KR20100044261A

KR20100044261A - Ｇ-ｃｓｆ의 액상 조성물

Info

Publication number: KR20100044261A
Application number: KR20107005783A
Authority: KR
Inventors: 월터 힌더럴; 하인즈 루베나우
Original assignee: 바이오제너릭스 에이지
Priority date: 2007-08-27
Filing date: 2008-08-27
Publication date: 2010-04-29
Also published as: EP2076243A1; CY1115815T1; EP2076243B1; US9468685B2; CN101795670A; ES2524454T3; EP2471510A1; BRPI0815280A2; AU2008291309A1; DK2076243T3; US20150125420A1; PL2076243T3; US20140030214A1; IL204118A; US8562967B2; JP2015038111A; HRP20141217T1; SI2076243T1; CA2697376A1; PT2076243E

Abstract

본 발명은 장시간 기간 동안 안정하며 주로 첨가제들이 없는 G-CSF의 약학 액상 조성물들뿐만 아니라 그런 조성물들 및 상응하는 키트들이 들어있는 즉시 사용 가능한 주사기들을 제공한다.

Description

Ｇ-ＣＳＦ의 액상 조성물{Liquid formulation of G-CSF}

본 발명의 목적은, 주로 G-CSF와 당 알코올로 이루어지는 안정한 G-CSF의 액상 수용액 조성물들, 계면 활성제, pH 값이 약 4.1에서 4.4 사이인 완충 물질, 및 선택적으로 또한 아미노산들 및/또는 글리세롤 및/또는 탄수화물들 및/또는 방부제들에 관한 것이다.

단백질 물질들에 대해 지금까지 알려진 많은 의약품 형태들은 약점들을 가지고 있다. 예를 들어, 어떤 제제들에는 약학 첨가물들 또는 의학적인 관점에서 손쉽게 무해한 것으로 분류될 수 없는 첨가제들이 들어 있다. 그들의 기원과 물리 화학적인 속성들 때문에, 중합체들 및 단백질들은 약학 첨가물들로서 그들의 적합성에 대하여 어떤 위험 가능성을 감당한다. 인간 또는 동물 기원의 단백질들뿐만 아니라 세포배양들에 의해 얻은 단백질들은 바이러스 오염들의 잠재적인 잔류 위험을 감당한다. 그들의 항원 속성들 때문에, 분석적으로 발견하기 어려운 단백질과 비슷한 다른 오염들은, 또한 인간들 내에서 면역학적 반응들을 촉발시킬 수 있다. 게다가, 동물 기원 단백질들은 대개 그들의 종 특유의 속성들 때문에 인간들 내에서 면역학적 반응들을 촉발시킬 수 있다. 나중 시점에 맞추어 그런 단백질들의 재적용에 대한 장기적인 반응들 또한 가능하다.

높은 분자량을 가지고 있는 화합물들의 혼합물은 또한 문제가 있을 수 있다. 중합체들은 그들의 높은 분자량 때문에 체내에 축적될 수 있으며, 그 때문에 생분해가 없는 경우에 체내에 장시간 남아있을 수 있다. 이것은 특히 피하용인 경우에, 혈액 순환을 통한 제거 및 분배가 정맥용과 비교했을 때 훨씬 더 지연되기 때문에, 우려된다. 몰 질량에 따라, 중합체들은 또한 항원 속성들을 가질 수 있다. 더욱이, 생산에 사용되는 촉매들 또는 단량체들 및 다른 중합체 조각들의 존재 때문에 중합체들의 순도는 보장하기 어렵다. 액상 약학 의약품 형태들에서 중합체들의 사용은 따라서 가능한 한 피하게 되며, 특히 피하용 의약품 형태들에서 그러하다.

더욱이, 특히 글리코실화되지 않은 G-CSF의 형태들이, CHO 세포들로부터 얻는 글리코실화된 G-CSF와 비교했을 때, 산화 및/또는 집합 때문에 극히 불안정하다는 것은 문헌으로부터 알려져 있다. 그러므로 글리코실화되지 않은 G-CSF의 형태들을 안정시키는 것은 극히 어려우며 상기 분자를 안정한 의약품 형태로 만들어 내기 위해서 특별히 선택된 조치들이 요구된다.

G-CSF를 안정시키기 위한 계면 활성제들의 사용은 상기 계면 활성제들이 국소 자극들을 촉발시킬 수 있기 때문에 의학적인 관점에서 주로 피하게 된다. 매우 낮은 pH 값을 가지고 있는 조성물들은, 특히 피하용인 경우에, 또한 환자들에게 국소 부적합성들을, 예를 들어 통증 및 국소 조직 자극을 야기할 수 있으며, 상기 pH 값은 pH 7.0에서 7.5까지 조직 안에 존재하는 생리학의 범위 아래에 위치해 있다.

최근에 발행된 국제 출원 WO 2005/042024는, EP 373 679의 가르침들과 유사하게, 상기 구성들, 그 중에서도, 계면활성제가 없는 그리고, 실시예에 기술된 구성들에 부합되게 유지함으로써, 매우 낮은 농도의 완충제를 제공함으로써, G-CSF의 안정한 약학 구성들을 얻는 방법을 가르친다. 그 안에 기술된 의약들의 수용성에 대하여 아무런 암시들이 주어지지 않았다.

유럽 특허 출원 EP 1 129 720에서, 5에서 8 사이의 pH 값을 가지고 있는 G-CSF의 제제들이 기술되었으며, 여기에서 황산염은 제제 안에 들어있는 G-CSF를 안정시키기로 되어있다. 다시, 그 안에 기술된 G-CSF 제제들의 수용성에 대하여 아무런 암시들이 주어지지 않았다.

본 발명의 근본적인 문제는 위에 기술한 지금까지 알려진 의약품 형태들의 약점들을 보이지 않는 G-CSF에 관한 액상 의약품 형태를 제공하는 것이다. 특히, 조제 약품용 물질은 장시간 기간 동안 안정하여야 할 뿐만 아니라 생리학적으로 허용되어야 한다. 그것은 특히 환자들에 의한 자기 적용에 대해 적합하여야 하며 주사 또는 주입을 통한 의약들의 자기 적용과 함께 자주 발생하는 피부의 원하지 않는 자극들과 주사 부위에서의 통증을 피하는 능력에 의해서 특징지어져야 한다.

이 문제는 특허청구범위에서 특징지어진 실시예들에 의해서 해결될 수 있으며 아래의 실시예들에서 보여지고 있다. 특히, 본 발명은 주로 G-CSF와 당 알코올로 이루어지는 안정한 G-CSF의 액상 수용액 조성물들, 농도가 약 0.04에서 0.06 mg/ml 사이인 계면 활성제, pH 값이 약 4.1에서 4.4 사이인 완충 물질로서 농도가 약 5에서 20 mM 사이인 아세테이트에 관한 것이다. 선택적으로, 아미노산들 및/또는 글리세롤 및/또는 탄수화물들 및/또는 방부제들이 사용될 수 있다. 더욱이, 본 발명에 따른 액상 조성물은 약학적으로 전통적인 첨가제들을 더 포함할 수 있다. 그러나 상기 및/또는 다른 첨가제들의 부재가 선호된다.

국제 출원 WO 94/14466에서, 전반적으로, 저장이 안정한 G-CSF의 수성 조제 약품용 물질들이 청구되어 있으며 그 물질들은 다른 완충 시스템들을 써서 3.5에서 5 사이 및 7에서 8 사이의 pH 값 범위 내에서 안정하기로 되어있다. 그러나, 오직 인산염 완충제가 포함된 액상 G-CSF 제제들만이 그들의 저장 안정성에 대해 테스트 되었으며, 반면에 다른 완충제들이 포함된 개별적인 실험의 제제들은 짧은 기계적 스트레스, 즉 샘플들에서의 혼란들의 발생에 관한 탁도 이후에야 테스트 되었다.

본 발명의 범위 안에서 행한 실험들의 공정에 있어서, WO 94/14466의 실시예들, 특히 10 mM 아세테이트 및 4.5의 pH 값을 가지는 조성물 4에서 아세테이트 완충제와 함께 제시된 G-CSF 용액들이, 집합들의 존재에 대한 임계값들과 G-CSF의 산화된 형태들이 이미 결정되었기 때문에, 원하는 안정성을 가지지 못한다는 것은 평가되어야 한다. 그래서, EP 0 373 679에 이미 제시된, 4.0 이상의 pH 값은 집합들의 형성을 야기한다는 점과 생리학적 수용성이 개선된 pH 값을 가지고 있는 G-CSF 액상 조성물은 그 이외에 선호되는 아세테이트 완충제 시스템의 사용으로써 성취될 수 없다는 점이 처음으로 추정된다.

국제 출원 WO 2005/039620에서, 0.6 mg/ml G-CSF, 10 mM 아세테이트 완충제, 0.004 %(w/v) Tween 80 및 pH 값이 4.0 및 4.2인 5 %(w/v) D-소르비톨의 구성을 가진 G-CSF 액상 조성물들이, 기계적인 스트레스 충격 아래의 그리고 그 이후에 5.0의 pH 값 및 0.02 %(w/v) Tween 20 을 가진 숙신산 완충제와 함께 G-CSF 조성물들을 얼리고 녹인 G-CSF 조성물들의 안정성에 관한 연구들에서, 비교 조성물들로서 사용되었다. 이 연구들에 따르면, 아세테이트 완충제를 가진 G-CSF 조성물들은 덜 안정적이었으며, 그래서 그런 아세테이트 완충제를 가진 구성들은 후보 의약들로 고려하는 것은 고사하고 더 나아간 연구에서 눈에 띄게 나타나지 않았다.

그것과는 대조적으로, 본 발명의 범위 안에서 행한 실험들의 공정에 있어서, 냉장고 안 저장 온도들 및 40 ℃, 즉 체온 범위 안에서의 안정성과 관련하여, pH > 4.0인 아세테이트 완충제를 가진 G-CSF 조성물들의 이로운 속성들이 놀랍게도 발견되었을 뿐만 아니라, 놀랍게도 환자들에서 좋은 수용성을 보여, 상업적으로 이용할 수 있는 의약들과 비교하였을 때 더 적은 피부 자극들이 발생했다.

특히, 본 발명의 관점에서, 아세트산과 아세테이트를 결합함으로써, 각각, 완충 물질 및 폴리소르베이트 80과 같은 계면 활성제로서, 각자 특정한 농도를 가지며 소르비톨과 같은 당 알코올의 존재하에서, pH 값을 약 4.2±0.15로 조정함으로써, 의약으로서 그들의 적합성에 대해 요구되는 안정성을 G-CSF 분자들에게 전달하는, 잘 견딜 수 있고 의약을 투여할 때 주사 부위에서 종종 발견될 수 있는 증상들의 거의 완벽한 예방을 추가적으로 가능하게 하는, 안정한 G-CSF의 액상 조성물이 얻어진다는 점이 나타났다. 이것은 본 발명에 따른 G-CSF 액상 조성물들을 그것과 함께 제공되는 즉시 사용 가능한 주사기들 및 키트들의 사용에 대해, 특히 가정용에 대해 적합하고 이롭게 만든다.

본 발명에 따른 액상 조성물들은 사용이 의학적인 관점에서 문제가 있을 수 있는, 단백질과 같은 또는 중합체 첨가제들이 가급적이면 없다는 이점을 더 가지고 있다. 실시예들에 제시된 임상 연구들에서 나타난 것처럼, 그들은 주로 통증이 없는 방식에서 잘 용인되고 적용되는 이점을 더 가지고 있다. 게다가, 본 발명에 따른 G-CSF 액상 조성물은 가급적으로 혈청 알부민과 같은 아미노산들 및/또는 추가 단백질들이 없다. 한 실시예에서, 본 발명에 따른 액상 조성물은 메티오닌이 없다.

생화학 실험들 및 임상 연구들에서 특정한 농도 범위에서의 완충 물질의 선택 및 당 알코올의 존재 때문에 약 0.04에서 0.06 mg/ml 사이의 계면 활성제의 작은 양들이 한편으로는 G-CSF를 안정시키기에 충분하지만 다른 한편으로는 환자에게 상당한 피부 자극들 또는 다른 부적합성들을 촉발시키지 않는다는 것이 밝혀졌다는 이점이 더 있다. 이것은 특히 피하용을 위한 그런 액상 의약품 형태들에 있어서 이점이 된다. 게다가, 본 발명에 따른 조치들로써, 특히 불안정한, 글리코실화되지 않은 G-CSF 분자들은 약학의 구성들을 위해서 충분히 안정화되어있다. 첨가제들의 목표로 삼는 선택은 단백질 안정성 면에서 양질의 제제들이며 즉시 사용 가능한 주사 또는 주입 용액들로서 특히 적합한 매우 잘 용인되는 G-CSF를 포함하는 액상 의약품 형태들을 전적으로 제공한다.

본 발명에 따른 액상 조성물들에서, 0.05에서 0.06 mg/ml 사이의 계면 활성제의 양들이, 특히 선호되는 약 0.06 mg/ml가 사용될 것이다. 사용되는 계면 활성제는 가급적이면 폴리소르베이트, 특히 가급적이면 Tween 80^ⓒ으로 또한 알려진 폴리소르베이트 80이다.

본 발명에 따른 G-CSF를 포함하는 의약품 형태들은 치료상 효과를 성취하는데 충분한 양의 물질을 포함한다. 보통, 0.01에서 5 mg/ml 사이인 물질 농도들이 사용되며, 가급적이면 0.1에서 1 mg/ml, 0.3에서 0.8 mg/ml, 그리고 특히 선호되는 약 0.6 mg/ml의 농도가 사용된다. 특히 피하용의 경우에, 0.3 mg/0.5 ml 및 0.48 mg/0.8 ml의 복용량들이 특히 더 좋은 것으로 밝혀졌다.

본 발명에 따르면, 아세트산은 완충 물질로서 이용되었다. 본 발명에 따른 액상 조성물의 제제에서, 완충 물질은 유리산의 형태로 제공된다. 용액의 바람직한 pH 값이, 예를 들면 알칼리 수산화물들, 토류 알칼리 수산화물들 또는 수산화 암모늄과 같은 염기들의 추가에 의해서 조정되었다. 이 목적을 위해서, 수산화나트륨의 사용이 선호된다.

즉시 사용 가능한 액상 의약품 형태에서 완충 물질 아세트산의 농도들은 5에서 20 mMol/l 사이이다. 단순화 때문에, 상기 산, 즉 아세테이트의 음이온 농도들은 이하에 언급될 것이다. 용어 아세테이트는 또한 해리되지 않은 아세트산을 포함하는 것으로 의도되었다. 가급적이면, 이하의 완충제 농도들 및 pH 값들이 이용되었다. 7.5에서 15 mMol, 특히 가급적이면 10 mMol 아세테이트 및 pH 4.1에서 4.4; 가급적이면 pH 4.15에서 4.3; 및 특히 pH 4.2.

본 발명에 따른 액상 조성물들에 사용되는 G-CSF는 기본적으로 재조합 방법들을 써서 생산되는 모든 G-CSF 분자들뿐만 아니라 그것의 변형들과도 관련되어 있다. 본 발명에 따른 용어 G-CSF 또는 G-CSF 변형은 자연적으로 일어나는 G-CSF의 변형들 모두를 포함할 뿐만 아니라 그것으로부터 유도되고 재조합 DNA 기술을 써서 조작된 G-CSF 단백질들, 특히 또한 G-CSF 부분 외에 다른 단백질 서열들이 들어있는 결합 단백질들을 포함한다. 이런 점에서 특히 선호되는 것은 원핵생물 세포들에서 발현에 의하여 만들어지는 포지션 -1에서 N말단 메티오닌 잔기를 가지는 G-CSF 돌연변이 단백질이다. 또한 WO 91/11520에 따라 제조될 수 있는 메티오닌이 없는 재조합형 G-CSF 이형도 적합하다. 용어 "G-CSF 이형"은 하나 이상의 아미노산들이 삭제될 수 있거나 다른 아미노산들로 치환될 수 있는 그런 G-CSF 분자들을 의미하는 것으로 이해되며, 여기에서 G-CSF의 상당한 특징들은 대단히 유지된다. 적합한 G-CSF 돌연변이 단백질들은, 예를 들어, EP 0 456 200에 기술되었다. 특히 선호되는 것은, 본 발명에 따른 액상 조성물들에 존재하는 G-CSF가 글리코실화되지 않은 것이다.

물질 및 안정화를 위해 이용되는 첨가제들의 삼투 속성들로 등장액이 이미 달성되지 않는 한 잘 용인되는 비경구 의약품 형태들의 제제을 위해서 등장(等張)성 첨가제들의 혼합이 적절하다. 이것 때문에, 특히 예를 들어 마니톨, 글리세롤 또는 다른 당 알코올들과 같은 이온화되지 않고 잘 용인되는 첨가제들이 이용된다. G-CSF의 경우에 소르비톨의 사용이 선호되며, 소르비톨은 특히 본 발명에 따른 액상 조성물들의 수용성에 대해 유리하다. 가급적이면, 당 알코올은 액상 조성물에서 농도가 약 2.5에서 7.5 %(w/v) 사이로, 특히 가급적이면 약 5 %(w/v)의 농도로 존재한다.

염 또는 이온들의 높은 농도들이 G-CSF의 집합 형태를 강화하기 때문에 등장액을 조정하기 위한 염들의 혼합물은 유리하지 않다. 그러므로, 염들은 유리하게 적은 양들로 혼합된다. 이온 강도가 가능한 한 최저 수준으로 유지되는 동안 pH-안정화 효과가 달성되는 그런 방식으로 완충제의 농도들이 측정된다. 가급적이면, 완충제의 농도들은 20 mMol까지의 범위 안에 있으며, 특히 15 mMol 보다 적다.

게다가, 즉시 사용 가능한 주사 용액들에 종래의 첨가제들 또는 첨가물들이 더 함유될 수 있다. 예를 들면 글루타티온, 아스코르브산 또는 유사한 물질들과 같은 산화 방지제들, 예를 들면 요소와 같은 혼돈 주성의(chaotropic) 첨가제들, 또는 예를 들면 메티오닌, 아르기닌, 리신, 오르니틴 기타 같은 종류의 것과 같은 아미노산들이 혼합될 수 있다.

특히 선호되는 실시예에서, 본 발명에 따른 G-CSF의 액상 수용액 조성물은 주사 또는 주입 용액의 형태로 제조되었으며 주로 농도가 약 0.6 mg/ml인 인간의 글리코실화되지 않은 메티오닐-G-CSF 및 농도가 약 5 %(w/v)인 소르비톨, 농도가 약 0.06 mg/ml인 폴리소르베이트 80, 및 pH 값이 약 4.2인 완충 물질로서 농도가 약 10 mM인 아세테이트로 구성된다.

대장균 K12의 실험실 균주에서 생산된 필그라스팀(filgrastim)과 같은, 고도로 정화된 글리코실화되지 않은 G-CSF 단백질의 사용이 본 발명에 따른 액상 조성물들에서 또한 선호되기 때문에, 다른 측면들에서 그리고 같은 투여량 강도를 가진, 본 발명에 따른 G-CSF의 액상 조성물들은 특히 투여량, 투여 및 의학적인 징후에 대하여 Neupogen^ⓒ의 제품 정보에 따라 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 액상 조성물들은, 암, 세포 독성 화학 요법에 의해서 발생 되는 부정적인 부작용들, 주변부 혈액 전구체 세포들의 동원이 요구되는 질병들의 치료와 함께, 심각한 만성 호중구 감소증(SCN), 에이즈 바이러스 감염, 기타 같은 종류의 것과 같은, G-CSF의 투여를 통해 치료할 수 있는 것으로 알려진 질병들의 치료를 위한 의약으로 유리하게 사용된다.

한 실시예에서, 본 발명에 따른 G-CSF의 구성은 중추 신경계 손상 같은, 예를 들면 급성 뇌졸증 다음에, 거기에 심각한 이차적인 손상들이 조기 투여, 예를 들면 약의 한 회분 형태의 도움으로 완화될 수 있거나 예방될 수 있는, 신경 징후들의 치료를 위한 의약의 제제을 위한 것이다. 다른 측면들에서, 본 발명에 따른 액상 조성물들은, 예를 들면 장기적으로 지속적인 G-CSF의 투여가 바람직한 경우에, 미리 채워진 주사기들을 이용한 주사 또는 주입에 의한, 가급적이면 피하 또는 정맥 투여를 위한 의약을 위한 것이다.

이미 위에서 제시한 것처럼, 본 발명에 따른 G-CSF의 액상 조성물은 장시간 기간동안 안정적이며 기본적으로 어떤 적합한 용기에라도 저장될 수 있다. 그래서 본 발명은 또한 위 또는 실시예들에 기술된 G-CSF의 액상 조성물들 중 하나가 함유되어 있는 용기와도 관련이 있다. 가급적이면, 액상 조성물과 접촉하고 있는 용기의 적어도 한 표면은 폴리테트라플루오로에틸렌(polytetrafluoroethylene) 또는 에틸렌-테트라플루오로에틸렌(ETFE)으로 구성된 재료로 코팅되어 있다. 전형적으로, 용기는 관습적으로 바이알, 주사기, 앰플, 카플(carpoule), 또는 주입 용기와 같은 액상 의약의 저장 및/또는 투여를 위한 용기이며, 거기에 본 발명에 따른 G-CSF의 액상 조성물을 즉시 사용 가능한 주사기들 및 앰플들에 사용하는 데 특히 유리하다. 선호되는 실시예에서, 액상 조성물은 주사기 또는 앰플 안에, G-CSF의 농도에 관하여, 0.5 ml 안에 0.3 mg 또는 0.8 ml 안에 0.48 mg의 농도를 가지며 존재한다.

첨가제들을 더 혼합하는 것 또는 본 발명에 따른 G-CSF의 액상 조성물의 투여에 앞서 여과, 혼합 등과 같은 제조 조치들을 더 수행하는 것은 유리하게 생략될 수 있기 때문에, 본 발명에 따른 G-CSF 액상 의약은 즉각적인 투여를 위하여, 예를 들면 키트 안에 제조될 수 있다.

한 실시예에서 그것은 의사들, 약사들 및 특별히 환자들에게 특히 유리하며, 그러므로 본 발명은 또한 가급적이면 저장 및/또는 투여에 관한 설명들과 함께, 위에 기술한 용기들 중 하나 이상을 포함하는, G-CSF의 비경구 투여를 위한 키트와 관련이 있다. 보통, 투여량이 5에서 30 μg/kg 체중인 G-CSF 투여가 제공될 것이며, 거기에 높은 또는 낮은 투여량들이, 그러나 의학의 징후 및 질병의 단계에 따라 표시될 수 있다.

가급적이면, 5 개의 주사기들 또는 앰플들이 본 발명에 따른 키트에 제공되며, 예를 들어 매일 투여가 일주일 동안 마지막까지 의도되는 경우에, 7 개의 주사기들 또는 앰플들과 같이, 더 선택적으로 키트에 제공된다.

안전한 조작을 이유로, 본 발명에 따른 키트는 주사기들 및 주사 및/또는 주입 바늘들을 위한 안전 칸들을 각각 유리하게 가지고 있다. 여기에, 바늘들의 배출 보조 기구들 및 준비된 또는 미리 맞춰진 밀봉 덮개들이 또한 고려된다.

실시예에 기술된 대로, 본 발명에 따른 G-CSF 액상 조성물들은 장시간 기간 동안, 특히 약 5 ℃에서, 가급적이면 적어도 4 주의 기간 동안 안정하다. 그러므로, 본 발명에 따른 액상 조성물들, 용기들 및 키트들은 종래의 냉장고에 유리하게 저장될 수 있다.

본 발명에서 기인하는 이들 및 더 이상의 실시예들은 특허청구범위에 의해서 포함된다.

위에 인용한 선행기술 문헌들의 공시 및 이하의 내용은, 특히 G-CSF의 재조합 생산, 완충제들, 주사기들 및 키트들과 관련하여 여기에 참고 문헌으로서 본 출원에 포함된다. 이들 및 더 이상의 실시예들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 밝혀졌고 분명하며 본 발명의 명세서 및 실시예들에 의해서 포함된다. 위에 언급한 첨가제들 중 하나뿐만 아니라 본 발명에 따라 사용될 수 있는 전자 수단들에 대한 더 이상의 문헌은 선행 기술로부터, 예를 들면 공공 도서관들의 이용으로부터 전자 수단들에 대한 문헌을 얻을 수 있다. 게다가, 더 이상의 공공 데이터베이스들을 예를 들면 "PubMed"(http://www.pubmed.gov)와 같은 인터넷을 통하여 손쉽게 이용할 수 있다.

본 발명을 수행하기 위한 기술들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 알려졌으며 관련 있는 문헌으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어 Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989); Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds., Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, Volumes Ⅰ-Ⅳ (D.M.Weir and C.C.Blackwell, eds., 1986)을 보라.

이하에는, 본 발명이 선호되는 실시예를 통해 더 분명히 보여져 있으나, 그러나 어떤 식으로든 본 발명의 목적을 제한하려는 것은 아니다.

액상 G-CSF 조성물들의 제조.

실시예들에 사용된 G-CSF 용액들은, 주사 목적들을 위해 위에 기술된 첨가제들을 물에 용해시킴으로써, 표시된 G-CSF의 양들을 추가함으로써 그리고 필요하다면, 소량의 완충 요소를 사용하여 바람직한 값까지 pH 값을 정확히 조정함으로써 제조되었다.

본 발명에 따른 G-CSF 조성물을 제조할 때, 이전에 행한 실험들의 공정에서 소듐 아세테이트의 사용 다음에 HCl을 사용하여 pH 값을 조정하는 것이, 아마 증가한 이온 농도 때문에, 단백질 집합들의 형성을 야기할 수 있다고 밝혀졌기 때문에, 아세테이트 완충제를 조정하기 위해 처음에 아세트산을 제공하고 그 뒤에 NaOH 용액을 사용하여 pH 값을 조정하는 것이 요구된다는 점에 주목해야한다.

기 호	구성의 설명	초기값 +5℃	제1주 +40℃	제2주 +40℃	제3주 +40℃	제4주 +5℃
기 호	구성의 설명	pH	pH	pH	pH	pH
Ⅰ	10 mM 아세트산, pH 4.1; 5% 소르비톨, 0.004% 폴리소르베이트 80	4.05	4.08	4.10	4.12	4.07
Ⅱa	10 mM 아세트산, pH 4.2; 5% 소르비톨, 0.004% 폴리소르베이트 80	4.23	4.24	4.24	4.25	4.23
Ⅱb	10 mM 아세트산, pH 4.3; 5% 소르비톨, 0.004% 폴리소르베이트 80	4.33	4.35	4.34	4.36	4.33
Ⅱc	10 mM 아세트산, pH 4.4; 5% 소르비톨, 0.004% 폴리소르베이트 80	4.43	4.45	4.43	4.47	4.43
Ⅲa	10 mM 아세트산, pH 4.2; 5% 소르비톨, 0.006% 폴리소르베이트 80	4.24	4.24	4.24	4.27	4.23
Ⅲb	10 mM 아세트산, pH 4.3; 5% 소르비톨, 0.006% 폴리소르베이트 80	4.34	4.34	4.35	4.37	4.33
Ⅲc	10 mM 아세트산, pH 4.4; 5% 소르비톨, 0.006% 폴리소르베이트 80	4.43	4.45	4.43	4.47	4.43

Ⅳa	10 mM 아세트산, pH 4.2; 5% 소르비톨, 0.008% 폴리소르베이트 80	4.21	4.24	4.22	4.25	4.21
Ⅳb	10 mM 아세트산, pH 4.3; 5% 소르비톨, 0.008% 폴리소르베이트 80	4.33	4.33	4.34	4.36	4.31
Ⅳc	10 mM 아세트산, pH 4.4; 5% 소르비톨, 0.008% 폴리소르베이트 80	4.43	4.45	4.43	4.45	4.41

표 1: 4 주간의 저장 동안 +40 ℃ 및 +5 ℃에서 30 MIU, 0.6 mg/ml, 0.5 ml/앰플의 투여량 강도를 가진 액상 조성물들에서의 pH 값들.

용액들은 그 뒤에 구멍의 폭이 0.2 μm인 적합한 살균된 막 필터들을 통해서 여과되며, 가수분해 등급 Ⅰ의 살균된 유리 주사 바이알들에 채워지고 소독된 테플론 고무 플러그들로 밀봉된다. 채우는 것은 가급적이면 질소 대기에서 수행된다.

본 발명의 G-CSF 조성물의 생화학적 안정성.

G-CSF의 실험적인 제제들은 빛의 차단 아래에, 정의된 저장 온도들에서 봉인되고 억제된 바이알들에 저장되었으며 그 뒤에 자외선 분광학, C4 및 C18 비유동 상태를 포함한 역전 상 HPLC 또는 SEC HPLC (size exclusion chromatography), IEF (isoelectric focusing), 차후에 은 착색 및 Western immunoblot analyses를 포함하는 티올 감소 및 비감소 조건들 아래의 SDS-PAGE와 같은 표준 기술들을 이용하여 단백질 순도 및 산화된 형태들, 집합들 및 2 분자체들의 발생이 테스트 되었다. 언급된 기술들에 대한 정보를 찾기 위해서, 예를 들어 WO 94/14466의 실시예들을 보라. 그것의 공시는 참고문헌으로서 여기에 포함된다.

실시예 1의 표 1에 명시된 G-CSF의 액상 조성물들은 표시된 대로 그들의 장기적인 안정성이 테스트되었다. 계면 활성제 내용물을 많이 함유한 조성물들은 주로 훨씬 열악한 장기적인 안정성이 나타났기 때문에, 계면 활성제 내용물을 0.006 % 초과하여 가지고 있는 조성물들에 대해 오직 0.008 %를 가진 조성물이 실시예를 통하여 표시되었다. 실험적인 구성들 중에 G-CSF의 생화학적 안정성과 관련 있는 실험들에서 0.008%의 내용물을 포함하는 것 이상의 높은 계면 활성제 농도들을 사용으로 G-CSF의 산화된 형태의 축적이 다량 관찰될 수 있음이 밝혀졌다. 그러므로 국제 출원 WO 94/14466의 가르침들과는 달리, 이미 낮은 계면 활성제 농도는, 그러나 어쨌든 높은 계면 활성제 농도는 용액에서 G-CSF의 산화 프로파일에 부정적으로 영향을 미친다는 것은 본 발명의 범위 안에서 이행된 실험들 안에서 평가되었다.

더욱이, 표 1에 명시된 본 발명의 G-CSF 조성물들은 산화된 종들의 상대적인 내용물이 1 % 아래라는 점이 특징지어지는 데 반하여, 이 한계점이 계면 활성제 내용물을 0.008 % 이상 가지고 있는 통제 표본들에서 초과되는 것을 알아냈으며, 이것은 그런 용액들은 후보 의약들로 고려될 수 없다는 결론에 이르게 한다.

실험적인 구성들에서 G-CSF의 생화학적 안정성 추가 시험들이 본 발명에 따른 조성물들은 아미노산들 및/또는 산화방지제들과 같은 첨가제들의 혼합이 더 이상 필요없이 집합뿐만 아니라 G-CSF의 산화도 주로 예방할 수 있음을 드러낸다.

G-CSF 조성물들의 수용성.

본 발명에 따른 액상 조성물들 중 하나는 3 단계 Ⅲ 임상 연구들에서 암 환자들에게 테스트되었으며, 거기에 그 중에서도, 주사 부위 부근에서의 환자들의 반응들이 시험되었다. 여기에, 부기, 발적, 피부 출혈, 압력에 대한 민감도 및 주사 부위에서 발생하는 다른 증상들에 대한 시험이 수행되었다. 임상 연구들을 위해서, 본 발명의 G-CSF 조성물은 표 1의 실험 제제 Ⅱa(XM02)의 지시들에 따라 선택되었으며, 하루에 5 μg/kg 체중의 투여량으로 처리되었다.

이 시험들을 하는 동안 다행스럽게도 전체 356 명의 환자들 중에 오직 한 환자만이, 즉 이 사례에서 오직 0.3 % 만이, 원하지 않는 반응들을 보고하였음이 밝혀졌다. 상업적으로 이용할 수 있는 Neupogen^ⓒ의 G-CSF 조성물과 함께 이행된 대조 실험들에서, 본 발명에 따른 G-CSF 조성물이 환자들의 주사 부위들에서의 부작용들과 관련 있는 인자 4에 의해 개선된 수용성을 보여준다는 점이 입증될 수 있다. 이 결과들은 아래의 표에 요약되어 있다.

약	pH	총 수	양성	양성(%)
XM02	4.2	356	1	0.3
Neupogen^ⓒ	4.0	249	3	1.2
Placebo	7.0	72	0	0.0

표 2: 3 단계 Ⅲ 임상 연구들에서 주사 부위에서의 반응들의 빈도. 유방암, Non-Hodgkin's 림프종 및 폐암에 대한 화학 요법의 첫 순환 평가

위에 언급한 시험들은 아세트산과 아세테이트를 결합함으로써, 각각, 완충 물질 및 폴리소르베이트 80과 같은 계면 활성제로서, 각각 특정한 농도를 가지며 소르비톨과 같은 당 알코올의 존재하에서, pH 값을 약 4.2±0.15로 조정함으로써, 의약으로서 그들의 적합성에 대해 요구되는 안정성을 G-CSF 분자들에게 전달하는, 잘 견딜 수 있고 의약을 투여할 때 주사 부위에서 종종 발견될 수 있는 증상들의 거의 완벽한 예방을 추가로 가능하게 하는 안정한 G-CSF의 액상 조성물이 얻어지는 결과를 이끌었다. 이것은 본 발명에 따른 G-CSF 액상 조성물들 및 그것과 함께 제공되는 키트들을 각각, 즉시 사용 가능한 주사기들 및 그것과 함께 제공되는 키트들의 사용에 대해, 특히 가정용에 대해 특히 적합하고 이롭게 만든다.

Claims

실질적으로 G-CSF와 당 알코올로 이루어지는 G-CSF의 액상 수용액 조성물; 농도가 0.04에서 0.06 mg/ml 사이인 계면 활성제; pH 값이 4.1에서 4.4 사이인 완충 물질로서 농도가 5에서 20 mM 사이인 아세테이트; 및 선택적으로 아미노산들 및/또는 글리세롤 및/또는 탄수화물들 및/또는 방부제들로 구성되는 것을 특징으로 하는 의약.
제1항에 있어서, 상기 G-CSF는 글리코실화되지 않은 것을 특징으로 하는 의약.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 G-CSF는 0.6 mg/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 의약.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면 활성제는 폴리소르베이트인 것을 특징으로 하는 의약.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 당 알코올은 소르비톨인 것을 특징으로 하는 의약.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 당 알코올은 5 %(w/v)의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 의약.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아세테이트는 약 10 mM의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 의약.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 의약은 주로 아미노산들 및/또는 추가 단백질이 없는 것을 특징으로 하는 의약.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 의약은 주사 또는 주입 용액인 것을 특징으로 하는 의약.
농도가 0.6 mg/ml인 인간의 글리코실화되지 않은 메티오닐 G-CSF와 농도가 5 % (w/v)인 소르비톨로 이루어지는 주사 또는 주입 용액으로서 G-CSF의 액상 수용액 조성물; 농도가 0.06 mg/ml인 폴리소르베이트 80; 및 pH 값이 4.2±0.15인 완충 물질로서 농도가 약 10 mM인 아세테이트로 구성되는 것을 특징으로 하는 의약.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 의약은 암, 심각한 만성 호중구 감소증(SCN), 에이즈 바이러스 감염, 중추 신경계의 손상, 세포 독성 화학 요법에 기인한 부정적인 부작용들의 치료를 위한, 또는 주변부 혈액 전구체 세포들의 동원이 요구되는 질병들의 치료를 수반하기 위한 의약.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 액상 의약 조성물을 포함하는 액상 의약들의 투여를 위한 용기.
제12항에 있어서, 상기 액상 조성물과 접촉하고 있는 상기 용기의 적어도 한 표면은 실리콘 또는 폴리테트라플루오로에틸렌 또는 에틸렌-테트라플루오로에틸렌 (ETFE) 공중합체로 구성되는 재료로 코팅된 것을 특징으로 하는 용기.
제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 용기는 주사기, 앰플, 카플 또는 주입 용기인 것을 특징으로 하는 용기.
제14항에 있어서, 상기 주사기 또는 상기 앰플에 액상 조성물이 존재하며, G-CSF의 농도에 관하여, 0.5 ml 안에 0.3 mg 또는 0.8 ml 안에 0.48 mg인 것을 특징으로 하는 주사기 또는 앰플.
제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 용기에 더하여 저장 및/또는 투여에 대한 설명들을 포함하는 것을 특징으로 하는 G-CSF의 비경구 투여를 위한 키트.
제16항에 있어서, 상기 G-CSF의 투여는 5에서 30 μg/kg 체중의 투여량이 제공되는 것을 특징으로 하는 키트.
제16항 또는 제17항에 있어서, 상기 키트 안에 5 개의 주사기들 또는 앰플들이 제공되는 것을 특징으로 하는 키트.
제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키트에 주사기들과 주사 및/또는 주입 바늘들을 위한 안전 칸들이 각각 제공되는 것을 특징으로 하는 키트.
제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키트의 저장은 5 ℃로 의도되는 것을 특징으로 하는 키트.