KR20100112672A - 새로운 결정형을 갖는 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물 및 이의 제조방법 - Google Patents

새로운 결정형을 갖는 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 새로운 결정형을 갖는 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 구체적으로 Cu 타겟 방사의 X선 회절 패턴에서, 2θ로 표시된 특성피크가 8.98±0.3, 18.06±0.3, 28.95±0.3, 32.32±0.3, 33.76±0.3 및 34.40±0.3에서 나타나는 새로운 결정형태를 갖는 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 의하면, 아미노기 보호기의 탈보호화 단계에서 취급이 용이하고 안정한 신타 CLEC-PA 효소를 이용하여 고순도, 고효율의 새로운 결정성 7-AVCA 수화물을 공업적으로 합성할 수 있어, 상기 7-AVCA를 중간체로 사용하는 세팔로스포린계 항생제 개발시 유용하게 사용될 수 있다.
7-AVCA, 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산, 결정성 수화물, 신타 CLEC-PA 효소, 세파디니르

Description

새로운 결정형을 갖는 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물 및 이의 제조방법{7-amino-3-vinyl-cephalosporinic salt hydrate having a new crystal form and preparation method thereof}
본 발명은 새로운 결정형을 갖는 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
세팔로스포린계 항생제는 인체 및 동물에 있어서 병원성 박테리아로 인해 유발된 질병을 치료하는데 널리 사용되며, 특히 페니실린 화합물과 같은 다른 항생제에 대해 내성이 있는 박테리아로 인한 질병의 치료와 페니실린 과민성 환자의 치료에 유용하다. 여러 경우에 있어서 그람양성 및 그람음성 미생물들에 모두 활성을 나타내는 항생제를 사용하는 것이 바람직한 바, 따라서 여러가지 형태의 광범위한 세팔로스포린계 항생제의 개발에 관한 연구가 계속되어 왔다.
7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산(7-Amino-3-Vinyl-Cephalosporinic Acid; 이 하 7-AVCA)은 광범위한 항균력을 가지는 대표적인 3세대 세팔로스포린계 항생제인 Cefdinir(상품명: Omnicef)와 Cefixim(상품명: Suprax)의 제조시 사용되는 핵심적인 중간체 화합물이다. 상기 7-AVCA는 주로 하기 화학식 1에 표시되는 바와 같이, 수화물로 존재한다.
Figure 112009021599447-PAT00001
(상기 화학식 1에서, x는 3~6이다)
이때, 상기 Cefdinir은 광범위한 병원균에 대하여 탁월한 항균 작용을 나타내며, 생체 내에서의 안정성도 우수하기 때문에 가장 주목받고 있는 제3세대 세파계 항생제 중 하나로서, 인후두염, 급성기관지염, 편도염, 폐렴, 중이염 등에 뛰어난 효능을 나타내고, 특히 약물에 내성을 나타내는 미생물(Serratia spp.등)에도 뛰어난 활성을 나타내므로 2005년 미국시장에서 2억 3000달러가 판매될 정도로 인기 있는 세파계 항생제이다.
따라서 세팔로스포린계 항생제의 제조시 중간체로 사용되는 7-AVCA의 제조는 상기 세팔로스포린계 항생제의 순도 및 수율에 영향을 미치기 때문에 높은 안정성을 나타내고, 취급이 용이하며 고순도, 고수율로 7-AVCA을 제조하는 것은 매우 중요한 일이다.
일반적으로, 상기 7-AVCA의 제조는 하기 반응식 1에 나타낸 바와 같이,
화학식 2의 화합물에서 카르복실기의 보호기 및 아미노기의 보호기를 제거하는 단계를 포함한다.
Figure 112009021599447-PAT00002
이때, 카르복실기 보호기를 제거하기 위하여는 페닐 또는 크레졸(cresol)이 사용되고, 아미노기 보호기를 제거하기 위하여는 오염화인, 피리딘 등이 사용된다. 그러나, 상기 아미노기 보호기를 제거하기 위해 사용되는 오염화인, 피리딘 등은 강산 또는 강염기의 유독성 용매이므로 인체에 해롭고, 환경오염의 원인이 되며, 부산물이 많이 생성되어 수율이 저하되는 문제가 있다.
따라서, 상기 문제를 해결하기 위하여, 아미노 보호기를 제거할 수 있는 효소를 도입하는 방법이 고안되었으며, 상기 효소로써 페니시리아시라제 또는 페니시리아미다제가 사용되고 있다. 상기 효소들은 물에 반응시킬 수 있으며 재사용이 가능하므로 친환경적이다.
그러나, 여전히 안정성이 높고, 재현성과 현장성이 있으며, 친환경적이고, 수율 및 순도가 높은 새로운 7-AVCA의 제조방법이 요구되고 있다.
한편, 결정형 화합물은 용해된 상태 등 어떠한 형태든지 최종 약제에 잔류 용매가 적게 함유하며, 결정화를 함으로써 추가적으로 정제 효과를 얻을 수 있다. 또한 약제의 제조시 높은 안정성을 나타내며, 제조 공장에서 취급이 용이한 장점이 있다.
이러한 결정형 화합물은 일반적으로 X선 회절(X-Ray Diffraction, XRD)에 의해 이들의 특성을 나타낼 수 있다. 상기 XRD는 물질의 내부 미세구조를 밝히는데 매우 유용한 수단으로, 원자가 규칙적으로 배열되어 있는 결정체는 원자에 의한 산란 X선의 간섭결과로 특정방향으로 강하게 산란하며, 이를 측정하여 결정구조를 감지할 수 있다. 이때, XRD 피크는 2θ 수치에서 감지되며, 주어진 위치에서 넓은 XRD 피크가 어떠한 2θ 수치에서 감지되었을 때 이것은 피크가 2θ 수치±0.3에 있는 것을 의미한다.
이에, 본 발명자들은 결정성 7-AVCA를 제조하기 위하여 연구하던 중, 신타(Syntha) CLEC-PA 효소를 사용하여 안정성이 높고, 재현성과 현장성이 있으며, 수율 및 순도가 높은 새로운 결정형태의 7-AVCA를 제조하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 안정성이 높고, 재현성과 현장성이 있는 제조방법을 사용하며, 수율 및 순도가 높은 새로운 결정성 7-AVCA를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 새로운 결정성 7-AVCA의 제조방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 새로운 결정성 7-AVCA의 제조시 사용되는 신타(Syntha) CLEC-PA 효소를 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 수율 및 순도가 높고 Cu 타겟 방사의 X선 회절 패턴에서, 2θ로 표시된 특성피크가 8.98±0.3, 18.06±0.3, 28.95±0.3, 32.32±0.3, 33.76±0.3 및 34.40±0.3에서 나타나는 새로운 결정성 7-AVCA를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 새로운 결정성 7-AVCA의 제조방법을 제공한다.
나아가, 본 발명은 상기 새로운 결정성 7-AVCA의 제조시 사용되는 신타(Syntha) CLEC-PA 효소를 제공한다.
본 발명에 의하면, 아미노기 보호기의 탈보호화 단계에서 취급이 용이하고 안정한 신타 CLEC-PA 효소를 이용하여 고순도, 고효율의 새로운 결정성 7-AVCA 수화물을 공업적으로 합성할 수 있어, 상기 7-AVCA를 중간체로 사용하는 세팔로스포린계 항생제 개발시 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 새로운 결정형 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112009021599447-PAT00003
(상기 화학식 1에서, x는 3~6이다)
결정은 그의 모든 구성 원자, 분자 또는 이온이 3차원에서 정렬된 배열을 가지는 고체 물질이다. 유기 약물 화합물의 결정은 분자 격자에 속하지만, 공정조건이 다른 경우 상이한 결정이 생성된다. 나아가, 동일한 약물의 다른 결정은 현저히 다른 외관, 용해도, 융점, 밀도, 용해 및 생물활성 등을 가져오며, 그의 안정성과 생물활성에 영향을 준다. 이러한 관점에서, 신규 약물의 개발 및 심사허가, 약물 의 제조와 품질 관리 및 신약 최종 제형 전 디자인에서 약물 결정형에 대한 연구는 필수적이고 중요한 측면이 되고 있다.
본 발명에 따른 7-AVCA 수화물은 X선 회절(XRD) 측정에 의해 이미 존재하는 7-AVCA와는 상이한 결정형인 것이 확인되었다. 구체적으로, 본 발명의 7-AVCA 수화물의 X선 회절 패턴은 2θ로 표시된 특성피크가 약 8.98, 약 18.06, 약 28.95, 약 32.32, 약 33.76 및 약 34.40에서 나타났다(도 4 참조). 이때, XRD 피크는 2θ±0.3을 의미한다.
또한, 본 발명은 상기 새로운 결정형 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 새로운 결정형 7-AVCA 수화물은
p-메톡시벤질-7-페닐아세트아미도-3-비닐-3-세펨-4-카르복실레이트(2)에 크레졸 또는 페놀을 넣고 교반하여 카르복실기의 보호기를 탈보호하는 단계(단계 1);
염기로 pH를 조절하면서 신타 CLEC-PA 효소를 넣고 교반하여 아미노기의 보호기를 탈보호하는 단계(단계 2);
무기산으로 pH를 조절하여 탈보호된 7-AVCA를 결정화하는 단계(단계 3); 및
상기 단계 3에서 생성된 7-AVCA에 메탄올 수용액 및 염기를 넣고 용해시킨 후, 산을 첨가하여 결정성 7-AVCA 수화물을 제조하는 단계(단계 4)를 포함한다.
먼저, 상기 단계 1은 p-메톡시벤질-7-페닐아세트아미도-3-비닐-3-세펨-4-카르복실레이트(2)에 크레졸 또는 페놀을 넣고 교반하여 카르복실기의 보호기를 탈보호하는 단계이다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 화학식 2의 p-메톡시벤질-7-페닐아세트아미도-3-비닐-3-세펨-4-카르복실레이트는 종래 기술의 방법에 의해 제조되거나 시판되는 것을 사용할 수 있으며, 첨가하는 크레졸 또는 페놀의 양은 카르복실기의 보호기가 탈보호될 수 있는 적절한 양으로 사용될 수 있다.
다음으로, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 카르복실기의 보호기가 탈보호된 화합물에 염기로 pH를 조절하면서 신타 CLEC-PA 효소를 넣고 교반하여 아미노기의 보호기를 탈보호하는 단계이다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 사용되는 염기는 탄산나트륨, 탄산칼륨 등의 탄산알칼리금속; 탄산수소나트륨, 산화나트륨, 수산화칼륨 등의 수산화알칼리금속; 암모니아수; 트리메틸아민 등의 트리알킬아민 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 pH는 7.5~8.0으로 유지하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 신타 CLEC-PA 효소는 도 1에 나타낸 바와 같이 유리 또는 결정화 형태로 되어 있기 때문에 취급하기 쉽고 반응의 효율성이 높아 공업적으로 유용하게 사용될 수 있다. 상기 신타 CLEC-PA 효소는 대장균으로부터 유도된다. 상기 효소의 사용량은 효소의 종류 ,기질, 반응, 온도, 형평 도달점, 반응 농도 등에 의하여 달라지나, 본 반응에서는 기질 1 g에 대해 0.01~20 g을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 신타 CLEC-PA 효소는 여과후, 동일 반응에 재사용될 수 있다.
다음으로, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 카르복실기 및 아미노기의 보호기가 탈보호된 7-AVCA 화합물에 무기산으로 pH를 조절하여 상기 7-AVCA를 결정화하는 단계이다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 무기산은 상기 7-AVCA의 결정화를 방해하지 않는 산이라면 제한없이 사용할 수 있으며, 예를 들면 염산, 질산, 황산 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 pH는 1.5~2.5로 유지하는 것이 바람직하다.
다음으로, 상기 단계 4는 상기 단계 3에서 생성된 7-AVCA에 메탄올 수용액 및 염기를 넣고 용해시킨 후, 산을 첨가하여 화학식 1의 결정성 7-AVCA 수화물을 제조하는 단계이다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 메탄올 수용액은 메탄올:물=5:1~1:2의 비율로 혼합되는 것이 바람직하며, 메탄올:물=4:1인 것이 더욱 바람직하다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 메탄올 수용액 내의 7-AVCA의 농도 는 5~20%인 것이 바람직하며, 10%가 더욱 바람직하다
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 염기는 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산수소나트륨 등을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 산은 염산, 황산, 질산 등을 사용할 수 있다.
상기 단계 4에서 산 처리된 후, 여과, 세척, 건조를 통해 결정성 7-AVCA 수화물이 형성된다. 상기 제조방법으로 제조된 결정성 7-AVCA 수화물은 도 4 및 표 1과 같은 XRD 피크를 나타내고, 수율은 최고 93%로 나타났으며, 순도 또한 99%로 나타났다.
나아가, 본 발명은 상기 새로운 결정성 7-AVCA 수화물의 제조시 사용되는 신타(Syntha) CLEC-PA 효소를 제공한다.
상기 신타 CLEC-PA 효소는 도 1에 나타낸 바와 같이 유리 또는 결정화 형태로 되어 있기 때문에 취급하기 쉽다.
또한, 상기 신타 CLEC-PA 효소는 아미노기 보호기의 탈보호 실험에서 종래 탈보호 효소로 사용되는 페니시린아미다제보다 반응시간을 1~4시간 단축시키며 수율을 약 10% 향상시키는 것으로 나타났다(표 2 참조).
따라서, 상기 신타 CLEC-PA 효소는 반응의 효율성이 높고, 취급하기 용이하며, 유독한 유기용매를 필요로 하지 않아 환경친화적이므로 결정성 7-AVCA 수화물 의 제조시 공업적으로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 다음의 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 새로운 결정성 7- AVCA 수화물의 제조
단계 1~3: 7-아미노-3-비닐-3- 세펨 -4- 카르복실산 (7- AVCA) 제조
p-메톡시벤질-7-페닐아세트아미도-3-비닐-3-세펨-4-카르복실레이트(2, 100 g, 0.215 mol)를 크레졸 300 mL에 가하고 35-40 ℃에서 밤새 교반시켰다. TLC로 반응유무를 확인한 후 에틸아세테이트 1 L를 가한 뒤 탄산수소나트륨수용액(탄산수소나트륨 50 g을 물 1.5 L에 녹인 용액)을 천천히 가한 뒤 30분 동안 실온에서 교반시켰다. 다음으로 수용액층의 크레졸을 제거하기 위하여 에틸아세테이트(500 mL)로 2회 세척하였다. 물층을 분리한 뒤 신타 CLEC-PA 효소 10,000 unit를 가하고 25-30 ℃에서 탄산수소나트륨수용액을 사용하여 pH를 7.5-8.0을 유지하면서 3시간 동안 교반시켰다. TLC로 반응유무를 확인한 후 효소를 여과,분리하였다. 물층을 카본착콜을 가하고 1시간 교반한 다음 여과하였다. 메탄올 1 L를 가한 뒤 2N-HCl로 pH를 3으로 맞추어 백색 고체를 생성시켰다. 이 고체를 여과한 후 증류수, 아세톤으로 세척, 건조하여 목적화합물(44.7 g, 수율 92%)을 얻었다.
1H-NMR (D2O+NaHCO3, 300MHz): δ 3.46 (d, 1H, J = 17.5 Hz), 3.60 (d, 1H, J = 17.5 Hz), 4.98 (d, 1H, J = 4.5 Hz), 5.11 (d, 1H, J = 11.1 Hz), 5.31 (dd, 2H, J = 5.6, 4.5 Hz), 6.62 (dd, 1H, J = 11.1, 6.4 Hz).
단계 4: 결정성 7- AVCA 수화물 합성
상기 단계 3에서 제조된 7-AVCA 10 g에 H2O 200 mL, MeOH 50 mL를 넣고, 2N-탄산나트륨 40 mL를 적가한 후 실온을 유지하며 완전히 녹을 때까지 교반하였다. 이후, 반응용액에 2N-HCl 약 20-30 mL를 실온을 유지하면서 천천히 적가하여 완전히 녹인 후, 다시 실온에서 30분간 교반한 다음 여과하고 아세톤 소량으로 세척하여 50 ℃에서 1-2시간 동안 훈풍 건조하여 결정형의 7-AVCA 수화물을 제조하였다.
수분 (칼피셔법) 2.8%.
1H-NMR (D2O+NaHCO3, 300MHz): δ 3.57 (d, 1H, J = 17.3 Hz), 3.75 (d, 1H, J = 17.3 Hz), 4.98 (d, 1H, J = 4.6 Hz), 5.14 (d, 1H, J = 11.1 Hz), 5.38 (dd, 2H, J = 5.8, 4.5 Hz), 6.70 (dd, 1H, J = 11.1, 6.4 Hz).
< 비교예 >
단계 1~3
효소를 신타 CLEC-PA 효소 대신 페니실린-G 아미다제를 사용하는 것을 제외 하고는 실시예와 동일한 방법으로 수행하여 7-AVCA를 제조하였다.
<분석>
실시예와 비교예에서 제조된 7-AVCA 및 7-AVCA 수화물을 XRD 및 현미경을 이용하여 분석하였다.
XRD로 측정한 결과, 실시예 및 비교예의 7-AVCA 화합물은 각각 도 2 및 도 3과 같은 피크가 나타났으며, 7-AVCA 수화물은 도 4와 같은 피크가 나타났다. 상기 7-AVCA 수화물 XRD의 구체적인 값은 하기 표 1에 나타내었다.
No. 2θ d I/I0
1 8.98 9.8394 71
2 18.06 4.9078 53
3 23.22 3.9974 8
4 27.75 3.2110 18
5 28.95 3.0806 92
6 30.32 2.9455 100
7 32.30 2.7693 15
8 33.76 2.6528 71
9 34.40 2.6049 83
10 35.70 2.5129 11
11 36.66 2.4493 25
12 36.96 2.4301 13
13 39.88 2.2567 40
14 43.98 2.0571 12
15 44.28 2.0439 22
16 44.60 2.0300 48
17 45.38 1.9969 19
18 46.10 1.9673 12
19 47.64 1.9073 20
20 48.22 1.8857 8
21 51.30 1.7795 13
22 52.40 1.7447 14
23 53.16 1.7215 7
24 55.26 1.6609 19
25 56.94 1.6159 10
26 57.72 1.5959 12
27 66.02 1.4139 5
28 66.75 1.4000 6
이는 7-AVCA 화합물(도 2 및 도 3)와 다른 새로운 결정성 화합물인 것으로 확인되었다.
또한, 실시예 및 비교예의 7-AVCA 화합물의 현미경 관찰 결과를 도 5에, 실시예에서 제조된 7-AVCA 수화물의 현미경 관찰 결과를 도 6에 나타내었다.
도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 7-AVCA 수화물(도 6)은 7-AVCA 화합물(도 5)에 비해 큰 결정을 갖는 것으로 확인되었다.
< 실험예 > 효소에 따른 탈보호화 효율 실험
본 발명에 따른 7-AVCA 수화물 제조시 사용되는 효소에 따른 탈보호화 효율을 알아보기 위하여, 다음과 같은 실험을 수행하였다.
실시예에 사용된 신타 CLEC-PA 효소(Altus Biologics 제품) 또는 비교예에 사용된 페니실린 아미다제(Sigma 제품)을 각각 10,000 unit을 넣고 출발물질(p-메톡시벤질-7-페닐아세트아미도-3-비닐-3-세펨-4-카르복실레이트)을 100 g, 200 g, 400 g으로 변화시킨 후, 아미노기 보호기의 탈보호 반응을 수행하였다.
이후 반응시간과, 생성물의 수율을 측정하여 표 2에 나타내었다.
출발물질의 양(g) 신타 CLEC-PA 효소 페니실린 아미다제
반응시간(시간) 수율(%) 반응시간(시간) 수율(%)
100 3 93 4 85
200 6 91 10 81
400 12 85 18 78
표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 사용된 신타 CLEC-PA 효소는 종래 탈보호 효소로 사용되는 페니시린아미다제보다 반응시간을 1~4시간 단축시키며 수율을 약 10% 향상시키는 것으로 나타났다.
따라서, 상기 신타 CLEC-PA 효소는 반응의 효율성이 높고, 취급하기 용이하며, 유독한 유기용매를 필요로 하지 않아 환경친화적이므로 결정성 7-AVCA 수화물의 제조시 공업적으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에서 사용되는 신타 CLEC-PA 효소의 결정모양을 나타내는 사진이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 의한 7-AVCA의 XRD 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일비교예에 의한 7-AVCA의 XRD 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일실시예에 의한 결정성 7-AVCA 수화물의 XRD 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일실시예에 의한 7-AVCA의 현미경 사진이다.
도 6은 본 발명의 일실시예에 의한 결정성 7-AVCA 수화물의 현미경 사진이다.

Claims (13)

  1. Cu 타겟 방사의 X선 회절 패턴에서, 2θ로 표시된 특성피크가 8.98±0.3, 18.06±0.3, 28.95±0.3, 32.32±0.3, 33.76±0.3 및 34.40±0.3에서 나타나는 새로운 결정형태를 갖는 하기 화학식 1의 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물:
    [화학식 1]
    Figure 112009021599447-PAT00004
    .
    (상기 화학식 1에서, x는 3~6이다)
  2. p-메톡시벤질-7-페닐아세트아미도-3-비닐-3-세펨-4-카르복실레이트(2)에 크레졸 또는 페놀을 넣고 교반하여 카르복실기의 보호기를 탈보호하는 단계(단계 1);
    염기로 pH를 조절하면서 신타 CLEC-PA 효소를 넣고 교반하여 아미노기의 보호기를 탈보호하는 단계(단계 2);
    무기산으로 pH를 조절하여 탈보호된 7-AVCA를 결정화하는 단계(단계 3); 및
    상기 단계 3에서 생성된 7-AVCA에 메탄올 수용액 및 염기를 넣고 용해시킨 후, 산을 첨가하여 결정성 7-AVCA 수화물을 제조하는 단계(단계 4)를 포함하는 제1항의 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 단계 2의 염기는 탄산알칼리금속, 수산화알칼리금속, 암모니아수 및 트리알킬아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 탄산알칼리금속은 탄산나트륨 또는 탄산칼륨이고, 상기 수산화알킬리금속은 탄산수소나트륨, 산화나트륨 또는 수산화칼륨이고, 상기 트리알킬아민은 트리메틸아민인 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  5. 제2항에 있어서, 상기 단계 2의 pH는 7.5~8.0으로 유지하는 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  6. 제2항에 있어서, 상기 단계 3의 무기산은 염산, 질산 또는 황산인 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  7. 제2항에 있어서, 상기 단계 3의 pH는 1.5~2.5로 유지하는 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  8. 제2항에 있어서, 상기 단계 4의 메탄올 수용액은 메탄올:물=5:1~1:2의 비율로 혼합되는 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  9. 제2항에 있어서, 상기 단계 4의 메탄올 수용액 내의 7-AVCA의 농도는 5~20%인 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  10. 제2항에 있어서, 상기 단계 4의 염기는 탄산나트륨, 탄산칼륨 및 탄산수소나트륨으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  11. 제2항에 있어서, 상기 단계 4의 산은 염산, 황산 또는 질산인 것을 특징으로 하는 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물의 제조방법.
  12. 제1항의 결정성 7-아미노-3-비닐-세팔로스포린산염 수화물 제조시 사용되는 신타(Syntha) CLEC-PA 효소.
  13. 제13항에 있어서, 상기 효소는 아미노기 탈보호반응의 시간을 단축시키고 수율을 향상시킴을 특징으로 하는 신타 CLEC-PA 효소.
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