수 있다. 따라서, 활성 또는 보다 활성의 물질을 생산하기 위해 재조합 단백질의 재폴딩 (refolding)이 필요할 수 있다. 세균 봉입체로부터 정확하게 폴딩된 이종성 단백질을 얻기 위한 몇몇 방법이 당업계에 공지되어 있다. 상기 방법은 일반적으로 봉입체로부터 단백질을 가용화시킨 후, 무질서유발제 (chaotropic agent)를 사용하여 단백질을 완전히 변성시키는 것을 포함한다. 시스테인 잔기가 단백질의 1차 아미노산 서열에 존재할 때, 디술피드 결합의 올바른 형성을 허용하는 환경 (레독스 (redox) 시스템)에서 재폴딩을 달성하는 것이 종종 필요하다. 일반적인 재폴딩 방법은 문헌 [Kohno, Meth. Enzym., 185:187-195 (1990)]에 개시되어 있다. EP 0433225 및 동시 계류중인 미국 특허 출원 08/163,877에는 다른 적절한 방법이 기재되어 있다.
또한, 단백질 또는 융합 단백질은 트랜스제닉 (transgenic) 동물의 생성물로서, 예를 들어 단백질 또는 융합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 체세포 또는 생식 세포를 특징으로 하는 트랜스제닉 소, 염소, 돼지, 또는 양의 젖의 성분으로서 발현될 수 있다.
단백질 또는 융합 단백질은 요구되는 단백질을 발현하기 위해 필요한 배양 조건 하에서 형질전환된 숙주 세포를 성장시킴으로써 제조할 수 있다. 이어서, 생성되는 발현된 단백질을 배양 배지 또는 세포 추출액으로부터 정제할 수 있다. 가용성 형태의 단백질 또는 융합 단백질을 조건화 배지로부터 정제할 수 있다. 특정 실시태양에서, 막-결합 형태의 단백질은 발현 세포로부터 총 막 분획을 제조하고, 비-이온계 세제, 예를 들어 Triton X-100로 막을 추출함으로써 정제될 수 있다.
특정 실시태양에서, 단백질은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 정제될 수 있다. 비제한적인 예를 들어, 단백질은 아미콘 (Amicon) 또는 밀리포어 펠리콘 (Millipore Pellicon) 한외여과 장치를 포함하고 이로 제한되지 않는 상업적으로 입수가능한 단백질 농축 필터를 사용하여 농축될 수 있다. 농축 단계 후에, 농축물을 정제 매트릭스, 예를 들어 겔 여과 매질에 적용할 수 있다. 별법으로, 음이온 교환 수지, 예를 들어 매달린 디에틸아미노에틸 (DEAB) 또는 폴리에틸렌이민 (PEI) 기를 갖는 매트릭스 또는 기재가 사용될 수 있다. 매트릭스는 아크릴아미드, 아가로스, 덱스트란, 셀룰로스 또는 단백질 정제에 통상 사용되는 다른 종류일 수 있다. 별법으로, 양이온 교환 단계가 사용될 수 있다. 적합한 양이온 교환체는 술포프로필 또는 카르복시메틸기를 포함하는 다양한 불용성 매트릭스를 포함한다. 특정 실시태양에서, 술포프로필기가 바람직하다 (예를 들어, S-세파로스® 컬럼). 또한, 배양 상등액으로부터 단백질 또는 융합 단백질의 정제는 친화도 수지, 예를 들어 콘카나발린 A-아가로스, 헤파린-토요펄 (toyopearl)® 또는 시바크롬 블루 (Cibacrom blue) 3GA 세파로스® 상의 하나 이상의 컬럼 단계; 또는 수지, 예를 들어 페닐 에테르, 부틸 에테르, 또는 프로필 에테르를 사용하는 소수성 상호작용 크로마토그래피; 또는 면역친화도 크로마토그래피를 포함할 수 있다. 마지막으로, 소수성 RP-HPLC 매질, 예를 들어, 매달린 메틸 또는 다른 지방족 기를 갖는 실리카 겔을 사용하는 하나 이상의 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC) 단계를 사용하여 단백질을 추가로 정제할 수 있다. 단백질에 대한 항체를 포함하는 친화도 컬럼도 공지의 방법에 따라 정제에 사용될 수 있다. 또한, 상기한 정제 단계의 일부 또는 전부를 다양한 조합으로 또는 다른 공지의 방법과 함께 사용하여 실질적으로 정제된 단리된 재조합 단백질을 제공할 수 있다. 바람직하게는, 단리된 단백질은 실질적으로 다른 포유동물 단백질이 존재하지 않도록 정제된다.
또한, 폴리펩티드는 공지의 통상적인 화학적 합성에 의해 생산될 수 있다. 합성에 의해 단백질을 제조하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 합성에 의해 제조된 단백질 서열은 단백질과 1차, 2차 또는 3차 구조 및/또는 입체형태적 특성을 공유함으로써, 단백질 활성을 포함하여 그와 공통적인 생물학적 특성을 보유할 수 있다. 따라서, 이들은 치료 화합물의 스크리닝 및 항체 개발을 위한 면역학적 과정에서 정제된 천연 단백질의 생물학적 활성 또는 면역학적 대체물로서 사용될 수 있다.
면역글로불린으로도 알려진 항체는 일반적으로 각각 약 25 kDa의 2개의 경쇄 (L) 및 각각 약 50 kDa의 2개의 중쇄 (H)로 이루어진 사량체의 글리코실화된 단백질이다. 람다 및 카파로 언급되는 두 종류의 경쇄가 항체에서 발견될 수 있다. 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린은 5개의 주요 클래스, 즉 A, D, E, G, 및 M으로 분류되고, 이들 중 몇몇은 하위클래스 (이소형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 각각의 경쇄는 N-말단 가변 (V) 도메인 (VL) 및 불변 (C) 도메인 (CL)을 포함한다. 각각의 중쇄는 N-말단 V 도메인 (VH), 3개 또는 4개의 C 도메인 (CH), 및 힌지 구역을 포함한다. VH에 가장 근접한 CH 도메인은 CH1로 지정된다. VH 및 VL 도메인은 초가변 서열 (상보성 결정 구역, 즉 CDR)의 3개의 구역에 대한 스캐폴드 (scaffold)를 형성하는 프레임워크 구역 (FR1, FR2, FR3, 및 FR4)으로 불리는 비교적 보존된 서열의 4개의 구역으로 구성된다. CDR은 항체의 항원과의 특이적인 상호작용을 담당하는 대부분의 잔기를 함유한다. CDR은 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 언급된다. 따라서, 중쇄 상의 CDR 구성 요소는 H1, H2, 및 H3으로 언급되고, 경쇄 상의 CDR 구성 요소는 L1, L2, 및 L3으로 언급된다.
CDR3은 일반적으로 항체-결합 부위 내의 분자 다양성의 가장 큰 공급원이다. H3은 예를 들어 2개의 아미노산 잔기만큼 짧거나 또는 26개의 아미노산을 초과할 수 있다. 면역글로불린의 상이한 클래스의 서브유닛 구조 및 3차원 입체형태는 당업계에 공지되어 있다. 항체 구조에 대해서는, 문헌 [Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, eds. Harlow et al., 1988]을 참조한다. 당업자는 각각의 서브유닛 구조, 예를 들어 CH, VH, CL, VL, CDR, FR 구조가 활성 단편, 예를 들어 항원에 결합하는 VH, VL, 또는 CDR 서브유닛의 일부, 즉, 항원 결합 단편, 또는 예를 들어 Fc 수용체 및/또는 보체에 결합하고/하거나 이를 활성화시키는 CH 서브유닛의 일부를 포함함을 알 것이다. CDR은 일반적으로 문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services (1991), eds. Kabat et al.]에 기재되어 있는 바와 같이 카바트 (Kabat) CDR로 언급된다. 항원 결합 부위의 특성을 결정하기 위한 다른 표준은 코티아 (Chothia)에 의해 초가변 루프로 언급되는 것이다. 예를 들어, 문헌 [Chothia, D. et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817]; 및 [Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628-4638]을 참조한다. 다른 표준은 옥스포드 몰레큘라 (Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용되는 AbM 정의이다. 일반적으로, 예를 들어, 문헌 [Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg)]을 참조한다. 카바트 CDR에 대해 설명되는 실시태양은 별법으로 코티아 초가변 루프 또는 AbM-규정 루프에 대해 설명된 유사한 관계를 사용하여 실행될 수 있다.
Fab 단편 (Fragment antigen-binding)은 불변 구역 사이의 디술피드 결합에 의해 공유 연결된 VH-CH1 및 VL-CL 도메인으로 구성된다. Fv 단편은 보다 작고, 비-공유연결된 VH 및 VL 도메인으로 구성된다. 비-공유연결된 도메인의 해리되는 경향을 극복하기 위해서, 단일쇄 Fv 단편 (scFv)을 제작할 수 있다. scFv는 (1) VH의 C-말단을 VL의 N-말단에, 또는 (2) VL의 C-말단을 VH의 N-말단에 연결하는 가요성 폴리펩티드를 함유한다. 15-mer (Gly4Ser)3 펩티드가 링커로서 사용될 수 있지만, 다른 링커가 당업계에 공지되어 있다.
조립 및 체세포 돌연변이 후의 항체 유전자의 서열은 고도로 변이되고, 이와 같이 변이된 유전자는 1010 개의 상이한 항체 분자를 코딩하는 것으로 추정된다 (Immunoglobulin Genes, 2nd ed., eds. Jonio et al., Academic Press, San Diego, CA, 1995).
당업자에게 공지된 많은 방법이 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 얻기 위해 이용가능하다. 예를 들어, 항체는 재조합 DNA 방법을 사용하여 생산할 수 있다 (미국 특허 4,816,567). 또한, 모노클로날 항체는 공지의 방법에 따라 하이브리도마의 생성에 의해 생산될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Kohler and Milstein (1975) Nature, 256: 495-499] 참조). 이어서, 상기 방식으로 형성된 하이브리도마는 특정 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하는 하나 이상의 하이브리도마를 확인하기 위해 표준 방법, 예를 들어 효소-연결 면역흡착 분석 (ELISA) 및 표면 플라스몬 공명 (BIACORE™) 분석을 사용하여 스크리닝된다. 임의의 형태의 특정 항원은 면역원, 예를 들어, 재조합 항원, 천연 생성 형태, 임의의 변이체 또는 그의 단편, 및 그의 항원성 펩티드로서 사용될 수 있다.
항체의 한 예시적인 제조 방법은 단백질 발현 라이브러리, 예를 들어, 파지 또는 리보좀 디스플레이 라이브러리의 스크리닝을 포함한다. 파지 디스플레이는 예를 들어 미국 특허 5,223,409 (Ladner et al.); 문헌 [Smith (1985) Science 228:1315-1317]; [Clackson et al. (1991) Nature, 352: 624-628]; [Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222: 581-597]; WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/20791; WO 92/15679; WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690; 및 WO 90/02809에 기재되어 있다.
디스플레이 라이브러리의 사용 이외에, 특정 항원이 예를 들어 마우스, 햄스터, 래트, 원숭이, 낙타, 라마, 어류, 상어, 염소, 토끼, 및 소를 포함하고 이로 제한되지 않는 비-인간 동물을 면역화시키기 위해 사용될 수 있다. 특정 실시태양에서, 비-인간 동물은 적어도 인간 면역글로불린 유전자의 일부를 포함한다. 예를 들어, 마우스 항체 생산이 결여된 마우스 주를 인간 Ig 로커스의 큰 단편으로 조작하는 것이 가능하다. 하이브리도마 기술을 사용하여, 요구되는 특이성을 갖는 유전자로부터 유도된 항원-특이적 모노클로날 항체를 생산하고 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, XENOMOUSE™, [Green et al. (1994) Nature Genetics 7:13-21], US 2003-0070185, 1996년 10월 31일 공개된 WO 96/34096, 및 1996년 4월 29일 출원된 PCT 출원 PCT/US96/05928을 참조한다.
특정 실시태양에서, 모노클로날 항체는 예를 들어 마우스, 햄스터, 래트, 원숭이, 낙타, 라마, 어류, 상어, 염소, 토끼, 및 소를 포함하고 이로 제한되지 않는 비-인간 동물로부터 얻은 후, 변형, 예를 들어, 인간화 또는 탈면역화된다. 특정 실시태양에서, 키메라 항체는 당업계에 공지되어 있는 재조합 DNA 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 키메라 항체를 제조하기 위한 다양한 방법이 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81:6851, 1985]; [Takeda et al., Nature 314:452, 1985], 미국 특허 4,816,567 (Cabilly et al.); 미국 특허 4,816,397 (Boss et al.); 유럽 특허 공개 EP 171496 (Tanaguchi et al.); 유럽 특허 공개 0173494, 영국 특허 GB 2177096B를 참조한다. 또한, 인간화 항체는 예를 들어 인간 중쇄 및 경쇄 유전자를 발현하지만 내인성 마우스 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자를 발현할 수 없는 트랜스제닉 마우스를 사용하여 생산될 수 있다. 윈터 (Winter)는 본원에서 설명되는 인간화 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 CDR-그라프팅 방법을 설명한 바 있다 (미국 특허 5,225,539). 특정 인간 항체의 모든 CDR은 적어도 비-인간 CDR의 일부로 교체될 수 있거나, 또는 단지 일부의 CDR만이 비-인간 CDR로 교체될 수 있다. 단지 인간화 항체가 소정의 항원에 결합하기 위해 필요한 수의 CDR만을 교체하는 것이 필요하다.
인간화 항체 또는 그의 단편은 항원 결합에 직접 관여하지 않는 Fv 가변 도메인의 서열을 인간 Fv 가변 도메인에 동등한 서열로 교체함으로써 생성될 수 있다. 인간화 항체 또는 그의 단편의 생성을 위한 예시적인 방법은 문헌 [Morrison (1985) Science 229:1202-1207]; [Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214]; 및 US 5,585,089; US 5,693,761; US 5,693,762; US 5,859,205; 및 US 6,407,213에 제시되어 있다. 이 방법은 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄로부터의 면역글로불린 Fv 가변 도메인의 전부 또는 일부를 코딩하는 핵산 서열의 단리, 조작 및 발현을 포함한다. 상기 핵산은 상기한 바와 같은 소정의 표적에 대한 항체를 생산하는 하이브리도마, 및 다른 공급원으로부터 얻을 수 있다. 이어서, 인간화 항체 분자를 코딩하는 재조합 DNA를 적절한 발현 벡터 내로 클로닝할 수 있다.
특정 실시태양에서, 인간화 항체는 보존적 치환, 컨센서스 서열 치환, 생식계열 치환 및/또는 역돌연변이의 도입에 의해 최적화된다. 상기 변경된 면역글로불린 분자는 당업계에 공지되어 있는 임의의 몇몇 기술에 의해 제조될 수 있고 (예를 들어, 문헌 [Teng et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 80: 7308-7312, 1983]; [Kozbor et al., Immunology Today, 4: 7279, 1983]; [Olsson et al., Meth. Enzymol., 92: 3-16, 1982]), PCT 공개 WO92/06193 또는 EP 0239400의 개시내용에 따라 제조될 수 있다.
또한, 항체 또는 그의 단편은 인간 T 세포 에피토프의 특이적인 제거 또는 WO 98/52976 및 WO 00/34317에 개시된 방법에 의한 "탈면역화"에 의해 변형될 수 있다. 간단히 설명하면, 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 MHC 클래스 II에 결합하는 펩티드에 대해 분석할 수 있고; 상기 펩티드는 잠재적인 T-세포 에피토프를 나타낸다 (WO 98/52976 및 WO 00/34317에 규정된 바와 같이). 잠재적인 T-세포 에피토프의 검출을 위해, "펩티드 쓰레딩 (threading)"으로 불리는 컴퓨터 모델링 방법을 적용할 수 있고, 또한 인간 MHC 클래스 II 결합 펩티드의 데이타베이스가 WO 98/52976 및 WO 00/34317에 기재된 바와 같이 VH 및 VL 서열에 존재하는 모티프에 대해 탐색될 수 있다. 상기 모티프는 임의의 18개의 주요 MHC 클래스 II DR 동종이인자형에 결합하고, 따라서 잠재적인 T 세포 에피토프를 구성한다. 검출되는 잠재적인 T-세포 에피토프는 가변 도메인 내의 소수의 아미노산 잔기를 치환하거나, 또는 바람직하게는 단일 아미노산 치환에 의해 제거될 수 있다. 일반적으로, 보존적 치환이 이루어진다. 항상은 아니지만, 종종 인간 생식계열 항체 서열 내의 위치에 공통적인 아미노산이 사용될 수 있다. 인간 생식계열 서열은 예를 들어 문헌 [Tomlinson, et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798]; [Cook, G. P. et al. (1995) Immunol. Today Vol. 16 (5): 237-242]; [Chothia, D. et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817]; 및 [Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628-4638]에 개시되어 있다. V BASE 디렉토리는 인간 면역글로불린 가변 구역 서열의 포괄적인 디렉토리를 제공한다 (문헌 [Tomlinson, I.A. et al. MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK]에서 편집됨). 상기 서열은 예를 들어 프레임워크 구역 및 CDR에 대한 인간 서열의 공급원으로서 사용될 수 있다. 또한, 미국 특허 6,300,064에 기재된 바와 같은 컨센서스 인간 프레임워크 구역이 사용될 수 있다.
특정 실시태양에서, 항체는 변경된 면역글로불린 불변 또는 Fc 구역을 함유할 수 있다. 예를 들어, 본원의 개시내용에 따라 생산되는 항체는 항체의 몇몇 면역 기능, 예를 들어 효과기 세포 활성, 용해, 보체-매개 활성, 항체 청소, 및 항체 반감기를 조절할 수 있는 효과기 분자, 예를 들어 보체 및/또는 Fc 수용체에 보다 강력하게 또는 보다 높은 특이성으로 결합할 수 있다. 항체 (예를 들어, IgG 항체)의 Fc 구역에 결합하는 일반적인 Fc 수용체는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII의 수용체 및 FcRn 하위클래스, 및 상기 수용체의 대립유전자 변이체 및 선택적으로 스플라이싱된 (spliced) 형태를 포함하고 이로 제한되지 않는다. Fc 수용체는 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92, 1991]; [Capel et al., Immunomethods 4:25-34,1994]; 및 [de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41, 1995]에서 검토된 바 있다.
추가의 항체 생산 기술에 대해서는 문헌 [Antibodies: A Laboratory Manual, eds. Harlow et al., Cold Spring Harbor Laboratory, 1988]을 참조한다.
이중특이적 또는 이기능성 항체는 2개의 상이한 중쇄/경쇄쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공적인 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 다양한 방법에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990)]; [Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)]을 참조한다. 특정 실시태양에서, 이중특이적 항체는 면역글로불린 불변 구역을 통해 제2 결합 도메인 폴리펩티드에 연결된 제1 결합 도메인 폴리펩티드, 예를 들어 Fab' 단편을 포함한다.
또한, 본 발명의 항체는 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 그의 상보성 결정 구역이 단일 도메인 폴리펩티드의 일부인 항체를 포함할 수 있다. 그 예는 중쇄 항체, 천연적으로 경쇄가 결여된 항체, 통상적인 4-사슬 항체로부터 유도된 단일 도메인 항체, 공학처리된 항체 및 항체로부터 유도된 것 이외의 단일 도메인 스캐폴드를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 단일 도메인 항체는 해당 기술 분야의 임의의 항체, 또는 임의의 미래의 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 마우스, 인간, 낙타, 라마, 어류, 상어, 염소, 토끼, 및 소를 포함하고 이로 제한되지 않는 임의의 종으로부터 유도될 수 있다. 본 발명의 한 측면에서, 단일 도메인 항체는 어류에서 발견되는 면역글로불린의 가변 구역으로부터, 예를 들어 상어의 혈청에서 발견되는 신규 항원 수용체 (NAR)로서 알려진 면역글로불린 이소형으로부터 유도된 것일 수 있다. NAR의 가변 구역으로부터 유도된 단일 도메인 항체 ("IgNAR")를 생산하는 방법은 WO 03/014161 및 문헌 [Streltsov (2005) Protein Sci. 14:2901-2909]에 기재되어 있다.
본 발명의 다른 측면에 따르면, 단일 도메인 항체는 경쇄가 결여된 중쇄 항체로서 알려진 천연 생성 단일 도메인 항체이다. 상기 단일 도메인 항체는 예를 들어 WO 9404678에 개시되어 있다. 분명한 이해를 위해, 천연적으로 경쇄가 결여된 중쇄 항체로부터 유도된 상기 가변 도메인은 4개 사슬의 면역글로불린의 통상적인 VH와 구분하기 위해 본원에서 VHH 또는 나노바디 (nanobody)로 언급된다. 상기 VHH 분자는 낙타과 (Camelidae) 종, 예를 들어 낙타, 라마, 단봉낙타, 알파카 및 과나코에서 생성시킨 항체로부터 유도될 수 있다. 낙타과 이외의 다른 종이 천연적으로 경쇄가 결여된 중쇄 항체를 생산할 수 있고; 상기 VHH는 본 발명의 범위 내에 포함된다.
또한, 본 발명은 CH1 이외의 다른 면역글로불린 중쇄, 예를 들어, IgG 및 IgA의 CH2 및 CH3 구역, 또는 IgE의 CH3 및 CH4 구역으로부터의 하나 이상의 천연 또는 공학처리된 불변 구역을 포함하는 구역에 융합되거나 연결된 면역글로불린 힌지 또는 힌지-작용 구역 폴리펩티드에 융합되거나 연결된 결합 도메인 폴리펩티드를 포함하는 결합 도메인-면역글로불린 융합 단백질의 사용을 고려한다 (예를 들어, 보다 자세한 설명에 대해서는 U.S. 2005/0136049 (Ledbetter, J. et al.) 참조). 결합 도메인-면역글로불린 융합 단백질은 힌지 구역 폴리펩티드에 융합되거나 연결된 천연 또는 공학처리된 면역글로불린 중쇄 CH2 불변 구역 폴리펩티드 (또는 IgE로부터 전체적으로 또는 부분적으로 유도되는 구성체의 경우에 CH3) 및 CH2 불변 구역 폴리펩티드 (또는 IgE로부터 전체적으로 또는 부분적으로 유도되는 구성체의 경우에 CH3)에 융합되거나 연결된 천연 또는 공학처리된 면역글로불린 중쇄 CH3 불변 구역 폴리펩티드 (또는 IgE로부터 전체적으로 또는 부분적으로 유도되는 구성체의 경우에 CH4)를 포함하는 구역을 추가로 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 결합 도메인-면역글로불린 융합 단백질은 항체 의존성 세포-매개된 세포독성, 보체 고정 및/또는 표적, 예를 들어, 표적 항원에 대한 결합으로 이루어지는 군 중에서 선택되는 적어도 하나의 면역학적 활성을 보일 수 있다.
특정 실시태양에서, 치료 단백질, 즉, 그가 작용하는 신체 내의 구역 또는 중간체를 통해 원거리에서 작용하는 신체의 구역에 대한 생물학적 효과를 갖는 단백질 또는 펩티드, 및 상기 치료 단백질의 설계 및 제조 방법이 제공된다. 본 발명의 치료 단백질은 펩티드 모방체를 포함할 수 있다. 모방체는 단백질 2차 구조의 요소를 모방하는 펩티드-함유 분자이다. 예를 들어, 본원에 참고로 포함되는 문헌 [Johnson et al., "Peptide Turn Mimetics" in BIOTECHNOLOGY AND PHARMACY, Pezzuto et al., Eds., Chapman and Hall, New York (1993)]을 참조한다. 펩티드 모방체의 사용에 대한 근본적인 원리는 단백질의 펩티드 백본 (backbone)이 주로 아미노산 측쇄를 분자 상호작용, 예를 들어 항체 및 항원의 상호작용을 용이하게 하기 위한 방식으로 배향시키기 위해 존재한다는 것이다. 펩티드 모방체는 분자 상호작용이 천연 분자에 유사하도록 예상된다. 본 발명에서 제공되는 정보와 함께, 상기 원칙을 사용하여 본원에 개시된 표적화 펩티드의 많은 천연 특성을 갖는 제2 생성 분자를 공학처리할 수 있다. 또한, 상기 제2 세대 분자는 변경되고, 잠재적으로 개선된 특성을 제공할 수 있다. 본 발명을 이용하여, 단백질 및 소분자 치료제 모두는 요구되는 시토킨 활성을 방해하도록 설계될 수 있고, 예를 들어 요구되는 위치, 즉 결합 복합체에 중요한 것으로 입증된 아미노산 위치에서 결합하고, 따라서 시토킨 및 그의 수용체 또는 수용체 복합체와 연관된 활성을 효과적으로 감소 또는 억제하도록 특이적으로 설계될 수 있다.
치료 단백질의 다른 실시태양은 융합 단백질을 포함한다. 상기 분자는 일반적으로 제2 폴리펩티드 또는 단백질의 전부 또는 일부에 N- 또는 C-말단에서 연결된 표적화 펩티드, 예를 들어, IL-22 또는 항-IL-22 항체의 전부 또는 실질적인 부분을 갖는다. 예를 들어, 융합체는 이종성 숙주에서 단백질의 재조합 발현을 허용하기 위해 다른 종으로부터 리더 서열을 사용할 수 있다. 다른 유용한 융합체는 융합 단백질의 정제를 용이하게 하기 위해 면역학적으로 활성인 도메인, 예를 들어 항체 에피토프의 부가를 포함한다. 융합체 연결부에 또는 그 부근에 절단 부위를 포함하면, 정제 후에 외래의 폴리펩티드의 제거가 용이할 것이다. 다른 유용한 융합체는 기능성 도메인, 예를 들어 효소의 활성 부위, 글리코실화 도메인, 세포 표적화 신호 또는 막횡단 (transmembrane) 구역의 연결을 포함한다. 융합 단백질 내로 도입될 수 있는 단백질 또는 펩티드의 예는 세포 증식 억제 단백질, 세포파괴 단백질, 세포자멸 유발제, 항-혈관신생제, 호르몬, 시토킨, 성장 인자, 펩티드 약물, 항체, 항체의 Fab 단편, 항원, 수용체 단백질, 효소, 렉틴, MHC 단백질, 세포 부착 단백질 및 결합 단백질을 포함한다. 융합 단백질의 생성 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 상기 단백질은 예를 들어 이기능성 가교결합 시약을 사용한 화학적 부착, 완전한 융합 단백질의 새로운 합성, 또는 표적화 펩티드를 코딩하는 DNA 서열의 제2 펩티드 또는 단백질을 코딩하는 DNA 서열에 대한 부착, 이어서 무손상 융합 단백질의 발현에 의해 생성될 수 있다.
특정 실시태양에서, 표적화 펩티드, 예를 들어, IL-22 또는 항-IL-22 항체는 면역글로불린 중쇄 불변 구역, 예를 들어 2개의 불변 구역 도메인 및 힌지 구역을 함유하지만 가변 구역이 결여된 Fc 단편과 융합된다 (본원에 참고로 포함되는 미국 특허 6,018,026 및 5,750,375 참조). Fc 구역은 천연 생성 Fc 구역일 수 있거나, 또는 특정 품질, 예를 들어 치료 품질, 순환 시간, 응집 감소 등을 개선하기 위해 변경될 수 있다. Fc 구역에 융합된 펩티드 및 단백질은 일반적으로 비융합된 대응물보다 생체 내에서 보다 긴 반감기를 보인다. 또한, Fc 구역에 대한 융합은 융합 폴리펩티드의 이량체화/다량체화를 허용한다.
특정 실시태양에서, 돌연변이 유발은 항체를 하나 이상의 생식계열 서열에 보다 유사하게 만들기 위해 사용된다. 이것은 돌연변이가 체세포 돌연변이 유발 또는 오류 빈발 (error prone) PCR을 통해 항체의 프레임워크 구역 내로 도입될 때 바람직할 수 있다. VH 및 VL 도메인에 대한 생식계열 서열은 VBASE 데이타베이스 (엠알씨 센터 포 프로테인 엔지니어링 (MRC Center for Protein Engineering), 영국)에 대해 아미노산 및 핵산 서열 정렬을 수행함으로써 확인될 수 있다. VBASE는 Genbank 및 EMBL 데이타 라이브러리의 현재 발표물 내의 서열을 포함하여 수천 개의 발표된 서열로부터 편집된 모든 인간 생식계열 가변 구역 서열의 포괄적인 디렉토리이다. 일부 실시태양에서, scFv의 FR 구역은 VBASE 데이타베이스 내에 가장 근접하게 매치하도록 돌연변이되고, CDR 부분은 무손상 상태로 유지된다.
재조합 DNA 방법을 사용하여, 개시된 CDR 서열은 각각의 CDR이 결여된 VH 또는 VL 도메인의 레퍼토리 내로 도입될 수 있다 (Marks et al. (BioTechnology (1992) 10: 779-783). 예를 들어, 가변 도메인의 5' 말단에 인접한 프라이머 및 제3 FR에 대한 프라이머를 사용하여 CDR3이 결여된 가변 도메인 서열의 레퍼토리를 생성시킬 수 있다. 상기 레퍼토리는 개시된 항체의 CDR3과 조합될 수 있다. 유사한 기술을 사용하여, IL-22에 결합하는 항원 결합 단편의 레퍼토리를 제공하기 위해 개시된 CDR 서열의 일부를 다른 항체로부터의 CDR 서열의 일부로 셔플링할 수 있다. 레퍼토리는 숙주 시스템, 예를 들어 파지 디스플레이 (WO 92/01047 및 그의 대응하는 미국 특허 5,969,108에 기재됨)에서 발현되어, IL-22에 결합하는 적합한 항원 결합 단편을 선택할 수 있다.
다른 방법은 IL-22에 계속 결합할 수 있는 변이체 VH 또는 VL 도메인을 생성시키기 위해 개시된 VH 또는 VL 서열의 무작위 돌연변이 유발을 이용한다. 오차 빈발 PCR을 이용하는 기술은 문헌 [Gram et al. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. (1992) 89: 3576-3580]에 기재되어 있다.
다른 방법은 개시된 VH 또는 VL 서열의 직접 돌연변이 유발을 이용한다. 그러한 기술은 문헌 [Barbas et al. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. (1994) 91: 3809-3813] 및 [Schier et al. J. Mol. Biol. (1996) 263: 551-567]에 개시되어 있다.
가변 도메인의 일부는 실질적으로 본원에 제시된 적어도 하나의 CDR 구역 및, 임의로, 본원에 제시된 VH 또는 VL 도메인으로부터의 개재하는 프레임워크 구역을 포함할 것이다. 상기 일부는 FR1의 C-말단 절반 및/또는 FR4의 N-말단 절반을 포함할 수 있다. 가변 도메인의 N-말단 또는 C-말단부의 추가의 잔기는 천연 생성 항체에서 발견되는 잔기와 동일한 잔기이거나 아닐 수 있다. 예를 들어, 재조합 DNA 기술에 의한 항체의 제작은 종종 그의 링커의 사용에 의해 N- 또는 C-말단 잔기를 도입한다. 일부 링커는 가변 도메인을 다른 가변 도메인 (예를 들어, 디아바디), 불변 도메인, 또는 단백질성 표지에 연결하기 위해 사용될 수 있다.
항체는 그들의 글리코실화를 변경하도록 변형될 수 있다; 즉, 적어도 하나의 탄수화물 모이어티 (moiety)가 결실되거나 항체에 부가될 수 있다. 글리코실화 부위의 결실 또는 부가는 당업계에 공지되어 있는 글리코실화 컨센서스 부위를 결실 또는 생성시키기 위해 아미노산 서열을 변경함으로써 달성될 수 있다. 탄수화물 모이어티를 부가하는 다른 수단은 항체의 아미노산 잔기에 대한 글리코시드의 화학적 또는 효소에 의한 커플링이다 (WO 87/05330 및 [Aplin et al. (1981) CRC Crit. Rev. Biochem., 22: 259-306] 참조). 또한, 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소에 의해 달성될 수 있다 ([Hakimuddin et al. (1987) Arch. Biochem. Biophys., 259: 52]; [Edge et al. (1981) Anal. Biochem., 118: 131]; [Thotakura et al. (1987) Meth. Enzymol., 138: 350] 참조).
항체 불변 구역의 변경 방법은 당업계에 공지되어 있다. 변경된 기능 (예를 들어, 효과기 리간드, 예를 들어 세포 상의 FcR 또는 보체의 C1 성분에 대한 변경된 친화도)을 갖는 항체는 항체의 불변부 내의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 잔기로 교체함으로써 생산될 수 있다 (예를 들어, EP 388,151 A1, US 5,624,821 및 US 5,648,260 참조). 쥐 또는 다른 종 항체에 적용될 경우 유사한 기능을 감소시키거나 제거하는 유사한 종류의 변경이 설명될 수 있다.
예를 들어, FcR (예를 들어, Fc 감마 R1) 또는 C1q에 대한 항체 (예를 들어, IgG, 예를 들어 인간 IgG)의 Fc 구역의 친화도를 변경시킬 수 있다. 친화도는 적어도 하나의 특정 잔기를 그의 측쇄 상에 적절한 기능성을 갖는 적어도 하나의 잔기로 교체하거나, 또는 하전된 기능성 기, 예를 들어 글루타메이트 또는 아스파르테이트, 또는 아마도 방향족 비-극성 잔기, 예를 들어 페닐알라닌, 티로신, 트립토판 또는 알라닌을 도입함으로써 변경될 수 있다 (예를 들어, US 5,624,821 참조).
다른 예에서, IgG 불변 구역에서 잔기 297 (아스파라긴)을 알라닌으로 교체하면 효과기 세포의 동원이 유의하게 억제되는 반면, C1q에 대한 친화도는 단지 경미하게 감소시킨다 (약 3배 더 약함) (예를 들어, US 5,624,821 참조). 중쇄 내의 잔기의 넘버링은 EU 지수의 넘버링이다 ([Kabat et al., 1991 상기 문헌] 참조). 상기 변경은 글리코실화 부위를 파괴하고, 탄수화물의 존재가 Fc 수용체 결합에 필요하다고 생각된다. 글리코실화 부위를 파괴하는 상기 부위에서의 임의의 다른 치환은 용해 활성을 유사하게 감소시키는 것으로 생각된다. 다른 아미노산 치환, 예를 들어 잔기 318 (Glu), 320 (Lys) 및 322 (Lys) 중의 임의의 하나를 Ala으로 변경하는 것도 IgG 항체의 Fc 구역에 대한 C1q 결합을 폐지하는 것으로 알려져 있다 (예를 들어, US 5,624,821 참조).
Fc 수용체와의 상호작용이 감소된 변형된 항체가 생산될 수 있다. 예를 들어, 인간 Fc 감마 R1 수용체에 결합하는 인간 IgG3에서 Leu 235의 Glu로의 변경은 수용체와 그의 상호작용을 파괴하는 것으로 밝혀졌다. 항체의 힌지 연결 구역 내의 인접 또는 근접 부위에 대한 돌연변이 (예를 들어, 잔기 234, 236 또는 237의 Ala로의 치환)도 Fc 감마 R1 수용체에 대한 항체 친화도에 영향을 주기 위해 사용될 수 있다. 중쇄 내의 잔기의 넘버링은 EU 지수를 기초로 한다 ([Kabat et al., 1991 상기 문헌] 참조).
예를 들어 CH2 도메인의 N-말단 구역 내의 적어도 하나의 아미노산을 변경함으로써 항체의 용해 활성을 변경하기 위한 추가의 방법은 WO 94/29351 (Morgan et al.) 및 US 5,624,821에 기재되어 있다.
특정 실시태양에서, 항체는 검출가능한 또는 기능성 표지로 태깅될 수 있다. 상기 표지는 방사성 표지 (예를 들어, 131I 또는 99Tc), 효소 표지 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제 또는 알칼린 포스파타제), 및 다른 화학적 모이어티 (예를 들어, 비오틴)를 포함한다.
특정 실시태양에서, IL-22 길항제는 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 쥐) IL-22에 결합하는 항체, 또는 그의 단편 (예를 들어, 그의 항원 결합 단편)이다. 특정 실시태양에서, 항-IL-22 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편)은 모노클로날 또는 단일 특이성 항체이다. 또한, 항체 또는 그의 단편은 인간, 인간화, 키메라, 또는 인간 IL-22에 대해 시험관 내에서 생성된 항체일 수 있다.
특정 실시태양에서, IL-1F6 길항제는 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 쥐) IL-1F6에 결합하는 항체, 또는 그의 단편 (예를 들어, 그의 항원 결합 단편)이다. 특정 실시태양에서, 항-IL-1F6 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편)은 모노클로날 또는 단일 특이성 항체이다. 또한, 항체 또는 그의 단편은 인간, 인간화, 키메라, 또는 인간 IL-1F6에 대해 시험관 내에서 생성된 항체일 수 있다.
특정 실시태양에서, IL-1F8 길항제는 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 쥐) IL-1F8에 결합하는 항체, 또는 그의 단편 (예를 들어, 그의 항원 결합 단편)이다. 특정 실시태양에서, 항-IL-1F8 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편)은 모노클로날 또는 단일 특이성 항체이다. 또한, 항체 또는 그의 단편은 인간, 인간화, 키메라, 또는 인간 IL-1F8에 대해 시험관 내에서 생성된 항체일 수 있다.
특정 실시태양에서, IL-1F9 길항제는 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 쥐) IL-1F9에 결합하는 항체, 또는 그의 단편 (예를 들어, 그의 항원 결합 단편)이다. 특정 실시태양에서, 항-IL-1F9 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편)은 모노클로날 또는 단일 특이성 항체이다. 또한, 항체 또는 그의 단편은 인간, 인간화, 키메라, 또는 인간 IL-1F9에 대해 시험관 내에서 생성된 항체일 수 있다.
특정 실시태양에서, IL-1Rrp2 길항제는 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 쥐) IL-1Rrp2에 결합하는 항체, 또는 그의 단편 (예를 들어, 그의 항원 결합 단편)이다. 특정 실시태양에서, 항-IL-1Rrp2 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편)은 모노클로날 또는 단일 특이성 항체이다. 또한, 항체 또는 그의 단편은 인간, 인간화, 키메라, 또는 인간 IL-1Rrp2에 대해 시험관 내에서 생성된 항체일 수 있다.
특정 실시태양에서, IL-17A 길항제는 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 쥐) IL-17A에 결합하는 항체, 또는 그의 단편 (예를 들어, 그의 항원 결합 단편)이다. 특정 실시태양에서, 항-IL-17A 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편)은 모노클로날 또는 단일 특이성 항체이다. 또한, 항체 또는 그의 단편은 인간, 인간화, 키메라, 또는 인간 IL-17A에 대해 시험관 내에서 생성된 항체일 수 있다.
특정 실시태양에서, TNFα 길항제는 포유동물 (예를 들어, 인간 또는 쥐) TNFα에 결합하는 항체, 또는 그의 단편 (예를 들어, 그의 항원 결합 단편)이다. 특정 실시태양에서, 항-TNFα 항체 또는 그의 단편 (예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편)은 모노클로날 또는 단일 특이성 항체이다. 또한, 항체 또는 그의 단편은 인간, 인간화, 키메라, 또는 인간 TNFα에 대해 시험관 내에서 생성된 항체일 수 있다.
TNFα 길항제의 예는 TNF (예를 들어, 인간 TNFα)에 대한 항체, 예를 들어 D2E7 (인간 항-TNFα 항체, U.S. 6,258,562, 후미라(Humira)™, 바스프 (BASF)); CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356 (인간화 항-TNFα 항체, 셀텍 (Celltech)/파마시아 (Pharmacia)); cA2 (키메라 항-TNFα 항체, 레미케이드(Remicade)™, 센토코르 (Centocor)); 및 항-TNF 항체 단편 (예를 들어, CPD870)을 포함한다. 다른 예는 가용성 TNF 수용체 (예를 들어, 인간 p55 또는 p75) 단편 및 유도체, 예를 들어 p55 kdTNFR-IgG (55 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, 레네르셉트(Lenercept)™) 및 75 kdTNFR-IgG (75 kD TNF 수용체-IgG 융합 단백질, 엔브렐(Enbrel)™, 이뮤넥스 (Immunex))를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295]; [J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A] 참조). 추가의 예는 효소 길항제 (예를 들어, TNFα 전환 효소 억제제 (TACE), 예를 들어 알파-술포닐 히드록삼산 유도체 (WO 01/55112) 또는 N-히드록시포름아미드 억제제 (GW 3333, -005, 또는 -022)) 및 TNF-bp/s-TNFR (가용성 TNF 결합 단백질)을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S284]; 및 [Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. (1995) Vol. 268, pp. 37-42] 참조). TNF 길항제는 가용성 TNF 수용체 (예를 들어, 인간 p55 또는 p75) 단편 및 유도체, 예를 들어 75 kdTNFR-IgG; 및 TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제일 수 있다.
항-IL-22 항체의 생산은 미국 특허 출원 공개 2005-0042220 및 2007-0243589에 보다 상세하게 설명되어 있다. IL-22R에 대한 IL-22 결합을 방해하는 항-IL22 항체의 한 비-제한적인 예는 미국 특허 출원 공개 2005-0042220에서 "Ab-04" 또는 "IL22-04"로 언급된다. Ab-04 (본원에서 래트 모노클로날 항체 "P3/2"으로도 언급됨)는 인간 IL-22에 결합하고 인간 IL-22의 활성을 중화시킨다. Ab-04를 생산하는 하이브리도마 세포주는 2003년 6월 5일자로 ATCC에 기탁되었고, ATCC 기탁 번호 PTA-5255가 부여되었다. IL-10R2에 대한 IL-22 결합을 방해하는 항-IL22 항체의 다른 비-제한적인 예는 "Ab-02" 또는 "IL22-02"로 언급된다. Ab-02 (본원에서 래트 모노클로날 항체 "P3/3"으로도 언급됨)는 마우스 및 인간 IL-22에 결합하고 마우스 및 인간 IL-22의 활성을 중화시킨다. Ab-02를 생산하는 하이브리도마 세포주는 2003년 6월 5일자로 ATCC에 기탁되었고, ATCC 기탁 번호 PTA-5254가 부여되었다. IL-22 활성을 감소시키거나 억제하거나 길항하는 IL-22 항체의 추가의 예는 미국 특허 출원 공개 2007-0243589에서 볼 수 있고, 여기에 GIL01, GIL16, GIL45, GIL60, GIL68, GIL92, 062A09, 087B03, 166B06, 166G05, 354A08, 355B06, 355E04, 356A11, 및 368D04로 확인되는 생식계열 항체가 설명되어 있다.
또한, 항체는 생물학적 샘플에서, 예를 들어 IL-22, IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, 및 IL-17A로 제한되지 않는 하나 이상의 분자의 존재를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 상기 단백질의 존재 또는 수준을 의학적 상태와 서로 관련시킴으로써, 당업자는 연관되는 의학적 상태를 진단할 수 있다. 예를 들어, IL-22는 염증성 시토킨 (예를 들어 IL-1 및 TNFα)에 의해 야기되는 것과 연관된 변화를 유발하고, IL-22의 억제제는 류마티스 관절염의 증상을 개선한다 (WO 2005/000897 A2). 항체에 의해 진단될 수 있는 예시적인 의학적 상태는 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 루푸스, 염증성 장 질병, 췌장염, 및 이식 거부를 포함하고 이로 제한되지 않는다.
본원에서 설명되는 특정 방법은 제약 용도 및 환자에 대한 투여에 적합한 조성물을 이용한다. 이들 조성물은 제약 부형제 및 하나 이상의 항체, 하나 이상의 가용성 수용체, 하나 이상의 결합 단백질, 또는 상기 항체, 가용성 수용체 및/또는 결합 단백질의 조합물을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "제약 부형제"는 제약학적 투여에 적합한 용매, 분산매, 코팅물, 항균 및 항진균제, 등장화 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약 활성 물질에 대한 상기 물질의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 조성물은 또한 보충의, 추가의, 또는 향상된 치료 기능을 제공하는 다른 활성 화합물을 함유할 수 있다. 제약 조성물은 또한 투여 지시서와 함께 용기, 팩 (pack), 또는 분배기에 포함될 수 있다.
제약 조성물은 그의 의도되는 투여 경로에 적합하도록 제형화될 수 있다. 투여를 수행하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 또한, 국소 또는 경구 투여될 수 있거나, 또는 점막을 가로질러 전달될 수 있는 조성물을 제조할 수 있다. 예를 들어, 투여는 정맥내, 복강내, 근내, 강내, 피하, 피부, 또는 경피 투여일 수 있다.
피내 또는 피하 적용을 위해 사용되는 용액 또는 현탁액은 전형적으로 적어도 하나의 다음 성분을 포함한다: 멸균 희석제, 예를 들어 물, 염수 용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 또는 기타 합성 용매; 항균제, 예를 들어, 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들어, 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이팅제, 예를 들어, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA); 버퍼, 예를 들어, 아세테이트, 시트레이트, 또는 포스페이트; 및 등장제, 예를 들어, 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기로 조정할 수 있다. 상기 제제는 앰퓰, 1회용 주사기 또는 다중 투여량 바이알에 포함될 수 있다.
정맥내 투여용으로 사용되는 용액 또는 현탁액은 생리 식염수, 정균수, 크레모포르 (Cremophor) EL™ (바스프, 미국 뉴저지주 파시파니), 에탄올, 또는 폴리올과 같은 담체를 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 멸균되어야만 하고, 용이한 주사 수행능을 위해 유동성이어야만 한다. 적절한 유동성은 종종 렉시틴 또는 계면활성제를 사용하여 얻을 수 있다. 조성물은 또한 제조 및 저장 조건 하에 안정해야 한다. 미생물의 예방은 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산,티메로살 등을 사용하여 달성될 수 있다. 많은 경우에, 등장화제 (당), 폴리알콜 (만니톨 및 소르비톨), 또는 염화나트륨이 조성물에 함유될 수 있다. 조성물의 연장 흡수는 흡수를 지연시키는 물질, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 첨가하여 달성될 수 있다.
경구 조성물은 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함한다. 조성물은 젤라틴에 봉입되거나 정제로 타정될 수 있다. 경구 투여를 위해, 항체는 부형제와 혼합될 수 있고, 정제, 트로키제 또는 캡슐제에 포함될 수 있다. 제약상 허용되는 결합제 또는 보조제 물질이 조성물에 함유될 수 있다. 정제, 트로키제, 및 캡슐제는 (1) 결합제, 예를 들어 미세결정 셀룰로스, 트라가칸트 고무 또는 젤라틴; (2) 전분 또는 락토스와 같은 부형제, (3) 알긴산, 프리모겔 또는 옥수수 전분과 같은 붕해제; (4) 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제; (5) 콜로이드성 이산화규소와 같은 활주제; 또는 (6) 감미제 또는 방향제를 포함할 수 있다.
제약 조성물은 또한 경점막 또는 경피 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어, Fc 부분을 포함하는 항체는 장, 구강 또는 폐에서 점막을 (Fc 수용체를 통해) 통과할 수 있다. 경점막 투여는 로젠지, 비강 분무, 흡입제 또는 좌제를 통해 달성될 수 있다. 경피 투여는 또한 당업계에 공지된 연고, 고약, 겔 또는 크림을 함유하는 조성물의 사용을 통해 달성될 수 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 투과될 장벽에 적당한 침투제가 사용된다. 흡입에 의한 투여를 위해, 항체는 추진제 (예를 들어, 액체 또는 가스) 또는 분무제를 함유하는 가압 용기 또는 분배기로부터 에어로졸 분무로 전달된다.
특정 실시태양에서, 제약 조성물은 활성 성분이 신체로부터 급속 제거되는 것을 막기 위해 담체와 함께 제조된다. 생분해성 중합체 (예를 들어, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안히드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산)가 흔히 사용된다. 상기 제형을 제조하기 위한 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 리포좀 현탁액은 또한 제약상 허용되는 담체로서 사용될 수 있다. 리포좀은 당업계에 공지되어 있는 확립된 방법에 따라 제조될 수 있다 (미국 특허 제4,522,811).
제약 조성물은 기재된 바와 같이 치료 유효량으로 투여된다. 치료 유효량은 대상의 연령, 상태, 성별 및 의학적 상태의 심도에 따라 다양할 수 있다. 적당한 용량은 임상적 징후를 기준으로 담당의가 결정할 수 있다. 조성물은 가장 긴 시간 동안 조성물의 순환 수준을 최대화기 위해 볼러스 (bolus) 투여로서 투여될 수 있다. 또한, 연속 주입이 볼러스 투여 후에 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상"은 인간 및 비-인간 동물을 포함하고자 의도된다. 용어 본 발명의 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 비-인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
대상에게 투여될 수 있는 용량 범위의 예는 1 ㎍/kg 내지 20 mg/kg, 1 ㎍/kg 내지 10 mg/kg, 1 ㎍/kg 내지 1 mg/kg, 10 ㎍/kg 내지 1 mg/kg, 10 ㎍/kg 내지 100 ㎍/kg, 100 ㎍/kg 내지 1 mg/kg, 250 ㎍/kg 내지 2 mg/kg, 250 ㎍/kg 내지 1 mg/kg, 500 ㎍/kg 내지 2 mg/kg, 500 ㎍/kg 내지 1 mg/kg, 1 mg/kg 내지 2 mg/kg, 1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 5 mg/kg 내지 10 mg/kg, 10 mg/kg 내지 20 mg/kg, 15 mg/kg 내지 20 mg/kg, 10 mg/kg 내지 25 mg/kg, 15 mg/kg 내지 25 mg/kg, 20 mg/kg 내지 25 mg/kg, 및 20 mg/kg 내지 30 mg/kg (또는 그 이상)으로부터 선택될 수 있다. 이들 용량은 용량, 투여 방법, 치료될 질환 또는 증상(들) 및 개별 대상의 특징에 따라 매일, 매주, 격주로, 매월 또는 이보다 덜한 회수로, 예를 들어, 2년마다 투여될 수 있다. 용량은 또한 연속 주입을 통해 (예를 들어, 펌프를 통해) 투여될 수 있다. 투여 용량은 또한 투여 경로에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 피하 투여는 정맥내 투여보다 더 높은 용량을 필요로 할 수 있다.
특정 상황에서, 투여 용이성 및 용량 균일성을 위해 단위 투여 형태로 조성물을 제형화하는 것이 유리할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은 단위 투여 형태는 환자에게 적합한 물리적 개별 단위를 의미한다. 각각의 투여 단위는 담체와 연합하여 치료 효과를 나타내는 것으로 계산된 소정량의 항체를 함유한다. 투여 단위는 항체의 특징 및 달성할 특정 치료 효과에 의해 결정된다.
제약 조성물의 독성 및 치료 효율은 세포 배양 또는 실험 동물에서 표준 제약 절차에 의해 결정할 수 있고, 예를 들어 LD50 (집단의 50％에 치사적인 투여량) 및 ED50 (집단의 50％에서 치료상 효과적인 투여량)을 결정한다. 독성과 치료 효과 사이의 투여량 비율은 치료 지수이고, 이것은 LD50/ED50 비율로서 나타낼 수 있다.
세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 얻은 데이터를 사용하여 인간에서의 용량 범위를 결정할 수 있다. 이들 화합물의 용량은 거의 또는 전혀 독성이 없는 ED50을 포함하는, 혈중 순환 항체 농도 범위 내에 있을 수 있다. 용량은 상기 범위 내에서 사용되는 투여 조성물 형태 및 투여 경로에 따라 다양할 수 있다. 치료 유효 용량은 초기에 세포 배양 분석을 이용하여 추정할 수 있다. 투여량은 IC50 (즉, 증상의 최대 억제의 절반을 달성하는 항체의 농도)를 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하기 위한 동물 모델에서 결정할 수 있다. 임의의 특정 용량의 효과는 적합한 생물학적 분석에 의해 모니터링할 수 있다. 적합한 생물학적 분석의 예는 DNA 복제 분석, 전사 기반 분석, 수용체 결합 분석 및 기타 면역학적 분석을 포함한다.
또한, 상기 논의된 길항제, 항체 및 결합 단편은 생물학적 샘플에서 적어도 하나의 IL-22, IL-17A, IL-17F, IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, 및 IL-1Rrp2의 존재를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 이들 시토킨 및 수용체는 본원에 개시된 방법을 포함하여 당업계에 공지된 방법을 사용하여 세포 외에서 또는 세포 내에서 검출될 수 있다. 이들 단백질의 존재 또는 수준을 의학적 상태와 상호관련시킴으로써, 당업자는 연관된 의학적 상태를 진단할 수 있다. 예를 들어, IL-22는 염증성 시토킨 (예를 들어 IL-1 및 TNFα)에 의해 야기되는 것과 연관된 변화를 유발하고, IL-22의 억제제는 류마티스 관절염의 동물 모델에서 증상을 개선한다 (WO 02/068476 A2).
항체 기반 검출 방법은 당업계에 공지되어 있고, ELISA, 방사성 면역분석, 면역블롯, 웨스턴 블롯, 유동 세포 측정, 면역형광, 면역침전, 및 다른 관련 기술을 포함한다. 항체는 진단 키트에 제공될 수 있다. 키트는 다른 성분, 포장재, 사용설명서, 또는 단백질 검출 및 키트의 사용을 돕기 위한 다른 물질을 포함할 수 있다.
항체는 검출가능한 마커, 예를 들어 리간드 기 (예를 들어, 비오틴), 형광단 및 발색단, 방사성 동위원소, 전자 고밀도 (electron-dense) 시약, 또는 효소로 변형될 수 있다. 효소는 그들의 활성에 의해 검출된다. 예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제는 테트라메틸벤지딘 (TMB)을 분광광도계로 측정가능한 청색 안료로 전환시키는 그의 능력에 의해 검출된다. 다른 적합한 결합 파트너는 비오틴 및 아비딘, IgG 및 단백질 A, 및 당업계에 공지되어 있는 다른 수용체-리간드 쌍을 포함한다.
또한, 항체는 적어도 하나의 다른 분자 실재 (entity), 예를 들어 다른 항체 (예를 들어, 이중특이적 또는 다중특이적 항체), 독소, 방사성 동위원소, 세포독성 또는 세포 증식 억제제에 기능적으로 연결될 수 있다 (예를 들어, 화학적 커플링, 유전자 융합, 비-공유 회합 등에 의해). 다른 과다돌연변이 및 가능성이 당업자에게 자명하고, 이들은 본 발명의 범위 내의 균등물로 간주된다.
특정 실시태양에서, 검출 방법이 시험관 내 방법일 때, 이 방법은 (1) 샘플 또는 대조군 샘플을 제1 표적 (비제한적인 예를 들어 IL-1F6)에 결합하는 제1 시약 및 제2 표적 (비제한적인 예를 들어 IL-1F8)에 결합하는 제2 시약과 접촉시키고, (2) 제1 및 제2 시약과 샘플 또는 대조군 샘플 사이의 복합체의 형성을 검출하는 것을 포함하고, 여기서 대조군 샘플에 비해 샘플에서 복합체 형성의 통계상 유의한 변화는 샘플 내의 시토킨의 존재를 표시한다. 한 실시태양에서, 방법은 세포를 포함하는 샘플을 표지된 시약, 예를 들어 세포 내의 IL-22, IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, IL-1Rrp2, 또는 IL-17A 중의 하나로부터 선택되는 표적에 결합하는 형광 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 세포 내에서 검출된 시약의 양은 세포 내에서 발현된 세포내 표적의 양에 정비례한다. 특정 실시태양에서, 샘플은 환자로부터의 혈액 샘플이다. 발현 수준이 측정될 수 있는 추가의 샘플은 활액, 구강 면봉채집물, 피부, 생검을 위해 제거된 물질, 비제한적인 예를 들어 생검을 위해 제거된 건선 환자의 피부, 정액, 모발, 뼈, 뇨, 비내 분비물, 및 기관지경 검사 동안 기관지 세정으로부터 얻은 유체를 포함하고 이로 제한되지 않는 가래를 포함하고, 이로 제한되지 않는다.
또한, 검출 방법은 생체 내 검출 방법 (예를 들어, 대상의 생체 내 영상화)일 수 있다. 이 방법은 질환, 예를 들어 본원에서 설명되는 질환의 진단을 위해 사용될 수 있다. 방법은 (1) 제1 표적 (비제한적인 예를 들어 IL-1F6)에 결합하는 제1 시약 및 제2 표적 (비제한적인 예를 들어 IL-1F8)에 결합하는 제2 시약을 대상 또는 대조 대상에게 제1 및 제2 시약이 그들의 표적에 결합하도록 하는 조건 하에 투여하고, (2) 제1 및 제2 시약과 그들의 표적 사이의 복합체의 형성을 검출하는 것을 포함하고, 여기서 대조군, 예를 들어 대조 대상에 비해 대상에서 복합체 형성의 통계상 유의한 변화는 시토킨의 존재를 표시한다.
특정 실시태양에서, 검출 방법은 또한 mRNA 수준을 측정하는 시험관 내 검출 방법일 수 있다. 이 방법은 질환, 예를 들어, 본원에서 설명되는 질환의 진단을 위해 사용될 수 있다. 특정 실시태양에서, 방법은 (1) 환자로부터 샘플을 수거하고, (2) 샘플에서 표적 mRNA의 수준을 검출하는 것을 포함한다. 특정 실시태양에서, 표적 mRNA는 적어도 하나의 IL-22 mRNA, IL-1F6 mRNA, IL-1F8 mRNA, IL-1F9 mRNA, IL-1Rrp2 mRNA 및 IL-17A mRNA를 포함한다. mRNA를 검출하고 정량하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 특정 실시태양에서, 방법은 정량적 RT-PCR을 포함한다. 특정 실시태양에서, 샘플은 환자로부터의 혈액 샘플이다. 발현 수준이 측정될 수 있는 추가의 샘플은 활액, 구강 면봉채집물, 피부, 생검을 위해 제거된 물질, 비제한적인 예를 들어 생검을 위해 제거된 건선 환자의 피부, 정액, 모발, 뼈, 뇨, 비내 분비물, 및 기관지경 검사 동안 기관지 세정으로부터 얻은 유체를 포함하고 이로 제한되지 않는 가래를 포함하고, 이로 제한되지 않는다.
실시예
실시예 1 - 건선 -유사 마우스 모델에서 IL -1 시토킨의 증가된 유전자 및 단백질 발현
심상성 건선 (Psoriasis vulgaris)은 과다증식성 표피 및 혼합형 피부 림프구 침윤을 특징으로 하는 만성 염증성 피부 질병이다. 초기에는 각질형성세포 변경의 1차 질병으로 간주되었지만, 효과적인 면역-조절 요법은 건선성 질병 병인에서 면역 세포 및 그들이 생산하는 시토킨이 하는 역할을 입증한다.
4x105개의 CD4+CD45RBhiCD25- 세포를 병원체가 없는 CB17 scid / scid에 전달하여, 인간 건선과 유사한 특정 특징이 있는 인설성의 상승된 피부 플라크 (plaque)를 유도하였다. 전달 후 제60일에, 대다수의 마우스가 건선-유사 피부 염증, 예를 들어 각질형성세포의 증가된 증식 (이상각화증 (parakeratosis))으로 인한 표피의 비후화 (극세포증 (acanthosis)), 표피의 하향 유두상 돌출 (기저 유두 (basilar papilla)), 및 표피 및 진피 내에서 염증성 세포 침윤을 발병하였다.
피부 병변의 시토킨 성분을 시험하기 위해, 마우스 귀를 입양 전달의 70일 후에 수거하고, IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9 및 그들의 특이적 수용체 IL-1Rrp2의 유전자 발현을 평가하기 위해 정량적 RT-PCR로 처리하였다. QIAGEN RNeasy® 키트 (퀴아겐)를 이용하여 동결된 마우스 귀 생검으로부터 RNA를 단리하였다. 시토킨 유전자의 발현은 다음 표에 따라 사전에 자격을 갖춘 프라이머 및 프로브를 사용하는 타크만(Taqman)® RT-PCR 키트 (어플라이드 바이오시스템즈 (Applied Biosystems))를 사용하여 검사하였다.
Figure pct00002
유전자 발현을 세포당 1,000 카피의 GAPDH mRNA를 가정하면서 하우스키핑 유전자 GAPDH의 발현에 대해 표준화하였다.
염수 주사를 한 대조군 마우스에 비해, 건선-유사 형성을 발병한 마우스에서는 귀 샘플에서 IL-1 시토킨, 즉, IL-1F6 (~500배), IL-1F8 (~60배), 및 IL-1F9 (~50배)의 발현이 유의하게 상승되었다 (도 1a 및 1c). 그들의 수용체, 즉, IL-1Rrp2의 전사체가 또한 약 3-5배 증가되었지만, 증가는 통계적 유의성에 도달하지 않았다. 또한, 건선이 있는 마우스의 백혈구에서 IL-1F6의 발현의 3배 증가 및 IL-1F9의 발현의 5배 증가가 검출되었다.
증가된 유전자 발현이 세포에서 증가된 단백질 생산과 상호관련됨을 확인하기 위해, 3개의 시토킨 중 하나, 즉, IL-1F6의 단백질 수준을 웨스턴 블롯에 의해 귀 용해물에서 검토하였다. 대조군 귀 샘플에 비해 3 내지 4배 초과의 IL-1F6 단백질이 CD4+CD45RBhiCD25- 세포의 수여체로부터의 귀 생검에서 웨스턴 블롯에 의해 검출되었고 (도 1b), 이것은 증가된 단백질 생산이 관찰된 증가된 유전자 발현과 일치함을 나타낸다.
실시예 2 - IL -22는 마우스 피부에서 IL -1 시토킨의 발현을 조절한다
IL-22는 건선에서 Th17 세포 매개된 병상에 요구되고, IL-22 중화 단독으로 건선 진행을 방지하기에 충분하다. 4x105개의 CD4+CD45RBhiCD25- 세포를 실시예 1에 기재된 바와 같이 병원체가 없는 CB17 scid / scid 마우스에 전달하였다. IL-22를 중화시키는 항체를 병원체가 없는 CB17 scid / scid 마우스에게 CD4+CD45RBhiCD25- T 세포의 입양 전달일에 시작하여 매주 1회 정맥내 주사하였다. IL-22를 중화시키는 항체의 정맥내 주사는 수여체 마우스에서 건선-유사 병변의 발병을 예방하였다. 전달 후 제70일에 감소된 증상과 상호관련되어, 귀에서 IL-1 시토킨의 전사체 수준이 또한 감소하였다: IL-1F6 발현 수준에서 ~9배 감소, IL-1F8 발현 수준에서 ~2.25배 감소, 및 IL-1F9 발현 수준에서 ~2.2배 감소 (도 2). 그러나, IL-22 중화는 수용체 IL-1Rrp2 유전자의 상승된 발현 수준에 대해 효과가 없었다. 전사체 수준은 실시예 1에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 의해 측정하였다.
IL-1 시토킨의 발현이 국소 수준에서 IL-22의 농도에 관련되었음을 입증하기 위해, 야생형 BALB/c 마우스에서 500 ng의 재조합 마우스 IL-22를 2주 동안 이틀마다 귀에 직접 주사하였다. 마지막 처리의 6시간 후에, 마우스 귀를 수거하고, 전사체 수준을 실시예 1에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 의해 측정하였다. IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9에 대한 전사체 수준은 대조군으로서 염수를 투여한 동일한 마우스의 좌측 귀에 비해 IL-22를 투여받은 우측 귀에서 모두 ~6배 증가하였다 (도 3). 수용체 IL-1Rrp2 mRNA는 또한 IL-22 처리된 귀에서 상향-조절하는 경향이 있었다. 이들 데이타는 Th17 시토킨인 IL-22가 염증의 부위에서 IL-1 시토킨의 유전자 발현을 직접 조절할 수 있음을 제안한다.
실시예 3 - 인간 각질형성세포에서 IL -1 시토킨의 생산의 시토킨 효과
IL -22, IL -17A, 및 IL -17F
IL-22에 의한 IL-1 이소형의 직접 유도를 추가로 확인하기 위해, 1차 인간 상피 각질형성세포를 2일 동안 IL-22로 처리한 후, 정량적 RT-PCR에 의해 유전자 발현을 검사하였다. 인간 각질형성세포는 해동 후에 p1-p3 계대배양물 (passage)로서 사용하였고, 도 4a 또는 4b에 도시된 바와 같이 0 ng/ml 내지 200 ng/ml의 가변 농도의 IL-22로 처리하였다. 전사체 수준은 실시예 1에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 의해 측정하였다. 제1 실험 세트에서, 200 ng/ml IL-22로 처리한 각질형성세포에서, IL-1F9 전사체 수준은 비-처리된 세포에 비해 4배 증가하였다. IL-1F8 전사체는 비-검출가능한 수준에서 검출가능한 수준으로 상향조절되었다. IL-1F6 전사체는 검출가능한 수준 미만이고, IL-1Rrp2 발현은 변화가 없었다. 제2 실험 세트에서, IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9 전사체에서 투여량 의존적 증가가 관찰되었다. 전사체 카피수에서 광범한 차이 (gapdh에 비해, il1f6 전사체에 대해 E-6, il1f8 전사체에 대해 E-5, il1f9 전사체에 대해 E-3)에도 불구하고, 배지만으로 배양된 것에 비해 200 ng/ml의 IL-22를 사용하여 배양된 각질형성세포에서 il1f6, il1f8 및 il1f9 전사체 수준에서 2 - 4배 증가가 일반적으로 검출되었다 (도 4b). 그러나, IL-22는 수용체 il1rl2 발현에 대해 효과가 없었다 (데이타를 제시하지 않음).
IL-22 및 IL-17A는 Th17 세포에 의해 동시-발현된다. IL-22 및 IL-17A는 몇몇 항미생물 펩티드, 예를 들어, β-데펜신 2, S100A7, S100A8 및 S100A9의 발현을 향상시키도록 상승적으로 작용한다. 이들 Th17 시토킨의 기능적 관계를 더욱 조사하기 위해, IL-1 이소형 및 그들의 수용체의 발현을 IL-22, IL-17A 및 IL-17F의 조합물로 처리한 1차 각질형성세포에서 검사하였다. 도 5a에 도시된 바와 같이, 1차 각질형성세포를 유전자 발현의 검사 전에 2일 동안 IL-22 (200 ng/ml) 또는 IL-17A (20 ng/ml) 단독으로 또는 IL-22 (200 ng/ml) 및 IL-17A (20 ng/ml)의 조합물로 처리하였다. 전사체 수준은 실시예 1에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 의해 측정하였다. IL-17A는 단독으로는 IL-1F6 (~20배), IL-1F8 (~1배) 및 IL-1F9 (~7배)의 발현을 유도할 수 있지만, IL-22의 존재는 IL-1F6 (~80배) 및 IL-1F9 (~15배)의 발현을 상승적으로 유도하고 IL-1F8 (~2배)의 발현을 상가적으로 향상시켰다 (도 5a 및 5c). 그러나, IL-17F 단독으로의 처리는 이들 IL-1 시토킨 및 그들의 수용체 IL-1Rrp2의 유전자 발현을 유도하지 않았고, IL-22 및 IL-17F의 조합물은 IL-1 시토킨 및 IL-1Rrp2의 유전자 발현을 IL-22 단독에서 관찰된 것보다 더 많이 유도하지 않았다. IL-22+IL-17A 처리된 각질형성세포에서 IL-1F9 단백질의 양을 웨스턴 블롯에 의해 검사하였고 (도 5b), 이것은 증가된 전사체 수준이 증가된 단백질 생산과 상호관련됨을 확인한다. 처리하지 않은 것이 비해 IL-22+IL-17A 처리된 각질형성세포에서 웨스턴 블롯에 의해 신호의 적어도 2배 증가가 검출되었다.
TNF -α
TNF-α는 피부에서 염증 반응을 개시하고 유지하는 또다른 중요한 염증유발성 시토킨이다. 임상 연구에서 TNF 경로를 차단하는 것이 건선 환자에서 효과적인 치료임을 입증하였다 [Gottlieb A.B. et al., J. Immunol. 175, 2721-29 (2005)]. TNF 차단의 임상 효율에 비추어, TNF-α에 의한 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9의 가능한 조절을 본 발명자들의 시험관 내 인간 각질형성세포 배양 시스템에서 검사하였다. 도 19에 도시된 바와 같이, TNF-α 자극된 각질형성세포는 배지 단독으로 배양된 세포에 비해 il1f6, il1f8 및 il1f9 유전자 전사체에서 10-20배 증가하였다. 증가된 IL-1 유전자 발현은 배양액에 IL-22 첨가로 추가로 향상될 수 있다. 함께 살펴보면, 이들 데이타는 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9가 피부에서 IL-17A, IL-22 및 TNF-α에 의한 그들의 유도의 하류의 효과기 시토킨임을 제안한다.
IFN -γ 및 IL -12
건선에서 조직 손상의 유도 및 진행은 Th1 T 세포 및 그들의 특징적 시토킨 IFN-γ 및 IL-12에 전통적으로 연관되었다. il1f6, il1f8 및 il1f9 유전자의 발현에 대한 이들 Th1 시토킨의 효과를 1차 각질형성세포에서 검사하였다. 도 20에 도시된 바와 같이, il1f8의 발현은 200 ng/ml 농도에서 IL-12에 의해 2배 유도되고, il1f9의 전사체 수준은 변화를 보이지 않았다. IFN-γ 단독으로의 처리는 il1f8 전사체의 약 10배 증가를 유도한 반면, il1f9 유전자 발현에는 최소의 효과를 가졌다. IFN-γ 각질형성세포 배양액에 IL-12를 첨가하면 IFN-γ 단독에 의해 유도된 il1f8 또는 il1f9 전사체를 실질적으로 향상시키지 않았다. 중요한 사실은, Th17 시토킨 또는 TNF-α에 반응하여 각질형성세포에서 il1f6 전사체 수준의 유의한 증가와는 반대로, Th1 시토킨은 il1f6의 발현에 대해 효과가 없었다는 것이다. 이들 데이타는 본 발명자들의 시험관 내 각질형성세포 시스템에서, IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9의 발현이 Th17 시토킨에 의해 주로 조절되지만, Th1 시토킨에 의해 조절되지 않음을 입증한다.
IL -17A 및 IFN -γ
Th1 세포 및 Th17 세포는 종종 인간 건선성 플라크 내에 동시-존재하므로, 인간 각질형성세포에 의한 IL-1 이소형의 발현에 대한 IL-17A 및 IFN-γ의 조합된 효과를 검사하였다. 도 21에 도시된 바와 같이, IL-17A는 IFN-γ에 의한 il1f8 전사체의 유도를 추가로 3배 향상시켰다. 그러나, 상기 시토킨 조합은 IL-17A에 의한 il1f6 또는 il1f9 전사체의 증가를 향상시키지 않는다 (데이타를 제시하지 않음).
실시예 4 - 증가된 IL -1 시토킨 유전자 발현은 인간 건선 피부 병변에서 IL -17A, IL -22, TNF -α 및 IFN -γ와 상호관련되었다
건선의 마우스 모델에서 관찰을 확인하기 위해, 건선 환자로부터 얻은 인간의 짝을 이룬 비-병변 및 병변 피부 샘플을 검사하였다. 11개의 짝을 이룬 피부 샘플에서 염증유발성 시토킨의 패널 (panel)의 발현 수준을 정량적 RT-PCR을 이용하여 검사하였다. 전사체 수준은 실시예 1에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 의해 측정하였다. 모든 환자가 군으로서 (도 6a) 또는 개별적으로 (도 6b 및 6c) 건선 병변에서 IL-1F6 (평균 약 20배 더 높은), IL-1F8 (평균 100배 더 높은), 및 IL-1F9 (평균 4배 더 높은)의 발현이 증가하였다. IL-1F9 mRNA는 세포당 최고 카피수에 도달하였고: GAPDH mRNA 카피의 44％ (도 6a), 이것은 피부 염증에서 강한 생물학적 기능을 나타낸다. 건선 병변에서 상승된 IL-1Rrp2 전사체가 검출되지 않았다. IL-1Rrp2의 발현 수준은 정상 피부 조직에서 mRNA 카피에 비해 병변에서 하향-조절되었다.
예상된 바와 같이, 인간 피부 병변에서 3개의 모든 IL-1 이소형의 발현은 Th17 시토킨 IL-22, IL-21 및 IL-17A의 발현과 강하게 상호관련되었지만 (표 3, 도 7a 및 도 8), 수용체 IL1RL2의 발현은 Th17 시토킨과 상관성이 없었다 (표 3 및 도 7b). IL-21R의 발현은 또한 IL-1 이소형과 상호관련되지만, IL-22R 또는 IL-22BP와 상호관련되지 않는다. 시험관 내에서 각질형성세포에 대한 IL-17F의 효과에 대한 상기 관찰과 일치하게, IL-1 이소형의 발현 및 IL-17F의 발현 사이에 상관성이 없었다 (도 8). 추가로, 3개의 IL-1 이소형의 발현을 IL-22R, IL-22BP, IL-21, IL-21R, IL-23, 및 TGFα의 발현에 비교하였다. IL-1F6 및 IL-1F8의 발현은 또한 다른 Th17 시토킨인 IL-21 및 그의 수용체와 상호관련된다. IL-1F9의 발현은 또한 IL-23의 발현과 상호관련되고, IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9의 발현은 TGFα의 발현과 상호관련된다.
Figure pct00003
시험관 내에서 TNF-α 자극 시에 IL-1 이소형의 각질형성세포 발현을 확증하였기 때문에, TNF의 발현은 건선성 병변에서 IL-1 시토킨의 발현과 상호관련된다. 또한, IFN-γ의 상승된 발현이 또한 병변에서 검출되고 IL-1F6, IL-1F8, 및 IL-1F9의 발현과 잘 상호관련되었지만 IL-12p35는 그렇지 않았고, 이것은 건선에서 Th1 및 Th17 세포 모두의 협력적인 관여를 나타낸다.
실시예 5 - 자가면역 질병의 동물 모델에서 생체마커로서 IL -1 시토킨의 차별화된 발현
자가면역 질병의 생체마커로서 IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9 및 그들의 수용체의 가능성을 평가하기 위해, 이들 유전자의 발현을 3개의 상이한 자가면역 마우스 모델로부터 수득한 혈액에서 검사하였다.
IL-1 이소형 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9를, 콜라겐 및 어쥬번트 (adjuvant)를 사용한 면역화에 의해 염증이 유도된 콜라겐 유도된 관절염 (CIA) 마우스 모델에서 검사하였다. 질병을 유도하기 위해, DBA1 마우스를 CFA 내에 유화시킨 200 ng의 소 타입 II 콜라겐 (콘드렉스)으로 피부 내로 면역화시켰다. 제21일에, 모든 마우스에게 IFA 중 200 ng의 콜라겐 추가접종물을 투여하였다. 제35일에, 혈액을 수집하고, 즉시 QIAGEN RNeasy® 혈액 미니 키트를 이용하여 RNA 추출하였다. 백혈구를 정량적 RT-PCR을 통한 유전자 발현 분석을 위해 사용하였다. 전사체 수준은 실시예 1에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 의해 측정하였다. 나이브 대조군 마우스에 비해, IL-1F8 및 IL-1F9의 mRNA는 이환된 마우스의 혈액에서 각각 ~10배 및 ~4.3배 증가한 한편, IL-1F6의 메시지 (message)는 이환된 마우스 및 대조군 마우스 모두에서 검출가능하지 않았다 (도 9).
IL-1 이소형 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9를 또한 나이브 야생형 Balb/c 마우스로부터 효과기 (CD4+CD45RBhiCD25-) T 세포의 정맥내 전달에 의해 scid / scid 마우스에서 유도된 건선-유사 피부 염증 마우스 모델에서 검사하였다. 질병 유도의 제70일에 마우스 혈액을 수집하고, 백혈구 내의 유전자 발현을 분석하였다. 전사체 수준은 실시예 1에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 의해 측정하였다. IL-1F6 및 IL-1F9의 전사체 수준는 염수 주사를 한 대조군 마우스에 비해 건선을 발병한 수여체 마우스에서 3-6배 증가하였다. 혈액 내의 IL-1F8의 전사체 수준은 검출 수준 미만이었다. 수용체 IL-1Rrp2의 발현은 또한 매우 낮고, 건선-유사 마우스의 혈액에서 하향-조절되는 것으로 보였다 (도 10).
IL-1 이소형 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9를 자발적 루푸스 마우스 모델에서 또한 검사하였다. NZBWF/1 동물주의 마우스는 자발적 루푸스 발병에 유전적으로 감수성이다. 사용된 콜로니는 대개 약 20주에서 검출가능한 루푸스 증상, 예를 들어 단백뇨 또는 항-dsDNA 항체를 보인다. 이들 마우스의 혈액 샘플을 질병 발병 10주 전 및 7개월 후에 수집하고, 유전자 발현을 검사하고 10주령의 건강한 C57BL/6 마우스 (자발적 루푸스를 발병하지 않는 동물주)에 비교하였다. 전사체 수준은 실시예 1에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 의해 측정하였다. 질병에서 10주 조기 시점에, IL-1F6, IL-1F9 및 IL-1Rrp2의 유전자 발현이 증가하였고 (도 11), 이것은 이들 유전자가 루푸스에 대한 조기 생체마커일 수 있음을 나타낸다. IL-1F6에 대한 전사체는 단백뇨의 루푸스 증상을 발병하고 항-dsDNA 항체가 증가한 7월령 마우스에서 추가로 상승되었다. 그러나, IL-1F9 및 수용체 IL-1Rrp2의 전사체는 상기 시점에서 하향-조절되었지만, 여전히 대조군 C57BL/6 마우스에 비해 더 높았다. IL-1F8의 전사체는 NZBWF1/J 루푸스 마우스의 혈액에서 검출하기에는 너무 적었다.
이들 결과는 IL-1 이소형의 상향조절된 mRNA 발현이 염증성 질병과 연관되고 이환된 동물의 혈액 샘플로부터 검출될 수 있음을 입증하였다. 이전에, 이들 이소형은 단지 피부 조직 샘플 및 각질형성세포에서 검출되었다. 상이한 질병 모델에서 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9, 및 그들의 특이적 수용체의 유도 및 발현의 상이한 수준은 이들 유전자가 다양한 자가면역 질병에서 비정상적으로 발현됨을 나타내고, 이것은 인간 염증성 및 자가면역 질병의 진단을 위한 생체마커로서 IL-1 이소형 발현 (예를 들어 mRNA 또는 단백질)의 잠재적인 용도를 제안한다.
실시예 6 - IL -1 이소형은 시험관 내에서 IL -21에 의해 조절되지 않는다
도 22에 도시된 바와 같이, IL-21은 공여체 1에서 il1f8 및 il1f9 전사체를 하향-조절하지만, 공여체 2에서 그들의 발현을 약간 증가시키고, 이것은 IL-21이 각질형성세포에서 IL-1 이소형을 직접 조절하지 않음을 나타낸다. 또한, 배양액에 IL-22를 첨가하면 IL-1 이소형의 발현에 유의하게 영향을 미치지 않는다. IL-21과 동시-배양된 각질형성세포에서 il1f6의 전사체 수준은 검출 한계 미만이었다.
실시예 7 - IL -1α 및 IL -1β 발현은 시험관 내에서 Th17 또는 Th1 시토킨에 의해 조절되지 않는다
최근의 임상 시험에서는 IL-12/23p40 경로를 차단하는 생물학적 물질이 건선에서 효과적임을 입증하였다 (Krueger, G. et al. N Engl J Med 356, 580-592 (2007)). 또한, 예비 임상 증거는 IL-17A를 차단하는 것이 또한 유익한 효과가 있음을 나타낸다 (Patel, D. In ACR/ARHP Annual Scientific Meeting, San Francisco (2008)). 이와 달리, 재조합 IL-1R 길항제를 사용한 IL-1α 및 IL-1β 경로의 차단은 파일럿 (pilot) 건선 연구에서 중정도 유익한 것으로 나타났다 (Gibbs, A.G. et al. In 25th European Workshop for Rheumatology Research. Arthritis Research and Therapy, Glasgow, UK. 68 (2005)). T 세포-유래된 시토킨에 의한 il1a 및 il1b의 조절을 본 발명자들의 시험관 내 배양 시스템에서 검사하였다. il1a 및 il1b의 발현의 약간의 증가 (~1.5-2배)는 각질형성세포에서 IL-17A 또는 IFN-γ에 의해 유도되었다 (도 23). 그러나, IL-22 또는 IL-12는 각각 단독으로, 또는 IL-17A 또는 IFN-γ와 조합으로 효과가 없었다. 이들 데이타는 IL-1α 및 IL-1β가 건선 병인에 중요한 주요 국소 면역 조정물질일 수 없음을 제안한다. 그러나, Th17 시토킨에 의한 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9의 강한 유도는 이들 IL-1 이소형이 질병의 주요 국소 조정물질을 나타낼 수 있음을 제안한다.
실시예 8 - IL -1α, IL -1F6 및 IL -1F9 발현은 시험관 내에서 IL -1 이소형에 의해 조절된다
건선에서 상승된 IL-1 이소형의 하류 효과를 조사하기 위해, 본 발명자들의 시험관 내 배양 시스템에서 IL-1α, IL-1β, IL-1F6 및 IL-1F9의 발현을 조절하는 IL-16, IL-1F8 및 IL-1F9의 능력을 검사하였다 (도 24). il1a의 발현에서 약간의 증가 (~2-6배)가 IL-1F6, IL-1F8 또는 IL-1F9 단독에 의해 유도되었다. IL-17A의 첨가는 IL-1 이소형에 의한 유도를 추가로 증가시켰다. 그러나, IFN-γ 또는 TNF-α의 첨가는 IL-1α 발현에 추가로 영향을 미치지 않았다. 3개의 IL-1 이소형은 단독으로 또는 Th1 또는 Th17 시토킨과 조합으로 IL-1β 발현의 근소한 조절을 보였다. 3개의 모든 IL-1 이소형은 IL-1F6의 발현을 유도하였고, 상기 증가는 동시-배양 후 6 hr정도로 이르게 검출되었다 (데이타를 제시하지 않음). IL-17A는 3개의 모든 이소형과 상승작용하고, il1f6 mRNA의 유도를 강하게 향상시켰다. TNF-α의 첨가가 또한 상기 증가를 향상시켰지만 더 적은 정도로 향상시켰다. IL-1F8 및 IL-1F9는 IL-1F9의 발현을 10배까지 강하게 유도하였다. 다시, IL-17A는 IL-1F8 및 IL-1F9와 상승작용하여, il1f9의 전사 수준을 ~80배로 증가시켰다. TNF-α의 첨가는 약간의 상가적 효과가 있는 반면, IFN -γ의 첨가는 효과가 없었다. 이들 데이타는 신규한 IL-1 이소형이 그들 자신의 유전자 발현을 유도할 뿐만 아니라, Th17 시토킨과 협동하여 상기 자가-조절을 더욱 향상시킴을 제안한다. IFN-γ는 IL-1 이소형의 자가-향상에 보통의 효과를 가지고, 이것은 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9의 유전자 발현의 유도에 대한 그의 보통의 효과와 일치한다.
실시예 9 - 급성기 반응물의 유도에서 IL -1 이소형의 상승적 효과
IL-1F6, IL-1F8 또는 IL-1F9는 단독으로 saa1 /2 (혈청 아밀로이드 A1/2), serpine1 (플라스미노겐 활성화 억제제-1 (PAI-1, Serpin E1로도 알려짐)), plau (유로키나제형 플라스미노겐 활성화인자 (u-PA로서 알려짐)), plat (조직 플라스미노겐 활성화인자 (t-PA로서 알려짐)), tnfa 및 il6을 비롯한 다양한 급성기 반응물의 유전자 발현에서 약간의 증가 (~1-3배)를 유도하였다 (도 25).
TNF-α의 증가는 3개의 모든 IL-1 이소형과 상승적 효과를 가져서, IL-1 이소형에 의해 유도된 saa1 /2 전사체의 발현을 강하게 향상시켰다. IL-17A 또는 IFN-γ의 첨가는 saa1 /2 유전자의 발현에 상가적 효과를 가졌다. TNF-α의 첨가는 또한 IL-1F6 및 IL-1F8과 상승적 효과를 가져서, 각각의 IL-1 이소형에 의해 유도된 plau 및 plat 전사체의 발현을 강하게 향상시켰다. IL-17A 또는 IFN-g의 첨가는 plau 및 plat 유전자의 발현에 추가의 효과가 없었다 (도 25).
IL-17A는 IL-1F9와 상승작용하는 반면, IFN-γ는 IL-1F6 및 IL-1F8과 상승작용하여 IL-1 이소형에 의해 유도된 tnfa 전사체의 발현을 ~40-60배 증가시켰다. TNF-α는 그 자신의 발현을 약 10배 유도하였지만, IL-1 이소형과 조합할 때 상승작용은 관찰되지 않았다 (도 25).
IFN-γ는 IL-1F6 및 IL-1F8과 상승작용하여 동시-배양의 6 hr 후에 il6 전사체의 발현을 ~230-4000배 증가시켰다. il6 유전자의 상기 강한 유도는 동시-배양의 72 hr 후에도 여전히 관찰되었다. IFN-γ는 또한 IL-1F9와 상승적 효과를 가져서, il6 전사체의 발현을 ~20배 증가시켰다. IL-17A는 또한 il6 발현에 대해 IL-1F6 및 IL-1F9와 상승적 효과를 보였지만, 상승적 반응은 IFN-γ만큼 강하지 않았다. TNF-α를 3가지 IL-1 이소형과 조합시키면 il6 발현에 대해 상승적 효과를 갖지 않았다 (도 25).
실시예 10 - IL -1 이소형은 IL -17A와 협동하여 항미생물 펩티드를 유도한다
IL-17A는 β-데펜신 2 (유전자 기호: def4) 및 S100A7 (유전자 기호: s100a7)를 비롯한 숙주 방어와 연관된 항미생물 펩티드의 발현을 유도하는 것으로 알려져 있다. IL-1 이소형이 단독으로 또는 Th17 또는 Th1 시토킨과 조합으로 동일한 유전자를 유도할 수 있는지 검사하기 위해, 각질형성세포를 개별 IL-1 시토킨과 함께 또는 이들 시토킨의 짝을 이룬 조합으로 인큐베이팅하였다. IL-1 이소형은 단독으로 β-데펜신 2 또는 S100A7 유전자 발현을 강하게 유도하지 않았지만, IL-17A와 조합으로 IL-1F8은 s100a7 전사체의 ~16배 증가를 유도한 한편, IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9는 IL-17A와 조합으로 def4 전사의 수준을 ~600-800배 증가시켰다 (도 26). TNF-α는 s100a7 발현의 유도에서 IL-1F8과 상가적 효과를 갖고, IFN-γ는 def4의 유전자 발현에서 3개의 모든 IL-1 이소형과 상가적 효과를 갖는다 (도 26).
하기 문헌은 IL-1 시토킨 및 IL-1Rrp2 수용체에 대한 추가의 정보를 제공하고, 임의의 목적을 위해 본원에 참고로 포함된다.
Figure pct00004
Figure pct00005
당업자는 본원에 기재된 구체적인 실시태양의 많은 균등물을 인식하거나 단지 통상적인 실험을 통해 확인할 수 있을 것이다. 그러한 균등물은 다음 특허청구범위에 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> WYETH <120> USES OF IL-22, IL-17, AND IL-1 FAMILY CYTOKINES IN AUTOIMMUNE DISEASES <130> WYT-106-PCT <140> <141> <150> 61/193,087 <151> 2008-10-27 <150> 61/092,743 <151> 2008-08-28 <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1191 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 gaattcggcc aaagaggcct acaggttctc cttccccagt caccagttgc tcgagttaga 60 attgtctgca atggccgccc tgcagaaatc tgtgagctct ttccttatgg ggaccctggc 120 caccagctgc ctccttctct tggccctctt ggtacaggga ggagcagctg cgcccatcag 180 ctcccactgc aggcttgaca agtccaactt ccagcagccc tatatcacca accgcacctt 240 catgctggct aaggaggcta gcttggctga taacaacaca gacgttcgtc tcattgggga 300 gaaactgttc cacggagtca gtatgagtga gcgctgctat ctgatgaagc aggtgctgaa 360 cttcaccctt gaagaagtgc tgttccctca atctgatagg ttccagcctt atatgcagga 420 ggtggtgccc ttcctggcca ggctcagcaa caggctaagc acatgtcata ttgaaggtga 480 tgacctgcat atccagagga atgtgcaaaa gctgaaggac acagtgaaaa agcttggaga 540 gagtggagag atcaaagcaa ttggagaact ggatttgctg tttatgtctc tgagaaatgc 600 ctgcatttga ccagagcaaa gctgaaaaat gaataactaa ccccctttcc ctgctagaaa 660 taacaattag atgccccaaa gcgatttttt ttaaccaaaa ggaagatggg aagccaaact 720 ccatcatgat gggtggattc caaatgaacc cctgcgttag ttacaaagga aaccaatgcc 780 acttttgttt ataagaccag aaggtagact ttctaagcat agatatttat tgataacatt 840 tcattgtaac tggtgttcta tacacagaaa acaatttatt ttttaaataa ttgtcttttt 900 ccataaaaaa gattactttc cattccttta ggggaaaaaa cccctaaata gcttcatgtt 960 tccataatca gtactttata tttataaatg tatttattat tattataaga ctgcatttta 1020 tttatatcat tttattaata tggatttatt tatagaaaca tcattcgata ttgctacttg 1080 agtgtaaggc taatattgat atttatgaca ataattatag agctataaca tgtttatttg 1140 acctcaataa acacttggat atcctaaaaa aaaaaaaaaa aaagcggccg c 1191 <210> 2 <211> 179 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ala Ala Leu Gln Lys Ser Val Ser Ser Phe Leu Met Gly Thr Leu 1 5 10 15 Ala Thr Ser Cys Leu Leu Leu Leu Ala Leu Leu Val Gln Gly Gly Ala 20 25 30 Ala Ala Pro Ile Ser Ser His Cys Arg Leu Asp Lys Ser Asn Phe Gln 35 40 45 Gln Pro Tyr Ile Thr Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser 50 55 60 Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe 65 70 75 80 His Gly Val Ser Met Ser Glu Arg Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu 85 90 95 Asn Phe Thr Leu Glu Glu Val Leu Phe Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln 100 105 110 Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Ala Arg Leu Ser Asn Arg 115 120 125 Leu Ser Thr Cys His Ile Glu Gly Asp Asp Leu His Ile Gln Arg Asn 130 135 140 Val Gln Lys Leu Lys Asp Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu 145 150 155 160 Ile Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn 165 170 175 Ala Cys Ile <210> 3 <211> 1166 <212> DNA <213> Mus sp. <400> 3 gaattcggcc aaagaggcct acctaaacag gctctcctct cagttatcaa ctgttgacac 60 ttgtgcgatc tctgatggct gtcctgcaga aatctatgag tttttccctt atggggactt 120 tggccgccag ctgcctgctt ctcattgccc tgtgggccca ggaggcaaat gcgctgcccg 180 tcaacacccg gtgcaagctt gaggtgtcca acttccagca gccatacatc gtcaaccgca 240 cctttatgct ggccaaggag gccagccttg cagataacaa cacagatgtc cggctcatcg 300 gggagaaact gttccgagga gtcagtgcta aggatcagtg ctacctgatg aagcaggtgc 360 tcaacttcac cctggaagac gttctgctcc cccagtcaga caggttccag ccctacatgc 420 aggaggtggt gcctttcctg accaaactca gcaatcagct cagctcctgt cacatcagcg 480 gtgacgacca gaacatccag aagaatgtca gaaggctgaa ggagacagtg aaaaagcttg 540 gagagagtgg agagatcaag gcgattgggg aactggacct gctgtttatg tctctgagaa 600 atgcttgcgt ctgagcgaga agaagctaga aaacgaagaa ctgctccttc ctgccttcta 660 aaaagaacaa taagatccct gaatggactt ttttactaaa ggaaagtgag aagctaacgt 720 ccatcattat tagaagattt cacatgaaac ctggctcagt tgaaaaagaa aatagtgtca 780 agttgtccat gagaccagag gtagacttga taaccacaaa gattcattga caatatttta 840 ttgtcactga tgatacaaca gaaaaataat gtactttaaa aaattgtttg aaaggaggtt 900 acctctcatt cctttagaaa aaaagcttat gtaacttcat ttccataacc aatattttat 960 atatgtaagt ttatttatta taagtataca ttttatttat gtcagtttat taatatggat 1020 ttatttatag aaacattatc tgctattgat atttagtata aggcaaataa tatttatgac 1080 aataactatg gaaacaagat atcttaggct ttaataaaca catggatatc ataaaaaaaa 1140 aaaaaaaaaa aaaaaaaagc ggccgc 1166 <210> 4 <211> 179 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 4 Met Ala Val Leu Gln Lys Ser Met Ser Phe Ser Leu Met Gly Thr Leu 1 5 10 15 Ala Ala Ser Cys Leu Leu Leu Ile Ala Leu Trp Ala Gln Glu Ala Asn 20 25 30 Ala Leu Pro Val Asn Thr Arg Cys Lys Leu Glu Val Ser Asn Phe Gln 35 40 45 Gln Pro Tyr Ile Val Asn Arg Thr Phe Met Leu Ala Lys Glu Ala Ser 50 55 60 Leu Ala Asp Asn Asn Thr Asp Val Arg Leu Ile Gly Glu Lys Leu Phe 65 70 75 80 Arg Gly Val Ser Ala Lys Asp Gln Cys Tyr Leu Met Lys Gln Val Leu 85 90 95 Asn Phe Thr Leu Glu Asp Val Leu Leu Pro Gln Ser Asp Arg Phe Gln 100 105 110 Pro Tyr Met Gln Glu Val Val Pro Phe Leu Thr Lys Leu Ser Asn Gln 115 120 125 Leu Ser Ser Cys His Ile Ser Gly Asp Asp Gln Asn Ile Gln Lys Asn 130 135 140 Val Arg Arg Leu Lys Glu Thr Val Lys Lys Leu Gly Glu Ser Gly Glu 145 150 155 160 Ile Lys Ala Ile Gly Glu Leu Asp Leu Leu Phe Met Ser Leu Arg Asn 165 170 175 Ala Cys Val <210> 5 <211> 477 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 atggaaaaag cattgaaaat tgacacacct cagcagggga gcattcagga tatcaatcat 60 cgggtgtggg ttcttcagga ccagacgctc atagcagtcc cgaggaagga ccgtatgtct 120 ccagtcacta ttgccttaat ctcatgccga catgtggaga cccttgagaa agacagaggg 180 aaccccatct acctgggcct gaatggactc aatctctgcc tgatgtgtgc taaagtcggg 240 gaccagccca cactgcagct gaaggaaaag gatataatgg atttgtacaa ccaacccgag 300 cctgtgaagt cctttctctt ctaccacagc cagagtggca ggaactccac cttcgagtct 360 gtggctttcc ctggctggtt catcgctgtc agctctgaag gaggctgtcc tctcatcctt 420 acccaagaac tggggaaagc caacactact gactttgggt taactatgct gttttaa 477 <210> 6 <211> 158 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Glu Lys Ala Leu Lys Ile Asp Thr Pro Gln Gln Gly Ser Ile Gln 1 5 10 15 Asp Ile Asn His Arg Val Trp Val Leu Gln Asp Gln Thr Leu Ile Ala 20 25 30 Val Pro Arg Lys Asp Arg Met Ser Pro Val Thr Ile Ala Leu Ile Ser 35 40 45 Cys Arg His Val Glu Thr Leu Glu Lys Asp Arg Gly Asn Pro Ile Tyr 50 55 60 Leu Gly Leu Asn Gly Leu Asn Leu Cys Leu Met Cys Ala Lys Val Gly 65 70 75 80 Asp Gln Pro Thr Leu Gln Leu Lys Glu Lys Asp Ile Met Asp Leu Tyr 85 90 95 Asn Gln Pro Glu Pro Val Lys Ser Phe Leu Phe Tyr His Ser Gln Ser 100 105 110 Gly Arg Asn Ser Thr Phe Glu Ser Val Ala Phe Pro Gly Trp Phe Ile 115 120 125 Ala Val Ser Ser Glu Gly Gly Cys Pro Leu Ile Leu Thr Gln Glu Leu 130 135 140 Gly Lys Ala Asn Thr Thr Asp Phe Gly Leu Thr Met Leu Phe 145 150 155 <210> 7 <211> 1172 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 ggttcctccc cactctgtct ttctcacctc tccttcactt ttcctagcct cctcaccacc 60 atctgatcta tcttgttctc ttcacaaaag gctctgaaga catcatgaac ccacaacggg 120 aggcagcacc caaatcctat gctattcgtg attctcgaca gatggtgtgg gtcctgagtg 180 gaaattcttt aatagcagct cctcttagcc gcagcattaa gcctgtcact cttcatttaa 240 tagcctgtag agacacagaa ttcagtgaca aggaaaaggg taatatggtt tacctgggaa 300 tcaagggaaa agatctctgt ctcttctgtg cagaaattca gggcaagcct ttaagcttca 360 gggctcccaa gataacatag ggaaggacac ttgctggaaa ctagttggaa ttcacacatg 420 cataaacctg gatgtgagag agagctgctt catgggaacc cttgaccaat ggggaatagg 480 agtgggtaga aagaagtgga agagttcctt tcaacatcac catctcagga agaaggacaa 540 agatttctca tccatgcgga ccaacatagg aatgccagga aggatgtaga aataagggga 600 ggaagattcc catctctaca atctttgagt gggtttgcta tcaatgaaat gctacaaatg 660 gaataagttg cagaaatttt tctcttttct tgggttctgg agagtttgta aaacaaggac 720 actatgtatt tttaaagagt tggtaaatct tacctgtaaa gctagagaag gtcggagtct 780 ttttaggagt agatttggac tacataacct gtaaatgtgt tttgtccagt ccttagagtg 840 ttttttaaaa aattgtaaag tcaaggtttt catgaaaaat gggaagatca gacaacattg 900 ctcctgaatt cccacagagc agcaagctac tagagctcaa tctgttattt cttttcctga 960 tgtacagggg ttaagtccta tggaagaaac agcagaatta ttcaaaatta tttacataat 1020 gtgcaattat tcactagagc atgaggagtg aaacgctctg tttagtatgt ataacttaaa 1080 aggaacacat acaattaaaa gtaattgaaa gacatttctt cttaaaaatt ctataatctt 1140 acactggtaa aataaactag tttttcccat gt 1172 <210> 8 <211> 164 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Asn Pro Gln Arg Glu Ala Ala Pro Lys Ser Tyr Ala Ile Arg Asp 1 5 10 15 Ser Arg Gln Met Val Trp Val Leu Ser Gly Asn Ser Leu Ile Ala Ala 20 25 30 Pro Leu Ser Arg Ser Ile Lys Pro Val Thr Leu His Leu Ile Ala Cys 35 40 45 Arg Asp Thr Glu Phe Ser Asp Lys Glu Lys Gly Asn Met Val Tyr Leu 50 55 60 Gly Ile Lys Gly Lys Asp Leu Cys Leu Phe Cys Ala Glu Ile Gln Gly 65 70 75 80 Lys Pro Thr Leu Gln Leu Lys Leu Gln Gly Ser Gln Asp Asn Ile Gly 85 90 95 Lys Asp Thr Cys Trp Lys Leu Val Gly Ile His Thr Cys Ile Asn Leu 100 105 110 Asp Val Arg Glu Ser Cys Phe Met Gly Thr Leu Asp Gln Trp Gly Ile 115 120 125 Gly Val Gly Arg Lys Lys Trp Lys Ser Ser Phe Gln His His His Leu 130 135 140 Arg Lys Lys Asp Lys Asp Phe Ser Ser Met Arg Thr Asn Ile Gly Met 145 150 155 160 Pro Gly Arg Met <210> 9 <211> 1180 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 gagccacgat tcagtcccct ggactgtaga taaagaccct ttcttgccag gtgctgagac 60 aaccacacta tgagaggcac tccaggagac gctgatggtg gaggaagggc cgtctatcaa 120 tcaatgtgta aacctattac tgggactatt aatgatttga atcagcaagt gtggaccctt 180 cagggtcaga accttgtggc agttccacga agtgacagtg tgaccccagt cactgttgct 240 gttatcacat gcaagtatcc agaggctctt gagcaaggca gaggggatcc catttatttg 300 ggaatccaga atccagaaat gtgtttgtat tgtgagaagg ttggagaaca gcccacattg 360 cagctaaaag agcagaagat catggatctg tatggccaac ccgagcccgt gaaacccttc 420 cttttctacc gtgccaagac tggtaggacc tccacccttg agtctgtggc cttcccggac 480 tggttcattg cctcctccaa gagagaccag cccatcattc tgacttcaga acttgggaag 540 tcatacaaca ctgcctttga attaaatata aatgactgaa ctcagcctag aggtggcagc 600 ttggtctttg tcttaaagtt tctggttccc aatgtgtttt cgtctacatt ttcttagtgt 660 cattttcacg ctggtgctga gacaggggca aggctgctgt tatcatctca ttttataatg 720 aagaagaagc aattacttca tagcaactga agaacaggat gtggcctcag aagcaggaga 780 gctgggtggt ataaggctgt cctctcaagc tggtgctgtg taggccacaa ggcatctgca 840 tgagtgactt taagactcaa agaccaaaca ctgagctttc ttctaggggt gggtatgaag 900 atgcttcaga gctcatgcgc gttacccacg atggcatgac tagcacagag ctgatctctg 960 tttctgtttt gctttattcc ctcttgggat gatatcatcc agtctttata tgttgccaat 1020 atacctcatt gtgtgtaata gaaccttctt agcattaaga ccttgtaaac aaaaataatt 1080 cttgtgttaa gttaaatcat ttttgtccta attgtaatgt gtaatcttaa agttaaataa 1140 actttgtgta tttatataat aataaagcta aaactgatat 1180 <210> 10 <211> 169 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Met Arg Gly Thr Pro Gly Asp Ala Asp Gly Gly Gly Arg Ala Val Tyr 1 5 10 15 Gln Ser Met Cys Lys Pro Ile Thr Gly Thr Ile Asn Asp Leu Asn Gln 20 25 30 Gln Val Trp Thr Leu Gln Gly Gln Asn Leu Val Ala Val Pro Arg Ser 35 40 45 Asp Ser Val Thr Pro Val Thr Val Ala Val Ile Thr Cys Lys Tyr Pro 50 55 60 Glu Ala Leu Glu Gln Gly Arg Gly Asp Pro Ile Tyr Leu Gly Ile Gln 65 70 75 80 Asn Pro Glu Met Cys Leu Tyr Cys Glu Lys Val Gly Glu Gln Pro Thr 85 90 95 Leu Gln Leu Lys Glu Gln Lys Ile Met Asp Leu Tyr Gly Gln Pro Glu 100 105 110 Pro Val Lys Pro Phe Leu Phe Tyr Arg Ala Lys Thr Gly Arg Thr Ser 115 120 125 Thr Leu Glu Ser Val Ala Phe Pro Asp Trp Phe Ile Ala Ser Ser Lys 130 135 140 Arg Asp Gln Pro Ile Ile Leu Thr Ser Glu Leu Gly Lys Ser Tyr Asn 145 150 155 160 Thr Ala Phe Glu Leu Asn Ile Asn Asp 165 <210> 11 <211> 1964 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 cccgcccacg gtggcgggga aatacctagg catggaagtg gcatgacagg gctcgtgtcc 60 ctgtcatatt ttccactctc cacgaggtcc tgcgcgcttc aatcctgcag gcagcccggt 120 ttggggatgt ggtccttgct gctctgcggg ttgtccatcg cccttccact gtctgtcaca 180 gcagatggat gcaaggacat ttttatgaaa aatgagatac tttcagcaag ccagcctttt 240 gcttttaatt gtacattccc tcccataaca tctggggaag tcagtgtaac atggtataaa 300 aattctagca aaatcccagt gtccaaaatc atacagtcta gaattcacca ggacgagact 360 tggattttgt ttctccccat ggaatggggg gactcaggag tctaccaatg tgttataaag 420 ggtagagaca gctgtcatag aatacatgta aacctaactg tttttgaaaa acattggtgt 480 gacacttcca taggtggttt accaaattta tcagatgagt acaagcaaat attacatctt 540 ggaaaagatg atagtctcac atgtcatctg cacttcccga agagttgtgt tttgggtcca 600 ataaagtggt ataaggactg taacgagatt aaaggggagc ggttcactgt tttggaaacc 660 aggcttttgg tgagcaatgt ctcggcagag gacagaggga actacgcgtg tcaagccata 720 ctgacacact cagggaagca gtacgaggtt ttaaatggca tcactgtgag cattacagaa 780 agagctggat atggaggaag tgtccctaaa atcatttatc caaaaaatca ttcaattgaa 840 gtacagcttg gtaccactct gattgtggac tgcaatgtaa cagacaccaa ggataataca 900 aatctacgat gctggagagt caataacact ttggtggatg attactatga tgaatccaaa 960 cgaatcagag aaggggtgga aacccatgtc tcttttcggg aacataattt gtacacagta 1020 aacatcacct tcttggaagt gaaaatggaa gattatggcc ttcctttcat gtgccacgct 1080 ggagtgtcca cagcatacat tatattacag ctcccagctc cggattttcg agcttacttg 1140 ataggagggc ttatcgcctt ggtggctgtg gctgtgtctg ttgtgtacat atacaacatt 1200 tttaagatcg acattgttct ttggtatcga agtgccttcc attctacaga gaccatagta 1260 gatgggaagc tgtatgacgc ctatgtctta taccccaagc cccacaagga aagccagagg 1320 catgccgtgg atgccctggt gttgaatatc ctgcccgagg tgttggagag acaatgtgga 1380 tataagttgt ttatattcgg cagagatgaa ttccctggac aagccgtggc caatgtcatc 1440 gatgaaaacg ttaagctgtg caggaggctg attgtcattg tggtccccga atcgctgggc 1500 tttggcctgt tgaagaacct gtcagaagaa caaatcgcgg tctacagtgc cctgatccag 1560 gacgggatga aggttattct cattgagctg gagaaaatcg aggactacac agtcatgcca 1620 gagtcaattc agtacatcaa acagaagcat ggtgccatcc ggtggcatgg ggacttcacg 1680 gagcagtcac agtgtatgaa gaccaagttt tggaagacag tgagatacca catgccgccc 1740 agaaggtgtc ggccgtttcc tccggtccag ctgctgcagc acacaccttg ctaccgcacc 1800 gcaggcccag aactaggctc aagaagaaag aagtgtactc tcacgactgg ctaagacttg 1860 ctggactgac acctatggct ggaagatgac ttgttttgct ccatgtctcc tcattcctac 1920 acctattttc tgctgcagga tgaggctagg gttagcattc taga 1964 <210> 12 <211> 575 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Met Trp Ser Leu Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ile Ala Leu Pro Leu Ser 1 5 10 15 Val Thr Ala Asp Gly Cys Lys Asp Ile Phe Met Lys Asn Glu Ile Leu 20 25 30 Ser Ala Ser Gln Pro Phe Ala Phe Asn Cys Thr Phe Pro Pro Ile Thr 35 40 45 Ser Gly Glu Val Ser Val Thr Trp Tyr Lys Asn Ser Ser Lys Ile Pro 50 55 60 Val Ser Lys Ile Ile Gln Ser Arg Ile His Gln Asp Glu Thr Trp Ile 65 70 75 80 Leu Phe Leu Pro Met Glu Trp Gly Asp Ser Gly Val Tyr Gln Cys Val 85 90 95 Ile Lys Gly Arg Asp Ser Cys His Arg Ile His Val Asn Leu Thr Val 100 105 110 Phe Glu Lys His Trp Cys Asp Thr Ser Ile Gly Gly Leu Pro Asn Leu 115 120 125 Ser Asp Glu Tyr Lys Gln Ile Leu His Leu Gly Lys Asp Asp Ser Leu 130 135 140 Thr Cys His Leu His Phe Pro Lys Ser Cys Val Leu Gly Pro Ile Lys 145 150 155 160 Trp Tyr Lys Asp Cys Asn Glu Ile Lys Gly Glu Arg Phe Thr Val Leu 165 170 175 Glu Thr Arg Leu Leu Val Ser Asn Val Ser Ala Glu Asp Arg Gly Asn 180 185 190 Tyr Ala Cys Gln Ala Ile Leu Thr His Ser Gly Lys Gln Tyr Glu Val 195 200 205 Leu Asn Gly Ile Thr Val Ser Ile Thr Glu Arg Ala Gly Tyr Gly Gly 210 215 220 Ser Val Pro Lys Ile Ile Tyr Pro Lys Asn His Ser Ile Glu Val Gln 225 230 235 240 Leu Gly Thr Thr Leu Ile Val Asp Cys Asn Val Thr Asp Thr Lys Asp 245 250 255 Asn Thr Asn Leu Arg Cys Trp Arg Val Asn Asn Thr Leu Val Asp Asp 260 265 270 Tyr Tyr Asp Glu Ser Lys Arg Ile Arg Glu Gly Val Glu Thr His Val 275 280 285 Ser Phe Arg Glu His Asn Leu Tyr Thr Val Asn Ile Thr Phe Leu Glu 290 295 300 Val Lys Met Glu Asp Tyr Gly Leu Pro Phe Met Cys His Ala Gly Val 305 310 315 320 Ser Thr Ala Tyr Ile Ile Leu Gln Leu Pro Ala Pro Asp Phe Arg Ala 325 330 335 Tyr Leu Ile Gly Gly Leu Ile Ala Leu Val Ala Val Ala Val Ser Val 340 345 350 Val Tyr Ile Tyr Asn Ile Phe Lys Ile Asp Ile Val Leu Trp Tyr Arg 355 360 365 Ser Ala Phe His Ser Thr Glu Thr Ile Val Asp Gly Lys Leu Tyr Asp 370 375 380 Ala Tyr Val Leu Tyr Pro Lys Pro His Lys Glu Ser Gln Arg His Ala 385 390 395 400 Val Asp Ala Leu Val Leu Asn Ile Leu Pro Glu Val Leu Glu Arg Gln 405 410 415 Cys Gly Tyr Lys Leu Phe Ile Phe Gly Arg Asp Glu Phe Pro Gly Gln 420 425 430 Ala Val Ala Asn Val Ile Asp Glu Asn Val Lys Leu Cys Arg Arg Leu 435 440 445 Ile Val Ile Val Val Pro Glu Ser Leu Gly Phe Gly Leu Leu Lys Asn 450 455 460 Leu Ser Glu Glu Gln Ile Ala Val Tyr Ser Ala Leu Ile Gln Asp Gly 465 470 475 480 Met Lys Val Ile Leu Ile Glu Leu Glu Lys Ile Glu Asp Tyr Thr Val 485 490 495 Met Pro Glu Ser Ile Gln Tyr Ile Lys Gln Lys His Gly Ala Ile Arg 500 505 510 Trp His Gly Asp Phe Thr Glu Gln Ser Gln Cys Met Lys Thr Lys Phe 515 520 525 Trp Lys Thr Val Arg Tyr His Met Pro Pro Arg Arg Cys Arg Pro Phe 530 535 540 Pro Pro Val Gln Leu Leu Gln His Thr Pro Cys Tyr Arg Thr Ala Gly 545 550 555 560 Pro Glu Leu Gly Ser Arg Arg Lys Lys Cys Thr Leu Thr Thr Gly 565 570 575 <210> 13 <211> 1859 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 gcaggcacaa actcatccat ccccagttga ttggaagaaa caacgatgac tcctgggaag 60 acctcattgg tgtcactgct actgctgctg agcctggagg ccatagtgaa ggcaggaatc 120 acaatcccac gaaatccagg atgcccaaat tctgaggaca agaacttccc ccggactgtg 180 atggtcaacc tgaacatcca taaccggaat accaatacca atcccaaaag gtcctcagat 240 tactacaacc gatccacctc accttggaat ctccaccgca atgaggaccc tgagagatat 300 ccctctgtga tctgggaggc aaagtgccgc cacttgggct gcatcaacgc tgatgggaac 360 gtggactacc acatgaactc tgtccccatc cagcaagaga tcctggtcct gcgcagggag 420 cctccacact gccccaactc cttccggctg gagaagatac tggtgtccgt gggctgcacc 480 tgtgtcaccc cgattgtcca ccatgtggcc taagagctct ggggagccca cactccccaa 540 agcagttaga ctatggagag ccgacccagc ccctcaggaa ccctcatcct tcaaagacag 600 cctcatttcg gactaaactc attagagttc ttaaggcagt ttgtccaatt aaagcttcag 660 aggtaacact tggccaagat atgagatctg aattaccttt ccctctttcc aagaaggaag 720 gtttgactga gtaccaattt gcttcttgtt tactttttta agggctttaa gttatttatg 780 tatttaatat gccctgagat aactttgggg tataagattc cattttaatg aattacctac 840 tttattttgt ttgtcttttt aaagaagata agattctggg cttgggaatt ttattattta 900 aaaggtaaaa cctgtattta tttgagctat ttaaggatct atttatgttt aagtatttag 960 aaaaaggtga aaaagcacta ttatcagttc tgcctaggta aatgtaagat agaattaaat 1020 ggcagtgcaa aatttctgag tctttacaac atacggatat agtatttcct cctctttgtt 1080 tttaaaagtt ataacatggc tgaaaagaaa gattaaacct actttcatat gtattaattt 1140 aaattttgca atttgttgag gttttacaag agatacagca agtctaactc tctgttccat 1200 taaaccctta taataaaatc cttctgtaat aataaagttt caaaagaaaa tgtttatttg 1260 ttctcattaa atgtatttta gcaaactcag ctcttcccta ttgggaagag ttatgcaaat 1320 tctcctataa gcaaaacaaa gcatgtcttt gagtaacaat gacctggaaa tacccaaaat 1380 tccaagttct cgatttcaca tgccttcaag actgaacacc gactaaggtt ttcatactat 1440 tagccaatgc tgtagacaga agcattttga taggaataga gcaaataaga taatggccct 1500 gaggaatggc atgtcattat taaagatcat atggggaaaa tgaaaccctc cccaaaatac 1560 aagaagttct gggaggagac attgtcttca gactacaatg tccagtttct cccctagact 1620 caggcttcct ttggagatta aggcccctca gagatcaaca gaccaacatt tttctcttcc 1680 tcaagcaaca ctcctagggc ctggcttctg tctgatcaag gcaccacaca acccagaaag 1740 gagctgatgg ggcagaacga actttaagta tgagaaaagt tcagcccaag taaaataaaa 1800 actcaatcac attcaattcc agagtagttt caagtttcac atcgtaacca ttttcgccc 1859 <210> 14 <211> 155 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Met Thr Pro Gly Lys Thr Ser Leu Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser 1 5 10 15 Leu Glu Ala Ile Val Lys Ala Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly 20 25 30 Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn 35 40 45 Leu Asn Ile His Asn Arg Asn Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser 50 55 60 Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu 65 70 75 80 Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His 85 90 95 Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser 100 105 110 Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His 115 120 125 Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys 130 135 140 Thr Cys Val Thr Pro Ile Val His His Val Ala 145 150 155

Claims (16)

  1. 환자에서 (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 상향조절을 확인하는 것을 포함하고, 여기서 IL-1의 적어도 하나의 이소형은 IL-1F6, IL-1F8 또는 IL-1F9인 염증성 질환의 검출 방법.
  2. 제1항에 있어서, 염증성 질환이 건선, 루푸스 또는 관절염인 방법.
  3. 제1항에 있어서, (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 상향조절을 mRNA 수준의 검출에 의해 결정하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 상향조절을 단백질 수준의 검출에 의해 결정하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 두 개의 상향조절의 검출을, (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 단백질 수준의 검출 및 (a) IL-1의 적어도 하나의 이소형 및 (b) IL-1Rrp2 중 적어도 하나의 mRNA 수준의 검출에 의해 검출하는 방법.
  6. 적어도 하나의 IL-1F6, IL-1F8 및 IL-1F9 중 적어도 하나의 억제제를 IL-22 연관 질환이 있는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, IL-22 연관 질환의 치료 방법.
  7. 제6항에 있어서, 적어도 하나의 억제제가 항-IL-1F6 항체인 방법.
  8. 제6항에 있어서, 적어도 하나의 억제제가 항-IL-1F8 항체인 방법.
  9. 제6항에 있어서, 적어도 하나의 억제제가 항-IL-1F9 항체인 방법.
  10. 제6항에 있어서, 적어도 하나의 억제제가 항-IL-1Rrp2 항체인 방법.
  11. 제6항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, IL-22 연관 질환이 건선, 루푸스 또는 관절염인 방법.
  12. 염증성 질환이 있는 환자에게 (a) (i) 항-IL-1F6 항체, (ii) 항-IL-1F8 항체, (iii) 항-IL-1F9 항체, 및 (iv) 항-IL-1Rrp2 항체 중 적어도 하나; 및 (b) 항-IL-22 항체의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환의 치료 방법.
  13. 염증성 질환이 있는 환자에게 항-IL-1 항체 및 항-IL-17A 항체를 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환의 치료 방법.
  14. 염증성 질환이 있는 환자에게 (a) (i) 항-IL-1F6 항체, (ii) 항-IL-1F8 항체, (iii) 항-IL-1F9 항체, 및 (iv) 항-IL-1Rrp2 항체 중 적어도 하나; (b) 항-IL-22 항체; 및 (c) 항-IL-17A 항체의 조합물을 투여하는 것을 포함하는, 염증성 질환의 치료 방법.
  15. 대조군 샘플에서의 유전자 발현 수준에 비해 대상에서의 유전자 발현 수준을 검출하는 것을 포함하고, 여기서 검출된 유전자 발현은 IL-1F6, IL-1F8, IL-1F9, IL-1Rrp 중 적어도 하나로부터의 유전자 발현이고; 대조군에 비해 대상에서의 보다 낮은 유전자 발현 수준은 대상에서의 염증성 질환의 치료, 감소, 예방 및/또는 개선에 있어 치료제의 유효성을 나타내는 것인, 대상에서의 염증성 질환의 치료, 감소, 예방 및/또는 개선에 있어 치료제의 유효성을 결정하는 방법.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 질병이 건선, 루푸스 또는 관절염인 방법.
KR1020117004589A 2008-08-28 2009-08-28 자가면역 질병에서 ｉｌ－２２, ｉｌ－１７ 및 ｉｌ－１ 패밀리 시토킨의 용도 KR20110048536A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9274308P 2008-08-28 2008-08-28
US61/092,743 2008-08-28
US19308708P 2008-10-27 2008-10-27
US61/193,087 2008-10-27
PCT/US2009/055366 WO2010025369A2 (en) 2008-08-28 2009-08-28 Uses of il-22, il-17, and il-1 family cytokines in autoimmune diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20110048536A true KR20110048536A (ko) 2011-05-11

Family

ID=41566112

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020117004589A KR20110048536A (ko) 2008-08-28 2009-08-28 자가면역 질병에서 ｉｌ－２２, ｉｌ－１７ 및 ｉｌ－１ 패밀리 시토킨의 용도

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20110159011A1 (ko)
EP (1) EP2337799A2 (ko)
JP (1) JP2012501184A (ko)
KR (1) KR20110048536A (ko)
CN (1) CN102197051A (ko)
AU (1) AU2009285585A1 (ko)
CA (1) CA2735155A1 (ko)
IL (1) IL211165A0 (ko)
MX (1) MX2011002153A (ko)
RU (1) RU2011105466A (ko)
WO (1) WO2010025369A2 (ko)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110229471A1 (en) 2008-11-26 2011-09-22 Cedars-Sinai Medical Center Methods of determining responsiveness to anti-tnf alpha therapy in inflammatory bowel disease
EP3216462A3 (en) 2010-02-26 2017-12-20 Novo Nordisk A/S Stable antibody containing compositions
WO2011147921A1 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Novo Nordisk A/S Stable multi-dose compositions comprising an antibody and a preservative
NZ603375A (en) * 2010-06-15 2014-10-31 Celgene Corp Biomarkers for the treatment of psoriasis
US8766034B2 (en) 2010-09-22 2014-07-01 Cedars-Sinai Medical Center TL1A model of inflammation fibrosis and autoimmunity
EA031948B1 (ru) * 2011-11-16 2019-03-29 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Антитело к il-36r или его антигенсвязывающий фрагмент, выделенный полинуклеотид, клетка-хозяин и способ получения этого антитела или его фрагмента, содержащая их фармацевтическая композиция и применение антитела или его фрагмента и композиции
AU2013217940A1 (en) 2012-02-10 2014-07-31 Novo Nordisk A/S Methods related to treatment of inflammatory diseases and disorders
WO2013164440A1 (en) 2012-05-03 2013-11-07 Novo Nordisk A/S Methods related to treatment of inflammatory diseases and disorders
MX2015013703A (es) 2013-03-27 2016-08-11 Cedars Sinai Medical Center Mitigacion e inversion de la fibrosis e inflamacion mediante la inhibicion de la funcion de tl1a y vias de señalizacion relacionadas.
WO2014186665A2 (en) * 2013-05-17 2014-11-20 Cedars-Sinai Medical Center Distinct effects of ifn-gamma and il-17 on tl1a modulated inflammation and fibrosis
EP3003356B1 (en) * 2013-05-31 2019-07-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Il-1 antagonists for use in treating alzheimer's disease
EP4105236A1 (en) 2013-07-19 2022-12-21 Cedars-Sinai Medical Center Anti-tl1a (tnfsf15) antibody for treatment of inflammatory bowel disease
WO2015191783A2 (en) * 2014-06-10 2015-12-17 Abbvie Inc. Biomarkers for inflammatory disease and methods of using same
MA41867A (fr) 2015-04-01 2018-02-06 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre l'immunoglobuline de cellule t et protéine 3 de mucine (tim-3)
SG11201708061TA (en) 2015-04-15 2017-10-30 Anaptysbio Inc Antibodies directed against interleukin 36 receptor (il-36r)
KR20220153109A (ko) 2016-03-17 2022-11-17 세다르스-신나이 메디칼 센터 Rnaset2를 통한 염증성 장 질환의 진단 방법
ES2930351T3 (es) * 2016-04-15 2022-12-09 Evive Biotechnology Shanghai Ltd Un dímero de IL-22 para su uso en el tratamiento de enterocolitis necrosante
AU2017261360A1 (en) 2016-05-06 2018-11-29 Exicure Operating Company Liposomal Spherical Nucleic Acid (SNA) constructs presenting Antisense Oligonucleotides (ASO) for specific knockdown of interleukin 17 receptor MRNA
JP7225089B2 (ja) 2016-09-16 2023-02-20 武田薬品工業株式会社 接触活性化系に関連する疾患のタンパク質バイオマーカー
KR20190098741A (ko) 2016-11-01 2019-08-22 아납티스바이오, 아이엔씨. T 세포 면역글로불린 및 뮤신 단백질 3(tim-3)에 대한 항체
US11926665B2 (en) 2017-01-09 2024-03-12 Tesaro, Inc. Methods of treating cancer with anti-TIM-3 antibodies
KR102536314B1 (ko) * 2018-05-23 2023-05-25 주식회사 휴벳바이오 질환의 진단용 조성물
EP3898673A1 (en) * 2018-12-21 2021-10-27 23Andme, Inc. Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof
MX2021010783A (es) 2019-03-08 2021-09-30 Boehringer Ingelheim Int Formulaciones de anticuerpo anti-il-36r.
CN111848780A (zh) * 2019-04-24 2020-10-30 华东师范大学 一种IL-36的可溶性受体sIL-36R及其应用
CN112704492A (zh) * 2019-10-25 2021-04-27 上海交通大学 基于皮肤自发荧光评估血清中数种白介素水平的方法
CN115247149B (zh) * 2022-08-22 2023-06-16 华域生物科技(天津)有限公司 适用于nk细胞的培养基组合物及培养方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ536216A (en) * 1996-02-09 2006-08-31 Abbott Biotech Ltd Use of an isolated antibody D2E7 for the treatment of a disorder in which TNF(alpha) activity is detrimental
US7638604B2 (en) * 2001-02-23 2009-12-29 Genetics Institute, Llc Monoclonal antibodies against interleukin-22
AU2003297570A1 (en) * 2002-11-26 2004-06-18 Advanced Biotherapy, Inc. Treatment of skin diseases
US7737259B2 (en) * 2005-12-02 2010-06-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of diseases and disorders associated with cytokine signaling
CN101389769A (zh) * 2005-12-28 2009-03-18 森托科尔公司 用于评价和治疗银屑病及相关疾病的标记与方法
TWI417301B (zh) * 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
JP2009534297A (ja) * 2006-03-10 2009-09-24 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Ｉｌ−１７ａおよびｉｌ−１７ｆの両方に結合する抗体ならびにその使用方法
WO2007149814A1 (en) * 2006-06-19 2007-12-27 Wyeth Methods of modulating il-22 and il-17
BRPI0715917A2 (pt) * 2006-08-11 2014-11-25 Schering Corp Anticorpos para il-17a
MX341064B (es) * 2006-09-08 2016-08-05 Amgen Inc * Variantes de la familia il-1.

Also Published As

Publication number Publication date
IL211165A0 (en) 2011-04-28
US20110159011A1 (en) 2011-06-30
EP2337799A2 (en) 2011-06-29
RU2011105466A (ru) 2012-10-10
WO2010025369A2 (en) 2010-03-04
WO2010025369A3 (en) 2010-08-19
MX2011002153A (es) 2011-03-29
CA2735155A1 (en) 2010-03-04
AU2009285585A1 (en) 2010-03-04
JP2012501184A (ja) 2012-01-19
CN102197051A (zh) 2011-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20110048536A (ko) 자가면역 질병에서 ｉｌ－２２, ｉｌ－１７ 및 ｉｌ－１ 패밀리 시토킨의 용도
JP5150516B2 (ja) 抗体剤ヒトｉｌ−２２およびその使用
EP1644415B1 (en) Antibodies against interleukin-22 and uses therefor
EP2327423B1 (en) Human antibodies against human interleukin-22 (IL-22)
US8475791B2 (en) Anti-IL-TIF antibodies and methods of use
EP1242600B1 (en) Cytokine zcyto18
JP2021526022A (ja) 抗インターロイキン１７ａ抗体、医薬組成物、およびその使用
US20050042220A1 (en) Antibodies against interleukin-22 and uses therefor
CA2662549C (en) Il-1 family variants
EP3689906A1 (en) Il-5 antibody, antigen binding fragment thereof, and medical application therefor
RU2772716C2 (ru) Антитело против il-5, его антигенсвязывающий фрагмент и его медицинское применение

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E601 Decision to refuse application