KR20100073275A - Cosmetics comprising cistanche tubulosa extract and method of making the same - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로, 특히, 천연식물 추출물을 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition, and more particularly, to a cosmetic composition having a natural plant extract.
본 발명은 항산화 효과 및 피부 세포에 대한 증식 촉진과 과산화물에 의한 피부세포 손상억제 효과, 콜라겐 생성 촉진 효과를 지니는 관화(Cistanche tubulosa) 추출물과 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 관화로부터 유기용매를 사용하여 추출한 항산화효과와 피부세포에 대한 증식 촉진과 과산화물에 대한 세포 보호 효과, 콜라겐 생성 촉진 효과가 있는 관화 추출물 및 그를 이용한 피부 보호 및 노화방지 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a mandarin ( cistanche tubulosa ) extract having an antioxidant effect, promoting the proliferation of skin cells, inhibiting skin cell damage caused by peroxides, and promoting the production of collagen, and a cosmetic composition containing the same. More specifically, the present invention is an antioxidant effect extracted from the mandarin using an organic solvent, and promotes proliferation for skin cells and cell protection against peroxides, mandarine extract having a collagen production promoting effect and skin protection and anti-aging cosmetics using the same It relates to a composition.
'관화'라고도 불리는 씨스탄체 튜부로사(Cistanche tubulosa)는 주로 중국의 신강성 위구르자치구 타쿠라마칸 사막이나 파키스탄에 분포하는 Hamauts과에 속하는 식물로서 두메오리나무(Tamaricus)의 뿌리에 기생한다. 주요 산지는 타쿠라마칸 사막의 남부에 있는 실크로드의 오아시스인 Hotan(和田)이며 Hotan은 위구르어로서 '들어가면 두 번 살아서 돌아오지 못 한다'라는 의미로 이 곳 사람들은 혹독한 환경에서 살아남기 위하여 씨스탄체 튜부로사를 생식하며 이것을 '사막 인삼'이라 부르며 귀중히 여겨 왔다. Cistanche tubulosa, also called 'mandarin', is a plant belonging to the Hamauts family in the Xinjiang Uygur Autonomous Region Takuramakan Desert or Pakistan, and lives in the roots of Tamaricus. Its main mountain is Hotan (和田), an oasis on the Silk Road in the southern part of the Takuramakan Desert. Hotan is a Uighur word meaning 'you can't come back alive twice when you enter.' Reproduction of tubulossa called this 'desert ginseng' and has been treasured.
씨스탄체 튜부로사는 자양강장, 발기 장애나 갱년기 장애의 예방과 개선, 뇌기능의 활성 및 치매의 예방 등에 효과가 있다고 알려져 있으며 주된 유효성분인 Acteoside, Echinacoside으로 알려져 있다.(무라오카 오사무 저, 실크로드 자생식물 관화의 건강생리활성 기능)Sistanze Tubulossa is known to be effective in nourishing tonic, preventing and improving erectile or menopausal disorders, activating brain function and preventing dementia, and is known as Acteoside and Echinacoside, the main active ingredients. Health and Physiological Activity of Native Plant Mandarins)
한편, 씨스탄체 튜부로사(Cistanche tubulosa)에 관한 연구로는 Haihui Xie 등의 "Monoterpeneconstituents from Cistanche tubulosa-Chemical structures of kankanosides A-E and kankanol"(Chem. Pharm. Bull. 54(5) 669-675, 2006), Chen M. 등의 "The determination of echinacoside and acteoside in herbs of Cistanche tubulosa"(Zhongguo Zhong Yao ZA Zhi. 30(11). 839-841, 2005), Song ZH. 등의 "Studies on chemical constituents of Cistanche tubulosa(Schenk)R. Wight"(Zhongguo Zhong Yao ZA Zhi. 25(12). 728-730, 2000) 등 씨스탄체 튜부로사의 성분에 관한 연구 및 Yoshikawa M. 등의 "Phenylethanoid oligoglycosides and acylated oligosugars with vasorelaxant activity from Cistanche tubulosa"(Bioorg Med Chem. 14(22). 7468-75, 2006) 등의 생리활성에 관한 연구가 진행되었다. Cistanche tubulosa , on the other hand, Haihui Xie et al "Monoterpeneconstituents from Cistanche tubulosa-Chemical structures of kankanosides AE and kankanol" (Chem. Pharm. Bull. 54 (5) 669-675, 2006 ), Chen M. et al., "The determination of echinacoside and acteoside in herbs of Cistanche tubulosa" (Zhongguo Zhong Yao ZA Zhi. 30 (11). 839-841, 2005), Song ZH. "Studies on chemical constituents of Cistanche tubulosa (Schenk) R. Wight" (Zhongguo Zhong Yao ZA Zhi. 25 (12). 728-730, 2000), etc. Biological activities such as "Phenylethanoid oligoglycosides and acylated oligosugars with vasorelaxant activity from Cistanche tubulosa" (Bioorg Med Chem. 14 (22). 7468-75, 2006) have been studied.
또한, "초본식물, 시스탄체 투부로사(스첸크) 위그트로부터 추출되는 페닐에타노이드 글리코시드를 함유하는 의약제제, 그것의 제조방법, 및 그것의 사용"(출 원인: 신파 파마세우티컬 코리미티드) 등 씨스탄체 튜브로사에 관련된 특허출원이 이루어졌으나 미용 및 피부, 피부질환과 관련된 연구는 이루어지지 않고 있다.In addition, "a pharmaceutical preparation containing a phenylethanoid glycoside extracted from a herbaceous plant, cystane tuburosa (Schenk) wig, a preparation method thereof, and use thereof" (Source: Sinpa Pharmaceutical Co. The patent application related to Sistanche tube rosa (Limited) has been filed, but there are no studies related to beauty, skin and skin diseases.
본 발명의 발명자들은 본 발명과 관련하여, 씨스탄체 튜브로사 원료(정확하게는 씨스탄체 튜부로사 스첸크 위그트의 다육질 줄기 분말)가 피부 및 피부 미용과 관련하여 갖는 효과를 여러 측면에서 고찰하기 위해 먼저 씨스탄체 튜브로사를 여러 조건으로 추출한 후, 각 추출물의 피부 관련 유용 효과를 DPPH법(1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl 용액을 이용한 항산화측정법), SOD(superoxide dismutase) 측정방법 등을 통해 확인하였으며,The inventors of the present invention, in connection with the present invention, in order to consider in various aspects the effect of Sistane tuberosa raw material (exactly fleshy stem powder of Sistane tuberosa Schenk Wig) in relation to skin and skin beauty First, the sistane tuberosa was extracted under various conditions, and the useful effects on the skin of each extract were confirmed by DPPH method (antioxidation method using 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl solution) and SOD (superoxide dismutase) measurement method.
본 발명은 그러한 확인 결과를 바탕으로 하여, 피부 보호 및 노화방지 효과를 가지는 화장료 조성물 및 그 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a cosmetic composition having a skin protection and anti-aging effect and a method for producing the same, based on such confirmation results.
본 발명은 씨스탄체 튜브로사(관화)로부터 추출한, 항산화 효과와 세포증식 촉진 효과 및 과산화물로부터의 피부세포 보호효과, 콜라겐 생성 촉진 효과가 있는 추출물이 포함된 화장료 조성물 및 그 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is an object of the present invention to provide a cosmetic composition comprising an extract having an antioxidant effect, a cell growth promoting effect, a skin cell protection effect from peroxides, and a collagen production promoting effect, extracted from cistane tuberosa (mandarine) and a method for producing the same. It is done.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 화장료 조성물은, 씨스탄체 튜부로사 추출물을 100㎍/㎖ 내지 10000㎍/㎖ 농도로 함유하며, 상기 추출물은 추출용매로서 물, 메탄올, 에탄올 각각 및 이들의 둘 이상의 혼합물로 이루어지는 집합 가운데 하나를 사용하여 얻은 추출물인 것을 특징으로 한다.The cosmetic composition of the present invention for achieving the above object, the sistanche tubulososa extract containing 100 ㎍ / ㎖ to 10000 ㎍ / ㎖ concentration, the extract is an extractant, each of water, methanol, ethanol and two of them Characterized in that the extract obtained by using one of the set consisting of the above mixture.
물을 추출용매로 사용하는 경우, 0.5 내지 10시간 동안 원료 물질인 씨스탄 체 튜부로사 중량의 3배 이상의 물에 넣어 100도씨 내지 110도씨로 가열하여 추출할 수 있다.When water is used as the extraction solvent, it can be extracted by heating to 100 degrees to 110 degrees Celsius in water at least three times the weight of Sistane Chetuburosa, the raw material for 0.5 to 10 hours.
에탄올이나 메탄올의 경우, 물이 10% 이하로 포함된 수용액을 사용할 수 있고, 원료의 중량의 3배 이상의 추출용매에 넣어 물과 달리 상온에서 충분한 시간, 가령, 1일 내지 10일 동안 추출을 진행할 수 있다. In the case of ethanol or methanol, an aqueous solution containing 10% or less of water may be used, and unlike water, extraction may be performed at room temperature for a sufficient time, for example, 1 to 10 days, unlike water. Can be.
본 발명의 화장료 조성물에서 추출용매는 매탄올 99% 이상 수용액으로 하는 것이 바람직하며, 씨스탄체 튜부로사 추출물을 중량 기준으로 10000㎍/㎖ 내지 100㎍/㎖ 포함하는 것이 바람직하다. 단, 이 범위 내에서도 1000㎍/㎖ 이상을 함유할 때에는 효과의 포화도를 보여 함량 대비 효과는 줄어들 수 있으므로 1000㎍/㎖ 이하로 포함하는 것이 효과적이며, 100㎍/㎖ 이하에서는 발명의 효과가 충분히 얻을 수 없다.In the cosmetic composition of the present invention, the extraction solvent is preferably 99% or more aqueous solution of methanol, and preferably 10000 µg / ml to 100 µg / ml based on the weight of Sistane tubulosae. However, even if it contains more than 1000 ㎍ / ㎖ within this range it is effective to include less than 1000 ㎍ / ㎖ because the effect can be reduced compared to the content saturation effect can be reduced, the effect of the invention is sufficiently obtained below 100 ㎍ / ㎖ Can't.
상기 목적을 달성하기 위한 씨스탄체 튜부로사의 추출 방법은,Sistanche tubulo Rosa extraction method for achieving the above object,
씨스탄체 튜부로사를 분쇄하여 원료물질을 준비하고 상기 원료물질의 중량의 3배에 해당하는 99% 이상 메탄올 수용액에 침지하는 침지 단계, 상온에서 상기 침지 단계의 결과물을 상온에서 3일 동안 진탕추출하는 공정을 3회 반복으로 진행하는 추출 단계,(결과적으로 3배양의 메탄올 수용액으로 3일 추출하고, 원료 물질인 씨스탄체 튜부로사를 다시 걸러서 별도의 3배양의 메탄올 수용액에 3일 침지하는 식으로 3회 반복함) 피추출된 원료물질을 여과를 통해 제거하고 메탄올 수용액을 증발시켜 건조된 고형물 상태의 추출물을 얻는 여과 건조 단계를 구비하여 이루어질 수 있다.Crushing sistane tubulosa to prepare a raw material and immersed in a 99% or more methanol aqueous solution corresponding to three times the weight of the raw material, the extraction of the result of the immersion step at room temperature for 3 days Extraction step of repeating the process three times, (As a result of extracting three days with aqueous methanol solution of three cultures, and again sifted sistane tubulosa raw material to three days immersed in a separate three cultures aqueous methanol solution Repeated three times) may be provided with a filter drying step of removing the extracted raw material through filtration and evaporated aqueous methanol solution to obtain an extract of the dried solid state.
본 발명에 따르면, 인간의 피부 세포를 이용한 검사 결과, 항산화 효과, 피부세포의 증식 촉진 및 세포보호, 콜라겐 생성 촉진에 효과를 가질 수 있음을 알 수 있다.According to the present invention, the test results using human skin cells, it can be seen that it may have an effect on the antioxidant effect, promoting the proliferation and protection of the skin cells, promoting collagen production.
본 발명 방법에 따르면, 항산화, 피부 노화방지와 관련된 효과를 가지는 추출물을 효과적으로 추출할 수 있다. According to the method of the present invention, an extract having an effect related to antioxidant and skin anti-aging can be effectively extracted.
이하 실시예와 비교예 및 실험예를 통해 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, Comparative Examples, and Experimental Examples.
먼저, 씨스탄체 튜부로사의 추출 방법의 실시예들을 통해 각각의 추출물을 얻고, 이들 추출물을 농도를 달리하면서 특정 효과에 대한 실험예를 통해 이들 추출물이 가지는 효과를 알아보고, 또한, 그 효과를 가지는 적정량 범위를 알아보기로 한다.First, obtain the respective extracts through the examples of the extraction method of Sistane tubulossa, and find out the effect of these extracts through experimental examples for specific effects while varying the concentration of these extracts, and also, the appropriate amount having the effect Let's find out the range.
효과에 대한 실험은 추출물에 대한 DPPH 항산화능을 조사하는 실험 1, 추출물을 SOD 측정용 kits를 이용하여 항산화능을 조사하는 실험 2, Human skin dermal fibroblast에 대한 세포 독성 및 증식 촉진 효과를 조사하는 실험 3, 용매별 추출물의 Hydrogen peroxide에 대한 세포 보호 효과를 조사하는 실험 4로 구성한다.Experiments to investigate the effects of DPPH antioxidant activity on the
추출방법에서, 추출용매를 사용할 때 시료 질량의 3배 미만으로 과소량을 사 용하면 추출물이 충분히 추출될 수 없고 20배 이상으로 너무 많으면 추출용매를 제거하고 건조 추출물을 얻는 데 시간과 비용이 많이 들게된다. 물의 경우, 추출 물질 종류가 충분히 포함되도록 하고, 추출 효율을 높이기 위해 가온된 상태로 추출을 행하는 것이 필요하며, 온도가 너무 낮으면 가온의 이점을 충분히 살리기 어렵고, 많은 시간을 추출해야 하며, 너무 높으면 유용물질의 분해가 생길 수 있으며, 100 내지 110도씨 정도로 가온이 이루어질 수 있다. 시간은 0.5시간 이하로 과소한 경우, 충분한 추출이 이루어질 수 없고, 10시간 이상으로 과다한 경우, 추출효율이 떨어지므로 공정이 비능률적이 된다. 추출용매로 메탄올이나 에탄올을 포함하는 경우, 상온에서 추출할 수 있으며, 분말상태의 시료를 충분한 시간, 가령 3일 정도의 시간 동안 충분한 추출용매에 침지하여 추출이 충분히 이루어지도록 하며, 추출이 충분하지 못한 경우, 반복 공정을 통해 추출량을 늘일 수도 있다. 추출이 진행되면, 다음으로 추출용매를 제거하기 위해 우선 회전 진공 증발기(rotary vacuum evaporator)로 추출물을 농축하고 이어서 동결 건조하는 방법을 사용할 수 있으며, 건조 전에는 여과를 통해 불순물을 걸러내는 과정이 먼저 이루어지는 것이 통상적이다.In the extraction method, when the extraction solvent is used in an amount of less than 3 times the mass of the sample, the extract cannot be extracted sufficiently, and when the extraction amount is too much, more than 20 times, it may be time and costly to remove the extraction solvent and obtain a dry extract. do. In the case of water, it is necessary to carry out the extraction in a heated state in order to sufficiently include the kinds of extracting substances, and to increase the extraction efficiency. If the temperature is too low, it is difficult to take full advantage of the warming, and the extraction time is too high. Decomposition of useful materials may occur, and may be heated to about 100 to 110 degrees Celsius. If the time is less than 0.5 hours, sufficient extraction cannot be achieved, and if the time is excessively more than 10 hours, the extraction efficiency is lowered, resulting in an inefficient process. When the extraction solvent contains methanol or ethanol, it can be extracted at room temperature, and the powdered sample is immersed in a sufficient extraction solvent for a sufficient time, for example, about 3 days, so that the extraction is sufficient, and the extraction is not sufficient. If not, it is possible to increase the extraction amount through an iterative process. When the extraction is progressed, the method of concentrating the extract first with a rotary vacuum evaporator and then freeze-drying to remove the extraction solvent may be performed. Is common.
(실시예 방법 1)(Example Method 1)
본 발명의 씨스탄체 튜부로사 추출방법으로서, 물을 추출용매로 이용하는 경우의 실시예로서, 우선, 씨스탄체 튜부로사의 물 추출물을 얻기 위해 씨스탄체 튜부로사 시료 0.1kg을 준비한다. 씨스탄체 튜부로사 시료를 중량대비 5배의 정제수 에 넣고 105도씨에서 5시간 가온 추출한 다. 추출공정이 종료되면 거름종이 (Whatman paper No. 1)로 걸르고, 다음으로 물을 제거하기 위해 우선 회전 진공 증발기(rotary vacuum evaporator)로 농축하고 이어서 동결 건조하는 방법을 사용하였다. 이로써, 씨스탄체 튜부로사 물 추출물 14.97g(건조중량)을 얻었다.As an example in the case of using the Sistane tuberusa extract of the present invention, when water is used as the extraction solvent, 0.1 kg of Sistane tuberosa sample is prepared in order to obtain the water extract of Sistane tuberosa. Sistane tuber Brosa samples are placed in purified water five times the weight and extracted at 105 degrees for 5 hours. At the end of the extraction process, the filter paper was filtered with Whatman paper No. 1, and then concentrated in a rotary vacuum evaporator to remove water, followed by freeze drying. This obtained 14.97 g (dry weight) of Sistane tuberosa water extract.
(실시예 방법 2)(Example method 2)
씨스탄체 튜부로사 시료 0.1kg에 대한 3배의 추출용매(95% 에탄올)을 가하여 상온에서 72시간동안 진탕추출하는 공정을 3회 진행한 뒤 추출액을 거름종이로 여과하여 회전 진공 증발기(rotary vacuum evaporator)로 농축하고 동결 건조하여 씨스탄체 튜부로사 에탄올 추출물 3.24g (건조중량)을 얻었다. Three times extraction process (95% ethanol) was added to 0.1 kg of Sistane tubulosa sample, followed by three times of shaking extraction at room temperature for 72 hours, followed by filtration of the extract with filter paper and a rotary vacuum evaporator. evaporator) and freeze-drying to obtain 3.24 g (dry weight) of cistane tubulo ethanol extract.
(실시예 방법 3)(Example Method 3)
씨스탄체 튜부로사 시료 0.1kg에 대한 3배의 추출용매(99.5% 메탄올)을 가하여 상온에서 72시간동안 진탕추출하는 공정을 3회 진행한 뒤 추출액을 거름종이로 여과하여 회전 진공 증발기(rotary vacuum evaporator)로 농축하고 동결 건조하여 씨스탄체 튜부로사 메탄올 추출물 20.53 g(건조중량)을 얻었다. Three times extraction process (99.5% methanol) was added to 0.1 kg of Sistane tubulosa sample, followed by three times of shaking extraction at room temperature for 72 hours, followed by filtration of the extract with filter paper and a rotary vacuum evaporator. Evaporator) and freeze-dried to give 20.53 g (dry weight) of the sistane tuberosa methanol extract.
(실험예 1)Experimental Example 1
상기 실시예 1, 2, 3의 방법으로 얻어진 각각의 추출물시료에 대한 세포 독성 및 증식 촉진 효과를 측정하였다.The cytotoxicity and growth promoting effects of the respective extract samples obtained by the methods of Examples 1, 2 and 3 were measured.
1-1. 실험 방법1-1. Experiment method
CCD-986sk 인간피부 섬유아세포(Human skin fibroblast)에 대한 세포독성 측 정은 소량의 세포의 생세포수를 측정하기 위한 방법으로 잘 알려진 염색법의 일종인 세포 독성도조사(MTT assay)를 실시하였다. MTT assay는 살아있는 세포들이 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-L-tetrazolium bromide, Sigma)를 미토콘드리아에 존재하는 탈수소효소의 환원작용으로 블루 포마잔 프로덕트(blue formazan product)로 전환시키고, 이 형성된 청색의 생성물을 용매(solvent)로 용출하여 이의 흡광도를 측정함으로서 살아있는 세포의 상대적 생장(growth)을 알아보는 방법이다. 보다 구체적으로, CCD-986sk(Human dermal skin fibroblast)을 10% FBS-IMDM(Iscove's Modified Dulbecco's Medium, Gibco)에 배양한 후, 이를 취하여 세포농도를 5×104cells/㎖로 조정한 세포액을 조제한 후, 이를 96well-plate에 200㎕씩 분주하고, 이를 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 배양시켰다. 24시간 배양 후, 배지를 제거한 후, 10% FBS-IMDM로 조제한 하기의 표1과 같은 농도별 추출물 200㎕과 FBS-free IMDM 180㎕를 다시 첨가하여 동일 조건에서 48시간 반응시켰다. 이 때 FBS-free IMDM만를 사용한 실험구를 시료의 대조구로 사용하였다. 반응 완료 3시간 전, 5㎎/㎖ MTT 용액(in 1× PBS(-))을 20㎕씩 첨가한 뒤, 다시 48시간까지 반응을 진행, 완료하였다. MTT 반응액을 제거한 후, DMSO(Dimethyl sulfoxide) 150㎕씩 첨가한 뒤 5분간 교반(상온)하고 이를 마이크로플레이트 계수기(microplate reader)를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. Cytotoxicity measurements on CCD-986sk human skin fibroblasts were performed by MTT assay, a well-known staining method for measuring viable cell numbers of small cells. MTT assay is a blue formazan product in which live cells reduce MTT (3- [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyl-L-tetrazolium bromide, Sigma) by dehydrogenase present in the mitochondria. It is a method of determining the relative growth of living cells by converting to (blue formazan product) and eluting the formed blue product with a solvent to measure its absorbance. More specifically, CCD-986sk (Human dermal skin fibroblast) incubated in 10% FBS-IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium, Gibco), and then taken to prepare a cell solution in which the cell concentration was adjusted to 5 × 10 4 cells / ml. Thereafter, 200 μl was dispensed into 96 well-plates, which were incubated for 24 hours in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator. After 24 hours of incubation, the medium was removed, and 200 μl of the extract according to the concentration of Table 1, prepared with 10% FBS-IMDM, and 180 μl of FBS-free IMDM were added thereto, and reacted under the same conditions for 48 hours. At this time, the experiment using only FBS-free IMDM was used as a control of the sample. 3 hours before the completion of the reaction, 20 μl of 5 mg / ml MTT solution (in 1 × PBS (−)) was added, followed by further reaction for 48 hours. After removing the MTT reaction solution, 150 μl of DMSO (dimethyl sulfoxide) was added thereto, followed by stirring for 5 minutes (room temperature), and the absorbance was measured at 570 nm using a microplate reader.
1-2. 실험 결과1-2. Experiment result
결과는 하기 표 1에 기재하고 도 1에 그래프로 도시하였다.The results are shown in Table 1 below and graphically shown in FIG. 1.
(㎍/㎖)sample
(Μg / ml)
상기 표 1 및 도 1에 나타난 바와 같이, 씨스탄체 튜부로사의 경우, 실시예 1, 2, 3 모두 최대농도 1,000㎍/㎖ 이하에서 세포독성을 나타내지 않았으며 오히려 실시예 1의 경우, 1,000㎍/㎖, 실시예 2, 3의 경우 250㎍/㎖~1,000㎍/㎖까지 농도의존적 세포 증식을 촉진시키는 결과를 나타내었다. 특히, 실시예 3의 메탄올 추출물의 경우 가장 높은 세포 증식 촉진 효과를 나타내어 비처리구인 대조구보다 약 50% 높은 활성을 나타내었다. As shown in Table 1 and FIG. 1, in the case of Sistane tubulo, Examples 1, 2, and 3 did not show cytotoxicity at the maximum concentration of 1,000 µg / ml or less, but in Example 1, 1,000 µg / In the case of ml, Examples 2 and 3 showed a result of promoting concentration-dependent cell proliferation from 250 µg / ml to 1,000 µg / ml. In particular, the methanol extract of Example 3 exhibited the highest cell proliferation promoting effect and showed about 50% higher activity than the control.
따라서, 씨스탄체 튜부로사 추출물은 세포 독성이 없으며 인체 피부 진피 섬유아세포에 대한 증식 촉진 효과를 나타냄을 알 수 있었다.Therefore, it was found that the sistanche tuburosa extract has no cytotoxicity and has a proliferation promoting effect on human dermal dermal fibroblasts.
이에 결과를 바탕으로 세포독성이 없으며 세포 증식을 촉진시키는 농도 내에서 항산화 및 세포 보호 효과, 주름개선효과를 살펴보기 위한 실험들을 진행하였다. Based on the results, experiments were conducted to examine the anti-oxidation, cell protective effect, and anti-wrinkle effect within the concentration which is not cytotoxic and promotes cell proliferation.
(실험예 2)Experimental Example 2
상기 실시예 1, 2, 3에 대한 항산화효과를 측정하였다. The antioxidant effects of Examples 1, 2, and 3 were measured.
2-1. 프리라디칼 소거능 측정2-1. Free radical scavenging capacity measurement
2-1-1. 실험방법2-1-1. Experiment method
시료에 대한 전자공여능(전자를 공급할 수 있는 능력) 측정은 다음과 같이 실시하였다. 각 추출물의 농도별 용액 100㎕에 5× 10-4M의 DPPH(1-1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) 100㎕를 넣고, 1분간 교반한 후, 25℃ 인큐베이터에서 30분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.The electron donating ability (the ability to supply electrons) for the sample was measured as follows. 100 μl of 5 × 10 −4 M of DPPH (1-1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl) was added to 100 μl of the concentration of each extract, stirred for 1 minute, and then reacted in a 25 ° C. incubator for 30 minutes. The absorbance was measured at 540 nm using a microplate counter.
실험 대조구로는 엘-아스코르빈산(1,000㎍/㎖)을 사용하였으며, 전자공여능은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.El-ascorbic acid (1,000µg / ml) was used as an experimental control, and the electron donating ability was expressed as the absorbance reduction rate of the sample solution added and the no added solution.
2-1-2. 실험 결과2-1-2. Experiment result
결과는 하기 표 2에 기재하고 도 2에 그래프로 도시하였다The results are shown in Table 2 below and graphically shown in FIG. 2.
(㎍/㎖)sample
(Μg / ml)
표 2 및 도 2에 나타난 바와 같이, 실시예 1, 2, 3 모두 높은 프리라디칼 소거능을 나타내었으며 특히, 실시예 3의 메탄올 추출물의 경우, 약 150㎍/㎖의 IC50을 나타내어 프리라디칼로 인한 세포 손상 및 피부노화 진행을 억제하는 효과를 나타내었다. 비교구인 엘-아스코르빈산(1,000㎍/㎖)의 경우, 95%의 소거능을 나타내었다.As shown in Table 2 and FIG. 2, Examples 1, 2, and 3 all exhibited high free radical scavenging ability. In particular, the methanol extract of Example 3 exhibited an IC 50 of about 150 µg / ml, It has been shown to inhibit cell damage and the progress of skin aging. The control group, L-ascorbic acid (1,000 μg / ml), exhibited 95% scavenging activity.
2-2. 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD; Superoxide dismutase) 유사활성 측정2-2. Superoxide dismutase (SOD) -like activity measurement
2-2-1. 실험 방법2-2-1. Experiment method
SOD 유사활성은 다음과 같이 실시하였다. 각 추출물 당 100ppm의 농도별 시료용액 20㎕에 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 분석 키트(SOD assay kit-WST) 내 더블류에스티 작업용액(WST working solution) 200㎕을 넣어 교반한 후, 다시 효소작업용액(Enzyme working solution) 20㎕를 넣어 혼합한 후, 37℃ 인큐베이터에서 20분간 반응시키고, 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. SOD-like activity was performed as follows. Into each extract of 20ppm concentration of 100ppm 200μl WST working solution in the superoxide dismutase assay kit (SOD assay kit-WST) was added and stirred, and again the enzyme working solution ( Enzyme working solution) 20 μl were mixed and reacted in a 37 ° C. incubator for 20 minutes, and the absorbance was measured at 450 nm using a microplate counter.
실험 대조구로는 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(Superoxide dismutase, 1,000units)을 사용하였으며, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 유사활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.Superoxide dismutase (1,000units) was used as the experimental control, and superoxide dismutase-like activity was expressed as the absorbance reduction rate of the sample solution added and the no added solution.
2-2-2. 실험 결과2-2-2. Experiment result
결과는 하기 표 3에 기재하고, 도 3에 그래프로 도시하였다.The results are shown in Table 3 below and graphically shown in FIG. 3.
(㎍/㎖)sample
(Μg / ml)
상기 표 3 및 도 3에 나타난 바와 같이, 실시예 1, 2, 3 모두 슈퍼옥사이드 디스큐타제 유사활성이 우수하으며, 특히, 실시예 3의 메탄올 추출물의 경우, 유사활성이 실시예 1, 2의 경우보다 낮은 농도에서 유지되는 우수한 결과를 나타내어 우수한 항산화 및 항노화 효과를 나타내었다. 비교구인 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(1,000units)의 경우, 99.5%의 활성을 나타내었다. As shown in Table 3 and FIG. 3, Examples 1, 2, and 3 are all excellent in the superoxide deskactase-like activity, in particular, in the case of the methanol extract of Example 3, the similar activity of Examples 1 and 2 It showed excellent results maintained at lower concentrations than the case, showing excellent antioxidant and anti-aging effects. In comparison, the superoxide dismutase (1,000 units) showed 99.5% of activity.
(실험예 3)Experimental Example 3
상기 실시예 1, 2, 3에 대한 세포 보호 효과를 측정하였다. The cell protective effect of Examples 1, 2, and 3 was measured.
3-1. 실험 방법3-1. Experiment method
과산화물에 의한 CCD-986sk(Human skin dermal fibroblast)의 손상을 억제하는 효과를 측정하기 위해 다음과 같이 실시하였다. 즉, CCD-986sk(Human dermal skin fibroblast)을 10% FBS-IMDM에 배양한 후, 이를 취하여 세포농도를 2.0× 105cell/㎖로 조정한 세포액을 조제한 후, 이를 96well-plate에 200㎕씩 분주하고, 이를 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 배양시켰다.In order to measure the effect of inhibiting the damage of CCD-986sk (Human skin dermal fibroblast) by the peroxide was carried out as follows. That is, after incubating the CCD-986sk (Human dermal skin fibroblast) in 10% FBS-IMDM, the cell solution was adjusted to adjust the cell concentration to 2.0 × 10 5 cell / ml, and then 200 μl each on a 96well plate. Aliquots were incubated for 24 hours in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator.
24시간 배양 후, 배지를 제거한 후, Earle' solution(0.12M NaCl, 5mM KCl, 0.83mM MgSO4·7H2O, 5.5mM glucose, 1.8mM CaCl2, 1mM NaH2PO4·2H2O, 26.2mM NaHCO3 in D.W) 내의 1.5mM H2O2 용액으로 조제한 추출물 200㎕을 다시 첨가하여 동일 조건에서 90분간 반응시켰다. 이 때 Earle' solution 만을 사용하여 제조한 실험구를 대조구로 사용하였다.After incubation for 24 hours, after removing the medium, Earle 'solution (0.12M NaCl, 5mM KCl, 0.83mM MgSO 4 · 7H 2 O, 5.5mM glucose, 1.8mM CaCl 2 , 1mM NaH 2 PO 4 · 2H 2 O, 26.2 200 μl of the extract prepared with 1.5 mM H 2 O 2 solution in mM NaHCO 3 in DW) was added again, and the reaction was carried out for 90 minutes under the same conditions. At this time, the experimental sphere prepared using only Earle 'solution was used as a control.
90분간 반응시킨 후, 배지 및 용액을 제거하고, 50㎍/㎖ 중성적색소(Neutral Red in 10% FBS-IMDM)를 200㎕씩 넣은 후, 37℃ 인큐베이터에서 2시간 반응시켰다. After reacting for 90 minutes, the medium and the solution were removed, 200 μl of 50 μg / ml neutral red (Neutral Red in 10% FBS-IMDM) was added thereto, and the reaction was carried out for 2 hours in a 37 ° C. incubator.
중성적색소 반응용액을 제거한 후, 1% CaCl2, 1% 포름알데히드(in D.W) 용액을 100㎕씩 넣고, 1분간 교반시킨 후, 용액을 제거하고, 이에 1% 아세트산, 50% 에탄올(in D.W)을 다시 100㎕씩 넣고, 15분간 교반시킨 후, 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였다.After removing the neutral red reaction solution, 100 μl of 1% CaCl 2 , 1% formaldehyde (in DW) solution was added thereto, and stirred for 1 minute, and then the solution was removed. Thus, 1% acetic acid and 50% ethanol (in DW) were added. ) Was added again to 100 µl and stirred for 15 minutes, and then the absorbance was measured at 570 nm using a microplate counter.
3-2. 실험 결과3-2. Experiment result
결과는 하기 표 4에 기재하고, 도 4에 그래프로 도시하였다.The results are shown in Table 4 below and graphically shown in FIG. 4.
(㎍/㎖)sample
(Μg / ml)
상기 표 4 및 도 4에 나타난 바와 같이, 실시예 1, 2의 경우는 과산화물에 의한 세포손상을 억제하는 효과를 보이지 못하였으나 실시예 3의 메탄올 추출물의 경우, 농도의존적인 세포보호효과를 보였으며 500㎍/㎖, 1,000㎍/㎖의 농도에서 약 200%의 세포보호효과를 나타내었다. As shown in Table 4 and Figure 4, in the case of Examples 1 and 2 did not show the effect of inhibiting the cell damage caused by the peroxide, but the methanol extract of Example 3, showed a concentration-dependent cytoprotective effect It showed a cytoprotective effect of about 200% at concentrations of 500 μg / ml and 1,000 μg / ml.
(실험예 4)Experimental Example 4
상기 실시예 1, 2, 3에 대한 콜라겐 생성 촉진 효과를 측정하였다. The collagen production promoting effect of Examples 1, 2, and 3 was measured.
4-1. 실험 방법4-1. Experiment method
CCD-986sk(Human skin dermal fibroblast) 내 콜라겐 생성 촉진 효과를 측정하기 위해 SIRCOL collagen assay(Biocolor Ltd)를 이용하여 다음과 같이 실시하였다. 즉, CCD-986sk(Human dermal skin fibroblast)을 10% FBS-IMDM에 배양한 후, 이를 취하여 세포농도를 1.5× 105cell/㎖로 조정한 세포액을 조제한 후, 이를 35× 10㎜ plate에 2㎖씩 분주하고, 이를 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 배양시켰다.In order to measure the collagen production promoting effect in the CCD-986sk (Human skin dermal fibroblast) was carried out using the SIRCOL collagen assay (Biocolor Ltd) as follows. That is, after incubating the CCD-986sk (Human dermal skin fibroblast) in 10% FBS-IMDM, the cell solution was prepared by adjusting the cell concentration to 1.5 × 10 5 cell / ㎖, and then 2 on a 35 × 10 mm plate Aliquots were dispensed and incubated for 24 hours in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator.
24시간 배양 후, 배지를 제거하고 새로운 10% FBS-IMDM 1㎖을 넣은 뒤 농도별로 준비한 시료를 다시 1㎖씩 넣고 동일조건에서 다시 24시간동안 배양시켰다. 24시간 배양 후, 각 plate로부터 배양액 0.5㎖씩 취하여 마이크로튜브(Microtube)로 옮기고 DYE Reagent(SIRCOL collagen assay, Biocolor Ltd) 1㎖를 첨가하였다. 이를 상온에서 30분간 교반시킨 뒤, 원심분리(15,000rpm, 5분)하여 상등액인 DYE Reagent를 완전히 제거하였다. 이에 다시 ALKALI Reagent(SIRCOL collagen assay, Biocolor Ltd) 0.1㎖을 첨가하여 5분간 교반한 뒤 이를 96well microplate로 옮겨 마이크로플레이트 계수기를 이용하여 540㎚에서 흡광도를 측정하였다. 실험 대조구로는 엘-아스코르빈산(100㎍/㎖)을 사용하였으며, 콜라겐 생합성 촉진효과는 시료용액의 첨가구의 무첨가구 대비 흡광도 증가율로 나타내었다. After incubation for 24 hours, the medium was removed, 1 ml of fresh 10% FBS-IMDM was added, and then, 1 ml of each sample prepared for each concentration was added, and cultured again for 24 hours under the same conditions. After incubation for 24 hours, 0.5 ml of the culture solution was taken from each plate, transferred to a microtube, and 1 ml of DYE Reagent (SIRCOL collagen assay, Biocolor Ltd) was added. After stirring for 30 minutes at room temperature, centrifugation (15,000rpm, 5 minutes) to completely remove the supernatant DYE Reagent. 0.1 ml of ALKALI Reagent (SIRCOL collagen assay, Biocolor Ltd) was added thereto, stirred for 5 minutes, and then transferred to a 96well microplate to measure absorbance at 540 nm using a microplate counter. El-ascorbic acid (100 ㎍ / ㎖) was used as an experimental control, collagen biosynthesis promoting effect was expressed as the increase in absorbance compared to the non-added group of the addition of the sample solution.
4-2. 실험 결과4-2. Experiment result
결과는 하기 표 5에 기재하고, 도 5에 그래프로 도시하였다.The results are shown in Table 5 below and graphically shown in FIG. 5.
상기 표 5 및 도 5에 나타난 바와 같이, 실시예 1, 2의 경우는 피부 진피 섬유아세포 내 콜라겐 생합성에 관여하지 않았으나 실시예 3의 메탄올 추출물의 경우, 농도의존적인 콜라겐 생합성 촉진 효과를 보였으며 100㎍/㎖에서 약 26%, 1,000㎍/㎖ 농도에서 약 55%의 콜라겐 생합성 촉진 효과를 보였다. 비교구인 엘-아스코르빈산(100㎍/㎖)의 경우, 100%의 촉진효과를 나타내었다.As shown in Table 5 and Figure 5, Examples 1 and 2 did not participate in collagen biosynthesis in dermal dermal fibroblasts, but methanol extract of Example 3 showed a concentration-dependent collagen
실험예를 보면 1000㎍/㎖ 이상 구간에서는 대부분의 특성이 우수한 것으로 나타나며, 특히 실시예 방법 3의 경우, 다른 실시예 방법들과 달리 실험예들에서 특히 1000㎍/㎖ 내지 100㎍/㎖의 농도를 가지는 구간에서 다른 추출방법에서는 효가가 유의적으로 크지 않은 부분에서도 높은 효과를 나타내고 있으며(실험예 3, 실험예 4), 실험예 2에서는 1000㎍/㎖ 내지 100㎍/㎖의 농도 구간에서 다른 실시예 방법에 의한 추출물을 사용한 경우와 비교할 때, 다른 실시예 방법에 의한 경우, 추출물 양이 줄면서 비례적으로 효과 줄어듦에 비해 실시예 방법 3에서는 효과가 상당부분 유지되는 것을 볼 수 있어 적은 추출물 양으로 탁월한 효과를 보임을 알 수 있었다. 특히 실시예 방법 3의 경우, 1000㎍/㎖ 이상 구간에서는 효과가 포화되는 것도 판단될 수 있어 1000㎍/㎖ 내지 100㎍/㎖의 농도를 가지는 구간은 다른 실시예 방법에 의한 추출물보다 효과의 이점을 가질 수 있었다. The experimental example shows that most of the characteristics are excellent in the interval of 1000 µg / ml or more, in particular, in the case of Example 3, unlike the other Examples, the concentration of 1000 µg / ml to 100 µg / ml The other extraction method in the section having a high effect even in the portion where the effect is not significant (Experimental Example 3, Experimental Example 4), Experimental Example 2 in the concentration range of 1000㎍ / ㎖ to 100㎍ / ㎖ Compared to the case of using the extract according to the example method, compared to the case of using the other example method, the effect is maintained in Example 3, while the amount of extract decreases proportionally, the effect is maintained in a significant amount. It was found that the effect was excellent in the amount. In particular, in the case of Example 3, it can be determined that the effect is saturated in a section of 1000 µg / ml or more, so that the section having a concentration of 1000 µg / ml to 100 µg / ml has an advantage of the effect than the extract of the other Example method. Could have.
이하는 각 화장품 제형에 있어서 씨스탄체 튜부로사 추출물을 함유하여 피부내 활성 산소를 제거하고 세포 손상 물질로부터 피부를 보호하는 효과를 나타내며 피부세포의 증식을 촉진시켜 콜라겐 생합성을 향상시키는 효과를 통하여 피부보호 및 노화방지 효과를 갖는 제형으로서의 화장료 조성물의 실시예를 보여주며 처방은 다음과 같다. 여기에 사용된 씨스탄체 튜부로사 추출물은 항산화 및 피부세포 증식 촉진 효과와 세포 보호 효과, 콜라겐 생성 촉진 효과가 가장 우수한 실시예 방법 3의 것이다. Each cosmetic formulation contains cistane tubulososa extract, which removes free radicals in the skin, protects the skin from cell damage, and promotes the proliferation of skin cells to improve collagen biosynthesis. An embodiment of a cosmetic composition as a formulation having a protective and anti-aging effect is shown and the prescription is as follows. The sistanche tuburosa extract used herein is that of Example 3, which has the most antioxidant and skin cell proliferation promoting effect, cell protective effect, and collagen production promoting effect.
(실시예 조성물 1)
본 발명에 따른 씨스탄체 튜부로사 추출물을 함유한 화장료 중 유연화장수의 처방 예는 다음 표6과 같다.Formulation examples of the flexible cosmetic water in the cosmetic containing cistane tubulosa extract according to the present invention is shown in Table 6.
(실시예 조성물 2)Example Composition 2
본 발명에 따른 씨스탄체 튜부로사 추출물을 함유한 화장료 중 영양화장수의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of nutrient cosmetic water in the cosmetic containing cistane tubulosa extract according to the present invention is as follows.
(실시예 조성물 3)Example Composition 3
본 발명에 따른 씨스탄체 튜부로사 추출물을 함유한 화장료 중 영양에센스의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of nutritional essence in cosmetics containing the sistanche tuburosa extract according to the present invention is as follows.
(실시예 조성물 4)Example Composition 4
본 발명에 따른 씨스탄체 튜부로사 추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of nutritional cream in the cosmetic containing cistane tubulosa extract according to the present invention is as follows.
(실시예 조성물 5)
본 발명에 따른 씨스탄체 튜부로사 추출물을 함유한 화장료 중 바디크림의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of the body cream of the cosmetic containing cistane tubulosa extract according to the present invention is as follows.
(실시예 조성물 6)Example Composition 6
본 발명에 따른 씨스탄체 튜부로사 추출물을 함유한 화장료 중 팩의 처방예는 다음과 같다.Prescription example of the pack of the cosmetic containing cistane tubulosa extract according to the present invention is as follows.
이상 실시예 및 실험예에서 확인된 바와 같이, 본 발명에 따른 씨스탄체 튜부로사 추출물은 우수한 항산화효과 및 피부세포의 증식 촉진과 세포보호 효과, 콜라겐 생합성 촉진 효과를 지니고 있으며, 본 발명의 추출물을 첨가하여 제조한 화장료 조성물 역시 항산화 및 항노화, 피부보호 효과를 가진다. As confirmed in the above Examples and Experimental Examples, the sistanche tuburosa extract according to the present invention has an excellent antioxidant effect, promoting the proliferation and cytoprotective effect of the skin cells, promoting collagen biosynthesis, the extract of the present invention Cosmetic compositions prepared by addition also have antioxidant and anti-aging and skin protection effects.
따라서 본 발명에 의하면 산화를 억제하여 피부 세포의 손상 및 노화를 예방하는 씨스탄체 튜부로사 추출물과 이를 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 효과가 있다.Therefore, according to the present invention, there is an effect of providing a sistanche tubulosa extract and a cosmetic composition comprising the same, which inhibits oxidation to prevent skin cell damage and aging.
여기서는 본 발명의 구체적인 방법을 실시 예를 들어 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 권리범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다. Here, the specific method of the present invention will be described in detail with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited only to these Examples.
도1은 본 발명의 실시예 방법 1 내지 3에서 얻은 씨스탄체 튜부로사 추출물을 농도별로 바꾸어가면서 독성 및 세포증식 효과를 실험한 결과를 나타내는 그래프이다.Figure 1 is a graph showing the results of experiments on the toxicity and cell proliferation effect while varying the concentration of sistanche tuburosa extract obtained in Examples 1 to 3 of the present invention.
도2는 본 발명의 실시예 방법 1 내지 3에서 얻은 씨스탄체 튜부로사 추출물을 농도별로 바꾸어가면서 프리라디칼 소거능을 통해 항산화효과를 실험한 결과를 나타내는 그래프이다.Figure 2 is a graph showing the results of experiments on the antioxidant effect of free radical scavenging ability while varying the concentration of Sistane tubulosa extract obtained in Examples 1 to 3 of the present invention.
도3은 본 발명의 실시예 방법 1 내지 3에서 얻은 씨스탄체 튜부로사 추출물을 농도별로 바꾸어가면서 SOD 유사활성 측정을 통해 항산화효과를 실험한 결과를 나타내는 그래프이다.Figure 3 is a graph showing the results of testing the antioxidant effect through the measurement of SOD-like activity by varying the concentration of sistane tubulosa extract obtained in Examples 1 to 3 of the present invention.
도4는 본 발명의 실시예 방법 1 내지 3에서 얻은 씨스탄체 튜부로사 추출물을 농도별로 바꾸어가면서 세포보호효과를 실험한 결과를 나타내는 그래프이다.Figure 4 is a graph showing the results of experiments on the cytoprotective effect while varying the concentration of sistane tubulo Rosa extract obtained in Examples 1 to 3 of the present invention.
도5는 실시예 방법 1 내지 3에서 얻은 씨스탄체 튜부로사 추출물을 농도별로 바꾸어가면서 콜라게 생성 촉진효과를 실험한 결과를 나타내는 그래프이다.Figure 5 is a graph showing the results of experiments to promote the collagenase production by changing the sistanche tuburosa extract obtained in Examples 1 to 3 by concentration.
Claims (5)
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