CN101679504B - 生长激素融合蛋白 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了体内稳定性和活性增加的生长激素融合蛋白、编码所述蛋白的核酸分子以及使用所述蛋白治疗生长激素缺乏症的方法。

Description

生长激素融合蛋白
本发明涉及生长激素融合蛋白、编码所述蛋白的核酸分子以及使用所述蛋白的治疗方法。
与受体相互作用产生生化应答(biochemical response)的配体被称为激动剂，并且那些防止或阻碍生化应答的配体被称为拮抗剂。例如，细胞特异性生长因子是充当激动剂并结合位于细胞表面的受体的配体。由配体特异性结合而导致的受体激活，通过激活细胞内信号级联促进细胞增殖，其中，该信号级联导致细胞周期特异性基因的表达以及激活静态细胞从而增殖。
被称为细胞因子的一组生长因子涉及许多不同的细胞功能。其包括调节免疫系统、调控能量代谢以及控制生长和发育。细胞因子通过表达于靶细胞的细胞表面的受体介导其功能。细胞因子受体分成三种不同的亚类。1型(生长激素家族)受体的特征为位于其细胞内区域的氨基末端部分的4个保守半胱氨酸残基和存在于C-末端部分的Trp-Ser-Xaa-Trp-Ser基序。重复的Cys基序也存在于2型(干扰素家族)和III型(中瘤坏死因子家族)中。
生长激素(GH)是对儿童期的线性生长和成人的正常身体组成重要的合成代谢细胞因子激素1。目前的GH替代治疗方案要求每天一次的皮下注射，这是不方便并且昂贵的。已经采取许多方法制备长效制剂，其包括聚乙二醇化2和缓释制剂3-5。聚乙二醇化的缺点在于其降低激素对受体的亲和力2，并且用后续纯化进行化学修饰是昂贵的。缓释制剂已经证明是有效的4-7，但是这些GH制剂的特征为突出的早期释放(early-release)谱，这导致超生理(supraphysiological)GH水平3，制备是昂贵的并且注射可能是痛苦的4。亟需将制造成本降至最低程度、具有好的药物动力学谱、容易给药并且对患者是可以接受的细胞因子制剂。
GH通过细胞表面1型细胞因子受体(GHR)起作用。与其它细胞因子受体一样，GHR的胞外区域被蛋白酶剪切并且作为结合蛋白(GHBP)循环8。在生理条件下，GH以1∶1的摩尔比被GHBP在循环中部分地结合并且该复合物是无生物活性的，从而避免清除和降解9，10。GH与GHBP的交联复合物延迟了清除但是没有生物活性11。以1∶1的比率同时给予分别纯化的GHBP和GH能增强GH的合成代谢作用12。因此，与许多激素系统一样，循环中的结合提供了与活性的游离激素处于平衡的无活性激素循环储存13。
如生长激素的细胞因子激素的血浆半衰期不长并要求经常给药。例如，生长激素(GH)替代疗法包括每天注射。与其它细胞因子一样，胞外区域GH受体作为结合蛋白循环并且自然地延长了GH的生物半衰期。
本公开涉及GH与其胞外区域受体的配体-受体融合物(LR-融合物)生物作用。从哺乳动物细胞培养物纯化这种遗传工程处理的LR-融合蛋白。在大鼠中，LR-融合物的清除率比天然GH的清除率降低了300倍，并且一次给药促进生长达10天，这远高于用天然GH所观察到的效果。降低的清除率在灵长动物模型中可以重现。LR-融合物形成相互头尾结合的二聚体，其提供如GH与其结合蛋白天然发生的无活性激素的储存。
根据本发明的一方面，提供了包含核酸序列的核酸分子，该核酸序列选自：
i)SEQ ID NO：1所示的核酸序列；
ii)SEQ ID NO：2所示的核酸序列；
iii)SEQ ID NO：3所示的核酸序列；
iv)SEQ ID NO：4所示的核酸序列；或
v)核酸分子，其包含在严紧杂交条件下与SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4杂交的核酸序列，并且该核酸序列编码具有生长激素受体激动剂活性的多肽。
当两个互补核酸分子相互间产生许多氢键时，发生核酸分子的杂交。杂交的严紧性能根据核酸所处的环境条件、杂交方法的特点及所用的核酸分子的成分和长度而变化。Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual(分子克隆：试验手册)(Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，2001)和Tijssen，LaboratoryTechniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization withNucleic Acid Probes Part I，Chapter 2(生物化学和分子生物学试验技术-核酸探针杂交，第一部分，第二章)(Elsevier，New York，1993)讨论了为达到特定程度的严紧性，所要求的杂交条件的计算。Tm是核酸分子的一条链的50％与其互补链杂交的温度。下文是一组示例性但非限制性的杂交条件：
极高严紧性(允许至少90％相同的序列杂交)
杂交：5×SSC于65℃达16小时
洗涤两次：2×SSC每次在室温(RT)达15分钟
洗涤两次：0.5×SSC每次于65℃达20分钟
高严紧性(允许至少80％相同的序列杂交)
杂交：5×-6×SSC于65℃-70℃达16-20小时
洗涤两次：2×SSC每次在室温(RT)达5-20分钟
洗涤两次：1×SSC每次于55℃-70℃达30分钟
低严紧性(允许至少50％相同的序列杂交)
杂交：6×SSC在RT至55℃达16-20小时
至少洗涤两次：2×-3×SSC每次在RT至55℃达20-30分钟。
在本发明的优选实施方案中，所述核酸分子包含或由SEQ ID NO：1所示的核酸序列组成。
在本发明的优选实施方案中，所述核酸分子包含SEQ ID NO：2所示的核酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述核酸分子包含SEQ ID NO：3所示的核酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述核酸分子包含SEQ ID NO：4所示的核酸序列或由其组成。
根据本发明的一方面，提供了由本发明的核酸编码的多肽。
根据本发明的另一方面，提供了包含氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列选自：
i)SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列；
ii)SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列；
iii)SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列；
iv)SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列；
v)SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列；
vi)SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列；
vii)SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列；
viii)SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列；其中所述多肽具有生长激素受体激动剂活性。
在本发明的优选实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列或由其组成。
在本发明的优选实施方案中，所述多肽包含SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含两个多肽的同型二聚体，该多肽包含SEQ ID NO：5或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含两个多肽的同型二聚体，该多肽包含SEQ ID NO：6或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含两个多肽的同型二聚体，该多肽包含SEQ ID NO：7或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含两个多肽的同型二聚体，该多肽包含SEQ ID NO：8或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含两个多肽的同型二聚体，该多肽包含SEQ ID NO：9或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含两个多肽的同型二聚体，该多肽包含SEQ ID NO：10或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含两个多肽的同型二聚体，该多肽包含SEQ ID NO：11或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含两个多肽的同型二聚体，该多肽包含SEQ ID NO：12或由其组成。
根据本发明的另一方面，提供了包含本发明的核酸分子的载体。
在本发明的优选实施方案中，所述载体是适于表达本发明的核酸分子的表达载体。
本发明的包含核酸的载体不需要包含启动子或其它调节序列，具体地，如果该载体被用于将核酸导入细胞以重组入基因组而实现稳定的转染。优选地，所述载体中的核酸可操作地连接至在宿主细胞中转录的合适启动子或其它调节元件。所述载体可以是在多种宿主中起作用的双功能表达载体。“启动子”是转录起始位点上游的核苷酸序列，其含有转录要求的所有调节区。合适的启动子包括组成的、组织特异性的、诱导的、发育的或其它在真核或原核细胞中表达的启动子。“可操作地连接”表示连接成为相同核酸分子的部分，合适地放置和定向以起始从启动子的转录。DNA可操作地连接至启动子即是在启动子的“转录起始调节之下”。
在优选的实施方案中，启动子是组成的、诱导的或可调节的启动子。
根据本发明的另一方面，提供了用本发明的核酸分子或载体转染或转化的细胞。
优选地，所述细胞是真核细胞。或者，所述细胞是原核细胞。
在本发明的优选实施方案中，所述细胞选自真菌细胞(例如，Pichiaspp、Saccharomyces spp、Neurospora spp)、昆虫细胞(例如，Spodopteraspp)、哺乳动物细胞(例如，COS细胞、CHO细胞)、植物细胞。
根据本发明的另一方面，提供了包含本发明的多肽的药物组合物，其含有赋形剂或载体。
在本发明的优选实施方案中，所述药物组合物与另外的治疗剂组合。
给药时，以药物可接受的制剂给予本发明的药物组合物。这些制剂通常含有药物可接受浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、相容的载体以及任选的其它治疗剂。
能以包括注射在内的常规途径进行本发明的药物组合物的给药。给药和施用可以是，例如，口服、静脉内、腹膜内、肌肉内、腔内、关节内、皮下、局部(眼)、真皮(例如，插入皮肤或粘膜的脂溶性乳膏)、透皮或鼻内。
以有效量给予本发明的药物组合物。“有效量”是单独或与其它剂量或协同药物一起，产生期望的应答的药物/组合物的量。这可可以仅包括暂时延缓疾病的进展，尽管更优选地，其包括永久地停止疾病的进展。这能通过常规方法进行监测或根据诊断方法进行监测。
能根据不同的参数选择给予个体的药物组合物的剂量，特别是，根据所用的给药方式和个体的情况(即年龄、性别)。给药时，以药物可接受的量和药物可接受的组成应用本发明的药物组合物。使用时，药物盐应当是药物可接受的，但是可以方便地使用非药物可接受的盐制备其药物可接受的盐，非药物可接受的盐并不被排除在本发明的范围之外。这些药物学和药物可接受的盐包括但不限于从下述酸制备的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。而且，药物可接受的盐能制备成碱金属或碱土金属盐，例如，钠、钾或钙盐。
如需要，可以将药物组合物与药物可接受的载体组合。本文所用的术语“药物可接受的载体”表示适合向人给药的一种或多种相容的固体或液体填充物、稀释剂或封装物质。术语“载体”表示天然或合成的有机或无机成分，活性成分与其组合以促进应用。所述药物组合物的组分还能以没有基本上削弱期望的药物疗效的相互作用的方式，与本发明的分子以及互相共混合。
药物组合物可以含有合适的缓冲剂，其包括乙酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐以及磷酸盐。
任选地，药物组合物还可以含有合适的防腐剂，例如苯扎氯胺、氯丁醇、对羟基本甲酸酯和乙基汞硫代水杨酸钠。
药物组合物可以方便地表现为单位剂量形式并且可以通过制药领域中熟知的方法的任何一种进行制备。所有的方法包括使活性成分与构成一种或多种附属成分的载体相结合的步骤。通常，通过均匀并充分地使活性化合物与液体载体、细碎固体载体或这两者相结合，然后，若需要，成形产物，制备组合物。
适合口服给药的组合物可以为分离的单位，例如，每一个含有预定量活性化合物的胶囊剂、片剂、锭剂。其它组合物包括水性液体或诸如糖浆、酏剂或乳剂的非水性液体形式的悬浮液。
适合胃肠外给药的组合物通常地包括无菌水性或非水性制剂，其优选地与受者的血液等渗。可以利用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂，根据已知的方法制备这种制剂。无菌注射制剂还可以是无菌注射溶液或无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂的悬浮液，例如，1，3-丁二醇的溶液。可以使用的可接受溶剂中有水、林格氏溶液(Ringer′s solution)和等渗氯化钠溶液。另外，常规地使用无菌的不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为了该目的，可以使用包括合成单-或二-甘油酯在内的任何温和的不挥发性油。另外，诸如油酸的脂肪酸可用于制备注射剂。能在Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明登氏制药科学)，MackPublishing Co.，Easton，PA中找到适合口服、皮下、静脉内、肌肉内给药的载体配方。
根据本发明的另一方面，提供了治疗患有生长激素缺乏症的人个体的方法，其包括给予有效量的至少一种本发明的多肽。
在本发明的优选方法中，所述多肽被静脉内给药。
在本发明的可选的优选方法中，所述多肽被皮下给药。
在本发明的另一优选方法中，所述多肽以2天的间隔给药，优选地，以每周、每两周或每月的间隔进行所述多肽的给药。
在本发明的优选方法中，所述生长激素缺乏症是儿童期生长激素缺乏症。
在本发明的优选方法中，所述生长激素缺乏症是成人生长激素缺乏症。
所述生长激素缺乏症的治疗包括，例如，特纳氏综合征(TurnersSyndrome)、普拉德-威利综合征(Prader Willi Syndrome)、子宫内生长迟缓、特发性身材矮小、肾衰竭、例如化疗治疗和AIDS治疗期间的异化状态的治疗。
在全部的描述和本说明书的权利要求书中，词语“包含(comprise)”和“包含(contain)”及其诸如“包含(comprising)”和“包含(comprise)”的变化形式表示“包括但不限于”并且不意图(并且不)排除其它部分、添加物、组分、整体或步骤。
在本说明书的全部的描述和权利要求书中，除非上下文要求，单数形式包括复数形式。具体地，当使用不定冠词时，除非上下文要求，说明书被理解为考虑复数形式以及单数形式。
在本发明具体的方面、实施方案或实施例中描述的特性、整体、特征、化合物、化学部分或基团应理解为应用于本文所述的任何其它方面、实施方案或实施例，除非与其不相容。
现在将仅通过实施例并参考下文的附图来描述本发明的实施方案：
图1显示了GH、GH结合蛋白(GHBP)、LR-融合物以及基于公开结构的GHR27(pdb3HHR)的关系示意图：(a)1∶1的复合物中GH结合GHBP的天然构型。(b)GH，其从GHBP复合物释放，结合至细胞表面GH受体。(c)GH连接至胞外GHR(exGHR)的单体形式的LR-融合物分子。(d)LR-融合物形成相互头-尾结合的二聚体的模型，其中一个分子中的GH结合另一分子中的exGHR。最后，(e)单体形式LR-融合物能结合并激活GH受体。
图2显示了LR-融合物的特征和生物活性：(a)显示了通过SDS-PAGE，然后用考马斯亮蓝染色(coomassie staining)(CS)和利用GH特异性抗体的蛋白质印迹法(western blotting)(WB)分离的LR-融合物。LR-融合物约为75kDa并且分离成相差约5kDa的两条条带。(b)显示了非变性PAGE分离的LR-融合物，其显示有快(F)和慢(S)的两种蛋白形式。(c)切除来自非变性PAGE的各条带(F和S)并通过还原条件SDS-PAGE进一步分离，然后进行使用GH特异性抗体的蛋白质印迹法。两条条带(F和S)都跑(run)在约75kDa处并分离成前面证明的双峰。这表明通过非变性PAGE观察到的两条不同的条带都由75kDa的LR-融合物组成并且可以以单体和二聚体的平衡存在于天然条件下。(d)显示了凝胶过滤后的LR-融合物的洗脱谱。2个不同峰的分离再次表明了溶液中以单体和二聚体存在的LR-融合物。(e)GH和LR-融合物的基于细胞的GHR信号生物检测。Y轴表示从Stat 5荧光素酶报道检测的修正的荧光素酶倍数诱导(fold induction)。GH的标准曲线的范围为0nM、0.25nM、0.5nM、1.0nM、2.0nM和5nM：LR-融合物的标准曲线的范围为0nM、1nM、2nM、5nM、10nM、25nM、50nM、100nM和250nM。以5nM实现了GH的最大应答，而与LR-融合物的最大应答要求50nM至250nM；
图3显示了皮下(sc)和静脉内(iv)给药后测量的GH和LR-融合物的谱：(a)显示sc给药后的早期(5小时)；(b)显示iv后的晚期(8天)；以及(c)sc给药后的晚期；
图4显示用GH和LR-融合物皮下处理后的体重变化：(a)与安慰剂(只有媒介物)相比，每天用GH处理后的体重；(b)隔天注射；(c)第1天和第5天注射两次；(d)第一天注射一次；以及(e)不同处理方案后体重变化的概要。***＝GH与LR-融合物比较，p＜0.0001；
图5示出1B7v0、1B7v1、1B7v2和1B7v3的体内活性；
图6示出显示给予1B7v0、1B7v1、1B7v2和1B7v3的大鼠体重增加的时间进程；
图7示出皮下给药后1B7v0、1B7v1、1B7v2和1B7v3的药物动力学；
图8示出静脉内给药后1B7v0、1B7v1、1B7v2和1B7v3的药物动力学；
图9示出以1mg/kg顺序s/c剂量给予恒河猴后，1B7v2和1B7v3的药物动力学谱。红色虚线表示人生长激素的最小有效浓度。
表1显示用GH或LR-融合物处理切除垂体的大鼠10天后的结果(平均值±平均标准误差)。
材料与方法
动物和人样品的使用。本地伦理学委员会(local ethics committee)批准使用人的样品并且患者提供了知情许可。依照涉及保护用于试验或其它科学目的动物的法国法律(French law)进行所有的试验。
材料。除非另外指出，所有的材料购自Sigma(Poole，UK)。重组GH购自Pfizer，DSL(DSL Research Reagents，Oxfordshire，UK)赠送了结合检测中使用的重组E.coli衍生人GH结合蛋白，并且NovoNordisk(NovoNordisk Park，Denmark)赠送了碘化GH。除了mAb B07b和B24a，以及mAb 263(AbD Serotec，Kidlington，Oxford，UK)，是Dr.Skriver(NovoNordisk Park，Denmark)赠送的礼物，用于纯化和表征的GH和GHR mAb是自有(in-house)材料。
GH-exGHR LR-融合物的纯化。通过RT-PCR分别从人脑垂体和肝扩增人GH和GH受体，并将其克隆至载体pSecTag-V5/FRT/Hist-TOPO(Invitrogen，Paisley，UK)中，并位于人GH分泌信号序列后。使用4个重复的Gly4Ser接头连接人GH的天然C-末端至人GHR的天然N-末端。在CHO Flp-In细胞(Invitrogen，Paisley，UK)中制备稳定的克隆，该细胞适合无蛋白质的培养基并生长于悬浮培养中。用自有ELISA证实LR-融合物的表达。利用GH mAb柱进行亲和纯化。
转录生物检测。如以前的稳定地表达人GHR的人293细胞所述进行转录生物检测16。
ELISA。基于夹心ELISA方法建立自有GH和LR-融合物ELISA。在检测中，在预包被了人GH抗体的小鼠抗体(mAb 10A7)的孔中，用生物素标记的抗人GH的小鼠抗体(mAb 7F8)孵育标准品(GH或LR-融合物)、对照和未知物。检测的检测极限是2.5pg并且检测内和检测间CV小于10％。IGF-I ELISA购自DSL(DSL-10-2900ACTIVEmouse/rat IGF-I kit；DSL Research Reagents，Oxfordshire，UK)。
药物动力学试验。使用来自Janvier(Le Genest Saint Isle，France)的7周大的正常Sprague Dawley大鼠进行药物动力学试验。在异氟烷麻醉下，进行Sc或iv给药(阴茎静脉)和采血(眼窝窦)。给大鼠(n＝4-6/组)iv或sc注射0.1mg/kg的rhGH或LR-融合物。从眼球后血管丛收集血液样品。收获血清并保存于-70℃直至检测。利用非线性最小二乘回归分析，将随时间变化的激素浓度与房室模型拟合，来估算药物动力学参数。根据动物重量标准化清除率值。利用从iv推注模型拟合获得的系数和指数计算按动物重量的清除率和终末半衰期(t1/2)。
灵长动物药物动力学试验
将试验物质IB7v2和IB7v3配制在含有11.9mM磷酸钠钾、137mM氯化钠、2.7mM氯化钾、0.01％聚山梨酸酯80的溶液中，调整该溶液的pH为7.4。
试验设计
将动物分成4个处理组(1个媒介物组、1个IB7v2测试组、1个IB7v3测试组)，其中媒介物组含有3个雄性动物，2个处理组每组含有4个雄性动物。下文的表中列出了剂量水平和给药体积：
  组   处理  #猴(雄性)   剂量(mg/kg/剂量)   剂量体积
  1   媒介物(对照)   3   0   0.2mL/kg，在第1和第15天
  2   IB7v2   4   1   0.2mL/kg，在第1和第15天
  3   IB7v3   4   1   0.2mL/kg，在第1和第15天
从全部试验的所有动物获得血液样品以测定血清中合适试验材料的浓度。在全部试验的许多时间点采取这些样品。
临床终点和测量
利用确认的ELISA方法测定IB7v2和IB7v3的血清浓度。利用WinNonlin Pro(v4.0.1)软件，将血清中每种蛋白质的浓度对时间作图，从而测定每种蛋白质的药物动力学谱。
生长试验。生长试验使用切除垂体的大鼠并在来自Charles River实验室(Larbresle，France)的Sprague Dawley大鼠上进行该试验。在4周大时，由饲养员在异氟烷麻醉下切除大鼠的垂体，并且该大鼠在根据成功手术的体重标准进行选择一周后被送达。将动物单独关在笼中，并让其在进入试验期前再休息一周。赋形剂、rhGH和LR-融合物的注射溶液不超过2ml/kg。每天称重大鼠并根据给药方案，使其接受10天的试验物质注射。
LR-融合物的表征。利用一组16个构象敏感的hGH受体mAb检查LR-融合物的构象。使用变性、非变性胶和蛋白质印迹法分析LR-融合物，并且以对GH非构象敏感进行蛋白质印迹法。利用SuperoseG200分析柱和分析超速离心，通过凝胶过滤确定溶液中形成的LR-融合蛋白的形式。通过沉积速度进行分析超速离心(AUC)(分析服务，Dr Andy Barry，Astbury，Leeds University，Leeds，UK)。
统计学。如果两组的差异是正态分布的，使用Student检验比较两组，或者，如果两组的差异不是正态分布的，使用Student-Satterthwaite检验进行比较。用F检验检验分布。使用单因素ANOVA比较3组或更多组的平均值，并且，如果显著水平为p＜0.05，使用Dunnett检验进行个体比较。在5％的显著水平上，所有的统计学检验都是双侧的(two-sided)并且没有估算缺失值。
实施例
LR-融合物的设计和表征
生成重组基因(图1c)，该重组基因编码通过柔性(Gly4Ser)4接头连接至GHR胞外区域(exGHR1-238)的A&B区域的人GH。在CHO细胞中表达该LR-融合物，并利用GH的mAb抗体的亲和介质纯化该LR-融合物至纯度大于95％(图2a)。利用16个构象敏感的mAb，通过ELISA筛查LR-融合物。所有这些mAb以与来自人血清的GHBP相当的亲和力结合所述LR-融合物。考马斯亮蓝染色和SDS-PAGE胶的蛋白印迹法显示该LR-融合蛋白分离成约75kDa的双峰，并且两条条带之间的差别约为5kDa。非变性PAGE胶分析(图2b)没有显示凝集的证据。该LR-融合物表现出两种不同的形式。从非变性PAGE胶切下这些不同的蛋白形式，快(F)和慢(S)，然后用还原条件SDS-PAGE再进行分析。来自非变性PAGE的F&S形式都包含75kDa的双峰(图2c)。分析凝胶过滤证实了溶液存在两种形式LR-融合物的证据(图2d)。这些结果与LR-融合物以二聚体存在于溶液中的情况是一致的。分析超速离心证实了这种情况，其中单体的大小被证实为75kDa。
体外生物检测和药物动力学
利用GH特异性荧光素酶报道检测测试了LR-融合物的体外生物活性16。LR-融合物的生物活性约为本静态检测系统中的GH的10％，尽管该LR-融合物即使在高于GH的浓度下，也能刺激最大的应答(图2e)。单次皮下(sc)或静脉内(iv)注射后，在正常大鼠中检查了LR-融合物药物动力学谱(图3)。LR-融合物证明了不分给药途径的延迟清除和sc给药后的延迟吸收。iv推注后，LR-融合物的终末半衰期为21±2h，并且清除率为3.3±0.9ml·h-1·kg-1。LR-融合物的清除比GH慢300倍2，12。单次sc给药后，LR-融合物具有与GH相比延迟的峰(30小时比1小时)。8天后仍然能检测到LR-融合物而6小时后就不能检测到GH。我们检查了LR-融合物的异常药物动力学是否与大小有关。测试了具有相同接头的两种不同LR-融合物分子：一种是与只有B区域exGHR连接的GH的LR-融合物(55kDa)，另一种是与exGHR连接的串联(GH连接GH)(100kDa)。55kDa和100kDa的蛋白都在生物检测中表现出与原始75kDa LR-融合物相比增加的激动剂活性，但是这两者iv给药后的循环半衰期都小于4小时(精确的半衰期是不可能的，因为所用的取样方案预期较长的半衰期)。结果证实原始75kDa LR-融合物的异常药物动力学并不是只与分子量有关。
在t-0和t-336小时(14天)的两次以1mg/kg顺序s/c剂量给药后，灵长类试验中的IB7v2和IB7v3的药物动力学谱示于图9中。能注意到，该水平迅速达到最大并随与半衰期小于1小时的天然人生长激素相比下降时间段明显延长。如随顺序剂量给药的持续时间的虚线所明确的，该水平很好地保持在最小有效浓度之上。
LR-融合物对GH的生长促进优势
给予切除垂体(缺乏GH)的大鼠LR-融合物和GH以测试生物活性。每天给予GH在10天中诱导连续生长。然后通过隔日sc注射或10天中两次注射或一次注射将LR-融合物与GH进行比较。对于所有试验，使用了等摩尔剂量的GH和LR-融合物并且在10天中提供了相同的总剂量：220μg/kg/天，10天中约10nmol，其类似于以前获得最大生长应答所使用的剂量12。LR-融合物促进增重的升高，这大于相同注射方案下的GH并类似于每天GH注射所观察到的情况(图4和表)。GH仅在注射后24小时内表现出促进增重。相比之下，甚至在以一次注射提供时，LR-融合物在十天中产生持续的增重。在股骨、胫骨、胸腺、肝和肾中观察到类似的生长方式(表)。分析了所有动物的10天末端血液中的GH依赖的生物标记物、胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和GH以及LR-融合物水平(表)。给予LR-融合物后，甚至一次注射后，IGF-I水平明显升高，并且明显高于每天注射GH后所观察到的IGF-I水平。所有的注射方案后，在末端血液中不能检测到GH的水平，而一次注射10天后可以检测到LR-融合物的水平。
我们证明，GH的LR-融合物产生有效的激动剂。我们认为分子形成头尾相互结合的二聚体(图1d)的能力是其增强的体内生物活性的原因。
LR-融合物的设计基于GHR已知的晶体结构17。我们使用了4次重复的柔性Gly4Ser接头(预计长度为80
Figure G2008800214732D00141
)。选择这种长接头作为GH和GHR之间相对柔性的系绳(tether)，从而GH部分仍然能与细胞表面GHR相互作用(图1e)。由于稳定性和没有免疫原性，在重组单链Fv抗体制备中使用了类似的Gly4Ser接头18。
LR-融合物合适地折叠，从而在非变性PAGE胶和凝胶过滤中表现为两种不同的类型，即潜在的单体和二聚体。用分析超速离心证实了存在的二聚体。我们认为，LR-融合物通过每个LR-融合物分子中的GH部分与另一LR-融合物分子中的受体部分的分子间结合形成相互头尾结合的二聚体(图1d)。可能由于糖基化，LR-融合物在SDS-PAGE中表现为两条条带，并且分子量差别为5kDa19，20。
与GH相比，LR-融合物在体内更有效，但是在体外其生物活性却低10倍。这种差别能归因于LR-融合物的二聚作用。在静态体外生物检测中，如用天然GH/GHBP复合物所观察到的，二聚体没有生物活性。然而，在体内，二聚体提供了与生物活性单体处于平衡的无活性激素的储存。
向大鼠iv给药后，本发明的LR-融合物的清除率比GH降低300倍，并且比之前报道的GH/GHBP复合物或轭合物的清除率降低10至30倍21，22。我们测试了两种其它LR-融合物变体，一个为55kDa，另一个为100kDa。两种蛋白质都不显示出相同的延迟清除。因此，我们认为，单独的单体的大小不会导致LR融合物的延迟清除。肾对GH清除率在人中估计为25-53％23，在大鼠中估计为67％24。因此，仅降低肾清除率预计只能大约减半GH清除2。由于GH清除与GH受体机制相对独立25，据推测蛋白质水解是主要的促成因素。我们认为，本发明的LR-融合物清除率的明显降低不但归因于降低的肾清除率，还归因于防止蛋白水解的构象。
在切除垂体的大鼠中，仅在10天期间提供一次的本发明的LR-融合物产生了类似于每天注射GH所观察到的增重。上文已经显示，与GH以1∶1摩尔比的复合物共给药的GHBP促进了生长12。使用相同的方案，本发明的LR-融合蛋白在一次注射后的10天内促进了生长，而GH/GHBP复合物要求每天注射并且本发明的LR-融合物产生比GH/GHBP共给药后所观察到的IGF-I水平更高的IGF-I水平。与GHBP轭合时，GH没有生物活性，并且非共价连接的复合物缺乏LR-融合物的稳定性11，12。LR-融合物的更强的生物作用可能与其增强的稳定性及其激活单体形式GHR的能力有关。
在人中，IGF-I水品通常是GH活性的良好的生物标记物。然而，在切除垂体的大鼠中，IGF-I水平并不总是反映对GH的生长应答2，12。给予LR-融合物导致与GH注射相比明显升高的IGF-I水平。我们认为对GH的生长和IGF-I的剂量应答在切除垂体的大鼠中是不同的。因此，本发明的试验中所用的LR-融合物的剂量超出促进最大生长应答所要求的剂量，但仍然能刺激产生IGF-I。大鼠表现出比人更快的肾清除，这使得难以预测人所要求的剂量给药方案。可以预计，能以比GH更低的剂量和低得多的频率使用LR-融合物。
细胞因子激素与血清白蛋白的融合物和聚乙二醇化已经用于延长循环半衰期2，26。本发明的LR-融合物分子比这两种方法有较大的优势。聚乙二醇化高效地延迟蛋白质的清除，但其要求化学修饰并降低了配体对其受体的亲和力2。因此，对于聚乙二醇化，要求更大的剂量，而对于本发明的LR-融合物，类似的剂量有比天然GH更大的效果。对于GH与白蛋白的融合物，白蛋白融合生长激素(Albutropin)，因为可以理解地是，其已经从临床试验中撤除了，所以了解得很少。在一个PK试验中26，当以s.c.提供时，白蛋白融合生长激素的终末半衰期比GH的终末半衰期长6倍，而以i.v.提供时，本发明的LR-融合蛋白的终末半衰期比GH公开的终末半衰期长100倍12(对于天然人GH：清除值为18.6ml/min.kg＝1116ml/hr.kg并且Vd＝336ml/kg，因此T1/2＝0.693×336/1116＝0.21hrs)。GH天然地结合循环外GHR，因此本发明的LR-融合物与其它蛋白质的融合物相比不大可能是免疫原性的，并且大规模硅片T细胞表位筛选表明在LR-融合物分子上没有位点(数据未显示)。
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序列表
<110>埃斯特瑞恩有限公司
<120>生长激素融合蛋白
<130>0746P/WO
<140>欲指定
<141>欲指定
<160>12
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>1455
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合蛋白
<400>1
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tcgtttacct ccatctggat accttattgt atcaagctaa ctagcaatgg tggtacagtg  1080
gatgaaaagt gtttctctgt tgatgaaata gtgcaaccag atccacccat tgccctcaac  1140
tggactttac tgaacgtcag tttaactggg attcatgcag atatccaagt gagatgggaa  1200
gcaccacgca atgcagatat tcagaaagga tggatggttc tggagtatga acttcaatac  1260
aaagaagtaa atgaaactaa atggaaaatg atggacccta tattgacaac atcagttcca  1320
gtgtactcat tgaaagtgga taaggaatat gaagtgcgtg tgagatccaa acaacgaaac  1380
tctggaaatt atggcgagtt cagtgaggtg ctctatgtaa cacttcctca gatgagccaa  1440
taa                                                                1443
<210>3
<211>1443
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>3
atggctacag gctcccggac gtccctgctc ctggcttttg gcctgctctg cctgccctgg    60
cttcaagagg gcagtgcctt cccaaccatt cccttatcca ggctttttga caacgctatg    120
ctccgcgccc atcgtctgca ccagctggcc tttgacacct accaggagtt tgaagaagcc    180
tatatcccaa aggaacagaa gtattcattc ctgcagaacc cccagacctc cctctgtttc    240
tcagagtcta ttccgacacc ctccaacagg gaggaaacac aacagaaatc caacctagag    300
ctgctccgca tctccctgct gctcatccag tcgtggctgg agcccgtgca gttcctcagg    360
agtgtcttcg ccaacagcct ggtgtacggc gcctctgaca gcaacgtcta tgacctccta    420
aaggacctag aggaaggcat ccaaacgctg atggggaggc tggaagatgg cagcccccgg    480
actgggcaga tcttcaagca gacctacagc aagttcgaca caaactcaca caacgatgac    540
gcactactca agaactacgg gctgctctac tgcttcagga aggacatgga caaggtcgag    600
acattcctgc gcatcgtgca gtgccgctct gtggagggca gctgtggctt cggtggcgga    660
ggtagtggtg gcggaggtag cggtggcgga ggttctggtg gcggaggttc cggtggcgga    720
ggtagttttt ctggaagtga ggccacagca gctatcctta gcagagcacc ctggagtctg    780
caaagtgtta atccaggcct aaagacaaat tcttctaagg agcctaaatt caccaagtgc    840
cgttcacctg agcgagagac tttttcatgc cactggacag atgaggttca tcatggtaca  900
aagaacctag gacccataca gctgttctat accagaagga acactcaaga atggactcaa  960
gaatggaaag aatgccctga ttatgtttct gctggggaaa acagctgtta ctttaattca  1020
tcgtttacct ccatctggat accttattgt atcaagctaa ctagcaatgg tggtacagtg  1080
gatgaaaagt gtttctctgt tgatgaaata gtgcaaccag atccacccat tgccctcaac  1140
tggactttac tgaacgtcag tttaactggg attcatgcag atatccaagt gagatgggaa  1200
gcaccacgca atgcagatat tcagaaagga tggatggttc tggagtatga acttcaatac  1260
aaagaagtaa atgaaactaa atggaaaatg atggacccta tattgacaac atcagttcca  1320
gtgtactcat tgaaagtgga taaggaatat gaagtgcgtg tgagatccaa acaacgaaac  1380
tctggaaatt atggcgagtt cagtgaggtg ctctatgtaa cacttcctca gatgagccaa  1440
taa                                                                1443
<210>4
<211>1368
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>4
atggctacag gctcccggac gtccctgctc ctggcttttg gcctgctctg cctgccctgg    60
cttcaagagg gcagtgcctt cccaaccatt cccttatcca ggctttttga caacgctatg    120
ctccgcgccc atcgtctgca ccagctggcc tttgacacct accaggagtt tgaagaagcc    180
tatatcccaa aggaacagaa gtattcattc ctgcagaacc cccagacctc cctctgtttc    240
tcagagtcta ttccgacacc ctccaacagg gaggaaacac aacagaaatc caacctagag    300
ctgctccgca tctccctgct gctcatccag tcgtggctgg agcccgtgca gttcctcagg    360
agtgtcttcg ccaacagcct ggtgtacggc gcctctgaca gcaacgtcta tgacctccta    420
aaggacctag aggaaggcat ccaaacgctg atggggaggc tggaagatgg cagcccccgg    480
actgggcaga tcttcaagca gacctacagc aagttcgaca caaactcaca caacgatgac    540
gcactactca agaactacgg gctgctctac tgcttcagga aggacatgga caaggtcgag    600
acattcctgc gcatcgtgca gtgccgctct gtggagggca gctgtggctt cttttctgga    660
agtgaggcca cagcagctat ccttagcaga gcaccctgga gtctgcaaag tgttaatcca    720
ggcctaaaga caaattcttc taaggagcct aaattcacca agtgccgttc acctgagcga    780
gagacttttt catgccactg gacagatgag gttcatcatg gtacaaagaa cctaggaccc    840
atacagctgt tctataccag aaggaacact caagaatgga ctcaagaatg gaaagaatgc    900
cctgattatg tttctgctgg ggaaaacagc tgttacttta attcatcgtt tacctccatc    960
tggatacctt attgtatcaa gctaactagc aatggtggta cagtggatga aaagtgtttc    1020
tctgttgatg aaatagtgca accagatcca cccattgccc tcaactggac tttactgaac    1080
gtcagtttaa ctgggattca tgcagatatc caagtgagat gggaagcacc acgcaatgca    1140
gatattcaga aaggatggat ggttctggag tatgaacttc aatacaaaga agtaaatgaa    1200
actaaatgga aaatgatgga ccctatattg acaacatcag ttccagtgta ctcattgaaa    1260
gtggataagg aatatgaagt gcgtgtgaga tccaaacaac gaaactctgg aaattatggc    1320
gagttcagtg aggtgctcta tgtaacactt cctcagatga gccaataa                 1368
<210>5
<211>484
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>5
Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu
1               5                   10                  15
Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu
            20                  25                  30
Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln
        35                  40                  45
Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys
    50                  55                  60
Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe
65                  70                  75                  80
Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys
                85                  90                  95
Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp
            100                 105                 110
Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val
        115                 120                 125
Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu
    130                 135                 140
Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg
145                 150                 155                 160
Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser
                165                 170                 175
His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe
            180                 185                 190
Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys
        195                 200                 205
Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly
    210                 215                 220
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
225                 230                 235                 240
Glu Phe Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala
                245                 250                 255
Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser
            260                 265                 270
Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe
        275                 280                 285
Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His Gly Thr Lys Asn Leu Gly
    290                 295                 300
Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln
305                 310                 315                 320
Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys
                325                 330                 335
Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys
            340                 345                 350
Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp
        355                 360                 365
Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu
    370                 375                 380
Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr
                405                 410                 415
Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Met Met Asp
            420                 425                 430
Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys
        435                 440                 445
Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr
    450                 455                 460
Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln
465                 470                 475                 480
Lys Leu Phe Glu
<210>6
<211>458
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>6
Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg
1               5                   10                  15
Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu
            20                  25                  30
Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro
        35                   40                  45
Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg
    50                  55                  60
Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu
65                  70                  75                  80
Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val
                85                  90                  95
Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp
            100                 105                 110
Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu
        115                 120                 125
Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser
    130                 135                 140
Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe
                165                 170                 175
Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Gly
            180                 185                 190
Gly Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
        195                 200                 205
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Phe Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala
    210                 215                 220
Ala Ile Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly
225                 230                 235                 240
Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser
                245                 250                 255
Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His
            260                 265                 270
Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn
        275                 280                 285
Thr Gln Glu Trp Thr Gln Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser
    290                 295                 300
Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp
305                 310                 315                 320
Ile Pro Tyr Cys Ile Lys Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu
                325                 330                 335
Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala
            340                 345                 350
Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp
        355                 360                 365
Ile Gln Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly
    370                 375                 380
Trp Met Val Leu Glu Tyr Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr
385                 390                 395                 400
Lys Trp Lys Met Met Asp Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr
                405                 410                 415
Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln
            420                 425                 430
Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr
        435                 440                 445
Leu Pro Gln Met Ser Gln Lys Leu Phe Glu
    450                 455
<210>7
<211>480
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>7
Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu
1               5                   10                  15
Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu
            20                  25                  30
Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln
        35                  40                  45
Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys
    50                  55                  60
Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe
65                  70                  75                  80
Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys
                85                  90                  95
Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp
            100                 105                 110
Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val
        115                 120                 125
Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu
    130                 135                 140
Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg
145                 150                 155                 160
Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser
                165                 170                 175
His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe
            180                 185                 190
Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys
        195                 200                 205
Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly
    210                 215                 220
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
225                 230                 235                 240
Glu Phe Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala
                245                 250                 255
Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser
            260                 265                 270
Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe
        275                 280                 285
Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His Gly Thr Lys Asn Leu Gly
    290                 295                 300
Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln
305                 310                 315                 320
Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys
                325                 330                 335
Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys
            340                 345                 350
Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp
        355                 360                 365
Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu
    370                 375                 380
Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr
                405                 410                 415
Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Met Met Asp
            420                 425                 430
Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys
        435                 440                 445
Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr
    450                 455                 460
Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln
465                 470                 475                 480
<210>8
<211>454
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>8
Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg
1               5                   10                  15
Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu
            20                  25                  30
Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro
        35                  40                  45
Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg
    50                  55                  60
Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu
65                  70                  75                  80
Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val
                85                  90                  95
Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp
            100                 105                 110
Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu
        115                 120                 125
Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser
    130                 135                 140
Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe
                165                 170                 175
Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Gly
            180                 185                 190
Gly Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
        195                 200                 205
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Phe Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala
    210                 215                 220
Ala Ile Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly
225                 230                 235                 240
Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser
                245                 250                 255
Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His
            260                 265                 270
Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn
        275                 280                 285
Thr Gln Glu Trp Thr Gln Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser
    290                 295                 300
Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp
305                 310                 315                 320
Ile Pro Tyr Cys Ile Lys Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu
                325                 330                 335
Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala
            340                 345                 350
Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp
        355                 360                 365
Ile Gln Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly
    370                 375                 380
Trp Met Val Leu Glu Tyr Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr
385                 390                 395                 400
Lys Trp Lys Met Met Asp Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr
                405                 410                 415
Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln
            420                 425                 430
Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr
        435                 440                 445
Leu Pro Gln Met Ser Gln
    450
<210>9
<211>480
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>9
Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu
1               5                   10                  15
Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu
            20                  25                  30
Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln
        35                  40                  45
Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys
    50                  55                  60
Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe
65                  70                  75                  80
Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys
                85                  90                  95
Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp
           100                 105                 110
Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val
       115                 120                 125
Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu
    130                 135                 140
Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg
145                 150                 155                 160
Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser
                165                 170                 175
His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe
            180                 185                 190
Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys
        195                 200                 205
Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
    210                 215                 220
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225                 230                 235                 240
Gly Ser Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala
                245                 250                 255
Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser
            260                 265                 270
Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe
        275                 280                 285
Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His Gly Thr Lys Asn Leu Gly
    290                 295                 300
Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln
305                 310                 315                 320
Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys
                325                 330                 335
Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys
            340                 345                 350
Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp
        355                 360                 365
Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu
    370                 375                 380
Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu
385                 390                 395                 400
Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr
                405                 410                 415
Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Met Met Asp
            420                 425                 430
Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys
        435                 440                 445
Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr
    450                 455                 460
Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln
465                 470                 475                 480
<210>10
<211>454
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>10
Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg
1               5                   10                  15
Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu
            20                  25                  30
Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro
        35                  40                  45
Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg
    50                  55                  60
Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu
65                  70                  75                  80
Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val
                85                  90                  95
Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp
            100                 105                 110
Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu
        115                 120                 125
Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser
    130                 135                 140
Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe
                165                 170                 175
Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Gly
            180                 185                 190
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        195                 200                 205
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala
    210                 215                 220
Ala Ile Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly
225                 230                 235                 240
Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser
                245                 250                 255
Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His
            260                 265                 270
Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn
        275                 280                 285
Thr Gln Glu Trp Thr Gln Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser
    290                 295                 300
Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp
305                 310                 315                 320
Ile Pro Tyr Cys Ile Lys Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu
                325                 330                 335
Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala
            340                 345                 350
Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala Asp
        355                 360                 365
Ile Gln Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly
    370                 375                 380
Trp Met Val Leu Glu Tyr Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr
385                 390                 395                 400
Lys Trp Lys Met Met Asp Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr
                405                 410                 415
Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gln
            420                 425                 430
Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr
        435                 440                 445
Leu Pro Gln Met Ser Gln
    450
<210>11
<211>455
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>11
Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu
1               5                   10                  15
Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu
            20                  25                  30
Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln
        35                  40                  45
Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys
    50                  55                  60
Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe
65                  70                  75                  80
Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys
                85                  90                  95
Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp
            100                 105                 110
Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val
        115                 120                 125
Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu
    130                 135                 140
Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg
145                 150                 155                 160
Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser
                165                 170                 175
His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe
            180                 185                 190
Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys
        195                 200                 205
Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr
    210                 215                 220
Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser Leu Gln Ser Val Asn Pro
225                 230                 235                 240
Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg
                245                 250                 255
Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His
            260                 265                 270
His Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Ile Gln Leu Phe Tyr Thr Arg Arg
        275                 280                 285
Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val
    290                 295                 300
Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser Ile
305                 310                 315                 320
Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp
                325                 330                 335
Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu Ile Val Gln Pro Asp Pro Pro Ile
            340                 345                 350
Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser Leu Thr Gly Ile His Ala
        355                 360                 365
Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ile Gln Lys
    370                 375                 380
Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr Glu Leu Gln Tyr Lys Glu Val Asn Glu
385                 390                 395                 400
Thr Lys Trp Lys Met Met Asp Pro Ile Leu Thr Thr Ser Val Pro Val
                405                 410                 415
Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys
            420                 425                 430
Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val
        435                 440                 445
Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln
    450                 455
<210>12
<211>429
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>生长激素/受体融合物
<400>12
Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg
1               5                   10                  15
Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu
            20                  25                  30
Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro
        35                  40                  45
Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg
    50                  55                  60
Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu
65                  70                  75                  80
Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val
                85                  90                  95
Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp
            100                 105                 110
Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu
        115                 120                 125
Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser
    130                 135                 140
Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr
145                 150                 155                 160
Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe
                165                 170                 175
Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Phe
            180                 185                 190
Ser Gly Ser Glu Ala Thr Ala Ala Ile Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser
        195                 200                 205
Leu Gln Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro
    210                 215                 220
Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His
225                 230                 235                 240
Trp Thr Asp Glu Val His His Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Ile Gln
                245                 250                 255
Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn Thr Gln Glu Trp Thr Gln Glu Trp Lys
            260                 265                 270
Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn
        275                 280                 285
Ser Ser Phe Thr Ser Ile Trp Ile Pro Tyr Cys Ile Lys Leu Thr Ser
    290                 295                 300
Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu Ile Val
305                 310                 315                 320
Gln Pro Asp Pro Pro Ile Ala Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser
                325                 330                 335
Leu Thr Gly Ile His Ala Asp Ile Gln Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg
            340                 345                 350
Asn Ala Asp Ile Gln Lys Gly Trp Met Val Leu Glu Tyr Glu Leu Gln
        355                 360                 365
Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Met Met Asp Pro Ile Leu
    370                 375                 380
Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu
385                 390                 395                 400
Val Arg Val Arg Ser Lys Gln Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe
                405                 410                 415
Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr Leu Pro Gln Met Ser Gln
            420                 425

Claims (22)

1.核酸分子，其由SEQ ID NO：4所示的核酸序列组成，其中所述核酸序列编码具有生长激素受体激动剂活性的多肽。
2.多肽，其由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列或者SEQ IDNO：12所示的氨基酸序列组成，其中所述多肽具有生长激素受体激动剂活性。
3.如权利要求2所述的多肽，其中所述多肽由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列组成。
4.如权利要求2所述的多肽，其中所述多肽由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列组成。
5.由两个多肽组成的同型二聚体，所述多肽由SEQ ID NO：11组成。
6.由两个多肽组成的同型二聚体，所述多肽由SEQ ID NO：12组成。
7.载体，其包含权利要求1所述的核酸分子。
8.如权利要求7所述的载体，其中所述载体是表达载体。
9.用权利要求8所述的载体转染或转化的细胞。
10.如权利要求9所述的细胞，其中所述细胞是真核细胞。
11.如权利要求9所述的细胞，其中所述细胞是原核细胞。
12.包含权利要求2所述的多肽的药物组合物，其含有赋形剂或载体。
13.权利要求2至4中的任一项所述的多肽或权利要求5或6所述的同型二聚体在制备治疗患有生长激素缺乏症的人个体的药物组合物中的用途。
14.如权利要求13所述的用途，其中所述药物组合物包含有效量的如权利要求2至4的任一项所述的多肽或如权利要求5或6所述的同型二聚体。
15.如权利要求13或14所述的用途，其中所述药物组合物用于静脉内给药。
16.如权利要求13或14所述的用途，其中所述药物组合物用于皮下给药。
17.如权利要求13或14所述的用途，其中所述药物组合物用于以2天为间隔的给药。
18.如权利要求13或14所述的用途，其中所述药物组合物用于以每周为间隔的给药。
19.如权利要求13或14所述的用途，其中所述药物组合物用于以2周为间隔的给药。
20.如权利要求13或14所述的用途，其中所述药物组合物用于以每月为间隔的给药。
21.如权利要求13或14所述的用途，其中所述生长激素缺乏症是儿童期生长激素缺乏症。
22.如权利要求13或14所述的用途，其中所述生长激素缺乏症是成人生长激素缺乏症。
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