KR20100043201A

KR20100043201A - 성장 호르몬 융합 단백질

Info

Publication number: KR20100043201A
Application number: KR1020107002192A
Authority: KR
Inventors: 리차드 로스; 피터 아르티미우크; 존 세이어즈
Original assignee: 아스테리온 리미티드
Priority date: 2007-07-20
Filing date: 2008-07-16
Publication date: 2010-04-28
Also published as: GB0717985D0; US20100197582A1; IL202225A; RU2473554C2; EP2170943A1; CN101679504B; WO2009013461A1; WO2009013461A8; US20130023477A1; US8293709B2; AU2008278907A1; RU2010103157A; JP2010534060A; US8470559B2; JP5546452B2; CN101679504A; AU2008278907B2; CA2693951A1; IL202225A0

Abstract

우리는 생체 안정성과 활성이 향상된 성장 호르몬 융합 호르몬 단백질; 상기 단백질을 엔코딩하는 핵산 분자 및 상기 단백질을 사용하는 성장 호르몬 결핍의 치료 방법을 개시한다.

Description

성장 호르몬 융합 단백질{GROWTH HORMONE FUSION PROTEINS}

본 발명은 성장 호르몬 융합 단백질; 상기 단백질을 엔코딩하는 핵산 분자 및 상기 단백질을 사용하는 치료 방법에 관한 것이다.

생화학 반응을 야기하는 수용체들(receptors)과 상호작용하는 리간드들은 작용제(agonist)로 알려져 있고 생화학 반응을 보호하거나 방해하는 그것들은 길항제(antagonist)로 알려져 있다. 예를 들어, 세포 특이 성장 요인은 작용제와 같이 행동하는 리간드로서 세포 표면상에 위치한 수용체와 결합한다. 리간드 특이 결합에 의한 수용체의 활성화는 다른 것들 중에서도 특히, 세포-주기(cell-cycle) 특이 유전자의 발현 및 증식을 위한 휴지 세포(quiescent cells)의 활성화를 야기하는 세포내 신호연속반응(intra cellular signalling cascades)의 활성화를 통한 세포 증식을 촉진한다.

사이토카인(cytokines)으로 일컬어지는 성장인자군은 수많은 다양한 종류의 세포 기능들에 관련되어 있다. 이들은 면역계의 조절, 에너지 대사의 조절, 및 성장 및 발달의 제어를 포함한다. 사이토카인은 표적 세포의 세포 표면에 발현되는 수용체를 통해 그들의 효과를 중재한다. 사이토카인 수용체는 3개의 구별된 부 그룹(sub group)으로 구분될 수 있다. 타입 1(성장 호르몬 족) 수용체는 세포외 도메인의 아미노 말단 부분의 4개의 보존된 시스테인 잔기들과 C-말단 부분의 보존된 Trp-Ser-Xaa-Trp-Ser 모티프의 존재에 의해 특징지어진다. 반복된 시스테인 모티프(Cys motif)는 타입 2(인터페론 족) 및 타입 Ⅲ에 존재한다.

성장 호르몬(GH)은 아동기의 선형적 성장(linear growth)과 성인기의 정상의 신체 조직을 위한 중요한 동화작용의 사이토카인 호르몬이다¹. GH 보충(replacement)을 위한 현재의 치료적 처방은 불편하고 비싼, 하루에 한번 처방되는 피하 주사를 요구한다. 페길화(pegylation)² 및 지효성 제형(sutained-release formulation)^3-5을 포함하는 지속성 제제(long-acting preparation)를 만들기 위한 수많은 접근이 수행되어 왔다. 페길화는 수용체에 대한 호르몬의 친화도를 떨어뜨리는 단점이 있고², 이어진 정제와 병행되는 화학적 변경이 비싸다. 지효성 제형은 효능이 증명되었으나⁴ ^-7, 이러한 GH처방은 초생리학적 GH 레벨³을 야기하는 지배적인 초기 배출 프로필에 의해 특징 지어지고, 제조가 비싸고 주사가 고통스러울 수 있다⁴. 제조 단가를 최소화하고 좋은 약동학 프로파일을 갖고, 투여하기 쉬우며, 환자에게 받아들여질 수 있는 사이토카인 조성물이 필요하다.

GH는 세포 표면 타입 1 사이토카인 수용체(GHR)를 통해 작용한다. 다른 사이토카인 수용체와 공통적으로, GHR의 세포외 도메인은 단백질 가수분해적으로 분해되고(proteolytically cleaved) 결합 단백질(GHBP)로써 순환한다⁸. 생리학적 조건하에서 GH는 부분적으로 GHBP와 1:1 분자비로 결합하여 순환하여 복합체(complex)는 생물학적으로 비활성으로 나타나고, 제거(clearance) 및 분해(degradation)로부터 보호된다^{9, 10}. GH와 GHBP의 가교 결합된 복합체는 제거로부터 지연되지만 화학적으로 활성은 아니다¹¹. 1:1 비율에서 정제되어 분리된 GH와 GHBP의 공동 투여(co-administration)는 GH의 동화 작용을 증가시킬 수 있다. 따라서, 많은 호르몬 시스템과 같이, 순환에서의 결합은 활성 자유 호르몬과 평형인 비활성 순환 저장소(inactive circulating reservoir)를 제공한다¹³.

성장 호르몬과 같은 사이토카인 호르몬은 단 플라즈마 반감기(short plasma half-life)를 갖고 빈번한 투여가 요구된다. 예를 들어, 성장 호르몬(GH) 보충은 매일 주사되는 것을 수반한다. 다른 사이토카인과 공통적으로, 세포외 도메인 GH 수용체는 결합 단백질로 순환하고 GH의 생물학적 반감기를 자연적으로 연장한다.

이 명세서는 세포외 도메인 수용체와 함께 있는 GH의 리간드-수용체 융합(LR-융합, LR-fusion)의 생물학적 활동과 관련 있다. 이러한 유전공학적 LR-융합 단백질은 포유류 세포 배양으로부터 정제된다. 쥐(rat)에서 LR-융합은 자연적인 GH에 비해 300배 감소된 제거(clearance)를 갖고 1회의 투여는 자연적인 GH에서 보여진것 보다 10일의 성장이 촉진되었다. 감소된 제거는 영장류 모델에서 재생산될 수 있다. LR-융합은 상호적인, GH와 이것의 결합 단백질과 함께 자연적으로 발생하는 비활성 호르몬의 저장소를 제공하는 헤드-투-테일 이합체(head to tail dimer)를 형성한다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 다음으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자가 제공된다.

ⅰ) 서열 식별번호:1에 표현된 핵산 서열

ⅱ) 서열 식별번호:2에 표현된 핵산 서열

ⅲ) 서열 식별번호:3에 표현된 핵산 서열

ⅳ) 서열 식별번호:4에 표현된 핵산 서열; 또는

ⅴ) 서열 식별번호: 1, 서열 식별번호: 2, 서열 식별번호:3, 또는 서열 식별번호:4로의 엄격한 혼성화 조건하에서 혼성화되는 핵산 서열을 포함하되, 성장 호르몬 수용체 작용제 활성을 갖는 핵산 분자.

핵산 분자의 혼성화는 두 개의 상보적인 핵산 분자가 상당한 양의 수소 결합을 할 때 일어난다. 혼성화의 엄격함은 핵산 주변의 환경적 조건, 혼성화 방법의 성질, 및 사용되는 핵산 분자의 조성 및 길이에 따라 바뀔 수 있다. 특별한 정도의 엄격성을 달성하는데 요구되는 혼성화 조건에 관한 계산은 Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 2001); Tihssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridzation with Nucleic Acid Probes Part Ⅰ, Chapter 2(Elsevier, New York, 1993)에 논의되었다. Tm은 핵산 분자의 주어진 가닥의 50%가 이것의 상보적인 가닥으로 혼성화되는 온도이다. 다음은 혼성화 조건의 예시적인 세트이고 이는 한정적이지 않다.

매우 높은 엄격도(서열이 적어도 90% 동일성을 공유하며 혼성화되게 함)

혼성화: 16시간동안 65℃에서 5×SSC

2차례 세정: 각각 15분동안 실온(RT)에서 2×SSC

2차례 세정: 각각 20분동안 65℃에서 0.5×SSC

높은 엄격도(서열이 적어도 80% 동일성을 공유하며 혼성화되게 함)

혼성화: 16-20시간동안 65℃-70℃에서 5×-6×SSC

2차례 세정: 각각 5-20분동안 실온에서 2×SSC

2차례 세정: 각각 30분동안 55℃-70℃에서 1×SSC

낮은 엄격도(서열이 적어도 50% 동일성을 공유하며 혼성화되게 함)

혼성화: 16-20시간동안 실온-55℃에서 6×SSC

적어도 2차례 세정 각각 20-30분동안 55℃에서 2×-3×SSC

본 발명의 바람직한 실시예에서 상기 핵산 분자는 서열식별번호:1에 표현된 핵산 서열로 구성되거나 이를 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시예에서 상기 핵산 분자는 서열식별번호:2에 표현된 핵산서열로 구성되거나 이를 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시예에서 상기 핵산 분자는 서열식별번호:3에 표현된 핵산 서열로 구성되거나 이를 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시예에서 상기 핵산 분자는 서열식별번호:4에 표현된 핵산서열로 구성되거나 이를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 측면에 따르면 본 발명에 따른 핵산에 의해 엔코딩된 폴리펩타이드가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면,

ⅰ) 서열 식별번호:5에 표현된 아미노산 서열;

ⅱ) 서열 식별번호:6에 표현된 아미노산 서열;

ⅲ) 서열 식별번호:7에 표현된 아미노산 서열;

ⅳ) 서열 식별번호:8에 표현된 아미노산 서열;

ⅴ) 서열 식별번호:9에 표현된 아미노산 서열;

ⅵ) 서열 식별번호:10에 표현된 아미노산 서열;

ⅶ) 서열 식별번호:11에 표현된 아미노산 서열;

ⅷ) 서열 식별번호:12에 표현된 아미노산 서열;로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드가 제공되되, 상기 폴리펩타이드는 성장 호르몬 수용체 작용 활성을 갖는다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면 상기 폴리펩타이드는 서열 식별번호:5에 표현된 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면 상기 폴리펩타이드는 서열 식별번호:6에 표현된 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면 상기 폴리펩타이드는 서열 식별번호:7에 표현된 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면 상기 폴리펩타이드는 서열 식별번호:8에 표현된 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면 상기 폴리펩타이드는 서열 식별번호:9에 표현된 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면 상기 폴리펩타이드는 서열 식별번호:10에 표현된 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면 상기 폴리펩타이드는 서열 식별번호:11에 표현된 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면 상기 폴리펩타이드는 서열 식별번호:12에 표현된 아미노산 서열로 구성되거나 이를 포함한다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 서열 식별번호 5로 구성되거나 이를 포함하는 두 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체(homodimer)가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 서열 식별번호 6으로 구성되거나 이를 포함하는 두 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 서열 식별번호 7로 구성되거나 이를 포함하는 두 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 서열 식별번호 8로 구성되거나 이를 포함하는 두 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 서열 식별번호 9로 구성되거나 이를 포함하는 두 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 서열 식별번호 10으로 구성되거나 이를 포함하는 두 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 서열 식별번호 11로 구성되거나 이를 포함하는 두 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 서열 식별번호 12로 구성되거나 이를 포함하는 두 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체가 제공된다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면 본 발명에 따른 핵산을 포함하는 벡터가 제공된다.

본 발명의 바람직한 실시예에서 상기 벡터는 본 발명에 따른 핵산 분자를 발현하기 위해 적용된 발현 벡터이다.

본 발명에 따른 핵산(들)을 포함하는 벡터는, 특히 안정한 트랜스펙션(transfection)을 위한 게놈으로의 재조합을 위해 벡터가 핵산을 세포로 도입하는 데에 사용되는 경우, 프로모터(promoter) 또는 다른 조절 요소(regularoty element)을 포함할 필요가 없다. 바람직하게 벡터 내의 핵산은 숙주 세포 내에서 적절한 프로모터나 전사를 위한 다른 조절 요소와 기능적으로 연결된다. 벡터는 다중의 숙주 내에서 작용하는 이기능성 발현 벡터(bifunctional expression vector)일 수 있다. "프로모터"에 의한다는 것은 전사적인 개시 자리로부터의 그리고 전사를 위해 요구되는 모든 조절 영역을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 상류를 의미한다. 적절한 프로모터들은 진핵 또는 원핵 세포에서의 발현을 위한 구성적(constitutive), 조직-특이적, 발생적 또는 다른 프로모터들을 포함한다. "기능적으로 연결된(operably linked)"은 같은 핵산 분자의 일부로서 결합되고, 적절하게 위치되고 프로모터로부터 개시된 전사를 위해 배향된 것을 의미한다. DNA는 프로모터의 "전사적 개시 조절하"에 있는 프로모터에 기능적으로 연결된다.

바람직한 실시예에서 프로모터는 구성적, 유도적 또는 조절가능한 프로모터이다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면, 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 벡터로 트랜스팩션(transfection) 또는 트랜스포메이션(transformation)된 세포가 제공된다.

바람직하게 상기 세포는 진핵 세포이다. 이와 달리, 상기 세포는 원핵 세포이다.

본 발명의 바람직한 실시예에서, 상기 세포는 진균 세포(예를 들어, Pichia spp, Saccharomyces spp , Neurospora spp); 곤충 세포(예를 들어, Spodoptera spp); 포유류 세포(예를 들어, COS 세포, CHO 세포); 식물 세포로 구성된 그룹에서 선택된다.

본 발명의 바람직한 실시예에서, 부형제(excipient) 또는 운반제(carrier)를 포함하는 본 발명에 따른 폴리펩타이드를 포함하는 제약학적 조성물이 제공된다.

본 발명의 바람직한 실시예에서, 상기 제약학적 조성물은 추가적으로 치료제(therapeutic agent)와 결합될 수 있다.

본 발명의 제약학적 조성물이 투여될 때는 제약학적으로 수용가능한 처방안에서 투여된다. 이러한 처방은 일반적으로 염, 완충제, 보존제, 융화성 운반제(compatible carrier), 및 선택적인 다른 치료제의 제약학적으로 수용가능한 농도를 함유할 수 있다.

본 발명의 제약학적인 조성물은 주사를 포함하는 임의의 종래의 경로(route)에 의해 투여될 수 있다. 투여 및 적용은, 예를 들어, 경구, 정맥, 복강내, 근육내, 강내(intracavity), 관절내(intra-articuar), 피하, 국소적(눈), 진피(dermal, 예를 들어, 피부 또는 점액막에 투여되는 지질 용해성의 크림), 경피(transdermal) 또는 비강용일 수 있다.

본 발명의 제약학적 조성물은 유효양이 투여된다. "유효양"은 원하는 반응을 생성하는 단독 또는 다른 도즈(dose) 또는 상승적인 약과 함께인 제약/조성물의 양이다. 이것은 일시적인 병의 진행을 지연시키는 것뿐만 아니라, 보다 바람직하게는 질병의 진행을 영구적으로 막는 것과 연계된다. 이것은 일상적인 방식에 의해 관찰되거나 진단학적 방법에 의해 관찰될 수 있다.

대상에 투여되는 제약학적인 조성물의 도즈는 다른 파라미터, 특히 사용되는 투여의 방법 및 대상의 상태(예를 들어, 나이, 성별)에 따른 파라미터에 따라 선택된다. 투여될 때, 본 발명의 제약학적인 조성물은 제약학적으로 수용가능한 양으로 제약학적으로 수용가능한 조성물로 적용된다. 의약으로 사용될 때 염은 제약학적으로 수용가능하되, 비제약학적으로 수용가능한 염이 본 발명의 범위에 제외되지 않고 그들의 제약학적으로 수용가능한 염으로 준비되기 위해 편리하게 사용될 수도 있다. 이러한 약리적 그리고 제약학적으로 수용가능한 염은, 염산(hydrochloric), 브롬화 수소산(hydrobromic), 황(surfuric), 질소산(nitric), 인산(phosphonic), 말산(maleic), 초산(acetic), 살리실산(salicylic), 구연산(citric), 포름산(formic), 말론산(malonic), 숙신(succinic), 및 이의 유사물로부터 준비될 수 있지만 이에 한정되지 않는다. 또한, 제약학적으로 수용가능한 염은 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염으로 준비될 수도 있다.

제약학적 조성물은, 바람직하다면, 제약학적으로 수용가능한 운반제(carrier)와 결합될 수 있다. 여기에서 "제약학적으로 수용가능한 운반제(pharmaceutically-acceptable carrier)"라는 표현은 인간에게 투여하기에 적절한 하나 또는 그 이상의 융화성 고체 또는 액체성 필러(filler) 또는 희석액 또는 캡슐화된 물질을 의미한다. "운반제(carrier)"라는 표현은 적용을 용이하기 위해 결합된 활성의 성분과 함께, 유기의 또는 무기의 성분(ingredient), 자연의 또는 합성의 성분을 나타낸다. 또한, 제약학적 조성물의 구성요소는 원하는 제약학적 효능을 실질적으로 감소시키는 반응이 없는 방식으로 본 발명의 분자와 함께, 그리고 각각 섞일 수 있다.

제약학적 조성물은 염, 염 내의 구연산, 염 내의 붕산, 및 염 내의 인산을 포함하는 적절한 완충제를 함유할 수 있다.

제약학적 조성물은 또한 선택적으로, 염화벤잘코늄(benzalkonium chloride); 클로로부탄올(chlorobutanol); 파라벤(parabens) 및 티메로살(thimerosal)과 같은, 적절한 보존제(preservative)를 함유할 수 있다.

제약학적 조성물은 편리하게 단위 도즈 형태로 존재할 수 있고 약학 분야에서 알려진 다른 임의의 방법으로 준비될 수 있다. 모든 방법은 하나 또는 그 이상의 보조적인 성분으로 구성된 운반제와 함께 결합된 활성제를 준비하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 조성물은 액체상의 운반제, 곱게 분할된 고체 운반제 또는 이들 모두와 결합된 활성 혼합물로 균일하고 밀접하게 준비되고, 이후 필요에 의해 생성물의 모양이 형성될 수 있다.

경구 투여에 적합한 조성물은 활성 조성물의 소정의 양을 각각 함유하는, 캡슐, 정제(tablet), 로젠지(lozenge)와 같은 분리된 단위로 존재될 수 있다. 다른 조성물은 시럽, 엘릭시르 또는 에멀젼과 같은 수성 액체 또는 비수성 액체의 서스펜션을 포함할 수 있다.

비경구의 투여에 적합한 조성물은 바람직하게 투여대상의 혈액에 등장인(isotonic) 살균 수성 또는 비수성 조제(preparation)를 포함할 수 있다. 이 조제는 적절한 분산 또는 습윤제 및 현탁제(suspending agent)를 사용하여 알려진 방법에 의해 제재될 수 있다. 살균된 주사가능한 조제는 또한 예를 들어, 1,3-부탄디올(1,3-butane diol)내의 용액과 같은 비독성 비경구적으로 수용가능한 희석액 또는 용매 내의 살균 주사가능한 용액 또는 현탁액일 수 있다. 물, 린저용액(Ringer's solution). 및 등장 염화나트륨용액(isotonic sodium chloride solution)이 수용가능한 용매로 적용될 수 있다. 이에 더하여, 살균된, 고정유(fixed oil)가 변리하게 용매 또는 현탁 매개로 적용된다. 이 목적을 위해 합성 모노- 또는 디-글리세라이드(mono- or di-glyceride)를 포함하는 임의의 무균 고정유(bland fixed oil)가 적용될 수 있다. 이에 더하여, 올레산과 같은 지방산이 주사제의 조제에 사용될 수 있다. 경구, 피하내, 정맥내, 근육내 등에 적합한 운반제재 투여는 Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA에서 찾을 수 있다.

본 발명의 더 나아간 측면에 따르면, 본 발명에 따른 적어도 하나의 폴리펩타이드의 유효양을 투여하는 것을 포함하는 성장 호르몬 결핍으로 고통받는 인간 대상을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 바람직한 방법에서, 상기 폴리펩타이드는 정맥으로 투여된다.

본 발명의 다른 바람직한 방법에서, 상기 폴리펩타이드는 피하에 투여된다.

본 발명의 더 나아간 바람직한 방법에서, 상기 폴리펩타이드는 적어도 2일 간격, 바람직하게 적어도 일주일 간격, 2주일 간격, 또는 한 달 간격으로 투여된다.

본 발명의 바람직한 방법에서, 상기 성장 호르몬 결핍은 아동기의 성장 호르몬 결핍이다.

본 발명의 바람직한 방법에서, 상기 성장 호르몬 결핍은 성인 성장 호르몬 결핍이다.

성장 호르몬 결핍의 치료는 예를 들어 터너 증후군(Turners Syndrome), 프라더 윌리 증후군(Prader Willi Sydrome), 인테루터린 성장 지연(Interuterine growth retardation), 특발성 저신장증(idiopathic shor stature), 신부전증(renal failure), 예를 들어 화학치료적 치료 동안 및 AIDS의 치료에서의 이화 상태(catabolic state)의 치료를 포함한다.

본 명세서의 상세한 설명 및 청구항들을 통해서 "포함한다" 및 "함유한다" 및 이 단어들이 변형된 단어들, 예를 들어 "포함하는" 및 "포함한다" 는 "포함하지만 이에 한정되지 않는다"는 의미이고, 다른 모이어티, 첨가물들, 요소들, 정수들 또는 단계들을 배제하는 것을 의도하지 않는다.

본 명세서의 상세한 설명 및 청구항들을 통해서, 단수는 다른 문맥상의 요구가 없는 한 복수를 포함한다. 특히, 한정사가 사용된 경우, 다른 문맥상의 요구가 없는 한 본 명세서는 단수뿐만 아니라 복수를 포함하는 것으로 이해된다.

특정한 측면, 실시예 또는 발명의 예과 함께 언급된 특징, 정수, 특성, 화합물, 화학적 모이어티 또는 그룹은 여기에 설명된 다른 측면, 실시예 또는 예에 양립불가하지 않는 이상 적용될 수 있다.

발명의 실시예가 단지 예로써 그리고 이하의 도면과 함께 참조되어 설명된다.

도 1은 GH, GH 결합 단백질(GHBP), LR-융합 및 공포된 구조에 기초한 GHR(GHR based on published structure (pdb3HHR))사이의 관계의 개요를 보여준다²⁷: (a) 1:1 복합체 내에서 GHBP에 결합된 GH의 자연의 형상(configuration). (b) GHBP 복합체로부터 나온 GH, 세포 표면 GH 수용체에 결합한다. (c) 단량체 형태의 LR-융합은 exGHR에 연결된 GH와 형성된다. (d) 일 분자 내의 GH가 다른 분자의 exGHR에 결합된 상호 헤드-투-테일 이합체(reciprocal head-to-tail dimer)를 형성하는 LR-융합을 위한 모델. 마지막으로, (e)에서 단량체 형태의 LR-융합은 GH를 결합하고 활성화할 수 있다.
도 2는 LR-융합의 특성화(characterisation)과 생물학적 활성(bioactivity)을 보여준다: (a)는 GH 특이 항체를 이용하여, 쿠메시 스테이닝(Coomassie staining (CS)) 및 웨스턴 블로팅(western blotting)이 뒤따라지는 SDS-PAGE에 의해 분리된 LR-융합을 보여준다. LR-융합은 대략 75 kDa이고, 대략 5kDa 떨어진 두 개의 밴드로 분리된다. (b)는 두 단백질 형태 빠른(F) 및 느린(S)를 보여주는 네이티브 PAGE(native PAGE)에 의해 분리된 LR-융합을 보여준다. (c) 네이티브 PAGE로부터 개별의 밴드들(F 및 S)는 절제되고(excised) 더 분리되어 제한 조건 하의 SDS-PAGE에 의해 더 분리되고, 이어서 GH 특이 항체를 사용한 웨스턴 블로팅이 뒤따른다. 두 밴드(F 및 S)는 대략 75kDa 까지 진행하고 앞서 설명된 이중선으로 분리된다. 이것은 네이티브 PAGE에 의해 관찰된 두 개의 분리된 밴드가 모두 75kDa LR-융합이고 단량체와 이합체로써 평형으로 본래의 조건에서 존재한다는 것을 제시한다. (d)는 젤 필터에 이은 LR-융합의 용리 프로파일을 보여준다. 2개의 구분되는 피크의 분리는 용액내에서 단량체와 이합체로써 LR-융합의 존재를 다시 나타낸다. (e) 세포는 GH와 LR-융합의 GHR 신호 바이오 어세이(bioassay)에 기초한다. y-축은 루시페라아제-리포터 어세이로부터의 고쳐진 루시페라아제의 접힘 유도(fold induction of corrected luciferase)를 나타낸다. GH의 표준 곡선은 0, 0.25, 0.5, 1.0, 2.0 및 5nM의 범위이고; LR-융합 표준 곡선은 0, 1, 2, 5, 10, 25, 50, 100 및 250nM의 범위이다. GH의 최대 반응은 5nM로 얻어지고, LR-융합과 함께한 최대 반응은 50 내지 250nM를 요구한다.
도 3은 피하(sc) 및 정맥(ⅳ) 투여 이후 측정된 GH와 LR-융합의 프로파일을 보여준다: (a)는 sc 투여 초기 상태(5시간)를 보여주고; (b)는 ⅳ이후 늦은 상태(8 일)을 보여주고; (c)는 sc 투여이후 늦은 상태를 보여준다.
도 4는 GH 및 LR-융합으로 피하 치료이후 체중 변화를 보여준다:(a) 플래시보(매개체 만) 대 GH의 매일치료 이후; (b) 하루 걸러(alternate day) 주사; (c) 1일째와 5일째의 2회 주사; (d) 1일째 1회 주사; 및 (e) 다른 치료 처방 후 체중의 변화의 요약. ***=p<0.0001GH vs LR-융합.
도 5는 1B7v0, 1B7v1, 1B7v2, 및 1B7v3의 생체 내(in vivo) 활성을 나타낸다.
도 6은 투여된 생쥐 1B7v0, 1B7v1, 1B7v2, 및 1B7v3의 체중변화를 보여주는 시간 과정을 나타낸다.
도 7은 피하 투여 이후 1B7v0, 1B7v1, 1B7v2, 및 1B7v3의 약동학(pharmacokinetics)을 나타낸다.
도 8은 정맥 투여후 1B7v0, 1B7v1, 1B7v2, 및 1B7v3의 약동학을 나타낸다.
도 9는 붉은털원숭이(rhesus monkey) 내에 1mg/kg의 연속적인 s/c도우징에 이은 1B7v2 및 1B7v3의 약동학적 프로파일을 나타낸다. 붉은 점선은 인간 성장 호르몬의 최소 유효 농도를 나타낸다.
표 1은 뇌하수체가 제거된(hypophysectomised) 쥐를 GH 또는 LR-융합으로 10일간 치료한 뒤의 결과(mean±sem)를 보여준다.

재료 및 방법

동물 및 인간 샘플의 사용. 인간 샘플은 지역 윤리 위원회에서 승인받고 환자들에게 동의를 얻었다. 모든 실험은 실험적 또는 다른 과학적 목적을 위해 사용되는 동물에 관한 프랑스 법(Council Directive N°86/609/EEC of 24 November 1986)에 따라 수행되었다.

재료. 모든 재료는 다른 언급이 없는 한 시그마(Sigma (Poole, 영국))으로부터 구매되었다. 재조합 GH는 화이자(Pfizer), 결합 어세이에 사용되는 인간 GH 결합 단백질 유도 재조합 E. coli(recombinant E. coli derived human GH binding protein)은 DSL(DSL Research Reagent, Oxfordshire, UK)로부터 기증받았고, 요오드화된 GH(iodinated GH)는 NovoNordisk(NovoNordisk Park, Denmark)로부터 기증받았다. 정제(purification)와 특성화(characterisation)를 위한 GH와 GHR mAb들은 Dr.Skriver(NovoNordisk Park, Denmark)로부터 기증받은 mAbs B07b 및 B24a를 제외한 인하우스 재료(in-house material)(CS)와 mAb 263(AbD Serotec, Kidlington, Oxford, UK)였다.

GH - exGHR LR -융합( LR - fusions )의 정제. 인간 GH 및 GH 수용체는 각각 인간 뇌하수체 및 간으로부터 RT-PCR에 의해 증폭되고 인간 GH 분비 신호 서열(human GH secretion signal sequence) 하에서 벡터, pSecTag-V5/FRT/Hist-TOPO(Invitrogen, Paisley, UK)로 복제되었다. Gly4Ser 링커(linker)의 4개의 반복(copy)은 인간 GH의 본래의 C-말단(native C-terminus)을 인간 GHR의 본래의 N-말단(native N-terminus)에 링크시키기 위해 사용되었다. 안정한 복제는, 단백질이 없는 매개로 개조되고 분산 배지(suspension culture)에서 성장한 CHO Flp-In cells(Invitrogen, Paisley, UK)에서 만들어진다. LR-융합 발현은 인하우스 ELISA에 의해 확인되었다. 친화도 정제(affinity purification)은 GH mAb 컬럼을 사용하여 수행되었다.

전사 바이오어세이 ( transcription bioassay ) 이들은 앞서 인간 GHR¹⁶을 안정적으로 발현하는 인간 293 세포들내에서 나타난 것과 같이 수행되었다.

ELISA. 인하우스 GH 및 LR-융합 ELISA는 샌드위치 ELISA 포맷에 기초하여 확립되었다. 어세이에서, 표본(GH 또는 LR-융합), 대조군 및 알려지지 않은 것들(unknown)은 인간 GH 항체(mAb 10A7)로 생쥐 항체로 프리 코팅된 웰 내에서 비오틴-표지된 생쥐(biotin-labelled mouse) 항체와 함께 인간 GH(mAb 7F8)로 배양되었다. 어세이의 탐지 한계는 2.5 pg이고 어세이 안과 밖의 CV는 10% 미만(intra and inter assay CV<10%)이다. IGF-I ELISA는 DSL(DSL-10-2900 ACTIVE mouse/rat IGF-I kit; DSL Research Reagent, Oxfordshime, UK)로부터 구입하였다.

약동학적 연구. Janvier(Le Genest Saint Isle, France)의 7주령의 정상 Sprague Dawley rats이 약동학적 연구를 위해 사용되었다. Sc 또는 iv 투여(penile vein) 및 혈액 회수(안구동-orbital sinus)가 이소플루란(isoflurane) 마취하에 수행되었다. 쥐(n=4-6/group)는 rhGH 또는 LR-융합 0.1mg/kg으로 iv 또는 sc 주사되었다. 혈액 샘플은 후안구얼기(retro-orbital plexus)로 모아졌다. 혈청은 거둬들여져 어세이 될 때까지 -70℃에서 저장되었다. 약동학적 파라미터들은 비선형 최소제곱 근사법분석을 통해 구분된 모델들의 시간 대 호르몬 농도의 피팅값(fitting values)으로 측정되었다. 제거값들(clearance values)은 동물 무게로 표준화되었다. 동물 무게당 제거(clearance rate) 및 터미널 반감기(terminal half lives)는 iv bolus model fits로부터 얻어진 계수 및 지수를 사용하여 계산되었다.

영장류 약동학적 연구

테스트 시료 IB7v2 및 IB7v3은 11.9mM 인산 나트륨 및 칼륨, 137mM 염화나트륨, 2.7mM 염화칼륨, 0.01% 폴리소베이트 80(polysorbate 80)을 함유하고; 7.4로 pH가 조정된 용액내에서 조제되었다.

연구 설계

동물들은 매개물 그룹(vehicle group) 내의 3 수컷과 2개의 치료 그룹 내의 각 그룹당 4 수컷을 포함하는 4개의 치료 그룹들(1 매개체, 1IB7v2 시험그룹, 1IB7v3 시험그룹)로 배정되었다. 투여되는 도즈 레벨 및 부피는 아래의 표에 개시된 바와 같다.

혈액 샘플은 혈청 내의 적절한 테스트 재료의 농도를 결정하기 위하여 연구동안 모든 동물로부터 얻어졌다. 이 샘플들은 연구 동안 수차례의 시점에 취해졌다.

치료 종점 및 측정( Clinical endpoints and measurements )

IB7v2 및 IB7v3의 혈청 농도는 유효한 ELISA(validated ELISA)법을 사용하여 결정되었다. 각 단백질의 약동학적 프로파일은 WinNonlin Pro(v4.0.1) 소프트웨어를 사용한 시간 대 혈청 내 각 단백질의 농도를 플로팅하는 것에 의해 결정되었다.

성장 연구. 성장 연구는 뇌하수체 제거된 쥐를 사용하였고 Charles River Laboratories (Larbresle, France)의 Sprague Dawley rats에 수행되었다. 쥐들은 사육에 의한 4주에서 이소플루란 마취하에서 뇌하수체 제거되었고 성공적인 수술을 위한 체중 기준 이후에 1주 인도되었다. 동물들은 각각 우리에 넣어지고 실험 상태로 들어가기 전 남은 1주일 동안 쉬도록 하였다. 부형제의 주사 용액, rhGH 및 LR-융합은 2ml/kg을 초과하지 않는다. 매일 쥐들의 체중을 재었고 투여 프로토콜에 따라, 10일 동안 테스트 물질의 주사를 받았다.

LR -융합의 특성화. LR-융합의 형태는 hGH 수용체 mAbs 에 형태적으로 감응하는 16의 패널을 사용하여 검사된다. 변성, 네이티브 젤 및 웨스턴 블로팅이 LR-융합 및 GH에 비형태적으로 감응되어 수행된 웨스턴 블로팅을 분석하는 데에 사용되었다. 용액 내의 LR-융합 단백질의 형태는 Superose G200 분석 컬럼 및 분석적 초원심분리를 사용한 젤 필터에 의해 정의되었다. 분석적 초원심분리(analytical ultracentrifugation(AUC))는 침전속도(Analytical service, Dr Andy Barry, Astbury, Leeds University, Leeds, UK)에 의해 수행된다.

통계. 두 그룹은 그들의 편차가 정규 분포하는 경우 Student's test로 비교하여 또는 정규 분포하지 않는 경우 Student-Satterthwaite's test에 의해 비교된다. 분포는 F test로 테스트된다. 일방향 ANOVA(one-way ANOVA)는 3 또는 이상의 그룹을 비교하기 위해 사용되고, 유의도(level of significance)가 p<0.05 인 경우 각각의 비교는 Dunnett's test로 수행된다. 모든 통계적 테스트는 양쪽으로 5퍼센트의 유의도 수준이고, 결측값의 대치법은 사용되지 않았다.

예

LR -융합의 설계와 특성화

플렉서블 (Gly₄Ser)₄ 링커를 경유하여 GHR 세포외 도메인(exGHR1-238)의 A 및 B 도메인에 연결되는 인간 GH를 엔코딩하는 재조합 유전자가 생성되었다(도 1c). 이 LR-융합은 CHO 세포들에서 발현되고 >95% 순도(purity)에 이르는 GH 친화 매개(affinity media)에 대한 mAb 항체를 사용하여 정제되었다(도 2a). LR-융합은 16 형태적으로 감응하는 mAb들을 사용하여 ELISA에 의해 스크린되었다. 이 모든 mAb는 인간 혈청으로부터 유도된 GHBP와 비교할만한 친화도를 갖는 LR-융합에 묶인다. 쿠마시 염색(Coomassie staining)과 SDS-PAGE 젤의 웨스턴 블로팅은 LR-융합 단백질이 두 밴드 사이에서 대략 5kDa 차이로 대략 75kDa의 이중선으로 분리된 것을 보여준다. 네이티브 PAGE 젤 분석(도 2b)은 응집의 증거를 보이지 않는다. LR-융합은 두 개의 구별된 형태로 나타난다. 이 구별된 단백질 형태들, 빠른 (F) 및 느린(S) 형태들은 네이티브 PAGE 젤로부터 제거되고 제한 조건(reducing) 하에서 SDS-PAGE에 의해 재분석된다. 네이티브 PAGE로부터의 F 및 S 모두 75 kDa이중선을 구성한다(도 2c). 용액 내의 LR-융합의 두 형태의 존재의 증거는 분석적 젤 필터에 의해 확인되었다(도 2d). 이 결과들은 용액 내의 이합체로서 존재하는 LR-융합과 일치한다. 이것은 단량체의 크기가 75kDa에서 확인되는 분석적 초원심분리에 의해 확인된다.

생험관 내 바이오 어세이 및 약동학

LR-융합의 생체 내 생체 활성은 GH-특이 루시페라아제 리포터 어세이(GH-specific luciferase reporter assay)¹⁶를 사용하여 테스트되었다. LR-융합이 GH보다 더 높은 농도에서 최대의 반응을 자극함에도 불구하고, LR-융합은 이 통계 어세이 시스템에서 GH와 비교한 생체 활성의 약 10%를 갖는다(도 2e). LR-융합의 약동학적 프로파일은 1회의 피하(sc) 또는 정맥(iv) 주사 이후의 정상 쥐에 시험되었다(도 3). LR-융합은 투여 루트에 관계없이 지연된 제거(clearance)와 sc 투여이후 지연된 흡수를 보여준다. iv 블루스(bolus) 이후 LR-융합의 터미널 반감기는 21±2 시간 및 제거 3.3±0.9ml·h^-1·kg^-1이다. LR-융합의 제거는 GH² ^,12보다 300배 늦다. 1회의 sc 투여 후 LR-융합은 GH에 비해 지연된 피크(30 대 1시간)를 갖는다. GH가 6시간에서 탐지되지 못하는 반면 LR-융합은 8일에서 여전히 탐지될 수 있었다. 우리는 LR-융합의 예외적인 약동학이 크기에 영향이 있는지 시험하였다. 두 변종 LR-융합 분자들: 하나는 오직 B 도메인 exGHR(55kDa)에의 GH의 LR-융합(55kDa)이고 다른 하나는 exGHR에 연결된 탠덤(GH에 연결된)(100kDa),이 시험되었다. 55kDa과 100kDa 단백질들 모두 원래의 75kDa LR-융합에 비해 바이오어세이에서 증가된 작용제 활성을 보여주지만 양쪽 모두에서 iv투여 이후 4시간 미만의 순환 반감을 보여준다(사용된 샘플링 프로토콜이 더 긴 반감기를 가지므로 정확한 반감기의 결정은 불가능하다). 이 결과는 본래의 75kDa LR-융합의 예외적인 약동학이 분자 무게와 관련하여 단독으로 나타나지 않음을 확인한다.

두 연이은 t-0 및 t-336시간(14일)에서의 1mg/kg s/c 도즈 다음의 IB7v2 및 IB7v3의 영장류 연구에서의 약동학 프로파일은 도 9에 보여진다. 레벨은 빠르게 최대로 이르고 1시간 이하의 반감기를 갖는 본래의 인간 성장 인간에 대해 충분히 연장된 기간으로 감소하는 것이 주목될 수 있다. 레벨은 또한, 연이은 투약(dosing) 기간에 걸쳐 점선에 의해 정의된 바와 같이, 최소 유효 농도 이상으로 잘 유지된다.

LR -융합 성장 촉진의 GH 를 넘어선 우월성

생물학적 활성을 테스트하기 위해, LR-융합과 GH가 뇌하수체 제거된(GH-결핍) 쥐에 투여되었다. GH의 매일의 투여는 10일 이상의 연속적인 성장을 유도하였다. LR-융합은 격일의 sc 주사, 또는 10일간에 걸쳐 2회의 주사, 또는 1회의 주사 중 어느 것과 함께 GH와 비교되었다. 모든 실험에서 GH와 LR-융합의 동일한 몰의 도즈가 10일 기간에 걸쳐 주어진 동일한 총 도즈로 사용되었다: 220㎍/ kg / day , 최대 성장 반응을 얻기 위해 이전에 사용된 도즈¹²와 유사한 10일에 걸쳐 대략 10nmol. LR-융합은 동일한 주사 프로토콜에서 GH보다 크고 매일의 GH 주사 이후 보여진 것과 유사한 체중 획득에서의 증가를 유도한다(도 4 및 표). GH는 오직 주사 이후 24시간내의 체중 획득을 촉진한다. 반면, LR-융합은 1회의 주사가 주어진 경우에도 10일에 걸쳐 연속적인 체중 획득을 나타냈다. 성장의 유사한 패턴은 대퇴부(femur), 경골(tibia), 흉선(thymus), 간(liver) 및 신장(kidney)에서 보여진다(표). 모든 동물로부터 10일 끝의 출혈은 GH-의존 바이오표지(GH-dependent biomarker), 인슐린-유사 성장요인(insulin-like growth factor-I (IGF-I)), 및 GH 및 LR-융합 레벨을 위해 분석되었다(표). IGF-I 레벨은 심지어 1회의 주사 이후에도 LR-융합 투여이후 충분히 상승되었고 GH의 매일의 주사 이후 보여진 것보다 크게 증가되었다. GH-융합 레벨은 1회의 주사 이후 탐지가능한 10일인 반면 GH의 레벨은 모든 주사 처방 이후 최종의 출혈에서 탐지될 수 없었다.

우리는 GH의 LR-융합이 강력한 작용제를 생성하는 점을 설명했다. 우리는 헤드-투-테일 상호 이합체(head-to-tail reciprocal dimer)를 형성하는 분자의 능력이 이것의 강화된 생체 내(in vivo) 생활성을 갖게 하는 것을 제안한다.

LR-융합의 설계는 GHR¹⁷의 알려진 결정구조에 기초한다. 우리는 4개의 반복(80Å의 예상된 길이)의 플렉서블 Gly₄Ser 링커를 사용하였다. 이 긴 링커는 GH와 GHR사이의 상대적으로 플렉서블한 밧줄로 선택되고 GH 모이어티는 세포 표면 GHR과 여전히 상호작용할 수 있다(도 1e). 유사한 Gly₄Ser 링커는 면역원성¹⁸의 안정성과 결핍때문에 재조합 단일 사실 Fv 항체 생성물에서 사용되어왔다.

LR-융합은 대략적으로 본래의 PAGE 젤 및 젤 필터 내에서 두 개의 구분된 종, 잠재적으로 단량체외 이합체로 나타나며 폴딩된다(folded). 이합체의 존재는 분석적 초원심분리에 의해 확인되었다. 우리는 각 LR-융합 분자 내의 GH 모이어티와 다른 것 내의 수용체 모이어티로의 분자사이 결합을 통해 상호 헤드-투-테일 이합체를 형성하는 것을 제안한다(도 1d). LR-융합은 SDS-PAGE에서 아마도 글리코실화때문에, 5kDa의 분자 무게 차이를 가지고, 2개의 밴드로 나타났다.

LR-융합은 GH에 비해 생체 내에서 더욱 강력하지만 시험관 내 생활성은 10배 적다. 이 모순점은 LR-융합의 이합체화(dimerisation)에 기여될 수 있다. 통계에서 이합체의 시험관 내 바이오 어세이는 본래의 GH/GHBP 복합체²¹ ^{, 22}에서 보여진 것처럼 생물학적으로 비활성이다. 하지만, 생체 내 이합체는 생물학적으로 활성 단량체와 평형을 이루는 비활성 호르몬의 저장소를 제공한다.

쥐에의 iv 투여 이후 LR-융합은 GH에 비해 300배 감소된 제거를 가졌고 이전에 보고된 GH/GHBP 복합체 또는 컨쥬게이트(conjugate)¹¹ ^{, 12}에 비해 30배 감소된 제거를 가졌다. 우리는 55kDa의 하나와 다른 100kDa의 두 개의 LR-융합을 시험했다. 어떤 단백질도 동일한 지연 제거를 보이지 않았다. 우리는 따라서 LR-융합 지연 제거에 책임이 있는 것은 단량체의 크기 혼자가 아닌 것으로 결론내린다. GH 제거에의 신장 기여(renal contribution)는 인간에서 25-53% 및 쥐에서 67%로 평가된다. 그러므로 감소하는 신장 제거 단독으로 대략 GH 제거를 반감시킬 것으로 예측될 수 있다. GH 제거가 GH 수용체 메카니즘에 상대적으로 독립적임에 따라, 단백질 가수분해(proteolysis)가 주요 기여자로 추측된다. 우리는 우리의 LR-융합의 크게 감소된 제거가 단백질 가수분해를 방지하는 감소된 신장 제거 및 형태 모두에 기여할 수 있으리라고 제안한다.

뇌하수체 제거된 쥐에서 10일동안 단 한번 주어진 우리의 LR-융합은 GH의 매일 주사로 보여진 체중과 유사한 증가를 나타냈다. 1:1 GH 증대 성장과의 복합체로써 공동 투여된 GHBP가 이전에 보여졌다¹². 같은 프로토콜을 사용하여 GH/GHBP 복합체는 매일의 주사가 요구되는 반면 우리의 LR-융합 단백질은 1회의 주사 이후 10일에 걸친 성장을 촉진하고 우리의 LR-융합은 GH/GHBP 공동-투여 이후에 보여진 것보다 더 높은 IGF-I 레벨을 발생시켰다. GH는 GHBP와 컨쥬게이션될 때 생물학적으로 비활성이고 비 공유결합적으로 연결된 복합체는 LR-융합의 안정성이 결여된다¹¹ ^{, 12}. LR-융합의 보다 큰 생물학적 활동은 이것의 증가된 안정도 및 단량체 형태에서 GHR을 활성화하는 능력과 관련있을 수 있다.

인간 IGF-I 레벨은 일반적으로 GH 활성에 좋은 바이오표지이다. 하지만, 뇌하수체 제거된 쥐에서 IGF-I 레벨은 GH에 반응한 성장을 언제나 반영하지는 않는다² ^{, 12}. LR-융합 투여는 분명히 GH 주사에 비교하여 향상된 IGF-I 레벨을 야기한다. 우리는 뇌하수체 제거된 쥐에서의 성장의 GH의 도즈 반응과 IGF-I 차이를 제안한다. 그러므로, 우리의 연구에서 사용된 LR-융합의 도즈는 최대 성장 반응을 촉진하는 데에 요구되는 것을 초과하지만, 여전히 IGF-I 생성을 자극할 수 있다. 쥐는 인간에 요구될 도우징(dosing) 처방을 예견하는 것을 어렵게 하는 사람보다 빠른 신장 제거를 보여준다. 하나는 LR-융합이 낮은 도즈에서 GH보다 덜 빈번하게 사용될 수 있을 것을 기대한다.

혈청 알부민 및 페길화와 함께 사이토카인의 융합은 순환 반감기를 연장하기 위해 사용되었다² ^,26. 우리의 LR-융합 분자는 이들 두 접근을 넘는 주요한 이점이 있다. 페길화는 단백질의 제거의 지연에 높은 효과가 있지만 화학적 변형을 요구하고 이것의 수용체의 리간드의 친화도를 떨어뜨린다². 그러므로, 우리의 LR-융합으로 유사한 도즈가 본래의 GH보다 더 큰 효과를 갖는 반면 페길화로 더 큰 도즈가 요구된다. 알부멘(albumen)과 함께 하는 GH 융합에 관하여, 알부트로핀(Albutropon)은 치료적 연구로부터 제외된 것으로 이해됨에 따라 상대적으로 조금 알려져있다. 일 PK 연구² ⁶에서, 우리 LR-융합은 GH¹²(본래의 인간 GH에 대해:clearance value of 18.6 ml/min.kg = 1116 ml/hr.kg and Vd = 336 ml/kg 따라서 T1/2 = 0.693x336/1116 = 0.21 hrs.)로 발행된 것에 비해 100배 긴 터미널 반감기를 갖는 반면 알부트로핀은 GH에 비한 주어진 s.c.에서 6배 더 긴 터미널 반감기를 갖는다. GH는 자연적으로 순환 exGHR에 결합되므로 우리 LR-융합은 다른 단백질과의 융합과 비교하여 면역원적이지 않을 것이고, 실리코 T 세포 에피토프 스크리닝에서 LR-융합 분자 내의 어느 사이트에서도 나타나지 않았다(데이터 미확인).

참고문헌:

1. Woodhouse, L.J., Mukherjee, A., Shalet, S.M. & Ezzat, S. The influence of growth hormone status on physical impairments, functional limitations, and health-related quality of life in adults. Endocr Rev. 27, 287-317 (2006).

2. Clark, R. et al. Long-acting growth hormones produced by conjugation with polyethylene glycol. Journal of Biological Chemistry. 271, 21969-21977 (1996).

3. Cook, D.M. et al. The pharmacokinetic and pharmacodynamic characteristics of a long-acting growth hormone (GH) preparation (nutropin depot) in GH-deficient adults. J Clin Endocrinol Metab. 87, 4508-14 (2002).

4. Reiter, E.O. et al. A multicenter study of the efficacy and safety of sustained release GH in the treatment of naive pediatric patients with GH deficiency. J Clin Endocrinol Metab. 86, 4700-6 (2001).

5. Jostel, A., Mukherjee, A., Alenfall, J., Smethurst, L. & Shalet, S.M. A new sustained-release preparation of human growth hormone and its pharmacokinetic, pharmacodynamic and safety profile. Clin Endocrinol (Oxf). 62, 623-7 (2005).

6. Laursen, T. et al. Long-term effects of continuous subcutaneous infusion versus daily subcutaneous injections of growth hormone (GH) on the insulin-like growth factor system, insulin sensitivity, body composition, and bone and lipoprotein metabolism in GH-deficient adults. J Clin Endocrinol Metab. 86, 1222-8 (2001).

7. Laursen, T., Jorgensen, J.O., Jakobsen, G., Hansen, B.L. & Christiansen, J.S. Continuous infusion versus daily injections of growth hormone (GH) for 4 weeks in GH-deficient patients. J Clin Endocrinol Metab. 80, 2410-8 (1995).

8. Muller-Newen, G., Kohne, C. & Heinrich, P.C. Soluble receptors for cytokines and growth factors. [Review] [58 refs]. International Archives of Allergy & Immunology. 111, 99-106 (1996).

9. Baumann, G., Amburn, K.D. & Buchanan, T.A. The effect of circulating growth hormone-binding protein on metabolic clearance, distribution, and degradation of human growth hormone. J Clin Endocrinol Metab. 64, 657-60 (1987).

10. Baumann, G. Growth hormone heterogeneity: genes, isohormones, variants, and binding proteins. Endocrine Reviews 12, 424-449 (1991).

11. Baumann, G., Shaw, M.A. & Buchanan, T.A. In vivo kinetics of a covalent growth hormone-binding protein complex. Metabolism. 38, 330-3 (1989).

12. Clark, R.G. et al. Recombinant human growth hormone (GH)-binding protein enhances the growth-promoting activity of human GH in the rat. Endocrinology. 137, 4308-4315 (1996).

13. Baumann, G. Growth hormone binding protein--errant receptor or active player? [editorial]. Endocrinology. 136, 377-378 (1995).

14. Ayling, R.M. et al. A dominant-negative mutation of the growth hormone receptor causes familial short stature. Nature Genetics. 16, 13-14 (1997).

15. Ross, R.J. et al. A short isoform of the human growth hormone receptor functions as a dominant negative inhibitor of the full-length receptor and generates large amounts of binding protein. Molecular Endocrinology. 11, 265-273 (1997).

16. Ross, R.J.M. et al. Binding and functional studies with the growth hormone receptor antagonist, B2036-PEG (pegvisomant), reveal effects of pegylation and evidence that it binds to a receptor dimer. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. 86, 1716-1723 (2001).

17. Cunningham, B.C. et al. Dimerization of the extracellular domain of the human growth hormone receptor by a single hormone molecule. Science. 254, 821-825 (1991).

18. Huston, J.S., Tai, M.S., McCartney, J., Keck, P. & Oppermann, H. Antigen recognition and targeted delivery by the single-chain Fv. Cell Biophys. 22, 189-224 (1993).

19. Herington, A.C., Smith, A.I., Wallace, C. & Stevenson, J.L. Partial purification from human serum of a specific binding protein for human growth hormone. Mol Cell Endocrinol. 53, 203-9 (1987).

20. Frick, G.P., Tai, L.R., Baumbach, W.R. & Goodman, H.M. Tissue distribution, turnover, and glycosylation of the long and short growth hormone receptor isoforms in rat tissues. Endocrinology. 139, 2824-30 (1998).

21. Mannor, D.A., Winer, L.M., Shaw, M.A. & Baumann, G. Plasma growth hormone (GH)-binding proteins: effect on GH binding to receptors and GH action. J Clin Endocrinol Metab. 73, 30-4 (1991).

22. Lim, L., Spencer, S.A., McKay, P. & Waters, M.J. Regulation of growth hormone (GH) bioactivity by a recombinant human GH-binding protein. Endocrinology. 127, 1287-91 (1990).

23. Haffner, D., Schaefer, F., Girard, J., Ritz, E. & Mehls, O. Metabolic clearance of recombinant human growth hormone in health and chronic renal failure. J Clin Invest. 93, 1163-71 (1994).

24. Johnson, V. & Maack, T. Renal extraction, filtration, absorption, and catabolism of growth hormone. American Journal of Physiology 233, F185-F196 (1977).

25. Veldhuis, J.D. et al. Impact of experimental blockade of peripheral growth hormone (GH) receptors on the kinetics of endogenous and exogenous GH removal in healthy women and men. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 87, 5737-5745 (2002).

26. Osborn, B.L. et al. Albutropin: a growth hormone-albumin fusion with improved pharmacokinetics and pharmacodynamics in rats and monkeys. Eur J Pharmacol 456, 149-58 (2002).

27. de Vos, A.M., Ultsch, M. & Kossiakoff, A.A. Human growth hormone and extracellular domain of its receptor: crystal structure of the complex. Science 255, 306-312 (1992).

<110> Asterion Limited <120> Growth Hormone Fusion Proteins <150> US 60/951,122 <151> 2007-07-20 <150> GB0717985.6 <151> 2007-09-14 <160> 12 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1455 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> growth hormone/receptor fusion protein <400> 1 atggctacag gctcccggac gtccctgctc ctggcttttg gcctgctctg cctgccctgg 60 cttcaagagg gcagtgcctt cccaaccatt cccttatcca ggctttttga caacgctatg 120 ctccgcgccc atcgtctgca ccagctggcc tttgacacct accaggagtt tgaagaagcc 180 tatatcccaa aggaacagaa gtattcattc ctgcagaacc cccagacctc cctctgtttc 240 tcagagtcta ttccgacacc ctccaacagg gaggaaacac aacagaaatc caacctagag 300 ctgctccgca tctccctgct gctcatccag tcgtggctgg agcccgtgca gttcctcagg 360 agtgtcttcg ccaacagcct ggtgtacggc gcctctgaca gcaacgtcta tgacctccta 420 aaggacctag aggaaggcat ccaaacgctg atggggaggc tggaagatgg cagcccccgg 480 actgggcaga tcttcaagca gacctacagc aagttcgaca caaactcaca caacgatgac 540 gcactactca agaactacgg gctgctctac tgcttcagga aggacatgga caaggtcgag 600 acattcctgc gcatcgtgca 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Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser 260 265 270 Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe 275 280 285 Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His Gly Thr Lys Asn Leu Gly 290 295 300 Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln 305 310 315 320 Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys 325 330 335 Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys 340 345 350 Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp 355 360 365 Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu 370 375 380 Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu 385 390 395 400 Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr 405 410 415 Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Met Met Asp 420 425 430 Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys 435 440 445 Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr 450 455 460 Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln 465 470 475 480 <210> 10 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> growth hormone/receptor fusion <400> 10 Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg 1 5 10 15 Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu 20 25 30 Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro 35 40 45 Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg 50 55 60 Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu 65 70 75 80 Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val 85 90 95 Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp 100 105 110 Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu 115 120 125 Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser 130 135 140 Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr 145 150 155 160 Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe 165 170 175 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Gly 180 185 190 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 195 200 205 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala 210 215 220 Ala Ile Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly 225 230 235 240 Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser 245 250 255 Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His 260 265 270 Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn 275 280 285 Thr Gln Glu Trp Thr Gln Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser 290 295 300 Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp 305 310 315 320 Ile Pro Tyr Cys Ile Lys Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu 325 330 335 Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala 340 345 350 Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp 355 360 365 Ile Gln Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly 370 375 380 Trp Met Val Leu Glu Tyr Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr 385 390 395 400 Lys Trp Lys Met Met Asp Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr 405 410 415 Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln 420 425 430 Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr 435 440 445 Leu Pro Gln Met Ser Gln 450 <210> 11 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> growth hormone/receptor fusion <400> 11 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu 20 25 30 Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln 35 40 45 Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys 50 55 60 Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe 65 70 75 80 Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys 85 90 95 Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp 100 105 110 Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val 115 120 125 Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu 130 135 140 Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg 145 150 155 160 Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser 165 170 175 His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe 180 185 190 Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys 195 200 205 Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr 210 215 220 Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro 225 230 235 240 Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg 245 250 255 Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His 260 265 270 His Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg 275 280 285 Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val 290 295 300 Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile 305 310 315 320 Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp 325 330 335 Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile 340 345 350 Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala 355 360 365 Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys 370 375 380 Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu 385 390 395 400 Thr Lys Trp Lys Met Met Asp Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val 405 410 415 Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys 420 425 430 Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val 435 440 445 Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln 450 455 <210> 12 <211> 429 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> growth hormone/receptor fusion <400> 12 Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg 1 5 10 15 Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu 20 25 30 Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro 35 40 45 Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg 50 55 60 Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu 65 70 75 80 Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val 85 90 95 Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp 100 105 110 Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu 115 120 125 Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser 130 135 140 Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr 145 150 155 160 Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe 165 170 175 Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Phe 180 185 190 Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser 195 200 205 Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro 210 215 220 Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His 225 230 235 240 Trp Thr Asp Glu Val His His Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Ile Gln 245 250 255 Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln Glu Trp Lys 260 265 270 Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn 275 280 285 Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys Leu Thr Ser 290 295 300 Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu Ile Val 305 310 315 320 Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser 325 330 335 Leu Thr Gly Ile His Ala Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg 340 345 350 Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr Glu Leu Gln 355 360 365 Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Met Met Asp Pro Ile Leu 370 375 380 Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu 385 390 395 400 Val Arg Val Arg Ser Lys Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe 405 410 415 Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln 420 425

Claims

ⅰ) 서열 식별번호:1에 표현된 핵산 서열
ⅱ) 서열 식별번호:2에 표현된 핵산 서열
ⅲ) 서열 식별번호:3에 표현된 핵산 서열
ⅳ) 서열 식별번호:4에 표현된 핵산 서열; 또는
ⅴ) 서열 식별번호: 1, 서열 식별번호: 2, 서열 식별번호:3, 또는 서열 식별번호:4로의 엄격한 혼성화 조건하에서 혼성화되는 핵산 서열을 포함하는 핵산 서열에서 선택되되, 성장 호르몬 수용체 작용제 활성을 갖는 핵산 분자.
청구항 1에 있어서,
서열 식별번호:1에 나타난 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자.
청구항 1에 있어서,
서열 식별번호:2에 나타난 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자.
청구항 1에 있어서,
서열 식별번호:3에 나타난 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자.
청구항 1에 있어서,
서열 식별번호:4에 나타난 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자.
청구항 1에 따른 핵산 분자에 의해 엔코딩되는 폴리펩타이드.
ⅰ) 서열 식별번호:5에 표현된 아미노산 서열;
ⅱ) 서열 식별번호:6에 표현된 아미노산 서열;
ⅲ) 서열 식별번호:7에 표현된 아미노산 서열;
ⅳ) 서열 식별번호:8에 표현된 아미노산 서열;
ⅴ) 서열 식별번호:9에 표현된 아미노산 서열;
ⅵ) 서열 식별번호:10에 표현된 아미노산 서열;
ⅶ) 서열 식별번호:11에 표현된 아미노산 서열;
ⅷ) 서열 식별번호:12에 표현된 아미노산 서열;로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하되, 성장 호르몬 수용체 작용제 활성을 갖는 폴리펩타이드.
청구항 7에 있어서,
서열 식별번호:5에 표현된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
청구항 7에 있어서,
서열 식별번호:6에 표현된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
청구항 7에 있어서,
서열 식별번호:7에 표현된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
청구항 7에 있어서,
서열 식별번호:8에 표현된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
청구항 7에 있어서,
서열 식별번호:9에 표현된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
청구항 7에 있어서,
서열 식별번호:10에 표현된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
청구항 7에 있어서,
서열 식별번호:11에 표현된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
청구항 7에 있어서,
서열 식별번호:12에 표현된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
서열 식별번호: 5를 포함하는 두 개의 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체.
서열 식별번호: 6을 포함하는 두 개의 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체.
서열 식별번호: 7을 포함하는 두 개의 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체.
서열 식별번호: 8을 포함하는 두 개의 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체.
서열 식별번호: 9를 포함하는 두 개의 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체.
서열 식별번호: 10을 포함하는 두 개의 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체.
서열 식별번호: 11을 포함하는 두 개의 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체.
서열 식별번호: 12를 포함하는 두 개의 폴리펩타이드를 포함하는 동종이합체.
청구항 1의 핵산 분자를 포함하는 벡터
청구항 24에 있어서, 상기 벡터는 발현 벡터인 벡터.
청구항 25에 따른 벡터로 트렌스펙션된(tranfected) 또는 트렌스포메이션된(transformed) 세포.
청구항 26에 있어서, 상기 세포는 진핵생물의 세포인 세포.
청구항 26에 있어서, 상기 세포는 원핵생물의 세포인 세포.
부형제(excipient) 또는 운반제(carrier)를 포함하는 청구항 7에 따른 폴리펩타이드를 포함하는 제약학적 조성물.
청구항 7에 따른 적어도 하나의 폴리펩타이드의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 성장 호르몬 결핍으로부터의 고통받는 인간 대상을 치료하는 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 폴리펩타이드는 정맥 투여되는 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 폴리펩타이드는 피하 투여되는 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 폴리펩타이드는 2일 간격으로 투여되는 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 폴리펩타이드는 일주일 간격으로 투여되는 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 폴리펩타이드는 2주간격으로 투여되는 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 폴리펩타이드는 매달 투여되는 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 성장 호르몬 결핍은 아동기 성장 호르몬 결핍인 방법.
청구항 30에 있어서,
상기 성장 호르몬 결핍은 성인 성장 호르몬 결핍인 방법.