KR20100120545A - Composition for improving hair growth - Google Patents

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KR20100120545A KR1020090039413A KR20090039413A KR20100120545A KR 20100120545 A KR20100120545 A KR 20100120545A KR 1020090039413 A KR1020090039413 A KR 1020090039413A KR 20090039413 A KR20090039413 A KR 20090039413A KR 20100120545 A KR20100120545 A KR 20100120545A
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Abstract

PURPOSE: A composition for preventing hair loss and promoting hair growth is provided to suppress TGF-beta 1 and to promote hair follicle cell activation. CONSTITUTION: A composition for preventing hair loss and promoting hair growth contains extract obtained by filtering independent low molecular material, ion, ash impurity using an ultrafiltration membrane. The composition further contains Saussurea lappa, Lycium chinense, Prunella vulgaris var.lilacina or Kochia scoparia. A formulation for topical application on the scalp contains the composition.

Description

모발 성장 촉진제 조성물 {Composition for improving hair growth} Hair growth promoter composition {Composition for improving hair growth}

본 발명은 목향, 구기자, 하고초 및 지부자로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택되는 한약재를 함유하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진제 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게 본 발명은 초음파로 추출 한 뒤 5,000 내지 300,000 달톤(dalton) 정도의 분획분자량(molecular weight cut-off)을 갖는 고분자 한외여과막(ultrafiltration membrane)을 사용하여 여과한 추출물을 통해 모발의 성장 주 기 가운데 휴지기에서 성장기로 이행하는 주기를 단축시켜 새로운 모발이 빨리 자라게 하는 모발 성장기 유도 촉진 효과와 함께 모낭 세포 활성이 우수한 모발 성장 촉진제에 관련된다.The present invention relates to a hair loss prevention and hair growth promoter composition containing a herbal medicine selected from the group consisting of Mokhyang, Gugija, hachicho and branch, more specifically the present invention is 5,000 to 300,000 Daltons after extraction with ultrasound The extract filtered using a polymer ultrafiltration membrane with a molecular weight cut-off of about the same time (dalton) shortens the cycle from the resting phase to the growth phase of the hair growth cycle. It is related to a hair growth promoter having excellent hair follicle cell activity, along with a hair growth phase induction-promoting effect of growing fast.

인체의 모발은 약 10만 ~ 15만개 정도로, 각각의 모발은 서로 다른 주기를 가지며 성장기(anagen), 퇴행기(catagen), 휴지기(telogen)를 거쳐 성장, 탈락한다. 이러한 주기는 3 ~ 6년에 걸쳐 반복되는데, 그 결과 정상적으로 하루 평균 50 ~ 100개의 모발이 탈락하게 된다. 일반적으로 탈모증이라 함은 이러한 주기 중에서 성장기의 모발 비율이 짧아지고 퇴행기 또는 휴지기의 모발이 많아져 비정상적으로 모발이 탈락하는 숫자가 많아지는 것을 일컫는다. Human hair is about 100,000 to 150,000 pieces, each hair has a different cycle and grow, drop out through the anagen, catagen, telogen. This cycle is repeated over three to six years, resulting in an average of 50 to 100 hairs falling out per day. Generally, the term alopecia refers to the increase in the number of hairs that fall abnormally due to shortening of the hair growth rate in the growth phase and more hair in the degenerative or resting phase.

탈모의 원인으로는 남성호르몬 작용 과잉설, 피지 분비 과잉설, 혈액순환 불량설, 과산화물이나 세균 등에 의한 두피 기능 저하설, 유전적 요인, 노화, 스트레스 등이 논의되어 왔다. 그러나 현재까지 탈모에 관한 명확한 원인은 밝혀져 있지 않은 상태이며, 매우 복잡한 작용이 얽혀 있는 것으로 알려져 있다. The causes of alopecia have been discussed, such as excessive male hormone action, excessive sebum secretion, poor blood circulation, hypoglycemia caused by peroxide or bacteria, genetic factors, aging, stress. However, to date, no clear cause for hair loss is unknown, and it is known that a very complicated action is intertwined.

이처럼 다양하고 복잡한 탈모 원인에 대해, 현재까지 알려진 탈모 방지 제품에는 유효성분으로 혈행 촉진, 모근 기능 강화, 두피 보습 효과, 비듬 방지 효과, 항산화 효과, 모발성장기 연장 효과, 남성호르몬 작용 억제 등을 목적으로 하는 성분 등이 포함되어 있으나, 효과 면에서 뚜렷한 효과를 지는 것은 아직까지 없는 상태이고 부작용의 문제가 제기되기도 한다.The various hair loss prevention products known to date are effective ingredients for promoting blood circulation, strengthening the hair root function, moisturizing the scalp, preventing dandruff, antioxidant effects, prolonging the hair growth period, and inhibiting male hormone activity. It contains ingredients, etc., but there is still no clear effect in terms of effects and problems of side effects have been raised.

탈모 방지 및 모발 성장 촉진 연구에 이용되는 실험법으로는 실험동물을 이 용한 in vivo 평가와 모낭세포 및 조직 배양을 이용한 in vitro 평가 등이 주로 이용되고 있다. 1980년대에 들어 모낭을 구성하고 있는 핵심 세포인 모유두세포(dermal papilla cell)와 외모근초세포(outer root sheath cell)의 배양법이 개발되면서 모낭에서의 분화기전에 대한 연구가 활기를 띠게 되었으며, 이후 모낭조직 배양법이 개발되면서 발모, 양모 및 탈모 방지 등의 연구에 유용한 평가모델로 활용될 수 있는 가능성을 보여주었다. 최근에는 생화학적, 분자생물학적 실험 방법을 이용하여 모발 성장과 관련된 각종 성장인자나 유전자의 동정, 작용기전 연구 및 약물탐색 연구 역시 활발히 진행되고 있다.As an experimental method used to prevent hair loss and promote hair growth, in vivo evaluation using experimental animals and in vitro evaluation using hair follicle cells and tissue culture are mainly used. In the 1980s, research on the differentiation mechanisms in hair follicles was invigorated by the development of culture methods for dermal papilla cells and outer root sheath cells, which are the core cells of hair follicles. With the development of tissue culture methods, it has been shown to be a useful evaluation model for research on hair growth, wool and hair loss prevention. In recent years, biochemical and molecular biological experiments have been actively conducted to identify various growth factors and genes related to hair growth, research on mechanism of action, and drug search.

모발 성장 촉진 또는 탈모 방지제로서 시판된느 제품이 모발에 미치는 작용으로는 성장기 유도효과, 모발 성장기 연장 효과, 5a-리덕타제 저해 효과, 혈행 촉진 효과, 살균 효과, 비듬 방지 효과, 보습 효과, 항산화 효과 등이 있으나, 기존 제제에서 탈모 방지 및 모발 성장 촉진 효과는 충분하지 않다.The effects of a commercially available product on the hair as a hair growth or hair loss inhibitor on the hair include growth phase induction effect, hair growth phase extension effect, 5a-reductase inhibitory effect, blood circulation promoting effect, bactericidal effect, anti-dandruff effect, moisturizing effect, and antioxidant effect. And the like, but the effect of preventing hair loss and promoting hair growth is not sufficient in existing formulations.

남성형 탈모증은 남성호르몬 의존적이어서 남성호르몬의 양과 직접적인 관계가 있으며, 이에 따라 최근 남성호르몬 활성 억제를 통해 탈모를 예방 및 치료하기 위한 많은 연구가 보고되고 있다. 남성호르몬에 대한 탈모의 기전을 간략히 설명하면 다음과 같다. 즉, 남성호르몬 중 하나인 테스토스테론(testosterone)은 5α-리덕타제라는 효소에 의해 활성형 남성호르몬인 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)으로 전환되고, 이처럼 활성화된 호르몬이 일정한 수용체와 결합하여 탈모를 일으키는 단백질을 유도하게 되어 탈모를 진행시키게 된다. 또한, 이와 같은 기전에 의해 피지를 과잉 생성하기도 하여 여드름이나 지루성 피부 염 등을 일으키기도 하는데, 그 결과로서 두피에서는 염증을 동반한 탈모가 나타나기도 한다. 결과적으로 남성형 탈모증은 5α-리덕타제의 작용에 의한 디하이드로테스토스테론의 과잉 생성 때문으로, 5α-리덕타제의 활성을 억제한다면 남성형 탈모증을 근본적으로 효과적으로 예방 및 치료할 수 있을 것이다. 이와 같은 관점에서 남성의 전립선 치료제로 사용되어 오던 피나스테라이드(finasteride)라는 성분을 이용한 남성형 탈모증 치료제가 개발되기도 하였으나 성기능 장애 등의 부작용이 보고된 일도 있을 뿐 아니라, 탈모에 대해서 이들의 5α-리덕타제 활성 억제 작용 단독으로는 그 효과를 충분히 기대하기도 어렵다. Androgenetic alopecia is directly dependent on the amount of male hormone since it is dependent on male hormones, and thus, many studies have recently been reported to prevent and treat hair loss through inhibition of male hormone activity. Briefly explain the mechanism of hair loss on male hormones are as follows. In other words, testosterone, one of the male hormones, is converted to dihydrotestosterone, an active male hormone, by an enzyme called 5α-reductase, and this activated hormone binds to a specific receptor to cause a hair loss protein. Induces hair loss. In addition, this mechanism may cause excessive production of sebum, causing acne, seborrheic dermatitis, and the like, and as a result, scalp may occur with inflammation. As a result, androgenetic alopecia is due to the excessive production of dihydrotestosterone by the action of 5α-reductase, it will be able to fundamentally effectively prevent and treat male alopecia if inhibiting the activity of 5α-reductase. In view of this, male hair loss treatment using finasteride, which has been used as a prostate treatment for men, has been developed, but side effects such as sexual dysfunction have been reported, and their 5α-reductase activity against hair loss It is also difficult to fully anticipate the effect by inhibitory effect alone.

최근 모발 분야에서도 한약재의 사용이 두드러져 비듬 완화 효과가 우수하고, 특히 모발 성장 촉진 효과 면에서 우수하다고 보고된 후 한약재 추출물을 이용한 탈모 억제 및 모발 성장 촉진 조성물에 대해서도 많은 연구가 있었다.Recently, in the field of hair, the use of herbal medicines is prominent, and it has been reported that the dandruff relieving effect is excellent, and in particular, in terms of hair growth promoting effect, there have been many studies on hair loss inhibiting and hair growth promoting compositions using herbal extracts.

그러나 통상의 방법으로 추출한 한약재 추출물들을 사용한 한약재 조성물들은 원하는 모발성장 촉진 효과가 미미하여 그 실용성이 높지 않았다.However, the herbal compositions using the herbal extracts extracted by conventional methods did not have high practicality because the desired hair growth promoting effect was insignificant.

한편, 초음파 기술을 이용한 추출물은 저온에서 초음파를 이용해 추출함으로써 열에 불안정한 플라보노이드, 비타민, 폴리페놀 등의 유효성분 함량 추출율이 현저히 높아지며, 전분, 고무질, 회분, 단백질 및 당분 등 불순물로 인한 피부 알러지등을 한외여과막을 이용해 제거하여 피부에 더욱 안전한 물질을 얻을 수 있다.On the other hand, the extract using the ultrasonic technology is extracted by using ultrasonic waves at low temperature, significantly increasing the extraction rate of the active ingredient content of flavonoids, vitamins, polyphenols, etc., which is unstable to heat, and also prevents skin allergies due to impurities such as starch, rubber, ash, protein and sugar. It can be removed using an ultrafiltration membrane to obtain a safer substance for the skin.

이상과 같은 문제점을 고려하여, 본 발명자들은 초음파 추출 후 고분자 한외여과막을 이용해 정제한 추출물을 이용한 여러 메커니즘에 대한 효과 중 모발의 성장기 유도 촉진 작용을 확인할 수 있는 실험을 통해 수십 종의 한약재 추출물을 스 크리닝 한 결과, 목향, 구기자, 하고초 및 지부자 등의 추출물이 새로운 모발이 나고 자라서 다시 빠지게 되는 모발 성장 주기 가운데 휴지기 에서 성장기로 이행하는 단계를 촉진시킨다는 것을 발견하게 되었으며, 모낭세포에 대한 호라성작용을 평가하는 in vitro 평가에서도 매우 우수한 결과를 나타내었다.In view of the above problems, the present inventors have examined dozens of herbal medicine extracts through experiments that can confirm the growth-induction promoting action of hair among the effects of various mechanisms using extracts purified using polymer ultrafiltration membranes after ultrasonic extraction. As a result of cleaning, it was found that extracts such as Mok-Gyu, Goji, Hachicho and Branch were promoted the transition from the resting phase to the growing stage of the hair growth cycle when new hair grows, grows and falls out again. In vitro evaluations showed very good results.

상기 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명은 초음파 및 한외여과막을 이용한 추출, 정제 기술을 통해 비자극성이고 피부에 안전하여 피부질환의 유발 문제가 없으며, 우수한 모발 성장 촉진 및 탈모 방지 효과를 갖는 모발 성장 촉진제 조성물을 제공하고자 하는 것이다.In order to solve the problems of the prior art, the present invention is non-irritating and safe to the skin through the extraction and purification technology using ultrasonic and ultrafiltration membranes, there is no problem of causing skin diseases, and has excellent hair growth promotion and hair loss prevention effect It is to provide a hair growth promoter composition.

본 발명은 탈모 억제 및 모발 성장 촉진 조성물에 관한 것으로 더욱 자세하게는, 초음파 추출 후 고분자 한외여과막을 이용하여 정제한 한약재 추출물로부터 우수한 모낭 세포 활성 증가 효과 및 형질전환 촉진 인자 베타 1의 억제 효과 등이 우수하고 동물실험에 의한 모발 성장 촉진 효과가 뛰어난 탈모 억제 및 모발 성장 촉진 조성물을 제공하고자 한다. The present invention relates to a hair loss inhibiting and hair growth promoting composition, and more particularly, excellent hair follicle cell activity and the effect of inhibiting the transformation promoter beta 1 from the herbal medicine extract purified using a polymer ultrafiltration membrane after ultrasonic extraction. And to provide a hair loss inhibition and hair growth promoting composition excellent in hair growth promoting effect by animal experiments.

아래 효과시험 예에서, 모발 성장기 유도 촉진 효과를 평가하는 동물시험 모 델로서는 C57BL/6 마우스 모델을 사용하였는데, C57BL/6 마우스는 체모가 검정색이고, 자발적 탈모(spontaneous alopecia)가 일어나는 특징을 지니고 있으며, 또한 멜라닌 세포(melanocyte)가 모낭에만 한정적으로 존재하고 멜라닌(melanin) 합성이 모발 성장 주기(hair growth cycle)와 잘 일치되어 피부색으로 모발의 성장 주기를 판정할 수 있는 장점을 가져 모발 성장기 유도 작용에 대한 연구에 널리 이용되는 것이다.In the effect test example below, the C57BL / 6 mouse model was used as an animal model for evaluating hair growth induction promoting effects. The C57BL / 6 mouse has black hair and is characterized by spontaneous alopecia. In addition, melanocytes are present only in the hair follicles, and melanin synthesis matches well with the hair growth cycle. It is widely used for research.

비교예Comparative example 1.  One. 열수Hydrothermal 추출 방법 Extraction method

목향, 구기자, 하고초 및 지부자를 건조하여 세절한 후 추출물은 동량으로 혼합한 후, 추출용매(증류수:1,3-부틸렌글리콜 = 7:3)를 400 mL 첨가하고 약탕기(DWP-5000, 대웅약탕기)에서 끓이면서 4시간동안 추출 후 침전물이 생기지 않도록 0.2㎛ 필터로 여과하여 최종 추출물을 얻었다.      After drying and cutting Mok-hyang, wolfberry, vinegar and branch, extracts were mixed in the same amount, and 400 mL of extraction solvent (distilled water: 1,3-butylene glycol = 7: 3) was added and the water bath (DWP-5000, After extracting for 4 hours while boiling in Daewoong tangtang) filtered to 0.2㎛ filter to obtain a final extract.

비교예Comparative example 2. 초음파 추출 방법 2. Ultrasonic Extraction Method

목향, 구기자, 하고초 및 지부자를 건조하여 세절한 후 추출물은 동량으로 혼합한 후, 추출용매(증류수:1,3-부틸렌글리콜 = 7:3)를 400 mL 첨가하고 실온에서 초음파추출기(SM30-CE, 소니메디)로 4시간 동안 추출 후 침전물이 생기지 않도록 0.2㎛ 필터로 여과하여 최종 추출물을 얻었다.      After drying and cutting Mok-hyang, wolfberry, vinegar and branch, extracts were mixed in the same amount, 400 mL of extraction solvent (distilled water: 1,3-butylene glycol = 7: 3) was added, and the ultrasonic extractor (SM30) was added at room temperature. -CE, Sony Medi) 4 hours after the extraction was filtered with a 0.2㎛ filter so as not to produce a precipitate to obtain a final extract.

실시예Example 1. 초음파 추출 후 고분자  1. Polymer after ultrasonic extraction 한외여과막을Ultrafiltration membrane 통해 여과하는 방법 How to Filtrate Through

목향, 구기자, 하고초 및 지부자를 건조하여 세절한 후 추출물은 동량으로 혼합한 후, 추출용매(증류수:1,3-부틸렌글리콜 = 7:3)를 400 mL 첨가하고 실온에서 초음파추출기(SM30-CE, 소니메디)로 4시간 동안 추출 후 1 내지 50 마이크 로미터 크기의 카트리지(catrige)형 전처리 여과기를 통과시킨 후 분획분자량이 10,000내지 200,000 달톤인 고분자로 이루어진 한외여과막을 사용하여 여과하여 최종 추출물을 얻었다.      After drying and cutting Mok-hyang, wolfberry, vinegar and branch, extracts were mixed in the same amount, 400 mL of extraction solvent (distilled water: 1,3-butylene glycol = 7: 3) was added, and the ultrasonic extractor (SM30) was added at room temperature. -CE, SonyMedi) 4 hours after extraction and passed through a cartridge-type pretreatment filter of 1 to 50 micrometers size, and then filtered using an ultrafiltration membrane made of a polymer having a molecular weight of 10,000 to 200,000 Daltons An extract was obtained.

실험예Experimental Example 1. 모발 성장기 유도 촉진 작용 평가 1. Evaluation of hair growth induction promoting action

상기 실시예 1,2,3 에서 제조한 한약재 추출물의 모발 성장 촉진 효과를 알아보기 위해 모발 성장기 유도 작용 실험을 하였다. 모발 성장기 유도 촉진 효과 평가에 널리 이용되고 있는 생후 42~56일된 마우스(C57BL/6,수컷)을 사용하였다. 먼저, 마우스 등 부위의 털을 전기면도기를 이용해 제거하고 각 마우스의 무게를 재서 몸무게가 골고루 분산되도록 12마리씩 나누었다. 하루 동안 적응 기간을 두고 다음 날부터 제모 부위에 대조약 및 한약재 추출물을 도포하였다. 이때 대조약으로는 40% 에탄올을, 시험 약으로는 실시예 1,2,3 에서 제조한 각 한약재 추출물을 사용하였다. 마우스 개체당 등 부위에 1일 1회, 100uL씩을 28일간 도포하여 성장기 유도 촉진 작용을 관찰하였으며, 그 결과를 화상분석기를 이용해 털을 제거한 면적에 대해 신생모가 자란 면적의 비율을 구하고 그 평균값으로 평가하였다. 아래 표 1은 한약재 추출물의 모발 성장기 유도 촉진 작용 평가 결과로서, 농도에 따른 효과를 보여준다.In order to determine the hair growth promoting effect of the herbal extracts prepared in Examples 1, 2, 3 were subjected to hair growth phase induction experiment. 42-56 days old mice (C57BL / 6, male), which are widely used to evaluate hair growth induction promoting effect, were used. First, the hair on the back of the mouse was removed using an electric razor, and each mouse was weighed and divided into 12 pieces so that the weight was evenly distributed. After one day of adaptation, the control and herbal extracts were applied to the hair removal site from the next day. At this time, 40% ethanol was used as a reference drug, and each herbal extract prepared in Examples 1,2 and 3 was used as a test drug. 100 uL was applied to the back of each mouse once a day for 28 days to observe the growth-induction promoting effect. The results were obtained by using an image analyzer to determine the ratio of the area where the newborn hair was grown to the area from which hair was removed. It was. Table 1 below shows the results of the hair growth phase induction promoting action of the medicinal herb extract, the effect according to the concentration.

추출물extract 농도(%)density(%) 면적비(%)Area ratio (%) 비교예 1Comparative Example 1 0.0010.001 10.710.7 0.010.01 21.221.2 0.10.1 25.125.1 1One 35.535.5 1010 50.150.1 비교예 2Comparative Example 2 0.0010.001 21.021.0 0.010.01 33.933.9 0.10.1 52.652.6 1One 68.268.2 1010 79.579.5 실시예 1Example 1 0.0010.001 31.531.5 0.010.01 43.043.0 0.10.1 76.676.6 1One 88.788.7 1010 92.892.8 대조군Control 5.25.2

상기 결과에서 알 수 있듯이 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물은 농도 의존적으로 매우 우수한 모발 성장기 유도 촉진 작용을 나타내어 모발 성장 촉진 효능이 우수함을 알 수 있었다.As can be seen from the results, it was found that the herbal extracts filtered by the ultrafiltration membrane of the polymer after ultrasonic extraction showed a very good hair growth induction promoting effect in a concentration-dependent manner, and the hair growth promoting effect was excellent.

실험예Experimental Example 2.  2. 모낭세포Hair follicle 활성 증가 평가 Activity increase assessment

상기 실시예 1,2,3 에서 제조한 한약재 추출물의 모낭 세포 활성 효능을 측정하기 위해, 성형외과로부터 두피 수술 후 사람 두피 조직을 얻어 이로부터 모낭조직을 분리하였다. 먼저, 두피 조직을 70% 에탄올에 1분간 침적하여 멸균시키고 세포배양용 배지인 DMEM으로 3회 세척하였다. 입체 현미경 하에서 표피와 진피의 경계부를 수술용 메스로 절개하여 표피를 분리시키고, 진피에 박혀있는 모낭을 핀셋을 이용해 1개씩 뽑아내었다. 분리된 모낭을 10% FBS(Fetal Bovin Serum)이 함유되어있는 DMEM배양액으로 옮기고 모유두가 들어있는 모낭의 아랫부분을 메스로 절단하였다. 미세한 핀셋을 이용해 모유두를 분리하고 이를 20% FBS가 함유된 DMEM배양액으로 옮겨 2주간 배양하였다. 모유두 조직으로부터 세포가 자라나기 시작하면서 배양용기에 가득 차면 0.25% 트립신, 0.02% EDTA로 세포를 배양용기에서 분리한 후 계대 배양하여 세포를 계속 배양하였다. 2~3 계대의 모유두 세포를 10% FBS가 들어있는 DMEM 배양액으로 2 X 104/mL 농도로 희석한 후 이를 60 mm 배양용기에 5mL씩 넣어주고 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다. 다음날 FBS가 함유된 배양액을 제거하고 FBS가 들어있지 않은 배양액 및 한약재 추출물이 함유된 배양액으로 교환하여 24시간 배양한 후, 방사선으로 표지된 타이미딘(Thymidine)을 배양접시당 10uCi씩 첨가해주고 24시간을 더 배양하였다. 배양이 끝난 세포를 인산 완충용액으로 3회 씻어주고 5% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid)으로 1회 세척하였다. 세포를 0.1% 소디움도데실설페이트, 0.5N 수산화나트륨 용액으로 녹인 후 신틸레이션 칵테일(scintillation cocktail)에 섞어주고 방사선 동위원소의 양을 베타-카운터(beta-counter)를 이용해 측정하였다. 세포활성도는 대조군에 대해 방사능 표지된 타이미딘을 세포 내로 어느 정도 많이 업테이크(uptake)하였는지로 비교 평가하였다.In order to measure the hair follicle cell activity of the herbal extracts prepared in Examples 1, 2, and 3 above, human scalp tissues were obtained from scalp surgery and the hair follicle tissues were separated therefrom. First, the scalp tissue was sterilized by soaking in 70% ethanol for 1 minute and washed three times with DMEM, a cell culture medium. Under the stereo microscope, the epidermis and the dermis were cut out with a surgical scalpel to separate the epidermis, and hair follicles embedded in the dermis were pulled out one by one using tweezers. The separated hair follicles were transferred to DMEM culture medium containing 10% FBS (Fetal Bovin Serum), and the lower part of the hair follicles containing the dermal papilla was cut with a scalpel. Nipples were separated using fine tweezers and transferred to DMEM medium containing 20% FBS and incubated for 2 weeks. When cells grew from the dermal papilla tissue and filled with the culture vessel, the cells were separated from the culture vessel with 0.25% trypsin and 0.02% EDTA, followed by subculture. 2 ~ 3 passages of dermal papilla cells were diluted with DMEM medium containing 10% FBS at a concentration of 2 X 104 / mL, and then 5mL each of them were placed in a 60 mm culture vessel and incubated in a 37 ° C. incubator for 24 hours. The next day, remove the culture medium containing FBS, exchange it with the culture medium containing no FBS and the medicinal herb extract and incubate for 24 hours, and then add radiation-labeled thymidine (10 uCi) per plate. The time was incubated further. The cultured cells were washed three times with phosphate buffer and washed once with 5% trichloroacetic acid. Cells were dissolved in 0.1% sodium dodecyl sulfate and 0.5 N sodium hydroxide solution, mixed in a scintillation cocktail, and the amount of radioisotope was measured using a beta-counter. Cell activity was evaluated by comparing how much uptake of radiolabeled thymidine into the cells.

추출물extract 농도(%)density(%) 세포증식 활성능(%)Cell proliferation activity (%) 비교예 1Comparative Example 1 0.0000010.000001 88.288.2 0.000010.00001 94.694.6 0.00010.0001 101.6101.6 비교예 2Comparative Example 2 0.0000010.000001 101.9101.9 0.000010.00001 114.6114.6 0.00010.0001 122.6122.6 실시예 1Example 1 0.0000010.000001 111.9111.9 0.000010.00001 130.6130.6 0.00010.0001 153.6153.6 대조군Control 100100

표 2의 결과에서 볼 수 있듯이 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물은 직접적으로 모낭 상피에 작용하여 모발 성장 촉진 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.As can be seen from the results in Table 2, the herbal extracts filtered by the ultrafiltration membrane of the polymer after ultrasonic extraction showed direct hair growth effect by acting on the hair follicle epithelium.

실험예Experimental Example 3. 세포독성 평가 3. Cytotoxicity Assessment

상기 실험예 1,2,3의 한약재 추출물에 대해 V79-4세포(차이니스 햄스터, 폐조직 섬유아세포의 연속 세포주)를 배양하여 MTT 시험을 하는 방법(Mossman T. J. Immunol. Meth. 55-63(1983))을 수행하여 세포 독성을 시험하고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 이때 대조군으로 SLS를 사용하였다. Method of MTT test by culturing V79-4 cells (Chinese hamster, lung tissue fibroblasts continuous cell line) with respect to the herbal extracts of Experimental Examples 1,2,3 (Mossman TJ Immunol. Meth. 55-63 (1983 )) Was performed to test the cytotoxicity, and the results are shown in Table 3 below. At this time, SLS was used as a control.

시료sample IC50 (%, w/v)IC50 (%, w / v) SLSSLS 0.0050.005 비교예 1Comparative Example 1 1.001.00 비교예 2Comparative Example 2 5.005.00 실시예 1Example 1 10.0010.00

표 3에서 볼 수 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물의 IC50값은 10%로 SLS에 비해 2배 이상 세포독성이 낮게 나타나 안전성이 우수함을 확인할 수 있었다.As can be seen in Table 3, the IC50 value of the medicinal herb extract filtered by the polymer ultrafiltration membrane after the ultrasonic extraction was 10%, which was two times lower than the SLS, indicating that the cytotoxicity was excellent.

실험예Experimental Example 4.  4. 알러지allergy 평가 evaluation

상기 실시예에서 제조한 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물의 알러지 유발 여부를 확인하기 위하여 운반 매개물로 에탄올을 사용하는 실험법을 택하였다[참고문헌 : Kimber Ⅰ(1990) : Identification of contact allergens using the murine local lymph node assay, J. Appl. Toxicol. 10(3); 173-180]. In order to confirm the allergy of the herbal extracts filtered by the polymer ultrafiltration membranes after the ultrasonic extraction prepared in the above example, the experimental method using ethanol was selected as a carrier medium [Reference: Kimber I (1990): Identification of contact allergens using the murine local lymph node assay, J. Appl. Toxicol. 10 (3); 173-180].

먼저 상기 실시예에서 있듯이 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물을 20.0 중량%, 40.00 중량% 및 60.00 중량% 용액으로 제조 후 시행하였다. 즉 생쥐(Balb/c)의 양쪽 귀에 50 ㎕씩 3 일간 발라준 후 쥐로부터 이개임파절(auricular lymph node)을 분리하였다. 임파절을 분쇄하여 단일세포 상태로 만든 후 방사성 동위원소인 [3H]-메틸티미딘([3H]-methyl thymidine)을 첨가하여 24 시간 배양한 다음, β-신틸레이션 계수기(Beckman LS 6000 TA, USA)를 이용하여 세포의 증폭도(dpm, disintegrations per minute)를 측정하고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 이때, 대조군으로는 에탄올 60 %용액을 사용하였다.First, as in the above embodiment, after extracting the ultrasonic medicinal herb extract filtered with a polymer ultrafiltration membrane was prepared in 20.0% by weight, 40.00% by weight and 60.00% by weight solution. That is, 50 μl was applied to both ears of the mouse (Balb / c) for 3 days, and then auricular lymph nodes were isolated from the mice. Milling the lymph nodes by a radioactive isotope of [3 H] and then made into a single cell - from the addition of methyl thymidine ([3 H] -methyl thymidine) and then incubated for 24 hours, β- scintillation counter (Beckman LS 6000 TA, USA) to measure the degree of amplification (dpm, disintegrations per minute) of the cells, and the results are shown in Table 4 below. At this time, ethanol 60% solution was used as a control.

시료sample 임파절세포 수
(107세포/mL)
Lymph node count
(10 7 cells / mL)
Cmp
(평균)
Cmp
(Average)
증폭도Amplification
에탄올ethanol 2.132.13 24812481 운반매개물Transportation 초음파 추출 후 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물Herbal Medicine Extract Filtered by Ultrafiltration Membrane after Ultrasonic Extraction 1.871.87 15301530 0.60.6 초음파 추출 후 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물Herbal Medicine Extract Filtered by Ultrafiltration Membrane after Ultrasonic Extraction 1.881.88 23372337 0.90.9 초음파 추출 후 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물Herbal Medicine Extract Filtered by Ultrafiltration Membrane after Ultrasonic Extraction 1.871.87 23362336 0.90.9

알러지 평가 결과는 대조군에 비한 시료군의 임파구 증폭 정도로 나타내며, 한 농도에서라도 시료의 증폭 정도(S.I.)가 3 이상이고, 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보일 경우 알러젠으로 간주하게 되는데, 상기 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명에 사용되는 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물은 증폭 정도가 3 이하로서 알러지 유발 가능성이 없는 것으로 나타났다.      The allergy evaluation result indicates the lymphocyte amplification of the sample group compared to the control group, and if the amplification degree (SI) of the sample is 3 or more at any concentration and shows a tendency to increase in a concentration-dependent manner, it is regarded as an allergen. As described above, the herbal extracts filtered by the ultrafiltration membrane of the polymer after the ultrasonic extraction used in the present invention showed that the amplification degree was 3 or less and there was no possibility of allergy.

본 발명에 따르는 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 모발 성장 촉진 조성물은 기존의 열수 추출이나 초음파 추출보다 모발의 성장기 유도 촉진 작용과 모낭세포 활성이 훨씬 뛰어났다. 또한 피부 독성이 적고 피부 트러블 유발이 없는 우수하여 매우 안전하다.The hair growth promoting composition filtered by the ultrafiltration membrane of the polymer after the ultrasonic extraction according to the present invention was far superior to the conventional hydrothermal extraction or the ultrasonic extraction and promoted the hair growth phase induction and hair follicle cell activity. In addition, it is very safe because of its low skin toxicity and excellent skin trouble.

목향(Saussurea lappa)은 국화과에 속한 다년생 초본인 목향의 뿌리를 건조한 것으로 한의학에서는 행기지통(行氣止痛), 온중화위(溫中和胃)의 효능이 있고, 현대 약리학적으로는 혈관확장, 혈압강하 및 소염 등의 효과가 있다고 한다.The root of Mok-hyang, a perennial herb belonging to the Asteraceae, was dried. It is said to be effective in lowering blood pressure and anti-inflammatory.

구기자(Lycium chinense)는 가지과에 속한 구기자 나무 또는 기타 동속식물의 열매를 건조한 것으로 한의학에서는 자신보양명목(滋腎補陽明目), 윤폐지해(潤肺止咳)의 효능이 있고 현대 약리학적으로는 면역조절, 조혈기능 촉진, 항노화 등의 효과가 있다고 한다.Lycium chinense is the dried fruit of a wolfberry tree or other related plant belonging to the branch family. In oriental medicine, it has the effect of self-retaining nomenclature and lubricity. It is said to have the effects of immune regulation, hematopoietic function and anti-aging.

하고초(Prunella vulgaris var.lilacina)는 꿀풀과에 속하는 다년생 초본인 꿀풀의 꽃이삭을 건조한 것으로 한의학에서는 청간화(淸肝火), 청열산결(淸熱散結)의 효능이 있고 현대 약리학적으로는 혈압강하, 소염, 면역억제 및 항균 등의 효과가 있다고 한다.Prunella vulgaris var.lilacina is a dried perennial herbaceous nectar which is a herbaceous herb in oriental medicine. It is said to be effective in lowering blood pressure, anti-inflammatory, immunosuppression and antibacterial effects.

지부자(Kochia scoparia)는 명아주과에 속한 1년생초목인 댑싸리의 과실로 한의학에서는 청열이수(淸熱利水), 이습지양(利濕止痒)의 효능이 있고 현대 약리학적으로는 피부 소양증에 효과가 있다고 한다. Kochia scoparia is a fruit of Dapsari, a year-old herbaceous plant belonging to the family of Ming Dynasty. It is said.

본 발명은 한약재 추출물을 제조하기 위해 통상적으로 이용하는 열수 추출, 실온 추출, 가온 추출 등의 방법 대신 초음파 추출을 이용한 후, 고분자 한외여과막을 통해 불순물을 여과 및 제거하는 경우, 탈모 억제 및 모발 성장 촉진효과가 매우 향상된다는 놀라운 결과에 기초하여 제조 방법을 제공한다.The present invention uses ultrasonic extraction instead of hot water extraction, room temperature extraction, warming extraction, etc., which are commonly used to prepare herbal extracts, and then, when filtering and removing impurities through a polymer ultrafiltration membrane, inhibiting hair loss and promoting hair growth. It provides a manufacturing method based on the surprising result that is greatly improved.

본 발명의 초음파 추출에 사용되는 추출용매는 정제수, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 핵산, 클로로포름, 벤젠 및 페트로륨 에테르로 이루어진 군으로부터 1종 또는 2종 이상 선택되어 사용할 수 있으며, 초음파 추출기로 약 1 내기 12시간 동안 추출한다.The extraction solvent used in the ultrasonic extraction of the present invention is purified water, methanol, ethanol, propanol, butanol, glycerol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, methyl acetate, ethyl acetate, nucleic acid, chloroform, benzene and petroleum ether. One or two or more kinds may be selected and used from the group consisting of, and the ultrasonic extractor is extracted for about 1 to 12 hours.

또한 상기와 같이 초음파를 이용해 추출된 한약재 추출물은 추출물 내에 존재하는 목질부나 입자성물질, 혹은 불용성 부유물질 등의 조립질을 제거하기 위해 1 내지 50 마이크로미터 크기의 캐트리지(catridge)형 전처리 여과기를 통과시킨 후 분획분자량이 5,000내지 300,000 달톤인 고분자로 이루어진 한외여과막을 사용하여 회분 및 독립적으로 존재하는 저분자 물질, 이온등을 거의 대부분 통과시키고 플라보노이드, 폴리페놀 등 유효성분만을 투과액중에 축적되게 하여 추출물을 얻으며, 고분자 여과막의 재질은 재생 셀룰로오스 계열(Regenerated Cellulose), 폴리아크릴로니트릴(Polycarylonitrile, PAN), 폴리설폰(Polysulfone), 폴리이소설 폰(Polyisosulfone), 폴리비닐리덴플루오르(Polyvinylidene fluoride)등이 바람직하다.In addition, the herbal extract extracted using the ultrasonic wave as described above is a cartridge type pretreatment filter having a size of 1 to 50 micrometers to remove coarse particles such as wood, particulate matter, or insoluble suspended solids present in the extract. After passing through, the ultrafiltration membrane composed of polymers with a molecular weight of 5,000 to 300,000 Daltons is used to pass through most of the low-molecular substances and ions, which are present independently of ash, and to extract only active ingredients such as flavonoids and polyphenols in the permeate. The material of the polymer filtration membrane is preferably Regenerated Cellulose, Polyacrylonitrile (PAN), Polysulfone, Polyisosulfone, Polyvinylidene fluoride, etc. Do.

상기와 같이 얻어진 한약재 추출물은 0.0001 내지 100 중량%를 함유하는 것이 바람직하다.Herbal medicine extract obtained as described above preferably contains 0.0001 to 100% by weight.

또한 본 발명의 조성물에는, 탈모 환자가 사용하기 적합하도록 부가적인 기능을 부여하기 위해 비듬방지제, 각질 연화제, 청량제, 보습제 등 보조 성분들을 첨가할 수 있으며, 이 경우 더욱 우수한 효과를 나타낸다.In addition, to the composition of the present invention, in order to impart additional functions suitable for use by alopecia patients, auxiliary ingredients such as anti-dandruff, keratin softeners, coolants, and moisturizers may be added, and in this case, a better effect is obtained.

본 발명의 모발 성장 촉진제 조성물은 액상, 크림상, 페이스트상 똔느 고체상 등 두피에 적용시킬 수 있는 모든 제형으로 제조할 수 있고, 통상의 첨가제를 가하여 모발 성장 촉진을 위한 샴푸, 헤어컨디셔너, 헤어 로션, 액상의 양모제 타입 등의 조성물로 제조될 수 있으며, 여기에는 이들 제형의 에어졸 타입도 포함된다. Hair growth promoter composition of the present invention can be prepared in any formulation that can be applied to the scalp, such as liquid, cream, paste or solid phase, shampoo, hair conditioner, hair lotion, And aerosol types of these formulations.

한편, 또한 본 발명의 한약재 추출물을 함유하는 피부 노화 방지 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분, 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다. On the other hand, the skin anti-aging cosmetic composition containing the herbal medicine extract of the present invention is a common ingredient, such as oil, water, surfactants, moisturizers, lower alcohols, thickeners, chelating agents, pigments, preservatives that are formulated in general skin cosmetics It is possible to apply and mix as many flavors as necessary.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 다음의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 다음의 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are merely provided to more easily understand the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

Claims (6)

한약재를 초음파 추출 후 분획분자량(molecular weight cut-off) 10,000 ~ 200,000 달톤의 고분자 한외여과막 (ultrafiltration membrane)을 사용하여 독립 저분자 물질, 이온, 회분 등의 불순물을 투과시켜 여과한 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진 조성물Ultrasonic extraction of herbal medicines using an ultrafiltration membrane with molecular weight cut-off of 10,000 to 200,000 Daltons, which includes extracts filtered through permeation of independent low molecular weight substances, ions, and ashes as active ingredients. Hair loss prevention and hair growth promoting composition, characterized in that 제 1항에 있어서, The method of claim 1, 목향, 구기자, 하고초 및 지부자로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택되는 한약재를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진 조성물Hair loss prevention and hair growth promoting composition, characterized in that it further comprises a herbal medicine selected from the group consisting of Mok-hyang, wolfberry, hachicho and branch 제 1항에 있어서, The method of claim 1, 각 건조된 한약재의 조성은 고형분을 기준으로 하여 각각 목향 0.01 ~ 10 중량%, 구기자 0.01 ~ 10 중량%, 하고초 0.01 ~ 10 중량%, 지부자 0.01 ~ 10 중량%의 비율로 혼합된 것을 특징으로 하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진 조성물The composition of each dried herbal medicine is characterized in that it is mixed in the ratio of 0.01 ~ 10% by weight, 0.01 ~ 10% by weight, Goji vinegar 0.01 ~ 10% by weight, branch branch 0.01 ~ 10% by weight based on the solid content, respectively Hair Loss Prevention and Hair Growth Promoting Composition 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 탈모 방지 및 모발 성장 촉진 조성물의 추출 용매는 저급 알코올 및 탄화수수계 용매 중의 1종 또는 2종 이상의 혼합 용매인 것을 특징으로 하는 조성물3. The composition according to claim 1 or 2, wherein the extraction solvent of the hair loss preventing and hair growth promoting composition is one or two or more mixed solvents of a lower alcohol and a hydrocarbon-based solvent. 제 1항에 있어서, 상기 조성물이 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제 및 향료로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택되는 첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 탈모 방지 및 모발 성장 촉진 조성물The hair loss of claim 1, wherein the composition further comprises at least one additive selected from the group consisting of oil, water, surfactants, moisturizers, lower alcohols, thickeners, chelating agents, pigments, preservatives and fragrances. Anti- and Hair Growth Promoting Composition 제 1항의 탈모 방지 및 모발 성장 촉진제 조성물을 포함하는, 두피에 적용하는 경피 국소 도포형 제제A transdermal topical formulation for application to the scalp, comprising the hair loss prevention and hair growth promoter composition of claim 1
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