KR20100073454A - 트란스글루타미나제 억제제로 사용되는 신규한 피라졸로디아제핀계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물 - Google Patents

트란스글루타미나제 억제제로 사용되는 신규한 피라졸로디아제핀계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 트란스글루타미나제 억제제로 사용되는 신규한 피라졸로디아제핀계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 화합물은 트란스글루타미나제를 강력하게 억제하므로, 트란스들루타미나제의 과다 활성에 기인한 질환인 신경계 질환 또는 암질환의 치료 및 예방을 위한 약제로 이용가능하다.
트란스글루타미나제 억제제, 피라졸로디아제핀, 신경계 질환, 암질환, 약제

Description

트란스글루타미나제 억제제로 사용되는 신규한 피라졸로디아제핀계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물 {Novel pyrazolodiazepine compound as an transglutaminase inhibitor, the preparation method thereof and a composition containing the same}
본 발명은 트란스글루타미나제에 대한 강력한 억제 작용을 나타내, 트란스글루타미나제 억제제로 사용되는 신규한 피라졸로디아제핀계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
[문헌 1] 종설. Soo-Youl Kim : New Target Against Inflammatory Diseases: Transglutaminase 2.　 Archivum Immunologiae & Therapiae Experimentalis 52, pp332-337, 2004
[문헌 2] Soo-Youl Kim. Transglutaminase 2 in inflammation. Front Biosci. 11, pp3026-3035, 2006
[문헌 3] Antonyak et al., Augmentation of tissue transglutaminase expression and activation by epidermal growth factor inhibit doxorubicin-induced apoptosis in human breast cancer cells. J Biol Chem. 2004 Oct 1;279(40):pp41461-7
[문헌 4] Dae-Seok Kim et al. Reversal of Drug Resistance in Breast Cancer Cells by Transglutaminase 2 Inhibition and Nuclear Factor-KB Inactivation. Cancer Res. 2006. in press
[문헌 5] Key Chung Park, Kyung Cheon Chung, Yoon-Seong Kim, Jongmin Lee, Tong H. Joh, and　 Soo-Youl Kim. Transglutaminase 2 induces nitric oxide synthesis in BV-2 microglia.　 Biochem. Biophys. Res. Commun. 323, pp1055-1062, 2004
[문헌 6] Jongmin Lee,Yoon-Seong Kim, Dong-Hee Choi, Moon S. Bang, Tay R. Han , Tong H. Joh, and Soo-Youl Kim. Transglutaminase 2 induces NF-κB activation via a novel pathway in BV-2 microglia.　 J. Biol. Chem. 279, pp53725-53735, 2004
[문헌 7] Tergaonkar et al., IkappaB kinase-independent IkappaBalpha degradation pathway: functional NF-kappaB activity and implications for cancer therapy. Mol Cell Biol. 2003 Nov;23(22):pp8070-83
[문헌 8] Sohn, J., Kim, T.-I., Yoon, Y.-H., and Kim, S.-Y.: Transglutaminase Inhibitor: A New Anti-Inflammatory Approach in Allergic Conjunctivitis. J. Clin. Invest. 111, pp121-8, 2003
[문헌 9] Nature Genetics 18, pp111-117, 1998
[문헌 10] Nature Medicine 8, pp143-149, 2002
[문헌 11] J. Med. Chem. 18, pp278-284, 1975
[문헌 12] Mol. Pharmacol. 35, pp701-706, 1989
[문헌 13] Blood, 75, pp1455-1459, 1990
[문헌 14] Nara, K., et al. 1994. Elastase inhibitor elafin is a new type of proteinase inhibitor which has a transglutaminase-mediated anchoring sequence termed "cementoin". J Biochem (Tokyo). 115:441-448
[문헌 15] 대한민국 특허출원 제10-2006-98921호
[문헌 16] The Journal of Biological Chemistry, Vol. 274. No. 43. Issue Of October 22, pp30715-30721
[문헌 17] PNAS, February 18,2003, Vol. 100, no.4, pp2047-2052
본 발명의 목적은 트란스글루타미나제에 대한 강력한 억제 활성을 나타내는 피라졸로디아제핀계 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 트란스글루타미나제 과다 활성에 기인한 질환의 예방 및 치료를 위한 조성물을 제공하는 것이다.
트란스글루타미나제(Transglutaminase)는 정상적인 상황에서는 혈액 응고나 상처 치유 등의 보호적 작용을 하는 효소이다. 그러나, 그 발현이 조절 받지 못하는 경우에는 많은 질병의 병리적 기전에서 주요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다 (종설. Soo-Youl Kim: New Target Against Inflammatory Diseases: Transglutaminase 2.　 Archivum Immunologiae & Therapiae Experimentalis 52, pp332-337, 2004).
특히 염증을 동반하는 질병, 즉 퇴행성 관절염(rheumatoid arthritis), 당뇨병(diabetes), 자가면역 근육염(inflammatory myositis), 동맥경화(atherosclerosis), 뇌졸증(stroke), 간경화(liver cirrhosis), 유방암 (breast cancer), 알츠하이머(Alzheimer), 파킨슨(Parkinson), 헌팅턴 (Huntington), 뇌막염(encephalitis) 및 염증성 위궤양(Celiac disease) 등에서 트란스글루타미나제의 발현이 많이 증가 된다. 또한, 암의 전이(metastasis), 화학적 내성(chemo-resistance), 방사선내성(radio-resistance)에서도 NF-κB의 발현 증가 및 트란스글루타미나제의 발현 증가가 관찰되었다(Soo-Youl Kim. Transglutaminase 2 in inflammation. Front Biosci. 11, pp3026-3035, 2006).
아직까지 암의 화학적 내성과 트란스글루타미나제가 어떻게 연관되어 있는지는 밝혀지지 않고 있으나, 화학적 내성을 가지는 유방암 세포주에 대해 트란스글루타미나제 발현을 억제하는 경,우 암세포가 항암제에 민감하게 반응하여 사멸되는 것으로 드러났다(Antonyak et al., Augmentation of tissue transglutaminase expression and activation by epidermal growth factor inhibit doxorubicin-induced apoptosis in human breast cancer cells. J Biol Chem. 2004 Oct 1;279(40): pp41461-7; Dae-Seok Kim et al. Reversal of Drug Resistance in Breast Cancer Cells by Transglutaminase 2 Inhibition and Nuclear Factor-KB Inactivation. Cancer Res. 2006. in press).
또한, 최근 트란스글루타미나제가 활성화되는 분자수준의 병리기전이 밝혀지면서, 트란스글루타미나제 억제의 타당성이 한층 더 구체화되었다 (Key Chung Park, Kyung Cheon Chung, Yoon-Seong Kim, Jongmin Lee, Tong H. Joh, and　 Soo-Youl Kim. Transglutaminase 2 induces nitric oxide synthesis in BV-2 microglia.　 Biochem. Biophys. Res. Commun. 323, pp1055-1062, 2004; Jongmin Lee,Yoon-Seong Kim, Dong-Hee Choi, Moon S. Bang, Tay R. Han, Tong H. Joh, and Soo-Youl Kim. Transglutaminase 2 induces NF-κB activation via a novel pathway in BV-2 microglia.　J. Biol. Chem. 279, pp53725-53735, 2004).
염증은 주로 NF-κB 전사 물질의 활성화에 기인한다. NF-κB는 신호 전달체계에 따른 카이네이즈(kinase)들에 의해 활성화되는 것으로 알려졌다. 하지만 카이네이즈의 도움없이도 NF-κB의 활성화가 이루어지는 것이 알려지면서, 카이네이즈 억제제(kinase inhibitor)들의 실효성이 감소하게 되었다 (Tergaonkar et al., IkappaB kinase-independent IkappaBalpha degradation pathway: functional NF-kappaB activity and implications for cancer therapy. Mol Cell Biol. 2003 Nov;23(22): pp8070-83).
본 발명자는 이전의 연구에서 트란스글루타미나제가 카이네이즈들(IKK, NAK) 도움없이, I-κBα를 교결합하여 NF-κB를 활성화 시킨다는 것을 밝힌바 있다(Jongmin Lee, et al. Transglutaminase 2 induces NF-kB activation via a novel pathway in BV-2 microglia.　 J. Biol. Chem. 279, pp53725-53735, 2004). 트란스글루타미나제는 칼슘의존성 효소이므로 세포 내 칼슘의 증가만으로도 NF-κB를 활성화시킬 수 있는 것이다.
염증반응에서 NF-κB 전사인자의 활성으로 트란스글루타미나제를 포함하는 염증성 인자들과 그 억제제인 I-κBα의 발현이 증가되므로, 정상적인 경우에는 I-κBα에 의해 NF-κB의 연속활성이 이루어지지 않지만, 만성 염증질환에서는 계속해서 NF-κB가 활성화된다. 흥미로운 현상은 TNF-a 또는 LPS(lipopolysaccharide) 등에 의한 NF-κB의 활성으로 트란스글루타미나제의 발현이 유도된다는 것이다. 따라서 비정상적으로 활성화된 트란스글루타미나제가 염증 세포에서 NF-κB를 직접 활성화시키거나, 활성화된 NF-κB를 더욱 유지시킴으로써 염증을 지속시키는 역할을 할 것으로 예상된다. 또한 이러한 악성 회로는 암 조직에서 암의 전이 및 약물저항성을 유발하는 주원인이 될 수 있다(Jongmin Lee, et al. Transglutaminase 2 induces NF-kB activation via a novel pathway in BV-2 microglia. J. Biol. Chem. 279, pp53725-53735, 2004).
따라서, 트란스글루타미나제의 억제제는 NF-κB의 연속 고리를 끊는 중요한 물질이 될 수 있으며, 본 발명자가 보여 주었던 스테로이드제제를 대체할 만한 효과는 바로 여기에 근거한 것으로 사료된다(Sohn, J., Kim, T.-I., Yoon, Y.-H., and Kim, S.-Y.: Transglutaminase Inhibitor: A New Anti-Inflammatory Approach in Allergic Conjunctivitis. J. Clin. Invest. 111, pp121-8, 2003).
트란스글루타미나제 활성을 억제하는 물질로는 아민 화합물(amine compound)이 알려져 있으며, 대표적으로 시스타민(cystamine)(Nature Genetics 18, 111-117, 1998; Nature Medicine 8, 143-149, 2002)과 푸트레신(putrescine)이다. 또한, 모노단실카다베린(monodansylcadaverine)(J. Med. Chem. 15, pp674-675, 1972), w-디벤질아미노알킬아민(w-dibenzylaminoalkylamine)(J. Med. Chem. 18, pp278-284, 1975), 3-할로-4,5-디하이드로이소자졸(3-halo-4,5-dihydroisoxazole)(Mol. Pharmacol. 35, pp701-706, 1989), 2-[(2-oxopropyl)thio]imidazolium derivatives (Blood, 75, pp1455-1459, 1990) 등의 화학적 억제제들이 개발되어 있으나, 모두 생체에서 비특이적으로 다른 효소의 억제를 유발하는 독성이 알려져 있다.
따라서, 안전하고 효과적인 트란스글루타미나제 특이적인 억제제의 개발이 요구되고 있다. 최근 손 등은 기니픽에 꽃가루를 이용한 눈 알레르기 모델에서, 펩타이드로 만든 트란스글루타미나제 억제제를 사용해 스테로이드 수준의 효과를 거두는데 성공했다(Sohn, J., Kim, T.-I., Yoon, Y.-H., and Kim, S.-Y.: Transglutaminase Inhibitor: A New Anti-Inflammatory Approach in Allergic Conjunctivitis. J. Clin. Invest. 111, pp121-8, 2003). 안티플라민(anti-flammin) 단백질(PLA2 억제제)과 엘라핀(elafin)이라는 단백질(아주 강력한 트란스글루타미나제 기질) (Nara, K., et al. 1994. Elastase inhibitor elafin is a new type of proteinase inhibitor which has a transglutaminase-mediated anchoring sequence termed "cementoin". J Biochem (Tokyo). 115: pp441-448)에서 트란스글루타미나제 촉매 부위를 흉내내어 합성한 펩타이드를 사용하였다. 특히 염증을 동반하는 질병들에서 트란스글루타미나제의 발현이 많이 증가되며, 이러한 질병의 예로서 퇴행성 관절염, 당뇨병, 자가 면역 근육염, 동맥경화, 뇌졸중, 간경화, 악성유방암, 뇌막염, 염증성 위궤양 등이 있다.
상기한 화합물들 외에도 다른 화학적 억제제들이 개발되었지만 모두 생체적으로 이용되는 경우 비특이적인 다른 효소의 억제를 유발하는 독성이 알려지고 있는 실정이다. 본 발명자에 의해 이전에 제조된 펩티드 억제제가 트란스글루타미나제의 억제제로 유효하나(대한민국 특허출원 제10-2006-98921호), 비용과 안전성면에서 그 실용화에는 여전히 문제들이 남아 있다.
그러나, 상기 문헌 어디에도 피라졸로디아제핀계 화합물을 트란스글루타미나제의 억제제로써 유용성에 대한 기술내용이 개시되거나 교시된 바는 없다.
본 발명자는 본 발명자들에 의하여 새롭게 제조된 피라졸로디아제핀계 화합물들이 트란스글루타미나제에 대한 강력한 억제 활성을 나타냄을 확인하여 본 발명의 화합물들이 트란스글루타미나제 활성 증가로 기인한 질병, 바람직하게는, 신경계 질환 또는 암, 보다 바람직하게는, 알츠하이머 질환, 다경색 치매, 알츠하이머 질환과 다경색 치매의 혼합형, 파킨슨씨 질환, 저갑상선증, 알코올성 치매 알츠하이머, 또는 헌팅턴 병과 같은 신경계 질환 또는 대장암, 소장암, 직장암, 항문암, 식도암, 췌장암, 위암, 신장암, 자궁암, 유방암, 폐암, 임파선암, 갑상선암, 전립선암, 백혈병, 피부암, 결장암, 뇌종양, 방광암, 난소암, 또는 담낭암 등과 같은 암질환의 치료 및 예방 약제로서 개발가능성이 높음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 트란스글루타미나제에 대한 강력한 억제 활성을 나타내는, 하기 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure 112008088293114-PAT00001
상기 식에서,
Y는 S, S-R4 또는 N-R4이고,
R1는 수소원자, C1-C6 저급 알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
R2는 수소원자, R'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 벤질기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R'는 보호기로 치환되거나 비치환된 아민기이며;
R3는 수소원자, R"로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R"는 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기 또는 에스테르기이며;
R4는 수소 원자, 보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 또는 하나 이상의 R"'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기이며, 여기에서 R"'는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 또는 C1- C6 저급 알킬기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기이며;
(-----)표시는 단일결합 또는 이중결합을 의미한다.
상기 일반식 (Ⅰ)에 속하는 화합물군 중에 바람직하기로는 R1는 수소원자, 쇄상 또는 가지상 부틸기 또는 펜틸기, 또는 페네틸기인 화합물군; R2는 수소원자, Boc'보호기로 치환되거나 비치환된 아민기로 치환된 C4-C6 저급 알킬기, 벤질기, 또는 페네틸기인 화합물군; R3는 수소원자, 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C2 저급알킬기로 치환된 케톤기로 치환되거나 비치환된 쇄상 또는 가지상 부틸기 또는 펜틸기인 화합물군; R4는 수소 원자, Boc'보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된 피페리딘, 피롤리딘, 피페라진, 피라졸, 또는 모르폴린으로 치환되거나 비치환된 C2-C6 저급 알킬기, 또는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 및 C1-C6 저급 알킬기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기로 치환된 C2-C6 저급 알킬기인 화합물군을 포함할 수 있다.
또한 본 발명은 하나의 구현예로서, 트란스글루타미나제에 대한 강력한 억제 활성을 나타내는, 하기 일반식 (Ⅰa)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀-8(2H) 티온계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure 112008088293114-PAT00002
상기 식에서,
R1는 수소원자, C1-C6 저급 알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
R2는 수소원자, R'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 벤질기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R'는 보호기로 치환되거나 비치환된 아민기이며;
R3는 수소원자, R"로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R"는 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기 또는 에스테르기이다.
또한 본 발명은 하나의 구현예로서, 트란스글루타미나제에 대한 강력한 억제 활성을 나타내는, 하기 일반식 (Ⅰb)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀-8-일 티오계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure 112008088293114-PAT00003
상기 식에서,
R1는 수소원자, C1-C6 저급 알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
R2는 수소원자, R'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 벤질기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원 자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R'는 보호기로 치환되거나 비치환된 아민기이며;
R3는 수소원자, R"로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R"는 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기 또는 에스테르기이며;
R4는 수소원자, 보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 또는 하나 이상의 R"'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기이며, 여기에서 R"'는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 또는 C1-C6 저급 알킬기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기이다.
또한 본 발명은 하나의 구현예로서, 트란스글루타미나제에 대한 강력한 억제 활성을 나타내는, 하기 일반식 (Ⅰc)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀-8-아민계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure 112008088293114-PAT00004
상기 식에서,
R1는 수소원자, C1-C6 저급알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
R2는 수소원자, R'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 벤질기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R'는 보호기로 치환되거나 비치환된 아민기이며;
R3는 수소원자, R"로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R"는 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C6 저급알킬기로 치 환된 케톤기 또는 에스테르기이며;
R4는 수소 원자, 보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 또는 하나 이상의 R"'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기이며, 여기에서 R"'는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 또는 C1-C6 저급 알킬기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기이다.
상기 일반식 (Ⅰa) 내지 (Ic)에 속하는 화합물군 중에 바람직하기로는 R1는 수소원자, 쇄상 또는 가지상 부틸기 또는 펜틸기, 또는 페네틸기인 화합물군; R2는 수소원자, Boc'보호기로 치환되거나 비치환된 아민기로 치환된 C4-C6 저급알킬기, 벤질기, 또는 페네틸기인 화합물군; R3는 수소원자, 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C2 저급알킬기로 치환된 케톤기로 치환되거나 비치환된 쇄상 또는 가지상 부틸기 또는 펜틸기인 화합물군; R4는 수소 원자, Boc'보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된 피페리딘, 피롤리딘, 피페라진, 피라졸, 또는 모르폴린으로 치환되거나 비치환된 C2-C6 저급 알킬기, 또는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 및 C1-C6 저급 알킬기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기로 치환된 C2-C6 저급 알킬기인 화합물군을 포함할 수 있다.
상기 일반식 (Ⅰa) 내지 (Ic)에 속하는 화합물군 중에 가장 바람직한 화합물로서,
상기 일반식 (Ia)에 속하는 화합물로는 실시예 1 (R)-1-(6-벤질-2-페네틸-8-티옥소-5,6,7,8-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-4(2H)-일)-2,2,2-트리플루오로에타논(LDD843), 실시예 2 (R)-6-벤질-2-페네틸-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-티온(LDD847), 실시예 11 (S)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-티옥소-2,4,5,6,7,8-헥사히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트(LDD1008), 실시예 12 (S)-6-(4-아미노부틸)-2,4-디이소부틸-4,5,6,7-테트라히드로 피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-티온(LDD998);
상기 일반식 (Ib)에 속하는 화합물로는 실시예 14 (S,E)-테르트-부틸 3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노에이트(LDD1007), 실시예 15 (S,E)-테르트-부틸 2-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)아세테이트(LDD1006), 실시예 16 (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노익산(LDD997), 실시예 17 (S,E)-3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노익산(LDD1005), 실시예 18 (S,E)-에틸3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노에이트(LDD1004), 실시예 19 (S,E)-테르트-부틸4-(8-(3-아미노-3-옥소프로필티오)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트(LDD1003), 실시예 20 (S,E)-테르트-부틸 4-(8-(3-히드라지닐-3-옥소프로필티오)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트(LDD1002), 실시예 21 (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로판히드라지드(LDD1001), 실시예 22 (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드라피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파나미드(LDD1000);
상기 일반식 (Ic)에 속하는 화합물로는 실시예 3 (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피페레딘-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD844), 실시예 4 (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피롤리딘-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD845), 실시예 5 (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피페라진-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD846), 실시예 6 (R,E)-6-벤질-N-(2-몰포리노에틸)-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD848), 실시예 7 (R,E)-6-벤질-N-메틸-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD849), 실시예 8 (S)-테르트-부틸 3-((R,E)-6-벤질-2-페네틸-2,4,5,6- 테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일아미노)피롤리딘-1-칼복실레이트(LDD850), 실시예 9 (R,E)-6-벤질-N-(1-벤질피페리딘-4-yl)-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD854), 실시예 10 (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(피페리딘-4-일)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD1010), 실시예 13 (S,E)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-(2-몰포리노에틸아미노)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트(LDD1009)을 포함할 수 있다.
상기 구조식 (Ⅰ)로 표시되는 본 발명의 화합물들은 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.
염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올 (예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.
이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온 산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
상기의 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용가능한 염으로는 히드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.
또한, 상기의 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물은 비대 칭 중심을 가지므로 상이한 거울상 이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물의 모든 광학 이성질체 및 R 또는 S형 입체 이성질체 및 이들의 혼합물도 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 한다. 본 발명은 라세미체, 하나 이상의 거울상 이성질체 형태, 하나 이상의 부분 입체 이성질체 형태 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함하며, 당업계에서 알려진 이성질체의 분리 방법이나 제조과정을 포함한다.
본 발명의 다른 목적은 상기 일반식 (Ⅰ) 화합물의 제조방법을 제공하는 것으로, 하기의 반응식들에 도시된 방법에 의해 화학적으로 합성될 수 있지만, 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.
하기의 반응식들은 본 발명의 대표적인 화합물들의 제조방법을 제조 단계별로 나타내는 것으로 본 발명의 여러 화합물들은 반응식 1 내지 3의 합성과정에서 사용되는 시약, 용매 및 반응 순서를 바꾸는 등의 작은 변경으로 제조될 수 있다. 본 발명의 몇몇 화합물들은 반응식 1 내지 3의 범주에 포함되지 않는 과정에 따라 합성되었으며, 이러한 화합물들에 대한 상세한 합성 과정은 이들 각각의 실시예에 설명되어 있다.
Figure 112008088293114-PAT00005
상기 반응식 1은 제조 중간체인 피라졸로디아제핀-8-온 유도체을 제조하는 방법을 도시한 것으로, 먼저 4-니트로피라졸로-1-카르복실산 (1) 출발물질을 아세틸 클로라이드(AcCl)과 같은 에스테르화제를 메탄올 등의 반응 용매하에 반응시켜, 에스테르체 (2)를 수득하는 제 1단계; 여기에서 얻은 에스테르체 피라졸환의 아민기에 R1-X의 할로겐화물을 수소화나트륨 및 DMF 등과 같은 반응 용매하에 1차적으로 선택적인 알킬화반응을 통하여 1차적으로 페네틸, 이소부틸 그룹, 프로필 그룹 등의 R1 치환기를 도입하는 제 2단계; 여기에서 얻은 치환체 화합물 (3)에 메탄올 등의 반응용매 및 1N NaOH 등의 알칼리 조건하에서 가수분해 반응을 수행하여 에스테르를 쉽게 가수분해를 한 후에, 염산 등의 산성용액으로 반응액을 중화시켜 생성된 염을 여과하여 제거함으로써 카르복실산 체 화합물 (4)를 수득하는 제 3단계; 상기 화합물 (4)를 아미노산 에스테르체(CH3-OCO-C(R2)-NH2), EDC, 및 HOBr를 커필링화제로 사용하여 TEA 및 DCM 등의 반응 용매하에 커플링반응을 수행하여 아미드 화합물 (5)를 수득하는 제 4단계; 이 화합물 (5)의 니트로 (NO2) 그룹을 Pd/C 촉매 및 수소가스(H2) 등의 환원제 존재 하에 메탄올 등의 반응 용매하에 환원 반응을 수행하여 1차 아민(NH2)으로 환원시켜 아민체 화합물(6)을 수득하는 제 5단계; 상기 화합물(6)의 에스테르 그룹은 -78℃ 등의 저온 조건하에서 DIBAL-H로 톨루엔 등의 불활성 용매하에서 반응시키는 선택적인 환원반응을 통하여 알데히드체 (7)를 선택적으로 수득하는 제 6단계; 상기 화합물 (7)을 이민으로의 반응이 저절로 느리게 일어나므로 서서히 반응시켜 DIBAL-H을 칼륨-소듐 타타레이트(Potassium-sodium tartrate) 포화 수용액을 이용하여 제거한 후에, NaB(OAc)3H 등의 반응시약을 이용해서 분자내 환원 아민화 반응을 통해 스캐 폴드체 (8)를 최종적으로 수득가능하 다.
Figure 112008088293114-PAT00006
상기 반응식 1에서 수득한 피라졸로[1[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-온 스캐폴드 (8)의 아민기에 알데히드 작용기를 갖는 잔기(R3-aldehyde)를 환원적 알킬화 반응(reductive alkylation)을 1% 초산 및 DCM과 같은 반응 용매하에 반응을 수행하여 80%이상의 높은 수율로 4위치의 아민기에 R3기를 도입하여 삼차아민체 화합물 (9)을 수득하는 제 1단계; 상기 화합물 (9)를 로웨슨 시약(Lawesson’s reagent)을 첨가하여 톨루엔 등의 용매하에서 가열하여 피라졸로디아제핀-8-티온 화합물 (10)을 수득하는 제 2단계; 상기 화합물 (10)을 DBU 및 할라이드체(R4-X)를 DCM 등의 반응 용매하에 반응시키는 에켄모세르 결합 반응(Eschenmoser coupling reaction)을 응용하여 선택적인 S-알킬화(alkylation) 반응을 통해 R4그룹을 도입한 피라졸로디아제핀-8-티오 유도체 화합물 (11)을 최종적으로 수득가능하다.
Figure 112008088293114-PAT00007
상기 반응식 1에서 수득한 피라졸로 [4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-온 스캐폴드(8)의 아민기에 삼불화아세틸 무수물(trifluoroacetyl anhydride) 및 알데히드(R3-aldehyde)를 1% 초산 및 DCM 반용용매 조건 또는 R3-무수물(anhydride) 및 DCM 등의 조건하에서 반응시켜 티오아미드(thioamide) 형성 반응을 용이하게 하기 위하여 4위치의 아민기에 R3기를 도입하여 삼차아민체 화합물 (12)을 수득하는 제 1 단계; 상기 화합물 (12)를 로웨슨 시약(Lawesson’s reagent)을 첨가하여 톨루엔 등의 용매하에서 가열하여 피라졸로디아제핀-8-티온 화합물 (13)을 수득하는 제 2단계; 상기 피라졸로디아제핀-8-티온 화합물 (13)에 에탄올 등의 반응용매로 하여 과량의 아민(R4-NH)과 반응시켜, 황원자(S)가 티올(SH) 형태로 떨어지면서 아민그룹으로 치환된 최종 물질인 피라졸로디아제핀-8-아민 유도체 (14)을 수득할 수 있다.
따라서 본 발명에서는 상기 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 제조방법으로 얻어진 일반식 (I) 화합물들은 트란스글루타미나제에 대한 강력한 억제 활성을 나타내므로 트란스글루타미나제 활성 증가로 기인한 질병, 예를 들어, 퇴행성 관절염(rheumatoid arthritis), 당뇨병(diabetes), 자가면역 근육염(inflammatory myositis), 동맥경화 (atherosclerosis), 뇌졸증(stroke), 간경화(liver cirrhosis), 유방암(breast cancer), 알츠하이머(Alzheimer), 파킨슨(Parkinson), 헌팅턴 (Huntington), 뇌막염(encephalitis) 및 염증성 위궤양(Celiac disease) 등을 치료 또는 예방할 수 있는 치료제로서 유용함을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물을 유효성분으로 포함하는 트란스글루타미나제에 대한 저해제를 제공한다.
본 발명자는 트란스글루타미나제가 [1,4,-14C] 푸트레신(putrescine)을 숙시닐레이티트 카제인에 결합시키는 것을 측정하여, 본 발명의 피라졸로디아제핀계 화 합물이 그 반응을 억제하는 것을 관찰하였다. 시험관 내 실험 상에서 14C로 표지된 푸트레신을 숙시닐레이티드 카제인과 결합시키는 트란스글루타미나제의 반응에 본 발명의 피라졸로디아제핀계 화합물을 첨가하였을 때, 트란스글루타미나제의 활성은 본 발명의 피라졸로디아제핀계 화합물의 농도가 증가할수록 감소되었다. 따라서 본 발명의 피라졸로디아제핀계 화합물이 트란스글루타미나제의 억제제임을 알 수 있으며, 트란스글루타미나제가 과발현될 때 본 발명의 피라졸로디아제핀계 화합물이 사용하여 증가된 트란스글루타미나제의 활성을 줄일 수 있음을 알 수 있다.
또 다른 양태로서, 본 발명은 피라졸로디아제핀계 화합물을 포함하는, 트란스글루타미나제 활성 증가로 기인한 질병을 예방, 치료하기 위한 약제학적 조성물과 피라졸로디아제핀계 화합물을 사용하여 상기 질병을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 용어 "예방"이란 피라졸로디아제핀계 화합물을 포함하는 조성물의 투여로 트란스글루타미나제의 활성의 증가로 인한 모든 질병의 발병을 억제시키거나 발병을 지연하는 모든 행위를 말하며, "치료"란 상기 약제학적 조성물의 투여로 트란스글루타미나제의 활성의 증가로 인한 모든 질병을 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 트란스글루타미나제 활성 증가로 기인한 질병은 트란스글루타미나제가 과발현되는 등 그 활성이 증가되어 초래되는 모든 질병을 포함하나, 구체적으로는 신경계 질환 또는 암을 포함한다.
신경계질환의 경우, 신경 세포의 사망 또는 손상과 관련되는 질환으로, 특히 알츠하이머 질환, 다경색 치매, 알츠하이머 질환과 다경색 치매의 혼합형, 파킨슨씨 질환, 저갑상선증, 알코올성 치매 알츠하이머, 헌팅턴 병 등의 중추신경계 세포의 손상 및 사망에 따른 중추신경계 질환이 대표적이다. 이런 질병의 주요증상은 인지 기능 장애와 언어, 판단, 추상력, 공간시간적 증력 및 기타 새로운 기술 습득의 장애 등을 포함하며, 성격변화, 정서적 불안정 등의 증세가 나타나며 종국적으로는 사망에 이르게 된다. 이 중 본 발명의 약제학적 조성물은 신경 조직에서 트란스글루타미나제가 과발현되는 등 그 활성이 증가된 질병에 쓰일 수 있는데, 구체적으로는 뇌에서 트란스글루타미나제가 과발현되는 헌팅턴 병(Nature Medicine, 8, 143-149, 2002), 소뇌와 대뇌 피질에서 트란스글루타미나제가 과발현되는 알츠하이머병(The Journal of Biological Chemistry, Vol. 274. No. 43. Issue Of October 22, pp 30715-30721), α 시누클레인(α synuclein)이 트란스글루타미나제에 의해 응집되는 파킨슨씨 병(PNAS, February 18,2003, Vol. 100, no.4, pp2047-2052) 등에 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 신경조직에서 트란스글루타미나제가 과발현되는 모든 질병의 치료에 사용될 수 있다.
암의 경우, 암의 전이, 화학적 내성, 방사성 내성을 가지는 암에서 트란스글루타미나제의 현저한 발현 증가가 확인되면서, 트란스글루타미나제의 억제는 암 예방 및 치료 측면에서도 중요하다. 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 사용하여 예방 또는 치료될 수 있는 구체적 암은 트란스글루타미나제의 증가가 나타나는 암, 구체적으로는 대장암, 소장암, 직장암, 항문암, 식도암, 췌장암, 위암, 신장암, 자궁암, 유방암, 폐암, 임파선암, 갑상선암, 전립선암, 백혈병, 피부암, 결장암, 뇌종양, 방광암, 난소암, 담낭암 등을 포함하고, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 피라졸로디아제핀계 화합물을 포함하는 조성물 및 치료방법은 인간뿐만 아니라 트란스글루타미나제 활성 증가로 기인한 질병이 발병할 수 있는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물에게도 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물을 유효성분으로 포함하는 트란스글루타미나제 활성 증가로 기인한 질병, 바람직하게는, 신경계 질환 또는 암, 보다 바람직하게는, 알츠하이머 질환, 다경색 치매, 알츠하이머 질환과 다경색 치매의 혼합형, 파킨슨씨 질환, 저갑상선증, 알코올성 치매 알츠하이머, 또는 헌팅턴 병과 같은 신경계 질환 또는 대장암, 소장암, 직장암, 항문암, 식도암, 췌장암, 위암, 신장암, 자궁암, 유방암, 폐암, 임파선암, 갑상선암, 전립선암, 백혈병, 피부암, 결장암, 뇌종양, 방광암, 난소암, 또는 담낭암 등과 같은 암질환의 치료 및 예방을 위한 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 0.0001~100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001~100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 조성물에서 본 발명의 화합물은 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~10 중량%, 바람직하게는 0.001~1 중량%의 양으로 존재하여야 한다.
또한, 본 발명의 화합물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
상기에 언급한 바와 같이, 본 발명은 트란스글루타미나제 억제제인 피라졸로 디아제핀계 화합물을 제공하고자하는 것으로 본 발명은 신규한 피라졸로디아제핀계 화합물을 합성하고 트란스글루타미나제 억제제로써의 의약용도를 실험함으로써 트란스글루타미나제 억제제를 제공하는 것이다. 이를 포함하는 화합물을 유효성분으로 하는 약학 조성물은 트란스글루타미나제 과다 활성에 기인한 질환의 치료 및 예방을 위한 약제로 이용가능하다.
이하, 본 발명을 하기에 의거하여 좀더 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 참고예 및 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이에 의해 제한되는 것은 아니다.
참고예 1. 실험 준비 및 기기
1-1. 분석기기
본 실험에서 얻은 생성물의 구조 확인을 위해 사용된 기기는 하기와 같다. 핵자기 공명 스펙트럼(1H NMR, 13C NMR)은 300 MHz 또는 400MHz를, 용매는 CDCl3, DMSO-d6를 사용하였다. 짝지음(Coupling) 상수( J )는 Hz로 표시하였다. 질량(Mass) 스펙트럼을 사용하였으며 m/z 형태로 표시하였다.
1-2. TLC 및 관크로마토그래피
TLC(Thin layer chromatography)는 E. Merck사 제품인 실리카겔(Merck F254)을 사용하였으며 관크로마토그래피(Column chromatography)를 위해서는 실리카(Merck EM9385, 230-400 mesh)를 사용하였다. 또한, TLC 상에서 분리된 물질을 확인하기 위해서 UV 램프(= 254 nm)를 이용하거나 아니스알데히드(Anisaldehyde), 과망간산칼륨(KMnO4) 발색 시약에 담근 후, 플레이트를 가열하여 확인하였다.
1-3. 사용 시약
본 실험에서 사용된 시약은 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 란캐스터(Lancaster), 플루카(Fluka) 제품을 구입하여 사용하였으며, 반응에 사용된 용매는 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 머크(Merck), 준세이 화학(Junsei Chemical Co.) 제품의 1급 시약을 정제 없이 사용하였다. 용매에 사용한 THF 는 아르곤 기류에서 Na 금속과 벤조페논(Benzophenone)을 넣고 가열환류하여 청색으로 되었을 때 사용하였다. 또한, 디클로로메탄(CH2Cl2) 은 아르곤 기류에서 CaH2를 넣고 가열환류하여 사용하였다. 에틸아세테이트와 헥산은 아르곤 기류에서 가열환류하여 정제하여 사용하였다.
참고예 2. 제조중간체인 피라졸로디아제핀-8-온 유도체의 제조
2-1. 에스테르체(2)의 제조
먼저 4-니트로피라졸로-1-카르복실산 (1) 출발물질 20 g (127.32 mmol)을 아세틸 클로라이드(AcCl) 11.10 ml(381.96 mmol)을 메탄올 350 ml에 녹인 반응용액에 적가하여 에스테르체 메틸-4-니트로-1H-피라졸-3-칼복실레이트 하이드로클로라이드(methyl 4-nitro-1H-pyrazole-3-carboxylate hydrochloride) (2) 23.69 g(수율: 90%)을 얻었다.
2-2. R1 치환체 (2)의 제조
상기 2-1에서 얻은 에스테르체 (2) 12 g(58.09 mmol)에 페네틸 브로바이드 11.7 ml(88.01 mmol)을 수소화나트륨 5.8 g(145.22 mmol) 및 DMF 250 ml 용매하에 1차적으로 선택적인 알킬화반응을 통하여 1차적으로 페네틸, 이소부틸 그룹, 프로필 그룹 등의 R1 치환기를 도입하여 R1 치환체 메틸 4-니트로-1-펜에틸-1H-피라졸-3-카르복실레이트 (methyl 4-nitro-1-phenethyl-1H-pyrazole-3-carboxylate) 10.54 g(수율: 69%)을 얻었다.
2-3. 카르복실산 체 (4)의 제조
상기 2-2에서 얻은 치환체 화합물 (3) 5.09 g(13.99 mmol)에 메탄올 150 ml 반응용매 및 NaOH 6 g 등의 알칼리 조건으로 상온에서 30분간 가수분해 반응을 수행하여 에스테르를 쉽게 가수분해를 한 후에, 1N 염산 150 ml 반응액을 중화시켜 생성된 염을 여과하여 제거함으로써 카르복실산 체 화합물 4-니트로-1-펠에틸-1H-피라졸-3-카르복실산 (4-nitro-1-phenethyl-1H-pyrazole-3-carboxylic acid) (4) 3.50 g(수율: 97%)을 얻었다.
2-4. 아미드 화합물 (5)의 제조
상기 2-3에서 얻은 카르복실산체 화합물 (4) 3.50 g(13.40 mmol)에 H-Phe-OMe·HCl 2.88 g(16.08 mmol) 시약을 (에틸-N",N"-디메틸아미노)프로필칼보디미드 하이드로클로라이드 (ethyl-N",N"-dimethylamino) propylcarbodiimide hydrochloride; EDC) 3.08 g (16.08 mmol)와 N-하이드록시벤조트리아졸(N-hydroxybenzotriazole; HOBt) 2.17 g(16.08 mmol)를 커플링화제로 사용하여 베이스로 트리에틸아민 (triethylamine; TEA) 2.13 ml(16.08 mmol) 사용하고, 디클로리메 탄 (dichlorimethane; DCM) 100 ml의 반응 용매하에 커플링반응을 수행하여 아미드 화합물 메틸 2-(4-니트로-1-펜에틸-1H-피라졸-3-칼복아미도)-3-페닐프로파노에이트(methyl 2-(4-nitro-1-phenethyl-1H-pyrazole -3-carboxamido)-3-phenylpropanoate) (5) 4.24 g(수율: 75%)을 얻었다.
2-5. 아민체 화합물 (6)의 제조
상기 2-4에서 얻은 아미드 화합물 (5) 4 g(9.47 mmol)의 니트로(NO2) 그룹을 Pd/C 촉매 600 mg 및 수소가스(H2) 등의 환원제 존재하에 메탄올 150 ml 용매하에 환원 반응을 수행하여 1차 아민(NH2)으로 환원시켜 아민체 화합물 (6) 메틸 2-(4-아미노-1-펜에틸-1H-피라졸-3-칼복아미도)-3-페닐프로파노에이트(methyl 2-(4-amino-1-phenethyl-1H-pyrazole-3-carboxamido) -3-phenylpropanoate) 3.52 g (수율: 95%)을 얻었다.
2-6. 아민체 화합물 (6)의 제조
상기 2-5에서 얻은 아민체 화합물 (6) 3.52 g(8.97 mmol)의 에스테르 그룹은 -78℃의 저온 조건하에서 디아이소부틸아루미니움 하이드라이드 (diisobutylalluminium hydride; DIBAL-H) 2M 톨루엔 용액(toluene solution) 9 ml을 천천히 적가하여 두시간 반동안 톨루엔 불활성 용매하에서 반응시킨후, 메탄올을 넣어 남아있는 DIBAL을 제거 하고 칼륨-소듐 타타레이트(Potassium-sodium tartrate) 포화 수용액을 이용하여 DIBAL로 인한 침전물을 제거함으로써 알데히드체 (7) 4-amino-N-(1-oxo-3-phenyl propan-2-yl)-1-phenethyl-1H-pyrazole-3- carboxamide을 intra amine과 자발적으로 반응하여 형성된 이민과의 혼합물 상태로 2.9 g를 선택적으로 수득하였다.
2-7. 아민체 화합물(6)의 제조
상기 2-6에서 얻은 알데히드체(7) 2.9 g을 이민으로의 반응이 저절로 느리게 일어나므로 1% AcOH DCM을 용매로 하여 자발적 이민화 반응을 한시간 동안 더 유도한 후에 NaB(OAc)3H 2.8 g을 첨가하여 상온에서 12시간 교반하여 분자내 환원 아민화 반응을 통해 피라졸로디아제핀-8-온 스캐 폴드체 (8) 6-벤질-2-펜에틸-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,3]디아제핀-8(2H)-온( 6-benzyl-2-phenethyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[4,3-e][1,4]diazepin-8(2H)-one) 1.45 g(수율: 52%)을 수득하였다.
실시예 1. (R)-1-(6-벤질-2-페네틸-8-티옥소-5,6,7,8-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-4(2H)-일)-2,2,2-트리플루오로에타논(LDD843)
Figure 112008088293114-PAT00008
1-1. 피라졸로디아제핀-8-온 중간체(LDD843-1)의 제조
상기 참고예 2 개시된 방법으로 합성된 골격 2번 위치에 페테틸기를, 6번 위치에 벤질기를 도입한 피라졸로디아제핀-8-온 (R)-6-벤질-2-펜에틸-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-온 ((R)-6-benzyl-2-phenethyl-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[4,3-e][1,4]diazepin-8(2H)-one) (520 mg, 1.5 mmol)을 디클로로메탄(DCM)에 녹인 뒤 트리플로오로아세틱 언하이드리드(trifluoroacetic anhydride; 420 mg, 3.0 mmol)을 첨가하여 상온에서 4 시간동안 교반하였다. 반응이 끝나면 디클로로메탄으로 희석하고 물로 남아있는 트리플로오로아세틱 언하이드리드를 제거 하여 용매는 감압 증류하여 제거한 후 하기 물성치를 갖는 골격 2번 위치에 페테틸기를, 6번 위치에 벤질기, 및 4위치에 트리플루오로 아세틸기를 도입한 피라졸로디아제핀-8-온(LDD843-1) (R)-6-벤질-2-펜에틸-4-(2,2,2-트리플루오로아세틸)-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-온 ((R)-6-benzyl-2-phenethyl-4-(2,2,2-trifluoroacetyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[4,3-e][1,4]diazepin-8(2H)-one)을 521 mg (수율: 78.5%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 8.15(1H, s), 7.38-7.07(10H, m), 7.10(1H, NH),4.44(2H, J=6.9Hz, t), 4.36(1H, J=15Hz, m), 3.94(1H, m), 3.80(1H, m), 3.22(2H, J=6.9Hz, t), 3.05(1H, J=5.7Hz, 13.8Hz, dd), 2.83(1H, J=13.9Hz, 9.3Hz, dd);
MS (ESI), m/z : 443.2 ([M+H]+)
1-2. (R)-1-(6-벤질-2-페네틸-8-티옥소-5,6,7,8-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-4(2H)-일)-2,2,2-트리플루오로에타논(LDD843)의 제조
상기 실시예 1-1에서 수득한 개시된 방법으로 합성된 피라졸로디아제핀-8-온 (LDD843-1) 430 mg을 로웨슨 시약(Lawesson's reagent; 227439 Aldrich) 471 mg과 톨루엔 용매하에서 2시간 동안 70℃에서 반응시켜 8위치에 황원자 도입된 하기 물성치를 갖는 (R)-1-(6-벤질-2-페네틸-8-티옥소-5,6,7,8-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-4(2H)-일)-2,2,2-트리플루오로에타논 (LDD843 )을 427 mg(수율: 95.8%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm) 8.15(1H, s), 7.84(1H, NH), 7.38-7.07(10H, m), 4.46(2H, J=6.9Hz, t), 4.00(1H, m), 3.92(2H, m), 3.22(2H, J=6.9Hz, t), 3.03(2H, m);
MS(ESI), m/z : 459.2([M+H] +)
실시예 2. (R)-6-벤질-2-페네틸-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-티온(LDD847)
Figure 112008088293114-PAT00009
상기 실시예 1에 개시된 제조 방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 1N-NaOH 염기로 처리하여 트리플로오로 아세틸기를 제거한 하기 물성치를 갖는 (R)-6-벤질-2-페네틸-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-티온 (LDD847 )을 10 mg(수율: 99%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) (ppm) 8.16(1H, NH), 7.34-7.16(10H, m), 6.80(1H, s), 4.38(2H, J=7.5Hz, t), 3.86(1H, m), 3.41(1H, J=13.2Hz, d), 3.25(1H, m), 3.20(2H, J=7.5Hz, t), 2.96(2H, m);
MS(ESI), m/z : 361.0([M-H] +)
실시예 3. (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피페레딘-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD844)
Figure 112008088293114-PAT00010
상기 실시예 1에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 2-피페리딘 에틸아민기 도입은 30% 2-피페리딘 에틸 아민(THF 상에서)을 12시간 동안 상온에서 반응시켜 처리하면, 트리플로오로 아세틸기는 2-피페리딘 에틸 아민의 염기성에 의해 제거됨으로써 하기 물성치를 갖는 (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피페레딘-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민 (LDD844 )을 14 mg(수율: 52.2%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 7.35-7.13(10H, m), 7.18(1H, s), 5.19(1H, NH), 4.38(1H, m), 4.30(2H, J=7.2Hz, t), 3.70(2H, br s), 3.43(1H, m), 3.21(2H, J=7.2Hz, t), 3.06(1H, J=13.5Hz, d), 2.89(2H, J=6.6Hz, J=13.2Hz, J=40.2Hz, ddd), 2.67(2H, br s) 1.53-1.48(5H, m);
MS (ESI), m/z : 457.2 ([M+H] +)
실시예 4. (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피롤리딘-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드 로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민 (LDD845)
Figure 112008088293114-PAT00011
상기 실시예 1에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 2-피롤리딘 에틸아민기 도입은 30% 2-피롤리딘 에틸아민(THF 상에서)에서 12시간 동안 상온에서 반응시켜 처리하고, 트리플로오로 아세틸기는 2-피롤리딘 에틸 아민의 염기성에 의해 제거됨으로써 하기 물성치를 갖는 (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피롤리딘-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민 (LDD845) 을 7 mg(수율: 36.8%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 7.34-7.14(10H, m), 7.17(1H, s), 5.13(1H, NH), 4.35(1H, m), 4.30(2H, J=7.2Hz, t), 3.79(2H, m), 3.41(1H, m), 3.20(2H, J=7.2Hz, t), 3.09(1H, J=10.8Hz, d), 2.99-2.78(5H, m), 2.64(3H, m), 1.78(4H, m);
MS (ESI), m/z : 429.4 ([M+H] +)
실시예 5. (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피페라진-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD846)
Figure 112008088293114-PAT00012
상기 실시예 1에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 2-피페라진 에틸아민기도입은 30% 2-피페라진 에틸아민(THF 상에서)에서 12시간동안 상온에서 반응시켜 처리하고, 트리플로오로 아세틸기는 2-피페라진 에틸 아민의 염기성에 의해 제거됨으로써 하기 물성치를 갖는 (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피페라진-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD846)을 5.5 mg(수율: 27.8%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm)7.36-7.12(10H, m), 7.05(1H, s), 4.40(2H, J=7.2Hz, t), 3.51(1H, m), 3.45(1H, m), 3.42(2H, J=6.3Hz, t), 3.21(2H, J=7.2Hz, t), 3.18-3.07(4H, m), 2.89(1H, m), 2.77(1H, m), 2.75-2.66(4H, m), 2.62(2H, J=6.3Hz, t);
MS (ESI), m/z : 458.3 ([M+H] +)
실시예 6. (R,E)-6-벤질-N-(2-몰포리노에틸)-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민 (LDD848)
Figure 112008088293114-PAT00013
상기 실시예 1에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 2-몰폴린 에틸 아민기 도입은 30% 2-몰폴린 에틸 아민(THF 상에서)에서 12시간동안 상온에서 반응시켜 처리하고, 트리플로오로 아세틸기는 2-몰폴린 에틸 아민의 염기성에 의해 제거됨으로써 하기 물성치를 갖는 (R,E)-6-벤질-N-(2-몰포리노에틸)-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민( LDD848) 을 14 mg(수율: 7O%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm) 7.37-7.07(10H, m), 7.04(1H, s), 4.56(1H, m), 4.32(2H, J=7.2Hz, t), 3.83(2H, m), 3.70(4H, br s), 3.42(1H, m), 3.21(2H, J=7.2Hz, t), 3.06(2H, br m), 2.77(1H, m), 2.70(2H, br m), 2.50(4H, br s);
MS(ESI), m/z : 459.0([M-H] +)
실시예 7. (R,E)-6-벤질-N-메틸-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD849)
Figure 112008088293114-PAT00014
상기 실시예 1에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 메틸아민기도입은 30% 메탈아민(THF 상에서)에서 12시간동안 상온에서 반응시켜 처리하고, 트리플로오로 아세틸기는 메틸아민의 염기성에 의해 제거됨으로써 하기 물성치를 갖는 (R,E)-6-벤질-N-메틸-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민( LDD849) 을 4.7 mg(수율: 3O%)로 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 7.35-7.07(10H, m), 6.94(1H, s), 4.65(1H, NH), 4.30(2H, J=7.2Hz, t), 4.10(1H, s), 3.40(3H, J=5.7Hz, d), 3.28(1H, m), 3.15(2H, J=7.2Hz, t), 2.99(1H, J=10.2Hz, d), 2.72(1H, J=10.2Hz, J=12.6Hz, dd);
MS (ESI), m/z : 360.3 ([M+H] +)
실시예 8. (S)-테르트-부틸 3-((R,E)-6-벤질-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일아미노)피롤리딘-1-칼복실레이트(LDD850)
Figure 112008088293114-PAT00015
상기 실시예 1에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 1-Boc 피롤리딘 아민기 도입은 30% 1-Boc 피롤리딘 아민(THF 상에서)에서 12시간동안 상온에서 반응시켜 처리하고, 트리플로오로 아세틸기는 1-Boc 피롤리딘 아민기의 염기성에 의해 제거됨으로써 하기 물성치를 갖는 (S)-테르트-부틸 3-((R,E)-6-벤질-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일아미노)피롤리딘-1-칼복실레이트( LDD850) 을 5.6 mg(수율: 25%)로 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 7.36-7.12(10H, m), 6.93(1H, s), 5.21(1H, NH), 4.68(1H, m), 4.33(2H, J=7.2Hz, t), 4.06(1H, m), 3.79(1H, m), 3.58(1H, m), 3.49(1H, m), 3.43(1H, m), 3.41(1H, m), 3.20(1H, m), 3.17(2H, J=7.2Hz, t), 3.08(1H, m), 3.04(1H, J=10.2Hz, d), 2.79(1H, J=10.2Hz, J=12.6Hz, dd), 2.04(1H, m), 1.82(1H, m), 1.48(9H, s);
MS (ESI), m/z : 515.2 ([M+H] +)
실시예 9. (R,E)-6-벤질-N-(1-벤질피페리딘-4-yl)-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민 (LDD854)
Figure 112008088293114-PAT00016
상기 실시예 1에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 1-벤질피페리딘 아민기 도입은 30% 1-벤질피페리딘 아민 (THF 상에서)에서 12시간동안 상온에서 반응시켜 처리하고, 트리플로오로 아세틸기는 1-벤질피페리딘 아민기의 염기성에 의해 제거됨으로써 하기 물성치를 갖는 (R,E)-6-벤질-N-(1-벤질피페리딘-4-yl)-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민 ( LDD854) 을 15 mg (수율: 69%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 4.63(2H, m), 4.33(2H, J=7.2Hz, t), 4.11(1H, J=4.8Hz, d), 3.62(2H, s), 3.28(1H, m), 3.15(2H, J=7.2Hz, t), 3.11(1H, m),3.04(1H, J=13.2Hz, d), 2.95(2H, br m), 2.72(1H, J=11.1Hz, J=13.2Hz, dd), 2.56(2H, br m), 2.17(2H, J=14.1Hz, m), 1.73(2H, br m);
MS (ESI), m/z : 519.2 ([M+H] +)
실시예 10. (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(피페리딘-4-일)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민 (LDD1010)
Figure 112008088293114-PAT00017
상기 실시예 1에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 피페리딘 아민기도입은 30% 피페리딘 아민 (THF 상에서)에서 12시간동안 상온에서 반응시켜 처리하고, 트리플로오로 아세틸기는 피페리딘 아민기의 염기성에 의해 제거됨으로써 하기 물성치를 갖는 (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(피페리딘-4-일)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민 ( LDD1010) 을 2 mg (수율: 11%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 7.39-7.11(10H, m), 6.94(1H, s), 4.63(2H, m), 4.33(2H, J=7.2Hz, t), 4.11(1H, J=4.8Hz, d), 3.28(1H, m), 3.15(2H, J=7.2Hz, t), 3.11(1H, m), 3.04(1H, J=13.2Hz, d), 2.95(2H, br m), 2.72(1H, J=11.1Hz, J=13.2Hz, dd), 2.56(2H, br m), 2.17(2H, J=14.1Hz, m), 1.73(2H, br m);
MS (ESI), m/z : 429.2 ([M+H] +)
실시예 11. (S)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-티옥소-2,4,5,6,7,8-헥사히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트 (LDD1008)
Figure 112008088293114-PAT00018
11-1. 피라졸로디아제핀-8-온 중간체(LDD1008-1)의 제조
상기 참고예 2 개시된 방법으로 합성된 골격 2번 위치에 아이소부틸기를, 6번 위치에 Boc-아미노부틸기를 도입한 피라졸로디아제핀-8-온 (S)-테르트-부틸-4-(2,4-디아이소부틸-8-옥소-2,4,5,6,7,8-헥사피드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트)((S)-tert-butyl 4-(2,4-diisobutyl-8-oxo-2,4,5,6,7,8-hexahydropyrazolo [4,3-e][1,4]diazepin-6-yl)butylcarbamate)을 8OO mg (수율: 40%) 얻었다.
11-2. (S)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-티옥소-2,4,5,6,7,8-헥사히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트( LDD1008)의 제조
상기 실시예 11-1에서 수득한 개시된 방법으로 합성된 피라졸로디아제핀-8-온(LDD1008-1)을 1% AcOH(DCM 상에서)에 녹이고 아이소부틸알데히드를 넣고 30분간 교반한 후 NaB(OAc)3H을 넣고 상온에서 12시간 교반하여 환원을 시켜서 4번 위치에 아이소부틸기를 치환시키고 로웨슨 시약 (Lawesson's reagent; 227439 Aldrich)(870 mg, 1당량)과 톨루엔 용매하에서 2시간 동안 70℃에서 반응시켜 8위치에 황원자 도입된 하기 물성치를 갖는 (S)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-티옥소-2,4,5,6,7,8-헥사히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트( LDD1008) 을 586 mg(수율: 67%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 8.05(1H, NH), 6.78(1H, s), 4.56(1H, NH), 3.92(2H, J=7.5Hz, J=13.2Hz, J=25.8Hz, ddd), 3.60(1H, m), 3.32(2H, J=3.9Hz, d), 3.10(2H, m), 2.89(2H, m), 2.26(1H, m), 1.98(1H, m), 1.66(2H, m), 1.49(4H, m), 1.43(9H, s), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS (ESI), m/z : 450.2 ([M-H] +)
실시예 12. (S)-6-(4-아미노부틸)-2,4-디이소부틸-4,5,6,7-테트라히드로 피라졸 로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-티온 (LDD998)
Figure 112008088293114-PAT00019
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 20% TFA (DCM 상에서)에서 30분동안 상온에서 반응시켜 처리하여 Boc기를 제거한 하기 물성치를 갖는 (S)-6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-티온( LDD998) 을 5.2 mg(수율: 45%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm) 8.48(1H, NH), 6.83(1H, s), 3.93(2H, J=7.5Hz, J=13.2Hz, J=25.8Hz, ddd), 3.66(1H, m), 3.34(2H, J=3.9Hz, d), 2.90(2H, m), 2.80(2H, m), 2.28(1H, m), 2.01(1H, m), 1.66(2H, m), 1.49(4H, m), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS(ESI), m/z : 350.2([M+H] +)
실시예 13. (S,E)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-(2-몰포리노에틸아미노)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트(LDD1009)
Figure 112008088293114-PAT00020
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, 8번 위치에 2-몰폴린에틸아민기 도입은 30% 2-몰폴린에틸아민 (THF 상에서)에서 상온에서 12시간 반응시켜 하기 물성치를 갖는 (S,E)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-(2-몰포리노에틸아미노)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트( LDD1009) 을 7 mg(수율: 58%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 6.78(1H, s), 4.56(1H, NH), 3.92(2H, J=7.5Hz, J=13.2Hz, J=25.8Hz, ddd), 3.70(4H, br s), 3.60(1H, m), 3.32(2H, J=3.9Hz, d), 3.10(2H, m), 3.06(2H, br m), 2.70(2H, br m), 2.50(4H, br s), 2.89(2H, m), 2.26(1H, m), 1.98(1H, m), 1.66(2H, m), 1.49(4H, m), 1.43(9H, s), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS (ESI), m/z : 548.0 ([M+H] +)
실시예 14. (S,E)-테르트-부틸 3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4- 디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노에이트(LDD1007)
Figure 112008088293114-PAT00021
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에 1,8-디아자비시클로[5,4,0]운데크-7-엔 (1,8-Diazabicyclo[5,4,0]undec-7-ene; DBU)를 베이스로 디클로로메탄에서 3-브로모-터셔리부틸 프로피오네이트 80 mg(20 당량)를 24시간동안 40℃에서 반응시켜 8번위치에 터셔리부틸 프로피오네이트기로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-테르트-부틸 3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노에이트 (LDD1007) 을 9 mg(수율: 78%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, Aceton-d6) δ(ppm) 7.11(1H, s), 5.83(1H, NH), 3.79(2H, J=7.2Hz, d), 3.56(1H, m), 3.22(1H, J=13.2Hz, d), 3.06(2H, m), 2.89(1H, m), 2.85(2H, J=2.7Hz, J=7.5Hz, dd), 2.52(2H, J=7.8Hz, t), 2.21(1H, m), 1.95(1H, m), 1.66(2H, m), 1.56(4H, m), 1.39(9H, s), 1.34(9H, s), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS (ESI), m/z : 580.3 ([M+H] +)
실시예 15. (S,E)-테르트-부틸 2-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)아세테이트(LDD1006)
Figure 112008088293114-PAT00022
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, DBU를 베이스로 디클로로메탄에서 2-브로모-터셔리부틸 아세테이트 4 μg(1당량) 2시간동안 상온에서 반응시켜 8번위치에 터셔리부틸 프로피오네이트기로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-테르트-부틸 2-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)아세테이트( LDD1006) 을 4 mg(수율: 66%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm)6.71(1H, s), 4.69(1H, NH), 3.79(2H, J=7.5Hz, d), 3.75(2H, J=15.6Hz, J=36.3Hz, q), 3.58(1H, m), 3.14(2H, m), 3.13(1H, m), 2.96(1H, m), 2.80(2H, m), 2.22(1H, m), 1.93(1H, m), 1.66(2H, m), 1.56(4H, m), 1.45(9H, s), 1.44(9H, s), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS(ESI), m/z : 566.3([M+H] +)
실시예 16. (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노익산(LDD997)
Figure 112008088293114-PAT00023
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, DBU를 베이스로 디클로로메탄에서 3-브로모-터셔리부틸 프로피오네이트 74 μl를 48시간 동안 40℃에서 반응시켜 8번 위치에 터셔리부틸 프로피오네이트기로 치환시킨 후 50% TFA(DCM 상에서)에서 1시간동안 상온에서 반응시키고 반응종료후 질소로 용매를 농축시킨후 SAX(strong anion exchanger) 레진을 통과시켜 TFA 염을 제거하여, 6번과 8번 위치에는 각각 Boc과 터셔리 부틸기가 제거된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노익산( LDD997) 을 7 mg (수율: 99%) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm)6.72(1H, s), 3.83(2H, J=6.6Hz, d), 3.57(1H, m), 3.27(2H, br m), 3.14(2H, J=12.9Hz, d), 2.98(2H, m), 2.81(2H, m), 2.60(2H, br m), 2.21(1H, m), 1.95(1H, m), 1.66(2H, m), 1.56(4H, m), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS (ESI), m/z : 422.3 ([M-H] +)
실시예 17. (S,E)-3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노익산(LDD1005)
Figure 112008088293114-PAT00024
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후 에, DBU를 베이스로 디클로로메탄에서 3-브로모-터셔리부틸 프로피오닉액시드 33 mg (10당량) 12시간동안 상온에서 반응시켜 8번 위치에 프로피오닉 액시드로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노익산( LDD1005) 을 10 mg (수율: 87%)로 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm) 6.82(1H, s), 4.98(1H, NH), 3.97(1H, m), 3.83(2H, J=7.2Hz, d), 3.27(4H, br m), 3.12(2H, br m), 2.89(4H, m), 2.21(1H, m), 2.01(1H, m), 1.66(2H, m), 1.56(4H, m), 1.43(9H, s), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS (ESI), m/z : 522.3 ([M-H] +)
실시예 18. (S,E)-에틸3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노에이트 (LDD1004)
Figure 112008088293114-PAT00025
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, DBU를 베이스로 디클로로메탄에서 2-브로모-에틸 프로파노에이트 60 μg(5 당량) 12시간동안 상온에서 반응시켜 8번 위치에 에틸 프로파노에이트기로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-에틸3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노에이트( LDD1004) 을 20 mg(수율: 64%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm) 6.72(1H, s), 4.70(1H, NH), 4.16(2H, J=7.2Hz, q), 3.83(2H, J=7.2Hz, d), 3.63(1H, m), 3.27(5H, br m), 3.09(1H, m), 2.81(2H, J=5.7Hz, t), 2.68(2H, J=7.5Hz, t), 2.18(1H, m), 1.94(1H, m), 1.66(2H, m), 1.56(4H, m), 1.37(9H, s), 1.24(3H, J=7.2Hz, t), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS(ESI), m/z : 552.3([M+H] +)
실시예 19. (S,E)-테르트-부틸4-(8-(3-아미노-3-옥소프로필티오)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트(LDD1003)
Figure 112008088293114-PAT00026
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, DBU를 베이스로 디클로로메탄에서 3-브로모-프로피오닉 액시드 33 mg(10 당량) 12시간동안 상온에서 반응시켜 8번 위치에 프로피오닉 액시드로 치환한 후, HATU (2-(1H-7-Azabenzotriazol-1-yl)--1,1,3,3- tetramethyl uronium hexafluorophosphate Methanaminium)를 커플링제로 이용하여 암모니아 2 M (디옥산(dioxane) 상에서)를 12시간동안 상온에서 반응시켜 8번 위치에 3-아미노-3-옥쏘프로필기로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-테르트-부틸4-(8-(3-아미노-3-옥소프로필티오)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트(LDD1003)을 5.2 mg(수율: 88) 얻었다.
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ(ppm)6.72(1H, s), 4.72(1H, NH), 3.83(2H, J=7.2Hz, d), 3.63(1H, m), 3.27(2H, m), 3.13(3H, m), 2.97(1H, m), 2.81(2H, m), 2.64(2H, m), 2.22(1H, m), 1.94(1H, m), 1.63-1.46(6H, br m), 1.43(9H, s), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS (ESI), m/z : 545.0 ([M+Na] +)
실시예 20. (S,E)-테르트-부틸 4-(8-(3-히드라지닐-3-옥소프로필티오)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트(LDD1002)
Figure 112008088293114-PAT00027
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, DBU를 베이스로 디클로로메탄에서 2-브로모-에틸 프로파노에이트 60 μg(5 당량) 4시간동안 상온에서 반응시켜 8번 위치에 에틸 프로파노에이트기로 치환한 후, 30% 하이드라진 하이드레이트(에탄올 상에서)에서 12시간 상온에서 반응시켜 8번 위치에 프로판하이드라자이드로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-테르트-부틸 4- (8-(3-히드라지닐-3-옥소프로필티오)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트( LDD1002) 을 3.6 mg(수율: 63%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm) 6.72(1H, s), 4.80(1H, NH), 3.90(2H, NH), 3.83(2H, J=7.2Hz, d), 3.63(1H, m), 3.27(2H, J=7.2Hz, t), 3.20 (3H, m), 3.02(1H, m), 2.81(2H, m), 2.62(2H, m), 2.17(1H, m), 1.91(1H, m), 1.63-1.46(6H, br m), 1.43(9H, s), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS(ESI), m/z : 538.3([M+H] +)
실시예 21. (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로판히드라지드(LDD1001)
Figure 112008088293114-PAT00028
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, DBU를 베이스로 디클로로메탄에서 3-브로모-에틸 프로파노에이트 60 μg(5 당 량) 4시간동안 상온에서 반응시켜 8번 위치에 에틸 프로파노에이트기로 치환한 후, 30% 하이드라진 하이드레이트 (에탄올 상에서)을 4시간동안 상온에서에서 반응시켜 8번 위치에 프로판하이드라자이드로 치환한 후, 20% TFA(DCM 상에서)에서 30분간 상온에서 반응시켜 반응 종료 후 질소로 용매를 농축시킨후 SAX(strong anion exchanger) 레진을 통과시켜 TFA 염을 제거하여, 6번 위치에서 Boc이 제거된 아미노부틸기로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로판히드라지드( LDD1001) 을 2 mg(수율: 71%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm) 6.72(1H, s), 3.90(2H, NH), 3.83(2H, J=7.2Hz, d), 3.63(1H, m), 3.27(2H, J=7.2Hz, t), 3.20 (3H, m), 3.02(1H, m), 2.81(2H, m), 2.62(2H, m), 2.17(1H, m), 1.91(1H, m), 1.63-1.46(6H, br m), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS(MALDI), m/z : 438.5([M+H] +)
실시예 22. (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드라피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파나미드(LDD1000)
Figure 112008088293114-PAT00029
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, DBU를 베이스로 디클로로메탄에서 3-브로모-프로피오닉 액시드 33 mg(10 당량) 12시간동안 상온에서 반응시켜 8번 위치에 프로피오닉 액시드로 치환한 후, HATU (2-(1H-7-Azabenzotriazol-1-yl)--1,1,3,3- tetramethyl uronium hexafluorophosphate Methanaminium)를 커플링제로 이용하여 암모니아 2 M (디옥산(dioxane) 상에서)를 12시간동안 상온에서 반응시켜 8번 위치에 3-아미노-3-옥쏘프로필기로 치환한 후, 20% TFA(DCM 상에서)에서 30분간 상온에서 반응시켜 반응 종료 후 질소로 용매를 농축시킨후 SAX 레진을 통과시켜 TFA 염을 제거하여, 6번 위치에 Boc이 제거된 아미노부틸기로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드라피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파나미드( LDD1000) 을 4 mg (수율: 80%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm) 6.72(1H, s), 6.67(1H, NH), 5.99(1H, NH), 3.83(2H, J=7.2Hz, d), 3.63(1H, m), 3.27(2H, m), 3.15(1H, J=6.3Hz, d), 2.97(1H, m), 2.81(2H, m), 2.64(2H, m), 2.22(1H, m), 1.94(1H, m), 1.63- 1.46(6H, br m), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS(MALDI), m/z : 423.3([M+H] +)
실시예 23. (S,E)-(6-(4-aminobutyl)-2,4-diisobutyl-2,4,5,6-tetrahydropyrazolo[4,3-e][1,4]diazepin-8-ylthio)mercury(LDD887)
Figure 112008088293114-PAT00030
상기 실시예 11-2에 개시된 제조방법과 동일한 방법으로 반응을 수행한 후에, (S)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-티옥소-2,4,5,6,7,8-헥사히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트를 에탄올에 녹이고 염화수은(Mercury chloride; HgCl2) 1.2 당량을 넣은후 상온에서 2시간 교반하여 반응시킨다. 반응 종료 후 남아있는 머큐리클로라이드는 필터해서 제거하고 용매는 감압증류후에 20% TFA(DCM 상에서)에서 Boc그룹을 제거 하여 6번 위치에 아미노부틸기로 치환된 하기 물성치를 갖는 (S,E)-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라하이드로피라졸로 [4,3-e] [1,4] 디아제핀-8-일티오)머큐리 ((S,E)-(6-(4-aminobutyl)-2,4- diisobutyl-2,4,5,6-tetrahydropyrazolo [4,3-e] [1,4] diazepin-8-ylthio) mercury) (LDD887)을 20 mg(수율: 78%) 얻었다.
1H-NMR(300MHz, CDCl3) δ(ppm) 7.14(1H, s), 4.10(1H, m), 4.01(2H, J=7.5Hz, d), 3.34(2H, m), 3.10(2H, m), 2.91(2H, m), 2.28(1H, m), 2.01(1H, m), 1.66(2H, m), 1.49(4H, m), 0.93(6H, J=6.3Hz, d), 0.90(6H, J=6.6Hz, d);
MS(ESI), m/z : 350.6([M+H] +)
실험예 1. 트란스글루타미나제 활성도 억제 in vitro 시험
상기 실시예에서 준비된 화합물들의 트란스글루타미나제에 대한 억제 활성을 결정하기 위하여 트란스글루타미나제가 [1,4,-14C] 푸트레신을 숙시닐레이티드 카제인에 결합시키는 것을 측정하는 문헌에 개시된 측정 방법을 응용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다 (Sohn, J., Kim, T.-I., Yoon, Y.-H., and Kim, S.-Y.: Transglutaminase Inhibitor: A New Anti-Inflammatory Approach in Allergic Conjunctivitis. J. Clin. Invest. 111, pp121-8, 2003).
숙시닐화된 카제인은 Calbiochem(Cat. No. 573464)로부터 구입하고, 상기 분말 1 g을 5 mM DTT(DL-Dithiothreitol)를 포함하는 반응 완충용액 50 ml (0.1M Tris-acetate(pH 8.0), 10 mM CaCl2, 0.15 M NaCl, 1.0 mM EDTA)에 용해시켰다. 이 용액은 사용 전에 -80℃에 보관한다. [1,4-14C] 푸트레신 디하이드로클로라이드는 GE Healthcare (Cat. No. CFA301)로부터 구입했고 그 스톡 용액(stock solution)을 방사선적 용량(radiological dosage)이 5 μCi/ml에 달할 때까지 증류수로 희석하였다. 트란스글루타미나제 2는 Sigma-Aldrich(Cat. No.T5398)로부터 구입했고 최종 농도가 1 unit/ml가 되게 증류수로 희석했다. 상기 실시예에서 수득한 화합물들의 스톡 용액은 DMSO에 10 mM 농도로 녹여서 제조한 후 이를 DMSO로 희석하여 각각의 농도로 제조하였다.
기질 용액은 450 μl의 숙시닐화된 카제인 용액 및 [1,4-14C] 푸트레신 디하이드로클로라이드 용액 50 μl를 혼합하여 제조하였다. 각 샘플을 96 μl의 반응 완충액, 3 μl의 썰파렘의 스톡 용액 및 1 μl의 트란스글루타미나제 스톡 용액을 혼합하여 제조하였다. 10분 동안 37℃에서 샘플을 인큐베이션 한 후에, 기질 용액β 500 μl 및 샘플 용액 100 μl을 잘 혼합하였고, 이들 혼합물을 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 하였다. 4.5 ml의 차가운(4℃) 7.5% TCA를 부가하여 반응을 정지시키고 전체 용액을 1시간동안 4℃에서 보관하였다. TCA-단백질 침전물을 GF/유리섬유 필터로 여과하여 차가운 5% TCA 25 ml로 세척하고 건조하였다. 가교된 단백질의 방사능을 액체섬광계수기(Liquid scintillation counter, LS-6500, Beckman Coulter)로 측정하고 표준으로서 DMSO-대조군의 활성을 가지고 보정하였다.
측정된 수치를 트란스글루타미나제의 활성으로 나타내었다. 동일한 조건 하에서 이러한 실험을 세 번 반복하였으며 각 화합물들의 트란스글루타미나제에 대한 억제 활성은 하기 표 1 내지 표 11에 나타낸 바와 같다. IC50 수치는 일반 비선형 회귀법에 의해 계산되었다.
LDD-887의 억제활성
농도 평균 SD(표준편차)
0 nM 1.000 0.000
50 nM 0.699 0.090
100 nM 0.358 0.040
250 nM 0.092 0.031
500 nM 0.005 0.002
IC50 = 75.5± 1.3 nM
P<0.0001
R= 0.9999
LDD-997의 억제활성 (DTT 비존재시)
농도 평균 SD(표준편차)
0 nM 1.000 0.000
20 nM 1.118 0.061
100 nM 1.008 0.120
500 nM 1.111 0.079
2500 nM 1.174 0.106
10000 nM 1.119 0.050
LDD-997의 억제활성 (DTT 존재시)
농도 평균 SD(표준편차)
0 nM 1.000 0.000
20 nM 1.015 0.078
100 nM 1.027 0.065
500 nM 1.148 0.057
2500 nM 1.047 0.046
10000 nM 1.094 0.071
LDD-998의 억제활성 (DTT 존재시)
농도 평균 SD(표준편차)
0 nM 1.000 0.000
20 nM 1.007 0.082
100 nM 1.050 0.024
500 nM 1.042 0.052
2500 nM 0.980 0.075
10000 nM 0.805 0.112
LDD-998의 억제활성 (DTT 비존재시)
농도 평균 SD(표준편차)
0 nM 1.000 0.000
20 nM 0.932 0.091
100 nM 1.006 0.046
500 nM 0.961 0.066
2500 nM 0.835 0.085
10000 nM 0.438 0.055
IC50 = 8.34±0.80 μM
P= 0.0005
R= 0.9995
R2= 0.9990
LDD-999의 억제활성 (DTT 존재시)
농도 평균 SD(표준편차)
0 nM 1.000 0.000
20 nM 0.969 0.091
100 nM 1.006 0.134
500 nM 1.029 0.028
2500 nM 1.059 0.088
10000 nM 0.853 0.074
LDD-999의 억제활성 (DTT 비존재시)
농도 평균 SD(표준편차)
0 nM 1.000 0.000
20 nM 0.998 0.010
100 nM 0.986 0.113
500 nM 1.000 0.098
2500 nM 1.007 0.032
10000 nM 0.786 0.067
LDD-1000의 억제활성 (DTT 비존재, 활성화전 작용)
농도 평균 SD(표준편차)
0 μM 1.000 0.000
0.2 μM 0.957 0.082
1 μM 0.921 0.089
5 μM 0.873 0.044
25 μM 0.457 0.027
IC50 = 22.1 ± 2.9 μM
P= 0.0046
R= 0.9993
R2= 0.9987
LDD-1000의 억제활성 (DTT 비존재, 활성화후 작용)
농도 평균 SD(표준편차)
0 μM 1.000 0.000
0.2 μM 0.932 0.095
1 μM 0.879 0.085
5 μM 0.858 0.057
25 μM 0.784 0.035
LDD-1001의 억제활성 (DTT 비존재, 활성화전 작용)
농도 평균 SD(표준편차)
0 μM 1.000 0.000
0.2 μM 1.040 0.144
1 μM 1.115 0.025
5 μM 0.916 0.091
25 μM 0.288 0.021
IC50 = 16.28 ± 2.89 μM
P= 0.0111
R= 0.9825
R2= 0.9652
LDD-1001의 억제활성 (DTT 비존재, 활성화후 작용)
농도 평균 SD(표준편차)
0 μM 1.000 0.000
0.2 μM 0.907 0.063
1 μM 1.133 0.069
5 μM 1.016 0.054
25 μM 0.373 0.059
IC50 = 24.07 μM
실험결과, 상기 실시예에서 수득한 화합물들의 농도에 따라 측정된 상대적인 트란스글루타미나제 억제 활성을 표 1 내지 표 11에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물들, 즉 화합물 LDD-887의 IC50 (75.5±1.3 nM), 화합물 LDD-998(DTT 비존재시)의 IC50 (8.34±0.80 μM), 화합물 LDD-1000 (DTT w/o 활성화전)의 IC50 (22.1± 2.9 μM), 화합물 LDD-1001(DTT w/o 활성화전)의 IC50 (24.07 μM),을 각각 나타내므로, 본 발명의 화합물들은 트란스글루타미나제의 활성을 농도 의존적으로 억제함을 확인할 수 있었다.

Claims (12)

  1. 하기 일반식 (Ⅰ)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염:
    Figure 112008088293114-PAT00031
    상기 식에서,
    Y는 S, S-R4 또는 N-R4이고,
    R1는 수소원자, C1-C6 저급 알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
    R2는 수소원자, R'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 벤질기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R'는 보호기로 치환되거나 비치환된 아민기이며;
    R3는 수소원자, R“로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 페네틸기, 탄 소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R”는 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기 또는 에스테르기이며;
    R4는 수소원자, 보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기, 또는 하나 이상의 R"'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급 알킬기이며, 여기에서 R"'는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 또는 C1-C6 저급 알킬기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기이며;
    (-----)표시는 단일결합 또는 이중결합을 의미한다.
  2. 제 1항에 있어서, R1는 수소원자, 쇄상 또는 가지상 부틸기 또는 펜틸기, 또는 페네틸기인 화합물군; R2는 수소원자, Boc'보호기로 치환되거나 비치환된 아민기로 치환된 C4-C6 저급알킬기, 벤질기, 또는 페네틸기인 화합물군; R3는 수소원자, 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C2 저급알킬기로 치환된 케톤기로 치환되거나 비치환된 쇄상 또는 가지상 부틸기 또는 펜틸기인 화합물군; R4는 수소 원자, Boc' 보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된 피페리딘, 피롤리딘, 피페라진, 피라졸, 또는 모르폴린으로 치환되거나 비치환된 C2-C6 저급알킬기, 또는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 및 C1-C6 저급알킬기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기로 치환된 C2-C6 저급 알킬기인 화합물.
  3. 제 1항에 있어서, 하기 일반식 (Ⅰa)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀-8(2H) 티온계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염:
    Figure 112008088293114-PAT00032
    상기 식에서,
    R1는 수소원자, C1-C6 저급알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
    R2는 수소원자, R'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 벤질기, 페네틸 기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R'는 보호기로 치환되거나 비치환된 아민기이며;
    R3는 수소원자, R“로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R”는 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기 또는 에스테르기이다.
  4. 하기 일반식 (Ⅰb)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀-8-일 티오계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염:
    Figure 112008088293114-PAT00033
    상기 식에서,
    R1는 수소원자, C1-C6 저급알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산 소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
    R2는 수소원자, R'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 벤질기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R'는 보호기로 치환되거나 비치환된 아민기이며;
    R3는 수소원자, R“로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R”는 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기 또는 에스테르기이며;
    R4는 수소원자, 보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 또는 하나 이상의 R"'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기이며, 여기에서 R"'는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 또는 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기이다.
  5. 하기 일반식 (Ⅰc)의 구조를 갖는 피라졸로디아제핀-8-아민계 화합물, 그 이성체 및 이의 약리학적으로 허용가능한 염:
    Figure 112008088293114-PAT00034
    상기 식에서,
    R1는 수소원자, C1-C6 저급알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며;
    R2는 수소원자, R'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 벤질기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R'는 보호기로 치환되거나 비치환된 아민기이며;
    R3는 수소원자, R“로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 페네틸기, 탄소수 5 내지 10의 아릴기, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기, 및 할로겐 원자로 구성된 군으로부터 선택된 치환기이며, 여기에서 R”는 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기 또는 에스테르기이며;
    R4는 수소원자, 보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된, 산소, 질소 또는 황원자로부터 선택된 헤테로원자를 갖는 탄소수 5 내지 10의 헤테로아릴기로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기, 또는 하나 이상의 R"'로 치환되거나 비치환된 C1-C6 저급알킬기이며, 여기에서 R"'는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 또는 C1-C6 저급알킬기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복실기이다.
  6. 제 3항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, R1는 수소원자, 쇄상 또는 가지상 부틸기 또는 펜틸기, 또는 페네틸기인 화합물군; R2는 수소원자, Boc'보호기로 치환되거나 비치환된 아민기로 치환된 C4-C6 저급알킬기, 벤질기, 또는 페네틸기인 화합물군; R3는 수소원자, 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1-C2 저급알킬기로 치환된 케톤기로 치환되거나 비치환된 쇄상 또는 가지상 부틸기 또는 펜틸기인 화합물군; R4는 수소원자, Boc'보호기 또는 벤질기로 치환되거나 비치환된 피페리딘, 피롤리딘, 피페라진, 피라졸, 또는 모르폴린으로 치환되거나 비치환된 C2-C6 저급알킬기, 또는 수소원자, 할로겐원자, 아민기 및 C1-C6 저급알킬기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 치환된 케톤기, 에스테르, 아미드기 또는 카르복 실기로 치환된 C2-C6 저급알킬기인 화합물.
  7. 제 6항에 있어서, (R)-1-(6-벤질-2-페네틸-8-티옥소-5,6,7,8-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-4(2H)-일)-2,2,2-트리플루오로에타논(LDD843), (R)-6-벤질-2-페네틸-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-티온(LDD847), (S)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-티옥소-2,4,5,6,7,8-헥사히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트(LDD1008), (S)-6-(4-아미노부틸)-2,4-디이소부틸-4,5,6,7-테트라히드로 피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8(2H)-티온(LDD998), (S,E)-테르트-부틸 3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노에이트(LDD1007), (S,E)-테르트-부틸 2-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)아세테이트(LDD1006), (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노익산(LDD997), (S,E)-3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노익산(LDD1005), (S,E)-에틸3-(6-(4-(테르트-부톡시카르보닐아미노)부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파노에이트(LDD1 004), (S,E)-테르트-부틸4-(8-(3-아미노-3-옥소프로필티오)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트(LDD1003), (S,E)-테르트-부틸 4-(8-(3-히드라지닐-3-옥소프로필티오)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸카르바메이트(LDD1002), (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로판히드라지드(LDD1001), (S,E)-3-(6-(4-아미노부틸)-2,4-디아이소부틸-2,4,5,6-테트라히드라피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일티오)프로파나미드(LDD1000), (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피페레딘-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD844), (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피롤리딘-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD845), (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(2-(피페라진-1-일)에틸)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD846), (R,E)-6-벤질-N-(2-몰포리노에틸)-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD848), (R,E)-6-벤질-N-메틸-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD849), (S)-테르트-부틸 3-((R,E)-6-벤질-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-일아미노)피롤리딘-1-칼복실레이트(LDD850), (R,E)-6-벤질-N-(1-벤질피페리딘-4-yl)-2-페네틸-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD854), (R,E)-6-벤질-2-페네틸-N-(피페리딘-4-일)-2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-8-아민(LDD1010), 또는 (S,E)-테르트-부틸 4-(2,4-디아이소부틸-8-(2-몰포리노에틸아미노)- 2,4,5,6-테트라히드로피라졸로[4,3-e][1,4]디아제핀-6-일)부틸칼바메이트(LDD1009).
  8. 제 1항에 기재된 일반식 (Ⅰ) 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 트란스글루타미나제에 대한 저해제.
  9. 제 1항에 기재된 일반식 (Ⅰ) 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 트란스글루타미나제 활성 증가로 기인한 질병의 치료 및 예방을 위한 약학 조성물.
  10. 제 9항에 있어서, 상기 트란스글루타미나제 활성 증가로 기인한 질병은 신경계 질환 또는 암인 약학 조성물.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 신경계 질환 또는 암, 보다 바람직하게는, 알츠하이머 질환, 다경색 치매, 알츠하이머 질환과 다경색 치매의 혼합형, 파킨슨씨 질환, 저갑상선증, 알코올성 치매 알츠하이머, 또는 헌팅턴 병과 같은 신경계 질환인 약 학 조성물.
  12. 제 10항에 있어서, 상기 암 질환은 대장암, 소장암, 직장암, 항문암, 식도암, 췌장암, 위암, 신장암, 자궁암, 유방암, 폐암, 임파선암, 갑상선암, 전립선암, 백혈병, 피부암, 결장암, 뇌종양, 방광암, 난소암, 또는 담낭암인 약학 조성물.
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