KR20100009444A

KR20100009444A - 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물 및 그제조방법

Info

Publication number: KR20100009444A
Application number: KR1020080070895A
Authority: KR
Inventors: 모상현; 정대현; 김형식; 안계환; 양승원; 박용운; 김상원
Original assignee: (주)바이오에프디엔씨; 주식회사 남양
Priority date: 2008-07-18
Filing date: 2008-07-18
Publication date: 2010-01-27
Also published as: KR101126136B1

Abstract

본 발명은 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산, 클루타치온, N-아세틸시스테인, 레스멜린 및 뉴로펩티드-1을 함유한 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물은 다양한 세균에 대해 광범위한 항균활성을 가지고, 항산화능이 강력하며, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아, 피부 자극을 유발할 수 있는 방부제 첨가가 필요하지 않고, 피부에 안전하면서도 티로시나제 저해 효과에 의한 미백효과가 우수하여, 피부미백 및 세균 감염에 의한 여드름, 뾰루지 등의 피부 질환에 탁월한 효과가 있다.

미백, 항균 활성

Description

피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물 및 그 제조방법{Cosmetic Composition for Skin-whitening and Antibacterial Activity and Method for Preparing the Same}

본 발명은 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물 밀 그 제조방법에 관한 것이다.

일반적으로 인간의 피부는 인체 내에서 외부 환경과 가장 밀접하게 접하고 있는 신체 기관으로, 인체 내부를 보호하는 생화학적이고 물리적인 기능을 가지고 있는 아주 중요한 기관이다. 피부는 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하지방(hypodermis)으로 크게 3부분으로 나눌 수 있고, 시간이 지남에 따라 자외선이나, 상처, 환경 오염 등에 의해 주름과 기미, 검버섯 등 노화 현상의 대표적인 증상이 나타나게 된다.

또한, 피부는 주위환경과 직접 접촉되는 부위이기 때문에 세균, 곰팡이 등의 감염이 쉽게 일어나고, 그람 양성 세균인 스타필로코커스 속(Staphylococcus sp.), 스트랩토코커스 속(Streptococcus sp.)과 그람 음성 세균인 슈도모나스 오루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 이스체리시아 콜리(Escherichia coli) 및 곰팡이 등이 상재하는데, 스타필로코커스 속에서 가장 흔히 피부에서 검출되는 종으로는 스타필로코커스 에피더미스(Staphylococcus epidermidis), 스타필로코커스 아우에우스(Staphylococcus aureus)와 프로피오니박테리윰 아크네스(Propionibacterium acnes) 등을 들 수 있다. 이러한 세균들에 의해 피부가 감염되어 여드름, 뾰루지, 버짐, 옹, 부스럼 등의 피부질환을 발생한다. 종래는 이러한 세균들을 살균시킬 목적으로 트리클로카반(Triclocarban), 트리클로산(Triclosan) 등의 화학 살균제를 사용하였으나, 그람 음성 세균과 진균에는 상대적으로 효과가 미약하며, 내성균 유발 및 피부자극을 초래하기 때문에 그 사용이 제한적일 수밖에 없었다.

한편, 멜라닌은 표피에서 생성되는 검은 색소이며 멜라노사이트라는 세포에서 생성된다. 멜라닌은 햇빛의 UV(자외선) 빛 에너지를 흡수하여 UV에 의한 손상으로 부터 더 깊숙이 있는 세포들을 보호하는 역할을 한다. 그러나 멜라닌이 비정상적으로 적게 생산되면 백반증과 같은 피부병변이 유발되고, 반대로 자외선 등에 의한 멜라닌의 과도한 합성은 피부에 손상을 줄 뿐만 아니라 기미, 주근깨를 형성하고 이와 같은 병변으로부터 나아가 피부암의 원인이 되기도 한다. 멜라닌이 합성되는 과정은, 세포내의 티로신(tyrosine)을 기질로 하여 티로시나아제(tyrosinase)효소가 작용하여 도파퀴논(dopaquinone)을 형성하고, 도파퀴논으로부터 멜라닌이 생성되는 메카니즘을 갖는다.

또한, 피부흑화(melanogenesis)는 피부 세포내에 있는 멜라닌 색소생성세포(melanocyte)에서 자외선 등의 자극에 대한 방어 기작으로 멜라닌 생성활동이 증가되고 이로 말미암아 만들어진 다량의 멜라닌이 각질형성세포(keratinocyte)로 전이 되어 피부표피층(epidermis)에 축척된 결과로, 비록 멜라닌이 피부보호작용을 하나 피부의 과색소침착은 기미, 주근깨, 피부 염증 후의 피부흑화, 노인성 색소반점 등을 일으키며 이로 인해 당사자에게 미용상의 불편뿐만 아니라 정신적으로 부정적인 영향을 미쳐 사회활동에 불편을 초래하기도 한다(M. Kubo, and H. Matsuda, Fragrance Journal, 8, 48, 1995, T. P. Dooley, R. C. Gadwood, K. Kilgore, and L. M. Thomasco, Skin Pharm., 7, 188, 1994). 따라서 최근에는 이러한 문제점을 예방 및 개선하기 위한 여러 미백용 화장품, 의약품 등이 개발되어 시판되고 있다. 따라서, 본 발명자들은 종래의 항생제 또는 화학합성 살균제의 사용으로 인한 내성 획득 균주의 출현이나 문제점을 개선할 수 있는 화장료 조성물을 연구하던 중, 인체 피부질환을 유발시키는 다양한 세균에 대하여 광범위하게 항균활성을 나타내는 미백 화장료 조성물을 발명하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 다양한 세균에 대한 광범위한 항균 활성을 가지면서 미백효과를 가지는 우수한 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산, 클루타치온, N-아세틸시스테인, 레스멜린, 뉴로펩티드-1 및 물을 포함하는 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 아르기닌, L-카르노신 및γ- 폴리글루탐산을 더 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 화장료 조성물 전체 100중량부에 대하여, 상기 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산, 클루타치온, N-아세틸시스테인, 레스멜린 및 뉴로펩티드-1은 각각 0.1∼10중량부, 0.05 ∼ 20중량부, 1∼20중량부, 0.0001∼1중량부, 0.0001∼1중량부, 1∼5중량부, 0.0001 ∼ 0.1중량부이고, 잔량의 물을 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 화장료 조성물 전체 100중량부에 대하여, 상기 아르기닌, L-카르노신 및 γ-폴리글루탐산은 각각 0.001 ∼ 5중량부, 0.01 ∼ 5중량부 및 0.1 ∼ 20 중량부인 것일 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은, 다음의 단계를 포함하는 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다:

(a) 물 30 내지 80 중량부에 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산 0.1∼10중량부, 0.05 ∼ 20중량부 및 1∼20중량부를 첨가하는 단계; 및

(b) 상기 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산이 함유된 정제수에 글루타치온, NAC, 레스멜린, 아르기닌, L-카르노신, 뉴로펩티드-1 및 γ-폴리글루탐산을 각각 0.0001∼1중량부, 0.0001∼1중량부, 1∼5중량부, 0.001 ∼ 5중량부, 0.01 ∼ 5중량부, 0.0001 ∼ 0.1중량부 및 0.1 ∼ 20 중량부를 첨가하고, 물 30 내지 80 중량부를 첨가하여 화장료 조성물을 제조하는 단계.

본 발명에 따른 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물은 다양한 세 균에 대해 광범위한 항균활성을 가지고, 항산화능이 강력하며, 장기간 보관에도 미생물의 천이가 생기기 않아, 피부 자극을 유발할 수 있는 방부제 첨가가 필요하지 않고, 피부에 안전하면서도 티로시나제 저해 효과에 의한 미백효과가 우수하여, 피부미백 및 세균 감염에 의한 여드름, 뾰루지 등의 피부 질환에 탁월한 효과가 있다.

이하, 본 발명에 따른 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물에 대하여 상세히 설명한다.

본 발명은 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산, 클루타치온, N-아세틸시스테인, 레스멜린 및 뉴로펩티드-1을 포함하는 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물에 관한 것으로, 추가적으로는 아르기닌, L-카르노신 및γ-폴리글루탐산을 더 포함할 수 있으며, 적절한 비율로 물(정제수)을 포함할 수 있다.

좀 더 구체적으로, 화장료 조성물 전체 100중량부에 대하여, 아스코르브산 0.1∼10중량부, 특히 바람직하게는 5중량부, 니아신은 0.05 ∼ 20중량부, 바람직하게는 4∼6중량부, α-히드록시산은 1∼20중량부, 바람직하게는 4∼6중량부, 글루타치온은 0.0001∼1중량부, N-아세틸시스테인 0.0001∼1중량부, 레스멜린은 1∼5중량부, 아르기닌 0.001 ∼ 5중량부, L-카르노신 0.01 ∼ 5중량부 뉴로펩티드-1 0.0001 ∼ 0.1 중량부, γ-폴리글루탐산(γ-PGA) 0.1 ∼ 20중량부로 함유할 수 있으며, 나머지 분량은 물을 적절히 포함시킬 수 있다.

상기 각각의 성분들이 함량 범위를 초과하거나 미만인 경우, 본 발명의 화장 료 조성물의 효능이 감소될 수 있는데, 구체적으로는, 상기 아스코르브산이 과량일 경우, 낮은 pH에 의해서 피부자극을 초래하고, 글루타치온이나 NAC가 과량일 경우에는 약간의 악취를 유발할 수 있다. 또한, 니아신과 α-히드록시산은 세포독성을 보일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물의 제조방법은 물 30 내지 80 중량부에 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산 0.1∼10중량부, 0.05 ∼ 20중량부 및 1∼20중량부를 첨가하여 녹인 다음, 글루타치온, NAC, 레스멜린, 아르기닌, L-카르노신, 뉴로펩티드-1 및 γ-폴리글루탐산을 각각 0.0001∼1중량부, 0.0001∼1중량부, 1∼5중량부, 0.001 ∼ 5중량부, 0.01 ∼ 5중량부, 0.0001 ∼ 0.1중량부 및 0.1 ∼ 20 중량부를 첨가하고, 물 30 내지 80 중량부를 첨가하여 화장료 조성물을 제조하는 것이다. 각 성분들을 단독으로 또는 혼합하여 정제수에 첨가할 수도 있으며, 각 성분들을 정제수에 혼합하는 순서는 상기 기재된 순서와 상이할 수도 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 각 구성성분에 대하여 살펴보면 다음과 같다.

1) 아스코르브산 (비타민 C)

인터페론의 합성을 촉진시키고, 체내에서 항바이러스 물질을 생성시켜 면역력을 상승시켜준다. Bioflavonoids와 함께 있을때 더욱 효과가 커지고, 괴혈병을 예방, 세포와 세포사이의 결합조직을 강화시켜 상처나 화상의 치유를 돕는다. 또한 동맥혈과 벽의 세포들을 강하게하여 심장박동을 일정하게 해주고, 부서지기 쉬운 말초혈관을 튼튼하게 해준다. 신경전달물질의 합성과 콜레스테롤이 담즙산으로 대 사될 때에도 관여한다. 또 자신은 산화되면서 상대방을 환원시켜주는 항산화제로서의 기능을 한다.

2) 니아신 (비타민 B3)

니코틴산으로 비타민B 복합체의 하나로 산화 환원 조효소인 NAD 및 NADP의 성분이다. 니아신은 체내에서 에너지 생성에서부터 연골(Cartilage)의 보수에까지 작용범위가 넓다. 부족하면 신경계에 영향을 미치기 때문에 우울, 흥분, 치매, 성격의 변화 등이 올 수 있고 육체적 평형감각이 둔해지며 피부가 거칠어지며 피부의 색이 황색이나 갈색의 색소가 침착하거나 딱지가 형성된다. 간이 비대되고 기능이 저하되며 입, 혀와 질 점막 등 점막이 변질되기 쉽고 졸음, 설사, 소화불량, 저혈당, 피로를 계속 느낀다. 관절운동기능이 저하 되거나, 연골의 약화 현상이 나타나며 근육의 강도가 떨어지면서 활동 범위도 축소된다. 얼굴, 목, 가슴 등으로 열감을 느끼며 붉게 되면서 두피 부분이 따끔거리는 증상이나 몸에 발진이 나타났다면, 이는 Niacin Flush 현상이다. 말초혈관이 확장되어 혈액순환이 좋아지면서 나타나는 현상이다. 과량의 비타민C와 같이 투여하여 정신분열증에 투여하기도 하고 편두통, 두통, 수족냉증, 고혈압, 고지혈증 등에 다양하게 이용된다. 또한, 멜라노사이트(Melanocyte)에서 생성된 멜라닌이 케라티노사이트(Keratinocyte)로 전이되는 과정을 차단하여 미백 효과를 돕는 기능을 한다.

3) α-히드록시산 (글리콜릭산)

α-히드록시산은 식물에서 값싸게 얻을 수 있고 레티노이드(retinoid)와 달리 햇빛에 의한 피부 자극이 없다는 점이 큰 장점이다. 여러 가지 과일, 사탕수수 등에서 쉽게 추출되는 성분이기 때문에 흔히 과일산(fruit acid)이라고도 부르고 있다. 글리콜릭산은 유두진피까지 침투되어 섬유아세포(fibroblast)를 활성화시켜 콜라겐 합성을 촉진하기 때문에 주름살 제거에 효과가 있다.

1990년대 초에 α-히드록시산이 본격적으로 쓰이기 시작하였다. 이것은 노화에 의해 피부에 필요 이상으로 남아 있는 오래된 각질들을 제거하여, 피부 세포로 신호를 전달되게 함으로써 피부를 재활성화시켜 새로운 피부세포가 생기게 하는 역할을 한다.

α-히드록시산의 3가지 특징은 다음과 같다.

첫째, 주름제거 효과가 있다. α-히드록시산이 육안으로 관찰되지 않는 상태에서 자극없이 미세한 필링작용이 지속됨으로써 피부의 재생기간이 빨라지게 되고 유두 진피층의 콜라겐의 생성량이 증가되어 탄력이 회복되며 피부는 윤기가 나고 잔주름이 없어지게 된다.

둘째, 기미, 주근께, 검버섯 제거효과가 있다. 죽은 각질 세포층이 두꺼워지면서 자외선과 여성호르몬인 프로게스테론(progesterone)의 작용에 의해 멜라닌 색소가 과잉 생성되어 만들어진 색소 침착증은 지속적인 필링에 의해 침착 색소의 탈피 작용과 피부 재생에 의해서 기미, 주근깨, 검버섯이 서서히 제거되는 자연요법적인 효과이며, 약용크림과 같은 일시적인 표백효과와는 근본적으로 다르다.

셋째, 여드름 제거효과가 있다. 여드름이란 모낭 주위에 각질이 쌓이게 되어 모공의 피지 유출을 막음으로써 이루어지고 항상 깨끗한 피부가 유지되어 여드름이 제거되고 예방되며, 또한 중성피부로 개선되는 속도가 빨라진다.

4) 글루타치온 (γ-ECG)

시스테인, 글루탐산, 글리신 등으로부터 간에서 합성된다. 중금속, 약물, 흡연, 술로부터 인체를 보호하는 매우 강력한 항산화제이다. 생체내의 산화환원 반응에 중요한 구실을 한다.

5) N-아세틸시스테인(NAC)

세포로 하여금 글루타치온을 생합성하는데 사용되는 황 함유 아미노산인 시스테인의 전구물질이다. NAC를 복용하여 세포내에 글루타치온의 함량을 효과적으로 유지할 수 있다. 독성물질을 간이나 림포사이트에서 무독화하기 위해서는 NAC가 필요하다. 술, 담배, 환경 오염물질과 같은 면역억제물질의 무독화에 강한 효능이 있다.

6) 레스멜린(Resmelin)

농축된 호장 추출물(Polygonum Cuspidatum Extract)에서 분리해 낸 고농도의 레스베라톨(Resveratol)과 측백엽 추출물(Thuja Orientalis Leaf Extract), 산초 추출물(Zanthoxylum piperitum Peel Extract)로 구성되어졌으며, 항산화제(COX2 Inhibitor)로서의 Skin Conditioning Agent로 작용하고, 피부 미백 작용과 항염, 항균작용에 의한 피부 보호 작용을 한다.

7) 아르기닌(Arginine)

강한 염기성을 가진 구조적으로 구아니딘기를 포함하고 있다. 아르기닌은 화장품에 사용되는 것 이외에도 가장 널리 이용되는 아미노산 중의 하나이다. 살아있는 유기체에서 아르기닌은 독성 암모니아를 유레아(urea)로 전환시켜 배설하는 urea cycle이라는 대사경로에서 중요한 작용을 한다.

아르기닌은 거친 피부 조절과 피부의 산뜻함과 부드러움 유지로 피부활성을 조절하고, 세포활성화를 위한 에너지원인 glucose-metabolizing 효소 활성화를 증가시킴으로써 피부세포의 대사를 활성화 시키고, 상처의 치료를 촉진하는 역할을 한다.

8) L-카르노신

카르노신(Carnosine)은 β-알라닌과 히스티딘이 결합된 β-알라닌-L-히스티딘의 디펩타이드(Dipeptide)로 수명이 긴 조직에서 상당히 많은 양이 발견되고, 특히 척추 동물 근육 세포의 비단백질 부분에 많이 존재하는데 그 양은 약 1∼20mM에 달한다. 카르노신은 세포를 산화적 스트레스로부터 보호하는 항산화제로서, 활성 산소종(Reactive Oxygen Species)을 제거하는데 뛰어난 효과를 갖는 자유 라디칼 소거제(Free Radical Scavenger)로 알려져 있다 (Boldyrevet.,Neuroscience 94(2):571-577, 1999, USP 5,866,537; USP 5,503,776). 이와 같은 항산화제로서의 기능을 이용하여 카르노신은 주로 화장품이나 피부질환 치료제로서 이용되어 왔다 (USP5,723,482; USP5,710,177). 이러한 카르노신의 보호 작용은 프로톤 완충효과(Proton Buffering), 중금속 킬레이트화(Chelating) 및 자유 라디칼과 활성 당분자의 제거를 통해 산화적 스트레스 환경에서 생체 고분자의 변형을 억제하고 이들의 고유 기능을 유지시킴으로써 이루어진다 (Boldyrevet al., Biochemistry (Mosc)65(7):751-756,2000).

또한, 최근의 연구 결과는 활성 산소에 의해 유도된 산화적 스트레스 손상으 로부터 세포를 보호하는 기능 이외에도, 카르노신이 배양 세포의 수명을 연장하고 노화 세포를 회복시키는 작용을 하는 것으로 보고하고 있다 (Wanget al., Biochemistry (Mosc)65(7)869-871,2000). 카르노신의 항노화 작용은 아밀로이드 펩타이드 (amyloid peptide), 말론디알데하이드 (malonedialdehyde) 및 하이포클로라이트 (hypochlorite)에 의한 세포 독성을 억제하고, 단백질-DNA 또는 단백질-단백질간의 교차 결합 및 당쇄화(glycosylation)를 억제하며, 카보닐(carbonyl) 그룹을 가진 저분자량 화합물과의 반응에 의한 것으로 알려져 있다. 카보닐 그룹은 노화 과정을 통해 단백질에 축적되는데, 주로 활성 산소종과 저분자량의 알데하이드 또는 케톤의 공격에 의해 발생한다. 따라서, Carnosine이 노화 과정에 발생한 단백질의 카보닐 그룹과 반응하여 단백질-카보닐-카노신 부가물 형태로 카노신화된 단백질(Carnosinylated protein)을 생성함으로써 항노화 작용을 나타내는 것으로 설명되고 있다.

9) 뉴로펩타이드-1 (Neuropeptide-1)

우리의 신체는 내,외부로부터 다양한 종류의 신호를 계속적으로 받고 있으며, 이 정보를 적절한 형태로 조합하여 신체를 일정한 상태로 유지시키고 있다. 이러한 기능을 담당하고 있는 것이 신경계로, 기능적 구성단위는 뉴런(neuron)이다. 이것은 특수하게 분화한 세포의 한 종류로 자극(Stimuli)을 전기화학적 신호(Electrochemical signal)로 전환한다. 신경계는 뉴런의 정보를 수용?전달?통합? 반응하는 과정을 통해 인식하고(perceiving), 행동하고(acting), 배우고(learning), 반응하여 (respond) 생체 내 항상성(homeostasis)유지에 기여하고 있 다. 자주 웃으며 즐거운 마음으로 살아가는 사람은 같은 나이 또래에 비해 피부가 훨씬 더 생기 있으며, 젊어보인다. 이러한 이유는 신경계를 구성하는 신경세포들로부터 Enkephaline, Endorphine같은 뉴로펩타이드들이 분비되어져 Nociceptor를 통한 일련의 신호전달 과정으로 세포 활성을 유도하기 때문이다. 뉴로펩타이드들은 일차적으로 신경세포에 작용하여 활성을 유도하고, 이후 다양한 신호전달과정으로 피부 조직의 활성을 유도할 수 있다.

10) γ-폴리글루탐산 (γ-PGA)

글루탐산과 아미드결합에 의해 중합한 물질이다. 글루탐산은 α위치와 γ위치의 탄소에 carboxyl기를 가져 이들이 아미노기와 결합한다. α위치의 카르복실기와의 아미드결합에 의해 중합한 것을 α-폴리글루탐산, γ위치의 카르복실기의 경우에는 γ-폴리글루탐산이라 부른다.

γ-폴리글루탐산은 아미노산 고분자로서 고도의 수용성 및 생분해성을 가진 음이온성 바이오 폴리머이다. 바실러스 서브틸리스(Bacillus Subtilis)를 이용해 발효, 추출한 성분이며 주름치료에 쓰이는 히알루론산(Hyaluronic Acid) 성분보다 최대 10배의 보습능력과 수분응집력을 가지고 있다. 또한 피부의 천연보습인자를 증가시켜주거나 pH밸런스를 안정적으로 조절해주는 역할을 한다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1: 본 발명의 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물의 제조

본 발명에 따른 피부미백 및 항균활성을 가지는 화장료 조성물을 수득하기 위하여, 하기의 표 1의 조성을 이용하여 제조하였다. 구체적으로, 총 1000ml의 화장료 조성물을 제조할 경우, 정제수 500ml에 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산 각각을 50g씩을 녹이고, 글루타치온 0.5g, NAC 0.3g, 레스멜린 25ml, 아르기닌 5g, L-카르노신 5g, 뉴로펩티드-1 0.01g, γ-폴리글루탐산 100ml을 순서대로 첨가한 후, 정제수로 1000 ml을 맞추어 제조하였다.

[표 1]

실험예 1: 본 발명에 따른 화장료 조성물의 항균활성 시험

실시예 1에서 제조된 화장료 조성물의 항균활성 시험은 페이퍼 디스크 아가 확산법(paper disk agar diffusion)을 응용하였다. 시험균주로 스타필로코커스 아우레우스 아종. 아우레우스(Staphylococcus aureus subsp. aureus, KCTC 1927), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa, KCTC 2513), 대장균 (Escherichia coli, KCTC 2571) 각각을 액체 배지(육즙성분(beef extract) 3.0g, 펩톤 5.0g, 아가 15.0g, 증류수 1.0L, pH 6.8)에 37℃에서 8∼24시간동안 전배양하여 활성화시킨 후, 균 현탁액을 일정한 농도(620nm에서 Optical Density 0.5)로 조절하여 희석한 후, 0.1ml씩 페트리디쉬에 접종한 후 멸균시킨 배지 10ml를 pouring하여 배지를 조성하였다. 여기에 실시예 1에서 제조된 화장료 조성물을 농도별로 희석시켜 30㎕가 흡착된 멸균 페이퍼 디스크에 24시간동안 배양한 후, 디스크 주위의 생육 억제환의 크기로 항균활성을 측정하였다. 양성 대조군으로는 균주의 항생제로 사용되고 있는 암피실린(Ampicillin)을 사용하였다.

각각의 균주에 대한 항균활성 결과는 도 1a 내지 1c 및 표 2와 같았고, 표 2에는 농도별로 희석된 실시예 1의 조성물에 의한 각각의 균주들의 생육억제 크기(inhibition zone)를 나타냈다. 특히, 슈도모나스 애루지노사의 경우는 본 발명에 따른 화장료 조성물의 항균 활성이 양성대조군인 암피실린과 거의 비슷하다는 것을 알 수 있었고, 농도의존적으로 활성이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

[표 2]

실험예 2: 본 발명에 따른 화장료 조성물의 티로시나아제 억제 효과 측정 시험

실시예 1에서 제조된 본 발명에 따른 화장료 조성물의 미백효과를 확인하기 위해, 생체내에서 티로신(Tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소인 티로시나제(Tyrosinase)의 기능이 억제되는 정도를 알아보았다. 구체적으로는, 티로시나제의 기능을 억제함으로써 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자 형성의 억제 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S.H., J. Biochem., 24:161-168,1966)을 응용해 미백효과를 판정하였다.

실시예 1에서 제조된 본 발명의 화장료 조성물을 각각 0.1％, 0.5％, 1％가 되도록 96 웰-플레이트에 넣고, 100mM의 소듐 포스페이트 완충액(pH 6.8)를 220㎕, 1.5mM L-티로신 용액 40㎕를 넣은 후, 머쉬룸 티로시나제(1,500units/ml, Sigma)를 20㎕를 첨가하여 37℃에서 20분간 반응시킨 후, 0.2 ml을 취하여 96 웰플레이트(well plate)에 옮기고, 마이크로플레이트 판독기(Microplate reader)를 사용하여 490nm에서 흡광도를 측정하여 티로시나제에 대한 저해율을 측정하였다. 티로시나제(Tyrosinase)의 기능이 억제되는 저해능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조구의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

도 2에 나타난 바와 같이, 정제수를 사용한 음성대조군(C)과 양성대조군인 알부틴에 비하여, 각각 1％ 처리시 72.9±0.3％, 0.5％ 처리시 72.1±0.3％, 0.1％ 처리시 15.5±3.1％의 산화 반응 저해능을 갖는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 효소에 의해서 매개되는 산화 반응에 대한 저해도 가능함을 확인할 수 있었고, 이 점은 미백 소재로 응용될 가능성을 나타내는 것이다.

실험예 3: 본 발명에 따른 화장료 조성물의 DPPH를 이용한 항산화 시험

화합물 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH, Sigma D9132-1G, USA)는 에 탄올 내에서 자유라디칼을 발생하는데, 실시예 1에서 제조된 본 발명에 따른 화장료 조성물과 일정 비율로 혼합하여 생성된 자유라디칼의 양이 어느 정도 감소하는지를 확인함으로써 항산화능에 따른 미백 촉진 효과를 갖는지를 알아보았다.

에탄올 0.4ml과 에탄올에 녹여진 0.1mM DPPH 0.5ml 및 정제수를 이용하여 최종농도가 10％ ∼ 0.1％ 되도록 화장료 조성물을 0.1ml을 첨가하였다. 10초간 강하게 볼텍싱(vortexing) 하고, 냉암소에서 30분간 보관한 다음, ELISA를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다.

도 3에 나타난 바와 같이, 정제수를 사용한 음성대조군(C)와 양성대조군인 0.1％ 비타민 C와 비교하여 각각 0.1％ 처리시 반응계의 DPPH 자유라디칼이 71.9％, 0.5％ 처리시 72.24％, 1％ 처리시 71.9％ 감소됨을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명에 따른 화장료 조성물을 화장품 제조에 응용할 경우, 유의적인 항산화능으로 미백 효과를 나타낼 것이다.

실험예 4: 본 발명에 따른 화장료 조성물의 잔존 생균 시험을 통한 정균능

본 발명에 따른 화장료 조성물이 자발적 정균능을 통하여, 첨가되는 방부제 처리 없이 미생물의 천이를 억제할 수 있는지를 확인하였다.

실시예 1에서 제조된 화장료 조성물 내 발생 가능한 생균의 수를 확인하기 위하여 조성물을 제조한 직후, 그리고 30일간 상온에서 방치한 후 생균수 확인 시험을 실시하였다. 실시예 1에서 제조된 화장료 조성물 0.1 ml을 레틴 한천배지 (Difco, USA)에 도말하고, 30℃에서 48시간동안 배양하여 세균의 존재를 확인하였 으며, 0.1ml을 사브로우드 덱스트로즈 한천배지 (Difco, USA)에 도말하고 25℃에서 72시간동안 배양하여 진균의 존재를 확인하였다.

도 4에서 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 화장료 조성물 제조 직후 세균 (A)과 진균 (B)의 존재를 한천 배지에 도말 후 배양하는 방법으로 확인한 결과 생균이 존재하지 않았으며, 상온에서 30일간 방치 후에도 세균 (C)과 진균 (D)이 존재하지 못하였음을 확인할 수 있었다. 따라서, 상온에서 장기간 보관으로도 방부제의 첨가 없이 미생물의 천이를 억제하는 본 발명에 따른 화장료 조성물의 정균능은 세균 및 진균 등의 비정상적 천이를 억제함으로써 미백 효과를 가능하게 할 수 있을 것이다.

도 1a 내지 도 1c는 본 발명에 따른 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물의 항균활성 시험 결과를 나타낸 사진이다 (도 1a: 스타필로코커스 아우레우스 아종. 아우레우스(Staphylococcus aureus subsp. aureus, KCTC 1927),도 1b: 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa, KCTC 2513) 및 도 1c: 대장균(Escherichia coli, KCTC 2571)).

도 2는 본 발명에 따른 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물의 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 그래프이다.

도 3은 본 발명에 따른 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물의 항산화능에 의한 효과를 DPPH의 자유라디컬 소거능으로 확인한 그래프이다.

도 4는 본 발명에 따른 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물의 정균능에 의한 피부미백 및 주름개선 효과를 나타낸 그래프이다 (A 및 B: 한방 조성물 제조 직후의 세균 및 진균; C 및 D: 상온에서 30일간 방치 후 세균 및 진균).

Claims

아스코르브산, 니아신, α-히드록시산, 클루타치온, N-아세틸시스테인, 레스멜린, 뉴로펩티드-1 및 물을 포함하는 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 아르기닌, L-카르노신 및γ-폴리글루탐산을 더 포함하는 것인 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 전체 100중량부에 대하여, 상기 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산, 클루타치온, N-아세틸시스테인, 레스멜린 및 뉴로펩티드-1은 각각 0.1∼10중량부, 0.05 ∼ 20중량부, 1∼20중량부, 0.0001∼1중량부, 0.0001∼1중량부, 1∼5중량부, 0.0001 ∼ 0.1중량부이고, 잔량의 물을 포함하는 것인 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물.
제2항에 있어서, 조성물 전체 100중량부에 대하여, 상기 아르기닌, L-카르노신 및γ-폴리글루탐산은 각각 0.001 ∼ 5중량부, 0.01 ∼ 5중량부 및 0.1 ∼ 20 중량부인 것인 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물.
다음의 단계를 포함하는 피부미백 및 항균 활성을 가지는 화장료 조성물의 제조방법:

(a) 물 30 내지 80 중량부에 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산 0.1∼10중량부, 0.05 ∼ 20중량부 및 1∼20중량부를 첨가하는 단계; 및

(b) 상기 아스코르브산, 니아신, α-히드록시산이 함유된 정제수에 글루타치온, NAC, 레스멜린, 아르기닌, L-카르노신, 뉴로펩티드-1 및 γ-폴리글루탐산을 각각 0.0001∼1중량부, 0.0001∼1중량부, 1∼5중량부, 0.001 ∼ 5중량부, 0.01 ∼ 5중량부, 0.0001 ∼ 0.1중량부 및 0.1 ∼ 20 중량부를 첨가하고, 물 30 내지 80 중량부를 첨가하여 화장료 조성물을 제조하는 단계.