KR101229748B1

KR101229748B1 - 비타민나무 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101229748B1
Application number: KR1020100009045A
Authority: KR
Inventors: 주영아; 김주호; 문선영; 윤종혁
Original assignee: 코스맥스 주식회사
Priority date: 2010-02-01
Filing date: 2010-02-01
Publication date: 2013-02-05
Also published as: KR20110089580A

Abstract

본 발명은 비타민나무의 가지, 잎, 열매를 효모균(Saccharomyces cerevisiae), 누룩균(Aspergillus oryzae), 고초균(Bacillus subtilis) 또는 유산균(Lactobacillus bulgaricus) 을 접종하여 발효시키거나, 자연발효시켜 숙성하여 얻은 추출물을 사용하여 피부의 치유 개선 효과, 보습, 미백 및 항노화 등에서 우수한 효과를 갖는 안전한 화장료 조성물를 제공한다.

Description

비타민나무 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic compositions containing fermented extract of Hippophae rhamnoides L}

본 발명은 비타민나무의 가지, 잎, 열매를 효모균(Saccharomyces cerevisiae), 누룩균(Aspergillus oryzae), 고초균(Bacillus subtilis) 및 유산균(Lactobacillus bulgaricus) 을 접종하여 발효 숙성한 발효추출물을 함유하는 우수한 피부의 치유 개선 효과, 보습, 미백 및 항노화 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부의 노화는 피부의 주름이 증가하고, 이완되며, 광택, 윤기, 매끄러움이 저하되며, 탄력이 저하된다. 그리고 살결이 거칠어지고, 주름이 흐트러지며 색소침착반이 증가하고, 부분적인 탈색소반이 생기며, 황색을 띠게 된다. 이러한 노화도 자연노화와 광노화로 나눌 수 있는데, 자외선이 원인이 되어 일어나는 피부변화를 광노화라 부르며, 태양 빛에 거의 노출되지 않는 부위에 나타나는 나이에 따른 변화를 자연노화라 부른다.

이렇게 자외선의 유무로 피부의 노화속도는 달라질 수 있지만, 결과적으로 사람의 피부는 노화될 수밖에 없음을 시사한다. 이렇듯 인간의 피부는 주름 증가와 탄력감소, 피부건조, 색소 침착 등의 여러 형태로 노화가 진행되며 어느 하나 만의 조절로 피부노화를 막을 수는 없는 것이다.

이에 본 발명에서는 피부노화의 전반적인 억제를 위해 다양한 효능을 지닌 화장료를 제공하고자하는 것이다.

피부는 자외선에 노출되어 있어 활성 산소종을 만드는 광화학적 반응들이 계속해서 일어나고 있다. 이들 활성 산소종들은 피부에 염증이 생길 경우 피부 세포 및 조직 손상을 주도하기도 한다. 이들은 항산화 효소와 비효소적 항산화제들로 구성된 항산화 방어망을 파괴함으로써 산화제/항산화제 균형을 산화 상태로 기울게 한다. 피부에는 이러한 외인성 인자로부터 방어하기 위한 수단으로서 vitamin E, vitamin C, ubiquinol과 glutathione과 같은 항산화제와 수퍼옥시드 디스무타아제(superoxide dismutase: SOD), 글루타치온 퍼옥시다아제(glutathioneperoxidase : GPx), 카탈라아제(catalase: CAT)와 같은 항산화효소가 존재한다. 하지만 UV와 같은 외인성 인자의 지속적인 노출은 피부의 방어시스템인 항산화제의 감소와 항산화효소의 파괴를 초래하고 결과적으로 산화적 스트레스가 일어나 세포 성분들을 손상시키고 광노화를 촉진시키게 된다 (Sies, H. (1986) Biochemistry of oxidative stress . Angew. Chem. 25, 1058-1071., Sies, H. (1991) Oxidative stress : Oxidants and antioxidant s . Academic Press, N . Y.).

또한 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면, 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려하며 그 결과 염증이 발생하게 된다. 이러한 염증을 소실시키기 위해 염증원의 제거, 생체반응 및 증상을 감소시키는 작용을 하는 것을 항염제라고 한다. 현재까지 항염의 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 프루폐나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin)등이 있고 스테로이드계통으로 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone)등이 있으며(김창종, 병태생리학, 한림상사, p61-69, 1988) 알란토인, 아즈렌,ε-아미노키프론산, 하이드로코티존(ⅴ), 감초산 및 그 유도체(β-글리칠레친산, 글리칠레친산유도체)등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.(광정무부, 신화장품학, 남산당, p162, 1993)

또한 외적 내적 요인에 의해 발생된 복합적 피부 노화 과정에서 생긴 물질은 멜라닌과 주름을 생성시키는 원인물질로 여겨진다. 피부내 탄력을 유지시켜주는 고분자 기질들 (콜라겐, 히아루론산, 엘라스틴)등에 활성산소를 노출함으로써 이들 기질들이 순차적으로 절단됨이 밝혀졌다 . 한편 피부에서의 색소 침착은 멜라닌 생성 혹은 멜라노사이트의 증식에 의해 야기되며 이러한 색소 침착은 다양한 방법으로 억제가 가능하다. 일반적으로 이용되는 방법으로는 멜라닌합성의 중요한 효소인 티로시나제(Tyrosinase) 활성억제, 멜라노사이트의 기능감소, 자동산화 반응의 억제를 통한 멜라닌 생성의 감소, 홍반과 같은 염증반응 억제등 다양한 경로를 이용할 수 있다.

이러한 외적 요인에 의한 피부조직의 파괴는 건조한 피부에서 좀 더 가속화되며 이러한 이유로 피부에서 수분함량은 유연하고 건강한 피부의 표면을 유지하기 위해 매우 중요하다. 각질층의 수분함량은 각질층의 유연성과 보호기능과 밀접한 관련이 있는데, 진피에서 각질층으로 도달하는 물의 비율, 증발에 의해 배출되는 물의 비율 및 각질층의 물 보유능력에 의해 좌우된다. 또한 규칙적인 각질화로 생성된 각질층안의 수분의 양은 항상 10~20%를 유지한다. 이것은 땀과 피지의 혼합으로 되어 있는 피지막 때문으로, 외부로부터 피부를 보호하고, 각질층에서 수분이 증발되는 것을 막고 있다. 그러나 피부가 노화되면 피부의 탄력에 중요한 역할을 하고 있는 매트릭스(matrix)안의 콜라겐 (collagen), 뮤코폴리사카라이드(mucopolysaccharide), 히아루론산(hyaluronic acid)의 양이 줄어들고 불용성 콜라겐의 양이 증가한다. 이렇게 되면 진피는 피부의 수분을 유지하기 어렵게 되고 피부는 거칠게 된다. 더 나아가 노화sa더불어 피지샘과 땀샘의 기능도 감소하여 피지sa땀의 양이 점차로 줄어들게 된다. 이로 인해 피지막은 적당히 생성되지 못하고 피부 수화에 대한 보호능을 잃게 되어 결국에는 피부는 건조하게 된다.(Esko Alanen, Jouni Nuutinen, Kirsi Nickle´n, Tapani Lahtinen and Jukka Mo¨nkko¨nen , Measurement of hydration in the stratum corneum with the MoistureMeter and comparison with the Corneometer, Skin Research and Technology, 10: pp32-37, (2004))

이러한 일련의 반응들이 다양한 메카니즘으로 진행되며, 이들의 종합적인 결과가 결국은 피부노화를 가져오는 것이라고 보아도 무방할 것이다.

본 발명에서는 이러한 종합적인 반응과정의 다양한 부분을 억제 및 증진시키고자 하였다.

본 발명에서 사용한 비타민 나무(Hippophae rhamnoides L)는 보리수과에 속하는 아교목성 식물로 동아시아와 유럽이 원산지로 강가나 바닷가 둔덕에서 잘 자라고 꽃이 없이 노란색에서 주홍색에 이르는 달걀 모양의 열매가 열리는 나무이다. 주요성분으로는 열매에는 많은 비타민을 함유하고 있는데, 그 중에서도 특히 비타민 A, C, E 및 P의 함량은 다른 과일이나 채소에 비하여 월등히 많다. (조선대백과사전,백과사전 출판사,1999,200~201)

본 발명의 목적은 비타민 나무열매, 가지, 혹은 잎을 효모균(Saccharomyces cerevisiae), 누룩균(Aspergillus oryzae), 고초균(Bacillus subtilis) 또는 유산균(Lactobacillus bulgaricus) 을 접종시켜 발효시키거나, 자연발효시켜 단순하게 추출하여 얻어진 추출물보다, 보습효과, 항염효과, 항산화 효과, 미백 및 항노화 효능이 월등히 우수하고 안정성 및 안전성에 문제가 없는 물질을 천연물로부터 추출하여 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 이러한 효능을 갖는 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

비타민나무(Hippophae rhamnoides L) 열매, 잎 또는 가지 일정량에 대하여 정제수 1~20배량을 넣고 80~120℃에서 0.5~6시간 가온한다. 가온 후 온도를 15~35℃ 로 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae), 누룩균(Aspergillus oryzae), 고초균(Bacillus subtilis) 또는 유산균(Lactobacillus bulgaricus) 을 접종시켜 단독 발효시키거나, 쌀, 좁쌀, 찹쌀, 현미, 보리 등의 발효액과 혼합하여 일정기간 (1~10일이상) 발효시키거나 또는 4~30℃에서 자연 발효시킨 후, 추출 용매로서 물, 에탄올, 글리세린, 부틸렌그리콜 및 프로필렌글리콜로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 1-20배 부피량을 가한다. 추출 방법으로는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50-95℃, 4-20시간 가열하여 추출하거나, 5~37℃에서 1~15일간 침적시켜 유효성분을 추출한다.

본 발명의 발효추출물을 얻는 또 다른 추출방법은 비타민 나무열매, 잎, 또는 가지 일정량에 대하여 에탄올 혹은 정제수 또는 두 용매의 혼합액을 1~20배 부피량 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50-95℃, 4-20시간 가열하여 추출하거나, 5~37℃에서 1~15일간 침적시켜 성분을 추출하여 감압 농축하여 얻은 1차 추출물 일정량에 대하여 다시 정제수 1~20배량을 넣고 80~120℃에서 0.5~6시간 가온한다. 가온 후 온도를 15~35℃ 로 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae), 누룩균(Aspergillus oryzae), 고초균(Bacillus subtilis) 또는 유산균(Lactobacillus bulgaricus) 을 접종시키켜 단독 발효하거나, 쌀, 좁쌀, 찹쌀, 현미, 보리등의 발효액과 혼합하여 일정기간(1~10일이상) 발효시킨 후, 추출 용매로서 물, 에탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 1-20배 부피량을 가한다. 추출 방법으로는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50-95℃, 4-20시간 가열하여 추출하거나, 5~37℃에서 1~15일간 침적시켜 유효성분을 추출하는 방법을 사용할 수 있다.

본 발명의 비타민나무 발효물을 제조하기 위한 효모로는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae), 사카로마이세스 사케이(Saccharomyces sakei) 등을 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae)가 적합하다. 유산균으로, 락토바실러스 브레비스 (Lactobacillus brevis), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 등을 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 락토바실러스 브레비스 (Lactobacillus bulgaricus)가 적합하다.

이렇게 추출된 추출액을 조성물 전체중량의 0.01~80중량%, 바람직하게는 0.1 내지 80.0 중량% 범위로 혼합하여 화장료 조성물에 첨가하는 것이다.

본 발명은 비타민나무를 효모균(Saccharomyces cerevisiae), 누룩균(Aspergillus oryzae), 고초균(Bacillus subtilis) 또는 유산균(Lactobacillus bulgaricus) 을 접종하여 발효시키거나, 자연발효시켜 숙성하여 얻은 추출물을 유효성분으로 사용함으로써 우수한 피부의 치유 개선 효과, 보습, 미백 및 항노화 효과를 갖는 안전한 화장료 조성물를 제공한다.

아래의 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 설명하나, 본 발명의 내용이 여기에 한정되지는 않는다.

실시예 1.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 25℃ 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae)을 접종하여 25℃에서 10일 배양한다. 배양 후 에탄올을 6kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하여 추출액 7.2kg(고형분 0.25%)을 얻었다.

실시예 2.

실시예 1과 같은 방법으로 비타민나무 가지를 처리하여 추출액 7.1kg(고형분 0.34%)을 얻었다.

실시예 3.

실시예 1과 같은 방법으로 비타민나무 잎을 처리하여 추출액 7.1kg(고형분 0.3%)을 얻었다.

실시예 4.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 25℃ 냉각한 후 누룩균(Aspergillus oryzae)을 접종하여 25℃에서 10일 배양한다. 배양 후 에탄올을 6kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하여 추출액 7.2kg(고형분 0.24%)을 얻었다

실시예 5.

실시예 4과 같은 방법으로 비타민나무 가지를 처리하여 추출액 7.1kg(고형분 0.29%)을 얻었다.

실시예 6.

실시예 4과 같은 방법으로 비타민나무 잎을 처리하여 추출액 7.1kg(고형분 0.31%)을 얻었다.

실시예 7.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 25℃ 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae)을 접종하여 25℃에서 10일 배양한다. 배양 후 프로필렌 글리콜을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하여 추출액 3.5kg(고형분 0.51%)을 얻었다.

실시예 8.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 25℃ 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae)을 접종하여 25℃에서 10일 배양한다. 배양 후 정제수을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하고 60℃ 농축하여 추출물 17.4g 을 얻었다.

실시예 9.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 25℃ 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae)을 접종하여 25℃에서 10일 배양한다. 배양 후 에탄올을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하고 60℃ 농축하여 추출물 15.4g 을 얻었다.

실시예 10.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 30℃ 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae)을 접종하여 30℃에서 2일 배양한다. 배양 후 에탄올을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하고 60℃ 농축하여 추출물 19.0g 을 얻었다.

실시예 11.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 25℃ 냉각한 후 누룩균(Aspergillus oryzae)을 접종하여 25℃에서 10일 배양한다. 배양 후 에탄올을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하고 60℃ 농축하여 추출물 18.8g 을 얻었다.

실시예 12.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 30℃ 냉각한 후 고초균(Bacillus subtilis)을 접종하여 30℃에서 2일 배양한다. 배양 후 에탄올을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하고 60℃ 농축하여 추출물 18.5g 을 얻었다.

실시예 13.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 30℃ 냉각한 후 유산균(Lactobacillus bulgaricus)을 접종하여 2일 배양한다. 배양 후 에탄올을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하고 60℃ 농축하여 추출물 16.6g 을 얻었다.

실시예 14.

비타민나무열매 200g을 70% 에탄올 2kg 에 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 있는 60℃의 수욕조에서 5시간 가열 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하여 60℃ 농축하여 추출물 56.3g 을 얻었다. 이러한 방법으로 얻어진 추출물 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 121 ℃ 에서 20분 동안 가온한 후 25℃ 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae)을 접종하여 25℃에서 2일 배양한다. 배양 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하여 60℃에서 감압농축하여 추출물 212.8g 을 얻었다.

실시예 15.

비타민나무열매 200g을 70% 에탄올 2kg 에 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 있는 60℃의 수욕조에서 5시간 가열 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하여 60℃ 농축하여 추출물 56.3g 을 얻었다. 이러한 방법으로 얻어진 추출물 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 121 ℃ 에서 20분 동안 가온한 후 30℃ 냉각한 후 효모균(Saccharomyces cerevisiae)을 접종하여 30℃에서 2일 배양한다. 배양 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하여 60℃에서 감압 농축하여 추출물 208.2g 을 얻었다.

실시예 16.

비타민나무열매 200g을 70% 에탄올 2kg 에 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 있는 60℃의 수욕조에서 5시간 가열 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하여 60℃ 농축하여 추출물 56.3g 을 얻었다. 이러한 방법으로 얻어진 추출물 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 121 ℃ 에서 20분 동안 가온한 후 25℃ 냉각한 후 누룩균(Aspergillus oryzae)을 접종하여 25℃에서 2일 배양한다. 배양 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하여 60℃에서 감압 농축하여 추출물 196.4g 을 얻었다.

실시예 17.

비타민나무열매 200g을 70% 에탄올 2kg 에 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 있는 60℃의 수욕조에서 5시간 가열 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하여 60℃ 농축하여 추출물 56.3g 을 얻었다. 이러한 방법으로 얻어진 추출물 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 121 ℃ 에서 20분 동안 가온한 후 30℃ 냉각한 후 고초균(Bacillus subtilis)을 접종하여 25℃에서 2일 배양한다. 배양 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하여 60℃에서 감압 농축하여 추출물 199.5g 을 얻었다.

실시예 18.

비타민나무열매 200g을 70% 에탄올 2kg 에 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 있는 60℃의 수욕조에서 5시간 가열 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하여 60℃ 농축하여 추출물 56.3g 을 얻었다. 이러한 방법으로 얻어진 추출물 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 121 ℃ 에서 20분 동안 가온한 후 30℃ 냉각한 후 유산균(Lactobacillus bulgaricus)을 접종하여 25℃에서 2일 배양한다. 배양 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하여 60℃에서 감압 농축하여 추출물 214.6g 을 얻었다.

실시예 19.

비타민 나무 열매 200g을 멸균된 병 500ml에 넣고 공기가 잘 통하는 천으로 막아 15℃ 에서 60일간 자연 발효 시키고, 발효 후 에탄올을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하고 60℃ 농축하여 추출물 13.4g 을 얻었다.

비교 실시예 1.

비타민 나무 열매 200g을 정제수 2kg 이 들어있는 용기에서 넣고 100 ℃ 에서 3시간동안 가온한 후 25℃ 냉각하고 에탄올을 2kg 을 가하여 2시간 교반한 후 여과지(와트만 No. 5)로 여과하고 60℃ 농축하여 추출물 15.2g 을 얻었다.

비교 실시예 2.

비타민나무열매 200g을 70% 에탄올 2kg 에 넣고 냉각 콘덴서가 장치되어 있는 60℃의 수욕조에서 5시간 가열 추출한 후 250메쉬 여과포로 여과하여 60℃ 농축하여 추출물 56.3g 을 얻었다.

실험예 1. 비타민나무 발효추출물의 프리라디칼 소거 효능 실험

상기 실시 1 - 19와 비교실시예 1-2를 시료로 사용하여 푸지타(Fujita) 등의 방법(Y.Fugita et al., Yakugak Zasshi, 108, p129, 1988)을 개선한 것으로, 안정한 1,1-디페닐-2-피크릴히드라질 라디칼(1,1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl radical)을 사용하였다. 0.2 mM 의 디페닐-2-피크릴히드라질 (DPPH) 용액 1㎖에 시료를 각 농도별로 2㎖을 첨가하고, 상온에서 10분간 반응 시킨 후, 525nm에서 최대 흡광도를 측정하여 하기 수학식 2로 자유 라디칼 소거효과(%)를 계산하여 , 각각의 실시예가 갖는 Free radical 소거활성 SC50 은 Free radical 을 50% 소거하는데 요구되는 추출물 및 화합물의 농도(㎍/㎖)로써 표시하였으며 그 결과를 표 1에 나타내었다.

<수학식 2>

자유 라디칼 소거효과(%) = [1-(A-A')/(B-B')] x 100

A : 시료와 DPPH를 첨가한 반응용액의 525nm에서 흡광도

A' : DPPH를 첨가하지 않은 반응용액의 525nm에서 흡광도

B : DPPH를 첨가한 반응용액의 525nm에서 흡광도

B' : 시료와 DPPH를 첨가하지 않은 반응용액의 525nm에서 흡광도

표 1 프리라디칼 소거작용 효과

표 1은 비타민나무 발효추출물의 프리라디칼소거 효능을 실험한 데이터로, 발효시키지 않은 비교실시에 1,2 는 프리라디칼 소거 효능이 상대적으로 떨이지며, 비타민나무의 열매, 가지, 잎 중에서도 비타민나무 열매를 발효추출한 것이 효능이 좋은 것을 확인할 수 있었다.

실험예 2. 비타민나무 발효추출물의 항염 실험

상기 비타민나무 발효추출물 1 - 19와 비교실시예 1-2에 대하여 항염 효과를 측정 하였다.

실험 방법

마우스 좌측귀를 대조부위, 우측귀를 시험부위로 하여 시료을 적용하기 전에 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하고, 시료 20㎕를 1일 1회 4일간 지속적으로 도포하고 마지막 도포 1시간 후에 좌측귀에 에탄올을, 우측귀에는 아라키돈산(Arachidonic acid)을 2㎎/ear을 도포하여 1시간 후 귀의부종(ear edema) 정도를 마이크로미터로 양쪽귀를 3회씩 반복 측정하였다.

항염효과는 아라키돈산(Arachidonic acid) 처리군을 기준으로 부종억제 정도로 판정하였으며 그 결과를 표. 3 에 나타내었다.

※ 억제율(%) = (A ― B) / A × 100

A : 대조군귀의 평균두께 (아라키돈산 처리귀의 두께 - 비처리 귀의두께)

B : 증자 발효추출물 도포군 귀의두께 (아라키돈산 처리귀의 두께 - 비처리 귀의두께)

표2 비타민나무 발효추출물의 항염효과

표 2는 비타민나무 발효추출물의 항염효과를 실험한 결과로, 실시예 2,3,5,6에서 항염효과가 나타나지 않아서 비타민나무의 열매 부분에서만 항염효과가 나타나는 것을 알 수 있었다.

실험예 3. 비타민나무 발효추출물의 보습실험

상기 비타민나무 발효추출물에 대한 Courage+Khazaka 사의 Corneometer CM 825 를 사용하여 보습 효과를 측정하여 나타내었고, 실시예 1 - 19와 비교실시예 1-2에 대하여서는 고형분을 1%로 고정하여 추출용매로 희석하여 보습실험을 실시하였고 시료 도포 40분 후의 값을 측정하여 표7에 나타내었다.

실험 방법

20 대 여성 20 명을 대상으로 상박부 2 × 2 ㎠ , 8 구획을 물로 여러 차례 세정한 후 자극없이 수분을 제거한다. 5 분경과 후, 각각 2 구획에 대하여 측정시료10 ㎕ 씩 점적하여 고르게 도포한다. 10 분 후, Corneometer를 이용하여 하나의 구획 당 5 회 측정한다. 1 구획에 대하여 5 분 간격으로 6 회 측정한다. 실내온도는 20℃, 상대습도 20% 였다.

Water contents (%) = 시료 도포후 Corneometer Value - 시료 도포전 Corneometer Value

이며, data 값은 20 명에 대한 평균치로 나타냈다.

표 3 . 비타민나무 발효추출물의 보습효과

표 3은 비타민나무 발효추출물의 보습효과를 실험한 결과로, 비타민나무 발효추출물 보다 발효시키지 않은 비교 실시에 1, 2의 수치가 낮게 나타나었다. 이것은 발효과정을 통하여 보습효과가 높아지는 것을 알수 있었다.

실험예 4. 비타민나무 발효추출물의 티로시나아제 저해 실험.

상기 실시예 1 - 19와 비교실시예 1-2를 시료로 사용하여 1500ug/㎖의 농도에서 머쉬룸 티로시나제 활성 저해효과를 바니 등의 방법(A. Vanni, Annali di Chimica, 80, p35, 1990)을 이용하여 측정하였다. 구체적으로, 0.1 M 포타슘 포스페이트 완충액(pH 6.8) 1.0 ㎖, 0.3 ㎎/㎖ L-티로신 수용액 1.0 ㎖, 1,250 유닛/㎖ 머쉬룸 티로시나제(SIGMA사, T-7755) 0.1 ㎖를 혼합한 후 여기에 시료용액을 농도에 따라 각각 0.2 ㎖ 첨가하여 37℃에서 10분간 효소반응을 진행시켰다. 반응용액의 흡광도를 480nm에서 측정하여 하기 수학식 3로 티로시나제 활성 억제 효과를 계산하여 그 결과를 표 7에 나타내었다.

<수학식 3>

머쉬룸 티로시나제 활성 억제율(%) = [1-(A-A')/(B-B')] x 100

A : 시료와 효소를 첨가한 반응용액의 480nm에서 흡광도

A' : 시료만 첨가한 반응용액의 480nm에서 흡광도

B : 시료를 첨가하지 않지 않고 효소만 첨가한 반응용액의 480nm에서 흡광도

B': 시료와 효소를 첨가하지 않은 반응용액의 480nm에서 흡광도

표 4. 머쉬룸 티로시나제 활성 억제율(%)

표4는 비타민나무 발효 추출물의 머쉬룸 티로시나아제 활성억제률을 나타낸 것으로, 비타민 나무의 가지 부분의 발효추출물은 티로시나아제 활성 억제능이 없는 것을 알수 있었다.

실험예 5. 비타민나무 발효추출물의 멜라노마 B16의 멜라닌 생성 억제 활성

상기 실시예 1 - 19와 비교실시예 1-2를 시료에 대하여 멜라노마 B16의 멜라닌 생성 억제작용효과를 측정 하였다. 구체적으로, 멜라노사이트 배양을 통하여 멜라닌 생성 억제 기능을 세포 수준에서 검정 하였다. B16 멜라노마 세포는 10 % 소의 멜라노마 세포를 5 % 이산화탄소가 존재하는 곳에서 2일간 배양하여 1.0 X 108 세포 / T25 프라스크가 될 때까지 배양한다. 그 다음 농도별로 혼합 식물 추출물을 넣고 5 % 이산화탄소가 존재하는 곳에서 2일간 배양한다. 그 후 트립신을 첨가하여 세포들을 수거하여 세포의 흑화 정도를 관찰한다. 멜라닌이 생성되어 배출된 T25 프라스크의 상층액을 취해 475 nm 에서 흡광도를 측정하여 멜라닌을 정량하고, 세포수는 수거된 세포: 트립판 블루(tryphan blue) = 1 : 9 의 비율로 혼합하여 현미경으로 관찰하여 살아있는 세포수를 세어 단위 세포당 생성된 멜라닌의 양을 정량하여 저해 효과를 나타낸다. 멜라닌 생성량 및 멜라닌 생성 저해효과는 하기 공식으로 구한 다음, 그 결과를 표 8에 나타내었다.

<수학식 4>

멜라닌 생성량 = 흡광계수(0.1498) × A475

<수학식 5>

멜라닌 생성 저해효과 = 1 - 멜라닌 생성량/시료의 세포수

<표 8>멜라닌 생성 저해효과(%)

표 5 . 멜라닌 생성 저해효과(%)

표 5는 비타민나무 발효추출물의 멜라닌 생성 저해 효과를 실험한 결과로, 실시예 2,3,5,6에서 멜라닌 생성 저해 효과가 나타나지 않아서 비타민나무의 열매 부분에서만 멜라닌 생성 저해 효과가 있는 것을 알 수 있었다.

처방예 조제 기준

하기 처방은 상기 실험예1~19에서 측정된 결과를 근거로 실시예 10의 추출물이 전반적으로 높은 효과를 나타내었고, 이에 따라 실시예 10의 추출물을 사용하여 제조하였다.

처방예 1.

상기 비타민나무 발효추출물을 함유한 화장료 중 화장수(스킨로션)의 처방예는 다음과 같다. 여기서 실시한 시료는 실시예 10의 것을 말한다.

표6

<제조방법>

1) 수상성분을 모두 넣고 균일하게 용해 및 혼합한다.

2) 에탄올파트 성분을 모두 넣고 균일하게 용해 및 혼합한다.

3) 상기 1)의 수상성분에 상기 2)의 에탄올파트 성분을 천천히 투입하여 혼합한다.

4) 상기 3)에 수상성분 2를 투입한 후, 혼합한 후 여과하여 숙성시킨다.

처방예 2.

상기 비타민나무 발효추출물을 함유한 화장료 중 영양로션의 처방예는 다음과 같다.

여기서 실시한 시료는 실시예 10 의 것을 말한다.

표7

<제조방법>

1) 유상성분 1을 모두 넣고 70~75℃에서 가열하여 균일하게 용해 및 혼합한다.

2) 수상성분 1을 모두 넣고 70~75℃에서 가열하여 균일하게 용해 및 혼합한다.

3) 상기 2)의 수상성분에 상기 1)의 유상성분을 교반하면서 70~75℃를 유지한 상태에서 투압하여 에멀젼을 만들고 45℃까지 냉각하였다.

4) 상기 3)에 수상성분 2, 유상성분 2 를 투입한 후 30℃까지 냉각한 후 숙성시킨다.

처방예 3

상기 비타민나무 발효추출물 을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.

여기서 실시한 시료는 실시예 10 의 것을 말한다.

표8

<제조방법>

처방예 4.

상기 비타민나무 발효추출물을 함유한 화장료중 에센스의 처방예는 다음과 같다.

여기서 실시한 시료는 실시예 10의 것을 말한다.

표9

<제조방법>

1) 수상성분을 모두 넣고 균일하게 용해 및 혼합한다.

3) 상기 1)의 수상성분에 상기 2)의 에탄올파트 성분을 천천히 투입하여 혼합한 후, 여과하여 숙성시킨다.

시험예 1. 피부 개선효과 확인실험

처방예 3과 비교처방예 3(비타민나무발효추출을 제외하고 처방예3과 동일) 의 영양크림에 대한 피부 도포시, 피부 손상 개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같은 임상 확인 실험을 하였다. 동일인에게 왼쪽 손에는 처방예 3의 영양크림을, 복부 오른쪽 손에는 비교처방예 3의 영양크림을 매일 저녁 세정 후, 피부에 1일 1회 60일간 도포한 후 피부 개선을 확인하기 위하여 피부상태 개선 정도를 측정하였다.

표 10. 비타민나무 발효 추출물의 피부 개선효과

상기 조사결과와 같이 상기 비타민나무 발효추출물을 첨가하여 제조한 처방예 3의 화장료가 첨가하지 않고 제조한 비교 처방예 3보다 피부 치유 개선효과가 우수하다는 것을 알 수 있다.

Claims

비타민나무의 열매, 가지 및 잎을 효모균, 누룩균, 고초균 또는 유산균을 이용하여 숙성 발효시킨 비타민나무 발효추출물을 조성물 전체중량에 대해서 0.1 ~ 80.0중량% 함유함을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 비타민나무 발효추출물은 비타민나무의 열매, 가지 및 잎을 직접 발효시켜 추출하여 얻은 추출물, 또는 먼저 1차 추출물을 얻은 후 이를 발효시켜 얻어진 추출물 임을 특징으로 하는 화장료 조성물
삭제
제1항 또는 제2항에 있어서, 비타민나무 발효추출물은 비타민나무의 열매를 발효하여 얻어진 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 비타민나무 발효추출물은 효모균을 이용하여 숙성 발효한 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제1항 또는 제2항에 있어서, 화장료 조성물은 보습효과, 미백 및 항노화 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
제 1 항 또는 제2항에 있어서, 추출 방법으로 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50-95℃, 4-20시간 가열하여 추출하거나, 5~37℃에서 1~15일간 침적시켜 유효성분을 추출하는 것을 특징으로 하는 화장료조성물.
제 1 항 또는 제2항에 있어서, 화장료 조성물 제형이 화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지 크림, 영양에센스 중에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.