KR20090133068A - 형질전환 성장인자의 활성을 가지는 펩타이드 및 그의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 특정 아미노산 서열을 포함하는 TGF-β(transforming growth factor-beta)-미미킹 펩타이드 및 이를 포함하는 TGF-β-유효성(TGF-β-effective)의 질환 또는 상태(conditions)의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 펩타이드는 인간 TGF-β로부터 유래된 것으로서, 천연의 인간 TGF-β와 유사한 기능 또는 작용을 한다. 본 발명의 펩타이드는 천연 TGF-β 보다 안정성이 우수하고 천연 TGF-β의 큰 분자량에 의한 문제점을 개선할 수 있다. 본 발명의 펩타이드는 TGF-β가 적용되는 다양한 질환 또는 상태의 치료 또는 개선에 이용될 수 있으며, 특히 피부 미백 및 주름개선에 대하여 탁월한 효능을 발휘한다.

형질전환 성장인자, TGF-β, 펩타이드, 안정성, 미백, 주름개선

Description

형질전환 성장인자의 활성을 가지는 펩타이드 및 그의 용도{Peptides Having Activities of Transforming Growth Factor-Beta and Their Uses}

본 발명은 형질전환 성장인자-베타(Transforming growth factor-beta: TGF-β)의 활성을 가지는 펩타이드 및 그의 용도에 관한 것이다.

형질전환 성장인자-베타(Transforming growth factor-beta: TGF-β)는 세포 분화 및 증식을 조절하는 폴리펩타이드 집단이다. 이 집단의 기타 구성원으로는 뮬러리안(Mulleria) 억제물질(Cate et al., Cell , 45:685-698(1986)), 인히빈류(inhibins)(Mason et al., Nature , 318:659-663(1985)) 및 드로조필라(Drosophilla)의 데카펜타플레지 유전자 복합체의 전사물로부터 예견되는 단백질(Padgett et al., Nature , 325:81-84(1987))을 들 수 있다. 형질전환 성장인자-베타(TGF-β)는 각 분자량이 13,000인, 2개의 유사한 디설파이드 연결 서브유니트로 이루어져 있다(Assoian et al., J. Biol . Chem ., 258:7155-7160(1983) ; Frolik et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 80:3676-3680(1983) ; Frolik et al., J. Biol. Chem ., 260:10995-11000(1984)). 이것은 몇몇 조직, 예컨대 태반(Frolik et al., Nature , 325:81-84(1983)), 혈소판(Childs et al., Proc . Natl . Acad . Sci. USA , 79:5312-5316(1982), Assioan et al., J. Biol . Chem ., 258:7155-7160(1983)), 신장( Roberts et al., Biochemistry , 22:5692-5698(1983)), 및 무기분이 감소된 뼈 (Seyedin et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 82:119-123(1985))로부터 정제하여 왔다. 10% 혈청 및 표피성장 인자의 존재하에서는 TGF-β는 정상적인 래트의 신장 섬유아세포의 족장 비의존성(anchorage independent) 생육을 증진시키고(Roberts et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 78:5339-5343(1981) : Roberts et al., Nature , 295:417-419(1982) : Twardzik et al., J. Cell . Biochem., 28:289-297(1985)), 10% 혈청만이 존재할 때는 AKR-2B 섬유아세포의 집락 형성을 유도할 수 있다(Tucker et al., Cancer Res ., 43:1518-1586(1983)). TGF-β는 또한 태아 래트의 근육간엽세포의 분화 및 연골 특이 거대분자의 생성을 야기하는 것으로 나타났다(Seyedin et al., J. Biol . Chem ., 261:5693-5695(1986)).

세포증식에 미치는 그의 효과와는 대조적으로, 아프리카산 녹색 원숭이 세포(BSC-1)로부터 분리된 기능적 연관 단백질뿐만 아니라 인체 혈소판으로부터 정제된 TGF-β는 배양 중 어떤 세포의 생육을 저해하는 것으로 나타났다(Tucker et al., Science , 226:705-707(1984)). TGF-β는 또한 몇 종류의 인체 암세포주의 생장도 저해하는 것으로 나타났다(Roberts et., Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 82:119-123(1985)). TGF-β의 이러한 억제/자극 효과는 예컨대 세포형태 및 세포의 생리 상태와 같은 몇몇 인자에 의존하는 것 같다(Spon et al., Science , 232:534 참고(1986)).

인간 TGF-β(Derynck et al., Nature , 316:701-705(1985)), 마우스 TGF-β(Derynck et al., J. Biol . Chem ., 261:4377-4379(1986)) 및 시미안 TGF-β(Sharples et. al., DNA , 6:239-244(1987))의 유전자를 코딩하는 cDNA 클론들이 분리되었다. 이러한 클론들의 DNA 배열분석결과 TGF-β 모노머를 생성시키게 하는 커다란 전구체 폴리펩타이드로서 합성되는 것으로 나타났다. 상술한 모든 TGF-β원으로부터의 TGF-β 전구체 단백질들 간에는 매우 큰 배열 상동성이 발견되었다.

최근 무기분이 감소된 소의 뼈로부터 분리해낸 어떠한 단백질이 TGF-β에 관련되는 것으로 동정되었다(Seyedin et al., J. Biol . Chem ., 262:1946-1949(1987)). 이 단백질은 또한 돼지의 혈소판(Cheifetz et al., Cell , 48:409-415(1987)), 인간 전립선 선암종 세포주 PC-3(Ikeda et al., Biochemistry , 26:2406-2410(1987)), 및 인간 교아 세포주(Wrann et al., EMBO J., 6:1633-1636(1987))로부터도 분리되었다. 이 단백질의 일부 아미노산 배열이 TGF-β와 상동성이 있는 것으로 나타났기 때문에 TGF-β2라 명명되었다. 상술한 인간 TGF-β(Derynck et al., Nature , 316:701-705(1985)), 마우스 TGF-β(Derynck et al., J. Biol . Chem ., 261:4377-4379(1986)) 및 시미안 TGF-β(Sharples et al., DNA , 6:239-244(1987))는 TGF-β1으로 명명되었다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시 되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

TGF-β는 매우 활성이 높은 단백질이지만, 발현이 매우 어려우며 가격이 비싸고 반감기가 짧아 원활한 사용에 제약이 있다. 본 발명자들은 천연의 인간 형질전환 성장인자(TGF-β)와 유사한 기능 또는 작용을 할 수 있으면서도 천연 TGF-β보다 안정성이 우수하고 천연 TGF-β의 큰 분자량에 의한 문제점을 개선할 수 있는 펩타이드를 제조하고자, 다양한 종류의 인간 TGF-β-유래 펩타이드를 제조 및 스크리닝하였다. 그 결과, 많은 펩타이드 후보물질 중에서 생리활성이 우수할 뿐만 아니라 안정성 및 피부 투과율이 우수한 펩타이드를 선별함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명의 목적은 TGF-β(transforming growth factor-beta)-미미킹 펩타이드를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 TGF-β-유효성(TGF-β-effective)의 질환 또는 상태(conditions)의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 서열목록 제1서열로 표시되는 아미 노산 서열을 포함하는 TGF-β(transforming growth factor-beta)-미미킹 펩타이드를 제공한다.

TGF-β는 매우 활성이 높은 단백질이지만, 발현이 매우 어려우며 가격이 비싸고 반감기가 짧아 원활한 사용에 제약이 있다. 본 발명자들은 천연의 인간 형질전환성장인자(TGF-β)와 유사한 기능 또는 작용을 할 수 있으면서도 천연 TGF-β 보다 안정성이 우수하고 천연 TGF-β의 큰 분자량에 의한 문제점을 개선할 수 있는 펩타이드를 제조하고자, 다양한 종류의 인간 TGF-β-유래 펩타이드를 제조 및 스크리닝하였다. 그 결과, 많은 펩타이드 후보물질 중에서 생리활성이 우수할 뿐만 아니라 안정성 및 피부 투과율이 우수한 펩타이드를 선별하였다.

본 발명의 펩타이드는 천연 인간 TGF-β 아미노산 서열로부터 유래된 아미노산 서열을 기본적으로 포함한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 TGF-β-미미킹 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에는 세포부착 아미노산 서열이 추가적으로 결합되어 있으며, 보다 바람직하게는 N-말단에 결합되어 있다. 상기 세포부착 아미노산 서열은 본 발명의 펩타이드의 TGF-β 활성을 향상시키는 작용을 한다.

본 발명에서 이용될 수 있는 세포부착 아미노산 서열은 당업계에 공지된 어떠한 세포부착 아미노산 서열도 포함한다. 바람직하게는, 세포부착 아미노산 서열은 RGD(Arg-Gly-Asp), RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser), RGDC(Arg-Gly-Asp-Cys), RGDV(Arg-Gly-Asp-Val), RGES(Arg-Gly-Glu-Ser), RGDSPASSKP(Arg-Gly-Asp-Ser-Pro- Ala-Ser-Ser-Lys-Pro), GRGDS(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser), GRADSP(Gly-Arg-Ala-Asp-Ser-Pro), KGDS(Lys-Gly-Asp-Ser), GRGDSP(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro), GRGDTP(Gly-Arg-Gly-Asp-Thr-Pro), GRGES(Gly-Arg-Gly-Glu-Ser), GRGDSPC(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Cys), GRGESP(Gly-Arg-Gly-Glu-Ser-Pro), SDGR(Ser-Asp-Gly-Arg), YRGDS(Tyr-Arg-Gly-Asp-Ser), GQQHHLGGAKQAGDV (Gly-Gln-Gln-His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val), GPR(Gly-Pro-Arg), GHK(Gly-His-Lys), YIGSR(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg), PDSGR(Pro-Asp-Ser-Gly-Arg), CDPGYIGSR(Cys-Asp-Pro-Gly-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg), LCFR(Leu-Cys-Phe-Arg), EIL(Glu-Ile-Leu), EILDV(Glu-Ile-Leu-Asp-Val), EILDVPST(Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr), EILEVPST(Glu-Ile-Leu-Glu-Val-Pro-Ser-Thr), LDV(Leu-Asp-Val) 또는 LDVPS(Leu-Asp-Val-Pro-Ser)이며, 가장 바람직하게는 RGD(Arg-Gly-Asp)이다. RGD 서열은 세포간질 단백질인 피브로넥틴(fibronectin)으로부터 선택된 것이다.

본 발명의 펩타이드는 그 자체로서 천연 TGF-β보다 매우 우수한 안정성을 나타내지만, 추가적인 아미노산의 변형에 의해 안정성이 향상될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드의 N-말단 및/또는 C-말단에는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 추가적으로 결합되어 있다. 이러한 보호기는 본 발명의 펩타이드의 안정성을 증가시키는 역할을 한다.

보다 바람직하게는, 상기 보호기는 아미노산이고, 보다 더 바람직하게는 Gly 또는 Ala이며, 가장 바람직하게는 Gly이다. 보호기로서 아미노산이 이용되는 경우, 아미노산 잔기의 수는 1-3이 바람직하고, 보다 바람직하게는 1-2이고, 가장 바람직하게는 1이다.

본 명세서에서 용어 “안정성”은 인 비보 안정성뿐만 아니라, 저장 안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 의미한다.

본 발명의 바람직한 일 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 서열목록 제1서열, 제2서열 또는 제3서열의 N-말단 또는 C-말단, 바람직하게는 N-말단에 세포부착 아미노산 서열이 결합되어 있고, 이어 상기 보호기가 N-말단 또는 C-말단, 바람직하게는 N-말단에 결합되어 있다.

본 발명의 펩타이드의 구체적인 예는 서열목록 제2서열에 기재되어 있다.

본 명세서에서 용어 “펩타이드”는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다.

본 발명의 펩타이드는 당업계에 공지된 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques)에 따라 제조될 수 있다(Merrifield, J. Amer. Chem . Soc . 85:2149-54(1963); Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed., Pierce Chem. Co.: Rockford, 111(1984)).

본 발명의 펩타이드는 우수한 생리학적 활성을 발휘할 뿐만 아니라, 열안정성 및 산과 알칼리 등의 물리화학적 인자에 대한 안정성이 우수하다. 따라서 상기 우수한 장기 보존성을 가지는 본 발명의 펩타이드는 의약품, 의약외품, 화장품 및 구강용품과 같은 장기간 저장이 요구되는 제품에 유리하게 적용될 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 TGF-β 활성을 나타내는 상술한 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 TGF-β-유효성(TGF-β-effective)의 질환 또는 상태(conditions)의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 상술한 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하기 때문에, 이 둘 사이에 중복된 내용은 중복 기재에 따른 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.

본 발명에서 유효성분으로 이용되는 펩타이드는 TGF-β 활성을 보유하여, 생체에 적용 시 천연 TGF-β가 발휘하는 작용 또는 기능을 발휘한다. 본 명세서에서 용어“TGF-β 활성”은, 천연 TGF-β에 대하여 종래에 규명된 모든 활성, 예컨대 세포증식 및 분열 촉진 등의 활성을 의미한다. 본 발명의 펩타이드는 천연 TGF-β의 작용을 흉내(mimicking) 내도록 제작된 것이기 때문에, 천연 TGF-β의 다양한 생체 내 활성을 모두 발휘할 수 있다.

본 발명에서 이용되는 펩타이드는 천연 TGF-β와 동일한 기능 또는 작용을 할 뿐만 아니라, 생리활성도도 유사하기 때문에, TGF-β-유효성의 질환 또는 상태의 예방 또는 치료에 유리하게 이용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “TGF-β-유효성의 질환 또는 상태”는 천연의 TGF-β에 의해 치료 또는 예방될 수 있는 질환 또는 상태를 의미한다. TGF-β-유효성의 질환 또는 상태는 미국 특허 제5780436호 및 미국 특허출원 공개 제20020010134호에 개시되어 있으며, 상기 특허문헌의 교시 사항은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물에 의해 발휘되는 활성은, 세포 증식 촉진, 분열촉진, 상피세포의 생리활성 촉진, 혈관 형성 촉진, 신경 재생의 촉진, 조직 복구(tissue repair), 상처 치유, 혈전증 치료, 골결함의 치료, 류마티스 관절염의 치료, 포도막염의 치료, 암의 치료, 동맥경화증 치료, 콜라겐, 엘라스틴, 라미민 또는 히알론산 합성 촉진, 치주질환의 치료 또는 피부 상태의 개선으로 표현될 수 있다.

본 발명의 조성물이 치주질환에 적용되는 경우, 본 발명의 조성물은 치약(toothpaste), 구강청정용 조성물 또는 구강보호용 조성물로 제조될 수 있다. 본 명세서에서 용어 “치주질환 치료용 조성물”은 “구강보호용 조성물(composition for tooth and mouth care)" 또는“구강청정용 조성물(composition for tooth and mouth cleaning)"로 대체될 수 있다. 본 발명의 펩타이드는 잇몸 조직의 상피세포의 생리활성을 촉진하고 신속한 잇몸 상처의 치유를 통하여 손상된 잇몸 조직을 재생시킴으로써, 치주질환을 치료 또는 예방할 수 있다.

보다 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 피부 상태의 개선의 효능 또는 활성을 갖는다. 특히, 본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 펩타이드는 천연 TGF-β 보다 분자량이 훨씬 작기 때문에, 피부 침투율이 매우 우수하다. 따라서 본 발명의 조성물을 국소적으로 피부에 도포하는 경우 피부 상태의 개선을 크게 달성할 수 있다. 보다 더 바람직하게는, 본 발명의 조성물에 의한 피부 상태의 개선은 피부 미백, 주름개선, 피부탄력 개선, 피부노화 방지, 피부보습 개선, 검버섯 제거, 여드름 치료, 상처제거 및 피부재생 효과이며, 가장 바람직 하게는, 피부 미백과 주름개선이다.

예를 들어, 본 발명에서 유효성분으로 이용되는 펩타이드는 피부에서 멜라닌 형성을 효과적으로 차단(예컨대, 타이로시나아제의 활성 억제)하여 미백 효능을 나타내며, 동시에 주름을 제거하는(프로콜라겐의 증가 또는 피브로넥틴의 증가) 효능을 나타낸다. 본 발명의 미백 조성물은 피부 색상을 밝게 하며, 피부 톤을 일정하게 하거나, 피부색소의 제거 및 검버섯 제거 등의 효과를 나타낸다.

더욱이, 본 발명의 펩타이드는 다양한 사람 유래의 세포에 전혀 독성을 나타내지 않아, 매우 안전하게 처치가 가능한 치료용 약물로서의 활용도가 매우 높으리라 판단된다.

본 발명의 조성물은 약제학적 조성물과 화장품 조성물로 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 펩타이드의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다.

본 명세서에서 용어 “약제학적 유효량”은 상술한 펩타이드의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤 조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구, 바람직하게는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 국소 투여, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 한편, 본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 1일 당 0.0001-100 ㎍이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 펩타이드의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount); 및 (b) 화장 품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 화장품 조성물이다.

본 명세서에서 용어 “화장품학적 유효량”은 상술한 본 발명의 조성물의 피부 개선 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 발명의 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이 트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 펩타이드와 담체 성분 이외에, 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점(advantages)을 요약하면 다음과 같다:

(ⅰ) 본 발명의 펩타이드는 인간 TGF-β로부터 유래된 것으로서, 천연의 인간 TGF-β와 유사한 기능 또는 작용을 한다.

(ⅱ) 본 발명의 펩타이드는 천연 TGF-β보다 안정성이 우수하고 천연 TGF-β의 큰 분자량에 의한 문제점을 개선할 수 있다.

(ⅲ) 본 발명의 펩타이드는 TGF-β가 적용되는 다양한 질환 또는 상태의 치료 또는 개선에 이용될 수 있으며, 특히 피부 미백과 주름개선에 대하여 탁월한 효능을 발휘한다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

실시예

실시예 1: 서열2의 펩타이드의 합성

클로로 트리틸 클로라이드 레진(Chloro trityl chloride resin: CTL resin, Novabiochem Cat No. 01-64-0021) 500 mg을 반응용기에 넣고 메틸렌 클로라이드(MC) 10 ml를 가하여 3분간 교반하였다. 용액을 제거하고 디메틸포름아마이 드(DMF) 10 ml를 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 반응기에 10 ml의 메틸렌 클로라이드용액을 넣고, 이어 Fmoc-Gln(trt)-OH(Novabiochem) 200 및 DIEA(diisopropylethylamine) 400 을 넣은 후 교반하여 잘 용해하고, 1시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응 후 세척하고 메탄올과 DIEA(2:1)를 MC에 용해하여 레진과 10분간 반응시킨 후, 과량의 MC/DMF(1:1)로 세척하였다. 용액을 제거하고 DMF를 10 ml 넣어 3분간 교반한 후 다시 용매를 제거하였다. 탈보호 용액(20%의 피페리딘/DMF) 10 ml를 반응용기에 넣고 10분간 상온에서 교반한 후 용액을 제거하였다. 동량의 탈보호 용액을 넣고 다시 10분간 반응을 유지한 후 용액을 제거하고 DMF로 2회, MC로 1회, 다시 DMF로 3분씩 1회 세척하여 Gln(trt)-CTL 레진을 제조하였다. 새로운 반응기에 10 ml의 DMF 용액을 넣고 Fmoc-Thr(otbu)-OH(Novabiochem) 200 , HoBt(N-Hydroxybenzotriazole) 200 및 Bop 200 을 넣은 후 교반하여 잘 용해시켰다. 반응기에 400 DIEA를 분획으로 2번에 걸쳐 넣은 후 모든 고체가 녹을 때까지 최소한 5분간 교반하였다. 용해된 아미노산 혼합용액을 탈보호된 레진이 있는 반응용기에 넣고 1시간 동안 상온에서 교반하면서 반응시켰다. 반응액을 제거하고 DMF 용액으로 3회 5분씩 교반한 후 미 반응 용매를 제거하였다. 반응 레진을 소량 취하여 카이저 테스트(Ninhydrine test)를 이용하여 반응 정도를 점검하였다. 탈보호 용액으로 상기와 같이 유사하게 2번 탈보호 반응시켜 Thr(otbu)-Gln(trt)-CTL 레진을 제조하였다. DMF와 MC로 충분히 세척하고 다시 한 번 카이저 테스트를 수행한 다음 상기와 유사하게 아래의 아미노산 부착 실험을 수행하였다. 즉, 도 1과 같이 선정된 아미노산 서열에 의거하여 Fmoc- Asp(otbu), Fmoc-Leu, Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Trp(boc), Fmoc-Ile, Fmoc-Thr(tBu), Fmoc-Asp(otbu), Fmoc-Gly, Fmoc-Arg(pbf), Fmoc-Gly 순으로 연쇄반응을 시켰다. 제조된 펩티딜 레진은 상기한 방법으로 탈보호 하여 Fmoc 을 제거 한 뒤 DMF, MC 및 메탄올로 각각 3번을 세척하고, 질소 공기를 천천히 흘려 건조한 후, P₂O₅하에서 진공으로 감압하여 완전히 건조하여 펩티틸레진을 준비하였다. 제조된 레진에 탈루용액[트리플로로화 초산(Trifluroacetic acid: TFA) 81.5%, 증류수 5%, 티오아니졸(Thioanisole) 5%, 페놀 5%, EDT 2.5% 및 TIS 1% 포함] 30 ml을 넣은 후 상온에서 가끔 흔들어주며 2 시간 반응을 유지하였다. 필터링으로 레진을 여과하고, 레진을 소량의 TFA 용액으로 세척한 후 모액과 합하였다. 감압을 이용하여 전체 볼륨이 절반 정도 남도록 증류하고 50 ml의 차가운 에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 원심 분리하여 침전을 모으고, 2번 더 차가운 에테르로 세척하였다. 모액을 제거하고 질소 하에서 충분히 건조하여 정제 전 NH2-Gly-Arg-Gly-Asp-Tyr-Ile-Trp-Ser-Leu-Asp-Thr-Gln-OH 서열2의 펩타이드 0.144 g을 수득하였으며, 분자량 측정기(Perseptive Pioneer DE-STR ABI, 미국)를 이용하여 분자량 1411.0(이론값 1410.5)를 얻을 수 있었다.

도 2는 합성하여 정제하지 않은 상기 펩타이드에 대한 고성능 액상 크로마토그래피이다.

실시예 2: 펩타이드의 안정성 평가

정제된 서열2 펩타이드의 안정성을 확인하기 위하여, 10 ㎍/ml이 되도록 펩타이드를 50 mM Tris-HCl(pH 8.0) 완충용액에 용해하였다. 대조군으로서 1 ㎍/ml의 농도로 대장균으로부터 생산된 재조합 TGF-β1(Sigma)을 완충용액에 준비했다. 준비된 용액을 유리 바이알에 넣은 후 40℃에서 정치하였다. 40℃에 정치된 용액을 0, 1, 10, 25, 50, 75 그리고 100일째에 샘플링하여 NIH-3T3 세포(한국세포주 은행)에 대한 MTT 분석(Scudiero, D. A., et al. Cancer Res ., 48:4827-4833(1988))을 실시하여 남아 있는 펩타이드의 잔존량을 측정하였다(도 3).

도 3에서 볼 수 있는 바와 같이, 재조합 TGF-β1의 경우 시간이 경과함에 따라 활성도가 급격히 감소됨을 알 수 있으나, 본 발명의 펩타이드는 활성도가 오랫동안 지속됨을 확인할 수 있었다.

실시예 3: 나노화 펩타이드의 제조

상기 실시예에서 얻은 펩타이드 50 mg을 정확히 칭량한 뒤 증류수 500 ml로 충분히 교반하여 용해하였다. 펩타이드 용액을 레시틴 5 g, 소듐 올리에이트(sodium oleate) 0.3 ml, 에탄올 50 ml 그리고 약간의 유상과 함께 혼합한 후, 총량이 1 L 가 되도록 증류수로 양을 맞춰 준 다음, 마이크로플루다이저로 고압을 이용하여 유화시켜 사이즈 100 nm 정도의 나노좀을 제조하였다. 제조된 나노좀은 최종 농도가 약 50 ppm으로 화장품 제조용으로 사용되었다.

제형예 1: 유연화장수

상기 실시예 1에서 제조된 펩타이드 나노좀을 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 유연화장수를 일반적인 화장수 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
서열 1의 펩타이드	0.001
1,3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
PEG 1500	1.0
소듐히알루로네이트	1.0
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	8.0
방부제, 색소	적량
벤조페논-9	0.05
향	미량
정제수	잔량
합계	100

제형예 2: 영양크림

상기 실시예 1에서 제조된 펩타이드 나노좀을 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 영양크림을 일반적인 영양크림 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
서열 1의 펩타이드	0.001
메도우폼오일	3.0
세테아릴알콜	1.5
스테아린산	1.5
글리세릴스테아레이트	1.5
유동 파라핀	10.0
밀납	2.0
폴리솔베이트60	0.6
솔비탄 세스퀴올레이트	2.5
스쿠알란	3.0
1,3-부틸렌글리콜	3.0
글리세린	5.0
트리에탄올아민	0.5
토코페릴아세테이트	0.5
방부제, 색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

제형예 3: 영양화장수

상기 실시예 1에서 제조된 펩타이드 나노좀을 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 영양화장수를 일반적인 화장수 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
서열 1의 펩타이드	0.002
1,3-부틸렌글리콜	4.0
글리세린	4.0
세테아릴알콜	0.8
글리세릴스테아레이트	1.0
트리에탄올아민	0.13
토코페릴아세테이트	0.3
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다미아너트오일	2.0
폴리솔베이트60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
카르복시비닐폴리머	1.0
방부제,색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

제형예 4: 에센스

상기 실시예 1에서 제조된 펩타이드 나노좀을 포함하며, 하기 조성으로 이루어진 에센스를 일반적인 에센스 제조방법에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
서열 1의 펩타이드	0.005
글리세린	10.0
1,3-부틸렌글리콜	5.0
PEG 1500	2.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
EDTA-2Na	0.02
히드록시에틸 셀룰로오스	0.1
소듐히알루로네이트	8.0
카르복시비닐폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.18
옥틸도데세스-16	0.4
에탄올	6.0
향, 방부제, 색소	적량
정제수	잔량
합계	100

실시예 4 : 펩타이드의 멜라닌색소의 감소

실시예 1에서 합성한 서열2 펩타이드의 멜라닌색소 감소효과를 측정하기 위해 C57BL/6 마우스의 멜라노사이트를 배양한 뒤 α-MSH(α-melanocyte stimulating hormone, Sigma)로 멜라닌 생성을 유발시킨 뒤, 펩타이드를 농도별로 처리한 뒤 멜라닌 생성 억제효과를 측정하였다. 마우스의 멜라노사이트는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media, Sigma)에 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, Sigma)을 첨가한 배지로 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다. 24-웰 플레이트에 1 X 10⁵ 세포/웰(cells/well)의 농도로 세포를 배양하고 세포의 부착을 확인한 뒤, 대조군에는 아무것도 처리 하지 않고 용매만 넣었으며, 양성대조군은 α-MSH을 200 μg/ml, 그리고 나머지 디쉬에는 서열2 펩타이드를 1 μg/ml과 10 μg/ml의 농도가 되도록 처리를 하였다. 각각의 디쉬는 시험물질을 가한 뒤 3일 동안 배양하였다. 여기서 시험물질은 각각의 성분을 배지 용매에 용해시킨 후, 프로필렌글리콜:에탄올:정제수의 비율이 5:3:2인 혼합용매에 용해시켜 시험농도로 희석되고 동일한 비율로 혼합된 것이다. 원심분리를 통해 배양액을 제거한 뒤 세포의 멜라닌 생성량을 육안으로 확인할 수 있었으며, 그 중 10 μg/ml 농도의 처리군에 대한 결과가 도 4에 나타나 있다. 도 4에서 확인할 수 있듯이, α-MSH을 넣은 군에서는 멜라닌 생성이 급격히 높아졌으나, 펩타이드를 처리한 군에서는 α-MSH를 처리하지 않았을 때와 유사한 멜라닌 생성을 나타내었다. 이는 피부에 멜라닌의 생성을 유발시키는 요인이 적용되었을 때 펩타이드가 그 활성을 억제해 피부의 톤을 밝게 할 수 있다는 것을 알 수 있다.

보다 정밀히 실험하기 위해 세포를 인산완충식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척한 후 1 N 수산화나트륨으로 세포를 녹여 400 nm에서 흡광도를 측정하였고, 멜라닌 생성 억제율을 계산하여(Dooley의 방법) 도 5에 나타내었다. 도 5의 결과는 도 4의 결과와 일치 된다.

실시예 5 : 펩타이드의 타이로시나아제의 활성 감소

실시예 1에서 합성한 서열2의 펩타이드와 형질전환 성장인자의 미백활성을 검증하기 위하여 멜라닌 생성인자인 α-MSH를 처리한 뒤의 멜라닌 생성 억제능을 조사하였다. B16F10 세포(한국세포주은행)를 1 x 10⁵ 개 정도 접종하여 3일을 배양하였다. 세포가 정착된 뒤에 2% 혈청으로 배지를 교환하면서, 음성대조군에는 아무런 처리를 하지 않았으며 양성대조군에는 α-MSH를 200 ng/ml의 농도로 처리 하였다. 나머지 다른 디쉬에는 α-MSH 200 μg/ml과 함께 실시예에서 제조한 서열2의 펩타이드를 각각 1 μg/ml와 10 μg/ml의 농도로 각각 처리하였다. 4일 배양 후 세포의 모습을 관찰한 뒤 세포를 수집하여 라이시스 완충액으로 처리하여 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질을 BCA(bicinchonic acid) 방법으로 정량한 뒤 각 군별로 90 의 단백질용액에 10 의 L-DOPA(L-3,4-dihydroxyphenylalanine, Sigma)를 넣고 37℃에서 30분간 반응한 뒤, 405 nm 분광광도계에서 흡광도를 측정하여 타이로시나아제의 활성을 측정하였다.

도 6에서 볼 수 있듯이, α-MSH만을 넣은 군에서는 타이로시나아제의 활성이 강화되었으나, 추가로 넣어준 펩타이드에 의해 30% 이상의 활성이 감소되었으며, 이는 펩타이드 양에 대하여 상조되는 수치로 나타내었다. 이는 피부 등에 타이로시나아제의 활성을 높이는 요인이 적용되었을 때 본 발명의 펩타이드가 활성을 억제해 피부의 톤을 밝게 할 수 있다는 것과, 본 발명의 펩타이드는 형질전환 성장인자와 같은 활성 기전을 보이고 있는 것으로 판단된다.

실시예 6: 서열2 펩타이드의 멜라닌 생성 표지인자들의 억제실험

α-MSH를 처리하여 멜라닌 생성이 유발된 마우스 흑색종 세포에서 TGF 유사 펩타이드의 미백활성을 보다 확실하게 검증하기 위하여, TRP1(tyrosinase-related protein-1), TRP2 및 MITF(microphthalmia-associated transcription factor)의 RNA 생성을 역전사 중합효소 연쇄반응으로 관찰하였다.

우선, 6-웰의 세포배양접시에 B16F10 세포를 1 x 10⁵ 개 정도 접종하여 3일을 배양하였다. 세포가 정착된 뒤에 2% 혈청으로 배지를 교환하면서, 대조군에는 용매만을, 양성대조군은 α-MSH를 200 μg/ml로 넣어 주었으며, 나머지 디쉬에는 α-MSH 200 μg과 서열2의 펩타이드를 10 μg/ml 농도로 처리하였다. 4일 배양하고 현미경을 통하여 세포의 형태를 관찰하였다. 도 7에서 보는 바와 같이 α-MSH에 의해 유도된 멜라노좀이 서열2의 펩타이드에 의해 사라지는 것을 볼 수 있었다.

이어, 배양세포로부터 mRNA를 추출하여 TRP1, TRP2 및 MITF의 프라이머를 이용하여 역전사 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 중합반응에 이용된 프라이머의 서열은 다음과 같다: TRP1; F-primer, 5`-GACAGACCGCTGTGGCTCAT-3`; R-primer, 5`-CTCCAGACGCAGGAGGTGGTA-3`; TRP2; F-primer, 5`-GCATGACGGTGGACAGCCTAGT-3`; R-primer, 5`-GTGTGGTGATCACGTAGTCGG-3`; MITF; F-primer, 5`-CCAGCCTGGCGATCATGTCATGC-3`; R-primer ; 5`-GGTTGGCTGGACAGGAGTTGCTG-3`.

실험 결과, 본 발명의 펩타이드는 멜라닌 생성과 관계가 있는 유전자인 TRP1, TRP2 및 MITF의 발현을 억제한다는 것을 알 수 있었다(도 8).

실시예 7: 서열2 펩타이드의 프로콜라겐 및 피브로넥틴 생성 촉진 효과

48시간을 배양한 NIH3T3 세포에 합성한 서열2의 펩타이드를 1 μg/ml, 10 μg/ml의 농도로 처리하고, 72시간 경과 후에 피부주름개선의 표지인 프로콜라겐 및 피브로넥틴의 농도를 측정하였다. 농도 측정은 프로콜라겐 ELISA 키트(Takara, 일본) 및 피브로넥틴 ELISA 키트(Chemicon, 미국)를 이용하여 실시하였다. 도 9에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 펩타이드는 섬유아세포의 프로콜라겐 생성을 증가시켰다. 특히, 서열2의 펩타이드가 우수한 프로콜라겐 생성 촉진능을 나타내었다. 또한, 도 10에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 펩타이드는 섬유아세포의 피브로넥틴 생성을 증가시켰다. 특히, 서열2의 펩타이드가 우수한 피브로넥틴 생성 촉진능을 나타내었다. 이를 통해 서열2의 펩타이드는 피부에 처리 시, 매우 우수한 주름 개선 효능을 발휘한다는 것을 알 수 있다.

실시예 8 : 서열2 펩타이드의 세포독성실험

본 발명의 펩타이드에 대한 피부세포의 세포내독성이 있는지의 여부를 확인 하기 위하여, 리지노 등의 방법(Rizzino, et al. Cancer Res ., 48:4266(1988))을 참조하여, HaCat 세포(한국세포주은행), NIH3T3 세포(한국세포주은행) 및 B16F10 세포주(한국세포주은행)를 이용한 SRB(Sulforhodamine B, Sigma)의 비색법을 이용하여 측정하였다. 각각의 세포주를 10% FBS(fetal bovine serum)가 함유된 EMEM(Eagle's minimal essential media, Gibco)이 들어 있는 250 ml 용량의 조직 배양용 플라스크를 이용하여 배양하였다. 배양된 세포주를 0.25% 트립신 용액으로 배양용기 바닥에서 떼어낸 후 원심 분리하여 세포 침전물만을 모았다. 이를 FBS가 함유되지 않은 EMEM 배양액에 다시 현탁한 후, 96-웰 조직 배양용 평판에 각 웰 당 1 x 10⁵세포가 되도록 넣고, 24시간 동안 37℃, 7% CO₂ 조건 하에서 배양하였다. 24시간 뒤 혈청을 완전히 제외한 동일한 배양액으로 배지를 교환한 뒤 표준을 잡기위한 공 시료와 펩타이드를 물과 10% DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 멸균상태로 용해한 다음, 10 ng/ml, 100 ng/ml, 1 μg/ml, 10 μg/ml, 그리고 100 μg/ml의 농도로 72시간을 위와 동일 조건으로 배양하였다. 배양이 완료된 후 배양 상층액을 제거하고 PBS로 1회 세척하였다. 세척용액을 제거한 뒤 비색 SRB 용액으로 처리하고 PBS로 충분히 세척을 한 뒤 현미경으로 각 세포를 관찰하여 생존 세포의 상태를 관찰하였으며, 자외선 590 nm에서 흡광도를 측정하여 각 세포의 생존상태를 도 11a-11c에 나타내었다.

도 11a-11c에서 보는 바와 같이, 각질세포주의 일종인 HaCat 세포, 섬유아세포의 일종인 NIH3T3 세포 및 멜라노사이트의 일종인 B16F10 세포주에 대하여, 저농도에서 고농도까지 투여한 펩타이드에 의한 세포 수의 감소는 전혀 관찰 되지 않았으며, 세포들의 현미경적인 관찰에서도 별다른 변화가 관찰되지 않았다. 이를 통해 본 발명의 펩타이드는 피부 관련 세포의 독성이 전혀 없음을 알 수 있으며, 이는 본 펩타이드를 피부에 처리하여도 피부세포에 큰 영향을 끼치지 않으리라는 것을 알 수 있다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

도 1은 인간 형질전환 성장인자-베타류(Transforming growth factor-Beta: TGF-β)의 아미노산 서열과 본 발명의 펩타이드의 서열 정보이다.

도 2는 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드에 대한 고성능 액상 크로마토그래피 분석 결과를 나타내는 그래프이다.

도 3은 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드의 안정성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.

도 4는 α-MSH로 처리한 B16 흑색종 세포에서 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드를 처리한 후의 멜라닌 세포의 멜라닌 생성 감소효과를 비교한 실험 결과이다.

도 5는 α-MSH로 처리한 B16 흑색종 세포에서 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드를 처리한 후의 멜라닌 생성 감소를 흡광도로 분석한 결과이다.

도 6은 α-MSH로 처리한 B16 흑색종 세포에서 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드를 처리한 후의 타이로시나아제의 활성을 측정한 그림이다.

도 7은 α-MSH로 처리한 B16 흑색종 세포에서 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드를 처리한 후의 흑색종 세포의 멜라노좀 변화를 관찰한 사진이다.

도 8은 α-MSH로 처리한 B16 흑색종 세포에서 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드를 처리한 후의 멜라닌 생성 표지인자의 감소효과를 증명하는 역전사 중합효소 연쇄반응의 그림이다.

도 9는 배양한 NIH3T3 섬유아세포에서 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩 타이드를 처리한 후의 프로콜라겐의 생성 증가를 나타내는 그림이다.

도 10은 배양한 NIH3T3 섬유아세포에서 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드를 처리한 후의 피브로넥틴의 생성 증가를 나타내는 그림이다.

도 11a-11c는 본 발명의 실시예에 의하여 제조된 펩타이드를 이용한 각질세포, 섬유아세포 및 B16 흑색종 세포에 대한 세포독성실험의 결과이다.

<110> Caregen. Co. Ltd. <120> Peptides Having Activities of Transforming Growth Factor-Beta and Its Uses <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TGF-Beta Mimicking Peptide 1 <400> 1 Tyr Ile Trp Ser Leu Asp Thr Gln 1 5 <210> 2 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TGF-Beta Mimicking Peptide 2 <400> 2 Gly Arg Gly Asp Tyr Ile Trp Ser Leu Asp Thr Gln 1 5 10

Claims (10)

1. 서열목록 제1서열로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 TGF-β(transforming growth factor-beta)-미미킹 펩타이드.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 TGF-β-미미킹 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에는 세포부착 아미노산 서열이 추가적으로 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 TGF-β-미미킹 펩타이드.
3. 제 2 항에 있어서, 상기 세포부착 아미노산 서열은 상기 TGF-β-미미킹 펩타이드의 N-말단에 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 TGF-β-미미킹 펩타이드.
4. 제 2 항에 있어서, 상기 세포부착 아미노산 서열은 RGD(Arg-Gly-Asp), RGDS(Arg-Gly-Asp-Ser), RGDC(Arg-Gly-Asp-Cys), RGDV(Arg-Gly-Asp-Val), RGES(Arg-Gly-Glu-Ser), RGDSPASSKP(Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ser-Lys-Pro), GRGDS(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser), GRADSP(Gly-Arg-Ala-Asp-Ser-Pro), KGDS(Lys-Gly-Asp-Ser), GRGDSP(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro), GRGDTP(Gly-Arg-Gly-Asp-Thr-Pro), GRGES(Gly-Arg-Gly-Glu-Ser), GRGDSPC(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro-Cys), GRGESP(Gly-Arg-Gly-Glu-Ser-Pro), SDGR(Ser-Asp-Gly-Arg), YRGDS(Tyr-Arg-Gly-Asp-Ser), GQQHHLGGAKQAGDV (Gly-Gln-Gln-His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val), GPR(Gly-Pro-Arg), GHK(Gly-His-Lys), YIGSR(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg), PDSGR(Pro-Asp-Ser-Gly-Arg), CDPGYIGSR(Cys-Asp-Pro-Gly-Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg), LCFR(Leu-Cys-Phe-Arg), EIL(Glu-Ile-Leu), EILDV(Glu-Ile-Leu-Asp-Val), EILDVPST(Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr), EILEVPST(Glu-Ile-Leu-Glu-Val-Pro-Ser-Thr), LDV(Leu-Asp-Val) 또는 LDVPS(Leu-Asp-Val-Pro-Ser)인 것을 특징으로 하는 TGF-β-미미킹 펩타이드.
5. 제 4 항에 있어서, 상기 세포부착 아미노산 서열은 RGD(Arg-Gly-Asp)인 것을 특징으로 하는 TGF-β-미미킹 펩타이드.
6. 제 1 항에 있어서, 상기 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 추가적으로 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 TGF-β-미미킹 펩타이드.
7. 제 2 항에 있어서, 상기 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 추가적으로 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 TGF-β-미미킹 펩타이드.
8. 제 7 항에 있어서, 상기 보호기는 상기 펩타이드의 N-말단에 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 TGF-β-미미킹 펩타이드.
9. TGF-β(transforming growth factor-beta) 활성을 나타내는 상기 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 TGF-β-유효성(TGF-β-effective)의 질환 또는 상태(conditions)의 예방 또는 치료용 조성물.
10. 제 9 항에 있어서, 상기 TGF-β-유효성 질환 또는 상태는 조직 손상, 동맥경화, 상처(wound), 골결함, 류마티스 관절염, 포도막염, 암, 주름개선 또는 피부 미백인 것을 특징으로 하는 조성물.

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