KR20090090953A - Ａｉｄｓ 예방 및 치료를 위한 ａｉｄｓ ｄｎａ백신(ｇｘ-127) 또는 재조합 아데노바이러스 - Google Patents

Abstract

본 발명은 AIDS에 대한 효과적인 예방 및 치료를 목적으로 하는 DNA 백신에 관한 것으로, 광범위하게 분포하는 B형 HIV-1 바이러스 염기 서열 상의 컨센서스 서열(consensus sequence)을 바탕으로 하여 포유류에서의 발현율을 높이도록 코돈 변형된 항원 유전자 및 면역 조절 인자를 포함하는 DNA 백신 및 재조합 아데노 바이러스 백신 조성물에 대한 것이다. 본 백신 조성물은 AIDS 바이러스의 구조 단백질(gag, env, pol), 초기 조절 단백질(rev, tat, nef) 유전자 전체 및 AIDS 바이러스의 보조 항원(vif, vpx, vpu)의 사람 내 항원 인자(epitope)를 포함하고 있어 다양한 변이체에 대처할 수 있도록 광범위한 면역 반응의 유도가 가능하다.

AIDS multigenic DNA vaccine, HIV B subtype consensus sequence, Flt3-ligand, IL-7

Description

ＡＩＤＳ 예방 및 치료를 위한 ＡＩＤＳ ＤＮＡ 백신(ＧＸ-127) 또는 재조합 아데노바이러스{AIDS vaccine or recombinant adenovirus for treating or preventing AIDS}

본 발명은 AIDS에 대한 효과적인 예방 및 치료를 목적으로 하는 DNA 백신에 관한 것으로, 광범위하게 분포하는 B형 HIV-1 바이러스 염기 서열 상의 컨센서스 서열(consensus sequence)을 바탕으로 하여 포유류에서의 발현율을 높이도록 코돈 변형된 항원 유전자 및 면역 조절 인자를 포함하는 DNA 백신 및 재조합 아데노 바이러스 백신 조성물에 대한 것이다. 본 백신 조성물은 AIDS 바이러스의 구조 단백질(gag, env, pol), 초기 조절 단백질(rev, tat, nef) 유전자 전체 및 AIDS 바이러스의 보조 항원(vif, vpx, vpu)의 사람 내 항원 인자(epitope)를 포함하고 있어 다양한 변이체에 대처할 수 있도록 광범위한 면역 반응의 유도가 가능하다.

후천성 면역 결핍증(AIDS)는 1980년 대 초반 AIDS 및 원인 바이러스인 HIV가 발견된 이래, 전 세계적으로 2000만 명을 사망하게 만든 질환으로서, HIV 감염에 의한 CD4 T세포의 감소로 인한 면역 손상에 기인한다. CD4 T 세포는 면역 체계에 있어 중추적인 기능을 담당하는 세포로서, HIV 감염에 의한 CD4 T 세포의 감소는 결핵 등과 같은 복합적인 기회 감염, 종양(neoplasia)를 유발하게 한다. 이러한 HIV 감염 및 AIDS의 예방을 위해 불활성 전체 바이러스, 특이항원추출백신(subunit), 합성 펩타이드(synthetic peptide) 백신 및 항-이디오타입항체(anti-idiotype antibody) 등 많은 종류의 백신이 개발되었으며, 2003년에는 재조합 B/E 형 외피 단백질(gp120)을 이용하여 임상 3상 실험이 수행되었다. 그러나, Vaxgen에 의해 수행된 최초의 AIDS 백신의 임상 3상 실험은 대조군과 실험군에서 유의한 수준의 방어 효능을 나타내는 데 실패하였으며, 아직까지 효과적인 AIDS 백신은 개발되지 않고 있다.

Vaxgen에 의해 실시된 AIDS 백신 임상 3상 실험의 실패는 AIDS 바이러스에 대한 중화항체의 유도가 힘들며, AIDS 바이러스 자체가 보유하고 있는 중화 항체 형성 및 결합에 대한 회피 기작에 기인한다고 할 수 있다.

이러한 항체 형성을 기반으로 하는 백신의 한계점을 극복하고, AIDS 바이러스 감염 세포를 특이적으로 제거할 수 있는 세포성 면역 반응을 효과적으로 유도할 수 있는 백신 기법인 DNA 백신이 그 대안으로 제시가 되었으며, 여러 동물 모델을 통해 그 효능이 검증된 바 있다.

DNA백신은 기존 단백질 백신과는 다른 형태의 백신으로서 특정 항원을 암호화하며 유전자를 포함하고 있는 플라스미드 형태의 백신이다. DNA 백신은 면역화 시 백신 접종자 체내의 수지상 세포를 포함한 다양한 세포에 유입되어, 항원 유전자의 전사 및 항원의 생산을 유도하여, B세포와 T 세포에 항원을 제시 체액성 및 세포성 면역 반응을 유도하게 된다.

DNA 백신은 전통적인 백신에 비해 여러 가지 장점을 가지고 있다. DNA 백신은 인체에 큰 부작용이 없이 체내에서 지속적인 항원 발현을 유도할 수 있으며, 기존 단백질 백신과는 달리 세포성 면역 반응을 유도하는 데 보다 효과적이다(Gurunathan, S., et al., Ann. Rev. Immunol., 2000, 18:927-974).

뿐만 아니라, DNA백신은 다른 백신 기법과 함께 사용 시 보다 증진된 면역 반응을 유도할 수 있다. 가장 대표적인 예로서, DNA 백신을 최초 면역화(프라이밍, priming)하고 재조합 아데노 바이러스로 추가 면역화(부스팅, boosting)하는 기법은 DNA 백신 단독 또는 재조합 아데노 바이러스 단독으로 프라이밍-부스팅 면역화한 기법에 비해 더욱 강한 세포성 면역 반응을 유도할 수 있는 것으로 알려져 있으며(Santra S. et al., J Virol 79:6516-22; Shiver J.W., et al., Nature 2002 415:331-5), SIVmac239, SIVmac251, SHIV89.6P 감염 원숭이 모델등을 통해 그 효능이 검증된 바 있다.

최근 들어 DNA 백신의 효과에 있어 중요한 세포내 DNA 전달을 효과적으로 증진시켜 DNA 백신의 면역 유도능을 크게 증진 시키는 면역화 기법인 in vivo electroporation이 제시됨에 따라, AIDS 백신 개발에 있어 DNA 백신의 중요성이 부각되고 있다(Donnelly, J.J., et al., J. Immunol., 2005, 175:633-639).

사람 및 원숭이에서 AIDS를 유발하는 HIV 및 SIV는 RNA를 유전체로 하는 바이러스로서 내피 단백질(gag) 및 외피단백질(env)과 같은 구조 단백질, 바이러스 단백질의 생산과 복제에 필요한 단백질 분해 효소(protease) 및 역전사 효소(reverse transcriptase)와 같은 효소 단백질, 바이러스의 면역 회피에 관여하는 조절 단백 질(regulatory protein) 등과 같은 많은 수의 항원을 체내에서 생산해 내게 된다.

SIVmac239 감염 원숭이 모델에 있어, 하나의 항원에 대한 면역 반응 유도보다 다항원에 대한 면역 반응을 유도하는 것이 좀 더 효과적으로 바이러스 증식을 억제할 수 있음이 제시되었다(Hel Z., et al, J Immunol. 2006 176:85-96). 이 점은 AIDS 바이러스의 감염 제어가 가능한 면역 반응에 대해 잘 알려져 있지 않으며, RNA 유전체를 갖는 바이러스에서 일반적으로 나타나는 면역 회피 변이체에 대한 면역 제어에 있어 다항원에 대한 면역 반응 유도가 보다 효과적인 백신 기법임을 제시하고 있다.

본 발명의 목적은 AIDS의 원인 바이러스인 HIV에 대한 예방 및 치료를 위해 HIV가 보유한 구조, 효소 및 조절 단백질 등과 같은 항원들에 대한 광범위한 면역 반응을 유도할 수 있는 DNA 백신 및 재조합 아데노바이러스 백신 조성물을 제공하는 것이다.

또 다른 목적으로서, 본 발명은 미국, 유럽 및 한국에서 유행하는 B형 HIV 바이러스 타입 내 변이체에 대한 교차 면역 반응이 가능 하도록 HIV의 컨센서스 서열(consensus sequence)을 바탕으로 한 유전자 및 항원을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 DNA 백신은 2004년 기준으로 Los Alamos HIV 서열 데이터베이스(http://www.hiv.lanl.gov/content/index)를 통해 보고된 B형의 HIV isolate의 항원 유전자 서열을 바탕으로 한 HIV의 컨센서스 서열에 기반을 두고 있다. 이러한 컨센서스 서열은 B형의 HIV 가 유행하고 있는 미국, 유럽 및 한국 등지에서 자연적으로 존재하는 바이러스와 유전학적으로 가장 유사하다고 생각된다. 또한, HIV isolate의 항원 유전자의 서열은 만성 감염 환자들로부터 추출된 것이므로 급성 감염 시의 HIV 항원의 염기 서열을 대표하는 것은 아니지만, HIV 감염자를 대상으로 한 치료를 목적으로 하는 치료 백신에 있어서 단일 HIV isolate로부터 유래된 염기 서열을 바탕으로 한 백신에 비해 교차 면역 반응의 유도와 같은 효과를 얻을 수 있을 것으로 생각된다(Jian Yan, et al., Molecular Therapy, 15:413-21).

앞서 언급한 바와 같이, HIV가 보유한 여러 항원에 대한 광범위한 면역 반응 유도는 SIV 감염 원숭이 모델에서 SIV 감염 예방 및 HIV 복제 억제에 있어 단일 항원에 대한 면역 반응 유도에 비해 효과가 있음이 확인되었다. 따라서 본 발명의 DNA 백신은 HIV가 보유한 구조, 효소 및 조절 항원 등과 같은 주요 항원이 항원 자체 또는 사람에서 알려진 항원 인자 형태로서 포함되어 있어, 면역 회피 변이체의 형성을 최소화하며 HIV에 대한 광범위한 면역 반응의 유도가 가능토록 구성되어 있다.

또한 여러 논문 등을 통해 제시된 바와 같이 코돈 최적화 및 고효율의 발현 벡터를 통해, 사람을 포함한 포유류에서 높은 수준의 항원 발현이 가능하도록 구성되어 있다.

본 발명의 바람직한 양태에서는, 본 발명 구성 성분 중 하나인 외피 단백질(Env) 및 조절 단백질 결합항원(Reg)을 발현하는 DNA 백신 성분이 수지상 세포의 증가 및 수지상 세포로의 항원 타겟팅을 유도할 수 있는 flt-3 ligand의 세포 외 부분(Flex)을 항원과 결합하여 보다 향상된 면역 반응을 유도할 수 있음을 제시한다.

다항원에 대한 면역 반응을 유도하기 위해 DNA 백신 조성물은 각 항원 발현 벡터를 혼합하는데, 이 과정에서 세포 내 각 항원의 발현 및 각 항원에 대한 면역 반응이 다른 항원에 대한 면역 반응을 억제 또는 증가되는 간섭 현상이 나타난다. 본 백신 조성물의 경우, HIV 외피 단백질과 HIV Pol 항원 간의 간섭 현상이 발생하여, HIV 외피 단백질에 대한 세포성 면역 반응이 증가되는 점을 제시한다.

이러한 유전자 조작 기술의 도입을 통해 제조된 DNA 백신 조성물은, 본 연구진에 의해 개발되어 SIV 감염 원숭이 모델에서 이미 그 효능이 입증된 기존 AIDS 백신(GX-01)에 비해 높은 면역원성을 갖고 있음을 소동물 모델을 통해 확인하였다. 이는 SIV 감염 원숭이 모델뿐만 아니라 사람에서 보다 높은 효과를 나타낼 가능성이 큼을 제시한다.

본 발명은 구체적인 실시예에서, HIV B형의 Gag, Env, Pol 항원 유전자 및 조절단백질 결합항원(Reg) 유전자를 각각 포함하는 발현 벡터 또는 재조합 바이러스 벡터를 포함하되, 상기 Env, Pol 항원 및 Reg 유전자의 각 N 말단에는 tissue plasminogen activator(tPA)의 신호서열이 연결되고, 상기 Env 및 Reg 유전자의 tPA 신호서열과 상기 각 유전자의 N 말단 사이에는 flt-3 ligand의 세포 외 부분(Flex)이 연결되며, 상기 Gag 및 Env 유전자는 HIV B형의 컨센서스 아미노산 서열을 코딩하고 포유류에서의 발현율을 높이도록 코돈 변형된 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물을 제조하였다.

상기 조성물에서, 바람직하게 Env 항원 유전자는 항원의 세포외 분비 증진을 위해 transmembrane region이 제거된 것일 수 있다.

상기 조성물에서, 바람직하게 Pol 항원 유전자는 HIV B형의 컨센서스 아미노산 서열을 코딩하고 포유류에서의 발현율을 높이도록 코돈 변형되었으며, 더욱 바람직한 경우로서 역전사 효소(reverse transcriptase)의 효소 활성 제거를 위해 역전사 효소의 아미노산 서열 기준 183번째 아미노산인 Tyrosine을 Phenylalanine으로 치환한 것을 암호화하는 것이다. 또한 바람직하게, 상기 Pol 항원 유전자는 인티그라제(integrase)의 효소 활성 제거를 위해 인티그라제 아미노산 서열 기준 152번째 아미노산인 Glutamic acid를 Aspartic acid로 치환한 것을 암호화하는 것일 수 있거나, 또는 Pol 항원 유전자는 단백질 분해 효소(protease)의 효소 활성 약화를 위해 단백질 분해 효소 아미노산 서열 기준 26번째 아미노산인 Threonine을 Serine으로 치환한 것을 암호화 하는 것일 수 있다.

상기 조성물에서, 바람직하게 Reg 유전자는 5‘ 말단으로부터 3’ 말단 쪽으로 Flex 의 C-말단에 연결된 rev, tat 및 nef의 조절단백질 유전자 및 vif, vpx 및 vpu의 사람 내 항원 인자(epi)가 결합된 것이며, 또한 바람직하게 Reg 유전자는 nef 아미노산 서열 기준 123번째 아미노산인 Aspartic acid가 Glycine으로 치환된 것을 암호화하는 것일 수 있다.

바람직한 경우로서, 상기 조성물의 Gag 항원 유전자는 서열번호 1의 염기서열을 가지며, Env 항원 유전자는 서열번호 2의 염기서열을 가지고, Pol 항원 유전자는 서열번호 3의 염기서열을 가지며, Reg 유전자는 서열번호 4의 염기서열을 가진다.

본 발명에 따른 상기 백신 조성물은 재조합 아데노 바이러스 벡터로도 제공될 수 있으며, 발현벡터의 경우, 본 발명자들에 의해 개발된 신규의 발현 벡터 pGX27 벡터를 사용할 수 있다.

본 발명은 또한 상기 DNA 백신 조성물에 면역증강제로서 IL-7 hybrid Fc 발현 벡터를 첨가하였는데, 이는 본원 발명자의 선행 대한민국 특허출원 제10-2007-0001663호에서 그 작용 및 효능이 명시된 바 있다.

본 발명은 또한 상기 기술된 발현 벡터에 의해 발현되는 폴리펩티드를 포함하는 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물을 제공할 수 있다.

본 백신 조성물은 AIDS 바이러스의 구조 단백질(gag, env, pol), 초기 조절 단백질(rev, tat, nef) 유전자 전체 및 AIDS 바이러스의 보조 항원(vif, vpx, vpu)의 사람 내 항원 인자(epitope)를 포함하고 있어 다양한 변이체에 대처할 수 있도록 광범위한 면역 반응의 유도가 가능하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

<실시예 1> 본 발명에 따른 DNA 백신(GX-127) 또는 재조합 아데노 바이러스가 포함하고 있는 AIDS 바이러스 항원 및 면역 증강 유전자에 대한 모식도

본 발명에 사용된 DNA 백신의 조성은 도 1에서 제시된 바와 같다. HIV B형의 컨센서스 서열을 바탕으로 인체 내에서 항원 발현을 극대화할 수 있도록 코돈 최적화된 유전자를 합성하여 제조되었다. 각 항원 말단에 존재하는 Asp718 및 XbaI의 제한 효소를 사용하여 단편을 얻은 후, 같은 제한 효소로 잘린 pGX27 벡터와 접합(ligation)하여 각 항원 유전자를 발현하는 pGX27 벡터를 제조하였다. 재조합 아데노바이러스는 E1 부분과 E3 부분이 결손된 인간 serotype-5 아데노바이러스(Q-Biogene사)를 말하여, 외래 유전자를 포함하여 동물 세포 감염 시 외래 유전자에 암호화된 단백질을 발현할 수 있다. 항원 유전자를 포함하는 재조합 아데노바이러스 제조를 위하여, 우선 DNA 백신 제조와 같은 방식으로 pshuttle 벡터 내의 Asp718 및 XbaI 결합 위치 삽입하였다. 항원 유전자를 포함하는 pshuttle 벡터를 PmeI 제한 효소를 사용하여 단편화(linearization)을 한 후 E1 및 E3 유전자를 제외한 아데노 바이러스 유전체를 포함한 pAd 벡터와 함께 BJ5183 대장균 균주(Q-Biogene사)에 형질전환을 실시하였다. 이를 통해 pshuttle 벡터와 pAd 벡터 사이의 상동 재조합(homologous recombination)이 이루어질 수 있도록 하여, 각 항원이 삽 입된 pAd 벡터를 제조하였다. 각 항원이 삽입된 pAd 벡터 DNA를 생산, 정제한 후, HEK 293 세포(Human Embryonic Kidney 293 cell)에 트렌스펙션(transfection)하여, 항원 발현 재조합 아데노 바이러스를 제조하였다.

HIV Envelope 항원의 경우, 항원의 세포 내 분비를 촉진하기 위해 고유의 신호 서열을 tpa 신호 서열(tissue plasminogen activator signal sequence)로 치환하고, gp41 내 위치한 transmembrane 부위를 제거하였다. HIV Pol 및 조절 단백질 결합 항원의 경우 HIV Envelope 항원의 경우에서와 같이 tpa 신호 서열을 첨가하여 항원의 세포 내 분비를 유도하였다.

HIV Pol 폴리 단백질로부터 생산되는 역전사 효소, 인티그라제에 의한 항원 유전자의 인체 유전체(genome)내 삽입 및 HIV 조절 단백질 결합 항원 내 nef에 의한 면역 억제 기작과 같은 안전성 문제 및 면역 유도 억제를 극복하기 위해 이들 효소의 작용에 중요한 활성 부위의 돌연변이를 도입하였다. 역전사 효소의 경우, 기질 인식 및 결합에 중요한 활성 부위 --Tyr-Met-Asp-Asp--를 --Phe-Met-Asp-Asp--로 변화시켰다(Harris D., et al., 1998, 37:9630~9640). 인티그라제의 경우, 중심부에 존재하는 효소 활성 부위 중, retrotransposon 사이에 보전된 Asp-64, Asp-116, Glu-152 아미노산 중 152번째 글루타민산(Glu, Glutamic acid)을 아스파린산(Asp, Aspartic acid)으로 치환하여, 효소 활성을 억제하였다(Engelman A.,et al., J. virol., 1992, 66:6361~6369). Nef의 경우, 면역 반응 유도에 있어 중요한 CD4 및 MHC I의 세포 표면 내 발현을 억제하는 데 관여하는 부위(Asp-108~Trp124) 중 123 번째 아미노산인 아스파린산을 글리신(Glycine)으로 치환하였다.

단백질 분해 효소(protease)의 경우, protease의 효소 활성을 약화시키도록 효소 활성 부위(--Asp-Thr-Gly--)을 --Asp-Ser-Gly--으로 돌연변이를 도입하였다.

본 발명의 DNA 백신 조성물은 실시예 3부터 5까지에서 제시된 방법을 통해 얻어진 실험 결과를 바탕으로 하여 최적의 HIV 바이러스에 대한 특이 면역 반응을 유도가 가능하도록 구성되어 있다.

<실시예 2> DNA 백신 조성물의 발현 확인

각 항원 발현 DNA 백신 벡터의 발현을 확인하기 위해, 293 세포주에 3ug의 항원 발현 벡신 벡터를 트랜스펙션하고 48시간 후에 세포 파쇄물에 대하여, 각 항원에 대한 다클론항체 또는 단일 클론 항체를 이용, 면역 블러팅을 수행하여 각 항원의 발현을 확인하였다(도 2a-d).

<실시예 3> AIDS 바이러스의 외피 단백질 및 조절 단백질 결합 항원에 대해 flex 결합이 이들 항원에 대한 면역 반응에 미치는 영향 규명

본 발명의 DNA 백신 조성물이 보유한 4가지 항원 발현 DNA 백신의 항원 특이적인 면역 반응을 보다 증진시키기 위해, 수지상 세포의 증가 및 수지상 세포로의 항원 타겟팅을 유도할 수 있는 flt-3 ligand의 세포 외 부분(flex)이 tpa 신호 서열의 C 말단과 항원의 N-말단 사이에 결합되었다. flex 결합이 HIV 항원 특이적 면역 반응에 미치는 영향을 규명하기 위해, Balb/c 암컷 마우스에 50ug의 항원 발현 DNA 백신 또는 flex 결합 항원 발현 DNA 백신을 면역화 하였다. 면역화는 3 주 간격으로 두 번의 근육 주사를 통해 이루어 졌으며, 마지막 면역화 후 3 주째에 마우스의 비장 세포를 분리하여, 1x 106의 비장 세포를 24시간 동안 HIV-1 항원 펩타이드(peptide)로 자극 하여, IFN-g를 분비 하는 항원 특이적 T 세포의 수를 IFN-g ELISPOT assay를 통해 확인하였다. 실험 결과, HIV의 외피 단백질 및 조절 단백질 결합 항원의 경우, flex 결합을 통해 면역 반응을 증진시킬 수 있었으며, 특히 조절 단백질 결합 항원 특이적 면역 반응의 증가가 보다 큰 것으로 나타났다(도 3).

<실시예 5> HIV Env 항원과 Pol 항원 간의 간섭 현상 및 HIV protease 활성과의 관계

HIV 외피 단백질 항원 및 Pol 항원 발현 DNA 벡터를 동시 면역화 시킬 때 나타나는 간섭 현상을 규명하기 위해, Balb/c 암컷 마우스에 20ug Env 항원을 Pol 항원과 같이 면역화 하였다. 실시예 3에서 제시된 바와 동일한 방법으로 IFN-g ELISPOT assay를 수행하여 Env에 대한 세포성 면역 반응을 측정하였다. 그 결과, Pol 항원의 투여가 Env 항원에 대한 면역 반응을 증가시키는 간섭 현상이 발생함을 관찰할 수 있었다(도 4).

<실시예 6> AIDS DNA 백신(GX-01)과 본 발명의 면역 유도능 비교

본 발명의 DNA 백신 조성물이 갖는 효능을 본 연구진에 의해 개발된 AIDS DNA 백신(GX-120)과 비교하기 위하여, 50ug의 GX-120 또는 GX-127 백신 조성물을 Balb/c 암컷 마우스의 근육 내 in vivo electroporation을 통해 면역화 하였다. 면역화 후 2 주 째 비장 세포를 분리하여, 실시예 3에서와 동일한 방법으로 IFN-g ELISPOT assay를 수행하여 세포성 면역 반응을 측정하였다. 그 결과, GX-127 백신의 면역화를 통해 약 6배의 향상된 세포성 면역 반응을 유도할 수 있슴이 관찰되었다(도 5)

도 1은 본 발명에 따른 DNA 백신(GX-127) 또는 재조합 아데노 바이러스가 포함하고 있는 AIDS 바이러스 항원 및 면역 조절 인자 유전자에 대한 모식도이다.

도 2는 4가지 항원 발현 벡터로부터 항원의 발현을 세포 파쇄물(cell lysate)에서 수행한 면역 블러팅을 통해 검증한 결과로서,

2-a 는 AIDS 바이러스의 내피 단백질(Gag)의 발현을 나타내고,

2-b 는 AIDS 바이러스의 외피 단백질(Env) 및 flt-3 ligand의 세포외 부분(Flex)이 결합된 외피 단백질(Flex/Env)의 발현을 나타내며,

2-c 는 AIDS 바이러스의 Pol 폴리 단백질 발현을 나타내고,

2-d 는 AIDS 바이러스 초기 감염 단계에서 발현되는 조절 단백질인 rev, tat, nef 및 기타 다른 조절 단백질의 사람 내 항원 인자가 서로 결합된 형태의 항원(Reg) 및 flt-3 ligand의 세포외 부분이 결합된 조절 단백질 항원(Flex/Reg)의 발현을 나타낸다.

도 3은 Flex 결합이 AIDS 바이러스 각 항원에 대한 면역 반응에 미치는 영향을 나타낸 것이다.

도 4는 Env와 Pol 항원 공동 투여 시 발생하는 간섭현상을 제시한 것이다.

도 5는 이 들 항원 발현 벡터가 포함된 백신 조성물을 본 연구진에 의해 개발된 AIDS DNA 백신(GX-120, 출원 제 호에 명시)과 동일한 기법(in vivo electroporation)을 사용하여 면역화 한 후의 세포성 면역 반응을 비교한 것이다.

<110> Postech foundation <120> AIDS vaccine or recombinant adenovirus for treating or preventing AIDS <160> 10 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1512 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence for HIV B subtype consensus Gag (Gag) <400> 1 atgggcgcca gagcctccgt gctgtctggg ggagagctgg ataggtggga gaagattaga 60 ctgcgcccag ggggcaagaa gaaatacaag ctgaagcaca ttgtgtgggc ctcccgggag 120 ctggagcggt tcgccgtgaa tcctggactg ctggagacct ctgaaggatg ccggcagatc 180 ctgggccagc tgcagccttc tctgcagacc ggcagcgagg agctgaggtc cctgtacaat 240 acagtggcca ccctgtattg tgtgcaccag aggattgagg tgaaggatac caaggaagcc 300 ctggaaaaaa tcgaagagga gcagaacaag agcaagaaga aagcccagca ggccgccgcc 360 gacacaggca attcctccca ggtgagccag aattatccaa ttgtgcagaa cctgcagggg 420 cagatggtgc accaggccat cagccccagg accctgaatg cctgggtgaa ggtggtggag 480 gagaaggcct tctcccctga agtgattcct atgttttccg ccctgtctga gggcgccaca 540 ccacaggatc tgaacaccat gctgaacacc gtgggcggcc accaggccgc catgcagatg 600 ctgaaggaaa ccatcaatga ggaggccgcc gagtgggata ggctgcaccc agtgcacgcc 660 ggccctatcg cccctggcca gatgagagag cctaggggca gcgatattgc cggcacaaca 720 tccaccctgc aggagcagat cgggtggatg acaaataacc ctcctatccc cgtgggagaa 780 atctataagc gctggatcat cctggggctg aacaagatcg tgcggatgta cagccctaca 840 agcatcctgg acatcaggca gggccctaag gagcctttca gggattatgt ggaccgcttc 900 tataaaacac tgcgggccga gcaggcctcc caggaggtga agaactggat gaccgagacc 960 ctgctggtgc agaatgccaa tcctgactgc aagacaatcc tgaaagccct gggccctgcc 1020 gccaccctgg aagagatgat gaccgcctgc cagggggtgg gcggacctgg ccacaaagcc 1080 agagtgctgg ccgaggccat gtctcaggtg acaaactctg ccacaatcat gatgcagaga 1140 ggaaatttta ggaaccagcg caagaccgtg aagtgcttca attgcggaaa ggaggggcac 1200 atcgccaaga attgtagggc cccacggaag aagggctgct ggaaatgcgg aaaagagggc 1260 caccagatga aggactgcac agagaggcag gccaacttcc tgggaaaaat ctggccctct 1320 cacaagggga ggcccggaaa ctttctgcag tccaggcccg agccaaccgc cccaccagag 1380 gaatctttcc gcttcgggga ggaaacaaca accccctccc agaaacagga gccaatcgat 1440 aaggagctgt accccctggc ctctctgcgg tccctgttcg gaaacgaccc aagctctcag 1500 gggcgcgcct aa 1512 <210> 2 <211> 2949 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence for Flex fused HIV B subtype consensus Env (Flex/Env) <400> 2 atggacgcca tgaagcgcgg cctgtgctgc gtgctgctgc tgtgcggcgc cgtgtttgtg 60 agccccagca tcacccagga ctgctccttc caacacagcc ccatctcctc cgacttcgct 120 gtcaaaatcc gtgagctgtc tgactacctg cttcaagatt acccagtcac cgtggcctcc 180 aacctgcagg acgaggagct ctgcgggggc ctctggcggc tggtcctggc acagcgctgg 240 atggagcggc tcaagactgt cgctgggtcc aagatgcaag gnttgctgga gcgcgtgaac 300 acggagatac actttgtcac caaatgtgcc tttcagcccc cccccagctg tcttcgcttc 360 gtccagacca acatctcccg cctcctgcag gagacctccg agcagctggt ggcgctgaag 420 ccctggatca ctcgccagaa cttctcccgg tgcctggagc tgcagtgtca gcccgactcc 480 tcaaccctgc cacccccatg gagtccccgg cccctggagg ccacagcccc gacagccccg 540 ggcggcggca gcggcgatgc tagcgctgcc gagaaactgt gggtgacagt gtactatggc 600 gtccctgtct ggaaggaggc cacaaccact ctgttctgtg cttcagatgc caaggcctac 660 gacacagagg tccataatgt gtgggcaaca catgcctgcg tgccaaccga ccctaacccc 720 caggaggtgg tgctcgagaa cgtgaccgag aatttcaaca tgtggaagaa caacatggtg 780 gagcagatgc acgaggatat catctctctg tgggaccaga gcctgaagcc ctgcgtgaag 840 ctgacacccc tctgcgtcac cctgaattgt acagatctga tgaatgctac caacacaaac 900 actacaatta tctaccggtg gcggggagag atcaagaatt gctctttcaa catcaccact 960 agcatccggg ataaggtgca gaaagaatac gctctgttct ataaactgga cgtggtgcct 1020 atcgacaatg ataacactag ctaccgactg atctcctgta atacctctgt catcacccag 1080 gcttgcccta aagtgtcctt cgaaccaatt ccaattcact actgtgctcc cgccgggttc 1140 gcaattctga agtgtaacga taagaagttc aatggcacag gcccttgcac aaacgtgtca 1200 accgtgcagt gtacccacgg gatccgaccc gtggtgagca cccagctgct cctcaacgga 1260 agtctcgccg aagaggaggt ggtcatcagg tccgagaact tcactgacaa cgccaagacc 1320 atcattgtcc agctgaacga gtccgtggaa attaattgca cacggcctaa caacaacaca 1380 cgaaagagca tccacatcgg acccggacgc gcattctaca ctactggtga gatcatcggg 1440 gatatcagac aggcccattg caacatcagc cgcgccaaat ggaacaacac cctgaaacag 1500 atcgtgaaaa aactgcgcga gcagttcggt aacaagacaa tcgtgttcaa tcagagcagt 1560 gggggcgacc ctgagattgt gatgcacagc tttaactgtg ggggagaatt cttttattgt 1620 aataccaccc agctgttcaa cagcacctgg aacggtacat ggaacaacac cgagggcaac 1680 attaccctgc cctgtaggat caagcagatc atcaatatgt ggcaggaggt gggcaaggca 1740 atgtacgcac caccaatcag aggccagatt cgctgttcat caaacatcac tgggctgctg 1800 ctcacccgcg acggaggcaa caacgagact gaaatcttca ggccaggcgg cggcgacatg 1860 cgagacaatt ggagatcaga gctctacaag tacaaggtgg tgaagatcga acccctcgga 1920 gtcgcaccaa ctaaggccaa aagaagagtg gtgcagagag agaagcgagc agtcggtatc 1980 ggcgctatgt tcctggggtt tctgggcgcc gccggatcca ccatgggtgc tgcttccatg 2040 acactcacag tccaggcccg gcagctgctc tctggtattg tgcagcagca gaataacctg 2100 ctgagagcca tcgaagctca gcagcatctg ctccagctca ccgtgtgggg gattaagcag 2160 ctgcaggctc gggtgctggc tgtcgaacgc tacctgaagg atcagcagct gctgggcatc 2220 tggggatgta gcggaaaact catttgtacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggtcc 2280 aacaagtctc tggacgagat ctgggacaac atgacttgga tggagtggga gagagagatt 2340 gacaattata cttcactgat ctataccctg attgaagagt cccagaacca gcaggagaag 2400 aacgagcagg aactgctcga gctggataag tgggcttcac tgtggaactg gttcgacatc 2460 accaattggc tctggtacat caagaacagg gtgcgacagg gctactcccc cctgtctttc 2520 cagacacggc tcccagcccc tagggggcct gacaggcctg agggaatcga ggaggaaggg 2580 ggagaacgag atcgcgatag gtctggcaga ctggtcgacg gctttctggc cctgatttgg 2640 gacgacctgc ggagcctgtg tctgtttagc taccacaggc tgcgggatct gctgctcatc 2700 gtgacccgaa tcgtggagct gctgggacgg agagggtggg aagtcctgaa atattggtgg 2760 aacctcctgc agtattggag ccaggagctg aaaaattcag ctgtgtccct gctgaacgcc 2820 acagcaatcg cagtcgccga gggcactgat cgcgtgattg aggtggtgca gcgggcatgt 2880 cgggctatcc tgcacatccc ccgccgaatt cggcagggcc tcgaacgcgc actgctcggg 2940 cgcgcctaa 2949 <210> 3 <211> 2925 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence for HIV B subtype consensus Pol (Pol) <400> 3 atggacgcca tgaagcgggg actctgttgc gtgttgcttc tttgcggcgc tgtgtttgtc 60 agtcccagcg ctcctcagat aacactttgg cagagacccc tggtcaccat aaagattgga 120 ggtcagctca aggaagcctt gctggacact ggcgcagatg atacagtgct ggaggaaatg 180 aacctgcccg gccggtggaa gcctaaaatg atcggaggta ttggcggctt tatcaaggtg 240 cgccagtacg atcaaattct gatcgaaata tgcggacata aagccatcgg cacagttctg 300 gtgggaccaa cacctgtgaa tatcattgga cgcaacctgc tgacacagat cggctgtact 360 ctcaatttcc ctatctcacc catagagact gtgcccgtca aactgaaacc tggcatggat 420 ggtcccaaag tgaagcagtg gccacttacg gaggagaaga ttaaggccct ggttgaaatc 480 tgcactgaaa tggagaagga aggcaagata agtaagattg gaccggaaaa tccttataac 540 acaccagttt ttgctattaa gaagaaagat tcaaccaaat ggcgaaaact tgtggatttc 600 cgagaactca ataagcggac tcaagacttc tgggaggtgc agctcggcat tcctcaccca 660 gccgggttga agaagaagaa gagcgtgact gttctggatg ttggcgacgc ctacttctct 720 gtcccccttg acaaagattt caggaaatac actgcattca ccatcccatc cattaataat 780 gagacgcctg gtattcgcta ccagtataac gtcctgccac agggttggaa aggcagtccc 840 gccatattcc agagtagtat gacaaagatc ctggagccat tcaggaagca aaaccccgat 900 atcgtcatat atcagtttat ggatgacttg tacgtcgggt cagatctgga aatcggccaa 960 catcgaacca agatcgagga gctgcggcag cacttgctgc gatgggggtt cacaactcca 1020 gacaagaaac accagaagga gcctcctttc ctgtggatgg gctacgaact gcacccggat 1080 aagtggaccg tgcagcccat tgtgctccct gagaaagata gctggactgt gaatgatatc 1140 caaaaactgg tggggaagtt gaattgggcc agccagatct acgctggcat caaggtgaag 1200 cagctctgca aacttctccg cggcaccaaa gccttgacgg aagtgattcc tctgacagag 1260 gaggccgagt tggagttggc cgaaaaccga gaaattctga aagaaccggt gcatggcgtg 1320 tactacgacc cgtctaaaga tctgatcgcc gagatccaga agcagggcca ggggcagtgg 1380 acatatcaaa tctatcaaga acctttcaag aaccttaaaa ctgggaagta cgcaaggatg 1440 cggggagcac acacaaatga tgtcaagcag ctgacagagg ccgtgcagaa gatcgccaca 1500 gagtccatag tgatctgggg aaaaaccccc aagtttaagc tccccatcca gaaggaaact 1560 tgggaagcct ggtggactga gtactggcag gccacttgga tacccgaatg ggagtttgtc 1620 aataccccgc ctctggtgaa attgtggtat cagctggaga aagaacccat tgtgggagca 1680 gagacgtttt acgttgacgg cgcagctaat agagagacaa aactgggcaa ggctggctac 1740 gttaccgacc gcggcaggca gaaagtggtg agcctgacag acacgaccaa ccagaaaacc 1800 gaactgcagg ctatccacct tgctttgcag gatagcggcc tcgaagtgaa tatcgttaca 1860 gactctcaat atgcactggg cattatccaa gcccaacctg ataaatctga gtccgaactg 1920 gtgtctcaaa ttattgagca gctgatcaaa aaagagaaag tctacctggc ttgggtcccc 1980 gcacacaaag ggatcggcgg gaatgagcaa gttgataaac tggtttccgc aggaatccgc 2040 aaggtgctgt ttctcgatgg aatagacaaa gcacaagaag aacacgagaa gtaccatagc 2100 aactggaggg ccatggctag cgactttaat cttccccctg tggttgctaa ggaaattgtt 2160 gcttcctgtg ataaatgcca gctgaaggga gaggctatgc atggccaggt ggactgtagc 2220 ccagggattt ggcaactcga ctgcactcat ctggagggga agattatctt ggttgcagtc 2280 cacgttgcct ccggctacat cgaagccgaa gtgattccag cagaaacggg gcaagagact 2340 gcttattttc tgctgaaact ggctggccgt tggcccgtca agaccatcca tacggacaac 2400 ggctcaaact tcacctcaac aaccgtgaag gccgcatgtt ggtgggccgg tatcaaacag 2460 gagtttggga tcccctacaa cccccagagc cagggggttg tgcagagcat gaacaaagag 2520 ttgaaaaaga ttatcggcca ggtgcgggat caggccgaac atctcaaaac tgcagtccaa 2580 atggcagttt ttatccataa cttcaagagg aaaggtggta ttggcgggta ctccgcaggt 2640 gagagaattg ttgatatcat cgcaacagat atccagacaa aagaattgca gaaacagatt 2700 acaaagatcc agaattttag ggtgtactat cgggattctc gagatcccct gtggaagggt 2760 cccgcaaaac tgttgtggaa aggagagggc gcagtggtca tccaggacaa ttcagacatt 2820 aaggtggtgc cacgcagaaa ggcaaaaatt atcagagact acgggaagca gatggctggc 2880 gatgattgcg tggctagtcg ccaggatgag gacgggcgcg cctaa 2925 <210> 4 <211> 2316 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence for Flex fused HIV B subtype consensus Reg (Flex/Reg) <400> 4 atggacgcca tgaagcgcgg cctgtgctgc gtgctgctgc tgtgcggcgc cgtgtttgtg 60 agccccagca tcacccagga ctgctccttc caacacagcc ccatctcctc cgacttcgct 120 gtcaaaatcc gtgagctgtc tgactacctg cttcaagatt acccagtcac cgtggcctcc 180 aacctgcagg acgaggagct ctgcgggggc ctctggcggc tggtcctggc acagcgctgg 240 atggagcggc tcaagactgt cgctgggtcc aagatgcaag gnttgctgga gcgcgtgaac 300 acggagatac actttgtcac caaatgtgcc tttcagcccc cccccagctg tcttcgcttc 360 gtccagacca acatctcccg cctcctgcag gagacctccg agcagctggt ggcgctgaag 420 ccctggatca ctcgccagaa cttctcccgg tgcctggagc tgcagtgtca gcccgactcc 480 tcaaccctgc cacccccatg gagtccccgg cccctggagg ccacagcccc gacagccccg 540 ggcggcggca gcggcgatgc tagcgctatg gctggacgct ctggggactc tgacgaggag 600 ctgctcaaga ccgtgcgcct gattaagttt ctgtaccagt ccaatcctcc tccatcccca 660 gagggcaccc ggcaggccag gagaaacagg cgacggcgct ggcgcgagcg ccagcggcag 720 atcaggagta tttccgagtg gattctgtcc acctacctgg gtcgcccagc cgagcccgtg 780 cctctgcagc tgcccccact cgagaggctg accctggact gcaatgaaga ctgtggcacc 840 tctgggaccc agggggtggg gagtccccag attctcgtgg aatccccagc agtgctcgaa 900 agcggtacta aggaaggagg cggatccggt atggaaccag tcgacccacg gctggaacct 960 tggaaacatc cagggagcca gcccaagaca gcctgtacaa actgttactg taagaaatgc 1020 tgcttccact gtcaggtgtg tttcattact aagggactgg gcatttctta tggcaggaag 1080 aagcggagac agaggagacg cgccccccag gactctcaga cccaccaggt gtccctgtcc 1140 aagcagcctg catcccagcc ccgaggggac ccaaccggcc caaaagagtc aaagaagaag 1200 gtcgagcggg aaactgaaac cgaccctgtg gatggggggg gatccggaat gggaggcaaa 1260 tggagcaaaa gaagcgtggt ggggtggccc actgtgaggg aacgcatgag aagagcagag 1320 cctgccgctg acggggtggg cgctgtcagt cgcgatctgg aaaagcatgg ggccattaca 1380 agcagcaaca cagctgctaa caacgcagac tgcgcttggc tcgaagcaca ggaggaagaa 1440 gaggtgggat tccccgtgag accccaggtc cccctgcgac ccatgacata taaaggtgca 1500 ctggatctgt cacactttct caaagagaag ggcggcctcg agggtctgat ctactcccag 1560 aaacgccagg atattctgga tctgtgggtg taccataccc agggatactt ccccggctgg 1620 cagaattaca cccctggtcc cgggattcga taccccctga cttttggctg gtgctttaaa 1680 ctggtgcccg tggagccaga aaaagtggag gaggcaaatg agggcgaaaa caatagcctc 1740 ctccacccaa tgagtctgca cggaatggat gatccagaaa gggaggtgct ggtgtggaaa 1800 tttgattccc gcctggcctt tcaccacatg gcccgcgagc tccaccccga gtactacaag 1860 gattgcggcg ggggatccgg tcgcgaacct tacaacgaat ggaccctgga ggctgtccgg 1920 cacttcccaa ggctgtggct gcacagcctc gacacatggg caggagtgga agcaatcatc 1980 cggattctgc agcagctgct gtttatcctg cagattctgg ccattgtcgc cctcgtggtg 2040 gctgccatta tcgctatcgt ggaatatagg aagatcctcc gccagcgacg aatcaggacc 2100 tggaagagcc tggtgaagca catgtacatc tccaggaaag ccaagggatg gttccacccc 2160 cgcatttcca gcgaagtgca tatccccctg ggagacgccc ggctggtcat ttggcacctg 2220 ggccaggggg tgtccattct cgccgatcag ctgatccatc tgtactataa gatcaagcct 2280 cctctgccat cagtgaccaa gctggggcgc gcctaa 2316 <210> 5 <211> 1404 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence for IL-7 hybrid Fc <400> 5 atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60 cctgtggcca gctccgactg cgacatcgag ggcaaggacg gcaagcagta cgagtccgtg 120 ctgatggtga gcatcgacca gctgctggac tccatgaagg agatcggctc caactgcctg 180 aacaacgagt tcaacttctt caagagacac atctgcgacg ccaacaagga gggcatgttc 240 ctgttcagag ccgccaggaa gctgagacag ttcctgaaga tgaactccac cggcgacttc 300 gacctgcacc tgctgaaggt gagcgagggc accaccatcc tgctgaactg caccggccag 360 gtgaagggca gaaagcccgc cgccctgggc gaggcccagc ctaccaagag cctggaggag 420 aacaagtccc tgaaggagca gaagaagctg aacgacctgt gcttcctgaa gaggctgctg 480 caggagatca agacctgctg gaacaagatc ctgatgggca ccaaggagca cgctagcgct 540 agcaagagca agaaggagat cttccgctgg cccgagagcc ccaaggccca ggccagcagc 600 gtgcccaccg cccagcccca ggccgagggc agcctggcca aggccaccac cgcccccgcc 660 accacccgca acaccggccg cggcggcgag gagaagaaga aggagaagga gaaggaggag 720 caggaggagc gcgagaccaa gacccccgag tgccccagcc acacccagcc cctgggcgtg 780 ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctgatgatca gccgcacccc cgaggtgacc 840 tgcgtggtcg tggatgtgag ccaggaagat cccgaagtgc agttcaactg gtacgtggat 900 ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagaag agcagttcaa ctccacctac 960 agagtggtga gcgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 1020 tgcaaggtgt ccaacaaagg cctgcccagc tccatcgaga agaccatcag caaagccaaa 1080 ggccagccca gagaacccca ggtgtacacc ctgcctccca gccaggaaga gatgaccaag 1140 aaccaggtgt ccctgacctg cctggtgaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1200 tgggaaagca acggccagcc cgagaacaat tacaagacaa cccctcccgt gctggatagc 1260 gatggcagct tctttctgta cagcagactg accgtggaca agagcagatg gcaggaaggc 1320 aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgaa gccctgcaca accactacac ccagaagagc 1380 ctgtccctga gcctgggcaa gtga 1404 <210> 6 <211> 503 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence for HIV B subtype consensus Gag <400> 6 Met Gly Ala Arg Ala Ser Val Leu Ser Gly Gly Glu Leu Asp Arg Trp 1 5 10 15 Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Lys Leu Lys 20 25 30 His Ile Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro 35 40 45 Gly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gln Ile Leu Gly Gln Leu 50 55 60 Gln Pro Ser Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn 65 70 75 80 Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Glu Val Lys Asp 85 90 95 Thr Lys Glu Ala Leu Glu Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys 100 105 110 Lys Lys Ala Gln Gln Ala Ala Ala Asp Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val 115 120 125 Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met Val His 130 135 140 Gln Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu 145 150 155 160 Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly 180 185 190 Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu 195 200 205 Ala Ala Glu Trp Asp Arg Leu His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala 210 215 220 Pro Gly Gln Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr 225 230 235 240 Ser Thr Leu Gln Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile 245 250 255 Pro Val Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys 260 265 270 Ile Val Arg Met Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Arg Gln Gly 275 280 285 Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu 290 295 300 Arg Ala Glu Gln Ala Ser Gln Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr 305 310 315 320 Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala 325 330 335 Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly 340 345 350 Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser 355 360 365 Gln Val Thr Asn Ser Ala Thr Ile Met Met Gln Arg Gly Asn Phe Arg 370 375 380 Asn Gln Arg Lys Thr Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His 385 390 395 400 Ile Ala Lys Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys 405 410 415 Gly Lys Glu Gly His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn 420 425 430 Phe Leu Gly Lys Ile Trp Pro Ser His Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe 435 440 445 Leu Gln Ser Arg Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Glu Glu Ser Phe Arg 450 455 460 Phe Gly Glu Glu Thr Thr Thr Pro Ser Gln Lys Gln Glu Pro Ile Asp 465 470 475 480 Lys Glu Leu Tyr Pro Leu Ala Ser Leu Arg Ser Leu Phe Gly Asn Asp 485 490 495 Pro Ser Ser Gln Gly Arg Ala 500 <210> 7 <211> 982 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence for Flex fused HIV B subtype consensus Env (Flex/Env) <400> 7 Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly 1 5 10 15 Ala Val Phe Val Ser Pro Ser Ile Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His 20 25 30 Ser Pro Ile Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys Ile Arg Glu Leu Ser Asp 35 40 45 Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp 50 55 60 Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp 65 70 75 80 Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu 85 90 95 Glu Arg Val Asn Thr Glu Ile His Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln 100 105 110 Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn Ile Ser Arg Leu 115 120 125 Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp Ile Thr 130 135 140 Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser 145 150 155 160 Ser Thr Leu Pro Pro Pro Trp Ser Pro Arg Pro Leu Glu Ala Thr Ala 165 170 175 Pro Thr Ala Pro Gly Gly Gly Ser Gly Asp Ala Ser Ala Ala Glu Lys 180 185 190 Leu Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys Glu Ala Thr 195 200 205 Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Asp Thr Glu Val 210 215 220 His Asn Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro 225 230 235 240 Gln Glu Val Val Leu Glu Asn Val Thr Glu Asn Phe Asn Met Trp Lys 245 250 255 Asn Asn Met Val Glu Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp Asp 260 265 270 Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu 275 280 285 Asn Cys Thr Asp Leu Met Asn Ala Thr Asn Thr Asn Thr Thr Ile Ile 290 295 300 Tyr Arg Trp Arg Gly Glu Ile Lys Asn Cys Ser Phe Asn Ile Thr Thr 305 310 315 320 Ser Ile Arg Asp Lys Val Gln Lys Glu Tyr Ala Leu Phe Tyr Lys Leu 325 330 335 Asp Val Val Pro Ile Asp Asn Asp Asn Thr Ser Tyr Arg Leu Ile Ser 340 345 350 Cys Asn Thr Ser Val Ile Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Ser Phe Glu 355 360 365 Pro Ile Pro Ile His Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Phe Ala Ile Leu Lys 370 375 380 Cys Asn Asp Lys Lys Phe Asn Gly Thr Gly Pro Cys Thr Asn Val Ser 385 390 395 400 Thr Val Gln Cys Thr His Gly Ile Arg Pro Val Val Ser Thr Gln Leu 405 410 415 Leu Leu Asn Gly Ser Leu Ala Glu Glu Glu Val Val Ile Arg Ser Glu 420 425 430 Asn Phe Thr Asp Asn Ala Lys Thr Ile Ile Val Gln Leu Asn Glu Ser 435 440 445 Val Glu Ile Asn Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile 450 455 460 His Ile Gly Pro Gly Arg Ala Phe Tyr Thr Thr Gly Glu Ile Ile Gly 465 470 475 480 Asp Ile Arg Gln Ala His Cys Asn Ile Ser Arg Ala Lys Trp Asn Asn 485 490 495 Thr Leu Lys Gln Ile Val Lys Lys Leu Arg Glu Gln Phe Gly Asn Lys 500 505 510 Thr Ile Val Phe Asn Gln Ser Ser Gly Gly Asp Pro Glu Ile Val Met 515 520 525 His Ser Phe Asn Cys Gly Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Thr Gln 530 535 540 Leu Phe Asn Ser Thr Trp Asn Gly Thr Trp Asn Asn Thr Glu Gly Asn 545 550 555 560 Ile Thr Leu Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile Asn Met Trp Gln Glu 565 570 575 Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala Pro Pro Ile Arg Gly Gln Ile Arg Cys 580 585 590 Ser Ser Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Asp Gly Gly Asn Asn 595 600 605 Glu Thr Glu Ile Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp Met Arg Asp Asn Trp 610 615 620 Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Lys Ile Glu Pro Leu Gly 625 630 635 640 Val Ala Pro Thr Lys Ala Lys Arg Arg Val Val Gln Arg Glu Lys Arg 645 650 655 Ala Val Gly Ile Gly Ala Met Phe Leu Gly Phe Leu Gly Ala Ala Gly 660 665 670 Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Met Thr Leu Thr Val Gln Ala Arg Gln 675 680 685 Leu Leu Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln Asn Asn Leu Leu Arg Ala Ile 690 695 700 Glu Ala Gln Gln His Leu Leu Gln Leu Thr Val Trp Gly Ile Lys Gln 705 710 715 720 Leu Gln Ala Arg Val Leu Ala Val Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gln Gln 725 730 735 Leu Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Ile Cys Thr Thr Ala 740 745 750 Val Pro Trp Asn Ala Ser Trp Ser Asn Lys Ser Leu Asp Glu Ile Trp 755 760 765 Asp Asn Met Thr Trp Met Glu Trp Glu Arg Glu Ile Asp Asn Tyr Thr 770 775 780 Ser Leu Ile Tyr Thr Leu Ile Glu Glu Ser Gln Asn Gln Gln Glu Lys 785 790 795 800 Asn Glu Gln Glu Leu Leu Glu Leu Asp Lys Trp Ala Ser Leu Trp Asn 805 810 815 Trp Phe Asp Ile Thr Asn Trp Leu Trp Tyr Ile Lys Asn Arg Val Arg 820 825 830 Gln Gly Tyr Ser Pro Leu Ser Phe Gln Thr Arg Leu Pro Ala Pro Arg 835 840 845 Gly Pro Asp Arg Pro Glu Gly Ile Glu Glu Glu Gly Gly Glu Arg Asp 850 855 860 Arg Asp Arg Ser Gly Arg Leu Val Asp Gly Phe Leu Ala Leu Ile Trp 865 870 875 880 Asp Asp Leu Arg Ser Leu Cys Leu Phe Ser Tyr His Arg Leu Arg Asp 885 890 895 Leu Leu Leu Ile Val Thr Arg Ile Val Glu Leu Leu Gly Arg Arg Gly 900 905 910 Trp Glu Val Leu Lys Tyr Trp Trp Asn Leu Leu Gln Tyr Trp Ser Gln 915 920 925 Glu Leu Lys Asn Ser Ala Val Ser Leu Leu Asn Ala Thr Ala Ile Ala 930 935 940 Val Ala Glu Gly Thr Asp Arg Val Ile Glu Val Val Gln Arg Ala Cys 945 950 955 960 Arg Ala Ile Leu His Ile Pro Arg Arg Ile Arg Gln Gly Leu Glu Arg 965 970 975 Ala Leu Leu Gly Arg Ala 980 <210> 8 <211> 974 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence for HIV B subtype consensus Pol(Pol) <400> 8 Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly 1 5 10 15 Ala Val Phe Val Ser Pro Ser Ala Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg 20 25 30 Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu Lys Glu Ala Leu Leu 35 40 45 Asp Thr Gly Ala Asp Asp Thr Val Leu Glu Glu Met Asn Leu Pro Gly 50 55 60 Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys Val 65 70 75 80 Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu Ile Glu Ile Cys Gly His Lys Ala Ile 85 90 95 Gly Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Val Asn Ile Ile Gly Arg Asn 100 105 110 Leu Leu Thr Gln Ile Gly Cys Thr Leu Asn Phe Pro Ile Ser Pro Ile 115 120 125 Glu Thr Val Pro Val Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys Val 130 135 140 Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val Glu Ile 145 150 155 160 Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro Glu 165 170 175 Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr Gln 195 200 205 Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys 210 215 220 Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser 225 230 235 240 Val Pro Leu Asp Lys Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro 245 250 255 Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu 260 265 270 Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met Thr 275 280 285 Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr 290 295 300 Gln Phe Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln 305 310 315 320 His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg Trp Gly 325 330 335 Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu Trp 340 345 350 Met Gly Tyr Glu Leu His Pro Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro Ile Val 355 360 365 Leu Pro Glu Lys Asp Ser Trp Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys Leu Val 370 375 380 Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser Gln Ile Tyr Ala Gly Ile Lys Val Lys 385 390 395 400 Gln Leu Cys Lys Leu Leu Arg Gly Thr Lys Ala Leu Thr Glu Val Ile 405 410 415 Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile 420 425 430 Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu 435 440 445 Ile Ala Glu Ile Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln Trp Thr Tyr Gln Ile 450 455 460 Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala Arg Met 465 470 475 480 Arg Gly Ala His Thr Asn Asp Val Lys Gln Leu Thr Glu Ala Val Gln 485 490 495 Lys Ile Ala Thr Glu Ser Ile Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro Lys Phe 500 505 510 Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu Thr Trp Glu Ala Trp Trp Thr Glu Tyr 515 520 525 Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr Pro Pro 530 535 540 Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln Leu Glu Lys Glu Pro Ile Val Gly Ala 545 550 555 560 Glu Thr Phe Tyr Val Asp Gly Ala Ala Asn Arg Glu Thr Lys Leu Gly 565 570 575 Lys Ala Gly Tyr Val Thr Asp Arg Gly Arg Gln Lys Val Val Ser Leu 580 585 590 Thr Asp Thr Thr Asn Gln Lys Thr Glu Leu Gln Ala Ile His Leu Ala 595 600 605 Leu Gln Asp Ser Gly Leu Glu Val Asn Ile Val Thr Asp Ser Gln Tyr 610 615 620 Ala Leu Gly Ile Ile Gln Ala Gln Pro Asp Lys Ser Glu Ser Glu Leu 625 630 635 640 Val Ser Gln Ile Ile Glu Gln Leu Ile Lys Lys Glu Lys Val Tyr Leu 645 650 655 Ala Trp Val Pro Ala His Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Gln Val Asp 660 665 670 Lys Leu Val Ser Ala Gly Ile Arg Lys Val Leu Phe Leu Asp Gly Ile 675 680 685 Asp Lys Ala Gln Glu Glu His Glu Lys Tyr His Ser Asn Trp Arg Ala 690 695 700 Met Ala Ser Asp Phe Asn Leu Pro Pro Val Val Ala Lys Glu Ile Val 705 710 715 720 Ala Ser Cys Asp Lys Cys Gln Leu Lys Gly Glu Ala Met His Gly Gln 725 730 735 Val Asp Cys Ser Pro Gly Ile Trp Gln Leu Asp Cys Thr His Leu Glu 740 745 750 Gly Lys Ile Ile Leu Val Ala Val His Val Ala Ser Gly Tyr Ile Glu 755 760 765 Ala Glu Val Ile Pro Ala Glu Thr Gly Gln Glu Thr Ala Tyr Phe Leu 770 775 780 Leu Lys Leu Ala Gly Arg Trp Pro Val Lys Thr Ile His Thr Asp Asn 785 790 795 800 Gly Ser Asn Phe Thr Ser Thr Thr Val Lys Ala Ala Cys Trp Trp Ala 805 810 815 Gly Ile Lys Gln Glu Phe Gly Ile Pro Tyr Asn Pro Gln Ser Gln Gly 820 825 830 Val Val Gln Ser Met Asn Lys Glu Leu Lys Lys Ile Ile Gly Gln Val 835 840 845 Arg Asp Gln Ala Glu His Leu Lys Thr Ala Val Gln Met Ala Val Phe 850 855 860 Ile His Asn Phe Lys Arg Lys Gly Gly Ile Gly Gly Tyr Ser Ala Gly 865 870 875 880 Glu Arg Ile Val Asp Ile Ile Ala Thr Asp Ile Gln Thr Lys Glu Leu 885 890 895 Gln Lys Gln Ile Thr Lys Ile Gln Asn Phe Arg Val Tyr Tyr Arg Asp 900 905 910 Ser Arg Asp Pro Leu Trp Lys Gly Pro Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly 915 920 925 Glu Gly Ala Val Val Ile Gln Asp Asn Ser Asp Ile Lys Val Val Pro 930 935 940 Arg Arg Lys Ala Lys Ile Ile Arg Asp Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly 945 950 955 960 Asp Asp Cys Val Ala Ser Arg Gln Asp Glu Asp Gly Arg Ala 965 970 <210> 9 <211> 771 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence for Flex fused HIV B subtype consensus Reg (Flex/Reg) <400> 9 Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly 1 5 10 15 Ala Val Phe Val Ser Pro Ser Ile Thr Gln Asp Cys Ser Phe Gln His 20 25 30 Ser Pro Ile Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys Ile Arg Glu Leu Ser Asp 35 40 45 Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu Gln Asp 50 55 60 Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln Arg Trp 65 70 75 80 Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly Leu Leu 85 90 95 Glu Arg Val Asn Thr Glu Ile His Phe Val Thr Lys Cys Ala Phe Gln 100 105 110 Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn Ile Ser Arg Leu 115 120 125 Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp Ile Thr 130 135 140 Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro Asp Ser 145 150 155 160 Ser Thr Leu Pro Pro Pro Trp Ser Pro Arg Pro Leu Glu Ala Thr Ala 165 170 175 Pro Thr Ala Pro Gly Gly Gly Ser Gly Asp Ala Ser Ala Met Ala Gly 180 185 190 Arg Ser Gly Asp Ser Asp Glu Glu Leu Leu Lys Thr Val Arg Leu Ile 195 200 205 Lys Phe Leu Tyr Gln Ser Asn Pro Pro Pro Ser Pro Glu Gly Thr Arg 210 215 220 Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Arg Trp Arg Glu Arg Gln Arg Gln 225 230 235 240 Ile Arg Ser Ile Ser Glu Trp Ile Leu Ser Thr Tyr Leu Gly Arg Pro 245 250 255 Ala Glu Pro Val Pro Leu Gln Leu Pro Pro Leu Glu Arg Leu Thr Leu 260 265 270 Asp Cys Asn Glu Asp Cys Gly Thr Ser Gly Thr Gln Gly Val Gly Ser 275 280 285 Pro Gln Ile Leu Val Glu Ser Pro Ala Val Leu Glu Ser Gly Thr Lys 290 295 300 Glu Gly Gly Gly Ser Gly Met Glu Pro Val Asp Pro Arg Leu Glu Pro 305 310 315 320 Trp Lys His Pro Gly Ser Gln Pro Lys Thr Ala Cys Thr Asn Cys Tyr 325 330 335 Cys Lys Lys Cys Cys Phe His Cys Gln Val Cys Phe Ile Thr Lys Gly 340 345 350 Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala 355 360 365 Pro Gln Asp Ser Gln Thr His Gln Val Ser Leu Ser Lys Gln Pro Ala 370 375 380 Ser Gln Pro Arg Gly Asp Pro Thr Gly Pro Lys Glu Ser Lys Lys Lys 385 390 395 400 Val Glu Arg Glu Thr Glu Thr Asp Pro Val Asp Gly Gly Gly Ser Gly 405 410 415 Met Gly Gly Lys Trp Ser Lys Arg Ser Val Val Gly Trp Pro Thr Val 420 425 430 Arg Glu Arg Met Arg Arg Ala Glu Pro Ala Ala Asp Gly Val Gly Ala 435 440 445 Val Ser Arg Asp Leu Glu Lys His Gly Ala Ile Thr Ser Ser Asn Thr 450 455 460 Ala Ala Asn Asn Ala Asp Cys Ala Trp Leu Glu Ala Gln Glu Glu Glu 465 470 475 480 Glu Val Gly Phe Pro Val Arg Pro Gln Val Pro Leu Arg Pro Met Thr 485 490 495 Tyr Lys Gly Ala Leu Asp Leu Ser His Phe Leu Lys Glu Lys Gly Gly 500 505 510 Leu Glu Gly Leu Ile Tyr Ser Gln Lys Arg Gln Asp Ile Leu Asp Leu 515 520 525 Trp Val Tyr His Thr Gln Gly Tyr Phe Pro Gly Trp Gln Asn Tyr Thr 530 535 540 Pro Gly Pro Gly Ile Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Trp Cys Phe Lys 545 550 555 560 Leu Val Pro Val Glu Pro Glu Lys Val Glu Glu Ala Asn Glu Gly Glu 565 570 575 Asn Asn Ser Leu Leu His Pro Met Ser Leu His Gly Met Asp Asp Pro 580 585 590 Glu Arg Glu Val Leu Val Trp Lys Phe Asp Ser Arg Leu Ala Phe His 595 600 605 His Met Ala Arg Glu Leu His Pro Glu Tyr Tyr Lys Asp Cys Gly Gly 610 615 620 Gly Ser Gly Arg Glu Pro Tyr Asn Glu Trp Thr Leu Glu Ala Val Arg 625 630 635 640 His Phe Pro Arg Leu Trp Leu His Ser Leu Asp Thr Trp Ala Gly Val 645 650 655 Glu Ala Ile Ile Arg Ile Leu Gln Gln Leu Leu Phe Ile Leu Gln Ile 660 665 670 Leu Ala Ile Val Ala Leu Val Val Ala Ala Ile Ile Ala Ile Val Glu 675 680 685 Tyr Arg Lys Ile Leu Arg Gln Arg Arg Ile Arg Thr Trp Lys Ser Leu 690 695 700 Val Lys His Met Tyr Ile Ser Arg Lys Ala Lys Gly Trp Phe His Pro 705 710 715 720 Arg Ile Ser Ser Glu Val His Ile Pro Leu Gly Asp Ala Arg Leu Val 725 730 735 Ile Trp His Leu Gly Gln Gly Val Ser Ile Leu Ala Asp Gln Leu Ile 740 745 750 His Leu Tyr Tyr Lys Ile Lys Pro Pro Leu Pro Ser Val Thr Lys Leu 755 760 765 Gly Arg Ala 770 <210> 10 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence for IL-7 hybrid Fc <400> 10 Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile 1 5 10 15 Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu 35 40 45 Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe 50 55 60 Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe 65 70 75 80 Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser 85 90 95 Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr 100 105 110 Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala 115 120 125 Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu 130 135 140 Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu 145 150 155 160 Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu 165 170 175 His Ala Ser Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu Ile Phe Arg Trp Pro Glu 180 185 190 Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala Gln Pro Gln Ala 195 200 205 Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala Thr Thr Arg Asn 210 215 220 Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu 225 230 235 240 Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln 245 250 255 Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln 275 280 285 Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile 340 345 350 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 355 360 365 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 370 375 380 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 385 390 395 400 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val 420 425 430 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Gly Lys 465

Claims (16)

1. HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물로서, 상기 조성물은 HIV B형의 Gag, Env, Pol 항원 유전자 및 조절단백질 결합항원(Reg) 유전자를 각각 포함하는 발현 벡터 또는 재조합 바이러스 벡터를 포함하되, 상기 Env, Pol 항원 및 Reg 유전자의 각 N 말단에는 tissue plasminogen activator(tPA)의 신호서열이 연결되고, 상기 Env 및 Reg 유전자의 tPA 신호서열과 상기 각 유전자의 N 말단 사이에는 flt-3 ligand의 세포 외 부분(Flex)이 연결되며, 상기 Gag 및 Env 유전자는 HIV B형의 컨센서스 아미노산 서열을 코딩하고 포유류에서의 발현율을 높이도록 코돈 변형된 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, Pol 항원 유전자는 HIV B형의 컨센서스 아미노산 서열을 코딩하고 포유류에서의 발현율을 높이도록 코돈 변형된 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, Env 항원 유전자는 transmembrane region이 제거된 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
4. 제 2 항에 있어서, Pol 항원 유전자는 역전사 효소(reverse transcriptase)의 효소 활성 제거를 위해 역전사 효소의 아미노산 서열 기준 183번째 아미노산인 Tyrosine을 Phenylalanine으로 치환한 것을 암호화하는 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
5. 제 2 항에 있어서, Pol 항원 유전자는 인티그라제(integrase)의 효소 활성 제거를 위해 인티그라제 아미노산 서열 기준 152번째 아미노산인 Glutamic acid를 Aspartic acid로 치환한 것을 암호화하는 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
6. 제 2항에 있어서, Pol 항원 유전자는 단백질 분해 효소(protease)의 효소 활성 약화를 위해 단백질 분해 효소 아미노산 서열 기준 26번째 아미노산인 Threonine을 Serine으로 치환한 것을 암호화 하는 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
7. 제 1 항에 있어서, Reg 유전자는 5‘ 말단으로부터 3’ 말단 쪽으로 Flex 의 C-말 단에 연결된 rev, tat 및 nef의 조절단백질 유전자 및 vif, vpx 및 vpu의 사람 내 항원 인자(epi)가 결합된 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
8. 제 7 항에 있어서, Reg 유전자는 nef 아미노산 서열 기준 123번째 아미노산인 Aspartic acid가 Glycine으로 치환된 것을 암호화하는 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
9. 제 1 항에 있어서, Gag 항원 유전자는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
10. 제 1 항에 있어서, Env 항원 유전자는 서열번호 2의 염기서열을 가지는 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
11. 제 1 항에 있어서, Pol 항원 유전자는 서열번호 3의 염기서열을 가지는 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
12. 제 1 항에 있어서, Reg 유전자는 서열번호 4의 염기서열을 가지는 것인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
13. 제 1 항에 있어서, 상기 재조합 바이러스 벡터가 재조합 아데노 바이러스 벡터인 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.
14. 제 1 항에 있어서, 상기 발현 벡터가 pGX27 벡터인 백신 조성물.
15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 면역증강제로서 IL-7-Fc를 코딩하는 핵산을 더 포함하는 백신 조성물.
16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에서 기술된 발현 벡터에 의해 발현되는 폴리펩티드를 포함하는 HIV의 치료 또는 예방을 위한 백신 조성물.

Images