KR20090131726A - 말초혈액단핵구로부터 고효율로 수지상세포를 제조하는방법 - Google Patents

말초혈액단핵구로부터 고효율로 수지상세포를 제조하는방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 말초혈액단핵구로부터 분리한 단세포를 poly(2-hydroxyethyl metacrylate), polymethyl methacrylate 등과 같이 세포가 잘 부착되지 않는 하이드로젤(hydrogel)로 코팅한 플라스크에서 배양하여 수지상세포로 분화시킴으로써, 수지상세포의 기능 및 수율(살아있는 세포)을 높이도록 한 수지상세포 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면 기존 수지상세포의 배양의 한계점을 극복하기 위하여 말초혈액단핵구에서 단세포를 분리하여 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에서 수지상세포로 분화시킴으로 인해, 매 제조시마다 항상 충분한 수지상세포의 세포수(회수율 향상) 및 기능을 확보할 수 있으므로 암환자에게 항종양효과를 높일 수 있는 품질이 우수한 암면역세포치료제를 제공할 수 있는 효과를 거둘 수 있다.
말초혈액단핵구, 수지상세포, 하이드로젤, 코팅

Description

말초혈액단핵구로부터 고효율로 수지상세포를 제조하는 방법{The manufacturing method of dendritic cells from peripheral blood mononuclear cells}
본 발명은 말초혈액단핵구로부터 MACS나 plastic adherent 등의 방법으로 단세포를 분리하고 이렇게 분리된 단세포를 poly(2-hydroxyethyl metacrylate), polymethyl methacrylate 등과 같이 세포가 잘 부착되지 않는 하이드로젤(hydrogel)로 코팅한 플라스크에서 배양하여 수지상세포로 분화시킴으로써, 수지상세포의 기능 및 수율(살아있는 세포)을 높이도록 한 수지상세포 제조방법에 관한 것이다.
수지상세포는 1868년 랑겔한스(Langerhans)에 의해 피부에서 처음 발견되었으며 1973년 칸(Cohn)과 스테인만(Steinmann)에 의해 면역보조 세포로 기능이 알려지게 되었다. 그리고 1990년대에는 강력한 항원제시세포(professional antigen presenting cells; APC)로 기능이 밝혀지면서 면역유도 및 면역조절에서의 중요한 역할을 함을 알게 되었다. 인체 내의 수지상세포는 전체 순환 백혈구의 단지 약 0.3%를 차지할 뿐이지만 대식세포와는 구별되는 표현형을 지닌 이질적인 집단으로 구성되어 있다. 수지상 세포는 비교적 약한 항원제시능력을 지닌 B 세포나 대식세포와는 달리 강력한 항원제시세포라는 점에서 차별화된다. 수지상세포는 혈액 내에 소량 존재하고 분리하기가 어려워 임상에 적용하기에는 큰 장애요인이 되어왔으나 최근 체외(in vitro)에서 혈액세포나 줄기세포를 이용하여 수지상세포로 분화하는 방법이 개발되면서 임상연구가 활발히 이루어지고 있다. 수지상 세포는 다양한 lineages에서 유래됨이 알려져 있으나, 보통 수지상 세포는 IL-4와 GM-CSF로 자극된 단세포나 또는 단핵구 전구체(CD34+ cell)에서 유래되어 vaccine protocol에 사용되고 있다. 미성숙한 수지상 세포는 효과적으로 아포토시스(apoptotic) 또는 괴사(necrotic) 세포, 세균 그리고 특정항원이나 수용성 단백질에서 효과적으로 항원 epitope를 추출한다. Apoptotic body 포획, macropinocytosis 그리고 mannose receptor나 CD32 또는 CD64 수용체를 통한 endocytosis 등의 여러 가지 기전으로 수지상세포 내로 들어온 항원은 일련의 과정을 거쳐 주조직복합체(MHC)와 complex를 형성하게 된다. 포획된 항원은 MHC class II 구획으로 운반되고 처리되어 peptide-MHC 복합체로 제시되어 CD4+ T cell 반응을 유도한다. 나아가서 최근에 수지상 세포가 외부에서 유입된 항원에 대하여 proteasome 및 TAP 의존성 기전에 의해 MHC I 분자를 통하여 제시할 능력이 있음이 증명되었다. 따라서 수지상 세포는 외부 항원에 대해서 특별한 처리과정을 통해 T 세포 및 B 세포 모두를 자극할 수 있다. 수지상세포의 이러한 특성 때문에 현재 암 면역치료에 많이 활용하고 있다.
수지상세포로 분화시키기 위해 말초혈액단핵구세포로부터 단세포를 분리하는 방법으로 플라스틱 부착(plastic-adherent) 단세포 분리방법이 가장 많이 이용되고 있지만, 이 방법으로 분리된 단세포는 수지상세포로 분화하는 단계에서 플라스크 표면에 강하게 부착하여 그 기능을 상실하거나 다른 형태의 세포로 분화되는 문제점이 있어 많은 수의 수지상세포를 얻을 수가 없다. 또한 수지상세포로 분화시키기 위해 말초혈액단핵구세포로부터 단세포를 분리하는 방법으로 MACS법{CD14+ 마그네틱 비드(magnetic bead; positive selection) 사용, B와 T 세포의 고갈(negative selection)} 또는 일루트리에이션(elutriation) 등 여러 가지의 다른 방법이 있는데, 이들 기법은 고순도 및 많은 수의 단세포를 얻을 수는 있지만 값비싼 장비와 기술적 스킬이 필요하며, 위 방법과 마찬가지로 이를 통해 분리된 단세포는 수지상세포로 분화하는 단계에서 플라스크 표면에 강하게 부착하여 그 기능을 상실하거나 다른 형태의 세포로 분화되는 문제점이 있어 목적으로 하는 많은 수의 수지상세포를 얻을 수가 없다.
따라서 본 발명에서는 poly(2-hydroxyethyl metacrylate), polymethyl methacrylate 등과 같이 세포의 부착을 방지하는 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에서 배양하여 수지상세포의 기능 및 수율을 높이고자 한다.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 세포를 poly(2-hydroxyethyl metacrylate), polymethyl methacrylate 등과 같은 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에 옮겨 강력한 항원제시능을 갖는 면역 치료용 수지상세포를 높은 수율로 제조하는 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명은 공여자인 사람의 말초혈액단핵구(PBMC)로부터 단세포를 분리하는 1단계;
1단계와는 별도로 배양용기에 하이드로젤(hydrogel)로 코팅하는 2단계;
상기 1단계에서 분리된 단세포를 하이드로젤 코팅된 배양용기에서 배양하여 미성숙 수지상세포로 분화시키는 3단계; 및
다시 3단계에서 분화된 미성숙 수지상세포를 2단계에서 만들어진 하이드로젤 코팅 배양용기에서 성숙수지상세포로 분화시키는 4단계;를 포함하는 수지상세포의 제조방법인 것을 특징으로 한다.
이때, 상기 1단계에서 단세포를 분리하는 방법은 MACS법 또는 Plastic adherent 방법인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 2단계에서 사용하는 하이드로젤(hydrogel)은 HEMA(약자의 의미에 대해서는 후술함, 이하의 약자도 마찬가지임, 또한 이들 약자는 청구범위에서도 같 은 의미로 사용함)의 중합체, HEMA와 MMA와 NVP의 중합체, HEMA와 MA의 중합체, HEMA와 PVP와 MA의 중합체, HEMA와 MA의 중합체, HEMA와 PC의 중합체, HEMA와 NVP의 중합체, PVA의 중합체, HEMA와 NVP의 중합체, MMA와 NVP의 중합체 중의 어느 하나인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 2단계는 하이드로젤(hydrogel)을 에탄올, 메탄올, 열수 등과 같은 용매에 녹여 최종 농도가 0.1~10%가 되게 만들어 플라스크에 코팅하는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또한, 단세포유래 미성숙수지상세포(monocyte-derived immature dendritic cell)를 하이드로젤(hydrogel)로 코팅한 배양용기에서 분화시켜 성숙수지상세포를 제조하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따르면 기존 수지상세포의 배양의 한계점을 극복하기 위하여 말초혈액단핵구에서 단세포를 분리하여 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에서 수지상세포로 분화시킴으로 인해, 매 제조시마다 항상 충분한 수지상세포의 세포수(회수율 향상) 및 기능을 확보할 수 있으므로 암환자에게 항종양효과를 높일 수 있는 품질이 우수한 암면역세포치료제를 제공할 수 있는 효과를 거둘 수 있다.
본 발명의 상기 1단계에서는 트리플백이나 백혈구 채집을 통해 채혈한 혈액 을 Histopaque-1077 용액을 이용하여 말초혈액단핵구(PBMC)를 분리할 수 있다. 분리된 말초혈액단핵구(PBMC)는 배양용기에 무동물혈청배지와 함께 넣어 1~2시간 동안 배양하여 단세포를 부착시킨다. 부착되지 않은 림프구는 제거하여 단세포를 얻는다(Plastic adherent 방법).
좀 더 고순도의 단세포를 얻기 위한 방법으로 말초혈액단핵구(PBMC)에 CD14 또는 CD3, CD19 antibody 등과 반응시켜 칼럼을 통해 순수한 단세포를 얻는 방법을 사용할 수 있다(MACS법).
그리고 상기 1단계에서 plastic adherent 방법으로 분리된 단세포는 GM-CSF와 IL-4를 첨가하여 미성숙수지상세포로 분화시킬 수 있고, MACS법으로 분리된 단세포는 poly(2-hydroxyethyl metacrylate), polymethyl methacrylate 등과 같은 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에 넣고 GM-CSF와 IL-4를 첨가하여 미성숙수지상세포 분화시킬 수 있다.
그리고 3단계에서 분화된 미성숙 수지상세포를 poly(2-hydroxyethyl metacrylate), polymethyl methacrylate 등과 같은 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에 넣어 성숙수지상세포로 분화시키는 것이 4단계이다.
이렇게 하여 얻은 성숙 수지상세포는 MHC class I을 통한 항원제시능이 증가되어 세포독성 T 세포(Cytotoxic T lymphocytes)를 자극할 수 있다. 또한, 성숙 수지상세포는 MHC class II를 통한 항원제시능이 증가되어 헬퍼 T 세포(helper T lymphocytes)를 자극할 수 있다. 그리고 수지상세포는 강력한 항원제시세포로서, 이를 이용한 일반적인 임상연구 protocol에서 보면 주로 혈액내의 단핵구로부터 IL-4와 GM-CSF라는 사이토카인을 이용해서 수지상세포로의 분화를 유도하며 이들은 미성숙한 수지상세포(immature DC)단계에서 특정항원을 세포 안으로 들어가게 하여 각종 단계를 거쳐서(maturation, processing) 주로 MHC class II에 항원을 제시하며 일부 MHC class I분자에 항원을 제시하도록 해준다. 이들 제시된 항원 정보를 CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포들에 의해 인식되게 되며 결과적으로 강력한 면역반응을 유도하게 된다. 하지만, 배양 과정 중에 세포가 배양용기에 부착되어 형태가 변화거나 분화가 제대로 이루어지지 않을 경우 강력한 항원제시세포로서 그 기능을 갖는 수지상세포를 얻기에는 큰 어려움이 따른다. 따라서 2단계는 상기 3단계 및 4단계에서 미성숙 및 성숙수지상세포로 분화시키는 데 가장 중요한 단계라고 할 수 있다.
본 발명의 방법에서, 배양용기 코팅 물질인 하이드로젤(hydrogel)은 몇 개의 monomer들이 polymer 네트워크를 형성하기 위한 소량의(보통 1% 미만) cross-linking agent에 의해 일정 간격으로 연결되어 체인형태로 결합한 polymer들이다. 이들 중 가장 단순한 방법으로 연결되고, 가장 흔한 물질은 poly(2-hydroxyethyl metacrylate) 또는 polyHEMA(때때로 그냥 HEMA로 일컬어짐)이고 이것은 1960년대에 Wichterle에 의해 개발되었다. 이것은 오직 한 타입의 monomer만을 포함하고 있고 cross-linker(EGDMA)에 의하여 결합된 hydoxyethyl methacrylate의 여러 유닛으로 이루어졌기 때문에 소위 homopolymer이다. polyHEMA는 상대적으로 생산하기 저렴하고, 다른 monomer와 결합이 용이하고, 매우 유연하며, pH와 온도 변화에 입체적으로 안전하기 때문에 세포배양용 코팅 물질로서 적절하다. 또한, 본 발명에서는 다 음과 같은 하이드로젤을 사용할 수 있다.
Figure 112008043779046-PAT00001
<약어의 의미 - 청구범위에서도 동일한 의미로 사용함 >
HEMA : 2-hydroxyethyl metacrylate
MA : methacrylic acid
MMA : methyl methacrylate
NVP : N-vinyl pyrrolidone
PC : phosphorylcholine
PVA : polyvinyl alcohol
PVP : polyvinyl pyrrolidone
이하 본 발명을 실시예와 함께 상세히 설명한다.
실시예 1. 말초혈액으로부터 단세포 분리
트리플백이나 백혈구 채집술을 통해 얻어진 백혈구 농축액(buffy coat)을 생리식염수(또는 PBS)로 희석하여 Histopaque-1077 위에 올린 후, 400g~600g에서 30분간 실온에서 원심분리 하여 말초혈액단핵세포(PBMC, peripheral blood mononuclear cell)를 얻었다. 얻어진 PBMC를 PBS로 2~3회 세척 후, 무동물혈청 배지에 현탁(1× 106/㎖)하여 T 75~T 150㎠ culture flask에 옮겨, 60~90분 동안 37℃, 5% CO2의 조건으로 배양하였다. 부착되지 않고 부유된 세포는 제거한다(Plastic adherent 방법).
단세포를 분리하기 위한 다른 방법으로는 말초혈액단핵세포(PBMC)에 CD14 또는 CD3, CD19 antibody 등과 반응시켜 칼럼을 통해 고순도의 단세포를 얻는 방법을 사용하였다(MACS법).
실시예 2. 배양용기 하이드로젤 ( hydrogel ) 코팅
하이드로젤 코팅 전에 배양용기를 에탄올을 이용하여 1~3회 세척하여 보관한다. poly(2-hydroxyethyl metacrylate), polymethyl methacrylate 등과 같은 하이드로젤(hydrogel) 코팅 물질을 최종농도 0.1~10%가 되게 만들어 에탄올로 세척된 배양용기에 표면이 덥힐 정도로 첨가하여 무균상태로 건조한다. 건조된 코팅 배양용기는 생리식염수(또는 PBS)로 2~3회 세척하여 사용한다.
실시예 3. 수지상세포 배양
MACS법으로 얻은 단세포는 하이드로젤(hydrogel)이 코팅된 배양용기에 IL-4(1000U/㎖), GM-CSF(1000U/㎖)가 첨가된 무동물혈청 배지에서 5일간 배양하여 미성숙수지상세포로 분화시켰다. 분화된 미성숙수지상세포(1×106cells/ml)는 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기와 코팅되지 않은 배양용기로 나누고 KLH(10㎍/㎖) 및 항원 (100㎍/1×106cells)을 탑재시켰다. 그 후, 성숙유도인자 (TNF-α 10ng/㎖ , IL-1β 10ng/㎖ , IL-6 1000U/㎖ and PGE2 1㎍/㎖)를 첨가하여 18~24시간 동안 추가 배양하여 성숙한 수지상세포로 분화시켰다.
실시예 4. 수지상세포 배양
plastic adherent 방법으로 얻은 단세포는 배양용기에 IL-4(1000U/㎖), GM-CSF(1000U/㎖)가 첨가된 무동물혈청 배지에서 5일간 배양하여 미성숙 수지상세포로 분화시켰다. 분화된 미성숙수지상세포(1×106cells/ml)는 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기와 코팅되지 않은 배양용기로 나누고 KLH(10㎍/㎖) 및 항원 (100㎍/1×106cells)을 탑재시켰다. 그 후, 성숙유도인자(TNF-α 10ng/㎖ , IL-1β 10ng/㎖ , IL-6 1000U/㎖ and PGE2 1㎍/㎖)를 첨가하여 18~24시간 동안 추가 배양하여 성숙한 수지상세포로 분화시켰다.
실시예 5. 수지상세포 성상 및 표면항원 분석
수지상세포의 성상을 확인하기 위해서 수지상세포의 형태를 현미경으로 관찰하였고, 표면항원 분석을 위해 FITC-또는 PE-가 접합된 isotype control, anti-CD11c, anti-CD14, anti-CD40, anti-CD54, anti-CD80, anti-CD83, anti-CD86, HLA-DR 및 HLA-ABC 등의 단일클론항체를 넣어 4℃에서 20분간 반응시킨 후 유세포 분석기로 분석하였고 세포의 생존율을 측정하기 위해 PI(또는 7-AAD)로 염색하여 분석하였다.
실시예 6. 수지상세포의 항원포식능력( Phagocytic activity )
미성숙 수지상세포는 성숙한 수지상세포에 비하여 항원을 인식하여 포식하는 능력이 우수하다고 알려져 있다. 따라서 본 발명의 방법에 따라 분화된 미성숙수지상세포의 Dextran-FITC uptake 정도를 유세포 분석기로 측정하여 항원포식능을 확인하였다. 미성숙수지상세포(1×106/㎖)에 Dextran-FITC를 1㎎/㎖의 농도로 처리하고 37℃에서 1시간 배양하였다. 수지상세포를 4℃에서 1시간 동안 배양시킨 것을 음성 대조군으로 사용하였으며, 배양 후에는 PBS로 2회 세척하여 유세포 분석기로 분석하였다.
실시예 7. 수지상세포의 IL -12 분비능
성숙한 수지상세포의 IL-12의 분비능을 확인하기 위해서 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기와 코팅되지 않은 배양용기에서 배양된 성숙수지상세포의 배양액을 채취하여 ELISA법으로 정량분석 하였다. 이때 미성숙수지상세포의 배양액은 대조군으로 사용하였다.
<결과>
도 1은 MACS법 및 plastic adherent법에 의해 분리된 단세포의 성상을 나타낸 것으로 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기(MACS법)의 단세포는 부착되지 않고 고유의 형태를 나타내고 있지만 코팅되지 않은 배양용기(plastic adherent)의 단세포는 활성화되어 그 형태가 변형된 것을 볼 수 있다.
도 2는 단세포를 MACS법으로 분리하여 하이드로젤(hydrogel) 코팅 배양용기와 코팅되지 않은 배양용기에서 미성숙수지상세포로 분화시킨 것이며, 도 4는 미성숙수지상세포를 하이드로젤(hydrogel) 코팅 배양용기와 코팅되지 않은 배양용기에서 성숙수지상세포로 분화시킨 세포의 형태를 나타낸 것이다. 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에서 배양된 미성숙수지상세포 및 성숙수지상세포가 코팅되지 않은 배양용기에서 배양된 미성숙수지상세포 및 성숙수지상세포보다 수상돌기(dendrite)가 전체적으로 골고루 많이 나와 있으며 다른 세포로 활성화되는 경우가 적다. 특히, 도 4의 경우 하이드로젤(hydrogel) 코팅된 배양용기는 미성숙수지상세포에서 성숙수지상세포로 분화 유도될 때 다른 형태의 세포로 활성화되는 것을 방지하고 생존율을 높이기 때문에 도 7과 같이 iDC/mDC 비율(수율)이 2배 이상 높음을 알 수 있다. Plastic adherent법에 의해 분리된 단세포를 미성숙수지상세포로 분화시킨 후 하이드로젤(hydrogel) 코팅된 배양용기와 코팅되지 않은 배양용기에 옮겨 성숙수지상세포로 분화 유도시켰을 때 MACS법과 거의 일치하는 결과가 나왔다.
도 3과 5는 도 2와 4의 세포를 유세포분석법을 이용하여 표면항원을 분석한 자료이다. 전체적으로 적절한 표현형을 나타내었지만 특히 CD11c, CD54, HLA-A.B.C, HLA-DR이 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에서 매우 강하게 발현됨을 알 수 있다(피크가 오른쪽으로 갈수록 발현 강도가 높음). 즉, 수지상세포의 분화 상태가 더욱 우수함을 보여주고 있다.
도 6은 미성숙수지상세포의 항원포식능력을 유세포분석법을 이용하여 측정한 것으로 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에서 배양된 미성숙수지상세포가 항원포식능이 더 우수함을 보여준다.
도 7은 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기와 코팅되지 않은 배양용기에서 배양한 수지상세포의 수율을 나타낸 것으로 전체적으로 코팅된 배양용기에서 2배 이상 높은 수율을 보이고 있다.
도 8은 수지상세포의 IL-12 분비능을 측정한 것으로 도 5에서도 알 수 있듯이 하이드로젤(hydrogel)로 코팅된 배양용기에서 배양된 수지상세포의 분화 상태가 더욱 우수하기 때문에 IL-12의 분비능도 코팅되지 않은 배양용기의 수지상세포보다 증가함을 알 수 있다.
위의 결과를 종합해볼 때 하이드로젤(hydrogel) 코팅 배양용기를 이용하여 수지상세포로 분화시켰을 때 코팅이 되지 않은 배양용기를 사용할 때보다 고효율의 수지상세포를 제조할 수 있는 기반을 마련하였다고 할 수 있다.
도 1a와 1b는 각각 하이드로젤(hydrogel)로 코팅되지 않은 배양용기와 코팅된 배양용기에서 배양되고 있는 단세포의 형태학적 양상을 나타낸다.
도 2a와 2b는 각각 하이드로젤(hydrogel)로 코팅되지 않은 배양용기와 코팅된 배양용기에서 배양된 미성숙수지상세포의 형태학적 양상을 나타낸다.
도 3a와 3b는 각각 하이드로젤(hydrogel)로 코팅되지 않은 배양용기와 코팅된 배양용기에서 배양된 미성숙수지상세포의 표면 마커 발현(surface markers expression)을 나타낸다.
도 4a와 4b는 각각 하이드로젤(hydrogel)로 코팅되지 않은 배양용기와 코팅된 배양용기에서 배양된 성숙수지상세포의 형태학적 양상을 나타낸다.
도 5a와 5b는 각각 하이드로젤(hydrogel)로 코팅되지 않은 배양용기와 코팅된 배양용기에서 배양된 성숙수지상세포의 표면 마커 발현(surface markers expression)을 나타낸다.
도 6a와 6b는 각각 하이드로젤(hydrogel)로 코팅되지 않은 배양용기와 코팅된 배양용기에서 배양된 미성숙수지상세포의 항원포식능력(Phagocytic activity)을 나타낸다.
도 7은 하이드로젤(hydrogel)로 코팅되지 않은 배양용기와 코팅된 배양용기에서 배양된 수지상세포의 수율을 나타낸다.
도 8은 본 발명에 따른 수지상세포의 IL-12(interleukin-12) 분비능을 나타낸다.

Claims (6)

  1. 사람의 말초혈액단핵구(PBMC)로부터 단세포를 분리하는 1단계;
    1단계와는 별도로 배양용기에 하이드로젤(hydrogel)로 코팅하는 2단계;
    상기 1단계에서 분리된 단세포를 하이드로젤 코팅된 배양용기에서 배양하여 미성숙 수지상세포로 분화시키는 3단계;
    다시 3단계에서 분화된 미성숙 수지상세포를 2단계에서 만들어진 하이드로젤 코팅 배양용기에서 성숙수지상세포로 분화시키는 4단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 수지상세포의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 1단계에서 단세포를 분리하는 방법은 MACS법 또는 Plastic adherent 방법인 것을 특징으로 하는, 수지상세포의 제조방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 2단계에서 사용하는 하이드로젤(hydrogel)은 HEMA의 중합체, HEMA와 MMA와 NVP의 중합체, HEMA와 MA의 중합체, HEMA와 PVP와 MA의 중합체, HEMA와 MA의 중합체, HEMA와 PC의 중합체, HEMA와 NVP의 중합체, PVA의 중합체, HEMA와 NVP의 중합체, MMA와 NVP의 중합체 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 수지상세포의 제조방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 2단계는 하이드로젤(hydrogel)을 에탄올, 메탄올, 열수 등과 같은 용매에 녹여 최종 농도가 0.1~10%가 되게 만들어 플라스크에 코팅하는 것을 특징으로 하는, 수지상세포의 제조방법.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 2단계는 하이드로젤(hydrogel)을 에탄올, 메탄올, 열수 등과 같은 용매에 녹여 최종 농도가 0.1~10%가 되게 만들어 플라스크에 코팅하는 것을 특징으로 하는, 수지상세포의 제조방법.
  6. 단세포유래 미성숙수지상세포(monocyte-derived immature dendritic cell)를 하이드로젤(hydrogel)로 코팅한 배양용기에서 분화시켜 성숙수지상세포를 제조하는 것을 특징으로 하는, 수지상 세포의 제조방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR101440102B1 (ko) * 2012-10-29 2014-09-18 한국원자력의학원 하이드로젤 코팅과 전기천공법을 이용한 강력한 항원제시세포의 제조방법
CN113186160A (zh) * 2021-04-25 2021-07-30 大连大学 一株猪dc细胞的传代细胞系及其建立方法与应用

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