KR20090095974A - 관절보호용 생약복합 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 관절조직 보호 작용을 갖는 생약조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 까마중, 금은화, 하고초, 천화분의 생약 추출물이 함유되어 있고 소염진통제, 혈액순환 개선 효과 및 관절연골 조직 분해 억제 활성 효과가 우수하고 관절조직 보호 활성도 우수하여 관절조직 보호제로 유용한 생약조성물에 관한 것이다.

관절조직 보호, 생약조성물, 까마중, 금은화, 하고초, 천화분

Description

관절보호용 생약복합 조성물{composition of Korean medicine for bone}

본 발명은 관절조직 보호 작용을 갖는 생약조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 까마중, 금은화, 하고초, 천화분의 생약 추출물이 함유되어 있고 소염진통제, 혈액순환 개선 효과 및 관절연골 조직 분해 억제 활성 효과가 우수하고 관절조직 보호 활성도 우수하여 관절조직 보호제로 유용한 생약조성물에 관한 것이다.

본 발명은 관절 보호용 생약조성물에 관한 것으로서 까마중, 금은화, 하고초, 천화분의 생약 추출물이 함유 된 조성물이며, 진통 효과, 급성 및 만성 염증 억제 작용, 혈소판 응집 억제 작용, 젼혈응고 억제작용, 항진된 면역세포(B-임파구, T-임파구)증식 억제 작용, 염증유발관련 효소(5-Lipoxygenase, Cyclooxygenase-I, Cyclooxygenase-Ⅱ) 활성 억제 작용 및 유해 활성산소라디칼(Superoxide radical) 소거작용을 하여 관절조직 분해 효소 활성 억제 효과가 매우 우수하고 특히 관절조직 보호 활성도 우수하므로 소염진통제, 혈액순환 개선제, 관절염 치료제 및 관절 보호제 등으로 유용한 새로운 특성의 생약 조성물에 관한 것이다.

까마중, 금은화, 하고초, 천화분은 한약재로서 널리 알려져 있으며, 이들 각 각의 생약은 각종 종기나 상처, 기관지염, 유선염, 편도선염 및 치루 등의 일반적인 염증에 널리 사용되어 왔을 뿐만 아니라 특히 습비를 제거하는 작용이 있어 손발이 차거나 저린데, 무릎이 아파 걷지 못하는데, 허리와 어깨 아픈데, 온몸이 힘이 없고 살갗통증 등의 증상 치료에 탕제 또는 생약분말제로 이용되어 왔다. 이들 증상은 현대 병리학적 개념으로 보면 만성류마티스 관절염을 포함한 일반적 관절염의 증상과 유사하다.

천화분은 ‘과루근’ 또는 백약‘이라고도 하며 다년생의 덩굴성 초본인 하눌타리, 노랑하눌타리의 뿌리를 가을에 캐내 깨끗이 씻어 외피를 깍아내고 적당한 길이로 잘라 햇볕에 말린 것을 약재로 사용하여온 무독한 한방 생약이다. 한방에서는 소갈증을 멈추게 하고 각종 종기, 치루 유선염 등에 유효하며 배농, 소종, 해독, 해열작용에 널리 이용되어 왔다. 지금까지 알려진 천화분의 성분으로는 단백질류인 트리코산틴(trichosanthin)이 가장 널리 알려져 있고, 그 외 아미노산 성분으로서 아르기닌(arginine), 시트롤린(citrulline)등이 알려져 있으며 지방산으로서 팔미틴산(palmitic acid), 리놀레인산(linoleic acid)등이 알려져 있다. 최근에는 브리오놀산(bryonolic acid), 4-히드록시_벤조인산(4-hydroxy-benzoic acid)및 알파_스피나스테롤(a-spinasterol)등의 스테놀류가 밝혀진 바 있다.[한국유용식물자원 연구총람, 한국화학연구소, pp1354~1357(1988);도해향학 대사전, 영림사, pp960~963(1990)].

하고초는 꿀풀 및 동속근연식물의 과수로서 여름에 과수가 반쯤 시들면 채취하여 햇볕에 말려 약재로 사용하여온 무독한 한방 생약이다. 한방에서는 만성적이 종기, 두창 유선염 및 임파선 결핵 등에 이용되어 왔으며 징가(아랫배에 담음이나 어혈로 생긴 덩어리)를 파괴하며 각기를 제거하고 온몸이 저리고 마비되는 것을 치료하는데 사용되어 왔다. 하고초의 성분으로는 올레아놀린산(oleanolic acid), 우르솔린산(ursolic acid)등의 사포닌류와 카로틴(carotine), 비타민C(vitamine C), 비타민 K(vitamine K), 탄틴(tanin), 카페인산(caffeic acid), 클로르제닌산(chlorogenic acid) 등이 알려져 있고 로스마린산(rosmaric acid)이 존재하는 것도 밝혀져 있다.[한국유용식물자원 연구총람, 한국화학연구소, pp480~482(1988);하고초 화학성분연구, 이작평 외 3인, 북경의과대학학보, 17(4), pp297~299(1985);Pharm. Acta. Helv. 66. No.7, pp185~188(1991)]

동의보감, 향약집성방 및 광제비급 등의 기성 한약서나 관련 문헌에서는 대부분 이들생약 각각에 대한 단방 생약으로서의 한방의학적 약효와 탕액의 제조방법에 관해서만 언급하고 있을 뿐 이들을 적절히 배합한 생약복합제로부터 탕액을 제조하여 처방한 바 없다.

본 발명자들은 관절조직 분해 효소 활성 억제 효과가 매우 우수하고 특히 관절조직 보호 효과도 우수하므로 소염진통제, 혈액순환 개선제, 관절염 치료제 및 관절 보호제, 풍, 한, 습으로 인한 비증을 개선시키는 것으로 알려진, 까마중, 금은화, 하고초 및 친화분 등의 생약 최적의 비율을 가진 우수한 생약 조성물을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 소염 진통작용, 관절조직 분해 효소 활성 억제, 관절조직 보호 등의 효과를 갖는 까마중, 금은화, 하고초 및 천화분 등의 최적 혼합 중량비율로 생약조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명은 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근으로부터 추출 정제된 유효성분을 함유하고 있는 생약조성물로서 소염 진통작용, 혈소판 응집억제작용, 전혈응고 억제작용, 관절조직 분해효소의 억제작용, 면역세포증진 억제작용, 염증유발관련 효소 억제작용, 유해활성산소라디칼 소거작용 및 만성류마티스관절염 치료작용을 가지고 있어 소염진통제, 만성류마티스 관절염 치료제 및 혈액순환 개선제로서 유용하다.

본 발명은 까마중, 금은화, 하고초 및 친화분의 혼합생약으로부터의 추출물을 포함하는 복합 생약조성물을 특징으로 한다.

이하, 본 발명을 실시예에 의거 상세히 설명하면 다음과 같은바 본 발명이 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1]

복합 생약조성물은 생약을 물 또는 알콜성 수용액으로 추출하여 생약제를 제조함에 있어서 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근의 생약을 800g, 2kg, 1kg, 2kg의 중량비로 혼합하고, 이 혼합생약을 물 또는 알콜성 수용액으로 추출하고 그 여액을 동량의 수포화 n-부틸알콜 또는 수포화 프로필알콜로 층분리하여 알콜층을 감압농축, 동결건조 과정을 거쳐 분말엑기스를 제조한다.

[실시예2]

복합 생약조성물은 생약을 물 또는 알콜성 수용액으로 추출하여 생약제를 제조함에 있어서 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근의 생약을 1kg, 2kg, 1kg, 2kg 의 중량비로 혼합하고, 이 혼합생약을 물 또는 알콜성 수용액으로 추출하고 그 여액을 동량의 수포화 n-부틸알콜 또는 수포화 프로필알콜로 층분리하여 알콜층을 감압농축, 동결건조 과정을 거쳐 분말엑기스를 제조한다.

[실시예3]

복합 생약조성물은 생약을 물 또는 알콜성 수용액으로 추출하여 생약제를 제조함에 있어서 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근의 생약을 800g, 2kg, 1.5kg, 2kg의 중량비로 혼합하고, 이 혼합생약을 물 또는 알콜성 수용액으로 추출하고 그 여액을 동량의 수포화 n-부틸알콜 또는 수포화 프로필알콜로 층분리하여 알콜층을 감압농축, 동결건조 과정을 거쳐 분말엑기스를 제조한다.

[비교예1]

복합 생약 추출물의 제조 방법은 대한민국특허 제180,567호의 방법에 기재되 어 있다. 물로 세척하여 협잡물을 제거하고 잘 건조된 상태의 위령선 200g, 2.0~4.0cm 정도로 세절된 천화분 450 g 및 잘 건조된 하고초 350 g을 고루 섞은 후, 10ℓ의 물을 가해 잘 교반하여 주면서 6시간 환류 추출하였다. 여액을 취하여 모으고 잔사에 대해서는 7ℓ의 물을 가해 3시간 재 가온 추출한 후 여액을 모두 합하여 5ℓ로 농축하였다. 여기에 동량의 수포화 n-부틸알콜을 가하여 3회 층분리 한 후 n-부틸알콜만을 모아 60~70℃로 생약추출물이 건조될 때까지 감압 농축하였다. 대부분의 n-부틸알콜과 물이 증발된 상태에서 1ℓ의 물을 가해 공비 농축한 후 다시 2회 반복하고, 최종적으로 동량의 증류수를 가하여 현탁시킨 후 동결 건조하고 분말상태의 복합 생약 추출물을 얻었다.

[비교예2]

복합 생약 추출물의 제조 방법은 대한민국특허 제180,567호의 방법에 기재되어 있다. 물로 세척하여 협잡물을 제거하고 잘 건조된 상태에서 위령선, 천화분, 하고초를 각각 330g씩 동량으로 혼화하고 10ℓ정도의 물을 가해 3시간 정도 가온 추출한 후 여액을 모두 합하여(15ℓ). 동량의 수포화 n-부틸알콜을 가하여 3회 층분리한 후 n-부틸알콜층을 모두 모아 60~70℃로 감압 농축하고, 마지막으로 2ℓ의 증류수를 가해 2회 공비 농축하였다. 여기에 동량의 증류수를 가하여 잘 현탁시킨 후 동결 건조하여 35g의 분말엑기스를 얻었다.

<독성에 관한 자료>

본 발명의 생약 조성물의 인체에 대한 투여용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환정도에 따라 달라질 수 있으며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할투여할 수도 있다. 예컨대 평균 몸무게가 70kg인 성인환자를 기준으로할 때 정제, 캅셀, 연질캅셀 등으로 제형화하여 경구로 투여하는 경우 일반적으로 50~2400 mg/일의 단위투여용량으로 투여되고, 주사제로 투여하는 경우 일반적으로 50~400 mg/일의 단위투여용량으로 투여되고 연고제로 투여하는 경우 일반적으로 300~2400 mg/일의 단위투여용량으로 투여되고, 경피투여제로 투여하는 경우 일반적으로 150~1200 mg/일의 단위투여용량으로 투여된다. 상기 투여량은 평균적인 경우를 예시한 것으로서 개인적인 차이에 따라 그 투여량이 높거나 낮을 수 있으며, 이러한 것은 본 발명의 범주에 속하는 것이다. 또한, 이들 생약 조성물의 1일 투여량이 상기 투여용량 미만이면 유의성 있는 효과를 얻을 수 없으며, 그 이상을 초과하는 경우 비경제적일 뿐만 아니라 상용량의 범위를 벗어나므로 역시 바람직하지않은 부작용이 나타날 우려가 발생한다.

특히 본 발명의 생약 조성물을 인체에 투여하는 경우 천연추출물의 일반적 특성에 비추어 볼 때 다른 합성 의약품에 비해 부작용의 염려가 없을 것으로 사료되었으며, 실제로 규격화된 생약 추출물에 대한 독성 시험 결과 생체에 아무런 영향이 없는 것으로 판명되었다.

[참고예1][독성시험]

실시예 1은 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근이 0.8 : 2.0 : 1.0 : 2.0의 중량비로 혼합된 복합 생약조성물의 최대 중량비율로 얻어진 건조 분말 엑기스를 2g/kg의 투여용량으로 SD(Spraque-Dawley)계 흰쥐에 경구투여하고, 2주일동안 관찰한 결과 폐사되는 동물은 나타나지 않았으며, 기타 해부학적 소견에 있어서도 대조군과 비교하여 아무런 이상이 발견되지 않았다.

[참고예2][독성시험]

실시예 2는 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근이 1.0 : 2.0 : 1.0 : 2.0의 중량비로 혼합된 복합 생약조성물의 최대 중량비율로 얻어진 건조 분말 엑기스를 2g/kg의 투여용량으로 SD(Spraque-Dawley)계 흰쥐에 경구투여하고, 2주일동안 관찰한 결과 폐사되는 동물은 나타나지 않았으며, 기타 해부학적 소견에 있어서도 대조군과 비교하여 아무런 이상이 발견되지 않았다.

[참고예3][독성시험]

실시예3은 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근이 0.8 : 2.0 : 1.5 : 2.0의 중량비로 혼합된 복합 생약조성물의 최대 중량비율로 얻어진 건조 분말 엑기스를 2g/kg의 투여용량으로 SD(Spraque-Dawley)계 흰쥐에 경구투여하고, 2주일동안 관찰한 결과 폐사되는 동물은 나타나지 않았으며, 기타 해부학적 소견에 있어서도 대조군과 비교하여 아무런 이상이 발견되지 않았다.

[실험예1] 진통 효과 테스트

상기 실시예 1~3 및 비교예 1~2에 의해 엑기스의 진통작용에 관한 효력 비교로서, 아세트산 유도 롸이딩 테스트를 다음과 같이 실시하였으며, 그 결과는 다음 표에 나타낸 바와 같다.

실험방법:

ICR(institute of Cancer Reserch)계 쥐에 실시예 1~3 및 비교예 1~2에서 얻어진 쥐 1kg당 200mg, 400mg씩 경구투여하고 1시간후 0.6% 아세트산을 쥐 몸무게 10g 당 0.1ml의 용량으로 복강주사하고, 주사 후 10분 후부터 10분간 각각의 쥐가 나타내는 통증 반응인 롸이딩(writhing : 등을 쭉 펴거나 뒷다리를 몸 뒤로 완전히 뻗어 제치는 현상)을 보이는 횟수를 관찰하였다.

	생약 엑기스 투여량(mg/kg)	롸이딩 평균 횟수	억제율(%)
대조군		20
실시예1	200 400	8 4	60 80
실시예2	200 400	8 6	60 70
실시예3	200 400	9 5	55 75
비교예1	200 400	14 10	30 50
비교예2	200 400	15 11	25 45

상기 표의 결과로부터 본 발명과 같이 제조된 추출물은 롸이딩 횟수가 감소한 것으로 보아 진통작용이 우수함을 알 수 있다.

[실험예 2] 관절염 치료 효과 테스트

상기 실시예 1~2 및 비교예 1~3에 의해 제조된 엑기스의 관절조직 보호 활성 을 비교하기 위하여 콜라게나아제(Collagenase)를 토끼 관절강에 주사하여 관절조직을 손상시킴으로써 사람의 관절염과 유사한 조직병리학적 소견을 나타내는 토끼 모델 실험을 실시하였고, 그 결과는 다음 표에 나타낸 바와 같다.

실험방법 : 2.0 ~ 2.5 kg의 토끼 관절강에 1kg 당 1mg의 콜라게나제를 실험 1일째와 4일째에 주사하여 관절염과 유사하게 관절조직의 손상을 유발시켰고, 상기 실시예 1~3 및 비교예 1~2에 의해 제조된 엑기스를 토끼 1kg 당 200mg 씩 4주일간 경구 투여하였다.(각 군당 6마리). 관절염 유발 4주 토끼를 해부하여 관절조직을 분리한 후 탈회 과정을 거쳐 사프라닌-O(Sapranin-O)등으로 염색시킨 후 현미경으로 관절 조직을 연골 조직 및 활액조직으로 대별하여 부위별로 관찰함으로써 조직병리학적 병변을 점수화하였다(병변없음:0, 미세한 병변:1, 확실한 병변 소견:2, 심한 병변:3, 매우 심한 병변:4).

구분	연골 조직	활액 조직	합계
대조군(무처치군)	12.0	10.9	22.9
실시예 1	5.2	6.0	11.2
실시예 2	5.3	6.1	11.4
실시예 3	5.4	6.2	11.6
비교예 1	7.9	7.5	15.4
비교예 2	7.6	7.6	15.2

1) 연골 조직(완전 관절염 24점) : 표층의 상실, 연골 부식, 섬유화 세포의 파괴 및 손상등

2) 활액 조직(완전 관절염 24점) : 내층의 과다형성, 비대, 세포 침윤, 과립조직의 증식 등

3) 합계(완전 관절염 48점)

상기 표에서 보는 바와 같이 본 발명과 같이 제조된 추출물은 콜라게나아제 에 의해 유발된 관절염 모델에서 관절조직을 보호하여 조직병리학적으로 병변 심화를 완화시켜주는 정도가 우수함을 알 수 있다.

[실험예3] 관절조직 분해 효소 활성 억제 효과 테스트

상기 실시예 1~3 및 비교예 1~2에 의해 제조된 엑기스의 관절조직 분해효소인 히알룰로니다제(Hyalulonidase)억제작용에 대한 비교 실험을 하였으며, 그 결과를 아래의 표에 나타내었다.

실험방법:

히알룰로니다제를 아세테이트 완충액상에서 37℃로 20분간 배양하여 활성화시킨 후에 실시예 1~3 및 비교예 1~2에서 얻은 추출물과 기질로서 포타슘 히알룰로네이트(potassium hyaluronate)를 가하여 약 40분간 계속 배양한다. NaOH로 반응을 종결시키고 포타슘 보레이트(potassium borate)를 가한 후 100℃로 가온하고 DMBA (Dimethylbenzanthracene)로 발색시켜 흡광도를 측정하였으며 대조군과 비교하여 억제율을 계산하였다.

	시험농도(mg/ml)	억제율(%)
실시예1	1	90.2
실시예2	1	89.6
실시예3	1	88.7
비교예1	1	79.2
비교예2	1	78.9

상기 표에서 보는 바와 같이 본 발명의 실시예 1, 2 및 3 을 투여한 경우가 관절조직 분해효소의 활성화를 억제하는 정도가 크다.

[실험예4] 유도 만성 류마티스관절염에 대한 비교효력 시험

상기 실시예 1~3 및 비교예 1~2에 의해 제조된 엑기스의 만성염증에 대한 비교효력 시험으로서 마이코박테리움 부티리쿰(Mycobacterium butyricum) 유도 만성 류마티스관절염 시험을 실시하였으며, 그 결과는 아래의 표와 같다.

실험방법:

미네랄오일에 현탁시킨 열처리된 마이코박테리움 부티리쿰을 흰쥐의 우측 뒷발바닥에 0.05ml씩 주사하여 만성 부종을 유도하고, 실시예 1~3 및 비교예 1~2에서 얻은 추출물을 투여한 후 15일 동안 부종 정도를 측정하였다. 각각의 엑기스는 1일 1회 15일간 경구 투여하였다.

위 표와 같이 본 발명의 실시예 1, 2, 3 은 부종의 크기 증가율이 작음을 알 수 있다. 관절조직 분해 효소 활성 억제 효과가 매우 우수하고 특히 관절조직 보호 활성도 우수하므로 소염진통제, 혈액순환 개선제, 관절염 치료제 및 관절 보호제 등으로 유용한 새로운 특성의 생약 조성물에 관한 것이다.

도 1은 본 발명의 실시예 1, 2 및 3에 대한 부종의 크기 증가율을 나타낸 것이다.

Claims (1)

1. 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근이 0.5~0.8 : 1.0~2.0 : 0.5~1.0 : 1.0~2.0의 중량비로 혼합된 것; 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근이 0.5~1.0 : 0.5~2.0 : 0.5~1.0 : 1.0~2.0의 중량비로 혼합된 것;

   까마중, 금은화, 하고초 및 과루근이 0.5~1.0 : 0.5~2.0 : 0.2~1.0 : 0.5~2.0의 중량비로 혼합된 것 및 까마중, 금은화, 하고초 및 과루근이 0.2~0.8 : 0.5~2.0 : 0.2~1.5 : 0.5~2.0의 중량비로 혼합된 것 중에서 선택되는 어느 하나로부터 생성된 추출물을 함유하는 관절보호용 생약복합 조성물.

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