KR20110010725A - 무스카린성 수용체 길항제 및 β２­아드레날린수용체 효능제를 포함하는 제약 생성물 - Google Patents

무스카린성 수용체 길항제 및 β２­아드레날린수용체 효능제를 포함하는 제약 생성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 호흡기 질환, 예컨대 만성 폐쇄성 폐 질환 및 천식의 치료에 사용하기 위한, 선택된 무스카린성 수용체 길항제인 제1 활성 성분 및 β2-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분을 포함하는, 제약 생성물, 키트 또는 조성물을 제공한다.

Description

무스카린성 수용체 길항제 및 β２­아드레날린수용체 효능제를 포함하는 제약 생성물{PHARMACEUTICAL PRODUCT COMPRISING A MUSCARINIC RECEPTOR ANTAGONIST AND A β2-ADRENOCEPTOR AGONIST}
본 발명은 호흡기 질환, 특히 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 및 천식의 치료에 사용하기 위한 제약 활성 물질의 조합물에 관한 것이다.
폐의 본질적인 기능은 오염물질, 미생물, 알레르겐 및 발암물질을 비롯한 환경에 크게 노출되는 연약한 구조를 요구한다. 생활 양식 선택과 유전자 조성의 상호작용으로부터 생성된 숙주 인자는 상기 노출에 대한 반응에 영향을 미친다. 폐에 대한 손상 또는 감염은 광범위한 호흡기계 질환 (또는 호흡기 질환)을 유발할 수 있다. 수많은 이들 질환은 공중 보건에 매우 중요하다. 호흡기 질환으로는 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 직업성 폐 질환, 폐암, 결핵, 섬유증, 진폐증, 폐렴, 기종, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 및 천식이 있다.
가장 일반적인 호흡기 질환은 천식이다. 천식은 일반적으로 간헐성 기류 폐쇄로 인한 임상적 증상을 갖는 기도의 염증성 장애로서 정의된다. 이는 임상적으로 천명, 호흡곤란 및 기침의 발작을 특징으로 한다. 이는 유병률 및 중증도 면에서 증가하고 있는 것으로 보이는 만성 불구 장애이다. 선진국 인구 중 15％의 어린이 및 5％의 성인이 천식을 겪고 있는 것으로 추산된다. 따라서, 증상을 제어하여, 정상 생활이 가능하고, 동시에 근원적인 염증을 치료하기 위한 기반을 제공하는 데 요법의 목표가 맞추어져야 한다.
COPD는 정상적인 호흡을 방해할 수 있는 광범위한 폐 질환 군을 가리키는 용어이다. 현재의 임상적 지침은 COPD를 완전히 가역적이지 않은 기류 제한을 특징으로 하는 질환 상태로서 정의한다. 기류 제한은 보통 진행성이고, 유해 입자 및 가스에 대한 폐의 비정상적 염증성 반응과 연관되어 있다. 상기 입자 및 가스의 가장 중요한 기여 공급원은, 적어도 서양에서는, 담배 연기이다. COPD 환자는 기침, 숨가쁨 및 과도한 객담의 생성을 비롯한 다양한 증상을 보이며, 상기 증상들은 호중구, 대식세포 및 상피 세포를 비롯한 다수의 세포 구획의 기능이상으로부터 발생한다. COPD에 포함되는 가장 중요한 두 상태는 만성 기관지염 및 기종이다.
만성 기관지염은 점액의 생성 증가 및 기타 변화를 유발하는 기관지의 지속성 염증이다. 상기 환자의 증상은 기침 및 객담 배출이다. 만성 기관지염은 더욱 빈번하고 심각한 호흡성 감염, 기관지 협착 및 막힘, 호흡 곤란 및 호흡 불능을 초래할 수 있다.
기종은 폐포 및/또는 가장 작은 기관지 말단에 영향을 미치는 만성 폐 질환이다. 폐가 탄성을 잃고, 그로 인해 폐의 해당 영역이 확장된다. 이러한 확장된 영역은 신선하지 못한 공기를 가두어, 신선한 공기와 효과적으로 교환되지 못한다. 이로 인해 호흡 곤란을 가져올 수 있고, 산소가 혈액에 불충분하게 전달될 수 있다. 기종 환자에서의 두드러진 증상은 숨가쁨이다.
호흡기 질환의 치료에 사용된 치료제로는 β2-아드레날린수용체 효능제가 있다. 이들 작용제 (베타2 (β2)-효능제로도 알려짐)는 기관지 평활근을 이완시키고, 기도 폐쇄를 감소시키고, 폐 과다팽창을 감소시키고, 숨가쁨을 감소시킴으로써 호흡기 질환의 증상을 경감시키기 위해 사용될 수 있다. 1일 1회 β2 효능제로서 현재 평가하에 있는 화합물은 문헌 [Expert Opin. Investig. Drugs 14 (7), 775-783 (2005)]에 기재되어 있다.
호흡기 질환의 치료에 사용되는 추가 부류의 치료제는 무스카린성 길항제이다. 무스카린성 수용체는 5종의 M1, M2, M3, M4 및 M5를 구성원으로 하는 G-단백질 커플링된 수용체 (GPCR) 군이다. 5종의 무스카린성 아형 중에서, 3종 (M1, M2 및 M3)은 인간 폐 조직에 대해 생리학적 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 부교감신경은 인간 기도에서의 반사 기관지 수축을 위한 주요 경로이고, 아세틸콜린을 무스카린성 수용체 상에 방출하여 기도 긴장을 매개한다. 기도 긴장은 호흡기 장애, 예컨대 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)을 가진 환자에서 증가하고, 이러한 이유로 무스카린성 수용체 길항제는 기도 질환의 치료에 사용하기 위해 개발되어 왔다. 임상적 실무에서 종종 콜린억제제로 불리는 무스카린성 수용체 길항제는 COPD를 가진 개체에 대한 최우선의 요법으로 널리 받아들여져 왔고, 그의 용도는 문헌에서 광범위하게 검토되어 왔다 (예를 들면, 문헌 [Lee et al, Current Opinion in Pharmacology 2001,1, 223-229]).
β2-아드레날린수용체 효능제 또는 무스카린성 길항제를 이용한 치료가 중요한 이득을 낼 수 있는 반면에, 이들 작용제의 효능은 대개 전혀 만족스럽지 못하다. 호흡기 질환, 예컨대 천식 및 COPD의 복잡성의 관점에서, 어느 하나의 매개체가 단독으로 상기 질환을 만족스럽게 치료할 수 있을 것으로 보이지는 않는다. 따라서, COPD 및 천식과 같은 호흡기 질환에 대하여 새로운 요법, 특히 질환을 변형시키는 잠재력을 가진 요법이 의학적으로 절실히 요구된다.
본 발명은
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; 및
(R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X
(여기서, X는 일가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)로부터 선택된 무스카린성 길항제인 제1 활성 성분, 및
β2-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분
을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.
본 발명에 따른 무스카린성 길항제가 β２-아드레날린수용체 효능제와 조합하여 사용된다면, 호흡기 질환의 치료에서 유익한 치료 효과가 관찰될 수 있다. 두 활성 물질이 동시에 (단일 제약 제제로 또는 별도의 제제를 통해), 또는 별도의 제약 제제를 통해 순차적으로 또는 별도로 투여되는 경우에 유익한 효과가 관찰될 수 있다.
본 발명의 제약 생성물은 예를 들어 제1 및 제2 활성 성분을 혼합하여 포함하는 제약 조성물일 수 있다. 대안적으로, 제약 생성물은 예를 들어 제1 활성 성분의 제제 및 제2 활성 성분의 제제, 및 임의로 상기 제제의 투여가 필요한 환자에게 상기 제제를 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여하는 것에 대한 지침서를 포함하는 키트일 수 있다.
본 발명의 조합물에서 제1 활성 성분은
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; 및
(R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X
(여기서, X는 일가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)로부터 선택된 무스카린성 길항제이다.
본 발명의 무스카린성 길항제는 M3 수용체에 대해 높은 효능을 나타내는 공-계류중인 PCT/GB2007/004350 (WO2008/059245)에 기재된 신규한 부류의 화합물의 선택된 구성원이다. 무스카린성 길항제의 명칭은 실시예에 도시된 구조식 및 칸-인골드-프렐로그(Cahn-Ingold-Prelog) 시스템에 따라 할당된 입체화학에 기초하여, MDL 인포메이션 시스템즈 인크.(MDL Information Systems Inc.)에 의해 공급된 바일스타인 오토놈 2000(Beilstein Autonom 2000) 명명 패키지에 의해 생성된 IUPAC 명칭이다. 예를 들어, (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄의 명칭은 하기 구조식으로부터 생성되었다.
Figure pct00001
본 발명의 무스카린성 길항제는 4급 질소 원자 상의 양전하와 회합된 음이온 X를 포함한다. 음이온 X는 일가 또는 다가 (예를 들어, 2가) 산의 임의의 제약상 허용되는 음이온일 수 있다. 본 발명의 한 실시양태에서, X는 무기산의 음이온, 예를 들어 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 술페이트, 톨루엔술포네이트 (토실레이트), 에디실레이트 (에탄-1,2-디술포네이트), 이세티오네이트 (2-히드록시에틸술포네이트), 니트레이트 또는 포스페이트이거나, 또는 적합한 유기산의 음이온, 예를 들어 아세테이트, 말레에이트, 푸마레이트, 시트레이트, 락테이트, 옥살레이트, 올레산, 숙시네이트, 타르트레이트, 메탄술포네이트 (메실레이트), p-톨루엔술포네이트, 벤젠술포네이트, 나파디실레이트 (나프탈렌-1,5-디술포네이트) (예를 들어, 헤미나파디실레이트), 말레에이트 ((Z)-3-카르복시-아크릴레이트), 숙시네이트 (3-카르복시-프로피오네이트), 말레이트 ((S)-3-카르복시-2-히드록시-프로피오네이트), p-아세트아미도벤조에이트, 2,5-디클로로벤젠술포네이트, 1-히드록시-2-나프토에이트 (크시나포에이트) 또는 1-히드록시나프탈렌-2-술포네이트일 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로벤젠술포네이트;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드;
(R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트;
(R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드;
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드; 및
(R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
로부터 선택된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 브로마이드 또는 나파디실레이트 염의 형태이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 나파디실레이트 염의 형태이다. 무스카린성 길항제가 나파디실레이트 염인 경우, 양이온/음이온 비는 다를 수 있고, 예를 들면 1:1 또는 2:1, 또는 1:1과 2:1 사이의 값일 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 길항제는 나파디실레이트 염 양이온/음이온 비가 2:1인 나파디실레이트 염, 즉, 헤미-나파디실레이트의 형태이다. 이 실시양태에 따른 무스카린성 길항제의 예는 다음과 같다:
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트; 및
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 2,5-디클로로벤젠 술포네이트 또는 1-히드록시나프탈렌-2-술포네이트 염의 형태이다. 이 실시양태에 따른 무스카린성 길항제의 예는 다음과 같다:
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트; 및
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로벤젠술포네이트.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 브로마이드 염의 형태이다.
본 발명의 조합물에서 제2 활성 성분은 β２-아드레날린수용체 효능제이다. 본 발명의 β２-아드레날린수용체 효능제는 β２-수용체를 자극하고, 기관지확장제로서 작용할 수 있는 임의의 화합물 또는 물질일 수 있다. 본 명세서의 문맥에서, 달리 언급하지 않는 한, β２-아드레날린수용체 효능제에 대한 임의의 언급은 상기 β２-아드레날린수용체 효능제로부터 형성될 수 있는 활성 염, 용매화물 또는 유도체, 및 그의 임의의 거울상이성질체 및 혼합물을 포함한다. β２-아드레날린수용체 효능제의 가능한 염 또는 유도체의 예는 산 부가염, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 아세트산, 푸마르산, 숙신산, 락트산, 시트르산, 타르타르산, 1-히드록시-2-나프탈렌카르복실산, 말레산, 트리플루오로아세트산, D-만델레이트 및 제약상 허용되는 에스테르 (예를 들어 C1-C6 알킬 에스테르)의 염이다. β２-효능제는 또한 용매화물, 예를 들어 수화물의 형태일 수 있다.
이 실시양태에 따른 제약 생성물에 사용될 수 있는 β２-아드레날린수용체 효능제의 예로는 메타프로테레놀, 이소프로테레놀, 이소프레날린, 알부테롤, 살부타몰 (예를 들어 술페이트로서), 포르모테롤 (예를 들어 푸마레이트로서), 살메테롤 (예를 들어 크시나포에이트로서), 테르부탈린, 오르시프레날린, 비톨테롤 (예를 들어 메실레이트로서), 피르부테롤 또는 인다카테롤이 있다. 이 실시양태의 β２-아드레날린수용체 효능제는 장기 작용성 β２-효능제 (즉, 24 시간 넘게 활성이 지속되는 β２-효능제), 예를 들면 살메테롤 (예를 들어 크시나포에이트로서), 포르모테롤 (예를 들어 푸마레이트로서), 밤부테롤 (예를 들어 히드로클로라이드로서), 카르모테롤 (TA 2005, 2(1H)-퀴놀론, 8-히드록시-5-[1-히드록시-2-[[2-(4-메톡시-페닐)-1-메틸에틸]-아미노]에틸]-모노히드로클로라이드, [R-(R*,R*)]로서 화학적으로 식별되고, 또한 화학초록서비스(Chemical Abstract Service) 등록 번호 137888-11-0으로 식별되고, 미국 특허 제4,579,854호에 개시됨), 인다카테롤 (CAS 번호 312753-06-3; QAB-149), 포름아닐리드 유도체, 예를 들어 WO 2002/76933에 개시된 3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(포르밀아미노)-4-히드록시페닐]-2-히드록시에틸}아미노)헥실]옥시}-부틸)-벤젠술폰아미드, 벤젠술폰아미드 유도체, 예를 들어 WO 2002/88167에 개시된 3-(4-{[6-({(2R)-2-히드록시-2-[4-히드록시-3-(히드록시-메틸)페닐]에틸}아미노)-헥실]옥시}부틸)벤젠술폰아미드, WO 2003/042164 및 WO 2005/025555에 개시된 아릴 아닐린 수용체 효능제, WO 2004/032921 및 US 2005/222144에 개시된 인돌 유도체, 화합물 GSK 159797, GSK 159802, GSK 597901, GSK 642444 및 GSK 678007일 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, β２-아드레날린수용체 효능제는 포르모테롤이다. 포르모테롤에 대한 화학명은 N-[2-히드록시-5-[(1)-1-히드록시-2-[[(1)-2-(4-메톡시페닐)-1-메틸에틸]아미노]에틸]페닐]-포름아미드이다. 포르모테롤의 제조는 예를 들어 WO 92/05147에 기재되어 있다. 이 실시양태의 한 측면에서, β２-아드레날린수용체 효능제는 포르모테롤 푸마레이트이다. 본 발명이 포르모테롤의 모든 광학 이성질체 및 그의 혼합물, 예컨대 라세미체의 사용을 포함한다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 예를 들면, 용어 포르모테롤은 N-[2-히드록시-5-[(1R)-1-히드록시-2-[[(1R)-2-(4-메톡시페닐)-1-메틸에틸]아미노]에틸]페닐]-포름아미드, N-[2-히드록시-5-[(1S)-1-히드록시-2-[[(1S)-2-(4-메톡시페닐)-1-메틸에틸]아미노]에틸]페닐]-포름아미드 및 이러한 거울상이성질체의 혼합물, 예컨대 라세미체를 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, β２-아드레날린수용체 효능제는
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드,
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판아미드, 및
7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온,
또는 그의 제약상 허용되는 염
으로부터 선택된다. 이 실시양태에 따른 β２-아드레날린수용체 효능제는 본원의 실험적 제조 부분에서 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 이 실시양태의 β２-아드레날린수용체 효능제의 명칭은 IUPAC 명칭, ACD 랩스(IUPAC NAME, ACD Labs) 버젼 8 명명 패키지에 의해 생성된 IUPAC 명칭이다.
본 발명의 추가의 실시양태에서, β２-아드레날린수용체 효능제는
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드,
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드, 및
7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 디히드로브로마이드
로부터 선택된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 포르모테롤 (예를 들어 푸마레이트로서)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로벤젠술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 포르모테롤 (예를 들어 푸마레이트로서)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 포르모테롤 (예를 들어 푸마레이트로서)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 포르모테롤 (예를 들어 푸마레이트로서)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디히드로브로마이드)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로벤젠술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디히드로브로마이드)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디히드로브로마이드)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X (여기서, X는 일가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)인 제1 활성 성분, 및 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디히드로브로마이드)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디히드로브로마이드)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로벤젠술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디히드로브로마이드)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디히드로브로마이드)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디히드로브로마이드)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 이 실시양태에 따른 β２-아드레날린수용체 효능제는 WO2008/075026 A1에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 이 실시양태의 추가의 측면에서, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 비스-트리플루오로아세트산 염이다. 이 실시양태의 추가의 측면에서, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디히드로브로마이드 염이다. 이 실시양태의 추가의 측면에서, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디-D-만델레이트 염)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로벤젠술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디-D-만델레이트 염)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디-D-만델레이트 염)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X (여기서, X는 일가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)인 제1 활성 성분, 및 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 제약 생성물을 제공한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 N-시클로헥실-N 3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어 디-D-만델레이트 염)이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, β２-아드레날린수용체 효능제는 인다카테롤이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 인다카테롤이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로벤젠술포네이트이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 인다카테롤이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 인다카테롤이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다. 이 실시양태의 또다른 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X이고, β２-아드레날린수용체 효능제는 인다카테롤이다. 이 실시양태의 한 측면에서, 무스카린성 수용체 길항제는 (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드이다.
본 발명의 조합물은 호흡기 질환의 치료에서 유익한 치료 효과를 제공할 수 있다. 그러한 가능한 효과의 예에는 하기 파라미터 중 하나 이상에서의 개선이 포함된다: 폐로 염증성 세포 유입의 감소, 경도 및 중증의 악화, FEV1 (1초 강제 호기량), 폐활량 (VC), 최대 호기 유량 (PEF), 증상 점수, 및 삶의 질.
본 발명의 무스카린성 길항제 (제1 활성 성분)과 β２-아드레날린수용체 효능제 (제2 활성 성분)는 호흡기 질환의 치료를 위해 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여될 수 있다. 순차적이라는 것은 활성 성분이 임의의 순서로, 하나가 투여된 직후에 다른 하나가 투여되는 것을 의미한다. 이들을 별도로 투여하여도 여전히 목적하는 효과를 가질 수 있지만, 이러한 방식으로 투여하는 경우에는, 일반적으로 4 시간 미만의 간격, 더욱 편리하게는 2 시간 미만의 간격, 보다 편리하게는 30 분 미만의 간격, 가장 편리하게는 10 분 미만의 간격으로 투여할 것이다.
본 발명의 활성 성분은, 정제, 캡슐제, 환제, 분말제, 수성 또는 유성 용액제 또는 현탁액제, 에멀젼 및 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 용액제 또는 현탁액제와 같은 통상의 전신 투여 형태를 이용하여, 경구 또는 비경구 (예를 들어 정맥내, 피하, 근육내 또는 관절내) 투여로 투여될 수 있다. 활성 성분은 또한 용액제, 현탁액제, 에어로졸 및 건조 분말 제제의 형태로 국소적으로 (예를 들어 폐 및/또는 기도로) 투여될 수 있다. 이들 투여 형태는 일반적으로 예를 들어 보조제, 담체, 결합제, 윤활제, 희석제, 안정화제, 완충제, 유화제, 점도-조절제, 계면활성제, 보존제, 향미제 또는 착색제로부터 선택될 수 있는 하나 이상의 제약상 허용되는 성분을 포함할 것이다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 활성 성분의 가장 적절한 투여 방법은 수많은 인자에 따라 좌우된다.
본 발명의 한 실시양태에서, 활성 성분은 별도의 제약 제제를 통해 투여된다. 따라서, 한 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 무스카린성 길항제인 제1 활성 성분의 제제, 및 β２-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분의 제제, 및 임의로 상기 제제의 투여가 필요한 환자에게 상기 제제를 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여하는 것에 대한 지침서를 포함하는 키트를 제공한다.
또다른 실시양태에서, 활성 성분은 단일 제약 조성물을 통해 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가로 본 발명에 따른 무스카린성 길항제인 제1 활성 성분, 및 β２-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분을 혼합하여 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 제약 조성물은 무스카린성 길항제 (제1 활성 성분)와 β２-아드레날린수용체 효능제 (제2 활성 성분) 및 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체를 혼합함으로써 제조될 수 있다. 따라서, 본 발명의 추가의 측면으로, 본 발명에 따른 무스카린성 길항제를 β２-아드레날린수용체 효능제 및 제약상 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하는 것을 포함하는, 제약 조성물의 제조 방법이 제공된다.
본 발명에 따라 투여되는 각 활성 성분의 치료적 투여량은 사용하는 특정 활성 성분, 상기 활성 성분이 투여되는 방식, 및 치료하고자 하는 상태 또는 장애에 따라 달라질 것임이 이해될 것이다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 무스카린성 길항제는 흡입을 통해 투여된다. 흡입을 통해 투여될 때, 본 발명에 따른 무스카린성 길항제의 투여량은 일반적으로 0.1 마이크로그램 (㎍) 내지 5000 ㎍, 0.1 내지 1000 ㎍, 0.1 내지 500 ㎍, 0.1 내지 100 ㎍, 0.1 내지 50 ㎍, 0.1 내지 5 ㎍, 5 내지 5000 ㎍, 5 내지 1000 ㎍, 5 내지 500 ㎍, 5 내지 100 ㎍, 5 내지 50 ㎍, 5 내지 10 ㎍, 10 내지 5000 ㎍, 10 내지 1000 ㎍, 10 내지 500 ㎍, 10 내지 100 ㎍, 10 내지 50 ㎍, 20 내지 5000 ㎍, 20 내지 1000 ㎍, 20 내지 500 ㎍, 20 내지 100 ㎍, 20 내지 50 ㎍, 50 내지 5000 ㎍, 50 내지 1000 ㎍, 50 내지 500 ㎍, 50 내지 100 ㎍, 100 내지 5000 ㎍, 100 내지 1000 ㎍, 또는 100 내지 500 ㎍의 범위일 것이다. 상기 투여량은 일반적으로 1일 1회 내지 4회, 편리하게는 1일 1회 또는 2회, 가장 편리하게는 1일 1회 투여될 것이다.
본 발명의 한 실시양태에서, β２-아드레날린수용체 효능제는 편리하게는 흡입을 통해 투여될 수 있다. 흡입을 통해 투여될 때, β２-효능제의 투여량은 일반적으로 0.1 내지 50 ㎍, 0.1 내지 40 ㎍, 0.1 내지 30 ㎍, 0.1 내지 20 ㎍, 0.1 내지 10 ㎍, 5 내지 10 ㎍, 5 내지 50 ㎍, 5 내지 40 ㎍, 5 내지 30 ㎍, 5 내지 20 ㎍, 5 내지 10 ㎍, 10 내지 50 ㎍, 10 내지 40 ㎍, 10 내지 30 ㎍, 또는 10 내지 20 ㎍의 범위일 것이다. 상기 투여량은 일반적으로 1일 1회 내지 4회, 편리하게는 1일 1회 또는 2회, 가장 편리하게는 1일 1회 투여될 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 무스카린성 길항제인 제1 활성 성분, 및 β２-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하며, 여기서 각각의 활성 성분이 흡입 투여를 위해 제제화된 것인 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 활성 성분은 편리하게는 용액제, 현탁액제, 에어로졸 및 건조 분말 제제의 형태로 흡입을 통해 (예를 들어 폐 및/또는 기도로 국소적으로) 투여된다. 예를 들면, 계량 흡입기 장치를 사용하여 적합한 추진제에 분산된 활성 성분을 추가의 부형제, 예컨대 에탄올, 계면활성제, 윤활제 또는 안정화제와 함께 또는 이들없이 투여할 수 있다. 적합한 추진제로는 탄화수소, 클로로플루오로카본 및 히드로플루오로알칸 (예를 들어, 헵타플루오로알칸) 추진제, 또는 임의의 이러한 추진제의 혼합물을 들 수 있다. 바람직한 추진제는 P134a 및 P227이고, 이들 각각은 단독으로, 또는 기타 추진제 및/또는 계면활성제 및/또는 기타 부형제와 조합하여 사용될 수 있다. 또한, 분무화 수성 현탁액제 또는 바람직하게는 용액제는 적합한 pH 및/또는 강장성 조절제와 함께 또는 이들 없이 단위-투여량 또는 다중-투여량 제제로서 사용될 수 있다.
활성 성분의 건조 분말 제제 및 가압식 HFA 에어로졸은 경구 또는 비강 흡입에 의해 투여될 수 있다. 흡입의 경우, 화합물은 바람직하게는 미분된다. 미분된 화합물은 바람직하게는 10 ㎛ 미만의 질량 중앙 직경을 가지며, 분산제, 예컨대 C8-C20 지방산 또는 그의 염 (예를 들면, 올레산), 담즙염, 인지질, 알킬 사카라이드, 퍼플루오르화 또는 폴리에톡실화 계면활성제, 또는 다른 제약상 허용되는 분산제의 보조에 의해 추진제 혼합물에 현탁될 수 있다.
본 발명의 미분된 화합물을 담체 물질, 예를 들어 단당류, 이당류 또는 다당류, 당 알코올 또는 또다른 폴리올과 함께 혼합하는 것이 가능하다. 적합한 담체는 당, 예를 들어 락토스, 글루코스, 라피노스, 멜레지토스, 락티톨, 말티톨, 트레할로스, 수크로스, 만니톨, 및 전분이다. 대안적으로, 미분된 화합물을 또다른 물질로 코팅할 수 있다. 분말 혼합물은 또한 목적하는 투여량의 활성 화합물을 각각 함유하는 경질 젤라틴 캡슐에 분산될 수 있다.
미분된 분말을 흡입하는 동안 파괴되는 구로 가공하는 것 또한 가능하다. 이 구형 분말은 예를 들면 투여 단위에 의해 목적하는 투여량이 계측된 다음, 환자에 의해 흡입되는, 터부헤일러(Turbuhaler®)로 공지된 다중 투여 흡입기의 약물 저장소에 충전될 수 있다. 이 시스템을 이용하여 활성 성분을 담체 물질과 함께 또는 담체 물질 없이 환자에게 전달한다.
본 발명의 조합물은 호흡관 장애, 예컨대 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 모든 유형의 만성 기관지염 (그와 연관된 호흡곤란 포함), 천식 (알레르기성 및 비-알레르기성; '천명성 유아 증후군'), 성인/급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 만성 기도 폐쇄, 기관지 과민반응, 폐섬유증, 폐기종, 및 알레르기성 비염, 다른 약물 요법, 특히 다른 흡입된 약물 요법으로 인한 기도 과민반응의 악화, 또는 진폐증 (예를 들면 알루미늄증, 탄분증, 석면증, 석분증, 첩모탈락증, 철침착증, 규폐증, 연초폐증 및 면폐증)의 치료 또는 예방에 유용하다.
건조 분말 흡입기는 활성 성분을 단독으로, 또는 제약상 허용되는 담체와 함께, 후자의 경우 미분된 분말로서 또는 규칙 혼합물로서 투여하기 위해 사용될 수 있다. 건조 분말 흡입기는 단일 투여량 또는 다중 투여량일 수 있고, 건조 분말 또는 분말-함유 캡슐을 이용할 수 있다.
계량 흡입기, 분무기 및 건조 분말 흡입기 장치는 널리 공지되어 있고, 이러한 다양한 장치들이 이용가능하다.
본 발명은 추가로 요법에 동시에, 순차적으로 또는 별도로 사용하기 위한 본 발명에 따른 제약 생성물, 키트 또는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 추가로 호흡기 질환, 특히 만성 폐쇄성 폐 질환 또는 천식의 치료에서 본 발명에 따른 제약 생성물, 키트 또는 제약 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 호흡기 질환, 특히 만성 폐쇄성 폐 질환 또는 천식의 치료를 위한 의약의 제조에서의 본 발명에 따른 제약 생성물, 키트 또는 제약 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 추가로
(a) (치료적으로 유효한) 용량의, 본 발명에 따른 무스카린성 수용체 길항제인 제1 활성 성분, 및
(b) (치료적으로 유효한) 용량의, β２-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분
을 호흡기 질환의 치료가 필요한 환자에게 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여하는 것을 포함하는, 호흡기 질환의 치료 방법을 제공한다.
본 명세서의 문맥에서, 용어 "요법"은 또한 달리 특정하게 언급하지 않는 한은 "예방"까지도 포함한다. 용어 "치료적" 및 "치료적으로"도 이와 같이 해석되어야 한다. 예방은 특히 해당 상태 또는 장애의 사전 에피소드를 경험하였거나, 또는 해당 상태 또는 장애에 걸릴 위험이 높아진 것으로 생각되는 사람의 치료와 관련된 것으로 예상된다. 특정 상태 또는 장애가 발생할 위험이 있는 사람으로는 일반적으로 상기 상태 또는 장애의 가족력이 있는 사람, 또는 유전자 시험 또는 스크리닝에 의해 상기 상태 또는 장애가 특히 발생하기 쉬운 것으로 확인된 사람이 포함된다.
본 발명의 제약 생성물, 키트 또는 조성물은 임의로 호흡기 질환의 치료에 사용하기에 적합한 물질인 제3 활성 성분을 포함할 수 있다. 본 발명에 도입될 수 있는 제3 활성 성분의 예로는 포스포디에스테라제 억제제, 케모카인 수용체 기능의 조정제, 키나제 기능의 억제제, 프로테아제 억제제, 스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 효능제, 및 비-스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 효능제가 있다.
이 실시양태에 따른 제3 활성 성분으로서 사용될 수 있는 포스포디에스테라제 억제제의 예로는 PDE4 억제제, 예컨대 이소형 PDE4D 억제제, PDE3 억제제 및 PDE5 억제제가 있다. 그 예로는 하기 화합물이 있다:
(Z)-3-(3,5-디클로로-4-피리딜)-2-[4-(2-인다닐옥시-5-메톡시-2-피리딜]프로펜니트릴,
N-[9-아미노-4-옥소-1-페닐-3,4,6,7-테트라히드로피롤로[3,2,1-jk][1,4]벤조디아제핀-3(R)-일]피리딘-3-카르복스아미드 (CI-1044),
3-(벤질옥시)-1-(4-플루오로벤질)-N-[3-(메틸술포닐)페닐]-1H-인돌-2-카르복스아미드,
(1S-엑소)-5-[3-(바이시클로[2.2.1]헵트-2-일옥시)-4-메톡시페닐]테트라히드로-2(1H)-피리미디논 (아티조람),
N-(3,5-디클로로-4-피리디닐)-2-[1-(4-플루오로벤질)-5-히드록시-1H-인돌-3-일]-2-옥소아세트아미드 (AWD-12-281),
β-[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]-1,3-디히드로-1,3-디옥소-2H-이소인돌-2-프로판아미드 (CDC-801),
N-[9-메틸-4-옥소-1-페닐-3,4,6,7-테트라히드로피롤로[3,2,1-jk][1,4]벤조디아제핀-3(R)-일]피리딘-4-카르복스아미드 (CI-1018),
시스-[4-시아노-4-(3-시클로펜틸옥시-4-메톡시페닐)시클로헥산-1-카르복실산 (실로밀라스트),
8-아미노-1,3-비스(시클로프로필메틸)크산틴 (시팜필린),
N-(2,5-디클로로-3-피리디닐)-8-메톡시-5-퀴놀린카르복스아미드 (D-4418),
5-(3,5-디-tert-부틸-4-히드록시벤질리덴)-2-이미노티아졸리딘-4-온 (다르부펠론),
2-메틸-1-[2-(1-메틸에틸)피라졸로[1,5-a]피리딘-3-일]-1-프로판 (이부딜라스트),
2-(2,4-디클로로페닐카르보닐)-3-우레이도벤조푸란-6-일 메탄술포네이트 (리리밀라스트),
(-)-(R)-5-(4-메톡시-3-프로폭시페닐)-5-메틸옥사졸리딘-2-온 (메소프람),
(-)-시스-9-에톡시-8-메톡시-2-메틸-1,2,3,4,4a,10b-헥사히드로-6-(4-디이소프로필아미노카르보닐페닐)-벤조[c][1,6]나프티리딘 (푸마펜트린),
3-(시클로프로필메톡시)-N-(3,5-디클로로-4-피리딜)-4-(디플루오로메톡시)벤즈아미드 (로플루밀라스트),
로플루밀라스트의 N-옥사이드,
5,6-디에톡시벤조[b]티오펜-2-카르복실산 (티베넬라스트),
2,3,6,7-테트라히드로-2-(메시틸이미노)-9,10-디메톡시-3-메틸-4H-피리미도[6,1-a]이소퀴놀린-4-온 (트레퀸신), 및
3-[[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]-메틸]-N-에틸-8-(1-메틸에틸)-3H-퓨린-6-아민 (V-11294A).
이 실시양태에 따른 제3 활성 성분으로서 사용될 수 있는 케모카인 수용체 기능의 조정제의 예로는 CCR3 수용체 길항제, CCR4 수용체 길항제, CCR5 수용체 길항제 및 CCR8 수용체 길항제가 있다.
이 실시양태에 따른 제3 활성 성분으로서 사용될 수 있는 키나제 기능의 억제제의 예로는 p38 키나제 억제제 및 IKK 억제제가 있다.
이 실시양태에 따른 제3 활성 성분으로서 사용될 수 있는 프로테아제 억제제의 예로는 호중구성 엘라스타제의 억제제 또는 MMP12의 억제제가 있다.
이 실시양태에 따른 제3 활성 성분으로서 사용될 수 있는 스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 효능제의 예로는 부데소니드, 플루티카손 (예를 들어 프로피오네이트 에스테르로서), 모메타손 (예를 들어 푸로에이트 에스테르로서), 베클로메타손 (예를 들어 17-프로피오네이트 또는 17,21-디프로피오네이트 에스테르로서), 시클레소니드, 로테프레드놀 (예를 들어 에타보네이트로서), 에티프레드놀 (예를 들어 디클로아세테이트로서), 트리암시놀론 (예를 들어 아세토니드로서), 플루니솔리드, 조티카손, 플루목소니드, 로플레포니드, 부틱소코르트 (예를 들어 프로피오네이트 에스테르로서), 프레드니솔론, 프레드니손, 티프레단, 스테로이드 에스테르, 예를 들어 6α,9α-디플루오로-17α-[(2-푸라닐카르보닐)옥시]-11β-히드록시-16α-메틸-3-옥소-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르, 6α,9α-디플루오로-11β-히드록시-16α-메틸-3-옥소-17α-프로피오닐옥시-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-(2-옥소-테트라히드로-푸란-3S-일) 에스테르 및 6α,9α-디플루오로-11β-히드록시-16α-메틸-17α-[(4-메틸-1,3-티아졸-5-카르보닐)옥시]-3-옥소-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르, DE 4129535에 따른 스테로이드 에스테르, WO 2002/00679, WO 2005/041980에 따른 스테로이드, 또는 스테로이드 GSK 870086, GSK 685698 및 GSK 799943이 있다.
이 실시양태에 따른 제3 활성 성분으로서 사용될 수 있는 비-스테로이드성 글루코코르티코이드 수용체 효능제의 예로는 WO2006/046916에 기재된 것이 있다.
<도면의 간단한 설명>
본 발명은 다음의 비제한적 예에 의해 설명된다. 실시예에서는 하기 도면이 제시되어 있다:
도 1: 무스카린성 길항제 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 결정 형태 A (실시예 1)의 X-선 분말 회절 패턴.
도 2: 무스카린성 길항제 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 결정 형태 A (실시예 2)의 X-선 분말 회절 패턴.
도 3: 무스카린성 길항제 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 결정 형태 A (실시예 3)의 X-선 분말 회절 패턴.
도 4: 무스카린성 길항제 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 결정 형태 A (실시예 4)의 X-선 분말 회절 패턴.
도 5: 무스카린성 길항제 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트 결정 형태 A (실시예 5)의 X-선 분말 회절 패턴.
도 6: 무스카린성 길항제 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로-벤젠술포네이트 결정 형태 A (실시예 6)의 X-선 분말 회절 패턴.
도 7: 무스카린성 길항제 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 결정 형태 A (실시예 7)의 X-선 분말 회절 패턴.
도 8: 무스카린성 길항제 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 결정 형태 A (실시예 14)의 X-선 분말 회절 패턴.
도 9: 시험관내 기니아 피그 기관에서 인다카테롤 (10 nM), (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (화합물 Z) (1 nM), 및 인다카테롤 (10 nM)과 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (화합물 Z) (1 nM)의 조합물에 대한 이완율 (％).
도 10: 시험관내 기니아 피그 기관에서 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (화합물 V) (10 nM), (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (화합물 Z) (1 nM), 및 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (화합물 V) (10 nM)와 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (화합물 Z) (1 nM)의 조합물에 대한 이완율 (％).
도 11: 시험관내 기니아 피그 기관에서 N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 (화합물 W) (1 nM), (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (화합물 Z) (1 nM), 및 N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염 (화합물 W) (1 nM)과 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (화합물 Z) (1 nM)의 조합물에 대한 이완율 (％).
무스카린성 길항제의 제조
본 발명에 따른 무스카린성 길항제는 다음과 같이 제조될 수 있다. 본원에 기술된 것에 대해 대안적인 염은 기술된 것과 유사한 방법을 이용하여 통상의 화학에 따라 제조될 수 있다.
무스카린성 길항제 제조를 위한 일반적인 실험의 상세설명
달리 언급하지 않는 한, 하기 일반적 조건이 무스카린성 길항제의 제조에서 이용되었다
달리 명시하지 않는 한, 모든 반응은 질소 분위기 하에서 수행하였다.
실시예에서, NMR 스펙트럼은 300 또는 400 또는 500 MHz의 양성자 주파수에서의 배리안 유니티 이노바(Varian Unity Inova) 분광계, 또는 400 또는 500 MHz의 양성자 주파수에서의 브루커(Bruker) DRX 분광계, 또는 600 MHz의 양성자 주파수에서 브루커 애반스(Bruker Avance) 분광계, 또는 300 MHz의 양성자 주파수에서 브루커 애반스 DPX 300 분광계 상에서 측정하였다. MS 스펙트럼은 애질런트(Agilent) 1100 MSD G1946D 분광계 또는 휴렛 패커드(Hewlett Packard) HP1100 MSD G1946A 분광계 또는 워터스 마이크로매스(Waters Micromass) ZQ2000 분광계 상에서 측정하였다. 명칭은 MDL에 의해 공급된 오토놈 2000 (버젼 4.01.305) 소프트웨어를 사용하여 생성하였다.
XRPD 데이터는 패널리티컬 큐비엑스 프로(PANalytical CubiX PRO) 기기 또는 패널리티컬 엑스퍼트 MPD(PANalytical X-Pert MPD) 기기를 이용하여 수집하였다.
X-선 분말 회절 - XRPD - 패널리티컬 큐비엑스 프로
데이터는 패널리티컬 큐비엑스 프로 기기를 이용하여 0.02° 증분 당 100-초 노출을 갖는 스캔 범위 2° 내지 40° 2θ에 걸쳐 θ-θ 구성으로 수집하였다. X-선을 45 kV 및 40 mA에서 작동하는 구리 미세 장초점 튜브에 의해 생성하였다. 구리 X-선의 파장은 1.5418 Å였다. 화합물 약 2 mg이 놓인 0 백그라운드 홀더 상에 데이터를 수집하였다. 상기 홀더는, 비-회절면을 따라 절단한 후에 광학 무광칠로 연마처리한 규소의 단일 결정으로부터 제조하였다. 이 표면 상의 X-선 입사를 브래그 소광에 의해 무효화시켰다.
X-선 분말 회절 - 패널리티컬 엑스퍼트
데이터는 패널리티컬 엑스퍼트 기기를 이용하여 0.02° 증분 당 100-초 노출을 갖는 스캔 범위 2° 내지 40° 2θ에 걸쳐 2θ-θ 구성으로 수집하였다. X-선을 45 kV 및 40 mA에서 작동하는 구리 미세 장초점 튜브에 의해 생성하였다. 구리 X-선의 파장은 1.5418 Å였다. 화합물 약 2 mg이 놓인 0 백그라운드 홀더 상에 데이터를 수집하였다. 상기 홀더는, 비-회절면을 따라 절단한 후에 광학 무광칠로 연마처리한 규소의 단일 결정으로부터 제조하였다. 이 표면 상의 X-선 입사를 브래그 소광에 의해 무효화시켰다.
시차 주사 열량 (DSC) 온도기록은 알루미늄 팬 및 구멍뚫린 덮개가 장착된 TA 인스트루먼츠(TA Instruments) Q1000 DSC 시차 주사 열량계를 이용하여 측정하였다. 샘플 중량은 0.5 내지 5 mg로 다양하였다. 질소 기체 흐름 (50 mL/분) 및 10℃/분의 일정 비율의 온도 증가에서 25 내지 300℃의 연구 온도 하에 상기 절차를 수행하였다.
열중량 분석 (TGA) 온도기록은 백금 팬이 장착된 TA 인스트루먼츠 Q500 TGA 열중량 분석기를 이용하여 측정하였다. 샘플 중량은 1 내지 5 mg로 다양하였다. 질소 기체 흐름 (60 mL/분) 및 10℃/분의 일정 비율의 온도 증가에서 25 내지 200-300℃ 이하의 연구 온도 하에 상기 절차를 수행하였다.
중량측정 증기 흡착 (GVS) 프로파일은 표면 측정 시스템 동적 증기 흡착 DVS-1, 또는 DVS 어드밴티지 GVS 기기를 이용하여 측정하였다. 약 1 내지 5 mg의 고체 샘플을 유리 또는 와이어 메쉬 용기에 넣고, 샘플 중량을 이중 사이클 단계 방법 (10％ RH 단계의 40→90→0→90→0％ 상대 습도 (RH)) 동안에 기록하였다.
실험 섹션에서의 사용된 약어:
Aq = 수성
DCE = 1,2-디클로로에탄
DCM = 디클로로메탄
DMF = 디메틸포름아미드
DMSO = 디메틸술폭시드
EtOAc = 에틸 아세테이트
EtOH = 에탄올
DSC = 시차 주사 열량계
GVS = 중량측정 증기 흡착
TGA = 열중량 분석
XRPD = X-선 분말 회절
HATU = O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
MeCN = 아세토니트릴
MeOH = 메탄올
RT = 실온
Rt = 체류 시간
THF = 테트라히드로푸란
Satd = 포화
본원에 기재된 무스카린성 길항제 및 이의 제조에서 사용된 중간체는 실시예에 도시된 구조식 및 칸-인골드-프렐로그 시스템에 따라 할당된 입체화학에 기초하여, MDL 인포메이션 시스템즈 인크.에 의해 공급된 바일스타인 오토놈 2000 명명 패키지에 의해 생성된 IUPAC 명칭을 부어받았다.
실시예 1: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
a) 1-페닐-시클로헵탄올
Figure pct00002
질소 환경 하에 무수 테트라히드로푸란 (60 mL) 중 마그네슘 (1.2 g)에 요오드의 결정에 이어 브로모벤젠 (7.85 g)을, 반응이 일정한 환류를 유지하는 속도로 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 시클로헵타논 (4.48 g)을 조심스럽게 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, 포화 수성 염화암모늄 (10 mL)을 첨가하고, 반응물을 물 (100 mL) 및 이소헥산 (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 증발시켜 부제 화합물을 오일로서 수득하였다 (7.6 g).
Figure pct00003
b) 1-메톡시-1-페닐-시클로헵탄
Figure pct00004
1-페닐-시클로헵탄올 (실시예 1a) (7.6 g)을 테트라히드로푸란 (100 mL) 중에 용해시키고, 수소화나트륨 (오일 중 60％, 2.0 g)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 5분 동안 교반하고, 요오도메탄 (7.1 g)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 밤새 유지한 다음, 추가 분량의 수소화나트륨 (오일 중 60％, 2.0 g) 및 요오도메탄 (7.1 g)을 첨가하고, 반응물을 70시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 물 (100 mL) 및 이소헥산 (100 mL) 사이에 분배하고, 유기층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 증발시켜 부제 화합물을 수득하였다 (11.31 g).
Figure pct00005
c) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산
Figure pct00006
칼륨 (2.62 g) 및 나트륨 (0.52 g)을 30분 동안 질소 환경 하에 120℃에서 광유 중에서 함께 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 오일을 제거하고, 에테르 (100 mL)로 교체하고, 1-메톡시-1-페닐-시클로헵탄 (실시예 1b) (4.9 g)을 첨가하고, 반응물을 질소하에 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 -78℃로 냉각시키고, 고체 이산화탄소 (약 20 g)를 교반하면서 첨가하였다. 반응물이 실온으로 가온되도록 하고, 물 (150 mL)을 질소 환경 하에 조심스럽게 첨가하였다. 수성층을 분리하고, 진한 염산으로 중성화시키고, 디에틸 에테르 (150 mL)로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 증발시켜 부제 화합물을 오일로서 수득하였다 (4.15 g).
Figure pct00007
d) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르
Figure pct00008
1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (실시예 1c) (4.15 g)을 메탄올 (150 mL) 및 진한 염산 (5 mL) 중에서 24시간 동안 환류시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 에테르 (100 mL) 중에 용해시키고, 이것을 물 (100 mL), 포화 중탄산나트륨 (50 mL) 및 물 (100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 증발시켜 부제 화합물을 오일로서 수득하였다 (3.5 g).
Figure pct00009
e) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르
Figure pct00010
1-페닐-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르 (실시예 1d) (1.0 g) 및 (R)-퀴누클리딘-3-올 (0.39 g)을 딘-스탁(Dean and Stark) 장치에서 나트륨 (약 5 mg)을 함유한 헵탄 (50 mL) 중에서 24시간 동안 환류시켰다. 헵탄 (20 mL)을 톨루엔 (20 mL)으로 교체하고, 3일 동안 환류를 계속하였다. 반응물을 물 (50 mL) 및 에테르 (50 mL) 사이에 분배하고, 에테르 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 증발시켰다. 조 생성물을 에틸 아세테이트/트리에틸아민 (99/1)으로 용리하는 실리카 상의 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 오일로서 수득하였다 (0.83 g).
Figure pct00011
f) 2-브로모-N-피라진-2-일-아세트아미드
Figure pct00012
디클로로메탄 (25 mL) 중 피라진-2-일아민 (1.878 g) 및 탄산칼륨 (8.19 g)의 교반된 현탁액에 2-브로모아세틸 브로마이드 (1.72 mL)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반한 다음, 물 (2×50 mL)로 세척하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 농축하여 부제 화합물을 고체로서 수득하였다 (0.700 g).
Figure pct00013
실시예 1: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 결정 형태 A
Figure pct00014
1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (실시예 1e) (0.200 g) 및 2-브로모-N-피라진-2-일-아세트아미드 (실시예 1f) (0.132 g)를 아세토니트릴 (1 mL) 중에 용해시키고, 밤새 그대로 정치시켰다. 생성된 고체를 여과하고, 아세토니트릴 (2×1 mL) 및 디에틸 에테르 (3 mL)로 세척하였다. 건조된 고체를 아세톤 (15 mL) 및 디에틸 에테르 (10 mL)로부터 재결정화하여 표제 화합물을 수득하였다 (0.240 g).
Figure pct00015
실시예 1: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 결정 형태 A의 분석
상기 기재된 절차에 의해 수득된 결정질 실시예 1 결정 형태 A의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 또는 큐비엑스 시스템), DSC 및 TGA에 의해 분석하였다.
DSC에 의해 측정된 실시예 1 브로마이드 형태 A의 용융 온도는 202℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. TGA에 의한 용융 이전에 관찰된 중량 손실은 2.7％였다. GVS 측정은 80％ RH (±0.2％)에서 3％ 중량 증가 (％w/w)를 제공하였다.
실시예 1 브로마이드 형태 A의 XRPD 스펙트럼은 도 1에 제시하였다.
실시예 2: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
a) 2-클로로-N-피라진-2-일-아세트아미드
Figure pct00016
디클로로메탄 (50 mL) 중 피라진-2-일아민 (4.6 g) 및 탄산칼륨 (20.05 g)의 교반된 현탁액에 2-클로로아세틸 클로라이드 (3.85 mL)를 첨가하였다. 반응물을 밤새 교반한 다음, 물 (2×50 mL)로 세척하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 농축하여 고체를 얻고, 이것을 에틸 아세테이트/이소헥산 (5:95)으로 용리하는 실리카 상의 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 부제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (2.2 g).
Figure pct00017
실시예 2: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 결정 형태 A
Figure pct00018
1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (실시예 1e) (0.55 g) 및 2-클로로-N-피라진-2-일-아세트아미드 (실시예 2a) (0.288 g)를 아세토니트릴 (4 mL) 중에서 밤새 교반하였다. 추가의 아세토니트릴 (14 mL)을 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 고체를 여과로 수집하고, 디에틸 에테르 (4×10 mL)로 세척하여 표제 화합물을 고체로서 수득하였다 (0.735 g).
Figure pct00019
실시예 2: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 결정 형태 A의 분석
상기 기재된 절차에 의해 수득된 결정질 실시예 2 결정 형태 A의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 또는 큐비엑스 시스템), DSC 및 TGA에 의해 분석하였다.
DSC에 의해 측정된 실시예 2 클로라이드 형태 A의 용융 온도는 215℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. GVS 측정은 80％ RH (±0.2％)에서 9％ 중량 증가 (％w/w)를 제공하였다.
실시예 2 클로라이드 형태 A의 XRPD 스펙트럼은 도 2에 제시하였다.
실시예 3: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
a) 시클로헵틸-페닐-메타논
Figure pct00020
페닐마그네슘 브로마이드 (디에틸 에테르 중 3.0 M 용액) (271 mL)를 디에틸 에테르 229 mL 중 시클로헵탄카르보니트릴 (50 g)의 교반된 (오버헤드 교반기) 용액에 질소 하에서 부드러운 환류를 유지하도록 하는 속도로 적가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 환류에서 3시간 동안 가열하였다. TLC는 출발 물질이 반응 혼합물 중에 존재하지 않음을 나타냈다. 반응 혼합물이 실온으로 냉각되도록 하고, 질소 하에 밤새 정치시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 온도를 20℃ 미만으로 유지하면서 4 N HCl (aq) 102 mL로 적가 처리하였다. 4 N 황산 (203 mL)을 출발시 빠르게 적가한 다음, 종결까지 더 신속하게 적가하였다. 얼음 조를 제거하고, 디에틸 에테르를 증발 제거하였다. 반응 혼합물을 80 내지 90℃에서 3.5시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각되도록 하고, 밤새 정치시켰다. 혼합물을 에테르 (대략 450 mL) 및 물 (100 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성층을 에테르 (2×400 mL)로 추출하였다. 유기층을 합하고, 포화 수성 탄산수소나트륨 (600 mL) 및 염수 (600 mL)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 부제 화합물을 오렌지색 액체로서 수득하였다 (86.5 g).
Figure pct00021
b) (1-클로로-시클로헵틸)-페닐-메타논
Figure pct00022
술푸릴 클로라이드 (210 mL)를 0℃에서 대략 1시간에 걸쳐 순수 시클로헵틸-페닐-메타논 (실시예 3a) (86.5 g)에 적가하였다. 기체 발생 및 발열이 관찰되었다. 상기 첨가 동안 내부 온도를 15℃ 미만으로 유지하였고, 발생된 기체를 10.2 M NaOH 수용액에 통과시킴으로써 분산시켰다. 반응 혼합물을 밤새 환류로 가열하였다. TLC는 출발 물질이 남아있지 않음을 나타냈다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 교반하면서 얼음 (1 L) 상에 서서히 부었다. 층들을 분리하고, 수성층을 에테르 (2×400 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (600 mL), 포화 수성 탄산수소나트륨 (600 mL) 및 염수 (600 mL)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켜 부제 화합물을 갈색 오일로서 수득하였다 (100 g).
Figure pct00023
c) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산
Figure pct00024
디옥산 750 mL 중 (1-클로로-시클로헵틸)-페닐-메타논 (실시예 3b) (100 g)의 용액을 물 (85 mL) 중 질산은 (137 g)의 흐린 용액으로 빠르게 적가 처리하여 침전물 형성을 야기하였다. 반응 혼합물을 4.5시간 동안 75℃로 가열하였다. TLC는 출발 물질이 남아있지 않음을 보여주었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음 여과하고, 대략 200 mL로 농축하였다. 물 (200 mL) 및 에테르 (300 mL)를 첨가하고, 층들을 분리하였다. 수성층을 에테르 (2×250 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 10％ 수성 탄산나트륨 (3×250 mL)으로 추출하였다. 합한 염기성 추출물을 40분에 걸쳐 90℃까지 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, 진한 HCl (aq)로 산성화시켰다. 생성된 갈색 고체를 여과 제거하고, 물 (×2)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켰다. 고온 에탄올 (40 mL)로부터 결정화시켜 부제 화합물을 옅은 갈색 결정으로서 수득하였다 (9.83 g).
Figure pct00025
d) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르
Figure pct00026
트리메틸실릴 디아조메탄 2.0 M 용액 (29.2 mL)을 질소 분위기 하에 메탄올 (85 mL) 및 톨루엔 (300 mL) 중 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (실시예 3c) (9.8 g)의 용액에 적가하였다. 45분 후의 TLC는 출발 물질이 존재하지 않음을 나타냈다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고, 조 생성물을 0-10％ 에틸 아세테이트/시클로헥산으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 관련된 분획을 합하고, 생성물을 옅은 황색 오일로서 수득하였다 (9.25 g).
Figure pct00027
e) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르
Figure pct00028
톨루엔 (90 mL) 중 (R)-(3)-퀴누클리디놀 (10.13 g) 및 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르 (실시예 3d) (9.25 g)의 용액을 딘-스탁 트랩으로 30분 동안 환류로 가열하였다. 반응 혼합물이 실온으로 냉각되도록 하고, 상기 트랩을 제거하였다. 수소화나트륨 (광유 중 60％ 분산액) (3.19 g)을 질소 하에 조금씩 나누어 적가하고, 반응 혼합물을 질소 하에 밤새 환류로 가열하였다. TLC는 출발 물질이 남아있지 않음을 보여주었다. 반응 혼합물을 얼음 조에서 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (200 mL) 및 물 (200 mL)로 희석하였다. 혼합물을 여과하고, 층들을 분리하였다. 수성층을 에틸 아세테이트 (2×250 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 생성물을 얻고, 이것을 1％ 트리에틸아민을 함유한 EtOAc로 용리하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 관련된 분획을 합하고 증발시켜 부제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다 (7.63 g).
Figure pct00029
f) 2-클로로-N-피리딘-2-일-아세트아미드
Figure pct00030
무수 디클로로메탄 (10.6 mL) 중 2-아미노-피리딘 (1.0 g)의 용액을 질소 하에 0℃에서 트리에틸아민 (1.63 mL)으로 처리한 다음, 클로로아세틸 클로라이드 (0.93 mL)를 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물이 실온까지 가온되도록 하였다. 2시간 후에, 혼합물을 디클로로메탄 및 물 사이에 분배하였다. 상들을 분리하고, 수성층을 디클로로메탄 (×2)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 얻고, 0-30％ 에틸 아세테이트/시클로헥산으로 용리하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하였다. 관련된 분획을 합하고, 증발시켜 표제 화합물을 핑크색 고체로서 얻었다 (1.43 g). 40-60 석유 에테르로 연화처리함으로써 추가 정제를 달성하여 목적 생성물 1.15 g을 얻었다. 환류 아세토니트릴 (2.4 mL)로부터 0.94 g 분량의 물질을 결정화시켜 부제 화합물을 핑크색 고체로서 얻었다 (0.73 g).
Figure pct00031
실시예 3: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 결정 형태 A
Figure pct00032
아세토니트릴 (5 mL) 중 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (실시예 3e) (254 mg)의 용액을 2-클로로-N-피리딘-2-일-아세트아미드 (실시예 3f) (46 mg)로 처리하고, 생성된 황색 용액을 실온에서 밤새 교반하고, 그 동안 고체를 침전시켰다. 반응 혼합물을 2 mL의 에테르로 처리하고, 고체를 여과 제거하고, 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 회백색 고체로서 얻었다 (217 mg). 환류 아세토니트릴 (20 mL)로부터의 결정화에 의해 정제를 달성하여 표제 화합물 98 mg을 백색 결정질 고체로서 얻었다.
Figure pct00033
실시예 3: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 결정 형태 A의 분석
상기 기재된 절차에 의해 수득된 결정질 실시예 3 결정 형태 A의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 시스템), DSC 및 TGA로 분석하였다.
DSC에 의해 측정된 실시예 3 클로라이드 형태 A의 용융 온도는 239℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. TGA에 의한 용융 이전에 관찰된 중량 손실은 무시할 만하였다. GVS 측정은 80％ RH (±0.2％)에서 무시할만한 중량 증가 (％w/w)를 제공하였다.
실시예 3 클로라이드 형태 A의 XRPD 스펙트럼은 도 3에 제시하였다.
실시예 4: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
a) 2-브로모-N-피리딘-2-일-아세트아미드
Figure pct00034
실온에서 무수 THF (98 mL) 중 2-아미노피리딘 (48.8 mmol)의 용액에 Et3N (58.6 mmol) 및 브로모아세틸 브로마이드 (58.6 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 포화 NaHCO3 (aq)으로 켄칭하였다. EtOAc를 혼합물에 첨가하고, 층들을 분리하였다. 수성상을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기물을 건조시키고 (MgSO4), 진공하에 갈색 고체로 농축시켰다. 1-2％ MeOH/디클로로메탄으로 용리하는 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 부제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (1.14 g).
Figure pct00035
실시예 4: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 결정 형태 A
Figure pct00036
1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (실시예 3e) (0.79 mmol) 및 2-브로모-N-피리딘-2-일-아세트아미드 (실시예 4a) (0.87 mmol)를 실온에서 2.5일 동안 무수 MeCN 중에서 함께 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시키고, 황색 고체를 2-8％ MeOH/디클로로메탄으로 용리하는 플래쉬 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 황갈색 고체를 얻었다. 상기 고체를 환류 MeCN 중에 용해시키고, 용액이 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 결정을 여과 제거하고, 소량의 저온 MeCN으로 세척하여 표제 화합물을 백색 결정질 고체로서 얻었다 (211 mg).
Figure pct00037
실시예 4: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 결정 형태 A의 분석
상기 기재된 절차에 의해 수득된 결정질 실시예 4 결정 형태 A의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 시스템), DSC 및 TGA로 분석하였다.
DSC에 의해 측정된 실시예 4 브로마이드 형태 A의 용융 온도는 230℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. TGA에 의한 용융 이전에 관찰된 중량 손실은 무시할 만하였다. GVS 측정은 80％ RH (±0.2％)에서 무시할만한 중량 증가 (％w/w)를 제공하였다.
실시예 4 브로마이드 형태 A의 XRPD 스펙트럼은 도 4에 제시하였다.
실시예 5: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트 결정 형태 A
Figure pct00038
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 (실시예 2) (100 mg) 및 1-히드록시나프탈렌-2-술폰산 칼륨 염 (200 mg)을 분별 깔때기에서 물 (10 mL) 및 디클로로메탄 (25 mL) 사이에 분배하였다. 디클로로메탄을 분리하고, 물 (10 mL)로 세척하고, 유기층을 건조시키고, 고체로 증발시키고, 이를 아세토니트릴로부터 재결정화하여 표제 화합물을 고체로서 수득하였다 (97 mg).
Figure pct00039
실시예 5: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트 결정 형태 A의 분석
상기 기재된 절차에 의해 수득된 결정질 실시예 5 결정 형태 A의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 또는 큐비엑스 시스템) 및 DSC로 분석하였다.
DSC에 의해 측정된 실시예 5 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트 형태 A의 용융 온도는 193℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. GVS 측정은 80％ RH (±0.2％)에서 거의 0.3％ (％w/w)의 무시할만한 중량 증가 (％w/w)를 제공하였다.
실시예 5 1-히드록시-나프탈렌-2-술포네이트 형태 A의 XRPD 스펙트럼은 도 5에 제시하였다.
실시예 6: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로-벤젠술포네이트 결정 형태 A
Figure pct00040
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 (실시예 2) (100 mg)를 분별 깔때기에서 물 (10 mL) 및 디클로로메탄 (25 mL) 사이에 현탁시켰다. 2,5-디클로로벤젠술폰산 나트륨 염의 수용액 (0.1 M, 8 mL)을 첨가하고, 혼합물을 진탕시켰다. 디클로로메탄을 분리하고, 물 (10 mL)로 세척하고, 유기층을 건조시키고, 고체로 증발시키고, 이것을 아세토니트릴/디에틸 에테르로부터 재결정화하여 표제 화합물을 수득하였다 (81 mg).
Figure pct00041
실시예 6: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 2,5-디클로로-벤젠술포네이트 결정 형태 A의 분석
상기 기재된 절차에 의해 수득된 결정질 실시예 6 결정 형태 A의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 시스템) 및 DSC로 분석하였다.
DSC에 의해 측정된 실시예 6 2,5-디클로로-벤젠술포네이트 형태 A의 용융 온도는 158℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. GVS 측정은 80％ RH (±0.2％)에서 거의 0.2％ (％w/w)의 무시할만한 중량 증가 (％w/w)를 제공하였다.
실시예 6 2,5-디클로로-벤젠술포네이트 형태 A의 XRPD 스펙트럼은 도 6에 제시하였다.
실시예 7: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 결정 형태 A
Figure pct00042
디클로로메탄 (25 mL) 중 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 (실시예 2) (100 mg)를 나프탈렌-1,5-디술폰산 디 나트륨 염의 수용액 (100 mL 중 중탄산나트륨 1.68 g에 산 2.88 g을 첨가함으로써 제조됨) 4×10 mL로 세척하였다. 유기상을 수집하고 건조시키고 (MgSO4), 그 후 농축 건조시켰다. 잔류물을 아세톤 (1 mL) 및 디에틸 에테르 (3 mL) 중에 용해시키고, 용액이 결정화되도록 하여 표제 화합물을 수득하였다 (78 mg).
Figure pct00043
실시예 7: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 결정 형태 A의 분석
상기 기재된 절차에 의해 수득된 결정질 실시예 7 결정 형태 A의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 또는 큐비엑스 시스템) 및 DSC로 분석하였다.
DSC에 의해 측정된 실시예 7 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 형태 A의 용융 온도는 222℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. GVS 측정은 80％ RH (±0.2％)에서 1.6％의 중량 증가 (％w/w)를 제공하였다.
실시예 7 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 형태 A의 XRPD 스펙트럼은 도 7에 제시하였다.
실시예 8: (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
a) 2-부트-3-에닐-2-(3-플루오로-페닐)-헥스-5-엔산 메틸 에스테르
Figure pct00044
(3-플루오로-페닐)-아세트산 메틸 에스테르 (4.30 g)를 테트라히드로푸란 (20 mL) 중에 용해시키고, -78℃로 냉각시켰다. 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (25.6 mL, 1 M THF 용액)를 첨가하고, 용액을 30분 동안 교반하였다. 4-브로모-부트-1-엔 (2.60 mL)을 첨가하고, 반응물이 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 다시 -78℃로 냉각시켰다. 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (25.6 mL, 1 M THF 용액)를 첨가하고, 용액을 30분 동안 교반하였다. 4-브로모-1-부텐 (2.60 mL)을 첨가하고, 반응물이 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 -78℃로 다시 냉각시키고, 추가 분취량의 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (25.6 mL, 1 M THF 용액) 및 4-브로모-1-부텐 (2.60 mL)을 상기 나타된 절차에 따라 첨가하였다. 밤새 교반한 후에, 물 (20 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 디에틸 에테르 (2×60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산마그네슘으로 건조시키고 증발시켰다. 생성된 액체를 에틸 아세테이트/이소헥산 (1/99)으로 용리하는 실리카 상의 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 부제 화합물을 수득하였다 (5.0 g).
Figure pct00045
b) 1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵트-4-엔카르복실산 메틸 에스테르
Figure pct00046
디클로로메탄 (100 mL) 중 2-부트-3-에닐-2-(3-플루오로-페닐)-헥스-5-엔산 메틸 에스테르 (실시예 8a) (5.0 g)에 그룹스(Grubbs) 촉매 (2세대, 시그마-알드리히 컴퍼니 리미티드(Sigma-Aldrich Company Ltd)) (0.05 g)를 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 환류로 가온시켰다. 20시간 후에, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 오일로 증발시키고, 에틸 아세테이트/이소헥산 (5/95)으로 용리하는 실리카 상의 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 오일을 수득하였다. 생성물의 분석은 상당한 양의 출발 물질이 혼합물 중에 존재함을 나타내며, 상기 혼합물을 상기와 같은 반응 조건 및 정제를 반복하여 부제 화합물을 색상이 있는 오일로서 수득하였다 (3.60 g).
Figure pct00047
c) 1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르
Figure pct00048
1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵트-4-엔카르복실산 메틸 에스테르 (실시예 8b) (1.09 g)를 메탄올 (20 mL) 중에 용해시키고, 탄소상 팔라듐 (50 mg)을 첨가하고, 혼합물을 수소 4 atm 하에 밤새 교반하였다. 용액을 여과하고 증발시켜 부제 화합물을 수득하였다 (1.09 g).
Figure pct00049
d) 1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르
Figure pct00050
1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르 (실시예 8c) (0.280 g)를 톨루엔 (100 mL) 중에 용해시키고, (R)-퀴누클리딘-3-올 (0.320 g)을 첨가하였다. 톨루엔 (10 mL)을 딘-스탁 장치에서 증발 제거하고, 냉각시킨 후에 수소화나트륨 (10 mg)을 첨가하였다. 반응물을 딘-스탁 장치에서 4시간 동안 환류시키고, 그 후에 여분의 양의 수소화나트륨 (10 mg)을 첨가하고, 반응물을 추가 4시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후에, 톨루엔을 물로 세척하고, 건조시키고 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트/이소헥산/트리에틸아민 (50/50/1)에 이어 에틸 아세테이트/트리에틸아민 (99/1)으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 부제 화합물을 수득하였다 (0.200 g).
Figure pct00051
실시예 8: (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
Figure pct00052
1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (실시예 8d) (0.100 g)를 아세토니트릴 (8 mL) 중에 용해시키고, 2-브로모-N-피라진-2-일-아세트아미드 (실시예 1f) (0.05 g)를 첨가하였다. 반응물을 3일 동안 교반하고, 디에틸 에테르 (8 mL)로 희석시키고, 10분 더 교반하고, 생성된 고체를 여과하고, 디에틸 에테르 (3×8 mL)로 세척하여 고체를 수득하고, 이것을 고온 부타논 (8 mL)으로부터 재결정화하여 표제 화합물을 고체로서 수득하였다 (0.081 g).
Figure pct00053
실시예 9: (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
a) 2-브로모-N-이속사졸-3-일-아세트아미드
Figure pct00054
이속사졸-3-일아민 (1.14 g)을 디클로로메탄 (50 mL) 중에 용해시키고, 탄산칼륨 (3.74 g)을 첨가하였다. 브로모아세틸 클로라이드 (1.12 mL)를 교반하면서 서서히 첨가하고, 현탁액을 밤새 교반하였다. 반응물을 물 (2×50 mL)로 세척하고 건조시키고 증발시켰다. 생성물을 디클로로메탄/이소헥산으로부터 재결정하여 부제 화합물을 수득하였다 (2.3 g).
Figure pct00055
실시예 9: (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
Figure pct00056
1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (실시예 8d) (50 mg) 및 2-브로모-N-이속사졸-3-일-아세트아미드 (실시예 9a) (30 mg)를 아세토니트릴 (4 mL) 중에 용해시키고, 밤새 교반하였다. 용액을 디에틸 에테르 (12 mL)로 희석하고, 밤새 교반하였다. 생성된 결정을 여과 제거하고, 에테르 (3×10 mL)로 세척하고 건조시켜 표제 화합물을 고체로서 수득하였다 (48 mg).
Figure pct00057
실시예 10: (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
a) 2-클로로-N-(5-플루오로-피리딘-2-일)-아세트아미드
Figure pct00058
표제 화합물 (0.99 g, 73％, 백색 고체)을 실시예 3f에 이용된 방법에 따라 2-아미노-5-플루오로-피리딘을 사용하여 제조하였다.
Figure pct00059
실시예 10: (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
Figure pct00060
2-클로로-N-(5-플루오로-피리딘-2-일)-아세트아미드 (실시예 10a) (31 mg)를 아세토니트릴 (1 mL) 중 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (실시예 3e) (49 mg)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 디에틸 에테르 (2 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 백색 고체를 여과 제거하고, 디에틸 에테르로 여러번 세척하고, 진공 하에 40℃에서 건조시켜 표제 화합물을 얻었다 (49 mg).
Figure pct00061
실시예 11: (R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
a) 2-클로로-N-(2-메틸-피리딘-4-일)-아세트아미드
Figure pct00062
표제 화합물 (1.0 g)을 실시예 3f에 이용된 방법에 따라 4-아미노-2-메틸피리딘을 사용하여 제조하였다.
Figure pct00063
실시예 11: (R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
Figure pct00064
표제 화합물을 실시예 10을 제조하기 위해 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다. 추가 정제는 0-20％ MeOH/디클로로메탄으로 용리하는 실리카겔 크로마토그래피로 달성하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (57 mg).
Figure pct00065
실시예 12: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
a) 2-클로로-N-피리딘-3-일-아세트아미드
Figure pct00066
3-아미노피리딘 (350 mg)과 수산화나트륨 (0.6 g)의 혼합물을 물 (8 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 얼음 조에서 냉각시켰다. 클로로아세틸 클로라이드 (1.19 mL)를 적가하고, 반응 혼합물이 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 추출하고, 유기층을 농축하고, 0-60％ 에틸 아세테이트/시클로헥산으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 얻었다 (0.10 g).
Figure pct00067
실시예 12: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드
Figure pct00068
표제 화합물 (78 mg)을 실시예 3에서 이용된 것과 유사한 방법으로 2-클로로-N-피리딘-3-일-아세트아미드를 2-브로모-N-피리딘-2-일-아세트아미드 대신 사용하여 제조하였다.
Figure pct00069
실시예 13: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
a) 2-브로모-N-피리다진-3-일-아세트아미드
Figure pct00070
디클로로메탄 (100 mL) 중 피리다진-3-일아민 (2.7 g) 및 디이소프로필에틸아민 (6.3 mL)의 현탁액에 0℃에서 적가에 의해 디클로로메탄 (10 mL) 중 브로모아세트산 무수물 (9.0 g)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온되도록 하였다. 생성된 현탁액을 여과하고, 디클로로메탄으로 세척하고 건조시켜 부제 화합물을 고체로서 수득하였다 (2.0 g).
Figure pct00071
실시예 13: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
Figure pct00072
1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (실시예 1e) (0.160 g) 및 2-브로모-N-피리다진-3-일-아세트아미드 (실시예 13a) (0.106 g)를 아세토니트릴 (1 mL) 중에 용해시키고, 밤새 그대로 정치시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 메탄올/디클로로메탄 (1:9)으로 용리하는 실리카 상의 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 고체로서 수득하였다 (180 mg).
Figure pct00073
실시예 14: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 결정 형태 A
Figure pct00074
디클로로메탄 (4 mL) 중 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 클로라이드 (실시예 3) (100 mg)를 나프탈렌-1,5-디술폰산 디 나트륨 염의 수용액 (H2O 2 mL 중 73 mg)과 함께 진탕시켰다. 유기상을 수집하고, 수성층을 디클로로메탄 (4 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 상 분리 카트리지에 통과시키고, 생성된 용액을 증발시켜 무색 오일을 얻었다. 잔류물을 디에틸 에테르로 연화처리하고, 생성된 고체를 여과로 수집하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 50℃에서 진공 하에 건조시켰다. 고체를 고온 아세토니트릴 (1 mL) 중에 용해시킨 다음 증발시켜 발포체를 얻고, 이 후 이것을 아세톤 (2 mL) 중에 용해시켰다. 혼합물을 48시간 동안 그대로 정치시키고, 그 동안 결정화를 수행하였다. 생성된 결정을 여과로 수집하고, 얼음-냉각된 아세톤으로 세척한 다음, 50℃에서 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (67 mg).
Figure pct00075
실시예 14: (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 결정 형태 A의 분석
상기 기재된 절차에 의해 수득된 결정질 실시예 14 결정 형태 A의 샘플을 XRPD (패널리티컬 엑스퍼트 또는 큐비엑스 시스템) 및 DSC로 분석하였다.
DSC에 의해 측정된 실시예 14 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 형태 A의 용융 온도는 198℃ (개시) (±2℃)인 것으로 밝혀졌다. GVS 측정은 80％ RH (±0.3％)에서 1％의 중량 증가 (％w/w)를 제공하였다.
실시예 14 헤미-나프탈렌-1,5-디술포네이트 형태 A의 XRPD 스펙트럼은 도 8에 제시하였다.
(R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (실시예 4)의 대안적인 제조
일반적인 조건: 달리 언급하지 않는 한, 모든 반응은 불활성 분위기 (질소)하에서 수행하였고, 시약 및 용매는 상업적으로 입수하고, 입수한 그대로 사용하였으며, 시약 등급 용매를 사용하였다.
(a) 시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르
시클로헵탄카르복실산 (3.75 kg) 및 메탄올 (37.50 L)을 반응 용기에 충전시키고, 생성된 혼합물을 교반하였다. 황산 (100％, 51.73 g)을 충전시키고, 온도를 60℃로 상승시키고, 18시간 동안 계속 교반하였다. 메탄올을 감압 하에 증류로 제거하여 총 부피 11.25 L를 잔류시켰다. 톨루엔 (37.50 L)을 충전시키고, 추가 15 L의 용매를 감압 하에 증류로 제거하였다. 1H NMR 분광법에 의한 분석을 수행하여 메탄올이 용액 중에 더 이상 존재하지 않음을 확인하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 톨루엔 (7.50 L)으로 희석하였다. 포화 수성 중탄산나트륨 (18.75 L)을 충전시켰다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 교반을 중단하고, 층들이 분리되도록 하였다. 아래의 수성층을 제거하여 폐기하였다. 포화 수성 염화나트륨 (18.75 L)을 충전시켰다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 교반을 중단하고, 층들이 분리되도록 하였다. 아래의 수성층을 제거하여 폐기하였다. 조 생성물 용액을 감압 하에 공비 증류로 건조시켜 톨루엔 7.5 L를 제거하고, 시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르의 14.08％ w/w 톨루엔 용액 28.3 kg을 얻었다.
(b) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르
디이소프로필아민 (3.44 kg) 및 톨루엔 (16.52 kg)을 제1 반응 용기에 충전시키고, 교반하면서 0℃로 냉각시켰다. 5℃ ± 5℃의 온도를 유지하면서 N-헥실리튬 (8.81 kg, 33％w/w)을 첨가하였다. 혼합물을 상기 온도에서 20분 동안 교반하였다. 시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르 (톨루엔 중 14.08％ w/w; 26.93 kg)를 감압 하에서 증류에 의해 톨루엔 11.37 L를 제거하여 먼저 농축시킨 다음, 5℃ ± 5℃의 온도를 유지하면서 제1 반응 용기에 충전시켰다. 내용물이 20℃로 가온되도록 하고, 이 온도에서 20분 동안 교반한 다음, 0℃로 다시 냉각시켰다. 두번째 반응 용기에 디브로모 비스(트리-tert-부틸포스핀)디팔라듐 (I) (존슨 매티(Johnson Matthey) Pd-113; 189.15 g); 브로모벤젠 (3.06 L) 및 톨루엔 (7.58 L)을 불활성 분위기 하에 주위 온도에서 충전시켰다. 제2 용기의 내용물을 5℃ ± 5℃의 온도를 유지하도록 하는 속도로 제1 용기에 충전시킨 다음, 톨루엔 (3.79 L)으로 라인을 세척하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 20℃로 가온시키고, 상기 온도에서 밤새 교반하였다. 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서 2 M 염산 (18.96 L)을 첨가하고, 그 후 혼합물을 20℃에서 15분 동안 교반하고, 교반을 중단하고, 층들이 분리되도록 하였다. 아래의 수성층을 제거하여 폐기하였다. 2 M 염산 (18.96 L)의 제2 충전물을 첨가한 다음, 혼합물을 20℃에서 15분 동안 교반하고, 교반을 중단하고, 층들이 분리되도록 하였다. 아래의 수성층을 제거하여 폐기하였다. 물 (18.96 L)을 충전시키고, 혼합물을 20℃에서 15분 동안 교반한 다음, 교반을 중단하고, 층들이 분리되도록 하였다. 아래의 수성층을 제거하여 폐기하였다. 조 생성물 용액을 포스포닉스(Phosphonics) SPM32 스캐빈저를 함유한 카트리지에 통과시킨 다음, 감압 하에 회전식 필름 증발기 상에서 증발 건조시켜 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르를 이동성 갈색 오일로서 얻었다 (3.12 kg)
(c) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산
수산화나트륨 (12.64 kg)을 물 (31.60 L) 중에 용해시키고, 20℃로 냉각시켰다. 메탄올 (31.60 L) 중 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 메틸 에스테르 (6.32 kg)를 첨가한 다음, 메탄올 (5 L)로 라인을 세정하였다. 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반한 다음, 20℃로 냉각시켜다. 온도를 50℃ 미만으로 유지하면서 진한 염산 (29.43 L)을 첨가하여 생성물을 침전시키고, 그 후 혼합물을 20℃로 냉각시키고, 18시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 여과로 수집하고, 물 (31.60 L)로 세척한 다음, 메탄올 (37.41 L) 및 물 (9.35 L) 중에 분산시켰다. 혼합물을 교반하면서 1℃/분의 속도로 62℃로 가열한 다음, 0.3℃/분의 속도로 5℃로 냉각시키고, 5℃에서 밤새 유지하였다. 생성물을 여과로 수집하고, 물 (2×12.64 L)로 세척하고, 40℃에서 72시간 동안 진공 오븐에서 건조시켜 1-페닐-시클로헵탄카르복실산을 얻었다 (5.60 kg).
(d) 1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르
1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (2.70 kg) 및 부탄니트릴 (21.60 L)을 제1 반응 용기에 충전시켰다. 내용물을 교반하면서 70±5℃로 가열하여 균질한 용액을 얻었다. 제2 반응 용기에 1,1'-카르보닐디이미다졸 (1.1 당량 (몰); 2.16 kg) 및 부탄니트릴 (10.80 L)을 충전시켰다. 내용물을 교반하면서 50±5℃로 가열하였다. 제1 용기의 내용물을 제2 용기에 옮기고, 온도를 70±5℃로 상승시키고, 30±15분 동안 계속 교반하였다. (R)-(-)-3-퀴누클리디놀 (1.67 kg) 및 부탄니트릴 (8.10 L)을 제1 반응 용기에 충전시킨 다음, 칼륨-t-아밀레이트 (7.32 L)를 충전시켰다. 이 혼합물을 15분 동안 동안 교반한 후, 제2 용기에 첨가한 다음, 부탄니트릴 (1.35 L)로 라인을 세정하였다. 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 교반한 다음, 20℃로 냉각시켰다. 1 M 염산 (29.70 L)을 충전시킨 다음, pH를 7 미만으로 감소시키기에 충분한 양의 진한 염산을 충전시켰다 (2.276 kg을 첨가함). 혼합물을 15분 동안 교반하고, 교반을 중단하고, 층들이 분리되도록 하였다. 아래의 층을 제거하여 폐기하였다. 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (27.00 L)을 충전시켰다. 혼합물을 15분 동안 교반하고, 교반을 중단하고, 층들이 분리되도록 하였다. 아래의 층을 제거하여 폐기하였다. 용매를 감압 하에 증류로 제거하여 부제 생성물의 31.9％ w/w 용액 (용액 10.73 kg 및 생성물 3.42 kg)을 얻었다.
(e) (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드
제1 반응 용기에서 메틸 아세테이트 (24.18 L) 중 브로모아세트산 (3.00 kg)에 메틸 아세테이트 중 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물 (T3P) (19.51 L) (50％ w/w 용액)을 충전시켰다. 내용물을 교반하면서 5℃로 냉각시킨 다음, 용기 내용물의 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 10℃로 사전 냉각된 메틸 아세테이트 (24.29 L) 중 2-피리딘아민 (8.13 kg)의 용액을 충전시켰다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, 교반을 중단하고, 층들이 분리되도록 하였다. 아래의 층을 분리하여 폐기하였다. 2-브로모-N-피리딘-2-일-아세트아미드를 함유한 남아있는 용액 (3.90％ w/w에서 42.04 kg)을 제2 반응 용기에 옮기고, 0℃로 냉각시켰다.
1-페닐-시클로헵탄카르복실산 (R)-(1-아자-바이시클로[2.2.2]옥트-3-일)에스테르 (부탄니트릴 중 31.9％ w/w 용액; 7.88 kg)를 제2 용기에 충전시키고, 혼합물을 0℃에서 18시간 동안 교반하였다. 고체 생성물을 여과로 수집하고, 메틸 아세테이트 (6.22 L)로 세척하고, 진공 오븐에서 50℃에서 건조시켜 조 생성물을 얻었다 (90.5％ w/w에서 3.51 kg, 총 3.17 Kg).
에탄올 (69.62 L) 중 조 생성물 (3.48 kg)이 완전히 용해될 때까지 이를 75℃로 가열하였다. 용액을 1.2 ㎛ 필터를 통해 여과한 다음, 0.3℃/분의 속도로 0℃로 냉각시키고, 상기 온도에서 18시간 동안 교반하였다. 고체 생성물을 여과로 수집하고, 에탄올 (7.47 L)로 세척하고, 진공 오븐에서 50℃에서 48시간 동안 건조시켜 정제된 생성물을 얻었다 (2.82 kg).
무스카린성 길항제의 생물학적 활성
무스카린성 길항제 화합물의 억제 효과는 무스카린성 수용체 방사성리간드 결합 검정에 의해 측정하였다.
[3H]-N-메틸 스코폴아민 ([3H]-NMS), 및 인간 무스카린성 수용체 (M2 또는 M3)를 발현하는 시판 구입가능한 세포 막을 활용한 방사성리간드 결합 연구는 M2 및 M3 수용체에 대한 무스카린성 길항제의 친화력을 평가하기 위해 이용하였다. 트리스 완충액 중의 막을 [3H]-NMS 및 M3 길항제를 다양한 농도로 함유한 96-웰 플레이트 내에서 3 시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 막 및 결합된 방사성리간드를 여과에 의해 수확하고, 밤새 건조시켰다. 이어서, 섬광 유체를 첨가하고, 결합된 방사성리간드를 캔버라 패커드 탑카운트(Canberra Packard Topcount) 섬광 계수기를 이용하여 계수하였다
각각의 무스카린성 수용체에서의 길항제의 반감기는 대안적인 방사성리간드 [3H]-QNB를 이용하고, 상기 친화력 검정을 적용하여 측정하였다. 길항제는 [3H]-QNB 리간드를 사용하여 측정된 바와 같이 그들의 Ki보다 10-배 더 높은 농도로, 인간 무스카린성 수용체를 발현하는 막과 함께 3시간 동안 인큐베이션하였다. 이 시간 말에, [3H]-QNB를 연구되는 수용체에 대한 그의 Kd보다 25-배 더 높은 농도로 첨가하고, 15분 내지 180분까지의 다양한 시간 동안 계속 인큐베이션하였다. 이어서, 막 및 결합된 방사성리간드를 여과에 의해 수확하고, 밤새 건조시켰다. 이어서, 섬광 유체를 첨가하고, 결합된 방사성리간드를 캔버라 패커드 탑카운트 섬광 계수기를 이용하여 계수하였다.
[3H]-QNB가 무스카린성 수용체에 결합하는 것을 검출하는 속도는 길항제가 수용체로부터 해리되는 속도, 즉, 수용체에 대한 길항제의 반감기와 관련된다.
표 1은 실시예 1에 대한 pIC50 특징을 보여준다.
Figure pct00076
하기 표 2는 실시예의 화합물에 대한 IC50 농도를 제공한다.
Figure pct00077
β 2 -아드레날린수용체 효능제의 제조
본 발명의 조합물에 사용될 수 있는 하기 β2-아드레날린수용체 효능제는 다음과 같이 제조될 수 있다.
β 2 -아드레날린수용체 효능제의 제조를 위한 일반적인 실험의 상세설명
1H NMR 스펙트럼은 배리안 이노바(Varian Inova) 400 MHz 또는 배리안 머큐리-VX(Varian Mercury-VX) 300 MHz 기기에서 기록하였다. 클로로포름-d (δH 7.27 ppm), 디메틸술폭시드-d 6 (δH 2.50 ppm), 아세토니트릴-d 3 (δH 1.95 ppm) 또는 메탄올-d 4 (δH 3.31 ppm)의 중심 피크를 내부 참조로서 이용하였다. 칼럼 크로마토그래피는 실리카 겔 (0.040-0.063 mm, 머크(Merck))을 사용하여 수행하였다. 달리 언급하지 않는 한, 출발 물질은 시판 구입가능하였다. 모든 용매 및 시판용 시약은 실험 등급이었고, 구입한 그대로 사용하였다.
LC/MS 분석을 위해 다음 방법을 이용하였다.
인스트루먼츠 애질런트 1100; 칼럼 워터스 시메트리(Column Waters Symmetry) 2.1×30 mm; 매스 APCI(Mass APCI); 유량 0.7 ml/분; 파장 254 nm; 용매 A: 물 + 0.1％ TFA; 용매 B: 아세토니트릴 + 0.1％ TFA; 구배 15-95％/B 8 분, 95％ B 1 분.
분석 크로마토그래피는 8분에 걸쳐 0.7 ml/분의 유량으로 5％에서 95％의 아세토니트릴 구배로 이동상으로서의 아세토니트릴/물/0.1％ 트리플루오로아세트산을 사용하여 3.5 ㎛의 입도를 갖는 시메트리 C18-칼럼, 2.1×30 mm 상에서 수행하였다.
실시예에 사용된 약어 또는 용어는 다음 의미를 갖는다:
SCX: 술폰산 흡착제를 사용하는 고상 추출
HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피;
DMF: N,N-디메틸포름아미드
제조시 사용된 β2-아드레날린수용체 효능제 및 중간체는, 도시된 구조식에 기초하여 IUPAC 명칭 ACD 랩스 버젼 8 명명 패키지를 사용하여 본원에서 명명하였다.
β2-아드레날린수용체 효능제 1: (BA1): 제조 1
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드
Figure pct00078
a) tert-부틸 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로파노에이트
1-나프탈렌 에탄올 (10 g)을 벤질트리메틸암모늄 히드록시드 (트리톤 B(Triton B®); 메탄올 중 40％ 용액 0.9 mL)로 처리하고, 생성된 혼합물을 진공 하에 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, tert-부틸 아크릴레이트 (8.19 g)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 서서히 가온시키고, 밤새 교반하였다. 그 후, 조 혼합물을 산화알루미늄 (30 g) 상에 흡수시키고, 디에틸에테르 (200 mL)로 용리하였다. 유기물을 농축하여 조 물질 (16.6 g)을 얻고, 이를 1:8 디에틸에테르:헥산으로 용리하는 플래쉬 실리카 크로마토그래피로 정제하여 부제 화합물을 얻었다 (12.83 g).
Figure pct00079
b) 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판산
tert-부틸 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로파노에이트 (6.19 g)를 디클로로메탄 (30 mL) 중에 녹이고, 트리플루오로아세트산 (5 mL)으로 처리하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 추가 1 mL의 트리플루오로아세트산을 첨가하고, 용액을 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 2 M 수산화나트륨 용액 (30 mL) 중에 녹이고, 에테르 (2×20 mL)로 세척하였다. 그 후, 수성층을 산성화시키고 (1 M 염산 사용), 에테르 (2×30 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 부제 화합물을 투명한 오일로서 수득하였다 (5.66 g).
Figure pct00080
c) N-(2-디에틸아미노에틸)-N-(2-히드록시에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드
옥살릴 클로라이드 (0.33 g)를 디클로로메탄 (10 mL) 중 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판산 (0.53 g)의 용액에 적가하고, 디메틸포름아미드 (1 방울)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 계속 교반하였다. 그 후, 혼합물을 농축하고, 디클로로메탄 (10 mL) 중에 재용해시키고, 디클로로메탄 (10 mL) 중 2-(2-디에틸아미노에틸아미노)에탄올 (0.35 g) 및 디이소프로필에틸아민 (0.56 g)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 희석하고 (디클로로메탄, 50 mL), 물 (2×20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 생성물 (0.91 g)을 얻고, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 5-7％ 메탄올로 용리함)로 정제하여 부제 화합물 0.63 g을 얻었다.
Figure pct00081
d) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드
디클로로메탄 (1 mL) 중 디메틸술폭시드 (0.097 g)의 용액을 디클로로메탄 (10 mL) 중 옥살릴 클로라이드 (0.079 g)의 용액에 -78℃에서 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반한 다음, 디클로로메탄 (1 mL + 1 mL 세척액) 중 N-(2-디에틸아미노에틸)-N-(2-히드록시에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (0.22 g)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 15분 동안 교반하였다. 트리에틸아민 (0.29 g)을 첨가하고, 반응물이 1시간에 걸쳐 실온으로 가온되도록 하고, 그 후 혼합물을 희석하고 (디클로로메탄 30 mL), 유기물을 중탄산나트륨 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하여 부제 화합물을 얻었다 (0.21 g).
조 생성물을 메탄올 (10 mL) 중에 용해시키고, 7-(2-아미노에틸)-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 히드로클로라이드 (문헌 [Organic Process Research & Development 2004, 8(4), 628-642]에 요약된 절차에 따라 제조됨; 0.131 g)를 아세트산 (0.1 mL) 및 물 (0.1 mL)과 함께 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후에, 나트륨 시아노보로히드라이드 (0.020 g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 암모니아 (메탄올 중 7 N, 1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 농축하였다. 조질 잔류물을 1％ 암모니아; 디클로로메탄 중 5％-7％ 메탄올로 용리하는 플래쉬 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 조 생성물을 다음 단계에 바로 사용하였다.
e) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드
Figure pct00082
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (0.052 g)를 에탄올 (1.5 mL) 중에 용해시키고, 48％ 브롬화수소산 (21 ㎕)으로 처리하였다. 백색 고체 디히드로브로마이드 염 (0.058 g)을 여과로 수집하였다.
Figure pct00083
NMR은 298K에서 회전이성질체의 대략 2:1 혼합물을 나타낸다.
β2-아드레날린수용체 효능제 1: (BA1): 제조 2
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드
Figure pct00084
a) N'-(2,2-디메톡시에틸)-N,N-디에틸-에탄-1,2-디아민.
Figure pct00085
메탄올 (500 mL) 중 N,N-디에틸-에틸렌디아민 (150 g)의 용액을 10 내지 15℃에서 글리옥살 디메틸아세탈 (물 중 60 중량％ 용액, 225 g)로 빠르게 적가 처리하였다. 첨가를 완료한 후에, 용액을 15℃로, 이어서 22℃로 가온시키고, 상기 온도에서 16시간 동안 두었다. 반응 혼합물을 5％ 탄소상 팔라듐 (존슨-매티 유형 38H 페이스트, 15 g)으로 처리하고, GC/MS에 의해 반응이 완료된 것으로 판단될 때까지 6 bar에서 수소화시켰다. 촉매를 여과로 제거하고, 여과물을 증발 건조시켜 (톨루엔 공비혼합물, 2.5 L), 부제 화합물 196.2 g을 수득하였다.
Figure pct00086
b) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2,2-디메톡시에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드.
Figure pct00087
옥살릴 클로라이드 (151 mL)를 디클로로메탄 (2.1 L) 및 DMF (0.5 mL) 중 3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판산 (389 g) (실시예 7 단계 b))의 용액에 45분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 추가 16시간 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물을 농축하고, DCM (1.7 L) 중에 재용해시키고, 1.75시간에 걸쳐 0℃에서 DCM (1.7 L) 중 N'-(2,2-디메톡시에틸)-N,N-디에틸에탄-1,2-디아민 (325 g) 및 이소프로필디에틸아민 (551 mL)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 수성 포화 중탄산나트륨 용액 (5×1 L), 물 (1.5 L)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축하여 부제 화합물 650 g을 얻었다.
Figure pct00088
c) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-3-[2-(1-나프틸)에톡시]-N-(2-옥소에틸)프로판아미드.
Figure pct00089
DCM (270 mL) 중 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2,2-디메톡시에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 (93 g)의 용액을 트리플루오로아세트산 (270 mL)으로 0℃에서 1.5 시간에 걸쳐 적가 처리하였다. 첨가 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 수성 포화 중탄산나트륨 용액 (1800 mL, 주의)에 부었다. 수성 혼합물을 DCM (4×400 mL)으로 추출하고, 합한 추출물을 황산 마그네슘 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 다음 반응에 바로 사용하였다.
d) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드.
Figure pct00090
무수 NMP (216 mL) 중 7-(2-아미노-에틸)-4-히드록시-3H-벤조티아졸-2-온 히드로클로라이드 (53 g)의 현탁액을 60℃로 가열하고, 메탄올 (102 mL) 중 NaOH (8.2 g)의 용액으로 한 번에 처리하였다. 밝은 오렌지색 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 디클로로메탄 (475 mL) 중 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-3-[2-(1-나프틸)에톡시]-N-(2-옥소에틸)프로판아미드의 용액으로 20분에 걸쳐 적가 처리하였다. 반응물이 25 분 동안 교반되도록 두었다. 이어서, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (91.5 g)를 20분에 걸쳐 나누어 첨가하고, 혼합물을 50분 더 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1.8 L)에 붓고, 산성 용액 (pH 5)을 tert-부틸 메틸 에테르 (TBME) (3×500 mL)로 세척하였다. 수성상을 고체 탄산칼륨을 첨가하여 pH 8로 염기성화시키고, 디클로로메탄 (3×750 mL)으로 추출하고, 합한 유기 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축시켜 어두운색 오일을 수득하였다. 이를 에탄올 (200 mL) 중에 용해시키고, 48％ 수성 브롬화수소산 (73 mL)을 첨가하였다. 용액을 30분 동안 숙성시킨 다음, 증발 건조시켰다. 잔류물을 에탄올 (560 mL)로 연화처리하고, 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 50℃에서 진공 하에 건조시켰다. 점착성 고체를 끓고 있는 에탄올 (100 mL) 중에 현탁시키고, 고온 여과하였다. 수집된 고체를 50℃에서 진공하에 건조시켰다. 이 물질을 에탄올/물 (3:1, 500 mL)로부터 재결정화하였다. 밤새 정치시킨 후에, 생성된 고체를 여과로 수집하고, 빙냉 에탄올 (75 mL)로 세척하였다. 50℃에서 24 시간 동안 진공하에 건조시켜 표제 화합물 57 g을 수득하였다.
β2-아드레날린수용체 효능제 2: (BA2):
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드
Figure pct00091
a) tert-부틸 3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로파노에이트
2-(3-클로로페닐)에탄올 (20 g)을 벤질트리메틸암모늄 히드록시드 (트리톤 B®) (2.67 mL)로 처리하고, 생성된 혼합물을 진공 하에 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, t-부틸 아크릴레이트 (17.40 g)로 처리하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에테르 (75 mL)로 용리하면서 산화알루미늄 (15 g)을 통해 여과하였다. 수집된 여과물을 농축하여 부제 화합물을 오일로서 얻었다 (34.40 g).
Figure pct00092
b) 3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판산
tert-부틸 3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로파노에이트 (실시에 1a), 34.40 g)를 디클로로메탄 (150 mL) 중에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 (50 mL)으로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시키고, 디클로로메탄 (2×10 mL)과 공비혼합하였다. 잔류물을 디클로로메탄 (300 mL) 중에 녹이고, 포화 탄산수소나트륨 (200 mL)으로 추출하였다. 염기성 층을 디클로로메탄 (20 mL)으로 세척한 다음, 2 M 염산으로 산성화시켰다. 산성 층을 디클로로메탄 (2×200 mL)으로 추출하였다. 유기층을 합하고, 염수로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 부제 화합물을 오일로서 수득하였다 (24.50 g).
Figure pct00093
c) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2,2-디메톡시에틸)-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판아미드
Figure pct00094
옥살릴 클로라이드 (9.50 mL)를 디클로로메탄 (120 ml) 및 DMF (0.5 mL) 중 3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판산 (22.50 g) (실시예 1b)의 용액에 45분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 추가 16시간 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물을 농축하고, DCM (1.7 L) 중에 재용해시키고, 0℃에서 1.75시간에 걸쳐 DCM (200 mL) 중 N'-(2,2-디메톡시에틸)-N,N-디에틸에탄-1,2-디아민 (20.20 g)(실시예 16a) 및 이소프로필디에틸아민 (34.43 mL)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 수성 포화 중탄산나트륨 용액 (3×1 L), 물 (1.5 L)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고 농축하여 부제 화합물 39.50 g을 얻었다.
Figure pct00095
d) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]-N-(2-옥소에틸)프로판아미드
Figure pct00096
DCM (500 mL) 중 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2,2-디메톡시에틸)-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판아미드 (실시예 1c) (20 g)의 용액을 0℃에서 30분에 걸쳐 트리플루오로아세트산 (50 mL)으로 적가 처리하였다. 첨가 후에, 반응 혼합물이 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 수성 포화 중탄산나트륨 용액 (1800 mL, 주의)에 부었다. 수성 혼합물을 DCM (3×400 mL)으로 추출하고, 합한 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고 농축하였다. 잔류물을 다음 단계에 바로 사용하였다.
e) N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드
Figure pct00097
무수 NMP (50 mL) 중 7-(2-아미노-에틸)-4-히드록시-3H-벤조티아졸-2-온 히드로클로라이드 (11.77 g)의 현탁액을 65℃로 가열하고, 메탄올 (23 mL) 중 NaOH (1.83 g)의 용액으로 한 번에 처리하였다. 밝은 오렌지색 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 디클로로메탄 (50 mL) 중 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]-N-(2-옥소에틸)프로판아미드 (실시예 1d)의 용액으로 30분에 걸쳐 적가 처리하였다. 반응물을 30분 동안 교반하도록 두었다. 이어서, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (20.33 g)를 20분에 걸쳐 조금씩 나누어 첨가하고, 혼합물을 16시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (1.8 L)에 붓고, 고체 탄산칼륨을 첨가하여 pH 8로 염기성화시키고, 디클로로메탄 (2×500 mL)으로 추출하고, 합한 유기 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 농축하여 어두운색 오일을 얻었다. 잔류물을 용리액으로서의 10％ (0.1％ aq NH3/MeOH)/DCM을 사용하는 실리카 상의 크로마토그래피로 정제하여 부제 화합물을 갈색 오일로서 얻었다. 수율 (6.58 g). 이것을 에탄올 (150 mL) 중에 용해시키고, 48％ 수성 브롬화수소산 (10 mL)을 첨가하였다. 용액을 30분 동안 숙성시키긴 다음, 증발 건조시켰다. 잔류물을 에탄올 (100 mL)로 연화처리하고, 생성된 고체를 여과로 수집하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켰다. 상기 물질을 에탄올/물 (6:1, 500 mL)로부터 재결정화하고, 밤새 정치시킨 후에, 생성된 고체를 여과로 수집하고, 빙냉 에탄올 (75 mL)로 세척하였다. 진공 하에 50℃에서 24시간 동안 건조시켜 표제 화합물 4.96 g을 수득하였다.
Figure pct00098
β2-아드레날린수용체 효능제 3: (BA3):
7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 디히드로브로마이드
Figure pct00099
a) 1-클로로-2-[(E)-2-니트로비닐]벤젠
Figure pct00100
2-클로로벤즈알데히드 (이전의 알드리히) (10.0 g)를 아세트산 (200 mL) 중에서 니트로메탄 (26.05 g) 및 암모늄 아세테이트 (21.92 g)와 혼합하고, 혼합물을 환류에서 40분 동안 가열하였다. 혼합물이 실온으로 냉각되도록 하고, 대부분의 아세트산을 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 물, 그 다음 탄산칼륨 용액 (×2), 그 다음 물로 다시 세척하였다. 유기물을 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고 여과하고 농축시켜 목적 물질을 오렌지색 오일로서 얻었다 (12.83 g).
Figure pct00101
b) 2-(2-클로로페닐)에탄아민
Figure pct00102
무수 THF (60 mL) 중 황산 (8.40 mL)의 용액을 0 내지 10℃에서 질소 분위기 하에 THF (314 mL) 중 1.0 M 수소화 리튬 알루미늄의 교반된 용액에 적가하여 수소화알루미늄을 제조하였다. 5℃에서 30분 동안 교반한 후에, 무수 THF (160 mL) 중 1-클로로-2-[(E)-2-니트로비닐]벤젠 (12.83 g)의 용액을 적가하면서 내부 온도를 0℃ 내지 10℃로 유지하였다. 첨가가 완료되면, 반응물을 환류에서 5분 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, 0℃로 냉각시키고, 이소프로판올 (22 mL)을 조심스럽게 적가하면서, 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다. 2 M 수산화나트륨 (35 mL)을 조심스럽게 적가하면서, 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 이후 이것을 THF (×3)로 세척하였다. 여과물을 증발 건조시켰다. 잔류물을, 물질을 로딩하기 위한 에틸 아세테이트, 이어서 에틸 아세테이트 중 10％ 트리에틸아민, 이후 45％ 에탄올:45％ 에틸 아세테이트 중 10％ 트리에틸아민을 용리액으로서 사용하는 실리카 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 물질을 얻었다 (4.66 g).
Figure pct00103
c) tert-부틸 [2-(2-클로로페닐)에틸]카르바메이트
Figure pct00104
무수 THF (300 mL) 중 2-(2-클로로페닐)에탄아민 (25.57 g) 및 트리에틸아민 (22.87 mL)의 교반된 용액에 무수 THF (50 mL) 중 디-tert-부틸 디카르보네이트 (35.85 g)의 용액을 10분에 걸쳐 주위 온도에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하여 목적 물질을 황색 오일로서 얻었다 (42.0 g).
Figure pct00105
d) tert-부틸 알릴[2-(2-클로로페닐)에틸]카르바메이트
Figure pct00106
무수 DMF (200 mL) 중 수소화나트륨 (광유 중 60％) (7.23 g) (에테르 (×3)로 세척함)의 현탁액에 무수 DMF (50 mL) 중 tert-부틸 [2-(2-클로로페닐)에틸]카르바메이트 (42.0 g)의 용액을 15분에 걸쳐 35℃에서 질소 분위기 하에 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 혼합물을 50℃에서 90분 동안 교반하였다. 혼합물이 실온으로 냉각되도록 한 다음, 알릴 브로마이드 (15.63 mL)를 서서히 첨가하고, 외부 냉각을 사용하여 온도를 25℃에서 유지하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 물로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (×3)로 추출하였다. 유기물을 합하고, 물로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 이소헥산 중 1％ 에틸 아세테이트로 로딩한 다음 에틸 아세테이트 (0％, 1％, 2％, 5％)를 함유한 이소헥산을 용리액으로서 사용하는 실리카 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 물질을 얻었다 (27.0 g). 몇몇의 혼합 분획이 존재하므로, 이들을 합하고, 상기와 같이 실리카 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 추가 4 g의 목적 물질을 얻었다. 생성물 수집물 모두를 합하여 총 31.0 g을 얻었다.
Figure pct00107
e) tert-부틸 [2-(2-클로로페닐)에틸]{3-[(2-히드록시에틸)티오]프로필}카르바메이트
Figure pct00108
tert-부틸 알릴[2-(2-클로로페닐)에틸]카르바메이트 (31.0 g)를 2-머캅토에탄올 (7.37 mL) 및 AIBN (1.15 g)과 혼합하고, 65℃에서 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 추가의 머캅토에탄올 (1 mL) 및 AIBN (200 mg)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 65℃에서 30분 더 교반하였다. 물질을 이소헥산 중 20％ 에틸 아세테이트로 로딩한 다음, 이소헥산 중 20％에서 50％로 변화하는 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 칼럼 크로마토그래피로 상기 물질을 정제하여 목적 물질을 얻었다 (31.94 g).
Figure pct00109
f) tert-부틸 [2-(2-클로로페닐)에틸]{3-[(2-옥소에틸)티오]프로필}카르바메이트
Figure pct00110
삼산화황:피리딘 복합체 (30.52 g)를 DMSO (200 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 질소 분위기 하에 15분 동안 교반하였다. DCM (100 mL)을 첨가한 다음, DCM (160 mL) 중 tert-부틸 [2-(2-클로로페닐)에틸]{3-[(2-히드록시에틸)티오]프로필}카르바메이트 (23.9 g) 및 휘니그 염기 (63.5 mL) (한번에 첨가함 (발열))를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 주위 온도에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물, 그 다음 1 N HCl, 그 다음 포화 중탄산나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 물질을 이소헥산 중 20％ 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 물질을 얻었다 (12.43 g).
Figure pct00111
g) tert-부틸 [2-(2-클로로페닐)에틸]{3-[(2-{[(2R)-2-히드록시-2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)티오]프로필}카르바메이트
Figure pct00112
tert-부틸 [2-(2-클로로페닐)에틸]{3-[(2-옥소에틸)티오]프로필}카르바메이트 (11.32 g)를 메탄올 (200 mL)과 아세트산 (1.74 ml)의 혼합물 중에 용해시켰다. 7-[(1R)-2-아미노-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 히드로클로라이드 (8.0 g)를 상기 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 질소 분위기 하에 1시간 동안 교반하였다. 나트륨 시아노보로히드라이드 (1.92 g)를 첨가하고, 혼합물을 2시간 더 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 물로 희석하고, 0.880 수성 암모니아로 염기성화시키고, 에틸 아세테이트 (×3)로 추출하였다 (추출 동안 셀라이트를 통해 여과함). 유기물을 합하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 갈색 잔류물을 얻었다 (15.5 g). 물질을 MeOH (2％, 5％, 10％, 20％ 및 30％, 모두 1％ 0.880 aq NH3을 함유함)을 함유한 DCM을 용리액으로서 사용하는 실리카 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 물질을 얻었다 (6.67 g) (38％ 수율).
Figure pct00113
h) 7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온 디히드로브로마이드
Figure pct00114
DCM (20 mL) 중 단계 g)로부터의 Boc 화합물 (5.93 g)의 교반된 현탁액에 트리플루오로아세트산 (20 mL)을 0℃에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소 하에 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 톨루엔으로 희석하고, 용매를 제거한 다음, 톨루엔 (×2)과 공비혼합하였다. 잔류물을 아세토니트릴 중에 용해시키고, 48％ aq HBr로 산성화시키고, 진공 하에 농축시켰다 (건조시키지는 않음). 혼합물을 아세토니트릴로 더 희석하고, 침전된 고체를 여과로 수집하고, 아세토니트릴로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 6.35 g을 얻었다. 3.8％의 불순물이 존재하므로 (단계 e)로부터의 이성질체), 물질을 아세토니트릴:물의 1:1 혼합물 중에 재용해시키고, 정제용 HPLC (선파이어(Sunfire) 30×80 mm C8 칼럼; NH4OAc 완충액; 10분에 걸쳐 아세토니트릴 5-50％)로 정제하였다. 생성된 물질을 데시케이터 내 10 mbar에서 KOH 및 H2SO4 상에서 밤새 건조시켰다. 생성된 디-아세테이트 염을 물 중에 용해시키고, 0.880 aq 암모니아로 염기성화시켰다. 백색 검이 형성되므로, 수성물을 경사분리하고, 상기 검을 진공 하에 건조시켜 유리 염기를 얻었다 (4.11 g). 이것을 고온 에탄올 중에 용해시키고, 용액을 여과한 다음, 실온으로 냉각되도록 하였다. 용액을 48％ aq HBr로 산성화시키고, 결정화되도록 두었다. 백색 고체를 여과로 수집하고, 에탄올로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 수확물 1을 3.81 g 얻었다.
Figure pct00115
모액을 증발 건조시킨 다음, 아세토니트릴로 연화처리하였다. 고체를 여과로 수집하여 수확물 2를 719 mg 얻었다 (총 4.53 g).
Figure pct00116
β 2 -아드레날린수용체 효능제의 생물학적 활성
아드레날린 β 2 매개된 cAMP 생성
세포 제조
H292 세포를 37℃, 5％ CO2의 225 cm2 플라스크 인큐베이터에서 10％ (v/v) FBS (소 태아 혈청) 및 2 mM L-글루타민을 함유하는 RPMI 배지 중에서 성장시켰다.
실험 방법
아쿠타제(Accutase™) 세포 박리 용액으로 15분 동안 처리하여 유착된 H292 세포를 조직 배양 플라스크로부터 탈착시켰다. 플라스크를 37℃, 5％ CO2의 가습 인큐베이터에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 탈착된 세포를 RPMI 배지 (10％(v/v) FBS 및 2 mM L-글루타민 함유) 중에 0.05×106개 세포/mL로 재현탁시켰다. 100 ㎕ 중의 5000개의 세포를 조직-배양-처리된 96-웰 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고, 세포를 37℃, 5％ CO2 하의 가습 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다. 배양 배지를 제거하고, 세포를 검정 완충액 100 ㎕로 2회 세척하고, 검정 완충액 (10 mM HEPES (pH 7.4) 및 5 mM 글루코스를 함유하는 HBSS 용액) 50 ㎕로 교체하였다. 세포를 실온에서 20분 동안 휴지시키고, 그 후에 롤리프람 (1.2 mM, 2.4％ (v/v) 디메틸술폭시드를 함유하는 검정 완충액 중에서 제조됨) 25 ㎕를 첨가하였다. 세포를 롤리프람과 함께 10분 동안 인큐베이션하고, 그 후에 화합물 A를 첨가하고, 세포를 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 검정시 최종 롤리프람 농도는 300 μM이었으며, 최종 비히클 농도는 1.6％ (v/v) 디메틸술폭시드였다. 상등액을 제거하고, 검정 완충액 100 ㎕로 1회 세척하고, 용해 완충액 50 ㎕로 교체하여 반응을 중단시켰다. 세포 단일층을 -80℃에서 30분 동안 (또는 밤새) 동결시켰다.
알파스크린(AlphaScreen™) cAMP 검출
알파스크린™ 방법을 이용하여 세포 용해물 중 cAMP (시클릭 아데노신 모노포스페이트)의 농도를 측정하였다. 동결된 세포 플레이트를 플레이트 진탕기 상에서 20분 동안 해동시킨 다음, 세포 용해물 10 ㎕를 96-웰 백색 플레이트로 옮겼다. 바이오티닐화된 cAMP와 함께 예비 인큐베이션시킨 혼합 알파스크린™ 검출 비드 40 ㎕를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 암실에서 10시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 알파스크린™ 신호는 제조업체가 권장하는 설정조건으로 엔비젼(EnVision) 분광광도계 (퍼킨-엘머 인크.(Perkin-Elmer Inc.))를 이용하여 측정하였다. cAMP 농도는 표준 cAMP 농도를 사용하는 동일한 실험에서 결정된 검정 곡선을 참조하여 측정하였다. 화합물 A에 대한 농도 반응 곡선을 구축하고, 데이터를 4-변수 로지스틱 방정식에 대입하여 pEC50 및 내재적 활성을 모두 측정하였다. 내재적 활성은 각 실험에서 포르모테롤에 대해 측정된 최대 활성에 대한 분율로 표시하였다. 그 결과를 표 1에 나타내었다.
선택성 검정
아드레날린 α1D
막 제조
재조합 인간 α1D 수용체를 발현하는 인간 태아 신장 293 (HEK293) 세포로부터 막을 제조하였다. 이들을 검정 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여, 최대와 최소 특이적 결합 사이의 명확한 범위를 제공하는 최종 농도의 막을 제공하였다.
실험 방법
검정은 U자-바닥 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [3H]-프라조신 (최종 농도 0.3 nM) 10 ㎕ 및 화합물 A (10× 최종 농도) 10　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 검정 플레이트에 대해, 비히클 (검정 완충액 중 10 ％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 10 ㎕ 또는 BMY7378 (최종 농도 10 μM; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 10 ㎕의 존재하의 [3H]-프라조신 결합을 위해 8개의 복제물을 얻었다. 이어서, 막을 첨가하여 최종 부피가 100 ㎕가 되도록 하였다. 플레이트를 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한 후에, 96-웰 플레이트 톰텍(Tomtec) 세포 수확기를 이용하여 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 (검정 완충액 중에 1시간 동안 미리 침지시켜 둠) 상에서 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, pH 7.4) 250 ㎕로 5회 세척하여 미결합 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후에, 패커드 플레이트 밀봉기를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O(MicroScint-O) (50 ㎕)를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실(TopSeal) A), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트(TopCount), 패커드 바이오사이언스(Packard BioScience))로 3-분 계수 프로토콜을 이용하여 측정하였다.
총 특이적 결합 (B0)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 차감하여 측정하였다. 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 NSB 값을 차감하였다. 이들 데이터는 B0의 백분율로 표현하였다. 화합물 농도-효과 곡선 ([3H]-프라조신 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 계열 희석액을 사용하여 측정하였다. 데이터를 4-변수 로지스틱 방정식에 대입하여 화합물 효능을 측정하였으며, 이를 pIC50 ([3H]-프라조신 결합의 50％ 억제를 유도하는 음의 로그 몰 농도)으로 표현하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
아드레날린 β1
막 제조
재조합 인간 아드레날린 β1 수용체를 함유하는 막을 유로스크린(Euroscreen)으로부터 입수하였다. 이들을 검정 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여, 최대와 최소 특이적 결합 사이의 명확한 범위를 제공하는 최종 농도의 막을 제공하였다.
실험 방법
검정은 U자-바닥 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [125I]-요오도시아노핀돌롤 (최종 농도 0.036 nM) 10 ㎕ 및 화합물 A (10× 최종 농도) 10　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 검정 플레이트에 대해, 비히클 (검정 완충액 중 10％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 10 ㎕ 또는 프로프라놀롤 (최종 농도 10 μM; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 10 ㎕의 존재하의 [125I]-요오도시아노핀돌롤 결합을 위한 8개의 복제물을 수득하였다. 이어서, 막을 첨가하여 최종 부피가 100 ㎕가 되도록 하였다. 플레이트를 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한 후에, 96-웰 플레이트 톰텍 세포 수확기를 이용하여 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 (검정 완충액 중에 1시간 동안 미리 침지시켜 둠)로 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, pH 7.4) 250 ㎕로 5회 세척하여 미결합 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후에 패커드 플레이트 밀봉기를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O (50 ㎕)를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실 A), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트, 패커드 바이오사이언스)로 3-분 계수 프로토콜을 이용하여 측정하였다.
총 특이적 결합 (B0)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 차감하여 측정하였다. 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 NSB 값을 차감하였다. 이들 데이터는 B0의 백분율로 표현하였다. 화합물 농도-효과 곡선 ([125I]-요오도시아노핀돌롤 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 계열 희석액을 사용하여 측정하였다. 데이터를 4-변수 로지스틱 방정식에 대입하여 화합물 효능을 측정하였으며, 이를 pIC50 ([125I]-요오도시아노핀돌롤 결합의 50％ 억제를 유도하는 음의 로그 몰 농도)으로 표현하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
도파민 D2
막 제조
재조합 인간 도파민 아형 D2s 수용체를 함유하는 막을 퍼킨-엘머로부터 입수하였다. 이들을 검정 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0.1％ 젤라틴, pH 7.4)으로 희석하여, 최대와 최소 특이적 결합 사이의 명확한 범위를 제공하는 최종 농도의 막을 제공하였다.
실험 방법
검정은 U자-바닥 96-웰 폴리프로필렌 플레이트에서 수행하였다. [3H]-스피페론 (최종 농도 0.16 nM) 30 ㎕ 및 화합물 A (10× 최종 농도) 30　㎕를 각각의 시험 웰에 첨가하였다. 각각의 검정 플레이트에 대해, 비히클 (검정 완충액 중 10 ％(v/v) DMSO; 최대 결합을 정의함) 30 ㎕ 또는 할로페리돌 (최종 농도 10 μM; 비-특이적 결합 (NSB)을 정의함) 30 ㎕의 존재하의 [3H]-스피페론 결합을 위한 8개의 복제물을 수득하였다. 이어서, 막을 첨가하여 최종 부피가 300 ㎕가 되도록 하였다. 플레이트를 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한 후에, 96-웰 플레이트 톰텍 세포 수확기를 이용하여 PEI 코팅된 GF/B 필터 플레이트 (검정 완충액 중에 1시간 동안 미리 침지시켜 둠) 상에서 여과하였다. 4℃에서 세척 완충액 (50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 120 mM NaCl, pH 7.4) 250 ㎕로 5회 세척하여 미결합 방사능을 제거하였다. 플레이트를 건조시킨 후에 패커드 플레이트 밀봉기를 이용하여 아래 부분부터 밀봉하고, 마이크로신트-O (50 ㎕)를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고 (탑실 A), 필터-결합된 방사능을 섬광 계수기 (탑카운트, 패커드 바이오사이언스)로 3-분 계수 프로토콜을 이용하여 측정하였다.
총 특이적 결합 (B0)은 평균 최대 결합으로부터 평균 NSB를 차감하여 측정하였다. 또한 다른 모든 웰로부터의 값으로부터 NSB 값을 차감하였다. 이들 데이터는 B0의 백분율로 표현하였다. 화합물 농도-효과 곡선 ([3H]-스피페론 결합의 억제)은 전형적으로 0.1 nM 내지 10 μM 범위의 계열 희석액을 사용하여 측정하였다. 데이터를 4-변수 로지스틱 방정식에 대입하여 화합물 효능을 측정하였으며, 이를 pIC50 ([3H]-스피페론 결합의 50％ 억제를 유도하는 음의 로그 몰 농도)으로 표현하였다. 그 결과를 표 3에 나타내었다.
Figure pct00117
조합물 데이터
기니아 피그에서 단리한 기관환 제제에서의 기관지확장제 활성의 평가.
기니아 피그 (300 내지 500 g)를 경추 탈골로 사망시키고, 기관을 단리하였다. 기관을 너비 당 2 내지 3개의 연골환의 분절로 절단하고, 개질 크렙스(Krebs) 용액 (mM; NaCl, 90; NaHCO3, 45; KCl, 5; MgSO4·7H2O, 0.5; Na2HPO4·2H2O, 1; CaCl2, 2.25; 글루코스, 10; pH 7.4, 37℃에서 5％ CO2, 95％ O2의 기체로 처리함) 중의 10 ml 장기 조에 현탁시켰다. 등장성 장력의 측정을 위해 기관환을 등장력 변환기에 부착시켰다. 조직을 세척하고, 각 조직에 1 g의 힘을 가하였다. 상기 환을 메타콜린 (1 μM)으로 수축시켰다. 수축이 평탄역에 도달하면, 비히클 (증류 H2O 중 0.01％ DMSO), 인다카테롤 (10 nM), N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드 (10 nM), N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염 (1 nM), (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM), (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)와 인다카테롤 (10 nM)의 조합물, N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드 (10 nM)와 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)의 조합물 및, 또는 N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 염 (1 nM)과 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)의 조합물을 첨가하고, 조직을 60분 동안 두었다. 화합물을 첨가한지 60분 후에 각각의 환에서 장력을 측정하고, 메타콜린 (1 μM)에 대한 수축의 이완율％ (평균 ± 표준 오차 평균)로 표현하였다. 챠트(Chart) 4 소프트웨어 (AD인스트루먼츠(ADInstruments), (영국 챨그로브 소재))를 이용하여 데이터를 수집하였다.
인다카테롤과 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드의 조합물의 평가:
인다카테롤 (10 nM)에 대한 이완율 (메타콜린 (1 μM)에 대한 최대 반응의 백분율로 표현됨)은 24±6.9였고, (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)에 대한 이완율 (％)은 9±9.4였고, 인다카테롤 (10 nM)과 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)의 조합물에 대한 이완율 (％)은 40±3.6이었다. 비히클에 대한 이완율 (％)은 0±0이었다 (n = 3; 도 9 참조, 여기서 화합물 Z는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드임).
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드와 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드의 조합물의 평가:
N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드 (10 nM)에 대한 이완율 (메타콜린 (1 μM)에 대한 최대 반응의 백분율로서 표현됨)은 18±11.2였고, (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)에 대한 이완율 (％)은 9±4.3이었고, N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드 (10 nM)와 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)의 조합물에 대한 이완율 (％)은 32±14.1이었다. 비히클에 대한 이완율 (％)은 6±4.5였다 (n = 4; 도 10 참조, 여기서 화합물 V는 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 디히드로브로마이드이고, 화합물 Z는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드임).
N-시클로헥실-N 3 -[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트와 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드의 조합물의 평가:
N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 (1 nM)에 대한 이완율 (메타콜린 (1 μM)에 대한 최대 반응의 백분율로서 표현됨)은 23±10이었고, (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)에 대한 이완율 (％)은 5±1.8이었고, N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트 (1 nM)와 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드 (1 nM)의 조합물에 대한 이완율 (％)은 42±11.1이었다. 비히클에 대한 이완율 (％)은 6±4.5였다 (n = 4; 도 11 참조, 여기서 화합물 W는 N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 디-D-만델레이트이고, 화합물 Z는 (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 브로마이드임).
생체내 조합물 데이터
마취시킨 기니아 피그에서의 폐 기능 평가
수컷 던킨-하틀리(Dunkin-Hartley) 기니아 피그 (300 내지 600 g)의 체중을 재고, 회복가능한 기체 마취제 (산소 중 5％ 할로탄) 하에 기관내 경로를 통해 비히클 (0.05 M 포스페이트, 0.1％ 트윈 80, 0.6％ 염수, pH 6) 또는 화합물을 투여하였다. 동물에게 메타콜린을 투여하기 2시간 전에 화합물 또는 비히클을 투여하였다.
1차 기관지수축제 투여 대략 30분 전에 펜토바르비톤 (60 mg/mL 용액 1 mL/kg, i.p.)으로 기니아 피그를 마취시켰다. 기관에 캐뉼라를 삽입하고, 정적 호흡 펌프 (하버드 로덴트 벤틸레이터(Harvard Rodent Ventilator) 모델 683)를 이용하여 60회 호흡/분의 속도 및 5 ml/kg의 1회 호흡량으로 동물을 환기시켰다. 메타콜린 또는 유지 마취제 (필요에 따라 펜토바르비톤 용액 (60 mg/mL) 0.1 mL)의 투여를 위해 경정맥에 캐뉼라를 삽입하였다.
기도 저항의 측정을 위해 동물을 플렉시벤트 시스템(Flexivent System) (SCIREQ, 캐나다 몬트리얼 소재)으로 옮겼다. 동물에게 60회 호흡/분 및 5 mL/kg의 1회 호흡량으로 환기시켰다 (준정현 환기 패턴). 2 내지 3 cm H2O의 호기말 양압을 적용하였다. 플렉시벤트 "스냅샷" 장비 (지속시간 1 초, 주파수 1 Hz)를 이용하여 호흡 저항을 측정하였다. 안정한 기준 저항값이 얻어지면, 동물에게 메타콜린을 상승 용량 (0.5, 1, 2, 3 및 5 ㎍/kg, i.v.)으로 대략 4분 간격으로 경정맥 카테터를 통해 투여하였다. 기관지수축제의 각 투여 후 피크 저항값을 기록하였다. 폐 기능 측정을 완료한 후 정맥내 펜토바르비톤 나트륨 (유타탈(Euthatal)) 대략 1.0 mL를 사용하여 기니아 피그를 안락사시켰다. 화합물에 의해 생성된 기관지보호 백분율을 기관지수축제의 각 용량에서 하기와 같이 계산하였다.
Figure pct00118
상기 식에서, ％ 변화 Rveh란 비히클 처리군에서 기도 저항의 최대 백분율 변화의 평균이다.

Claims (15)

  1. (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
    (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리다진-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
    (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(피라진-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
    (R)-3-[1-(3-플루오로-페닐)-시클로헵탄카르보닐옥시]-1-(이속사졸-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
    (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
    (R)-1-[(5-플루오로-피리딘-2-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X;
    (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-3-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X; 및
    (R)-1-[(2-메틸-피리딘-4-일카르바모일)-메틸]-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X
    (여기서, X는 일가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)로부터 선택된 무스카린성 길항제인 제1 활성 성분, 및
    β2-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분
    을 조합하여 포함하는 제약 생성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 활성 성분이 2,5-디클로로벤젠 술포네이트 또는 1-히드록시나프탈렌-2-술포네이트인 무스카린성 길항제인 생성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제1 활성 성분이 1-히드록시나프탈렌-2-술포네이트 염인 무스카린성 길항제인 생성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제1 활성 성분이 브로마이드 염인 무스카린성 길항제인 생성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 β2-아드레날린수용체 효능제가 포르모테롤인 생성물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 β2-아드레날린수용체 효능제가
    N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드,
    N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(3-클로로페닐)에톡시]프로판아미드, 및
    7-[(1R)-2-({2-[(3-{[2-(2-클로로페닐)에틸]아미노}프로필)티오]에틸}아미노)-1-히드록시에틸]-4-히드록시-1,3-벤조티아졸-2(3H)-온, 또는
    이들의 제약상 허용되는 염
    으로부터 선택된 것인 생성물.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 β2-아드레날린수용체 효능제가 N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 생성물.
  8. 제1항에 있어서, (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X (여기서, X는 일가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)인 제1 활성 성분, 및 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-3-[2-(1-나프틸)에톡시]프로판아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 생성물.
  9. 제1항에 있어서, (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X (여기서, X는 일가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)인 제1 활성 성분, 및 N-시클로헥실-N3-[2-(3-플루오로페닐)에틸]-N-(2-{[2-(4-히드록시-2-옥소-2,3-디히드로-1,3-벤조티아졸-7-일)에틸]아미노}에틸)-β-알라닌아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 생성물.
  10. 제1항에 있어서, (R)-3-(1-페닐-시클로헵탄카르보닐옥시)-1-(피리딘-2-일카르바모일메틸)-1-아조니아-바이시클로[2.2.2]옥탄 X (여기서, X는 일가 또는 다가 산의 제약상 허용되는 음이온을 나타냄)인 제1 활성 성분, 및 인다카테롤인 제2 활성 성분을 조합하여 포함하는 생성물.
  11. 호흡기 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 생성물의 용도.
  12. 제11항에 있어서, 상기 호흡기 질환이 만성 폐쇄성 폐 질환인 용도.
  13. (a) (치료적으로 유효한) 용량의, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 정의된 무스카린성 수용체 길항제인 제1 활성 성분, 및
    (b) (치료적으로 유효한) 용량의, β2-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분
    을 호흡기 질환의 치료가 필요한 환자에게 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여하는 것을 포함하는, 호흡기 질환의 치료 방법.
  14. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 정의된 무스카린성 수용체 길항제인 제1 활성 성분의 제제, 및 β2-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분의 제제, 및 임의로 상기 제제의 투여가 필요한 환자에게 상기 제제를 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여하는 것에 대한 지침서를 포함하는 키트.
  15. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 정의된 무스카린성 수용체 길항제인 제1 활성 성분, 및 β2-아드레날린수용체 효능제인 제2 활성 성분을 혼합하여 포함하는 제약 조성물.
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