KR20100016303A - 광노화를 방지하기 위한 바이오틴의 용도 - Google Patents

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레기나 고랄치크
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디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이.
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Abstract

본 발명은 피부의 일광 유도된 노화(광노화)를 방지하기 위한, 바람직하게는 바이오틴 및 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)의 특정 비의 조합 형태의, 바이오틴의 용도에 관한 것이다.

Description

광노화를 방지하기 위한 바이오틴의 용도{USE OF BIOTIN TO PREVENT PHOTOAGING}
본 발명은 피부의 일광 유도된 노화(광노화)를 방지하기 위한, 바람직하게는 바이오틴 및 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)의 특정 비의 조합 형태의, 바이오틴의 신규한 용도에 관한 것이다.
피부가 자외선에 만성적으로 노출되는 경우, 상피 및 피부 손상, 예컨대 피부 환부에서의 각막 비후증, 각질세포 형성장애 및 피부 탄력섬유증을 초래하여 임상적으로는 화학선 또는 태양에 의한 각화증을 가진 광노화된 피부로서 나타난다. 피부 광손상 및 광노화의 분자적 기전은 광범위하게 연구되어 왔다. 자외선은 모든 세포 표면 성장 인자 및 사이토카인 수용체를 활성화시킨다(2002년 리티(Rittie) 및 피셔(Fisher)의 문헌). 리간드-비의존적 수용체 활성화는 전사 인자 AP-1을 자극하도록 수렴되는 다중 다운스트림 신호화 경로를 유도한다. AP-1에 의해 상향조절되는 유전자중 몇몇의 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP)계 구성원이 있다.
따라서, MMP는 특히 태양 자외선 유도된 피부 손상을 초래하여 피부 색조 및 탄력에 영향을 주어 노화를 조발시킨다. MMP는 피부의 세포외 매트릭스에서 콜라겐 및 엘라스틴을 분해한다. 증가된 MMP 발현 및 활성은 증강된 콜라겐 단백질분해를 야기하고 감소된 콜라겐 발현과 함께 피부 탄력섬유증 및 주름을 초래한다(2003년 번부르그(Burneburg)의 문헌). 그 증상으로는 질긴 결, 주름, 얼룩덜룩한 착색, 이완 및 나쁜 혈색이 포함된다.
MMP는 가장 중요하고 잘 확립된 광노화 연관된 유전자중 하나이다. 따라서, 물질의 광노화에 대한 보호능을 확립하기 위해 그의 자외선 A(UVA) 유도된 MMP의 억제에 대한 효과를 조사하는 것이 주요 관심사이다.
바이오틴은 피부, 모발 및 손발톱의 기능에 중요한 수용성 비타민이다. 바이오틴의 부족은 비늘 모양의 거친 피부 및 부서지기 쉬운 손발톱을 초래한다. 더욱이, 바이오틴은 몇몇의 카복실라제 효소, 예컨대 아세틸-CoA 카복실라제, 메틸크로토닐-CoA 카복실라제, 미토콘드리아 프로피오닐-CoA 카복실라제 및 미토콘드리아 피루베이트 카복실라제에서 이산화 탄소의 이동을 초래하는 보조인자이다.
(-)-에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)는 다양한 피부 콜라게나제를 억제하는 식이 화합물중 하나이다(2005년 리(Lee) 등의 문헌). 본원에 사용된 용어 "EGCG"는 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트 및/또는 하나 이상의 그의 유도체(예컨대 에스터화된 형태, 글리코사이드, 설페이트)를 나타낸다.
본 발명의 목적은 피부의 일광 유도된 노화(광노화)를 방지하는 활성 성분을 제공하는 것이다. 본원에 사용된 용어 "일광"은 천연 및/또는 인공 일광을 지칭하며 자외선 외에도 특히 적외선을 포함한다. 따라서, 활성 성분은 피부의 자외선 유도된 노화 뿐만 아니라 적외선 유도된 노화를 방지해야 한다.
본 발명에 이르러, 놀랍게도, 본 발명의 목적이 일광 유도된 콜라겐 및/또는 엘라스틴 분해, 주름 및 잔주름살 및/또는 피부 노화 콜라게나제를 감소시키기 위한 및/또는 일광 유도된 콜라게나제를 억제하기 위한 바이오틴의 용도에 의해 달성됨이 밝혀졌다.
더욱 더 놀랍게도, 본 발명의 목적이 바이오틴과 EGCG의 상승적 조합에 의해 더욱 더 바람직한 방식으로 달성됨이 밝혀졌다. 따라서, 일광 유도된 콜라겐 및/또는 엘라스틴 분해, 주름 및 잔주름살 및/또는 피부 노화 콜라게나제를 감소시키기 위해 및/또는 일광 유도된 콜라게나제를 억제하기 위해 바이오틴과 EGCG의 상승적 조합을 사용하는 것이 더욱 바람직하다.
활성 성분은 경구 또는 국소/미용 조성물을 통해 투여될 수 있고, 바람직한 것은 경구 투여이다.
본원에 사용된 용어 "경구 조성물"은 경구적으로 투여되는 조성물을 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따른 경구 조성물은 고체, 예컨대 캡슐 또는 정제, 또는 액체, 예컨대 용액 또는 현탁액일 수 있는 식품, 사료 및 음료에 대한 보충물로서, 식이 보충물로서 또는 약학 제형으로서 작용할 수 있다. 더욱이, 용어 "경구 조성물"은 본 발명에 따른 활성 성분을 하나 또는 둘다 함유하는 식품, 사료 및 음료도 포함한다.
본원에 사용된 용어 "국소 조성물"은 포유동물 각질 조직에 국소적으로 적용될 수 있는 미용 조성물을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "미용 조성물"은 예컨대 문헌 [Rompp Lexikon Chemie, 10th edition, 1997, Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York]의 표제 "Kosmetika"하에 정의된 바와 같은 미용 조성물을 지칭한다.
바람직한 양태에서, 본 발명은 또한 1 : 1 내지 1 : 5000의 비의 바이오틴 및 EGCG의 상승적 조합을 함유하는 경구 조성물에 관한 것이다.
바이오틴과 EGCG의 조합이 UVA 유도된 MMP-1을 억제하는데 우수한 상승적 활성을 나타내어 항노화/항주름 효과를 제공하리라는 것은 당업자에 의해 예견되지 않았던 것이다. 또한, 바이오틴과 EGCG의 상승적 조합은 실제 일광/자외선에 노출되기 몇일 내지 몇주 전에 투여될 때도 광노화를 방지한다. 또한, 강렬한 일광 노출, 즉 일광 욕 직전, 동안 및/또는 후에 투여될 때도 방지한다.
바이오틴이 EGCG와 조합되어 투여되는 경우, 본 발명에 따라 바람직한 것은 (-)-에피갈로카테킨 갈레이트 자체를 사용하는 것이다. 추가의 본 발명의 바람직한 양태에서, 사용된 EGCG는 80 % 이상, 바람직하게는 85 % 이상, 보다 바람직하게는 90 % 이상, 보다 더 바람직하게는 92 % 이상, 가장 바람직하게는 94 % 이상의 순도를 갖는다. 또한, 예컨대 및 바람직하게는 US 6,383,392, EP 1 103 550, US 10/246,112 및 EP 1 077 211에 기재된 임의의 방법에 의해 수득된 바와 같이, 추출물의 총량을 기준으로 80 % 이상(바람직하게는 85 % 이상, 보다 바람직하게는 90 % 이상, 보다 더 바람직하게는 92 % 이상, 가장 바람직하게는 94 % 이상)의 EGCG를 함유하는 수성 녹차 추출물이 특히 바람직하다. 다른 폴리페놀 및 카테킨, 예컨대 갈로카테킨 갈레이트, 카테킨 갈레이트, 에피카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨, 갈로카테킨 및 에피카테킨의 총량은 녹차 추출물의 총 중량을 기준으로 5 중량% 이하인 것이 바람직하다. 갈로카테킨 갈레이트의 양이 2.5 중량% 이하이고/이거나 에피카테킨 갈레이트의 양이 5 중량% 이하(바람직하게는 3 중량% 이하)인 것이 보다 바람직하다.
본 발명에 따르면, 각각 녹차 추출물의 총 중량을 기준으로, 녹차 추출물중의 카페인의 양이 2.5 중량% 이하, 바람직하게는 0.1 중량% 이하이고/이거나 갈산의 양이 0.1 중량% 이하인 것이 유리하다.
바이오틴이 EGCG와 조합으로 사용되는 경우, 본 발명에 따르면 바이오틴 : EGCG의 비는 1 : 1 내지 1 : 5000, 바람직하게는 1 : 3 내지 1 : 3000, 가장 바람직하게는 1 : 5 내지 1 : 1000의 범위인 것이 유리하다.
활성 성분이 경구 투여용인 경우, 본 발명에 따르면 일당(daily) 효과량("일당 투여량")이 하기 제시된 범위내에 있도록 활성 성분을 투여하는 것이 유리하다. 이로써, 일당 투여량이 한번에 전부(단일 투여에 의해) 투여되든지 또는 다회 투여량으로 나누어 투여되든지 상관없다.
바이오틴:
약 70 kg의 체중이 나가는 사람에 대한 일당 투여량은 40 mg을 초과해서는 안되고, 바람직하게는 25 mg을 초과해서는 안되며, 유리하게는 0.03 내지 40 mg, 보다 바람직하게는 0.06 내지 25 mg의 범위이다.
EGCG:
약 70 kg의 체중이 나가는 사람에 대한 일당 투여량은 50 내지 600 mg, 바람직하게는 150 내지 300 mg의 범위이다.
조성물이 경구 투여용 정제, 캡슐, 과립 또는 분말 형태로 제조되는 경우, 부형제, 예컨대 락토스, 수크로스, 염화 나트륨, 글루코스, 우레아, 전분, 덱스트린 및/또는 말토덱스트린, 탄산 칼슘, 인산 칼슘 및/또는 수소 인산 칼슘, 카올린, 결정질 및/또는 미세결정질 셀룰로스 및/또는 규산(담체로서); 결합제, 예컨대 물, 에탄올, 프로판올, 단 시럽, 글루코스 용액, 전분 및/또는 가수분해된 전분 용액, 젤라틴 용액, 카복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 하이드록시프로필전분, 셸락, 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 인산 칼슘 및/또는 폴리비닐 피롤리돈; 붕해제, 예컨대 건조 전분, 크로스카멜로스, 크로스포비돈, 알긴산 나트륨, 한천 분말, 라미나란 분말, 수소 탄산 나트륨, 탄산 칼슘, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스터, 라우릴 황산 나트륨, 스테아르산 모노글리세라이드, 전분 및/또는 락토스; 붕해-방지제, 예컨대 스테아르산, 카카오 기름 및/또는 수소화된 오일; 흡수촉진제, 예컨대 4차 암모늄 염기 및/또는 라우릴 황산 나트륨; 습윤제, 예컨대 글리세롤 및/또는 전분; 흡착제, 예컨대 전분, 락토스, 카올린, 벤토나이트 및/또는 콜로이드성 실리카; 윤활제, 예컨대 정제된 활석, 스테아르산염, 붕산 분말 및/또는 폴리에틸렌 글리콜; 풍미 교정약, 예컨대 수크로스, 오렌지 껍질, 시트르산 및/또는 석신산; 등이 사용될 수 있다.
조성물이 정제 형태로 제조되는 경우, 통상의 피복물로 피복된 정제, 예컨대 당-피복된 정제, 젤라틴-피복된 정제, 장-피복된 정제, 필름-피복된 정제, 이중 피복된 정제, 다층-피복된 정제 등으로 제공될 수 있다. 캡슐은 본 발명에 따른 화합물을 상기 예시된 또는 당분야의 기술에 따른 다양한 담체와 혼합하고 생성되는 혼합물을 경질 젤라틴 캡슐, 연질 캡슐 등으로 충전함으로써 제조된다.
본 발명에 따른 조성물에 다중비타민 및 미네랄 보충물을 예컨대 균형잡힌 영양을 유지하기 위해 또는 일부 식이 요법에서 빠지는 필수 영양소의 적량을 얻기 위해 첨가시킬 수 있다. 또한, 다중비타민 및 미네랄 보충물은 생활 양식으로 인한 영양 손실 및 결핍 및 일부 식이 요법에서 관찰되는 통상적인 부족한 식이 양식에 대한 보호 및 질병 예방에 유용할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 식품 또는 음료 조성물일 수 있다. 음료는 예컨대 스포츠 음료, 강장 음료 또는 기타 청량 음료, 또는 임의의 다른 적당한 음료 제제일 수 있다.
스포츠 음료는 운동 선수를 다시 수화할 뿐만 아니라 전해질, 당 및 기타 영양소를 회복시키는 것으로 추측되는 음료이다. 스포츠 음료는 통상 등장성인데, 이는 인체내에서 발견되는 바와 동일한 비율의 영양소를 함유한다는 것을 의미한다.
강장 음료는 사용자에게 폭발적인 에너지를 제공할 의도로 (합법적) 흥분제, 비타민(특히 비타민 B) 및/또는 미네랄을 함유하는 음료이다. 통상적인 성분으로는 카페인, 과라나(과라나 식물로부터 유래되는 카페인) 및/또는 타우린, 다양한 형태의 인삼, 말토덱스트린, 이노시톨, 카르니틴, 크레아틴, 글루쿠로노락톤, 조효소 Q10 및/또는 은행나무가 포함된다. 일부는 다량의 당 또는 글루코스를 함유할 수 있는 한편, 다른 것은 당 알콜 및/또는 인공 감미료, 예컨대 카사이클라메이트 또는 아스파테임으로 완전히 또는 부분적으로 감미롭게 될 수 있다. 다수의 이러한 음료는 풍미가 더해지고/지거나 착색된다.
청량 음료는 알콜을 함유하지 않는 음료이다. 일반적으로, 이 용어는 찬 음료에 대해서만 사용된다. 핫초콜릿, 차 및 커피는 청량 음료로 간주되지 않는다. 이 용어는 처음에 탄산 음료만을 지칭하였는데 아직도 이런 방식으로 상용된다.
조성물이 하기 식품중 하나의 형태로 제조되는 경우, 본 발명에 따르면 조성물중 바이오틴 및 필요에 따라 EGCG의 양은 하기 표 1에 제시된 범위로부터 선택되는 것이 유리하다.
Figure 112009068313745-PCT00001
조성물이 정제 또는 캡슐 형태로 제조되는 경우, 본 발명에 따르면 조성물중 바이오틴 및 필요에 따라 EGCG의 양은 하기 표 2에 제시된 범위로부터 선택되는 것이 유리하다.
Figure 112009068313745-PCT00002
실시예 1
매트릭스 메탈로프로테아제 -1( MMP -1)의 UVA 유도된 발현의 억제에 대한 EGCG 및 바이오틴의 상승 효과
1차 인간 피부 섬유아세포를 글루타민 없이 EMEM(Earle's Minimum Essential Medium; 얼 최소 필수 배지)에서 배양하고 37 ℃/5 % CO2에서 항생제/항사상균제(AB/AM), 2 mM L-글루타민 및 7.5 % 송아지 태아 혈청(FCS)으로 보충시키고 100 % 합류되도록 성장시켰다. 방사(irradiation)하기 48 시간 전, 세포를 EMEM(AB/AM, L-글루타민 및 2 % FCS 함유)에서 목적 물질과 함께 예비배양하였다. 24 시간 후, 배지를 물질을 함유한 새로운 배지(새롭게 제조된)로 대체시켰다. 방사하기 위해, 배지를 제거하고 인산염 완충된 염수(PBS)에 의한 6개의 세척 단계 후 PBS로 대체시켰다. 이어서, 플레이트를 30 J/cm2 UVA1에 노출시켰다. UVA1 출력은 약 150 mW/cm2이었다. 방사 후, 세포 마이크로플레이트중 PBS를 배지(+ 7.5 % FCS)에 대해 물질(새롭게 제조된)로 교환하고, 세포를 CO2-배양기에서 추가의 24 시간동안 배양하였다(MMP-1 측정). 배지를 제거하였다. 세포를 PBS로 헹구고 전체 플레이트를 액체 질소중에 냉동하였다. 총 RNA를 알엔이지 토탈 알엔에이 키츠(RNeasy Total RNA Kits; 독일 힐든 소재의 퀴아젠(Qiagen))를 사용하여 단리하였다. RNA 농도를 260/280에서 광도 측정을 통해 측정하였다. 75 ng인 총 RNA의 분취량을 RT-PCR용 수퍼스크립트(Superscript, 상표) III 제 1 가닥(First-Strand) 합성 시스템을 사용하여 cDNA-합성에 적용하였다. 각 화합물에 대해 두 샘플을 분석하였다. PCR 반응을 에스와이비알 그린 피씨알 마스터 믹스(SYBR Green(등록상표) PCR Master Mix; 독일 다름스타트 소재의 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems))를 사용하여 옵티콘(Opticon) 1(미국 매사추세츠주 왈탐 소재의 엠제이 리서치(MJ Research))상에서 수행하였다. 실제 시간 PCR 대조 세포 및 처리된 세포에서 상대 발현을 비교하기 위해 2(- 델타 델타 C(T)) 방법을 사용하였다. 결과를 하기 표 3에 요약하였다. UVA 처리는 비-방사된 세포(도시되지 않음)에서 검출된 수준에 비해 MMP-1 RNA의 약 10배 증가를 유도하였다. EGCG 및 바이오틴은 각각 13 % 및 66 %만큼 이 발현을 감소시켰다. 대조적으로, 물질을 조합하였을 때, UVA 유도된 MMP-1 발현은 완전히 폐지되었다. 이는, 관찰된 억제율과 예상된 억제율(각각의 단일 화합물의 값들의 합) 사이의 차이가 양의 값(즉, 21 %)으로 수득되었으므로, EGCG 및 바이오틴이 MMP-1의 조절에 상승 효과를 나타냄을 의미한다.
Figure 112009068313745-PCT00003
실시예 2
장기간 항노화 방지용 정제
조성:
Figure 112009068313745-PCT00004
제조:
바이오틴, 테아비고(상표) TG, 응집된 락토스, 미세결정질 셀룰로스, 이산화 규소 및 크로스포비돈을 적절한 용기에 첨가하고 텀블러 혼합기로 20 분동안 혼합하였다. 스테아르산 마그네슘을 1 mm 체를 통해 체질하여 첨가하고 조성물을 다시 2 분동안 혼합하였다. 분말을 천공 크기 17 x 7.87 mm의 타원형인 코르슈(Korsch) XP1 타정기를 사용하여 정제로 압축하였다. 1 일 1 정을 봄, 즉 일광 노출이 증가되기 적어도 2 개월 전에 시작하여 섭취하고 계절 내내 유지하였다.
실시예 3
항노화 보호를 상승시키기 위한 인스턴트 음료
조성:
Figure 112009068313745-PCT00005
제조:
모든 성분을 500 ㎛ 체를 통해 체질하였다. 분말을 적절한 용기에 넣고 텀블러 블렌더로 20 분 이상동안 혼합하였다. 물을 첨가하여 음료 1 ℓ당 분말 35 g을 사용하였다. 인스턴트 음료는 240 ml 즉석 음료 1회 제공량(serving)당 EGCG 50 mg 및 바이오틴 0.5 mg을 함유하였다. 광범한 또는 일광 욕 동안 및 후 1 일 3회 제공량까지 권장된다.
실시예 4
연속적 염기성 항노화 보호를 위한 민트
조성:
Figure 112009068313745-PCT00006
제조:
테아비고(상표) TG, 바이오틴, 아스코르브산 미세 과립, 소르비톨, 방향제, 감미료 및 PEG 6000을 드럼내로 혼합하고 텀블러 혼합기를 사용하여 10 분동안 혼합하였다. 소르비톨 및 이산화 규소를 1 mm 체를 통해 체질하고 별도의 드럼에서 10 분동안 혼합하였다. 두 분말 혼합물을 합하고 10 분동안 다시 혼합하였다. 스테아르산 마그네슘을 1 mm 체를 통해 체질 후 첨가하고 2 분동안 혼합하였다. 분말을 천공 크기 8 mm의 원형인 코르슈 XP1 타정기를 사용하여 정제로 압축하였다. 1 일 5개 민트까지 권장된다.

Claims (11)

  1. 일광 유도된 콜라게나제를 억제하기 위한 바이오틴의 용도.
  2. 일광 유도된 콜라겐 및/또는 엘라스틴 분해를 감소시키기 위한 바이오틴의 용도.
  3. 일광 유도된 주름 및 잔주름살 및/또는 피부 노화를 예방하고/하거나 감소시키기 위한 바이오틴의 용도.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항중 어느 한 항에 있어서,
    (-)-에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와의 상승적 조합 형태의 바이오틴의 용도.
  5. 제 4 항에 있어서,
    조합에서 바이오틴 : EGCG의 비가 1 : 1 내지 1 : 5000의 범위인 용도.
  6. 제 4 항에 있어서,
    조합에서 바이오틴 : EGCG의 비가 1 : 3 내지 1 : 3000의 범위인 용도.
  7. 제 4 항에 있어서,
    조합에서 바이오틴 : EGCG의 비가 1 : 5 내지 1 : 1000의 범위인 용도.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항중 어느 한 항에 있어서,
    경구 소비에 적합한 조성물에서 활성 성분으로 사용되는 바이오틴 및 적용되는 경우 EGCG의 용도.
  9. 바이오틴 : EGCG의 비가 1 : 1 내지 1 : 5000의 범위인, 바이오틴 및 EGCG의 조합을 함유하는 경구 조성물.
  10. 제 1 항에 있어서,
    바이오틴 : EGCG의 비가 1 : 3 내지 1 : 3000의 범위인 조성물.
  11. 제 1 항에 있어서,
    바이오틴 : EGCG의 비가 1 : 5 내지 1 : 1000의 범위인 조성물.
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