KR20110022611A

KR20110022611A - 베타２－아드레날린수용체 활성의 조절을 위한, ４－히드록시－２－옥소－２,３－디히드로－１,３－벤조티아졸－７－일 화합물을 포함하는 제약 조성물

Info

Publication number: KR20110022611A
Application number: KR1020107028445A
Authority: KR
Inventors: 스테펜 콘놀리; 아드리안 피셔; 알렉산더 험프리스; 앤드류 제임스 와츠; 캐서린 엘리자베스 와일리
Original assignee: 아스트라제네카 아베
Priority date: 2008-06-20
Filing date: 2009-06-18
Publication date: 2011-03-07
Also published as: CN102131505A; CA2727908A1; AU2009260904A1; WO2009154562A1; JP2011524897A; US20100144606A1; RU2011101664A; EP2303266A4; EP2303266A1; TW201010990A; AR072262A1; MX2010013416A; UY31920A

Abstract

본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 염인 제1 활성 성분, 및 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제; 항산화제; CCR1 길항제; 케모카인 길항제 (CCR1이 아님); 코르티코스테로이드; CRTh2 길항제; DP1 길항제; 히스톤 데아세틸라제 유도제; IKK2 억제제; COX 억제제; 리폭시게나제 억제제; 류코트리엔 수용체 길항제; MPO 억제제; 무스카린성 길항제; p38 억제제; PDE 억제제; PPARγ 효능제; 프로테아제 억제제; 스타틴; 트롬복산 길항제; 혈관확장제; 또는 ENAC 차단제 (상피성 나트륨-채널 차단제)로부터 선택되는 제2 활성 성분을 포함하는 제약 생성물, 키트 또는 조성물; 및 호흡기 질환 (예를 들면, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 또는 천식)의 치료에서의 그의 용도; N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드의 특정 염; 및 상기 제약 활성 물질 및 그의 염의 제조에 유용한 중간체를 제공한다.

Description

베타２－아드레날린수용체 활성의 조절을 위한, ４－히드록시－２－옥소－２,３－디히드로－１,３－벤조티아졸－７－일 화합물을 포함하는 제약 조성물 {PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING A 4-HYDROXY-2-OXO-2,3-DIHYDRO-1,3-BENZOTHIAZOL-7-YL COMPOUND FOR MODULATION OF BETA2-ADRENORECEPTOR ACTIVITY}

본 발명은 호흡기 질환 (예를 들면, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 또는 천식)의 치료에 사용하기 위한 2종 이상의 제약 활성 물질의 조합물, N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드의 특정 염, 및 상기 제약 활성 물질 및 그의 염의 제조에 유용한 중간체에 관한 것이다.

폐의 본질적인 기능은 오염물질, 세균, 알레르겐 및 발암물질을 비롯한 환경에 크게 노출되는 연약한 구조를 요구한다. 생활 양식의 선택 및 유전자 조성의 상호작용으로부터 생성된 숙주 인자는 상기 노출에 대한 반응에 영향을 미친다. 폐에 대한 손상 또는 감염은 광범위한 호흡기계 질환 (또는 호흡기 질환)을 유발할 수 있다. 수많은 상기 질환은 공중 보건에 크게 중요하다. 호흡기 질환은 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 직업성 폐질환, 폐암, 결핵, 섬유증, 진폐증, 폐렴, 기종, 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD) 및 천식을 포함한다.

가장 일반적인 호흡기 질환은 천식이다. 천식은 일반적으로 간헐성 기류 폐쇄로 인한 임상 증상을 갖는 기도의 염증성 장애로서 정의된다. 천식은 천명, 호흡곤란 및 기침의 발작에 의해 임상적으로 특징화된다. 이는 유병률 및 중증도 면에서 증가하고 있는 것으로 보이는 만성 불능 장애이다. 선진국 인구 중 15％의 어린이 및 5％의 성인이 천식을 겪고 있는 것으로 추산된다. 따라서, 요법은, 증상을 제어하여 정상 생활이 가능하고 동시에 근원적인 염증을 치료하기 위한 기초를 제공하는데 목표를 두어야 한다.

COPD는 정상적인 호흡을 방해할 수 있는 광범위한 폐질환 군을 가리키는 용어이다. 현재의 임상 지침은 COPD를 완전히 가역적이지는 않은 기류 제한을 특징으로 하는 질환 상태로서 정의한다. 기류 제한은 일반적으로 진행성이고, 독성 입자 및 가스에 대한 폐의 비정상적 염증성 반응과 연관되어 있다. 상기 입자 및 가스의 가장 중요한 기여 공급원은, 최소한 서양에서는, 담배 연기이다. COPD 환자는 기침, 숨가쁨 및 과도한 객담의 생성을 비롯한 다양한 증상을 보이며; 상기 증상들은 호중구, 대식세포 및 상피성 세포를 비롯한 다수의 세포 구획의 기능이상으로부터 발생한다. COPD에 포함되는 가장 중요한 두 질병은 만성 기관지염 및 기종이다.

만성 기관지염은 점액의 생성 증가 및 기타 변화를 유발하는 기관지의 지속성 염증이다. 상기 환자의 증상은 기침 및 객담 배출이다. 만성 기관지염은 더욱 빈번하고 심각한 호흡성 감염, 기관지 협착 및 막힘, 호흡 곤란 및 불능을 가져올 수 있다.

기종은 폐포 및/또는 최소 기관지 말단에 영향을 미치는 만성 폐질환이다. 폐가 탄력성을 잃고, 그로 인해 폐의 해당 영역이 확장되게 된다. 그러한 확장된 영역은 신선하지 못한 공기의 흐름을 막아서, 이를 신선한 공기와 효과적으로 교환하지 못한다. 이로 인해 호흡 곤란을 가져올 수 있고, 산소가 혈액에 불충분하게 전달될 수 있다. 기종 환자에서의 두드러진 증상은 숨가쁨이다.

호흡기 질환의 치료에서 사용되는 치료제는 코르티코스테로이드를 포함한다. 코르티코스테로이드 (또한, 글루코코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드로 공지됨)는 효능있는 소염제이다. 그의 정확한 작용 메커니즘은 분명하지 않으나, 코르티코스테로이드 치료의 최종 결과는 기관지 점막하층으로의 염증성 세포의 수, 활성 및 움직임을 감소시켜 기도 반응성의 감소를 유발하는 것이다. 코르티코스테로이드는 또한 기관지 상피 내막의 쉐딩 (shedding), 혈관 투과도 및 점액 분비의 감소를 유발할 수 있다. 코르티코스테로이드 치료가 중요한 이득을 낼 수 있는 반면, 상기 작용제의 효능은 종종, 특히 COPD에서 전혀 만족스럽지 못하다. 게다가, 스테로이드의 사용으로 치료 효과를 볼 수 있는 반면, 규칙적 투여와 연관되어 있을 수 있는 바람직하지 않은 부작용의 발생 및 중증도를 최소화하기 위해서 적은 용량으로 스테로이드를 사용할 수 있는 것이 바람직하다. 최근의 연구는 또한 호흡기 질환을 앓고 있는 환자 중 스테로이드 내성의 획득 문제를 강조하고 있다. 예를 들어, 천식이 있는 흡연자들은 단기의 코르티코스테로이드 흡입 요법에 민감하지 않은 것으로 밝혀졌으나, 흡연자 및 비-흡연자 간 반응의 불일치는 고용량의 코르티코스테로이드 흡입으로 감소되는 것으로 보여진다 (문헌 [Tomlinson et al., Thorax 2005;60:282-287]).

호흡기 질환의 치료에 사용되는 추가 부류의 치료제는 기관지확장제이다. 기관지확장제는 기관지 평활근을 이완시키고, 기도 폐쇄를 감소시키고, 폐 과팽창을 감소시키고, 숨가쁨을 줄여서 호흡기 질환의 증상을 경감시키기 위해서 사용될 수 있다. 임상 용도의 기관지확장제의 유형은 β₂ 아드레날린 수용체 효능제, 무스카린 수용체 길항제 및 메틸크산틴을 포함한다. 기관지확장제는 주로 증상 완화를 위해 처방되고, 호흡기 질환의 자연 경과를 변경시키는 것으로는 생각되지 않는다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 및 그의 디-D-만델레이트, 디히드로브로마이드 및 비스-트리플루오로아세테이트 염은 β2 아드레날린수용체 효능제이고, PCT/GB2007/004861에 개시되어 있다. 상기 화합물 및 그의 염은 아드레날린 α1D, 아드레날린 β1 및 도파민 D2 활성에 비해 적어도 5배의 β2 아드레날린수용체 효능 선택성을 나타낸다.

β₂ 아드레날린수용체 효능제 및 코르티코스테로이드를 포함하는 조합 생성물을 이용할 수 있다. 그러한 생성물 중 하나가 부데소니드 및 포르모테롤 푸마레이트의 조합물 (상표명 심비코르트 (Symbicort, 등록상표)하에 아스트라제네카 (AstraZeneca)에 의해 시판)로, 이는 많은 환자에게서 천식 및 COPD를 제어하고 삶의 질을 향상시키는데 효과적인 것으로 입증되었다.

호흡기 질환, 예컨대 천식 및 COPD의 복잡성의 관점에서, 어느 하나의 매개체가 단독으로 호흡기 질환을 만족스럽게 치료할 수 있을 것으로 보이지는 않는다. 또한, β₂ 아드레날린수용체 효능제 및 코르티코스테로이드를 이용한 조합 치료가 환자에게 유의한 이점들을 제공한다 하더라도, 천식 및 COPD와 같은 호흡기 질환에 대한 신규 요법, 특히 잠재성이 개조된 질환으로의 요법에 대한 의학적 요구는 여전히 남아있다.

따라서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 염인 제1 활성 성분, 및

비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제;

항산화제;

CCR1 길항제;

케모카인 길항제 (CCR1이 아님);

코르티코스테로이드;

CRTh2 길항제;

DP1 길항제;

히스톤 데아세틸라제 유도제;

IKK2 억제제;

COX 억제제;

리폭시게나제 억제제;

류코트리엔 수용체 길항제;

MPO 억제제;

무스카린성 길항제;

p38 억제제;

PDE 억제제;

PPARγ 효능제;

프로테아제 억제제;

스타틴;

트롬복산 길항제;

혈관확장제; 또는

ENAC 차단제 (상피성 나트륨-채널 차단제)

로부터 선택되며, 단 무스카린성 길항제가

(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;

(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;

(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;

(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;

(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;

(R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;

(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; 또는

(R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X

(여기서, X는 1가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)가 아닌 것인 제2 활성 성분

을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

상기 포기의 대상인 화합물은 WO 2008/059245 및 PCT/SE2009/050525에 기재되어 있다.

본 발명의 제약 생성물은 제1 활성 성분 및 제2 활성 성분을 포함하고, 이는 제3 활성 성분을 포함할 수 있다. 제3 활성 성분은 제2 활성 성분 목록으로부터 선택될 수 있지만, 통상적으로 다른 작용 매카니즘을 가질 것이다. 따라서, 예를 들어 제2 활성 성분은 무스카린성 길항제일 수 있고, 제3 활성 성분은 비스테로이드성 글루코코르티코스테로이드 수용체 효능제, 코르티코스테로이드, CCR1 길항제 또는 PDE4 억제제일 수 있다.

한 특정 측면에서, 본 발명은

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 염인 제1 활성 성분, 및

항산화제;

CCR1 길항제;

케모카인 길항제 (CCR1이 아님);

코르티코스테로이드;

CRTh2 길항제;

DP1 길항제;

히스톤 데아세틸라제 유도제;

IKK2 억제제;

COX 억제제;

리폭시게나제 억제제;

류코트리엔 수용체 길항제;

MPO 억제제;

무스카린성 길항제;

p38 억제제;

PDE 억제제;

PPARγ 효능제;

프로테아제 억제제;

스타틴;

트롬복산 길항제;

혈관확장제; 또는

ENAC 차단제 (상피성 나트륨-채널 차단제)

로부터 선택되는 제2 활성 성분

을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 염인 제1 활성 성분은 용매화물 (예컨대, 수화물)의 형태일 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면에서, N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드의 적합한 염이, 예를 들어 히드로클로라이드, 히드로브로마이드 (예컨대, 디히드로브로마이드), 트리플루오로아세테이트, 술페이트, 술포네이트, 포스페이트, 아세테이트, 푸마레이트, 말레에이트, 타르트레이트, 락테이트, 시트레이트, 피루베이트, 숙시네이트, 옥살레이트, 메탄술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 바이술페이트, 벤젠술포네이트, 에탄술포네이트, 말로네이트, 크시나포에이트, 아스코르베이트, 올레에이트, 니코티네이트, 사카리네이트, 아디페이트, 포르메이트, 글리콜레이트, L-락테이트, D-락테이트, 아스파르테이트, 말레이트, L-타르트레이트, D-타르트레이트, 스테아레이트, 2-푸로에이트, 3-푸로에이트, 나파디실레이트 (나프탈렌-1,5-디술포네이트 또는 나프탈렌-1-(술폰산)-5-술포네이트), 에디실레이트 (에탄-1,2-디술포네이트 또는 에탄-1-(술폰산)-2-술포네이트), 이세티오네이트 (2-히드록시에틸술포네이트), 2-메시틸렌술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 2,5-디클로로벤젠술포네이트, D-만델레이트, L-만델레이트, 신나메이트, 벤조에이트, 아디페이트, 에실레이트, 말로네이트, 메시틸레이트 (2-메시틸렌술포네이트), 나프실레이트 (2-나프탈렌술포네이트), 캄실레이트 (캄포-10-술포네이트), 포르메이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트 (2-(벤조일아미노)아세테이트), 오로테이트, 크실레이트 (p-크실렌-2-술포네이트), 파모산 (2,2'-디히드록시-1,1'-디나프틸메탄-3,3'-디카르복실레이트), 팔미테이트 또는 푸로에이트이다.

본 발명의 또 다른 측면에서, N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드의 적합한 염이, 예를 들어 히드로클로라이드, 히드로브로마이드 (예컨대, 디히드로브로마이드), 트리플루오로아세테이트, 술페이트, 포스페이트, 아세테이트, 푸마레이트, 말레에이트, 타르트레이트, 락테이트, 시트레이트, 피루베이트, 숙시네이트, 옥살레이트, 메탄술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 바이술페이트, 벤젠술포네이트, 에탄술포네이트, 말로네이트, 크시나포에이트, 아스코르베이트, 올레에이트, 니코티네이트, 사카리네이트, 아디페이트, 포르메이트, 글리콜레이트, L-락테이트, D-락테이트, 아스파르테이트, 말레이트, L-타르트레이트, D-타르트레이트, 스테아레이트, 2-푸로에이트, 3-푸로에이트, 나파디실레이트 (나프탈렌-1,5-디술포네이트 또는 나프탈렌-1-(술폰산)-5-술포네이트), 에디실레이트 (에탄-1,2-디술포네이트 또는 에탄-1-(술폰산)-2-술포네이트), 이세티오네이트 (2-히드록시에틸술포네이트), 2-메시틸렌술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 2,5-디클로로벤젠술포네이트, D-만델레이트, L-만델레이트, 신나메이트, 벤조에이트, 아디페이트, 에실레이트, 말로네이트, 메시틸레이트 (2-메시틸렌술포네이트), 나프실레이트 (2-나프탈렌술포네이트), 캄실레이트 (캄포-10-술포네이트), 포르메이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트 (2-(벤조일아미노)아세테이트), 오로테이트, 크실레이트 (p-크실렌-2-술포네이트), 파모산 (2,2'-디히드록시-1,1'-디나프틸메탄-3,3'-디카르복실레이트), 팔미테이트 또는 푸로에이트이다.

추가의 측면에서, 본 발명은 제1 활성 성분이 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제약 생성물을 제공한다.

제1 및 제2 활성 성분은 동시에 (단일 제약 제제로 {즉, 활성 성분이 되어 있음} 또는 별개의 제제를 통해), 또는 순차적으로 또는 개별적으로 별개의 제약 제제를 통해 투여될 수 있다.

비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR) 효능제는, 예를 들어 WO 2006/046916에 개시되어 있는 화합물이다.

항산화제는, 예를 들어 알로퓨리놀, 에르도스테인, 만니톨, N-아세틸 시스테인 콜린 에스테르, N-아세틸 시스테인 에틸 에스테르, N-아세틸시스테인, N-아세틸시스테인 아미드 또는 니아신이다.

CCR1 길항제는, 예를 들어 WO2001/062728 또는 WO2001/098273에 개시되어 있는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예컨대, 히드로클로라이드, 트리플루오로아세테이트, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염); BX471 ((2R)-1-[[2-[(아미노카르보닐)아미노]-4-클로로페녹시]아세틸]-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-메틸피페라진 모노히드로클로라이드) 또는 CCX634이다.

또한, CCR1 길항제는, 예를 들어 WO2001/062728 또는 WO2001/098273에 개시되어 있는 화합물 [예컨대, N-(2{(2S)-3[{(3R)-1-[(4-클로로페닐)메틸]-3-피롤리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-플루오로페닐)아세트아미드, N-(2{(2S)-3[{(3S)-1-[(4-클로로페닐)메틸]-3-피롤리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-플루오로페닐)아세트아미드, N-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤조일)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, (2-{[(2S)-3-{[(2R,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(3S,4R)-1-(4-클로로벤질)-3-메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(3R,4R)-1-(4-클로로벤질)-3-메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2R,4S,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2R,4R,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2S,4R,5R)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2S,4S,5R)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, 메틸 (2-{[(2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)프로파노에이트, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-4-클로로페닐 아세트아미드, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐] 아세트아미드, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-플루오로페닐] 아세트아미드, N-[5-클로로-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐] 아세트아미드, N-[5-클로로-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐] 프로판아미드, (2-{[(2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)메탄술폰산, N-5-클로로-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤질)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-히드록시페닐)-N'-시클로프로필-우레아, N-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤질)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-페닐)-N'-에틸-우레아, (2S)-1-(2-에틸페녹시)-3[(1-[4-클로로벤질]4-피페리디닐)아미노]프로판-2-올, (2S)-1-[2-(-히드록시에틸)페녹시]-2-메틸-3[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]프로판-2-올, 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)벤즈알데히드, 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-N-시클로프로필벤즈아미드, 메틸 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-4-플루오로벤조에이트, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H-스피로[1,3-벤조디옥솔-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시벤조산, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[2-벤조푸란-1,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드; 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[2-벤조푸란-1,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, N-[2-({(2S)-3-[(2R)-5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,3'-피롤리딘]-1'-일]-2-히드록시프로필}옥시)-4-히드록시페닐]아세트아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)우레아, 4-플루오로-2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}벤조산, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)우레아, N-(2-{[(2S)-2-아미노-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-[(2S)-3-(5-클로로스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로폭시]-벤즈알데히드, (αS)-5-클로로-α-[[2-(2-히드록시에틸)페녹시]메틸]-스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-에탄올, (αS)-5-클로로-α-[[2-(히드록시메틸)페녹시]메틸]-스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-에탄올, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-5-클로로-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-(4-{아세틸아미노}페녹시)아세트산, 5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-(4-{아세틸아미노}페녹시)아세트산, {2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}아세트산, 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산, (2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-{[(3S)-3-히드록시피롤리딘-1-일]카르보닐}페녹시)아세트산, 5-클로로-2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-(시아노메톡시)벤조산, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-5-클로로-4-(2,2-디플루오로에톡시)벤조산, 5-클로로-2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-(3,3,3-트리플루오로프로폭시)벤조산, N-(2-{3-[5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일]프로폭시}페닐)아세트아미드, 메틸 3-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)프로판산, N-(2-{[(2S)-3-({스피로[인돌-2-4'-피페리딘]-3(1H)-온}-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드 또는 (2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)메탄술폰산, 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, 상기 기재한 바와 같음; (예컨대, 히드로클로라이드, 트리플루오로아세테이트, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염))]; BX471 ((2R)-1-[[2-[(아미노카르보닐)아미노]-4-클로로페녹시]아세틸]-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-메틸피페라진 모노히드로클로라이드); 또는 CCX634이다.

또한, CCR1 길항제는, 예를 들어 N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필)옥시]-4-히드록시페닐}아세트아미드 (WO 2003/051839 참조), 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산 (PCT 공보 번호 WO 2008/010765 참조), 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들면, 히드로클로라이드, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염)이다.

케모카인 길항제 (CCR1 길항제 제외)는, 예를 들어 656933 (N-(2-브로모페닐)-N'-(4-시아노-1H-1,2,3-벤조트리아졸-7-일)우레아), 766994 (4-({[({[(2R)-4-(3,4-디클로로벤질)모르폴린-2-일]메틸}아미노)카르보닐]-아미노}메틸)벤즈아미드), CCX-282, CCX-915, 시아노비린 N, E-921, INCB-003284, INCB-9471, 마라비록, MLN-3701, MLN-3897, T-487 (N-{1-[3-(4-에톡시페닐)-4-옥소-3,4-디히드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일]에틸}-N-(피리딘-3-일메틸)-2-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]아세트아미드) 또는 비크리비록이다.

코르티코스테로이드는, 예를 들어 알클로메타손 디프로피오네이트, 아멜로메타손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소니드, 부틱소코르트 프로피오네이트, 시클레소니드, 클로베타솔 프로피오네이트, 데스이소부티릴시클레소니드, 에티프레드놀 디클로아세테이트, 플루오시놀론 아세토니드, 플루티카손 푸로에이트, 플루티카손 프로피오네이트, 로테프레드놀 에타보네이트 (국소) 또는 모메타손 푸로에이트이다.

CRTh2 길항제는, 예를 들어 WO 2004/106302 또는 WO 2005/018529로부터의 화합물이다.

DP1 길항제는, 예를 들어 L888839 또는 MK0525이다.

히스톤 데아세틸라제 유도제는, 예를 들어 ADC4022, 아미노필린, 메틸크산틴 또는 테오필린이다.

IKK2 억제제는, 예를 들어 2-{[2-(2-메틸아미노-피리미딘-4-일)-1H-인돌-5-카르보닐]-아미노}-3-(페닐-피리딘-2-일-아미노)-프로피온산이다.

COX 억제제는, 예를 들어 셀레콕시브, 디클로페낙 나트륨, 에토돌락, 이부프로펜, 인도메타신, 멜록시캄, 니메술리드, OC1768, OC2125, OC2184, OC499, OCD9101, 파레콕시브 나트륨, 피세아타놀, 피록시캄, 로페콕시브 또는 발데콕시브이다.

리폭시게나제 억제제는, 예를 들어 아줄렘산, 다르부펠론, 다르부펠론 메실레이트, 덱시부프로펜 라이신 (일수화물), 에탈로시브 나트륨, 리코펠론, 리나졸라스트, 로나팔렌, 마소프로콜, MN-001, 테폭살린, UCB-35440, 벨리플라폰, ZD-2138, ZD-4007 또는 질류톤 ((±)-1-(1-벤조[b]티엔-2-일에틸)-1-히드록시우레아)이다.

류코트리엔 수용체 길항제는, 예를 들어 아블루카스트, 이랄루카스트 (CGP 45715A), 몬텔루카스트, 몬텔루카스트 나트륨, 온타졸라스트, 프란루카스트, 프란루카스트 수화물 (단일 Na 염), 베를루카스트 (MK-679) 또는 자피를루카스트이다.

MPO 억제제는, 예를 들어 히드록삼산 유도체 (N-(4-클로로-2-메틸-페닐)-4-페닐-4-[[(4-프로판-2-일페닐)술포닐아미노]메틸]피페리딘-1-카르복스아미드), 피세아타놀 또는 레스베라트롤이다.

무스카린성 길항제는, 예를 들어 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대, R,R-, R,S-, S,R- 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (WO 01/04118 참조), 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (WO 01/04118 참조); 또는 4급 암모늄 염 (예컨대, [2-((S)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-(3-페녹시-프로필)-암모늄 염, [2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-(3-페녹시-프로필)-암모늄 염, [2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-(2-페네틸옥시-에틸)-암모늄 염, [2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-[3-(3,4-디클로로-페녹시)-프로필] 디메틸-암모늄 염, [2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-[2-(3,4-디클로로-벤질옥시)-에틸]-디메틸-암모늄 염, [2-(4-클로로-벤질옥시)-에틸]-[2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-암모늄 염, 또는 (R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄이고; 여기서 반대 이온은, 예를 들어 클로라이드, 브로마이드, 술페이트, 메탄술포네이트, 벤젠술포네이트 (베실레이트), 톨루엔술포네이트 (토실레이트), 나프탈렌비스술포네이트 (나파디실레이트), 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 타르트레이트, 메실레이트, 말레에이트, 푸마레이트 또는 숙시네이트이다.

본 발명의 한 측면에서, 무스카린성 길항제는 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대, R,R-, R,S-, S,R- 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀 또는 티오트로퓸 브로마이드이다.

본 발명의 또 다른 측면에서, 무스카린성 길항제는 글리코피롤레이트 (예컨대, R,R-, R,S-, S,R- 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드) 또는 티오트로퓸 브로마이드이다.

또 다른 측면에서, 무스카린성 길항제는 (R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 (WO2008/075005 참조)이고; 여기서 반대-이온은, 예를 들어 클로라이드, 브로마이드, 술페이트, 메탄술포네이트, 벤젠술포네이트 (베실레이트), 톨루엔술포네이트 (토실레이트), 나프탈렌비스술포네이트 (나파디실레이트), 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 타르트레이트, 메실레이트, 말레에이트, 푸마레이트 또는 숙시네이트이다.

p38 억제제는, 예를 들어 WO 2005/042502로부터의 화합물, 681323, 856553, AMG548 (2-[[(2S)-2-아미노-3-페닐프로필]아미노]-3-메틸-5-(2-나프탈레닐)-6-(4-피리디닐)-4(3H)-피리미디논), 어레이-797, AZD6703, 도라마피모드, KC-706, PH 797804, R1503, SC-80036, SCIO469, 6-클로로-5-[[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2,5-도메틸-1-피페라지닐]카르보닐]-N,N,1-트리메틸-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드, VX702 또는 VX745 (5-(2,6-디클로로페닐)-2-(페닐티오)-6H-피리미도[1,6-b]피리다진-6-온)이다.

PDE 억제제: 예컨대 PDE4 억제제는, 예를 들어 256066, 아로필린 (3-(4-클로로페닐)-3,7-디히드로-1-프로필-1H-퓨린-2,6-디온), AWD 12-281 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-히드록시-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드), BAY19-8004 (바이엘 (Bayer)), CDC-801 (칼진 (Calgene)), 셀진 (Celgene) 화합물 ((βR)-β-(3,4-디메톡시페닐)-1,3-디히드로-1-옥소-2H-이소인돌-2-프로판아미드), 실로밀라스트 (시스-4-시아노-4-[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]-시클로헥산카르복실산), 교와 하꼬 고교 컴퍼니 리미티드 (Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd., 일본)로부터의 WO2006098353의 화합물, 2-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-(7-메톡시스피로[1,3-벤조디옥솔-2,1'-시클로펜탄]-4-일)에타논 (CAS 번호 185406-34-2)), 화이자 (Pfizer)로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[(2-히드록시-5-메틸벤조일)아미노]시클로헥실]-)-3-피리딘카르복스아미드), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[[2-히드록시-5-(히드록시메틸)벤조일]아미노]시클로헥실]-3-피리딘카르복스아미드), CT2820, GPD-1116, 이부딜라스트, IC 485, KF 31334, KW-4490 (교와 하꼬 고교), 리리밀라스트 ([2-(2,4-디클로로벤조일)-6-[(메틸술포닐)옥시]-3-벤조푸라닐])-우레아), 머크 (Merck) 화합물 (N-시클로프로필-1,4-디히드로-4-옥소-1-[3-(3-피리디닐에티닐)페닐]-)-1,8-나프티리딘-3-카르복스아미드), 오글레밀라스트 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)-8-[(메틸술포닐)아미노])-1-디벤조푸란카르복스아미드), ONO6126, ORG 20241 (4-(3,4-디메톡시페닐)-N-히드록시-)-2-티아졸카르복스이미드아미드), PD189659/PD168787 (파크-데이비스 (Parke-Davis)), 펜톡시필린 (3,7-디히드로-3,7-디메틸-1-(5-옥소헥실)-)-1H-퓨린-2,6-디온), 화이자 화합물 (5-플루오로-N-[4-[(2-히드록시-4-메틸-벤조일)아미노]시클로헥실]-2-(티안-4-일옥시)피리딘-3-카르복스아미드), 화이자 UK 500,001, 피클라밀라스트 (3-(시클로펜틸옥시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-메톡시-벤즈아미드), PLX-369 (WO 2006026754), 로플루밀라스트 (3-(시클로프로필메톡시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)벤즈아미드), SCH 351591 (N-(3,5-디클로로-1-옥시도-4-피리디닐)-8-메톡시-2-(트리플루오로메틸)-5-퀴놀린카르복스아미드), SelCID(TM) CC-10004 (칼진), T-440 (타나베 (Tanabe)), 테토밀라스트 (6-[2-(3,4-디에톡시페닐)-4-티아졸릴]-2-피리딘카르복실산), 토피밀라스트 (9-시클로펜틸-7-에틸-6,9-디히드로-3-(2-티에닐)-5H-피라졸로[3,4-c]-1,2,4-트리아졸로[4,3-a]피리딘), TPI 1100, UCB 101333-3 (N,2-디시클로프로필-6-(헥사히드로-1H-아제핀-1-일)-5-메틸-4-피리미딘아민), V-11294A (나프 (Napp)), VM554/VM565 (버날리스 (Vernalis)), 또는 자르다베린 (6-[4-(디플루오로메톡시)-3-메톡시페닐]-3(2H)-피리다지논)이다.

PDE5 억제제는, 예를 들어 감마-글루타밀[s-(2-요오도벤질)시스테이닐]글라이신, 타달라필, 바르데나필, 실데나필, 4-페닐-메틸아미노-6-클로로-2-(1-이미다졸릴)-퀴나졸린, 4-페닐-메틸아미노-6-클로로-2-(3-피리딜)-퀴나졸린, 1,3-디메틸-6-(2-프로폭시-5-메탄술포닐아미도페닐)-1,5-디히드로피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-온 또는 1-시클로펜틸-3-에틸-6-(3-에톡시-4-피리딜)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-온이다.

PPARγ 효능제는, 예를 들어 피오글리타존, 피오글리타존 히드로클로라이드, 로시글리타존 말레에이트, 로시글리타존 말레에이트 ((-)-거울상이성질체, 유리 염기), 로시글리타존 말레에이트/메트포르민 히드로클로라이드 또는 테사글리티자르이다.

프로테아제 억제제는, 예를 들어 알파1-항트립신 프로테이나제 억제제, EPI-HNE4, UT-77, ZD-0892 또는 WO 2006/004532, WO 2005/026123, WO 2002/0744767 또는 WO 22002/074751로부터의 화합물; 또는 TACE 억제제 (예를 들어, DPC-333, Sch-709156 또는 독시시클린)이다.

스타틴은, 예를 들어 아토르바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 로수바스타틴 또는 심바스타틴이다.

트롬복산 길항제는, 예를 들어 라마트로반 또는 세라트로다스트이다.

혈관확장제는, 예를 들어 A-306552, 암브리센탄, 아보센탄, BMS-248360, BMS-346567, BMS-465149, BMS-509701, 보센탄, BSF-302146 (암브리센탄), 칼시토닌 유전자-관련 펩티드, 다글루트릴, 다루센탄, 판도센탄 칼륨, 파수딜, 일로프로스트, KC-12615 (다글루트릴), KC-12792 2AB (다글루트릴), 리포소말 트레프로스티닐, PS-433540, 시탁센탄 나트륨, 나트륨 페룰레이트, TBC-11241 (시탁센탄), TBC-3214 (N-(2-아세틸-4,6-디메틸페닐)-3-[[(4-클로로-3-메틸-5-이속사졸릴)아미노]술포닐]-2-티오펜카르복스아미드), TBC-3711, 트라피딜, 트레프로스티닐 디에탄올아민 또는 트레프로스티닐 나트륨이다.

ENAC (상피 나트륨 채널 차단제)는, 예를 들어 아밀로리드, 벤자밀, 트리암테렌, 552-02, PSA14984, PSA25569, PSA23682 또는 AER002이다.

상기 모든 제2 활성 성분 (이하 참조)은 용매화물, 예컨대 수화물의 형태일 수 있다.

한 특정 측면에서, 본 발명은 제1 및 제2 활성 성분을 혼합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다. 별법으로, 제약 생성물은, 예를 들어 제1 활성 성분의 제제 및 제2 활성 성분의 제제, 및 임의로 상기 제제의 투여를 필요로 하는 환자에게 이를 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여하는 것에 대한 지침서를 포함하는 키트일 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및

CCR1 길항제;

케모카인 길항제 (CCR1이 아님);

코르티코스테로이드;

IKK2 억제제;

무스카린성 길항제;

p38 억제제; 또는

PDE 억제제

로부터 선택되며, 단 무스카린성 길항제가

(여기서, X가 1가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)가 아닌

것인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은

CCR1 길항제;

케모카인 길항제 (CCR1이 아님);

코르티코스테로이드;

IKK2 억제제;

무스카린성 길항제;

p38 억제제; 또는

PDE 억제제

로부터 선택되는 제2 활성성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR) 효능제, 예를 들어 WO 2006/046916에 개시되어 있는 화합물인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 CCR1 길항제, 예를 들어 WO2001/062728 또는 WO2001/098273에 개시되어 있는 화합물 [예컨대, N-(2{(2S)-3[{(3R)-1-[(4-클로로페닐)메틸]-3-피롤리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-플루오로페닐)아세트아미드, N-(2{(2S)-3[{(3S)-1-[(4-클로로페닐)메틸]-3-피롤리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-플루오로페닐)아세트아미드, N-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤조일)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, (2-{[(2S)-3-{[(2R,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(3S,4R)-1-(4-클로로벤질)-3-메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(3R,4R)-1-(4-클로로벤질)-3-메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2R,4S,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2R,4R,5S)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2S,4R,5R)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, (2-{[(2S)-3-{[(2S,4S,5R)-1-(4-클로로벤질)-2,5-디메틸피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)아세트산, 메틸 (2-{[(2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)프로파노에이트, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-4-클로로페닐 아세트아미드, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐] 아세트아미드, N-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-플루오로페닐] 아세트아미드, N-[5-클로로-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐] 아세트아미드, N-[5-클로로-[2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)-4-히드록시페닐] 프로판아미드, (2-{[(2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필]옥시}-4-플루오로페닐)메탄술폰산, N-5-클로로-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤질)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-4-히드록시페닐)-N'-시클로프로필-우레아, N-(2-{(2S)-3-[1-{(4-클로로벤질)-4-피페리디닐}아미노]-2-히드록시프로폭시}-페닐)-N'-에틸-우레아, (2S)-1-(2-에틸페녹시)-3[(1-[4-클로로벤질]4-피페리디닐)아미노]프로판-2-올, (2S)-1-[2-(-히드록시에틸)페녹시]-2-메틸-3[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]프로판-2-올, 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시-2-메틸프로폭시)벤즈알데히드, 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-N-시클로프로필벤즈아미드, 메틸 2-({2S}-3-[(1-[4-클로로벤질]-4-피페리디닐)아미노]-2-히드록시프로폭시)-4-플루오로벤조에이트, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H-스피로[1,3-벤조디옥솔-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시벤조산, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[2-벤조푸란-1,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드; 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[2-벤조푸란-1,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시-N-메틸벤즈아미드, N-[2-({(2S)-3-[(2R)-5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,3'-피롤리딘]-1'-일]-2-히드록시프로필}옥시)-4-히드록시페닐]아세트아미드, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)우레아, 4-플루오로-2-{[(2S)-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}벤조산, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)우레아, N-(2-{[(2S)-2-아미노-3-(5-플루오로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-[(2S)-3-(5-클로로스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로폭시]-벤즈알데히드, (αS)-5-클로로-α-[[2-(2-히드록시에틸)페녹시]메틸]-스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-에탄올, (αS)-5-클로로-α-[[2-(히드록시메틸)페녹시]메틸]-스피로[벤조푸란-2(3H),4'-피페리딘]-1'-에탄올, N-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-5-클로로-4-히드록시페닐)아세트아미드, 2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-(4-{아세틸아미노}페녹시)아세트산, 5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-(4-{아세틸아미노}페녹시)아세트산, {2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}아세트산, 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산, (2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-{[(3S)-3-히드록시피롤리딘-1-일]카르보닐}페녹시)아세트산, 5-클로로-2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-(시아노메톡시)벤조산, 2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-5-클로로-4-(2,2-디플루오로에톡시)벤조산, 5-클로로-2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-(3,3,3-트리플루오로프로폭시)벤조산, N-(2-{3-[5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일]프로폭시}페닐)아세트아미드, 메틸 3-(2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)프로판산, N-(2-{[(2S)-3-({스피로[인돌-2-4'-피페리딘]-3(1H)-온}-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-히드록시페닐)아세트아미드 또는 (2-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-플루오로페닐)메탄술폰산, 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, 상기 기재한 바와 같음; (예컨대, 히드로클로라이드, 트리플루오로아세테이트, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염))]; BX471 ((2R)-1-[[2-[(아미노카르보닐)아미노]-4-클로로페녹시]아세틸]-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2-메틸피페라진 모노히드로클로라이드); 또는 CCX634인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, CCR1 길항제는 N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필)옥시]-4-히드록시페닐}아세트아미드 또는 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산, 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들면, 히드로클로라이드, 술페이트, (헤미)푸마레이트, 벤조에이트, 푸로에이트 또는 숙시네이트 염)이다. 예를 들어, 벤조에이트 염으로서의 N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-클로로벤질)피페리딘-4-일]아미노}-2-히드록시-2-메틸프로필)옥시]-4-히드록시페닐}아세트아미드 또는 유리 산으로서의 2-{2-클로로-5-{[(2S)-3-(5-클로로-1'H,3H-스피로[1-벤조푸란-2,4'-피페리딘]-1'-일)-2-히드록시프로필]옥시}-4-[(메틸아미노)카르보닐]페녹시}-2-메틸프로판산.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 케모카인 길항제 (CCR1이 아님), 예를 들어 656933 (N-(2-브로모페닐)-N'-(4-시아노-1H-1,2,3-벤조트리아졸-7-일)우레아), 766994 (4-({[({[(2R)-4-(3,4-디클로로벤질)모르폴린-2-일]메틸}아미노)카르보닐]-아미노}메틸)벤즈아미드), CCX-282, CCX-915, 시아노비린 N, E-921, INCB-003284, INCB-9471, 마라비록, MLN-3701, MLN-3897, T-487 (N-{1-[3-(4-에톡시페닐)-4-옥소-3,4-디히드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일]에틸}-N-(피리딘-3-일메틸)-2-[4-(트리플루오로메톡시)페닐]아세트아미드) 또는 비크리비록인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 코르티코스테로이드, 예를 들어 알클로메타손 디프로피오네이트, 아멜로메타손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소니드, 부틱소코르트 프로피오네이트, 시클레소니드, 클로베타솔 프로피오네이트, 데스이소부티릴시클레소니드, 에티프레드놀 디클로아세테이트, 플루오시놀론 아세토니드, 플루티카손 푸로에이트, 플루티카손 프로피오네이트, 로테프레드놀 에타보네이트 (국소) 또는 모메타손 푸로에이트인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 한 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 부데소니드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루티카손 프루오에이트, 모메타손 푸로에이트, 베클로메타손 디프로피오네이트 또는 부틱소코르트 프로피오네이트 에스테르로부터 선택된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 코르티코스테로이드, 예를 들어 부데소니드, 플루티카손 푸로에이트 또는 플루티카손 프로피오네이트인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 한 실시양태에서, 코르티코스테로이드는 부데소니드이다. 부데소니드 및 그의 제조는, 예를 들어 문헌 [Arzneimittel-Forschung (1979), 29 (11), 1687-1690], DE 2,323,215 및 US 3,929,768에 기재되어 있다. 현재 이용가능한 부데소니드 제제는 상표명 엔토코르트 (Entocort, 등록상표)하에 시판되고 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 IKK2 억제제, 예를 들어 2-{[2-(2-메틸아미노-피리미딘-4-일)-1H-인돌-5-카르보닐]-아미노}-3-(페닐-피리딘-2-일-아미노)-프로피온산인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 무스카린성 길항제, 예를 들어 아클리디늄 브로마이드, 글리코피롤레이트 (예컨대, R,R-, R,S-, S,R- 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드), 옥시트로퓸 브로마이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, 티오트로퓸 브로마이드, 3(R)-(2-히드록시-2,2-디티엔-2-일아세톡시)-1-(3-페녹시프로필)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (WO 01/04118 참조), 3(R)-1-페네틸-3-(9H-크산텐-9-카르보닐옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 또는 (3R)-3-[(2S)-2-시클로펜틸-2-히드록시-2-티엔-2-일아세톡시]-1-(2-페녹시에틸)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (WO 01/04118 참조); 또는 4급 암모늄 염 (예컨대, [2-((S)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-(3-페녹시-프로필)-암모늄 염, [2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-(3-페녹시-프로필)-암모늄 염, [2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-(2-페네틸옥시-에틸)-암모늄 염, [2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-[3-(3,4-디클로로-페녹시)-프로필] 디메틸-암모늄 염, [2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-[2-(3,4-디클로로-벤질옥시)-에틸]-디메틸-암모늄 염, [2-(4-클로로-벤질옥시)-에틸]-[2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-암모늄 염, 또는 (R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 (여기서, 반대 이온은 예를 들어 클로라이드, 브로마이드, 술페이트, 메탄술포네이트, 벤젠술포네이트 (베실레이트), 톨루엔술포네이트 (토실레이트), 나프탈렌비스술포네이트 (나파디실레이트), 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 타르트레이트, 메실레이트, 말레에이트, 푸마레이트 또는 숙시네이트임)인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 옥시트로퓸 브로마이드 또는 티오트로퓸 브로마이드인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 장기 작용형 무스카린성 수용체 길항제, 즉 활성이 12시간을 초과하여 지속되는 무스카린성 수용체 길항제이다. 장기 작용형 무스카린성 수용체 길항제의 예에는 티오트로퓸 브로마이드가 포함된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예컨대, 디-D-만델레이트 염)인 제1 활성 성분, 및 티오트로퓸 브로마이드인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 티오트로퓸 브로마이드인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예컨대, 디-D-만델레이트 염)인 제1 활성 성분, 및 글리코피롤레이트 (예컨대, R,R-, R,S-, S,R- 또는 S,S-글리코피로늄 브로마이드)인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예컨대, 디-D-만델레이트 염)인 제1 활성 성분, 및 (R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 (여기서, 반대-이온이, 예를 들어 클로라이드, 브로마이드, 술페이트, 메탄술포네이트, 벤젠술포네이트 (베실레이트), 톨루엔술포네이트 (토실레이트), 나프탈렌비스술포네이트 (나파디실레이트), 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 타르트레이트, 메실레이트, 말레에이트, 푸마레이트 또는 숙시네이트임)인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 p38 억제제, 예를 들어 WO 2005/042502로부터의 화합물, 681323, 856553, AMG548 (2-[[(2S)-2-아미노-3-페닐프로필]아미노]-3-메틸-5-(2-나프탈레닐)-6-(4-피리디닐)-4(3H)-피리미디논), 어레이-797, AZD6703, 도라마피모드, KC-706, PH 797804, R1503, SC-80036, SCIO469, 6-클로로-5-[[(2S,5R)-4-[(4-플루오로페닐)메틸]-2,5-도메틸-1-피페라지닐]카르보닐]-N,N,1-트리메틸-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드, VX702 또는 VX745 (5-(2,6-디클로로페닐)-2-(페닐티오)-6H-피리미도[1,6-b]피리다진-6-온)인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 PDE 억제제: 예컨대 PDE4 억제제 {예를 들어, 256066, 아로필린 (3-(4-클로로페닐)-3,7-디히드로-1-프로필-1H-퓨린-2,6-디온), AWD 12-281 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-히드록시-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드), BAY19-8004 (바이엘), CDC-801 (칼진), 셀진 화합물 ((βR)-β-(3,4-디메톡시페닐)-1,3-디히드로-1-옥소-2H-이소인돌-2-프로판아미드), 실로밀라스트 (시스-4-시아노-4-[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]-시클로헥산카르복실산), 교와 하꼬 고교 컴퍼니 리미티드 (일본)로부터의 WO2006098353의 화합물, 2-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-(7-메톡시스피로[1,3-벤조디옥솔-2,1'-시클로펜탄]-4-일)에타논 (CAS 번호 185406-34-2)), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[(2-히드록시-5-메틸벤조일)아미노]시클로헥실]-)-3-피리딘카르복스아미드), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[[2-히드록시-5-(히드록시메틸)벤조일]아미노]시클로헥실]-3-피리딘카르복스아미드), CT2820, GPD-1116, 이부딜라스트, IC 485, KF 31334, KW-4490 (교와 하꼬 고교), 리리밀라스트 ([2-(2,4-디클로로벤조일)-6-[(메틸술포닐)옥시]-3-벤조푸라닐])-우레아), 머크 화합물 (N-시클로프로필-1,4-디히드로-4-옥소-1-[3-(3-피리디닐에티닐)페닐]-)-1,8-나프티리딘-3-카르복스아미드), 오글레밀라스트 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)-8-[(메틸술포닐)아미노])-1-디벤조푸란카르복스아미드), ONO6126, ORG 20241 (4-(3,4-디메톡시페닐)-N-히드록시-)-2-티아졸카르복스이미드아미드), PD189659/PD168787 (파크-데이비스), 펜톡시필린 (3,7-디히드로-3,7-디메틸-1-(5-옥소헥실)-)-1H-퓨린-2,6-디온), 화이자 화합물 (5-플루오로-N-[4-[(2-히드록시-4-메틸-벤조일)아미노]시클로헥실]-2-(티안-4-일옥시)피리딘-3-카르복스아미드), 화이자 UK 500,001, 피클라밀라스트 (3-(시클로펜틸옥시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-메톡시-벤즈아미드), PLX-369 (WO 2006026754), 로플루밀라스트 (3-(시클로프로필메톡시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)벤즈아미드), SCH 351591 (N-(3,5-디클로로-1-옥시도-4-피리디닐)-8-메톡시-2-(트리플루오로메틸)-5-퀴놀린카르복스아미드), SelCID(TM) CC-10004 (칼진), T-440 (타나베), 테토밀라스트 (6-[2-(3,4-디에톡시페닐)-4-티아졸릴]-2-피리딘카르복실산), 토피밀라스트 (9-시클로펜틸-7-에틸-6,9-디히드로-3-(2-티에닐)-5H-피라졸로[3,4-c]-1,2,4-트리아졸로[4,3-a]피리딘), TPI 1100, UCB 101333-3 (N,2-디시클로프로필-6-(헥사히드로-1H-아제핀-1-일)-5-메틸-4-피리미딘아민), V-11294A (나프), VM554/VM565 (버날리스), 또는 자르다베린 (6-[4-(디플루오로메톡시)-3-메톡시페닐]-3(2H)-피리다지논); 또는 PDE5 억제제, 예를 들어 감마-글루타밀[s-(2-요오도벤질)시스테이닐]글라이신, 타달라필, 바르데나필, 실데나필, 4-페닐-메틸아미노-6-클로로-2-(1-이미다졸릴)-퀴나졸린, 4-페닐-메틸아미노-6-클로로-2-(3-피리딜)-퀴나졸린, 1,3-디메틸-6-(2-프로폭시-5-메탄술포닐아미도페닐)-1,5-디히드로피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-온 또는 1-시클로펜틸-3-에틸-6-(3-에톡시-4-피리딜)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-온}인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, PDE4 억제제, 예를 들어 256066, 아로필린 (3-(4-클로로페닐)-3,7-디히드로-1-프로필-1H-퓨린-2,6-디온), AWD 12-281 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-히드록시-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드), BAY19-8004 (바이엘), CDC-801 (칼진), 셀진 화합물 ((βR)-β-(3,4-디메톡시페닐)-1,3-디히드로-1-옥소-2H-이소인돌-2-프로판아미드), 실로밀라스트 (시스-4-시아노-4-[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]-시클로헥산카르복실산), 교와 하꼬 고교 컴퍼니 리미티드 (일본)로부터의 WO2006098353의 화합물, 2-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-(7-메톡시스피로[1,3-벤조디옥솔-2,1'-시클로펜탄]-4-일)에타논 (CAS 번호 185406-34-2)), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[(2-히드록시-5-메틸벤조일)아미노]시클로헥실]-)-3-피리딘카르복스아미드), 화이자로부터의 화합물 (2-(3,4-디플루오로페녹시)-5-플루오로-N-[시스-4-[[2-히드록시-5-(히드록시메틸)벤조일]아미노]시클로헥실]-3-피리딘카르복스아미드,), CT2820, GPD-1116, 이부딜라스트, IC 485, KF 31334, KW-4490 (교와 하꼬 고교), 리리밀라스트 ([2-(2,4-디클로로벤조일)-6-[(메틸술포닐)옥시]-3-벤조푸라닐])-우레아), 머크 화합물 (N-시클로프로필-1,4-디히드로-4-옥소-1-[3-(3-피리디닐에티닐)페닐]-)-1,8-나프티리딘-3-카르복스아미드), 오글레밀라스트 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)-8-[(메틸술포닐)아미노])-1-디벤조푸란카르복스아미드), ONO6126, ORG 20241 (4-(3,4-디메톡시페닐)-N-히드록시-)-2-티아졸카르복스이미드아미드), PD189659/PD168787 (파크-데이비스), 펜톡시필린 (3,7-디히드로-3,7-디메틸-1-(5-옥소헥실)-)-1H-퓨린-2,6-디온), 화이자 화합물 (5-플루오로-N-[4-[(2-히드록시-4-메틸-벤조일)아미노]시클로헥실]-2-(티안-4-일옥시)피리딘-3-카르복스아미드), 화이자 UK 500,001, 피클라밀라스트 (3-(시클로펜틸옥시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-메톡시-벤즈아미드), PLX-369 (WO 2006026754), 로플루밀라스트 (3-(시클로프로필메톡시)-N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-4-(디플루오로메톡시)벤즈아미드), SCH 351591 (N-(3,5-디클로로-1-옥시도-4-피리디닐)-8-메톡시-2-(트리플루오로메틸)-5-퀴놀린카르복스아미드), SelCID(TM) CC-10004 (칼진), T-440 (타나베), 테토밀라스트 (6-[2-(3,4-디에톡시페닐)-4-티아졸릴]-2-피리딘카르복실산), 토피밀라스트 (9-시클로펜틸-7-에틸-6,9-디히드로-3-(2-티에닐)-5H-피라졸로[3,4-c]-1,2,4-트리아졸로[4,3-a]피리딘), TPI 1100, UCB 101333-3 (N,2-디시클로프로필-6-(헥사히드로-1H-아제핀-1-일)-5-메틸-4-피리미딘아민), V-11294A (나프), VM554/VM565 (버날리스), 또는 자르다베린 (6-[4-(디플루오로메톡시)-3-메톡시페닐]-3(2H)-피리다지논)인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 PDE4 억제제, 예를 들면 AWD 12-281 (N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-1-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-히드록시-α-옥소-1H-인돌-3-아세트아미드) 또는 로플루밀라스트인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 로플루밀라스트인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.

본 발명의 제약 생성물의 제1 활성 성분 및 제2 활성 성분은 호흡기 질환의 치료를 위해 동시에, 순차적으로, 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 동시에라는 것은 활성 성분들이 혼합되어 있거나, 그들이 동일한 흡입기의 별개 챔버 내에 있을 수 있다는 것을 의미한다. 순차적이라는 것은 활성 성분이 임의의 순서로, 하나가 투여된 직후에 다른 하나가 투여되는 것을 의미한다. 그러나, 일반적으로는 4시간 미만의 간격, 알맞게는 2시간 미만의 간격, 보다 알맞게는 30분 미만의 간격, 가장 알맞게는 10분 미만의 간격, 예를 들어 하나를 투여한 직후에 다른 하나를 투여하지 않고 10분 미만의 간격의 방식으로 투여하는 경우, 이들을 별개로 투여하여도 여전히 목적하는 효과를 갖는다.

본 발명의 활성 성분은, 정제, 캡슐, 환제, 분말, 수성 또는 유성 용액 또는 현탁액, 에멀젼 및 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 용액 또는 현탁액과 같은 통상의 전신 투여 형태를 이용하여, 경구 또는 비경구 (예를 들어 정맥내, 피하, 근육내 또는 관절내) 투여로 투여될 수 있다. 활성 성분은 용액, 현탁액, 에어로졸 또는 건조 분말 제제의 형태로 경구 투여를 통해 폐 및/또는 기도로 전달될 수 있다. 이러한 투여 형태는 일반적으로, 예를 들어, 보조제, 담체, 결합제, 윤활제, 희석제, 안정화제, 완충제, 유화제, 점도-조절제, 계면활성제, 보존제, 향미제 또는 착색제로부터 선택될 수 있는 하나 이상의 제약상 허용되는 성분을 포함할 것이다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 활성 성분의 가장 적절한 투여 방법은 수많은 인자에 따라 달라진다.

다른 실시양태에서, 제1 및 제2 활성 성분은 단일 제약 조성물로 투여된다 (즉, 제1 및 제2 활성 성분이 혼합되어 있음). 따라서, 본 발명은 추가로, N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염인 제1 활성 성분, 및 상기 정의된 바와 같은 제2 활성 성분을 혼합하여 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 임의로는, 상기 제약 조성물은 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체를 추가로 포함한다.

본 발명의 제약 조성물은 제1 활성 성분을 제2 활성 성분 및 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하는 것에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 본 발명의 추가의 측면에서는 제1 및 제2 활성 성분과 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체를 혼합하는 것을 포함하는 제약 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명에 따라 투여되는 각 활성 성분의 치료적 투여량은 사용하는 특정 활성 성분, 상기 활성 성분이 투여되는 방식, 및 치료하고자 하는 질병 또는 장애에 따라 달라질 것임을 이해할 것이다.

본 발명의 한 실시양태에서, 제1 활성 성분은 흡입을 통해 투여된다. 흡입을 통해 투여되는 경우, 제1 활성 성분 (즉, 염 형태, 용매화물 형태, 또는 염의 용매화물 형태의 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드)의 투여량은 일반적으로 0.1 마이크로그램 (㎍) 내지 5000 ㎍, 0.1 내지 1000 ㎍, 0.1 내지 500 ㎍, 0.1 내지 100 ㎍, 0.1 내지 50 ㎍, 0.1 내지 5 ㎍, 5 내지 5000 ㎍, 5 내지 1000 ㎍, 5 내지 500 ㎍, 5 내지 100 ㎍, 5 내지 50 ㎍, 5 내지 10 ㎍, 10 내지 5000 ㎍, 10 내지 1000 ㎍, 10 내지 500 ㎍, 10 내지 100 ㎍, 10 내지 50 ㎍, 20 내지 5000 ㎍, 20 내지 1000 ㎍, 20 내지 500 ㎍, 20 내지 100 ㎍, 20 내지 50 ㎍, 50 내지 5000 ㎍, 50 내지 1000 ㎍, 50 내지 500 ㎍, 50 내지 100 ㎍, 100 내지 5000 ㎍, 100 내지 1000 ㎍ 또는 100 내지 500 ㎍의 범위일 것이다. 투여량은 일반적으로 1일 1회 내지 4회, 편리하게는 1일 1회 또는 2회, 가장 편리하게는 1일 1회 투여될 것이다.

본 발명의 한 실시양태에서, 제2 활성 성분은 흡입을 통해 투여된다. 흡입을 통해 투여되는 경우, 제2 활성 성분의 투여량은 일반적으로 0.1 마이크로그램 (㎍) 내지 5000 ㎍, 0.1 내지 1000 ㎍, 0.1 내지 500 ㎍, 0.1 내지 100 ㎍, 0.1 내지 50 ㎍, 0.1 내지 5 ㎍, 5 to 5000 ㎍, 5 내지 1000 ㎍, 5 내지 500 ㎍, 5 내지 100 ㎍, 5 내지 50 ㎍, 5 내지 10 ㎍, 10 내지 5000 ㎍, 10 내지 1000 ㎍, 10 내지 500 ㎍, 10 내지 100 ㎍, 10 내지 50 ㎍, 20 내지 5000 ㎍, 20 내지 1000 ㎍, 20 내지 500 ㎍, 20 내지 100 ㎍, 20 내지 50 ㎍, 50 내지 5000 ㎍, 50 내지 1000 ㎍, 50 내지 500 ㎍, 50 내지 100 ㎍, 100 내지 5000 ㎍, 100 내지 1000 ㎍ 또는 100 내지 500 ㎍의 범위일 것이다. 투여량은 일반적으로 1일 1회 내지 4회, 편리하게는 1일 1회 또는 2회, 가장 편리하게는 1일 1회 투여될 것이다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 제1 활성 성분 대 제2 활성 성분의 몰비가 1:1000 내지 1000:1, 예컨대 1:100 내지 100:1, 예를 들어 1:50 내지 50:1, 예를 들어 1:20 내지 20:1인 제약 생성물을 제공한다.

한 실시양태에서, 본 발명은 상기에서 정의한 바와 같은 제1 활성 성분 및 상기에서 정의한 바와 같은 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공하며, 여기서 각 활성 성분은 흡입 투여를 위해 제제화된다. 이 실시양태의 추가의 측면에서, 제약 생성물은 제1 및 제2 활성 성분을 혼합하여 포함하는 제약 조성물의 형태이고, 이 조성물은 흡입 투여를 위해 제제화된다.

본 발명의 활성 성분은 용액, 현탁액, 에어로졸 또는 건조 분말 (예컨대, 덩어리 혼합물 또는 규칙 혼합물) 제제의 형태로 흡입에 의한 경구 투여를 통해 폐 및/또는 기도로 알맞게 전달된다. 예를 들어, 추가적인 부형제, 예컨대 에탄올, 계면활성제, 윤활제 또는 안정화제의 존재 또는 부재하에 적합한 분사제 중에 분산된 활성 성분을 투여하는데 정량식 흡입 장치를 사용할 수 있다. 적합한 분사제로는, 탄화수소, 클로로플루오로카본, 또는 히드로플루오로알칸 (예를 들어, 헵타플루오로알칸) 분사제, 또는 예를 들어 가압 정량식 흡입기 (pMDI) 내의 임의의 이러한 분사제의 혼합물이 있다. 바람직한 분사제는 P134a 및 P227이고, 이들 각각은 단독으로 또는 기타 분사제 및/또는 계면활성제 및/또는 기타 부형제와 함께 사용될 수 있다. 분무된 수성 현탁액 또는, 바람직하게는, 용액은 또한 적합한 pH 및/또는 장성 조정하에 또는 이들 없이 단위-투여량 또는 다중-투여량 제제로서 사용될 수 있다. 건조 분말의 전달을 위한 적합한 장치는 터부할러 (Turbuhaler, 등록상표)이다.

본 발명의 제약 생성물은, 예를 들어 제1 및 제2 활성 성분을 흡입기의 별개의 챔버 내에 포함하여 투여시에 활성 성분들이 흡입기의 마우스피스 또는 환자의 구강, 또는 둘 모두에서 혼합되도록 하는 흡입기를 통해 (동시 사용을 위함); 또는 제1 및 제2 활성 성분이 별개의 흡입기 내에 존재하는 별개의 흡입기를 통해 (별개의 사용 또는 순차적 사용을 위함); 또는 흡입기가 환자에게 제공될 때 제1 및 제2 활성 성분이 흡입기 내에서 혼합되어 존재하는 흡입기를 통해 (동시 사용을 위함) 투여될 수 있다.

건조 분말 흡입기는 활성 성분을 단독으로, 또는 제약상 허용되는 담체 (예컨대, 락토스)와 함께 투여하는데 사용될 수 있고, 후자의 경우 미분된 분말로서 또는 규칙 혼합물로서 투여하는데 사용될 수 있다. 건조 분말 흡입기는 단일 투여량 또는 다중 투여량일 수 있고, 건조 분말 또는 분말-함유 캡슐을 이용할 수 있다.

정량식 흡입기, 분무기 및 건조 분말 흡입 장치는 널리 공지되어 있고, 이러한 다양한 장치가 사용가능하다.

본 발명의 조합물은 기도의 폐쇄성 질환, 예컨대 천식, 예를 들어 기관지 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 외인성 천식, 운동-유도된 천식, 약물-유도된 천식 (아스피린 및 NSAID-유도된 천식 포함) 및 먼지-유도된 천식 (간헐성 및 지속성 천식 및 모든 중증도의 천식 포함), 및 기도 과민반응의 다른 원인; 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 기관지염, 예컨대 감염성 및 호산구성 기관지염; 기종; 기관지확장증; 낭포성 섬유증; 유육종증; 농부 폐 및 관련 질환; 과민성 폐렴; 폐 섬유증, 예컨대 잠재성 섬유화 폐포염, 특발성 간질성 폐렴, 항신생물 요법의 합병증으로 나타나는 섬유증, 및 만성 감염, 예컨대 결핵 및 아스페르길루스증, 및 다른 진균성 감염; 폐 이식의 합병증; 폐 혈관의 혈관염성 및 혈전성 장애, 및 폐 고혈압; 진해 활성, 예컨대 기도의 염증성 및 분비성 질병과 관련된 만성 기침, 및 의인성 기침의 치료; 급성 및 만성 비염, 예컨대 약물성 비염 및 혈관운동성 비염; 통년성 및 계절성 알레르기성 비염, 예컨대 신경성 비염 (고초열); 비강 폴립증; 급성 바이러스 감염, 예컨대 일반 감기, 및 호흡기 세포융합 바이러스, 인플루엔자, 코로나바이러스 (SARS 포함) 및 아데노바이러스에 의한 감염과 같은 호흡기 질환을 치료하는데 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명은 추가로 요법에서 동시적, 순차적으로 또는 개별적으로 사용하기 위한 본 발명에 따른 제약 생성물을 제공한다.

본 발명은 추가로 호흡기 질환, 특히 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 비염, 기종 또는 기관지염 (예컨대, 만성 폐쇄성 폐 질환 또는 천식; 예를 들어, 만성 폐쇄성 폐 질환)을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명에 따른 제약 생성물의 용도를 제공한다.

본 발명은 또한 추가로 호흡기 질환의 치료가 필요한 환자에게

(a) 치료 유효 용량의 상기 정의한 바와 같은 제1 활성 성분; 및

(b) 치료 유효 용량의 상기 정의한 바와 같은 제2 활성 성분

을 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여하는 것을 포함하는, 호흡기 질환의 치료 방법을 제공한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 호흡기 질환, 특히 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 비염, 기종 또는 기관지염 (예컨대, 만성 폐쇄성 폐 질환 또는 천식; 예를 들어, 만성 폐쇄성 폐 질환)을 치료하기 위한, 상기에서 기재한 바와 같은 제약 생성물, 키트 또는 조성물의 용도를 제공한다.

본 명세서의 문맥에서, 용어 "요법"은 또한 달리 특정하게 언급하지 않는 한은 "예방"까지도 포함한다. 용어 "치료적" 및 "치료적으로"는 이에 따라 해석되어야 한다. 예방은 특히 해당 질병 또는 장애의 사전 에피소드를 경험하였거나, 또는 해당 질병 또는 장애에 걸릴 위험이 높아진 것으로 생각되는 사람의 치료와 관련된 것으로 예상된다. 특정 질병 또는 장애가 발생할 위험이 있는 사람으로는 일반적으로 상기 질병 또는 장애의 가족력이 있는 사람, 또는 유전자 시험 또는 스크리닝에 의해 상기 질병 또는 장애가 특히 발생하기 쉬운 것으로 확인된 사람이 포함된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드의 염 (여기서, 염이 나프탈렌-2-술폰산, 히푸르산, 황산, 4-메틸벤젠술폰산, 나프탈렌-1,5-디술폰산, 벤젠술폰산, 메탄술폰산, 말레산 및 사카린을 포함하는 군으로부터 선택된 산과의 반응에 의해 형성된 염임)을 제공한다.

상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염은 기도의 폐쇄성 질환, 예컨대 천식, 예를 들어 기관지 천식, 알레르기성 천식, 내인성 천식, 외인성 천식, 운동-유도된 천식, 약물-유도된 천식 (아스피린 및 NSAID-유도된 천식 포함) 및 먼지-유도된 천식 (간헐성 및 지속성 천식 및 모든 중증도의 천식 포함), 및 기도 과민반응의 다른 원인; 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD); 기관지염, 예컨대 감염성 및 호산구성 기관지염; 기종; 기관지확장증; 낭포성 섬유증; 유육종증; 농부 폐 및 관련 질환; 과민성 폐렴; 폐 섬유증, 예컨대 잠재성 섬유화 폐포염, 특발성 간질성 폐렴, 항신생물 요법의 합병증으로 나타나는 섬유증, 및 만성 감염, 예컨대 결핵 및 아스페르길루스증, 및 다른 진균성 감염; 폐 이식의 합병증; 폐 혈관의 혈관염성 및 혈전성 장애, 및 폐 고혈압; 진해 활성, 예컨대 기도의 염증성 및 분비성 질병과 관련된 만성 기침, 및 의인성 기침의 치료; 급성 및 만성 비염, 예컨대 약물성 비염 및 혈관운동성 비염; 통년성 및 계절성 알레르기성 비염, 예컨대 신경성 비염 (고초열); 비강 폴립증; 급성 바이러스 감염, 예컨대 일반 감기, 및 호흡기 세포융합 바이러스, 인플루엔자, 코로나바이러스 (SARS 포함) 또는 아데노바이러스에 의한 감염과 같은 호흡기 질환을 치료하는데 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 요법에 사용하기 위한, 상기 정의한 바와 같은 본 발명에 따른 염을 제공한다.

본 발명은 또한 호흡기 질환, 특히 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 비염, 기종 또는 기관지염 (예컨대, 만성 폐쇄성 폐 질환 또는 천식; 예를 들면 만성 폐쇄성 폐 질환)의 치료를 위한 의약의 제조에서의 상기 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 염의 용도를 제공한다.

본 명세서의 문맥에서, 용어 "요법"은 또한 달리 특정하게 언급하지 않는 한은 "예방"까지도 포함한다. 용어 "치료적" 및 "치료적으로"는 이에 따라 해석되어야 한다.

예방은 특히 해당 질병 또는 장애의 사전 에피소드를 경험하였거나, 또는 해당 질병 또는 장애에 걸릴 위험이 높아진 것으로 생각되는 사람의 치료와 관련된 것으로 예상된다. 특정 질병 또는 장애가 발생할 위험이 있는 사람으로는 일반적으로 상기 질병 또는 장애의 가족력이 있는 사람, 또는 유전자 시험 또는 스크리닝에 의해 상기 질병 또는 장애가 특히 발생하기 쉬운 것으로 확인된 사람이 포함된다.

본 발명은 또한 염증성 질환 또는 질병 (가역적 폐쇄성 기도 질환 또는 질병 포함)을 치료하거나, 또는 그 위험을 감소시키는 것이 필요한 환자에게 치료 유효 용량의 상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 질병을 치료하거나, 또는 그 위험을 감소시키는 방법을 제공한다.

상기 언급한 치료 용도의 경우에, 투여량은 물론 사용되는 화합물, 투여 방식, 원하는 치료 및 해당 장애에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염의 일일 투여량은 흡입하는 경우 0.05 마이크로그램/킬로그램 체중 (㎍/kg) 내지 100 마이크로그램/킬로그램 체중 (㎍/kg)의 범위일 수 있다. 별법으로, 본 발명의 염을 경구로 투여하는 경우, 본 발명의 화합물의 일일 투여량은 0.01 마이크로그램/킬로그램 체중 (㎍/kg) 내지 100 밀리그램/킬로그램 체중 (mg/kg)의 범위일 수 있다.

상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염은 그 자체로 사용될 수 있으나, 일반적으로 상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염 (활성 성분)이 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 함께 존재하는 제약 조성물의 형태로 투여될 것이다. 적합한 제약 제제의 선택 및 제조에 관한 통상의 절차는, 예를 들어 문헌 ["Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988]에 기재되어 있다.

투여 방식에 따라 제약 조성물은 활성 성분을, 예를 들어 0.05 내지 99 중량％ (중량 기준 백분율), 예컨대 0.05 내지 80 중량％, 예를 들어 0.10 내지 70 중량％, 예컨대 0.10 내지 50 중량％를 포함할 것이고, 여기서 모든 중량 기준 백분율은 전체 조성물을 기준으로 한다.

본 발명은 또한 상기 정의된 바와 같은 염을 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염을 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하는 것을 포함하는, 본 발명의 제약 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 제약 조성물은 국소적으로 (예를 들어, 피부 또는 폐 및/또는 기도로), 예를 들어 크림, 용액, 현탁액, 헵타플루오로알칸 (HFA) 에어로졸 또는 건조 분말 제제 (예를 들어, 터부할러 (등록상표)로 알려진 흡입 장치 내의 제제)의 형태로 투여될 수 있거나; 또는 전신적으로, 예를 들어 정제, 캡슐, 시럽, 분말 또는 과립의 형태로 경구 투여에 의해; 또는 용액 또는 현탁액의 형태로 비경구 투여에 의해; 피하 투여에 의해; 좌제의 형태로 직장 투여에 의해; 또는 경피로 투여될 수 있다.

상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염의 건조 분말 제제 또는 가압 HFA 에어로졸은 경구 또는 비강 흡입에 의해 투여될 수 있다. 흡입의 경우, 염은 바람직하게 미분된다. 미분된 염은, 예를 들어 10 ㎛ 미만의 질량 중앙 직경을 가지며, 분산제, 예컨대 C₈-C₂₀ 지방산 또는 이들의 염 (예를 들어, 올레산), 담즙염, 인지질, 알킬 사카라이드, 과플루오르화된 또는 폴리에톡실화된 계면활성제, 또는 다른 제약상 허용되는 분산제의 보조하에 분사제 혼합물에 현탁될 수 있다.

상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염은 또한 건조 분말 흡입기에 의해 투여될 수 있다. 흡입기는 단일 또는 다중 투여 흡입기일 수 있으며, 호흡 작동식 건조 분말 흡입기일 수 있다.

한가지 가능성은 상기 정의된 바와 같은 본 발명의 미분된 염을 담체 물질, 예를 들어 단당류, 이당류 또는 다당류, 당 알콜 또는 또 다른 폴리올과 함께 혼합하는 것이다. 적합한 담체는, 예를 들어 당, 예컨대 락토스, 글루코스, 라피노스, 멜레지토스, 락티톨, 말티톨, 트레할로스, 수크로스, 만니톨, 또는 전분이다. 별법으로, 미분된 염을 또 다른 물질로 코팅할 수 있다. 분말 혼합물은 또한 목적하는 투여량의 활성 성분을 각각 함유하는 경질 젤라틴 캡슐에 분산될 수 있다.

또 다른 가능성은 미분된 분말을 흡입하는 동안에 파괴되는 구로 가공하는 것이다. 이 구형 분말은, 예를 들어 투여 단위가 목적하는 투여량으로 계량된 후에 환자에 의해 흡입되는, 터부할러 (등록상표)로 공지된 다중투여 흡입기의 약물 저장소에 충전될 수 있다. 이 시스템을 이용하여 활성 성분을 담체 물질과 함께 또는 담체 물질 없이 환자에게 전달한다.

상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염은 또한 상기 질병 중 하나 이상의 치료를 위해 사용되는 또 다른 화합물과 함께 투여될 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 상기 정의된 바와 같은 본 발명의 염, 또는 본 발명의 염을 포함하는 제약 조성물 또는 제제를 열거한 질병 중 하나 이상을 치료하기 위한 다른 치료제 또는 작용제와 동시에, 순차적으로, 또는 조합 제제로서 투여하는 조합 요법에 관한 것이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 하기 중간체 디시클로헥실암모늄 N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니노에이트를 제공한다.

N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니노에이트는 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염의 제조에 있어서 중요한 중간체이고, N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니노에이트의 디시클로헥실암모늄 염은 결정질이다. 이는 공정에 걸쳐 도중에 용이하게 효과적으로 정제된다.

일반적인 제조 방법

달리 언급하지 않는 한, 출발 물질은 상업적으로 입수가능하며, 모든 용매 및 상업적 시약은 실험용 등급의 것이었고, 입수한 그대로 사용하였고, 적절한 경우 반응은 비활성 기체, 예컨대 질소 분위기하에 수행되었다. 달리 언급하지 않는 한, 인용된 온도는 내부 온도로서 적용된 온도를 지칭한다. 주위 온도는 17 내지 28℃ 범위의 온도를 지칭한다. 달리 언급하지 않는 한, 용액의 농축은 감압하에 (진공하에), 예를 들어 뷔히 로타베이퍼 (Buechi Rotavapor) (등록상표) 회전 증발기를 이용하여 증발시킴으로써 수행하였다.

박층 크로마토그래피 (TLC)는 형광 (UV254) 지시약을 함유하는 실리카 (입도 <63 μm; 다공률 60 Å; 표면적 약 500 ㎡/g)로 코팅된 알루미늄- 또는 유리-지지된 플레이트를 이용하여 수행하였다. 용출시킨 후, UV₂₅₄ 조사, 또는 적합한 지시약, 예컨대 요오드 (실리카 상에 미리 흡수시킴), 과망간산칼륨 수용액 또는 세륨 (IV) 질산암모늄 수용액을 사용한 발색에 의해 플레이트를 가시화시켰다. 지시약 제조의 예는 문헌 ['Experimental Organic Chemistry: Preparative and Microscale' 2nd Ed. (Harwood, L., Moody, C. and Percy, J.), WileyBlackwell, 1998]에서 찾아볼 수 있다.

분석용 HPLC는 0.1％ 수성 트리플루오로아세트산, 0.1％ 수성 포름산, 0.1％ 수성 암모늄 아세테이트 또는 0.1％ 수성 암모니아 중 아세토니트릴의 구배로 용출시키는 워터스 (Waters) 엑스브릿지 (XBridge, 상표명) C8 3.5 μm 컬럼; 0.1％ 수성 암모니아 중 아세토니트릴의 구배로 용출시키는 워터스 엑스브릿지 (상표명) C18 3.5 μm 컬럼; 0.1％ 수성 트리플루오로아세트산 중 아세토니트릴의 구배로 용출시키는 워터스 시메트리 (Symmetry, 상표명) C18 3.5 μm 컬럼; 0.1％ 수성 트리플루오로아세트산 중 아세토니트릴의 구배로 용출시키는 워터스 선파이어 (Sunfire, 상표명) C8 3.5 μm 컬럼; 또는 0.1％ 수성 트리플루오로아세트산 중 아세토니트릴의 구배로 용출시키는 페노메넥스 (Phenomenex) 제미니 (Gemini, 상표명) C18 3 μm 컬럼을 이용하여 수행하였다. 용출된 피크의 UV 스펙트럼은 애질런트 (Agilant) 1100 (등록상표) 시스템 또는 동급의 시스템 상에서 다이오드 어레이를 이용하여 측정하였다.

예비-패킹된 바이오티지 (Biotage) 플래쉬 (FLASH, 상표명) 컬럼 또는 동급의 컬럼, 예를 들어 톰슨 (Thomson) 싱글 스템 (SINGLE StEP, 상표명), 바이오티지 이솔루트 (Isolute, 상표명), 텔레다인 이스코 (Teledyne Isco) 레디세프 (RediSep, 상표명) 또는 실리사이클 (Silicycle) 울트라퓨어 (UltraPure) 실리카 컬럼을 사용하여 권장 용매 유속 및 샘플 로딩으로 실리카 (입도 <63 μm; 다공률 60 Å; 표면적 약 500 ㎡/g) 상에서 중압 액체 크로마토그래피 (MPLC)를 수행하였다. 분획 순도는 TLC 또는 분석용 HPLC로 측정하였다.

달리 상술하지 않는 한, 정제용 HPLC는 용리액으로서 수성 0.1-0.2％ 트리플루오로아세트산 중 아세토니트릴, 수성 0.1-0.2％ 암모늄 아세테이트 중 아세토니트릴, 또는 0.1-0.2％ 암모니아 수용액 중 아세토니트릴을 사용하여 페노메넥스 제미니 (상표명) C18 5 μm 컬럼, 워터스 선파이어 (상표명) C18 5 μm 컬럼, 워터스 엑스브릿지 (상표명) C8 5 μm 컬럼 또는 워터스 엑스테라 (XTerra, 상표명) 5 μm를 이용함으로써 상술한 바와 같이 수행하였다. 220 또는 254 nm와 같은 파장에서 UV 분광분석법에 의한 검출에 따라 분획을 수집하였다. 분획 순도는 TLC 또는 분석용 HPLC로 측정하였다.

¹H NMR 스펙트럼은 배리안 유니티이노바 (Varian UnityInova) 500 MHz, 400 MHz 또는 300 MHz 기기 또는 브루커 (Bruker) DPX 300 (300 MHz) 상에서 기록하였다. 클로로포름-d (CDCl₃; δ_H 7.27 ppm), 디메틸술폭시드-d₆ (d₆-DMSO; δ_H 2.50 ppm) 또는 메탄올-d₄ (CD₃OD; δ_H 3.31 ppm) 또는 내부 표준의 테트라메틸실란 (TMS; δ_H 0.00 ppm)의 중앙 피크를 참조로서 사용하였다. 질량 스펙트럼은 분석용 HPLC에 따라 애질런트 (Agilent) MSD (+ve 및 -ve APCI 및/또는 전기분무 (예를 들어, 멀티모드)) 상에서 기록하였다.

XRPD는 패널리티컬 큐빅스 프로 (PANalytical CubiX PRO) 기계 상에서 2 ° 내지 40 ° 2Ø 스캔 범위에 걸쳐 0.02 ° 증분 당 100 초 노출을 이용하는 Ø-Ø 형태로 수행하였다. X-선을 45 kV 및 40 mA에서 작동하는 구리 미세 장초점 튜브에 의해 생성하였다. 구리 X-선의 파장은 1.5418 Å이었다. 화합물 약 2 mg을 놓은 제로 배경 (zero background) 홀더에서 데이터를 수집하였다. 홀더는, 비-회절 면을 따라 절단한 후 광학적 플랫 처리로 연마한 단일 결정의 규소로부터 제조되었다. 이 표면 상에 입사된 X-선을 브래그 (Bragg) 소광에 의해 무효화시켰다.

DSC 열상을 알루미늄 팬 및 관통형 덮개가 있는 TA Q1000 시차주사열량계를 이용하여 측정하였다. 샘플 중량은 0.3 내지 5 mg으로 다양하였다. 질소 기체의 흐름 (50 mL/분) 및 10 ℃/분의 일정 비율의 온도 증가에서 25 내지 300 ℃의 연구 온도 하에 상기 절차를 수행하였다.

모든 다른 과정은 표준 실험실용 기술을 이용하여, 예를 들어 문헌 ['Experimental Organic Chemistry: Preparative and Microscale' 2nd Ed. (Harwood, L., Moody, C. and Percy, J.), WileyBlackwell, 1998]에 상술된 바와 같이 수행하였다.

제조에 사용된 약어 또는 용어는 다음 의미를 갖는다.

SCX: 술폰산 흡착제를 사용하는 고체 상 추출

HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피

DMF: N,N-디메틸포름아미드

THF: 테트라히드로푸란

NMP: N-메틸피롤리디논

HATU: O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄

헥사플루오로포스페이트

TFA: 트리플루오로아세트산

TBME: tert-부틸(메틸)에테르

IMS: 상업용 변성 알콜

CBZ 카르보닐옥시벤질

제조 1

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 비스-트리플루오로아세트산 염

i) 벤질 (2,2-디메톡시에틸)[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]카르바메이트

7-(2-아미노에틸)-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 히드로브로마이드 (20 g)를 THF (300 mL)와 물 (150 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 탄산수소나트륨 (5.77 g)을 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 아세트산 (7.86 mL)에 이어서 디메톡시아세트알데히드 (14.9 g, 12.91 mL)를 첨가하고, 혼합물을 추가로 30분 동안 교반하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드 (8.64 g)를 10분에 걸쳐 일부분씩 첨가하고, 용액을 추가로 20시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트 (500 mL), 및 물 (250 mL) 중 탄산수소나트륨 (17.33 g)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 격렬하게 교반하고, 벤질 클로로포르메이트 (8.78 g, 7.35 mL)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 유기층을 분리하고, 물, 0.1 M 수성 HCl, 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (무수 Na₂SO₄), 여과하고, 증발시켰다. 용리액으로서 디클로로메탄 중 10％ 메탄올을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 생성된 물질을 정제함으로써, 부제 화합물을 밝은 갈색 검 (23.1 g)으로서 수득하였다.

ii) 벤질[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸](2-옥소에틸)카르바메이트

단계 i)로부터의 아세탈 (5 g)을 아세톤 (100 mL) 중에 용해시키고, 디옥산 중 2 M HCl (50 mL)을 첨가하고, 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 진한 HCl (2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 추가로 20시간 동안 교반하였다. 톨루엔 (100 mL)을 첨가하고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 THF (200 mL) 중에 용해시키고, 톨루엔 (100 mL)을 첨가하고, 용매를 진공하에 제거하여 (2회), 부제 화합물을 회백색 고체 (4.5 g)로서 수득하였다.

iii) 벤질 [2-(시클로헥실아미노)에틸][2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]카르바메이트

단계 ii)의 생성물 (0.5 g)을 THF (10 mL)와 물 (1 mL)의 혼합물 중 시클로헥실아민 (0.23 g, 0.33 mL)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드 (0.17 g)에 이어서 아세트산 (0.24 g, 0.23 mL)을 첨가하고, 반응물을 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 탄산수소나트륨으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (무수 Na₂SO₄), 여과하고, 증발시켜, 부제 화합물을 밝은 갈색 검 (0.6 g)으로서 수득하였다.

iv) 벤질 {2-[아크릴로일(시클로헥실)아미노]에틸}[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]카르바메이트

단계 iii)에서 제조한 아민 (1.57 g)을 디클로로메탄 (20 mL) 중에 용해시키고, 클로로트리메틸실란 (1.29 mL) 및 트리에틸아민 (1.91 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 아크릴로일 클로라이드 (336 ul)를 첨가하고, 혼합물을 교반하고, 실온으로 3시간 동안 가온하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨에 이어서 물로 세척하고, 건조시키고 (무수 Na₂SO₄), 여과하고, 증발시켰다. 용리액으로서 이소헥산 중 에틸 아세테이트 (30, 50, 70, 100％)를 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제함으로써, 부제 화합물을 (1.1 g)을 수득하였다.

v) N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 비스-트리플루오로아세트산 염

단계 iv)에서 제조한 아크릴아미드 (에탄올 중 0.33 M 용액 1 mL)를 3-플루오로페네틸아민 (97 ul)으로 처리하고, 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 생성물을 SCX 크로마토그래피 (메탄올 중 1 N 암모니아로 용출)로 정제하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄 (0.5 mL) 중에 재용해시켰다. 상기 용액을 얼음/물 배스에서 냉각시키고, 아세트산 중 브롬화수소 30 중량％ 용액 (0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 톨루엔 (1 mL)을 반응물에 첨가하고, 모든 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 톨루엔에 이어서 에탄올 (2회)과 함께 공비시킨 후, 역상 HPLC (수성 TFA 중 5→40％ 아세토니트릴)로 정제하였다. 잔류물을 디에틸 에테르 중에서 분쇄하여, 표제 화합물을 백색 고체 (30 mg)로서 수득하였다.

제조 2

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염

i) tert-부틸 N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니네이트

tert-부틸 아크릴레이트 (5.61 mL)를 에탄올 (200 mL) 중 3-플루오로페네틸아민 (5.0 mL)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하여, 부제 화합물을 오일 (9.6 g)로서 수득하였다.

ii) tert-부틸 N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니네이트

약 5℃에서, 벤질 클로로포르메이트 (5.57 mL)를 디클로로메탄 (100 mL) 중 단계 i)에서 제조한 tert-부틸 N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니네이트 (9.5 g) 및 트리에틸아민 (5.94 mL)의 용액에 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응물이 실온에 도달하게 하고, 밤새 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 용리액으로서 이소헥산 중 10％ 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제함으로써, 부제 화합물을 오일 (11.5 g)로서 수득하였다.

iii) N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라닌

트리플루오로아세트산 (50 mL)을 디클로로메탄 (50 mL) 중 단계 ii)에서 제조한 tert-부틸 에스테르 (11.5 g)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 오일을 톨루엔 (2회)과 함께 공비시켜, 부제 화합물을 점성 오일 (10.5 g)로서 수득하였다.

iv) 벤질 {3-[시클로헥실(2,2-디메톡시에틸)아미노]-3-옥소프로필}[2-(3-플루오로페닐)에틸]카르바메이트

질소하에 교반하면서 디클로로메탄 (50 mL) 중에 용해된 단계 iii)에서 제조한 N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라닌 (5 g)의 용액에 디메틸포름아미드 (2 방울)에 이어서 옥살릴 클로라이드 (1.64 mL)를 10분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 진공하에 농축시키고, 디클로로메탄 (25 mL) 중에 재용해시켰다. 0℃에서 질소하에, 용액을 디클로로메탄 (25 mL) 중 N-(2,2-디메톡시에틸)시클로헥산아민 (2.71 g) 및 트리에틸아민 (3.0 mL)의 미리형성된 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 물 (25 mL)을 첨가하고, 층을 분리하였다. 유기층을 2 M 염산, 포화 수성 중탄산나트륨 및 염수로 세척한 후, 건조시키고 (무수 MgSO₄), 여과하고, 진공하에 농축시켜, 부제 화합물을 오일 (7.45 g)로서 수득하였다.

v) 벤질 {3-[시클로헥실(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)아미노]-3-옥소프로필}[2-(3-플루오로페닐)에틸]카르바메이트

파라-톨루엔술폰산 일수화물 (10.4 g)을 디클로로메탄 (94 mL) 중 단계 i)로부터의 생성물 (9.4 g)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하고, 물 (100 mL) 중 포화 수성 중탄산나트륨 (4.6 g)의 용액을 첨가하였다. 층을 분리하고, 유기상을 포화 수성 중탄산나트륨 (50 mL) 및 물 (50 mL)로 세척한 후, 건조시키고 (무수 MgSO₄), 여과하고, 농축시켰다. 생성된 오일을 N-메틸피롤리디논 (30 mL) 중에 재용해시키고, N-메틸피롤리디논 (30 mL) 및 물 (3 mL) 중 7-(2-아미노에틸)-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 히드로브로마이드 (6.0 g) 및 트리에틸아민 (2.9 mL)의 용액에 첨가하였다. 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (6.0 g)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 후, 물 (600 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (150 mL씩 2회)로 추출하였다. 유기층을 수성 염화나트륨 (100 mL)으로 세척하였다. 유기층으로부터 고체가 침전되었고, 이를 부분적으로 진공하에 농축시키고, 침전물을 여과에 의해 수집하고, 에틸 아세테이트로 세척하여, 부제 화합물을 무색 고체 (7.7 g)로서 수득하였다.

vi) N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염

실온에서 교반된 아세트산 (3 mL) 중 단계 v)로부터의 생성물 (1 g)의 용액에 아세트산 중 브롬화수소산 (33％, 3 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 80분 동안 교반한 후, tert-부틸 메틸 에테르 (8 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 후, 여과하고, tert-부틸 메틸 에테르 (8 mL)로 세척하였다. 뜨거운 에탄올 (20 mL)로부터의 재결정화에 의해 정제하여, 표제 화합물 (0.82 g)을 고체로서 수득하였다.

제조 2 (형태 C)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 C)

주위 온도의 물 배스에서 아세트산 중 브롬화수소의 용액 (33％, 12.9 mL)을 아세트산 (19.4 mL) 중 제조 2의 단계 v)로부터의 생성물 (3.23 g)의 교반용액에 첨가하였다. 혼합물을 2.5시간 동안 교반한 후, 디에틸 에테르와 에틸 아세테이트의 1:1 혼합물 (230 mL)로 서서히 희석하자 침전이 일어났다. 혼합물을 90분 동안 격렬하게 교반하여, 미세 침전물을 수득하였고, 이를 여과에 의해 단리하였다. 잔류물을 디에틸 에테르와 에틸 아세테이트의 1:1 혼합물로 세척한 후, 공기 스트림으로 건조시키고, 이어서 진공하에 1시간 동안 건조시켜, 복숭아색 고체 (3.09 g)를 수득하였다.

복숭아색 고체 (3.09 g)를 약간 초음파 처리한 에탄올 (75 mL) 중에 용해시키고, 용액을 주위 온도에서 2시간 동안 방치하자 백색 고체의 침전이 일어났다. 혼합물을 18시간 동안 교반하고, 백색 고체를 여과에 의해 단리하였다. 잔류물을 에탄올 (40 mL)로 세척한 후, 에어 스트림으로 건조시키고, 이어서 진공하에 4시간 동안 건조시켜, 표제 화합물 (2.25 g)을 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 C)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 1에 나타냈다.

<도 1>

제조 2 (형태 D)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 D)

제조 2 (형태 C)의 샘플 (10 mg)을 아세토니트릴 (1.5 mL)과 물 (0.05 mL)의 뜨거운 혼합물 중에 용해시켰다. 용액을 주위 온도로 냉각시키자 백색 고체의 침전이 일어났다. 상층액을 경사분리하고, 잔류물을 아세토니트릴로 세척하고, 진공하에 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 D)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 2에 나타냈다.

<도 2>

제조 2 (형태 E)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 E)

제조 2 (형태 C)의 샘플 (10 mg)을 물 (0.5 mL) 중에 부분적으로 용해시켰다. 현탁액을 실온에서 6일 동안 연속적으로 교반하였다. 원심분리를 이용하여 고체를 분리하고, 후속으로 물질을 공기스트림으로 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 E)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 3에 나타냈다.

<도 3>

제조 2 (형태 F)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 F)

제조 2 (형태 C)의 샘플 (10 mg)을 1,4-디옥산 (0.5 mL) 중에 부분적으로 용해시켰다. 현탁액을 실온에서 6일 동안 연속적으로 교반하였다. 원심분리를 이용하여 고체를 분리하고, 후속으로 물질을 공기 스트림으로 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 F)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 4에 나타냈다.

<도 4>

제조 2 (형태 G)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 G)

제조 2 (형태 C)의 샘플 (10 mg)을 아세톤 (1 mL)과 물 (0.05 mL)의 뜨거운 혼합물 중에 용해시켰다. 용액을 주위 온도로 냉각시키고, 1주일 동안 방치하자 백색 고체의 침전이 일어났다. 상층액을 경사분리하고, 잔류물을 아세톤으로 세척하고, 진공하에 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 G)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 5에 나타냈다.

<도 5>

제조 2 (형태 H)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 H)

i) N-(2,2-디메톡시에틸)시클로헥산아민

가열된 (130℃) 시클로헥실아민 (82 g)에 클로로아세트알데히드 디메틸아세탈 (40 g)을 30분에 걸쳐 첨가한 후, 시클로헥실아민 (3 g)으로 세정하였다. 혼합물을 120 내지 138℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 20％ 수산화나트륨 (93.7 g)으로 켄칭하고, 분리하고, 120 - 145℃의 적용 온도 및 15 - 21 mbar의 진공 (100 내지 120℃의 헤드 온도 제공)에서 유기층을 진공 증류시켜, 부제 화합물 (54.2 g)을 수득하였다.

IMS (131.5 kg) 중 3-(플루오로페닐)에틸아민 (45.0 Kg)의 뜨거운 (환류 74 내지 75℃) 용액에 tert-부틸 아크릴레이트 (43.7 Kg)를 45분에 걸쳐 첨가한 후, IMS 세정제 (17.0 Kg)을 첨가하고, 생성된 용액을 환류하에 2시간 45분 동안 교반하였다. 반응물을 -5℃로 냉각시켰다. 트리에틸아민 (39.5 Kg)을 90분에 걸쳐 첨가하고 (온화한 발열 유발), 이어서 IMS 세정제 (3 Kg)를 첨가하였다. 벤질 클로로포르메이트 (57 Kg)를 -5.9℃ 내지 -1.9℃에서 16시간에 걸쳐 첨가한 후, IMS 세정제 (3 Kg)를 첨가하였다. 반응물을 -5 내지 0℃에서 1시간 동안 유지하였다. 반응물을 20 내지 25℃로 가온하였다. 2-메틸테트라히드로푸란 (186 Kg), 물 (131 Kg) 및 5％ 시트르산 용액 (43.5 Kg)을 첨가하고, 분리하였다. 수성층을 2-메틸테트라히드로푸란 (112 Kg)으로 역추출하였다. 유기층을 물 (175 Kg), 5％ 시트르산 용액 (44 Kg) 및 20％ 염화나트륨 용액 (66 Kg)의 조합물로 세척하였다. 합한 유기층을 20％ 염화나트륨 용액 (131 Kg)으로 세척하였다. 유기층을 23.1 - 54.5℃의 내부 온도에서 200 - 15 mbar에서 증류시켰다. 잔류물에 2-메틸테트라히드로푸란 (42 kg)을 넣고, 상기 용액을 50.1 - 55.5℃의 내부 온도에서 100 - 15 mbar에서 진공하에 증류시켰다. 상기 잔류물에 2-메틸테트라히드로푸란 (50 kg)을 넣었다. 최종 진공 증류를 50.1 - 52.1℃의 내부 온도에서 200 - 15 mbar에서 수행하였다. 이와 같이 하여, 조 오일 136 kg을 수득하였다 (GC 분석에 의해 에탄올 함량이 0.05％인 것으로 나타남). 오일을 다음 단계에 바로 사용하기 위해 2-메틸테트라히드로푸란 (576 kg) 중에 용해시켰다.

GC 방법: 제브론 (Zebron) ZB5 30 m이 장착된 퍼킨 엘머 (Perkin Elmer). 주입기: 275℃. 검출기: 300℃. 캐리어: 질소 (10 psi). 방법: 50℃ (5분) → 280℃까지 (10℃/분의 증분).

2-메틸테트라히드로푸란 (576 kg) 중 제조 2 (형태 H) 단계 ii)로부터의 용액 (136 kg)에 85％ 인산 (197 kg)을 9.9 내지 25.3℃에서 1시간에 걸쳐 첨가한 후, 2-메틸테트라히드로푸란의 라인 세정제 (10 kg)를 첨가하였다. 반응물을 환류하에 76시간 동안 가열하였다. 반응물을 <25℃로 냉각시키고, 16.1 내지 27.6℃에서 4분에 걸쳐 32％ 수산화나트륨 (307 kg)으로 켄칭하였다. 2-메틸테트라히드로푸란 (167 kg)에 이어서 물 (547 kg)을 넣었다. 32％ 수산화나트륨 (90 kg)을 첨가하여 pH를 6.6 내지 6.8로 조정하고, 하부의 수성층을 폐기하였다. 이어서, 유기층을 TBME (506 kg)에 이어서 1 M 수산화나트륨 용액 (763.5 kg)으로 희석하였다. 하부의 수성층을 제거하고, 30℃에서 유지하여 모든 고체를 용해시켰다. 수성층을 2-메틸 테트라히드로푸란 (750 kg) 및 36％ 염산 (175 kg)으로 세척하였다. 분리한 후, 유기층을 2-메틸테트라히드로푸란 (583 kg)으로 추가로 희석하고, 진공 증류를 위해 용기를 내부 온도 28.3 - 39.9℃의 340 - 250 mbar로 만들었다. 상기 과정에서 2-메틸테트라히드로푸란 1198 ℓ가 제거되었다. 혼합물을 <40℃로 냉각시키고, 신선한 2-메틸테트라히드로푸란 (1000 kg)으로 재희석한 후, 27.0 - 43.5℃의 내부 온도에서 300 - 250 mbar하에 재증류시켰다. 상기 시점에서, 유기 혼합물에 대해 0.01 중량％의 물의 칼-피셔 (Karl-Fischer) 분석 결과를 얻었다. 혼합물을 25 내지 30℃로 냉각시키고, 생성물의 유기 용액 (2-메틸테트라히드로푸란 345.5 kg 중 80.5 kg)을 표제 화합물의 공지된 표준에 대해 HPLC 분석으로 확인하고, 후속 단계에 사용하였다.

KF 방법: 메틀러 톨레도 (Mettler Toledo) 모델 DL31; 히드라날 콤포짓 5K (Hydranal Composite 5K) 및 히드라날 메탄올 드라이 (Hydranal Methanol Dry)

HPLC 방법 세부 사항:

컬럼: 워터스 아틀란티스 (Waters Atlantis) T3; 크기: 50mm x 3mm x 3μm. 이동상 "A": 물 중 0.03％ TFA; 이동상 "B": 아세토니트릴 중 0.03％ TFA; 유속: 1.5 ml/분; 용리 구배:

검출: UV; 검출기 파장: 220 nm, 밴드폭 7nm, 기준 360 nm, 밴드폭 100 nm; 주입 부피: 3 ㎕; 컬럼 온도: 40℃.

N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라닌의 체류 시간: 14.44분.

2-메틸테트라히드로푸란 (345.5 kg; 용액의 KF = 0.04％) 중 제조 2 (형태 H) 단계 iii)의 용액 (CBz 산) (80.5 Kg)에 제조 2 (형태 H) 단계 i)로부터의 물질 (47 Kg)을 40분에 걸쳐 넣고 (13.8℃ → 16.3℃의 발열이 일어남), 이어서 2-메틸테트라히드로푸란 세정제 (10 Kg)를 넣었다. 트리에틸아민 (79.5 Kg)을 1시간 10분에 걸쳐 넣은 후, 2-메틸테트라히드로푸란 세정제 (5 Kg)를 넣었다. 반응 내용물을 10℃로 냉각시켰다. 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스포리난-2,4,6-트리옥시드 (T3P) (260 Kg)를 6시간 20분에 걸쳐 넣고 (11.0℃ → 19.0℃의 발열이 일어남), 이어서 2-메틸테트라히드로푸란 세정제 (21 Kg)를 넣었다. 반응물을 19℃에서 1시간 동안 유지하고, 3시간 5분에 걸쳐 0.5 M 중탄산나트륨 용액 (619 Kg)으로 켄칭하고 (20.1℃ → 26.1℃의 발열이 일어남), 분리하였다. 유기층을 20％ 염화나트륨 (458 Kg) 및 20％ 염화나트륨 (451 Kg)으로 세척하였다. 유기층을 진공하에 16.1 - 37.5℃의 내부 온도로 500 - 150 mbar에서 농축시켜, 부제 화합물의 2-메틸테트라히드로푸란 용액 [2-메틸테트라히드로푸란 73.5 Kg 중 119.5 Kg, 즉 61.9 중량％ 용액 (CDCl₃ 중에서 브루커 DPX 300 분광계를 이용하여 1,2-디플루오로벤젠에 대한 ¹⁹F NMR 분석에 의해 측정)]을 수득하였다.

파트 a) 500 mL 용기에 파라-톨루엔술폰산 일수화물 (76.23 g)을 넣고, 테트라히드로푸란 (103.13 mL)을 첨가하였다. 벤질 {3-[시클로헥실(2,2-디메톡시에틸)아미노]-3-옥소프로필}[2-(3-플루오로페닐)에틸]카르바메이트 (51.56 g, 2-메틸테트라히드로푸란 중 61.9 중량％ 용액으로서) (제조 2 (형태 H) 단계 iv에서 수득한 바와 같음)를 첨가하였다. 테트라히드로푸란의 라인 세척제 (154.69 mL)를 첨가하고, 용액을 20℃로 교반하였다. 1시간 후, 반응물을 <5℃로 냉각시키고, 이어서 내부 온도를 <15℃로 유지하면서 물 (469.2 mL) 중 염화나트륨 (103.13 g) 및 10 M 수성 수산화나트륨 (50.3 mL)의 상기 제조한 <5℃ 용액에 첨가하였다. 테트라히드로푸란의 라인 세척제 (25.8 mL)를 첨가한 후, 혼합물을 20℃로 가온하였다. 수성상을 폐기하였다. 유기상을 깨끗한 용기로 옮기고, 테트라히드로푸란 (25.8 mL) 라인 세정제를 도포하였다. 이 용액에 물 (12.38 mL)을 첨가하고, 용액을 파트 b)에 사용하기 위해 유지하였다.

파트 b) 7-(2-아미노에틸)-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 히드로브로마이드 (32.09 g), 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (44.71 g)에 테트라히드로푸란 (206.25 mL), N-메틸피롤리돈 (46.41 mL) 및 트리에틸아민 (18.05 mL)을 첨가하였다. 슬러리를 10℃로 냉각시켰다. 파트 a)로부터 유지된 유기상을 32분에 걸쳐 첨가한 후, 테트라히드로푸란의 라인 세척제 (25.8 mL)를 첨가하였다. 2시간 후, 혼합물을 20℃로 가온하였다. 30분 후, 물 (232.03 mL) 및 에틸 아세테이트 (232.03 mL)를 첨가하였다. 수성상을 제거하고, 유기상을 10 중량％ 수성 염화나트륨 (232.03 mL)으로 세척하였다. 수성상을 제거하였다. 유기상을 진공하에 원래 부피의 약 25％로 증류시켰다. 에틸 아세테이트 (232.03 mL)를 첨가하고, 혼합물을 20℃로 냉각시켰다. 혼합물을 기준 물질로 시딩하고, 생성된 현탁액을 19시간 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 케이크를 에틸 아세테이트 (232.03 mL)로 세척하고, 진공하에 건조시켜, 부제 화합물 (37.521 g)을 수득하였다.

vi) N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 H)

제조 2 (형태 H) 단계 v)로부터의 물질의 일부 (10.05 g) 및 아세트산 (35.18 mL)을 250 mL 재킷 용기에 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반하여, 균질 용액을 수득하였다. 아세트산 중 브롬화수소의 용액 (33 중량％; 30.15 mL)을 압력-균일 적하 깔대기 / 침지 파이프 어셈블리를 이용하여 15 내지 20분에 걸쳐 첨가하고, 반응물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 메틸 tert-부틸 에테르 (16.08 mL) 및 에탄올 (4.02 mL)을 예비-혼합하고, 약 2시간에 걸쳐 첨가하고, 벌크 반응 혼합물의 샘플 약 4 mL를 취하고, 제조 2 (형태 C)의 시드 1 mg을 넣었다. 이 혼합물을 약 3분 동안 진탕시켜 다량의 침전물을 수득하였다. 상기 현탁액을 벌크 혼합물에 다시 넣고, 이를 25℃에서 질소하에 밤새 교반하에 방치하였다. 이어서, 고체 생성물을 질소하에 여과에 의해 단리하고, 메틸 tert-부틸 에테르 (20.10 mL)로 세정하였다. 물질을 진공하에 55℃에서 오븐 건조시켜, 표제 화합물 (10.57 g)을 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염 (형태 H)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 6에 나타냈다.

<도 6>

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차

오버헤드 교반기, 콘덴서, 질소 주입구 및 온도 프로브가 장착된 500 mL 재킷 용기에 제조 2 (형태 H) (15 g)를 넣었다. 용기를 에탄올 (300 mL)로 채우고, 교반하였다. 재킷을 85℃로 가온하였고, 혼합물은 77.4℃에서 용액이 되었다. 혼합물을 환류하에 30분 동안 교반한 후, 재킷을 0.5℃/분으로 (즉 160분에 걸쳐) 85℃로부터 5℃로 냉각시켰다. 시딩없이 생성물이 결정화되었다. 물질을 5℃에서 2시간 동안 유지한 후, 물질을 여과에 의해 단리하였다. 여과는 70 mm 와트만 (Whatman) 유형 54 페이퍼 상에서 달성되었고, 60초가 걸렸다. 케이크는 11 mm 높이였다. 에탄올 (케이크 세척제) (45 mL) 세척을 적용하여 (70초가 걸림) 탈액시켰다. 물질을 수집하고, 50℃에서 65시간 동안 진공 오븐 내에서 건조시켰다. 이로써 표제 화합물 11.96 g을 수득하였다.

이는 XRPD에 의한 물질의 분석에서 형태 C인 것으로 나타났다.

제조 3 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염 (형태 A)

제조 2로부터의 디히드로브로마이드의 일부를 테트라히드로푸란 및 물 (5:1) 중에 현탁시키고, 물 중 포화 중탄산나트륨 (3 mol 당량) 수용액으로 처리하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 테트라히드로푸란을 진공하에 제거하고, 염화나트륨을 첨가하고, 혼합물을 클로로포름으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (무수 Na₂SO₄), 여과하고, 아세토니트릴 (40 mL) 중 D-만델산 (3 mol 당량)의 용액으로 처리하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 아세토니트릴로 세척하고, 건조시켜, 표제 화합물을 무색 고체로서 수득하였다.

DSC로 측정한 제조 3 (형태 A)의 융점은 156℃ (개시, ±2℃)인 것으로 밝혀졌다. TGA에 의한 용융 이전에 관측된 중량 손실은 무시가능하였다. GVS 측정에서 80％ RH에서의 1％ (±0.2％) 중량 증가 (％w/w)가 나타났다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 7에 나타냈다.

<도 7>

제조 3 (형태 A) - 별법의 절차

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차의 일부 (30.00 g) 및 2-MeTHF (120 mL)를 재킷 용기에 넣고, 에탄올 (30 mL)을 첨가하고, 생성된 슬러리를 20℃에서 교반하였다. 별도의 용기에서, 탄산칼륨 (18.01 g)을 물 (240.00 mL) 중에 용해시키고, 용액을 20℃에서 평형화시킨 후, 내부 온도를 < 25℃로 유지하면서 2-메틸테트라히드로푸란/에탄올 슬러리에 첨가하였다. 교반하면서 온도를 20℃에서 평형화시킨 후, 상을 가라앉혔다. 하부의 수성 상을 제거하고, 폐기하고, 미세 필터를 이용하여 유기상을 여과하고, 에탄올 (15 mL)을 사용하여 (다시 미세 필터를 이용) 라인을 세정하였다. (R)-(-)-만델산 (13.88 g)을 에탄올 (90 mL) 중에 용해시키고, 미세 필터를 통해 용액을 유리 염기를 함유하는 용기에 넣었다. 에탄올 (11.87 g)을 사용하여 미세 필터를 통해 라인을 세정하고 (용기로), 추가의 에탄올 (270 mL)을 미세 필터를 통해 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 기준 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염 (30 mg)으로 시딩한 후, 0℃로 냉각시켰다. 상기 온도에서 밤새 교반한 후, 혼합물을 여과하고, 고체를 에탄올 60 mL로 세척하고, 미세 필터를 이용하여 예비-여과하였다. 케이크를 건조하게 인취하고, 생성된 물질을 40℃에서 진공하에 일정한 중량으로 건조시켜, 표제 화합물 (27.917 g)을 수득하였다.

제조 4 (형태 A)

(R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (형태 A)

중간체 A (이성질체 1 ＆ 2): 2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피온산 메틸 에스테르

아세토니트릴 (30 mL) 중 메틸 2-브로모-2-페닐프로파노에이트 (1 g)의 용액을 피페리딘 (1 mL)으로 처리하였다. 용액을 교반하고, 환류하에 3시간 동안 가열한 후, 농축 건조시켰다. 잔류물을, 에테르/이소헥산 (3:7)을 사용하여 실리카겔 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피로 정제함으로써, 라세미체 부제 화합물을 무색 오일 (0.8 g)로서 수득하였다. 거울상이성질체의 혼합물을, 키라셀 (chiracel) OJ-H 컬럼을 이용하여 키랄 hplc (80％ 이소헥산/에탄올의 등용매 시스템을 이용)로 분리함으로써 2개의 거울상이성질체를 수득하였고, 이를 용출 순서대로 이성질체 1 및 이성질체 2로 정의하였다.

2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피온산 메틸 에스테르 (이성질체 1)

키랄 HPLC 80:20 이소헥산 : 에탄올 (등용매). 키라셀 OJ-H 4.6mm x 50mm

체류 시간 1.09분

2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피온산 메틸 에스테르 (이성질체 2)

체류 시간 2.52분

중간체 B: 2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피온산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일) 에스테르 (이성질체 1)

무수 톨루엔 (20 mL) 중 2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피온산 메틸 에스테르 (중간체 A, 이성질체 1) (0.9 g), (R)-퀴누클리딘-3-올 (1.157 g) 및 수소화나트륨 (광유 중 60％, 0.335 g)의 혼합물을 120℃에서 질소 분위기하에 8시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고, 디에틸 에테르 (150 mL씩 2회)로 추출하였다. 합한 추출물을 건조시키고 (MgSO₄), 농축시켜, 오일을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/메탄올 (9:1)로 용출)로 정제하여, 표제 화합물 (0.500 g)을 수득하였다.

아세토니트릴 (25 mL) 중 2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피온산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일) 에스테르 (중간체 B, 이성질체 1) (3 g)를 1-(2-브로모에틸)-4-플루오로벤젠 (2.384 g)으로 처리하고, 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고, 잔류물을 실리카겔 상에서 (디클로로메탄 중 10％ 메탄올로 용출) 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축 건조시키고, 포말 잔류물을 아세토니트릴 (20 mL) 중에 재용해시켰다. 용액에 디에틸 에테르 (40 mL)를 첨가하고, 생성된 고체를 여과에 의해 수집하였다. 고체를 뜨거운 아세톤 (75 mL) 중에 용해시킨 후, 밤새 냉각시켰다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 50℃에서 건조시켜, 표제 화합물 (3.70 g)을 수득하였다.

제조 1에 대해 얻은 단일 결정 X-선 회절 데이터는 구조가 (R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드임을 입증하였다. 데이터 세트는 k-축 측각기 및 CCD 영역 검출기 (Nonius, 1998)가 장착된 카파CCD (KappaCCD) 단일-결정 X-선 회절계 상에서 그래파이트 단색화 MoK(a) 방사를 이용하여 실온에서 수집하였다. 미처리 회절 데이터는 디지털 이미지 프레임으로부터의 정보를 오차 평가와 함께 h, k, l 지표, 배경, 및 회절 스팟의 Lp 보정된 강도를 포함하는 파일로 전환시키도록 덴조 (Denzo)-SMN 프로그램 패키지 (Otwinowski ＆ Minor, 1998) 내에서 가공하였다.

제조 4에 대해 측정된 결정 구조를 기초로, 사용된 중간체 A - 이성질체 1의 절대 배위는 (S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피온산 메틸 에스테르인 것으로 지정하였다.

DSC에 의해 측정된 제조 4 브로마이드 형태 A의 융점은 171℃ (제1 개시) 및 183℃ (제2 개시) (±2℃)에서 발생하는 이중 흡열 사건으로 나타났다. TGA에 의한 용융 이전에 관측된 중량 손실은 무시가능하였다. GVS 측정에서 80％ RH (±0.2％)에서의 0.1％ 중량 증가 (％w/w)가 나타났다.

(R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 8에 나타냈다.

<도 8>

제조 4 형태 C: (R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (형태 C)

(R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (상기) (1 g)을 메탄올 (5 mL) 중에 용해시키고, 혼합물을 60℃로 가온하였다. 혼합물을 40℃로 냉각시키자 고체가 형성되기 시작하였고, 이어서 혼합물을 50℃로 재가열하였다. 10 mL 분취량의 메틸 아세테이트를 3회 혼합물에 첨가하고, 이어서 실온으로 서서히 냉각시키고, 18시간 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집한 후, 감압하에 50℃에서 건조시켜, 표제 화합물 (50 mg)을 수득하였다.

DSC에 의해 측정된 제조 4 브로마이드 형태 C의 융점은 184℃ (개시) (±2℃)인 것으로 나타났다. TGA에 의한 용융 이전에 관측된 중량 손실은 4％였다. GVS 측정에서 80％ RH (±0.2％)에서의 4％ 중량 증가 (％w/w)가 나타났다.

(R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (형태 C)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 9에 나타냈다.

<도 9>

제조 5

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드

제조 2로부터의 생성물 (820 mg)을 수성 THF 중에 용해시키고, 용액을 포화 중탄산나트륨 수용액으로 염기성화시키고, 에틸 아세테이트 (3회)로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켜, 표제 화합물 (600 mg)을 수득하였다.

제조 5 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 (형태 A)

메탄올 (10 mL) 중 제조 5로부터의 물질 (200 mg)의 용액을 밤새 방치하였다. 생성된 고체를 여과에 의해 단리하고, 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 10에 나타냈다.

<도 10>

제조 6 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디(나프탈렌-2-술폰산) 염 (형태 A)

메탄올 (1 mL) 중 제조 5로부터의 물질 (20 mg)의 용액을 메탄올 (1 mL) 중 나프탈렌-2-술폰산 (70％ w/w, 22.5 mg)의 용액과 함께 완전히 혼합하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 IPA 중에 24시간 동안 슬러리화시켰다. 생성된 고체를 여과에 의해 단리하고, 건조시켜, 표제 화합물 (21 mg)을 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디(나프탈렌-2-술폰산) 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 11에 나타냈다.

<도 11>

제조 6 (형태 B)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디(나프탈렌-2-술폰산) 염 (형태 B)

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차로부터의 디히드로브로마이드의 일부 (2 g)를 2-메틸테트라히드로푸란 (8 mL) 및 에탄올 (2 mL) 중에 현탁시켰다. 23℃에서 상기 현탁액에 물 (16 mL) 중 탄산칼륨 (1.2 g)의 예비혼합 용액을 넣었다. 23℃에서 교반하자 투명한 2상 혼합물이 생성되었고, 90분 후에 이를 분리 깔대기에 붓고, 하부의 수성층을 제거하였다. 라인 세척제로서 2-메틸테트라히드로푸란 (0.7 mL)을 깨끗한 용기로 첨가하여 유기상을 총 부피 10 mL로 만들었다. 이어서, 교반 유기층에 2-나프탈렌술폰산 수화물 (1.35 g)을 넣어, 균질 교반 용액을 수득하였다. 혼합물을 에탄올 (10 mL)로 희석하였고, 이는 고체를 제공하지 않았다. 상기 용액을 이소-헥산/디에틸 에테르의 1:1 교반 용액 (40 mL)에 첨가하자, 백색 고체가 생성되었고, 이를 수집하고, 40℃에의 진공 오븐에서 2.41 g의 일정한 중량으로 건조시켰다.

고체를 에탄올 (20 상대 부피, 즉 20 mL/g) 및 물 (1.4 상대 부피, 즉 1.4 mL/g)의 혼합물로부터 재경정화시켜, 형태 B의 물질을 수득할 수 있었다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디(나프탈렌-2-술폰산) 염 (형태 B)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 12에 나타냈다.

<도 12>

제조 7 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히푸르산 염 (형태 A)

메탄올 (1 mL) 중 제조 5로부터의 물질 (20 mg)의 용액을 메탄올 (1 mL) 중 히푸르산 (13.5 mg)의 용액과 완전히 혼합하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 IPA 중에 24시간 동안 슬러리화시켰다. 생성된 고체를 여과에 의해 단리하고, 건조시켜, 표제 화합물 (2 mg)을 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히푸르산 염의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 13에 나타냈다.

<도 13>

제조 8 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 황산 염 (형태 A)

에탄올 (0.5 mL) 중 제조 5와 유사한 방법으로 제조한 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 (10 mg)의 용액을 에탄올 (1 mL) 중 진한 황산 (d=1.84 g mL^-1, 1 ㎕)의 혼합물과 완전히 혼합하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 아세토니트릴 중에서 분쇄하고, 고체를 여과에 의해 단리하고, 건조시켜, 표제 화합물 (12 mg)을 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 황산 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 14에 나타냈다.

<도 14>

제조 9 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 나프탈렌-1,5-디술폰산 염 (형태 A)

에탄올 (1 mL) 중 제조 5와 유사한 방법으로 제조한 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 (25 mg)의 용액을 에탄올 (1 mL) 중 나프탈렌-1,5-디술폰산 (17 mg)의 용액과 완전히 혼합하여 침전을 일으켰다. 혼합물을 밤새 교반하고, 고체를 여과에 의해 단리하고, 에탄올로 세척하고, 건조시켜, 표제 화합물 (34 mg)을 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 나프탈렌-1,5-디술폰산 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 15에 나타냈다.

<도 15>

제조 9 (형태 B)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 나프탈렌-1,5-디술폰산 염 (형태 B)

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차로부터의 디히드로브로마이드의 일부 (2 g)를 2-메틸테트라히드로푸란 (8 mL) 및 에탄올 (2 mL) 중에 현탁시켰다. 23℃에서 상기 현탁액에 물 (16 mL) 중 탄산칼륨 (1.2 g)의 예비혼합된 용액을 넣었다. 23℃에서 교반하자 투명한 2상 혼합물이 생성되었고, 90분 후에 이를 분리 깔대기에 붓고, 하부의 수성층을 제거하였다. 라인 세척제로서 2-메틸테트라히드로푸란 (0.7 mL)을 깨끗한 용기로 첨가하여 유기상을 총 부피 10 mL로 만들었다. 이어서, 교반 유기층에 나프탈렌-1,5-디술폰산 사수화물 (1.06 g)을 넣었고, 이를 교반하자 용액이 생성되었다. 20분 후, 에탄올 (10 mL)을 용액에 넣고, 혼합물을 교반하자 60분 이내에 백색 침전물이 생성되었다. 60시간 동안 교반한 후, 물질을 여과를 통해 단리하였다. 백색 고체를 에탄올 (10 mL)로 세척하고, 40℃의 진공 오븐에서 18시간 후 2.17 g의 일정한 중량으로 건조되었다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 나프탈렌-1,5-디술폰산 염 (형태 B)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 16에 나타냈다.

<도 16>

제조 10 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 A)

1:1 테트라히드로푸란/아세토니트릴 (6 mL) 중 제조 5 (150 mg)의 용액을 아세토니트릴 (3 mL) 중 벤젠술폰산 (90 mg)의 용액과 혼합하고, 마개로 막은 플라스크에서 혼합물을 밤새 방치하였다. 이어서, 혼합물을 진공하에 농축시키고, 잔류물을 아세토니트릴 (3회)과 함께 공비시켰다. 이어서, 추가의 아세토니트릴을 잔류물에 첨가하고, 때때로 스크래칭하면서 혼합물을 3시간 동안 방치하여 결정화를 촉진하자, 고체의 침전이 일어났다. 생성된 혼합물을 18시간 동안 교반하고, 고체를 여과에 의해 단리하고, 건조시켜, 표제 화합물 (190 mg)을 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 17에 나타냈다.

<도 17>

제조 10 (형태 B)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 B)

제조 10 (형태 A)의 샘플 (10 mg)을 부분적으로 물 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 현탁액을 실온에서 7일 동안 연속적으로 교반하였다. 원심분리를 이용하여 고체를 분리하고, 후속으로 물질을 공기 스트림에 의해 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 B)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 18에 나타냈다.

<도 18>

제조 10 (형태 C)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 C)

제조 10 (형태 A)의 샘플 (10 mg)을 부분적으로 에탄올 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 현탁액을 실온에서 7일 동안 연속적으로 교반하였다. 원심분리를 이용하여 고체를 분리하고, 후속으로 물질을 공기 스트림에 의해 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 C)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 19에 나타냈다.

<도 19>

제조 10 (형태 D)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 D)

제조 10 (형태 A)의 샘플 (10 mg)을 부분적으로 이소-프로판올 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 현탁액을 실온에서 7일 동안 연속적으로 교반하였다. 원심분리를 이용하여 고체를 분리하고, 후속으로 물질을 공기 스트림에 의해 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 D)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 20에 나타냈다.

<도 20>

제조 10 (형태 E)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 E)

제조 10 (형태 A)의 샘플 (10 mg)을 부분적으로 아세톤 (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 현탁액을 실온에서 7일 동안 연속적으로 교반하였다. 원심분리를 이용하여 고체를 분리하고, 후속으로 물질을 공기 스트림에 의해 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 E)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 21에 나타냈다.

<도 21>

제조 10 (형태 F)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 F)

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차로부터의 디히드로브로마이드의 일부 (2 g)를 2-메틸테트라히드로푸란 (8 mL) 및 에탄올 (2 mL) 중에 현탁시켰다. 23℃에서 상기 현탁액에 물 (16 mL) 중 탄산칼륨 (1.2 g)의 예비혼합된 용액을 넣었다. 23℃에서 교반하자 투명한 2상 혼합물이 생성되었고, 90분 후에 이를 분리 깔대기에 붓고, 하부의 수성층을 제거하였다. 라인 세척제로서 2-메틸테트라히드로푸란 (0.7 mL)을 깨끗한 용기로 첨가하여 유기상을 총 부피 10 mL로 만들었다. 이어서, 교반 유기층에 벤젠술폰산 (934.9 mg)을 넣었고, 이를 교반하자 균질 용액이 생성되었다. 에탄올 (10 mL)을 넣은 후, 혼합물은 23℃에서 여전히 용액이었다. 23℃에서 밤새 교반한 후에, 또는 -10℃로 다시 냉각시킨 경우에도 고체는 관측되지 않았다. tert-부틸 메틸 에테르 (40 mL)를 함유하는 용기에 혼합물을 부었다. 이와 같이 하여, 검성 오일을 수득하였고, 이를 장기간 교반하자 백색 고체로 전환되었다. 이를 여과하고, 40℃의 진공 오븐에서 밤새 2.31 g의 일정한 중량으로 건조시켰다.

일부 (0.5 g)를 에탄올 (10 mL; 즉 20 상대 부피, 즉 20 mL/g) 중에서 성공적으로 재결정화시켰다. 이는 환류하에 용액을 생성하였고, 이를 냉각시키고, 여과하여, 표제 화합물 (0.45 g)을 고체로서 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디벤젠술폰산 염 (형태 F)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 22에 나타냈다.

<도 22>

제조 11 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 비스(4-메틸벤젠술폰산) 염 (형태 A)

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차로부터의 디히드로브로마이드의 일부 (2 g)를 2-메틸테트라히드로푸란 (8 mL) 및 에탄올 (2 mL) 중에 현탁시켰다. 23℃에서 상기 현탁액에 물 (16 mL) 중 탄산칼륨 (1.2 g)의 예비혼합된 용액을 넣었다. 23℃에서 교반하자 투명한 2상 혼합물이 생성되었고, 90분 후에 이를 분리 깔대기에 붓고, 하부의 수성층을 제거하였다. 라인 세척제로서 2-메틸테트라히드로푸란 (0.7 mL)을 깨끗한 용기로 첨가하여 유기상을 총 부피 10 mL로 만들었다. 이어서, 교반 유기층에 파라-톨루엔술폰산 일수화물 (1.1 g)을 넣었다. 이를 교반하자 교반이 어려운 점성의 침전물이 생성되었다. 혼합물을 에탄올 (10 mL)로 희석하고, 현탁액을 2시간 동안 교반한 후, 여과하고, 에탄올 (10 mL)로 세척하였다. 백색 고체를 단리하고, 40℃의 진공 오븐에서 밤새 2.2 g의 일정한 중량으로 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 비스(4-메틸벤젠술폰산) 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 23에 나타냈다.

<도 23>

제조 12 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디메탄술폰산 염 (형태 A)

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차로부터의 디히드로브로마이드의 일부 (2 g)를 2-메틸테트라히드로푸란 (8 mL) 및 에탄올 (2 mL) 중에 현탁시켰다. 23℃에서 상기 현탁액에 물 (16 mL) 중 탄산칼륨 (1.2 g)의 예비혼합된 용액을 넣었다. 23℃에서 교반하자 투명한 2상 혼합물이 생성되었고, 90분 후에 이를 분리 깔대기에 붓고, 하부의 수성층을 제거하였다. 라인 세척제로서 2-메틸테트라히드로푸란 (0.7 mL)을 깨끗한 용기로 첨가하여 유기상을 총 부피 10 mL로 만들었다. 이어서, 교반 유기층에 메탄술폰산 (380 ㎕)을 넣었다. 이와 같이 하여, 2상 용액을 수득하였고, 에탄올 (10 mL)을 첨가하여 이를 균질화시켰다. 교반 tert-부틸 메틸 에테르 (40 mL)를 함유하는 용기에 상기 용액을 넣었다. 이와 같이 하여, 검성 오일을 수득하였고, 이를 장기간 교반하자 백색 고체로 전환되었다. 고체를 여과에 의해 회수하고, tert-부틸 메틸 에테르 (20 mL)로 세척하였다. 40℃의 진공 오븐에서 일정한 중량으로 건조시킨 후, 백색 고체 0.956 g을 수득하였다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디메탄술폰산 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 24에 나타냈다.

<도 24>

제조 13 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디말레산 염 (형태 A)

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차로부터의 디히드로브로마이드의 일부 (2 g)를 2-메틸테트라히드로푸란 (8 mL) 및 에탄올 (2 mL) 중에 현탁시켰다. 23℃에서 상기 현탁액에 물 (16 mL) 중 탄산칼륨 (1.2 g)의 예비혼합된 용액을 넣었다. 23℃에서 교반하자 투명한 2상 혼합물이 생성되었고, 90분 후에 이를 분리 깔대기에 붓고, 하부의 수성층을 제거하였다. 라인 세척제로서 2-메틸테트라히드로푸란 (0.7 mL)을 깨끗한 용기로 첨가하여 유기상을 총 부피 10 mL로 만들었다. 이어서, 교반 유기층에 (Z)-2-부텐디온산 (686 mg)을 넣었고, 이를 교반하자 용액이 생성되었으며, 60분 이내에 백색 침전물이 생성되었다. 혼합물을 에탄올 (10 mL)로 희석하여, 보다 용이하게 교반가능한 현탁액을 수득하였다. 60시간 동안 교반한 후, 물질을 여과를 통해 단리하였다. 백색 고체를 에탄올 (10 mL)로 세척하고, 40℃의 진공 오븐에서 18시간 후에 2.03 g의 일정한 중량으로 건조되었다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디말레산 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 25에 나타냈다.

<도 25>

제조 14 (형태 A)

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디사카린 염 (형태 A)

제조 2 (형태 C) - 별법의 절차로부터의 디히드로브로마이드의 일부 (5 g) 및 사카린 나트륨 염 수화물 (3.31 g)을 에탄올 (75 mL) 및 물 (1 mL) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 환류하에 30분 동안 유지하였다. 이어서, 혼합물을 20℃로 냉각시켰다. 이와 같이 하여, 백색 현탁액이 생성되었고, 이를 66시간 동안 교반하였다. 고체를 여과를 통해 단리하고, 고체를 에탄올 (10 mL)로 세척하였다. 고체를 40℃의 진공 오븐에서 밤새 4.86 g의 일정한 중량으로 건조시켰다.

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디사카린 염 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 26에 나타냈다.

<도 26>

제조 15 (형태 A)

디시클로헥실암모늄 N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니노에이트 (형태 A)

250 mL 3구 플라스크 (오버헤드 교반기 및 온도계 장착)에 TBME (10 g 투입량의 N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라닌을 생성하기 위해 분석 용액 88.4 mL 필요) 중의 용액으로서의 제조 2 단계 iii)의 생성물의 일부 (10 g)를 넣었다. 용액을 21℃에서 교반하였다. 디시클로헥실아민 (5.76 mL)을 칭량하여 50 mL 원뿔형 플라스크에 넣고, TBME (40 mL)로 희석하였다. TBME 중 디시클로헥실아민의 용액을 적하 깔대기를 통해 약 10분에 걸쳐 첨가하였다. 용액의 약 50％를 첨가한 후, 용기의 벽에 결정화가 발생하기 시작하였다. 약 75％를 첨가한 후, 혼합물은 백색 결정질 물질을 함유하는 점성이었고, 내부 온도는 2℃ 만큼 (21 → 23℃) 증가하였다. 혼합물을 약 120분 동안 21℃에서 교반한 후, 여과하였다. 고체 잔류물을 폐기하고, 여과액을 250 mL 용기에 다시 넣어 (벽에 남아있는 소량의 고체를 세척해냄), 교반 현탁액을 수득하였고, 이를 0℃로 냉각시켰다. 냉각시킴에 따라, 더 많은 고체가 침전되었고, 약 20℃로 서서히 가온하면서 혼합물을 교반하에 밤새 방치하였다. 혼합물을 추가의 TBME 40 mL로 희석하고, 생성된 현탁액을 0℃로 재냉각시키고, 상기 온도에서 30분 동안 교반한 후, 여과하였다. 고체 잔류물을 TBME (20 mL씩 2회)로 세척하고, 축축한 고체를 33℃의 진공 오븐에서 2시간 동안 건조시켰다. 고체를 8.07 g의 일정한 중량까지 백색 고체로서 건조시켰다.

디시클로헥실암모늄 N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니노에이트 (형태 A)의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 27에 나타냈다.

<도 27>

제조 16

(R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트의 합성

제조 16a 및 16b에 대한 일반적인 실험 세부 사항

달리 언급하지 않는 한, 모든 반응은 비활성 분위기하에 수행하였고: 시약 및 용매는 상업적으로 수득하였고, 입수한 대로 사용하였으며; 시약 등급 용매를 사용하였다. NMR 스펙트럼은 400 MHz의 양성자 주파수에서 배리안 유니티 이노바 분광계 상에서 측정하였다. MS 스펙트럼은 애질런트 1100 MSD G1946D 분광계 상에서 측정하였다.

제조 16a

WO2008/075005 (실시예 44)에 기재된 바와 같이 제조한 (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 염 (0.6 g)을 디클로로메탄 (50 mL) 중에 용해시키고, 물 (100 mL) 중 나트륨 4-메틸벤젠술포네이트 (3.1 g)의 용액과 함께 (3개의 동일 부분 (약 33 mL)으로) 진탕하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 백색 포말을 뜨거운 아세토니트릴 (약 5 mL) 중에 용해시키고, 3일 동안 교반하면서 실온으로 냉각시켰다. 백색 고체가 형성되었고, 이를 여과에 의해 수집하고, 차가운 아세토니트릴 (약 2 mL)로 세척하고, 진공하에 60℃에서 2일 동안 건조시켜, 생성물 (0.490 g)을 수득하였다.

제조 16b

단계 a) 내지 g)에 사용한 분석용 HPLC 및 GC 조건

단계 a)를, 에이스 (Ace) 페닐 컬럼 (구배 상의 표준 수성/아세토니트릴/TFA 이동상, 230 nm에서의 UV 검출)을 이용하여 HPLC로 모니터링하였다.

단계 b), c) 및 d)를, DB-5 모세관 컬럼 (FID 검출 및 40℃ → 300℃의 표준 오븐 구배, 분할 주입)을 이용하여 GC로 모니터링하였다.

단계 e), f), g) 및 h)를, C18 상 (구배 상의 표준 수성/아세토니트릴/TFA 이동상, 220 nm에서의 UV 검출)을 이용하여 HPLC로 모니터링하였다.

단계 e) 용매 조성을, DB-624 모세관 컬럼 (FID 검출 및 40℃ → 250℃의 오븐 구배, 분할 주입)을 이용하여 GC로 모니터링하였다.

단계 e)를, HP-1 모세관 컬럼 (FID 검출 및 40℃ → 300℃의 오븐 구배, 분할 주입)을 이용하여 GC로 퀴누클리디놀의 수준에 대해 모니터링하였다.

a) 메틸 2-페닐프로파노에이트

반응 용기에서 (+/-)-2-페닐프로피온산 (20.5 g)을 메탄올 (62 mL) 중에 용해시켰다. 후속으로, 황산 (98％, 0.82 mL)에 이어서 라인 세정제로서의 메탄올 (20.5 mL)을 넣었다. 이어서, 반응물을 63℃ (±3℃)로 가열하고, 상기 온도에서 4시간 이하 동안 교반하였다. 반응물을 HPLC로 모니터링하여 메틸 2-페닐프로파노에이트 : (+/-)-2-페닐프로피온산 비율을 분석하였다 (상세 > 97:3). 반응이 완료되는 대로, 혼합물을 23℃ (±3℃)로 냉각시켰다. 시클로헥산 (102 mL)에 이어서 Na₂CO₃ (수성) (3.7％ wt/wt, 61.5 mL)을 첨가하였다. 층을 분리하고, 하부의 수성 상을 폐기하였다. 이어서, 물 (61.5 mL)을 넣고, 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 층을 분리하여 하부의 수성 상을 폐기하였다. 이어서, 시클로헥산 (205 mL)을 유기상에 넣었다. 이어서, 반응 혼합물을 45℃, 150 - 240 mbar에서 감압하에 증류시켜 용매 180 mL를 제거하였다. 이어서, 반응 혼합물을 23℃ (±3℃)로 냉각시켜, 메틸 2-페닐프로파노에이트를 시클로헥산 중의 용액으로 수득하였다.

b) 메틸 2-브로모-2-페닐프로파노에이트

시클로헥산 중의 용액인 메틸 2-페닐프로파노에이트 (단계 a에서 제조) (22.42 g; 단계 a로부터의 100％ 수율 기준)를 반응 용기에 넣었다. 후속으로, 브롬화수소산 (48％, 0.62 mL)에 이어서 라인 세척제로서의 시클로헥산 (22.4 mL)을 넣었다. 이어서, 디벤조일 퍼옥시드 (75％, 2.21 g) 및 N-브로모숙신이미드 (31.61 g)를 용기에 넣고, 반응물을 50℃ (±3℃)로 가열하고, 상기 온도에서 4시간 이상 동안 교반하였다. 반응물을 GC로 모니터링하여, 메틸 2-브로모-2-페닐프로파노에이트 : 메틸 2-페닐프로파노에이트 비율에 대해 분석하였다 (상세 > 96:4). 반응이 완료되는 대로, 혼합물을 20℃ (±3℃)로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 여과하여 고체 숙신이미드 부산물을 제거하고, 필터 케이크를 시클로헥산 (22.4 mL)으로 2회 세척하였다. 고체 부산물을 폐기하였다. 이어서, NaHSO₃ (수성) (10％w/w, 81.9 mL)을 넣고, 15분 동안 교반한 후, 상을 분리하여 하부의 수성 상을 폐기하였다. 이어서, 물 (81.9 mL)을 넣고, 15분 동안 교반한 후, 상을 분리하여 하부의 수성 상을 폐기하였다. 이어서, 3-펜타논 (201.9 mL)을 넣고, 혼합물을 45℃, 150 - 280 mbar에서 증류시켜, 용매 210 mL를 제거하였다. 반응 혼합물을 23℃ (±3℃)로 냉각시켰다. 이어서, 3-펜타논 (101 mL)을 넣고, 용매 조성을 GC로 분석하여 (상세 <30％ 시클로헥산), 메틸 2-브로모-2-페닐프로파노에이트를 3-펜타논의 용액으로 수득하였다.

c) 메틸 2-페닐-2-피페리딘-1-일프로파노에이트

3-펜타논의 용액인 메틸 2-브로모-2-페닐프로파노에이트 (단계 b에서 제조) (33.21 g; 단계 b로부터의 100％ 수율 기준)에 이어서 피페리딘 (40.5 mL)을 반응 용기에 넣었다. 반응물을 40℃ (±3℃)로 가열하고, 4시간 이상 동안 유지하였다. 반응물을 GC로 모니터링하여, 메틸 2-페닐-2-피페리딘-1-일프로파노에이트 : 메틸 2-브로모-2-페닐프로파노에이트 비율을 분석하였다 (상세 > 97:3). 이어서, 반응 혼합물을 23℃ (±3℃)로 냉각시킨 후, 여과하여 피페리딘 히드로브로마이드 염 부산물을 제거하고, 필터 케이크를 메틸 ^t부틸 에테르 (66.4 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 폐기하였다. 이어서, 메틸 ^t부틸 에테르 (133 mL) 및 염화수소 (2.74 M, 172.6 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 후, pH를 판독하여 pH < 4임을 확인하였다. 이어서, 층을 분리하고, 하부의 수성 상을 보관하였다. 이어서, 염화수소 (2.74 M, 60.4 mL)를 유기상에 첨가하고, 혼합물을 15분 이상 동안 교반한 후, 상을 분리하여 하부의 수성 상을 보관하였다. 이어서, 두 수성 상을 합하고, 샘플링하고, GC로분석하여 메틸 2-페닐-3-(피페리딘-1-일)프로파노에이트 불순물을 제외한 모든 불순물이 < 0.5％임을 확인하였다. 이어서, 수성 상을 Na₂CO₃ (32.29 g), 물 (232 mL) 및 메틸 ^t부틸 에테르 (332 mL)의 혼합물에 넣었다. 혼합물을 15분 이상 동안 교반한 후, pH를 판독하여 pH >6임을 확인하였다. 이어서, 층을 분리하고, 하부의 수성 상을 폐기하였다. 이어서, 물 (66.4 mL)을 넣고, 15분 동안 교반한 후, 상을 분리하여 하부의 수성 상을 폐기하였다. 이어서, 시트르산 (0.8중량％, 66.4 mL)을 유기상에 넣고, 혼합물을 15분 동안 교반한 후, 상을 분리하여 하부의 수성 상을 폐기하였다. 이어서, 제2 투입량의 시트르산 (0.8중량％, 66.4 mL)을 유기 상에 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반한 후, 상을 분리하여 하부의 수성 상을 폐기하였다. 유기상을 샘플링하고, GC로 분석하여, 메틸 2-페닐-3-(피페리딘-1-일)프로파노에이트 불순물이 0.5％ 미만임을 확인하였다. 이어서, 혼합물을 45℃, 80 - 220 mbar에서 증류시켜, 용매 265 mL를 제거하였다. 이어서, 메탄올 (332 mL)을 용기에 넣고, 혼합물을 45℃, 80 - 220 mbar에서 다시 증류시켜, 용매 332 mL를 제거하였다. 반응 혼합물을 23℃ (±3℃)로 냉각시켜, 메틸 2-페닐-2-피페리딘-1-일프로파노에이트를 메탄올의 용액으로 수득하였다. 이어서, 생성물을 NMR 분석 및 HPLC으로 순도에 대해 분석하였다. 23.8 g (100 w/w％) 70.5％ 수율, >99.5％ HPLC 순도.

d) (S)-메틸 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트

라세미체 메틸 2-페닐-2-피페리딘-1-일프로파노에이트 (단계 c에서 제조)를 모사 이동 층 (Simulated Moving Bed; SMB) 크로마토그래피로 정제하여, 메틸 (S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일프로파노에이트를 수득하였다. (S)-메틸 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트를 톨루엔 중 40 w/w％ 용액으로서 단리하였다. SMB 정제에 대한 전형적 조건은 다음과 같다.

고정상 키랄셀 (Chiralcel) OJ 20μm

컬럼 층 크기 (l x d) 25cm x 11cm

이동상 이소-헥산 중 20％ 에탄올

공급 희석제 이소-헥산 중 20％ 에탄올

공급 농도 (g/L) 170

컬럼 층 압력 (Bar) 50

주입 부피 (ml) 50

주입 당 로딩 (g) 8.5

러닝 시간 (분) 14

유속 (ml/분) 500

파장 (nm) 230

e) (S)-((R)-퀴누클리딘-3-일) 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트

(S)-메틸 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트 (단계 d에서 제조) (17.6 g, 톨루엔 중 40 w/w％ 용액)에 이어서 (R)-(-)-3-퀴누클리디놀 (9.5 g) 및 톨루엔 (106 mL)을 반응 용기에 넣었다. 혼합물을 60℃, 180 - 450 mbar에서 증류시켜 용매 52 mL를 제거하였다. 샘플을 취하고, HPLC 분석으로 (S)-메틸 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트를 분석하였다 (상세 180 내지 220 mg/mL). 이어서, 반응물을 60℃ (±5℃)로 가열하고, 칼륨 tert-펜톡시드 (25 w/w％, 43.12 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃ (±5℃)에서 2시간 이상 동안 교반하고, HPLC로 모니터링하여 메틸 (S)-메틸 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트 : (S)-((R)-퀴누클리딘-3-일) 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트 비율을 분석하였다 (상세 > 95:5) (이어서, 라인 세정제로서 톨루엔 (8.8 mL)). 반응 혼합물을 20℃ (±5℃)로 냉각시켰다. 부탄니트릴 (88 mL) 및 물 (88 mL)을 넣고, 혼합물을 20분 동안 교반한 후, 상을 분리하여 하부의 수성 상을 폐기하였다. 물 (88 mL)을 넣고, 혼합물을 20분 동안 교반한 후, 상을 분리하여 하부의 수성 상을 폐기하였다. 유기상을 GC로 분석하여, 잔류 (R)-(-)-3-퀴누클리디놀 수준이 0.5％ 미만임을 확인하였다. 유기상을 60℃, 100 - 430 mbar에서 증류시켜, 용매 142 mL를 제거하였다. 이어서, 반응물을 칭량하고, NMR 분석 (생성물의 w/w％) 및 GC (용매 조성)로 분석하여, 용액 중 생성물의 양 및 용매 조성을 측정한 후, 톨루엔 (18.5 mL, 1.05 vol) 및 부탄니트릴 (52.5 mL, 3 vol)을 혼합물에 첨가하여, (S)-((R)-퀴누클리딘-3-일) 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트 (19.67 g, 81％ 수율)를 7:3 부탄니트릴:톨루엔 용매 조성물 중 140 mg/mL 농도로 수득하였다.

f) (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드

(S)-((R)-퀴누클리딘-3-일) 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트 (단계 e에서 제조) (19.67 g, 부탄니트릴:톨루엔 중 140 mg/mL 용액)에 이어서 4-플루오로페네틸브로마이드 (13.99 g) 및 부탄니트릴 (19.7 mL)를 반응 용기에 넣었다. 반응 혼합물을 60℃ (±5℃)로 가열하고, 상기 온도에서 8시간 이상 동안 교반하였다. 반응물을 HPLC로 모니터링하여 (S)-((R)-퀴누클리딘-3-일) 2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노에이트 : 생성물 비율을 분석하였다 (상세 > 96:4). 반응 혼합물을 40분 이상에 걸쳐 (0.5℃/분) 40℃로 냉각시키고, 이어서 6시간 이상에 걸쳐 (0.125℃/분) -5℃로 냉각시켰다. 냉각시키는 동안 20℃에서 결정화가 발생하지 않았다. 따라서, 반응물을 (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (25 mg - WO 2008/075005에 기재된 방법으로 수득가능함 - 형태 A)의 샘플로 시딩하였다. 반응 혼합물이 -5℃에 도달한 후, 톨루엔 (39.3 mL)을 첨가하고, 슬러리를 1시간 이상 동안 -5℃에서 교반하였다. 이어서, (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드를 여과에 의해 수집하고, 필터케이크를 부탄니트릴 (39.3 mL)로 세척하였다. 이어서, (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 생성물을 45℃에서 진공하에 건조시켰다. 이어서, 생성물을 HPLC 순도 및 NMR 분석으로 분석하였다. 30 g, 96％ 수율, >99.5％ HPLC 순도, >99.5 w/w％ 분석.

g) (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트

물 (300 mL; 16.65 mole) 중 나트륨 p-톨루엔술포네이트 (26.97 g)의 용액을 제조하였다. 500 mL 재킷 용기에 (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (15.00 g)를 넣었다. 부탄니트릴 (225 mL) 및 나트륨 토실레이트 용액 절반을 반응 용기에 첨가하였다. 이어서, 용기를 교반하고, 35℃로 가열하였다. 용기 내용물이 35℃에 도달하고 적당히 혼합되면, 교반을 중지하고, 상을 가라앉혔다. 하부의 수성 상을 제거하고, 폐기하였다. 나트륨 토실레이트 용액의 두번째 절반을 첨가하고, 교반하면서 용기 내용물을 35℃로 가열하였다. 용기 내용물이 35℃에 도달하고 적당히 혼합되면, 교반을 중지하고, 상을 가라앉혔다. 하부의 수성 상을 제거하고, 폐기하였다. 물 (75 mL)을 첨가하고, 혼합물을 70℃로 가열하였다. 용기 내용물이 70℃에 도달하고 적당히 혼합되면, 교반을 중지하고, 상을 가라앉혔다. 하부의 수성 상을 제거하고, 폐기하였다. 뜨거운 유기상을 깨끗한 용기로 여과하였다. 원래의 용기를 부탄니트릴 (30 mL)로 세척하고, 상기 용매를 필터를 통해 상기 깨끗한 용기로 여과액에 첨가하였다. 습윤 유기 용액을 증류시켜 이를 공비건조 (azeodry)시켰다 (120-150 mbar - 80℃의 용기 재킷). 용매 약 60 mL를 증류시킨 후, 침전물을 관측하였고; 내용물은 48℃였다. 총 용매 110 mL (10 mL 물:100 mL 부탄니트릴)를 수집하였다. 상기 시점에서, 진공을 풀고, 용기 내용물을 75℃로 가온하였다. 아세토니트릴 (45 mL)을 첨가하고, 용기 내용물을 75℃ (모든 물질이 용해되지는 않음)로 재가열하였다. 추가의 아세토니트릴 (45 mL)을 첨가하고, 용기 내용물을 75℃ (모든 물질이 용해됨)로 재가열하였다. 용액을 5℃로 120분에 걸쳐 냉각시켰다 (65℃에서 침전이 시작됨). 5℃에서 용기 내용물과 함께 생성물을 여과에 의해 수집하고, 차가운 (5℃) 부탄니트릴 (30 mL)로 세척하고, 필터 상에서 건조하게 인취하여 고체 15.27 g을 수득하였다. 상기 고체를 환풍 장치 (fume cupboard)하에 개방하여 밤새 방치함으로써, (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트 (15.22 g)를 수득하였다. 4차 종 대 토실레이트의 비율은 30초 이완 지연을 이용한 400 MHz ¹H NMR에 의해 1:1.01로 측정되었다.

h) (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트 (재결정화)

(R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트 (7.50 g) 및 아세토니트릴 (90.00 mL)을 용기에 넣었다. 혼합물을 80℃로 가열하고, 생성된 용액을 80℃에서 30분 동안 유지하였다. 이어서, 혼합물을 65℃로 20분에 걸쳐 냉각시켰다. 용액을 (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트의 시드 결정 (6 mg)으로 시딩하고, 65℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 10시간에 걸쳐 5℃로 냉각시키고, 5℃에서 6시간 동안 교반하였다. 이어서, 고체 생성물을 여과에 의해 단리시키고, 필터 케이크를 아세토니트릴 (15.00 mL)로 세척하였다. 이어서, 생성물을 45℃에서 진공하에 건조시켜, (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트를 백색 고체 (6.6 g)로서 수득하였다.

(R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트의 고체 상태 분석

기기 세부 사항:

o X-선 분말 회절 (XRPD) - 2 ° 내지 40 ° 2Ø 스캔 범위에 걸쳐 0.02 ° 증분 당 100 초 노출을 이용하는 2Ø-Ø 형태의 패널리티컬 엑스퍼트 (PANalytical X'Pert) 기계 또는 Ø-Ø 형태의 패널리티컬 큐빅스 기계. X-선을 45 kV 및 40 mA에서 작동하는 구리 미세 장초점 튜브에 의해 생성하였다. 구리 X-선의 파장은 1.5418 Å이었다. 약 2 mg의 화합물을 놓은 제로 배경 홀더에서 데이터를 수집하였다. 홀더는, 비-회절 면을 따라 절단한 후 광학적 플랫 처리로 연마한 단일 결정의 규소로부터 제조되었다. 이 표면 상에 입사된 X-선을 브래그 소광에 의해 무효화시켰다.

o 시차 주사 열량 (DSC) 열상은 알루미늄 팬 및 구멍뚫린 덮개가 장착된 TA Q1000 시차 주사 열량계를 이용하여 측정하였다. 샘플 중량은 0.5 내지 5 mg 사이로 다양하였다. 질소 기체 흐름 (50 mL/분) 및 10℃/분의 일정 비율의 온도 증가에서 30 내지 230℃의 연구 온도 하에 상기 절차를 수행하였다.

o 중량측정 증기 흡착 (GVS) 프로파일은 표면 측정 시스템 동적 증기 흡착 DVS-1, 또는 DVS 어드밴티지 (Advantage) 기기를 이용하여 측정하였다. 약 1 내지 5 mg의 고체 샘플을 유리 용기에 놓고, 샘플 중량을 이중 주기 단계 방법 (40→90→0→90→0％ 상대 습도 (RH), 10％ RH의 간격으로) 중에 기록하였다.

상기 본원에 기재한 바와 같이 제조 16에 의해 수득한 물질의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 또는 큐빅스 시스템), GVS 및 DSC로 분석하였다. DSC로 측정한 융점은 189℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. GVS 측정에서 80％ 상대 습도 (±0.2％)에서의 0.1％ 중량 증가 (％w/w)가 나타났다.

제조 16에 따라 제조된 (R)-1-(4-플루오로페네틸)-3-((S)-2-페닐-2-(피페리딘-1-일)프로파노일옥시)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 4-메틸벤젠술포네이트의 XRPD 스펙트럼을 하기 도 28에 나타냈다.

<도 28>

아드레날린 β2 매개 cAMP 생성

세포 제조

H292 세포를 37℃, 5％ CO₂의 225 ㎠ 플라스크 인큐베이터에서 10％ (v/v) FBS (소 태아 혈청) 및 2 mM L-글루타민을 함유하는 RPMI 배지 중에서 성장시켰다.

실험 방법

아쿠타제 (Accutase, 상표명) 세포 분리 용액으로 15분 동안 처리하여 유착된 H292 세포를 조직 배양 플라스크로부터 제거하였다. 플라스크를 37℃, 5％ CO₂의 가습 인큐베이터에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 탈착된 세포를 RPMI 배지 (10％(v/v) FBS 및 2 mM L-글루타민 함유) 중에 0.05 x 10⁶개 세포/mL로 재현탁시켰다. 100 ㎕ 중의 5000개의 세포를 조직-배양-처리된 96-웰 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고, 세포를 37℃, 5％ CO₂ 하의 가습 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다. 배양 배지를 제거하고, 세포를 분석 완충액 100 ㎕로 2회 세척하고, 분석 완충액 (10 mM HEPES (pH 7.4) 및 5 mM 글루코스를 함유하는 HBSS 용액) 50 ㎕로 교체하였다. 세포를 실온에서 20분 동안 휴지시키고, 그 후에 롤리프람 (1.2 mM, 2.4％ (v/v) 디메틸술폭시드를 함유하는 분석 완충액 중에서 제조됨) 25 ㎕를 첨가하였다. 세포를 롤리프람과 함께 10분 동안 인큐베이션하고, 그 후에 화합물 Z를 첨가하고, 세포를 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 분석시 최종 롤리프람 농도는 300 μM이었으며, 최종 비히클 농도는 1.6％ (v/v) 디메틸술폭시드였다. 상층액을 제거하고, 분석 완충액 100 ㎕로 1회 세척하고, 용해 완충액 50 ㎕로 교체하여 반응을 중지시켰다. 세포 단일층을 -80℃에서 30분 동안 (또는 밤새) 동결시켰다.

알파스크린 (AlphaScreen, 상표명) cAMP 검출

알파스크린 (상표명) 방법을 이용하여 세포 용해물 중 cAMP (시클릭 아데노신 모노포스페이트)의 농도를 측정하였다. 동결된 세포 플레이트를 플레이트 진탕기 상에서 20분 동안 해동시킨 다음, 세포 용해물 10 ㎕를 96-웰 백색 플레이트로 옮겼다. 비오티닐화된 cAMP와 함께 예비 인큐베이션시킨 혼합 알파스크린 (상표명) 검출 비드 40 ㎕를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 암실에서 10시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 알파스크린 (상표명) 신호는 제조업체가 권장하는 설정조건으로 엔비젼 (EnVision) 분광광도계 (퍼킨-엘머 인코포레이티드 (Perkin-Elmer Inc.))를 이용하여 측정하였다. cAMP 농도는 표준 cAMP 농도를 사용한 동일한 실험에서 결정된 검량 곡선을 참조하여 측정하였다. 화합물 Z에 대한 농도 반응 곡선을 구축하고, 데이터를 4 파라미터 로지스틱 방정식에 대입하여 pEC₅₀ 및 내인성 활성을 둘 다 측정하였다. 내인성 활성은 각 실험에서 포르모테롤에 대해 측정된 최대 활성에 대한 분율로 표시하였다. 화합물 Z에 대한 결과는 표 1에 있다.

선택성 분석

아드레날린 α1D

막 제조

재조합 인간 α1_D 수용체를 발현하는 인간 태아 신장 293 (HEK293) 세포로부터 막을 제조하였다. 이들을 분석 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여, 최대 및 최소 특이적 결합 사이에 명확한 영역 (window)을 갖는 최종 농도의 막을 얻었다.

실험 방법

분석은 U-바닥 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [³H]-프라조신 (최종 농도 0.3 nM) 10 ㎕ 및 화합물 Z (10x 최종 농도) 10　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 분석 플레이트에 대해, 비히클 (분석 완충액 중 10 ％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 10 ㎕ 또는 BMY7378 (최종 농도 10 μM; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 10 ㎕의 존재하의 [³H]-프라조신 결합을 위해 8개의 복제물을 얻었다. 이어서, 막을 첨가하여 100 ㎕의 최종 부피를 얻었다. 플레이트를 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한 후에, 96-웰 플레이트 톰텍 (Tomtec) 세포 수확기를 이용하여 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 (분석 완충액 중에 1시간 동안 미리 침지시켜 둠) 상에서 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, pH 7.4) 250 ㎕로 5회 세척하여 미결합 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후에 패커드 (Packard) 플레이트 밀봉기를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O (MicroScint-O) (50 ㎕)를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실 (TopSeal) A), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트 (TopCount), 패커드 바이오사이언스 (Packard BioScience))로 3-분 계수 프로토콜을 이용하여 측정하였다.

총 특이적 결합 (B₀)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 차감하여 측정하였다. 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 NSB 값을 차감하였다. 이들 데이터는 B₀의 백분율로 표현하였다. 화합물 농도-효과 곡선 ([³H]-프라조신 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 연속 희석액을 사용하여 측정하였다. 데이터를 4 파라미터 로지스틱 방정식에 대입하여 화합물 효능을 측정하였으며, 이를 pIC₅₀ ([³H]-프라조신 결합의 50％ 억제를 유도하는 음의 로그 몰 농도)으로 표현하였다. 결과를 하기 표 1에 나타냈다.

아드레날린 β1

막 제조

재조합 인간 아드레날린 베타1 수용체를 함유하는 막을 유로스크린 (Euroscreen)으로부터 입수하였다. 이들을 분석 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여, 최대 및 최소 특이적 결합 사이에 명확한 영역을 갖는 최종 농도의 막을 얻었다.

실험 방법

분석은 U-바닥 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [¹²⁵I]-요오도시아노핀돌롤 (최종 농도 0.036 nM) 10 ㎕ 및 화합물 Z (10x 최종 농도) 10　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 분석 플레이트에 대해, 비히클 (분석 완충액 중 10％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 10 ㎕ 또는 프로프라놀롤 (최종 농도 10 μM; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 10 ㎕의 존재하의 [¹²⁵I]-요오도시아노핀돌롤 결합을 위한 8개의 복제물을 얻었다. 이어서, 막을 첨가하여 100 ㎕의 최종 부피를 얻었다. 플레이트를 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한 후에, 96-웰 플레이트 톰텍 세포 수확기를 이용하여 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 (분석 완충액 중에 1시간 동안 미리 침지시켜 둠) 상에서 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, pH 7.4) 250 ㎕로 5회 세척하여 미결합 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후에 패커드 플레이트 밀봉기를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O (50 ㎕)를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실 A), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트, 패커드 바이오사이언스)로 3-분 계수 프로토콜을 이용하여 측정하였다.

총 특이적 결합 (B₀)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 차감하여 측정하였다. 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 NSB 값을 차감하였다. 이들 데이터는 B₀의 백분율로 표현하였다. 화합물 농도-효과 곡선 ([¹²⁵I]-요오도시아노핀돌롤 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 연속 희석액을 사용하여 측정하였다. 데이터를 4 파라미터 로지스틱 방정식에 대입하여 화합물 효능을 측정하였으며, 이를 pIC₅₀ ([¹²⁵I]-요오도시아노핀돌롤 결합의 50％ 억제를 유도하는 음의 로그 몰 농도)으로 표현하였다. 결과를 하기 표 1에 나타냈다.

도파민 D2

막 제조

재조합 인간 도파민 아형 D2 수용체를 함유하는 막을 퍼킨-엘머로부터 입수하였다. 이들을 분석 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여, 최대 및 최소 특이적 결합 사이에 명확한 영역을 갖는 최종 농도의 막을 얻었다.

실험 방법

분석은 U-바닥 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [³H]-스피페론 (최종 농도 0.16 nM) 30 ㎕ 및 화합물 Z (10x 최종 농도) 30　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 분석 플레이트에 대해, 비히클 (분석 완충액 중 10 ％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 30 ㎕ 또는 할로페리돌 (최종 농도 10 μM; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 30 ㎕의 존재하의 [³H]-스피페론 결합을 위한 8개의 복제물을 수득하였다. 이어서, 막을 첨가하여 300 ㎕의 최종 부피를 얻었다. 플레이트를 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한 후에, 96-웰 플레이트 톰텍 세포 수확기를 이용하여 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 (분석 완충액 중에 1시간 동안 미리 침지시켜 둠) 상에서 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, pH 7.4) 250 ㎕로 5회 세척하여 미결합 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후에 패커드 플레이트 밀봉기를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O (50 ㎕)를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실 A), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트, 패커드 바이오사이언스)로 3-분 계수 프로토콜을 이용하여 측정하였다.

총 특이적 결합 (B₀)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 차감하여 측정하였다. 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 NSB 값을 차감하였다. 이들 데이터는 B₀의 백분율로 표현하였다. 화합물 농도-효과 곡선 ([³H]-스피페론 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 연속 희석액을 사용하여 측정하였다. 데이터를 4 파라미터 로지스틱 방정식에 대입하여 화합물 효능을 측정하였으며, 이를 pIC₅₀ ([³H]-스피페론 결합의 50％ 억제를 유도하는 음의 로그 몰 농도)으로 표현하였다. 화합물 Z에 대한 결과를 하기 표 1에 나타냈다.

본 발명은 하기 예시적인 실시예를 참조로 추가로 설명될 것이다.

실시예 1

CRL:CD 래트에의 리포폴리사카라이드 (LPS)의 에어로졸 투여 후 폐포내 호중구 이동에 대한 화합물 활성의 평가

CRL:CD 래트에의 LPS 투여는 폐로의 염증성 세포의 유입을 야기한다. 래트에게 0.9％ w/v 염수의 에어로졸 또는 0.9％ 염수 중 0.1 mg/mL LPS의 에어로졸을 30분 동안, 또는 0.1 내지 10 ㎍/kg의 기관내 투여량으로 투여하였다. 실험 프로토콜에 따라 이것을 최대 8회 반복하였다. 실험 프로토콜에 따라 투여 전후의 다양한 시점에 적절한 경로 및 빈도로 래트에 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 시험 화합물 군은 상이한 투여량의 동일한 화합물, 또는 단일 투여량의 상이한 화합물, 또는 이 둘의 조합일 수 있다. 시험 화합물은 복강내, 정맥내 또는 피하 주사에 의해, 또는 흡입 투여 또는 기관내 투여에 의해 제공하였다.

래트를 연구의 특성에 따라 투여 후 다양한 시점에서, 그러나 전형적으로는 LPS 투여 4시간 후에 펜토바르비톤 나트륨 1 mL를 사용하여 안락사시켰다. 기관을 절개하여 캐뉼라를 삽입하였다. 이어서, 실온에서 멸균 PBS 3 mL를 사용하여 기도를 세척하였다. PBS를 기도에 10초간 방치한 후 제거하였다. 세포를 함유하는 PBS를 얼음상의 15 mL 원심분리용 튜브에 넣었다. 이 과정을 3회 반복하였다.

BAL 유체의 분취량을 덜어내어 시스멕스 (Sysmex) (시스멕스 UK, 밀턴 케인즈 소재)를 상에서 계수하였다. 700 rpm에서 5분 동안 작동시킨 샨돈 시토스핀3 (Shandon Cytospin3) 내의 시토스핀 깔대기에 BAL 유체 100 ㎕ 분취량을 첨가하여 시토스핀 슬라이드를 제조하였다. 슬라이드를 헤마-테크-2000 (Hema-Tek-2000) 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사 (Wright-Giemsa) 염색을 이용하여 염색하였고, 전형적으로 200개의 세포가 현미경 하에서 계수되었다. 세포를 호산구, 호중구, 및 단핵 세포 (단핵 세포에는 단핵구, 대식세포 및 림프구가 포함됨)로 분류하고, 총 갯수의 백분율로 나타냈다.

실시예 2

기니 피그에서의 리포폴리사카라이드 (LPS)의 에어로졸 투여 이후 폐포내 호중구 이동에 대한 화합물 활성의 평가

수컷 던킨-하틀리 (Dunkin-Hartley) 기니 피그 (300 내지 600 g)를 실린더형 에어로졸 챔버가 주위에 무작위로 부착된 전면 개방형 기니 피그 수용 원뿔체에 넣었다. 기니-피그를 투여 원뿔체에서 유지하고, 군 당 비히클 에어로졸, 또는 0.9％염수 중 0.1 내지 30 ㎍/ml 농도의 LPS의 에어로졸에 노출시켰다. 에어로졸은 컬럼당 2개의 제트 분무기를 사용하여 12 ℓ/m의 유속으로 발생시켰다. 각각의 분무기에 투여제 10 ml를 넣었다. 별법으로, 동물에게 0.1 내지 10 ㎍/kg을 기관내 투여하였다. 실험 프로토콜에 따라 이것을 최대 8회 반복하였다.

실험 프로토콜에 따라 투여 전후의 다양한 시점에 적절한 경로 및 빈도로 기니 피그에 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 시험 화합물 군은 상이한 투여량의 동일한 화합물, 또는 단일 투여량의 상이한 화합물, 또는 이 둘의 조합일 수 있다. 시험 화합물은 복강내, 정맥내 또는 피하 주사에 의해, 또는 흡입 투여 또는 기관내 투여에 의해 제공하였다. 투여 4시간 내지 24시간 이후에 마취제를 과량투여하여 (유타탈 (Euthatal) 0.5 ml, 복강내) 투여된 기니 피크를 사망시켰다. 이어서, 폐를 세척하였다. 기관을 노출시키고 루어 피팅 캐뉼라 (luer fitting cannula, 오렌지색 = 크기 8FG)를 이용하여 캐뉼라를 삽입한 후, 행크스 완충 염 용액 (Hanks Buffered Salt Solution (HBSS, EDTA 무함유))의 3 x 5 ml 분취량으로 세척하였다. 세척은 흉곽을 부드럽게 마사지하듯 하여, 유체가 폐에서 적절하게 섞이도록 수행하였다. 세척액을 15 ml의 원뿔형 폴리프로필렌 원심분리용 튜브에 담고, BAL 유체의 분취량을 덜어내어 시스멕스 (시스멕스 UK, 밀턴 케인즈 소재) 상에서 계수하였다. 700 rpm에서 5분 동안 작동시킨 샨돈 시토스핀3 내의 시토스핀 깔대기에 BAL 유체의 100 ㎕ 분취량을 첨가하여 시토스핀 슬라이드를 제조하였다. 슬라이드를 헤마-테크-2000 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사 염색을 이용하여 염색하였고, 전형적으로 200개의 세포가 현미경 하에서 계수되었다. 세포를 호산구, 호중구 및 단핵 세포 (단핵 세포에는 단핵구, 대식세포, 및 림프구가 포함됨)로 분류하고, 총 갯수의 백분율로 나타냈다.

실시예 3

마우스에서의 리포폴리사카라이드 (LPS)의 에어로졸 투여 이후 폐포내 호중구 이동에 대한 화합물 활성의 평가

수컷 C57BL/6/J 또는 BALB/C 마우스 (20 내지 35 g)를 최대 20개의 군으로 퍼스펙스 (Perspex) 노출 박스에 넣고, 0.3 mg/ml LPS 또는 0.9％ w/v 염수의 에어로졸에 노출시켰다. LPS (시그마 (Sigma), 이.콜라이 (E. Coli), 참조번호 L-3755, 혈청형 026:B6, 로트 번호 111k4078)는 0.9％ w/v 염수로 이루어졌다. 에어로졸은 15분 동안 12 ℓ/분 (각 분무기에 대해 6 ℓ/분)의 유속으로 작동하는 2개의 제트 분무기를 사용하여 발생시켰다. 별법으로, 동물에게 0.1 내지 10 ㎍/kg를 기관내 투여하였다. 이것은 최대 8회까지 반복할 수 있다.

실험 프로토콜에 따라 투여 전후의 다양한 시점에 적절한 경로 및 빈도로 마우스에게 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 시험 화합물 군은 상이한 투여량의 동일한 화합물, 또는 단일 투여량의 상이한 화합물, 또는 이 둘의 조합일 수 있다. 시험 화합물은 복강내, 정맥내 또는 피하 주사에 의해, 또는 흡입 투여 또는 기관내 투여에 의해 제공하였다.

마우스를 LPS 투여 30분, 1 내지 24시간 이후에 유타탈을 과량투여 (복강내)하여 사망시켰다. 순환이 멈추었을때, 기관에 캐뉼라를 삽입하고 (포르텍스 (Portex) 정맥내 캐뉼라), 기도를 이소톤 II (베크만 쿨터 (Beckman Coulter) 참조 번호 8448011 로트 번호 25775) 3 x 0.3 ml로 세척하였다. 시토스핀을 위해 BALF 100 ㎕를 시토스핀 깔대기에 첨가하고, 써모샨돈 (ThermoShandon) 시토스핀 모델 3 또는 4를 이용하여 700 rpm에서 5분 동안 회전시켰다. 슬라이드 상의 세포를 헤마-테크-2000 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사 염색을 이용하여 염색하였고, 세포 구별 계수하여 호산구, 호중구 및 림프단핵 세포 (단핵구, 대식세포, 및 림프구가 포함됨)로 구별하였다. 전형적으로 슬라이드당 200개의 세포가 계수되었고, 각 세포 유형을 총 갯수의 백분율로 나타냈다. BALF의 총 백혈구 수는 시스멕스 (시스멕스 UK, 밀턴 케인즈 소재)를 이용하여 측정하였다.

실시예 4

마취시킨 기니-피그의 폐 기능 평가

수컷 던킨-하틀리 기니 피그 (300 내지 600 g)의 체중을 재고, 회복가능한 기체 마취제 (산소 중 5％ 할로탄) 하에 기관내 경로를 통해 실험 프로토콜에 따라 비히클 또는 적절한 비히클 내의 화합물을 투여하였다. 투여 후에 동물에게 추가적 산소를 투여하고, 충분히 회복될 때까지 모니터링하였다. 전형적으로 0.5 ml/kg의 투여 부피가 기관내 경로에 사용된다. 투여 반응 연구에서, 동물에게 히스타민을 투여하기 2시간 전에 화합물 또는 비히클을 투여하였다. 시험 화합물 군은 상이한 투여량의 동일한 화합물, 또는 단일 투여량의 상이한 화합물, 또는 이 둘의 조합일 수 있다.

기관지수축제를 1차 투여하기 대략 30분 전에 펜토바르비톤 (60 mg/mL 용액 1 mL/kg, 복강내)으로 기니 피그를 마취시켰다. 기관에 캐뉼라 (포르텍스 정맥내 캐뉼라, 200/300/070 (오렌지색) 또는 200/300/060 (황색))를 삽입하고, 정적 호흡 펌프 (하버드 로덴트 벤틸레이터 (Harvard Rodent Ventilator) 모델 683)를 이용하여 60회 호흡/분의 속도 및 5 ml/kg의 일호흡량으로 동물에게 산소를 공급하였다. 히스타민 또는 지속적인 마취제의 투여 (펜토바르비톤 용액 0.1 mL, 60 mg/mL, 필요에 따름)를 위해 목정맥에 캐뉼라 (포르텍스 정맥내 카테터 200/300/010 (녹색))를 삽입하였다.

이어서, 기도 저항의 측정을 위해 동물을 플렉시벤트 시스템 (Flexivent System) (SCIREQ, 캐나다 몬트리얼 소재)으로 옮겼다. 60회 호흡/분 및 5 mL/kg의 일호흡량으로 동물에게 산소를 공급하였다 (준정현 (quasi-sinusoidal) 산소공급 패턴). 2 내지 3 cm H₂O의 호기말양압을 적용하였다. 플렉시벤트 "스냅샷" 장비 (지속시간 1 초, 주파수 1 Hz)를 이용하여 호흡 저항을 측정하였다. 안정한 기준선 저항값이 얻어지면, 동물에게 히스타민 디히드로클로라이드 또는 메타콜린을 상승 용량 (히스타민; 0.5, 1, 2, 3 및 5 ㎍/kg (정맥내), 메타콜린; 3, 10 및 30 ㎍/kg (정맥내))으로 대략 4분 간격으로 목 카테터를 통해 제공하였다. 히스타민의 각 투여 후 피크 저항값을 기록하였다. 폐 기능 측정을 완료한 후 정맥내 펜토바르비톤 나트륨 (유타탈) 대략 1.0 mL를 사용하여 기니 피그를 안락사시켰다.

화합물에 의해 얻어진 기관지보호 백분율을 히스타민의 각 투여량에서 아래와 같이 계산하였다.

상기 식에서, 변화율(％) R_비히클이란 비히클 처리군에서 기도 저항의 최대 변화율 (％)의 평균이다.

실시예 5

난알부민 감작화된 브라운 노르웨이 (Brown Norway) 래트에서의 항원 유도 호산구증가증에 대한 화합물의 평가

연구 0일째에, 브라운 노르웨이 래트에게 두 개의 서로 다른 위치에서 염수 0.4 mL (각 위치 당 대략 0.2 mL) 중의 수산화 알루미늄 100 mg에 흡착된 난알부민 500 ㎍을 피하 주사하였다. 감작 후 14일 및 15일 째에 래트를 에어로졸화된 난알부민을 15분 동안 투여하였다. 래트를 10마리의 군로 아크릴 박스에 넣었다 (내부 면적: 너비 320 mm x 깊이 320 mm x 높이 195 mm, 부피: 20 ℓ). 0.9％ 염수 중의 10 mg/mL 난알부민 8 mL, 또는 0.9％ 염수 단독을 2개의 제트 분무기 (사이드스트림 (Sidestream, 등록상표), 프로파일 레스피레토리 시스템즈 리미티드 (Profile Respiratory Systems Ltd.))에 각각 넣어두었다. 압축된 공기를 6 ℓ/분으로 각각의 분무기를 통해 통과시키고, 분무기의 산출물을 래트가 담긴 박스에 통과시켰다.

실험 프로토콜에 따라 투여 전후의 다양한 시점에 적절한 경로를 통해 래트에 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 투여 후 다양한 시점에 복강내로 펜토바르비톤 나트륨 (유타탈)을 0.5 mL로 래트를 안락사시켰다. 기관을 절개하여 기관에 캐뉼라를 삽입하였다. 이어서, 실온에서 멸균 PBS 3 mL를 사용하여 기도를 세척하였다. PBS를 기도에 10초간 방치한 후 제거하였다. 세포를 함유하는 PBS를 얼음상의 15 mL 원심분리용 튜브에 넣었다. 이 과정을 3회 반복하였다. 회수된 최종 부피를 기록하였다. BAL 유체의 분취량을 덜어내어 시스멕스 (시스멕스 UK, 밀턴 케인즈 소재)를 이용하여 계수하였다.

700 rpm에서 5분 동안 작동시킨 샨돈 시토스핀3 내의 시토스핀 깔대기에 BAL 유체의 100 ㎕ 분취량을 첨가하여 시토스핀 슬라이드를 제조하였다. 슬라이드를 헤마-테크-2000 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사 염색을 이용하여 염색하였고, 전형적으로 200개의 세포가 현미경 하에서 계수되었다. 세포를 호산구, 호중구 및 단핵 세포로 분류하였다. 단핵 세포에는 단핵구, 대식세포 및 림프구가 포함된다.

실시예 6

난알부민 감작화된 마우스에서의 항원 유도 호산구증가증에 대한 화합물의 평가

20 내지 25 g의 수컷 BALB/c 마우스에게 0.3 ml 염수 중의 수산화알루미늄 겔 혼합물 (피셔 사이언티픽 UK (Fisher Scientific UK)) 1 mg에 흡착된 등급 V의 난알부민 (시그마) 100 ㎍을 복강내 투여하여 알부민에 대해 감작시켰다. 필요에 따라, 감작화 최소 2주 후에 마우스의 군에 화합물을 예비투여하였다. 이어서, 구체화된 연구 프로토콜에 따라 이들에게 시험 화합물 또는 비히클 0.25 mL를 1 내지 8일 동안 매일 투여하였다.

1 내지 8일의 각 날마다, 투여 1시간 후에 마우스를 퍼스펙스 챔버 (20x11x11 cm, 최대 10마리/챔버)에 넣고, 36분 동안 난알부민 20 mg ml^-1을 에어로졸 투여하였다 (18분 동안 8 mL, 이어서 18분 동안 추가의 8 mL). 에어로졸의 전달은 데빌비스 (DeVilbiss) 제트 분무기를 이용하여 61 분^-1의 유속으로 달성하였다. 마지막 투여 24시간 후에 유타탈 0.2 ml를 복강내 주사하여 마우스를 사망시키고, 세포 구별 계수 분석을 위해 혈액 샘플을 채취하고 (EDTA 튜브 내), 1 cm를 절개하여 분홍색 루어 마운트 포르텍스 캐뉼라를 이용하여 기관에 캐뉼라를 삽입하고, 이소톤 II 1 ml의 3회 세척액을 이용하여 폐를 세척하였다. 시토스핀을 위해 BALF 100 ㎕를 시토스핀 깔대기에 첨가하고, 써모샨돈 시토스핀 모델 3 또는 4를 이용하여 700 rpm에서 5분 동안 회전시켰다. 슬라이드 상의 세포를 헤마-테크-2000 자동 슬라이드 염색기 상에서 라이트-김사 염색을 이용하여 염색하였고, 세포 구별 계수하여 호산구, 호중구 및 림프단핵 세포 (단핵구, 대식세포 및 림프구가 포함됨)로 구별하였다. 전형적으로 슬라이드당 200개의 세포가 계수되었고, 각 세포 유형을 총 갯수의 백분율로 나타냈다. BALF의 총 백혈구 수는 시스멕스 (시스멕스 UK, 밀턴 케인즈 소재)를 이용하여 측정하였다.

실시예 7

마우스를 급성으로 담배연기에 노출시킨 후의 폐 기능 및 BAL-호중구증가증에 대한 화합물 효과의 평가

BALB/c 또는 C57BL6/J 마우스의 전신을 주류 연기에 노출시키고 (50분/담배 12 개피), 1 내지 9일 동안 하루에 1회 또는 2회 신선한 공기에 노출시켰다. 실험 프로토콜에 따라 투여 전후의 다양한 시점에 적절한 경로를 통해 마우스에게 비히클, 표준 화합물 또는 시험 화합물을 투여하였다. 실험 마지막 날에 유타탈 0.2 mL (복강내)로 마우스를 사망시키고, 기관지-폐포 세척액을 수득하여 플렉시벤트 시스템 (SCIREQ, 캐나다 몬트리얼 소재)을 이용하여 백혈구 침윤 (상기한 바와 같음) 또는 폐 기능을 평가하였다. 별법으로, 강제 기동 시스템 (EMMS)을 이용하여 폐 역학을 측정하였다.

마우스를 펜토바르비톤으로 마취시켰다 (1 mL/kg 투여 부피의 1/10 희석액, 복강내). 기관에 캐뉼라를 삽입하고, 기도 저항의 측정을 위해 동물을 플렉시벤트 시스템으로 옮겨 동물에게 150회 호흡/분 및 10 mL/kg의 일호흡량으로 산소를 공급하였다 (준정현 산소공급 패턴).

플렉시벤트 "스냅샷" 장비 (지속시간 1 초, 주파수 1 Hz)를 이용하여 호흡 저항을 측정하였다. 폐 기능 측정을 완료한 후 펜토바르비톤 나트륨 (유타탈) 대략 0.5 mL로 (정맥내) 마우스를 안락사시켰다.

실시예 8

기니 피그에서 단리한 기관연골고리 제제에서의 기관지확장제 활성의 평가

본 실시예에서:

화합물 W는: N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염이고;

화합물 X는: [2-(4-클로로-벤질옥시)-에틸]-[2-((R)-시클로헥실-히드록시-페닐-메틸)-옥사졸-5-일메틸]-디메틸-암모늄 헤미-나파디실레이트 염 (WO 2008/096136 참조)이고;

화합물 Y는: (R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다.

기니 피그 (300 내지 500 g)를 경추 탈골로 사망시키고, 기관을 단리하였다. 기관을 너비 당 2 내지 3개의 연골고리의 분절로 절단하고, 개질 크렙스 (Krebs) 용액 (mM; NaCl, 90; NaHCO₃, 45; KCl, 5; MgSO₄·7H₂O, 0.5; Na₂HPO₄·2H₂O, 1; CaCl₂, 2.25; 글루코스, 10; pH 7.4, 37℃에서 5％ CO₂, 95％ O₂의 기체로 처리함) 중의 10 ml 장기 배스에 현탁시켰다. 등장성 장력의 측정을 위해 기관연골고리를 등장력 변환기에 부착시켰다. 조직을 세척하고, 각 조직에 1 g의 힘을 가하였다. 상기 고리를 메타콜린 (1 μM)으로 수축시켰다. 수축이 정체 상태에 이르면 비히클 (증류 H₂O 중의 DMSO 0.01％), 화합물 W (1 nM 또는 3 nM), 화합물 X (1 nM), 화합물 Y (1 nM), 화합물 W (3 nM)와 화합물 X (1 nM)의 조합물, 또는 화합물 W (1 nM)와 화합물 Y (1 nM)의 조합물을 첨가하고, 조직을 60분 동안 방치하였다. 화합물 첨가 60분 후에 각각의 고리에서 장력을 측정하고, 메타콜린 (1 μM)에 대한 수축의 이완율 (％) (평균 ± 표준 오차 평균)로 표현하였다. 챠트 (Chart) 4 소프트웨어 (AD인스트루먼츠 (ADInstruments), (영국 챨그로브 소재))를 이용하여 데이터를 수집하였다.

화합물 W와 화합물 X의 조합물의 평가: 화합물 W (3 nM)에 대한 확장 반응 (메타콜린 (1μM)에 대한 최대 반응의 백분율로 나타냄)은 46±10.7이었고, 화합물 X (1 nM)에 대한 이완율 (％)은 1±0.5였고, 화합물 W (3 nM)와 화합물 X (1 nM)의 조합물에 대한 이완율 (％)은 65±15.7이었다. 비히클에 대한 이완율 (％)은 6±4.6이었다 (n = 4; 도 29).

화합물 W와 화합물 Y의 조합물의 평가: 화합물 W (1 nM)에 대한 확장 반응 (메타콜린 (1μM)에 대한 최대 반응의 백분율로 나타냄)은 48±3.9였고, 화합물 Y (1 nM)에 대한 이완율 (％)은 17±3.4였고, 화합물 W (1 nM)와 화합물 Y (1 nM)의 조합물에 대한 이완율 (％)은 63±5.4였다. 비히클에 대한 이완율 (％)은 3±2.5였다 (n = 6; 도 30).

<도 29>

<도 30>

Claims

N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 염인 제1 활성 성분, 및
비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제;
항산화제;
CCR1 길항제;
케모카인 길항제 (CCR1이 아님);
코르티코스테로이드;
CRTh2 길항제;
DP1 길항제;
히스톤 데아세틸라제 유도제;
IKK2 억제제;
COX 억제제;
리폭시게나제 억제제;
류코트리엔 수용체 길항제;
MPO 억제제;
무스카린성 길항제;
p38 억제제;
PDE 억제제;
PPARγ 효능제;
프로테아제 억제제;
스타틴;
트롬복산 길항제;
혈관확장제; 또는
ENAC 차단제 (상피성 나트륨-채널 차단제)
로부터 선택되며, 단 무스카린성 길항제가
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; 또는
(R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X
(여기서, X는 1가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)가 아닌 것인 제2 활성 성분
을 조합하여 포함하는 제약 생성물.
제1항에 있어서, 제1 활성 성분이, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드 (예컨대, 디히드로브로마이드), 트리플루오로아세테이트, 술페이트, 포스페이트, 아세테이트, 푸마레이트, 말레에이트, 타르트레이트, 락테이트, 시트레이트, 피루베이트, 숙시네이트, 옥살레이트, 메탄술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 바이술페이트, 벤젠술포네이트, 에탄술포네이트, 말로네이트, 크시나포에이트, 아스코르베이트, 올레에이트, 니코티네이트, 사카리네이트, 아디페이트, 포르메이트, 글리콜레이트, L-락테이트, D-락테이트, 아스파르테이트, 말레이트, L-타르트레이트, D-타르트레이트, 스테아레이트, 2-푸로에이트, 3-푸로에이트, 나파디실레이트 (나프탈렌-1,5-디술포네이트 또는 나프탈렌-1-(술폰산)-5-술포네이트), 에디실레이트 (에탄-1,2-디술포네이트 또는 에탄-1-(술폰산)-2-술포네이트), 이세티오네이트 (2-히드록시에틸술포네이트), 2-메시틸렌술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 2,5-디클로로벤젠술포네이트, D-만델레이트, L-만델레이트, 신나메이트, 벤조에이트, 아디페이트, 에실레이트, 말로네이트, 메시틸레이트 (2-메시틸렌술포네이트), 나프실레이트 (2-나프탈렌술포네이트), 캄실레이트 (캄포-10-술포네이트), 포르메이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트 (2-(벤조일아미노)아세테이트), 오로테이트, 크실레이트 (p-크실렌-2-술포네이트), 파모산 (2,2'-디히드록시-1,1'-디나프틸메탄-3,3'-디카르복실레이트), 팔미테이트 또는 푸로에이트인 염의 형태인 제약 생성물.
제1항에 있어서, 제1 활성 성분이, 디-D-만델레이트 염인 염의 형태인 제약 생성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 활성 성분이
비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제;
CCR1 길항제;
케모카인 길항제 (CCR1이 아님);
코르티코스테로이드;
IKK2 억제제;
무스카린성 길항제;
p38 억제제; 또는
PDE 억제제
로부터 선택되고, 단 무스카린성 길항제가
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; 또는
(R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X
(여기서, X가 1가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)가 아닌 것인 제약 생성물.
N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제1 활성 성분 및 티오트로퓸 브로마이드인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물.
N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제1 활성 성분 및 글리코피롤레이트인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물.
N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제1 활성 성분, 및 반대-이온이 클로라이드, 브로마이드, 술페이트, 메탄술포네이트, 벤젠술포네이트 (베실레이트), 톨루엔술포네이트 (토실레이트), 나프탈렌비스술포네이트 (나파디실레이트), 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 타르트레이트, 메실레이트, 말레에이트, 푸마레이트 또는 숙시네이트인 (R)-1-[2-(4-플루오로-페닐)-에틸]-3-((S)-2-페닐-2-피페리딘-1-일-프로피오닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물.
요법에서의 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 제약 생성물의 용도.
호흡기 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 제약 생성물의 용도.
제9항에 있어서, 호흡기 질환이 만성 폐쇄성 폐 질환인 용도.
호흡기 질환의 치료가 필요한 환자에게
(a) 치료 유효 용량의, N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 염인 제1 활성 성분; 및
(b) 치료 유효 용량의, 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제; 항산화제; CCR1 길항제; 케모카인 길항제 (CCR1이 아님); 코르티코스테로이드; CRTh2 길항제; DP1 길항제; 히스톤 데아세틸라제 유도제; IKK2 억제제; COX 억제제; 리폭시게나제 억제제; 류코트리엔 수용체 길항제; MPO 억제제; 무스카린성 길항제; p38 억제제; PDE 억제제; PPARγ 효능제; 프로테아제 억제제; 스타틴; 트롬복산 길항제; 혈관확장제; 또는 ENAC 차단제 (상피성 나트륨-채널 차단제)이며; 단, 무스카린성 길항제가 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; 또는 (R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X (여기서, X가 1가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)가 아닌 것인 제2 활성 성분
을 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여하는 것을 포함하는, 호흡기 질환의 치료 방법.
제1항에 정의한 바와 같은 제1 활성 성분의 제제, 제1항에 정의한 바와 같은 제2 활성 성분의 제제, 및 임의로 상기 제제의 투여를 필요로 하는 환자에게 이를 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여하는 것에 대한 지침서를 포함하는 키트.
N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 염인 제1 활성 성분, 및 비스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 (GR 수용체) 효능제; 항산화제; CCR1 길항제; 케모카인 길항제 (CCR1이 아님); 코르티코스테로이드; CRTh2 길항제; DP1 길항제; 히스톤 데아세틸라제 유도제; IKK2 억제제; COX 억제제; 리폭시게나제 억제제; 류코트리엔 수용체 길항제; MPO 억제제; 무스카린성 길항제; p38 억제제; PDE 억제제; PPARγ 효능제; 프로테아제 억제제; 스타틴; 트롬복산 길항제; 혈관확장제; 또는 ENAC 차단제 (상피성 나트륨-채널 차단제)로부터 선택되며; 단, 무스카린성 길항제가 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; 또는 (R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X (여기서, X가 1가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)가 아닌 것인 제2 활성 성분을 혼합하여 포함하는 제약 조성물.
제약상 허용되는 염 (여기서, 염은 나프탈렌-2-술폰산, 히푸르산, 황산, 4-메틸벤젠술폰산, 나프탈렌-1,5-디술폰산, 벤젠술폰산, 메탄술폰산, 말레산 및 사카린을 포함하는 군으로부터 선택된 산과의 반응에 의해 형성된 염임)의 형태의 N-시클로헥실-N³-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드.
제14항의 염을 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.
요법에 사용하기 위한, 제14항의 염.
호흡기 질환, 특히 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 비염, 기종 또는 기관지염 (예컨대, 만성 폐쇄성 폐 질환 또는 천식; 예를 들면 만성 폐쇄성 폐 질환)의 치료를 위한 의약의 제조에서의 제16항의 염의 용도.
제17항에 있어서, 호흡기 질환이 만성 폐쇄성 폐 질환, 천식, 비염, 기종 또는 기관지염인 용도.
호흡기 질환 또는 질병을 치료하거나, 또는 그 위험을 감소시키는 것이 필요한 환자에게 치료 유효량의 제14항의 염을 투여하는 것을 포함하는, 호흡기 질환 또는 질병을 치료하거나, 또는 그 위험을 감소시키는 방법.
하기 중간체 디시클로헥실암모늄 N-[(벤질옥시)카르보닐]-N-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-β-알라니노에이트.