JPH07501052A

JPH07501052A - ウイルスエンベロープタンパク質と糖タンパク質の中和エピトープに相当するペプチドとの間の相乗作用によるウイルス感染に対する防御の誘発

Info

Publication number: JPH07501052A
Application number: JP5508136A
Authority: JP
Inventors: マール，ジラード
Original assignee: インスティチュート・パスツール
Priority date: 1991-10-28
Filing date: 1992-10-28
Publication date: 1995-02-02
Also published as: EP0613378A1; AU2800392A; WO1993008836A1; CA2122263A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ウィルスエンベロープタンパク質と糖タンパク質の中和エピトープに相当するペプチドとの間の相乗作用によるウィルス感染に対する防御の誘発皮慮公■ 本発明は、ブライミング（初回抗原刺激用）抗原、この場合にはＨＩＶ、ＳＩＶ又はその天然宿主においてエイズ（Ａよりｓ）を誘発することができるあらゆるレンチウィルスのようなウィルスからの、又はＨＴＬＶ−Ｉ型もしくはＨＴＬＶ −ｎ型レトロウィルスからの糖タンパク質と、遊離しているか又は担体分子に結合している合成オリゴペプチドからなり、オリゴペプチドがこの同じ糖タンパク質のための中和エピトープに相当する増幅組成物とを、同時に又は連続して利用することを包含する、予防接種方法に関する。本発明はまた、該方法における使用のための組成物にも関する。

ウィルスに対する有効なワクチン組成物は、ウィルスが休止細胞の染色体内の潜伏性プロウィルスの形で自分自身を保護したり、又は免疫系から手の届かないところにある細胞又は組織の区画の中に隠れ場所を見い出すことがないようにするため、ウィルスの迅速な中和を生み出さな（ではならない。

五旦技止ＨＩＶの場合にはチンパンジーを、又ＳＩＶの場合はマカクを用いて行なわれたこれまでの実験から、ウィルスエンベロープ（外被）糖タンパク質単独の接種によっては充分な防御免疫応答は得られないということは明らかである。特に、ウィルスエンベロープ糖タンパク質には、感染に対する防御を提供するために充分なレベルの中和抗体は産生されない。

従って、当該技術分野においては、ウィルス感染を受ける可能性がある宿主においてウィルス感染に対する充分なレベルの中和抗体を誘発する方法に対する必要性が存在する。その上、当該技術分野においては、この方法において使用するための医薬組成物に対する必要性も存在する。

ル咀Ω皿丞本発明は、当該技術分野におけるこれらの必要性を満たす一助となるものである。本発明の１つの目的は、糖タンパク質を、エンベロープ糖タンパク質の配列から誘導され、ウィルス中和エピトープに対応する、すなわちそれらが投与される宿主における中和抗体の産生に関与するアミノ酸配列に対応する、少なくとも１つのペプチドと、好ましくは異なる時点で１群のペプチドと１組合わせることによって、ウィルスの少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質の免疫原付を強化することにある。

従って、本発明は、宿主におけるウィルスのエンベロープ糖タンパク質の免疫原性を増強する方法及びこの方法で使用するための組成物を提供する。この方法は、ウィルスの少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質、及びエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少な（とも１つのペプチドを、宿主に投与する段階を含んでいる。このペプチドは少なくとも１つのウィルス中和エピトープを含んでいる。エンベロープ糖タンパク質及びペプチドは、宿主において中和抗体を誘発するのに充分な量で投与される。

本発明は、一定のウィルスのエンベロープ糖タンパク質の免疫原性を増強するための組成物であって、該組成物が同時、個別又は逐次的に使用するための組合わせられた調製物として、（Ａ）ウィルスの少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質、又はこの糖タンパク質の少な（とも５０アミノ酸のフラグメント、及び（Ｂ）エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少なくとも１つのペプチドを含むこと、該ペプチドが少なくとも１つのウィルス中和エピトープを含むこと、及びエンベロープ糖タンパク質とペプチドとが宿主において中和抗体を誘発するのに充分な量で投与されることを特徴とする組成物を提供する。

本発明において、「組成物」という語は、成分（この場合、エンベロープ糖タンパク質及びエンベロープ糖タンパク質から誘導された単数もしくは複数のペプチド）が混合物の形を呈すること又は並んだ形を呈することができ、従って宿主に対して同時に、個別に又は間隔をおいて適用することができる、組合わせられた調製物を含むことを意図している。例えば、組成物中に存在するペプチドは、エンベロープ糖タンパク質によって開始（ブライミング）される免疫原性反応を追加免疫するため逐次投与されるべ（、・その他の成分から分離して維持することができる。

好ましい一実施態様においては、本発明は、エンベロープ糖タンパク質が、その投与を受ける宿主における中和抗体の誘発を開始させるのに充分な量で存在し、少なくとも１つのペプチドが、その投与を受ける宿主における持続性中和抗体の誘発を増強するのに充分な量で存在することを条件として、上述のエンベロープ糖タンパク質及びペプチドを含む組成物を提供している。

従って、本発明は、中和抗体を誘発するべ（宿主に対してウィルスのエンベロープ糖タンパク質を投与した場合、このエンベロープ糖タンパク質の免疫原性を増強するための上述のペプチドのうちの少なくとも１つの用途に関する。

本発明の組成物は、免疫療法薬剤の調製のために使用しつる。この場合、組成物は、中和抗体のレベルを増大させ、ひいてはウィルスの制御を可能にするべく、血清陽性者に対して投与される。

複数の方法が、Ｊ、　５ａｌｋによりｒ　４　＠Ｃｏ１１ｏｑｕｅ　ｄｅｓ　ＣｅｎｔＧａｒｄｅｓ−ヒトＡＩＤＳ及び関連する動物疾患のレトロウィルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ＡＩＤＳ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ａｎｉｍａｌ　ｄｉｓｅａｓｅｓ）−Ｅｄ、　Ｍ、　Ｇｉｒａｒｄ、　Ｌ、　Ｖａｌｅｔｔｅ−Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　Ｍｅｒｉｅｕｘ　１９９０　ｐ　２７：３−２７３」及びｒＮａｔｕｒｅ　１９８９．３２７巻、　ｐ　４７３−４７６　Ｊの中に記載されている。

本発明は、同様に、ウィルスによる感染に対して宿主に予防接種を行なうための組成物をも提供する。

この組成物は、エンベロープ糖タンパク質が投与される宿主における予防接種の初回抗原投与に充分な量で、ウィルスの少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質を含む。この組成物は、エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少な（とも１つのペプチドをも含む。このペプチドは、糖タンパク質の少なくとも１つのウィルス中和エピトープを含む。この組成物は、宿主において持続性中和抗体の誘発を増強するのに充分な量でペプチドを含む。

上述の組成物のワクチンとしての用途に関する本発明の記載は、記載された手段が中和抗体の産生の増強を可能にすることを条件として、この組成物の免疫療法薬剤としての用途にもあてはめることができる。

ペプチド及びエンベロープ糖タンパク質は、非共有結合的な物理的組合せによって、又は共有結合的な化学的結合によって、それらが相互作用できるようにする条件下で、組合わせることができる。

代替的には、本発明の好ましい一実施態様においては、初回抗原投与予防接種は、エンベロープ糖タンパク質の注射、そしてそれに続（中和エピトープに対応する免疫原性ペプチドの注射による防御免疫の増強によって達成される。

免疫された３匹のチンパンジーのうち２匹は、ウィルス感染に対して良好に防御され、３番目の動物においては、本発明の組成物及び方法を用いて長い間ウィルスは抑制された。これらの結果は、本発明が、免疫を通してＨＩＶ−１に対する防御を惹起することを可能にするということを立証している。

区匣立鼠単皇韮朋本発明を、以下の図を参照しながら、さらに詳細に記載する二面１は、チンパンジーＦＵＮＦＡＣＥ　（Ｃ−３３９）及び対照（Ｃ−５１９）における、Ｅ　Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａ　（Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍｓキット）により測定した抗ＨＩＶ抗体レベルを示す。結果は、血清ＥＬＩ　ＳＡ力価（１：陽性応答を与える希釈度）と時間の関係として示されている。図中の時間ゼロは、不活性化されたＨＩＶでの第１回の追加免疫の日に相当する。動物は７０週目に抗原投与を受けた（矢印）。

図２は、ＫＬＨ−ＢＲＵペプチドコンジュゲート（複合体）、の注射（矢印）に応答してのチンパンジーＦＵＮＦＡＣＥ　（黒丸）及びチンパンジーＲＯＢＥＲＴ　（白丸）における中和抗体レベルを示す。動物は、Ｏ１３及び１９週目（矢印）に接種を受け、２４週目に抗原投与を受けた。

図３は、チンパンジーＲＯＢＥＲＴ　（Ｃ−４３３）における、ＥＬＩＳＡにより測定した抗ＨＩＶ抗体レベルを示す。結果は、血清ＥＬＩ　ＳＡ力価（１：陽性応答を与える希釈度）と時間との関係として示されている。時間ゼロは、最初の抗原注射（ｇｐ１６０ｅｎｖ、ｐ２７ｎｅｆ、ｐ２３ｖｉｆ、及びｐ１８ｇａｇ）の日に相当する。動物は８４週目に抗原投与を受けた（矢印）。

図４は、時間１０（［、］）、及び遊離ペプチドの３回目の接種後２週目（〔〕〕及び５週目（◆）における、チンパンジーＪＯＪＯＴＯＯ（４９９）、ＩＲＡ　（１５１）及びＨＥＮＲＹＩＩ（５３１）の、血清希釈度の関数としてのＨＩＶ−Ｉ　Ｂ　ＲＵの中和を示す。

図５は、時間１０（［、］）及び遊離ペプチドの３回目の接種後（◆）のチンパンジーＪＯＪＯＴＯＯ（Ｃ−４９９）　におけ！血清希釈度の関数としてのＨＩＶ−Ｉ　ＢＲＵ　（破線曲線）及びＨＩｖ−Ｉ　ＡＲＶ−２＜実線的１１）　ｃ７）中和ヲ示ｔ。

図６は、チンパンジーＣ−３３９（Ａ）　、Ｃ−４３３（Ｂ）及びＣ−４９９（Ｃ）についての総ＨＩＶ−１特異抗体力価を示す。

示されている時点で、チンパンジーは、さまざまな免疫原の接種を受けるか（表１参照）、又はＨＩＶ−１での抗原投与を受けた。

力価は、ＨＩＶ−Ｉ　ＥＲＡキット（Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて陽性であった血清の最高希釈度の逆数として定義される。

図７は、ＨＩ　Ｖ−１抗原テノ免疫中（７）Ｃ−３３９、Ｃ−４３３及びＣ−４９９からの血清中の中和抗体力価を示す。力価は、特定の投薬を受けたことのないチンパンジーからの対照血清を用いて得られたものと比較した場合に、ＣＥＭ −３Ｓ細胞により形成されたシンシチウム（融合細胞）の数の９０％の減少を与えた血清の最高希釈度の逆数である［Ｎａｒａ、　Ｐ、Ｌ、、　Ｈａｔｃｈ、　Ｗ、Ｃ，、Ｄｕｎｌｏｐ、　Ｎ、Ｍ、。

Ｒｏｂｅｙ、　Ｗ、Ｇ、、　Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、Ｏ，、Ｇｏｎｄａ、　Ｍ、Ａ、　＆　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、　Ｐ、Ｊ。

（１９８７）　ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ、　Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ、　３．２８３−３０２３　。

図８は、ＨＩ　Ｖ−１を用いたチンパンジーＣ−３３９及びＣ−４３３の抗原投与後６力月目に得られたリンパ節組織及びＰＢＭＣからのＤＮＡのＰＣＲ分析を示す。

（Ａ）重複したプライマーセットを用いた２ラウンドのＰＣＨの後の増幅されたＨＩＶ配列の、臭化エチジウム染色したゲル。

ＨＩＶ特異的増幅フラグメントのサイズは１４１塩基対である。

レーンｌ、分子量マーカーとして、Ｈａ　ｅ　ＩＩ！で切断された０、５ｕｇ（７）ＯＸ１７４ＤＮＡ。

レーン２〜７．レーン２で３，０００個の分子から始めて、前の試料よりｌＯ倍少々いＸｂａＩで切断されたｐＨＸＢ２の分子を各々含む、感度についての陽性対照。各々の試料は、非感染の対照−ｆ−”／ハ”／シー、Ｃ−５１９から（７）ｌｕ！（７）ＤＮＡ　（１，５Ｘ１０’個の細胞中のＤＮＡの量）の存在下で増幅させた。１つの陰性対照試料（レーン１４）が同定され、非感染のチンパンジーの細１１２４　Ｄ　Ｎ　Ａの供給源として用いた；その他の全ての試料は、盲検法に付した。

Ｃ−４８７は、陽性対照として用いられた、ＨＩＶ−１に感染したチンパンジーであった。

レーン８〜１１、それぞれＣ−３３９、Ｃ−４８７、ｃ−４３及びＣ−Ｃ−５１９（７）ＰＢがらのＤＮＡ。

レーン１２〜１５、それぞれＣ−４８７、Ｃ−４３３、Ｃ−５１９及びＣ−３３９のリンパ節組織からのＤＮＡ。

（Ｂ）内部対照としてのβ−グロビン遺伝子の増幅された一部分の、臭化エチジウムで染色したゲル［５ｃｈａｒｆ、　Ｓ、Ｊ、、　Ｈｏｒｎ、　Ｇ、Ｔ、　＆Ｅｒ１ｉｃｈ、　Ｈ，Ａ、（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３３．１０７６− １０７８］。（Ｃ）ＰＣＲで増幅された配列のオリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション。

（Ａ）に示されているＰＣＲ反応産物を変性させ、増幅された配列の中で完全にアニールする［”Ｐ］標識されたプライマー５Ｋ１０２を用いてアニーリングした；この産物を、Ｋｗｏｋ及びＫｅｌｌｏｇｇに従ってポリアクリルアミドゲル電気泳動及びオートラジオグラフィの後に検査した〔にｗｏｋ、　Ｓ、　＆　Ｋｅｌｏｇｇ、　Ｄ、Ｅ、　（１９９０）、ｒＰＣＲプロトコール：方法及び応用の指針（ＰＣＲＰｒｏｔｏｃｏｌｓ　：　Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔ。

Ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）　Ｊ　、Ｉｎｎ１ｓ、　Ｍ、Ａ、、　Ｇｅ１ｆａｎｄ、　Ｄ、Ｈ，。

５ｎｉｎｓｋｙ　Ｊ、Ｊ、　＆　Ｗｈｉｔｅ　Ｔ、Ｊ、編（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｉｎｃｌ、　ＳａｎＤｉｅｇｏ、　ＣＡ）中、ｐ　３３７−３４７］。

図９は、チンパンジーＣ−４３３、Ｃ−３３９及びＣ−４９９の免疫及び抗原投与の後の特異的ＨＩＶ−１タンパク質に対する抗体のイムノプロット分析を示す。血清試料は、ｌ：２００に希釈し、市販のキット（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　Ｐａ５ｔｅｕｒ）を用いてテストした。図示されている試料について、血清は、抗原投与（矢印あり）の１力月前、及びその後４週間の間隔で収集した。ＨＩＶ −１タンパク質の分子量は、陽性対照血清について示されている。

図１Ｏは、本発明に従って処置したアカゲザル（Ｒｈｅｓｕｓ　ｍｏｎｋｅｙｓ）における抗ｇｐ１６０ＥＬＩｓＡ力価を示す。

図１１は、本発明に従って処置されたアカゲザルにおける抗Ｖ３　ＢＲＵ抗体力価を示す６図１２は、細胞から細胞への伝播の血清中和を示す。

図１３は、無細胞ＨＩＶの抗原投与後の、チンパンジーにおけるの抗体力価を示す。

図１４は、免疫スケジュールである。精製された組換え型ｇｐ１６０及びＰＮＤオリゴペプチド（ｖ３）を、ミョウバン、ＩＦＡ又は５ＡＦ−１のいずれかの存在下で、指示された時点に感染させた。

図１５は、ＥＬＩＳＡにより測定した３つのグループのサルにおける抗体応答の時間的経過（タイムコース）である。パネルＡ：抗ｇｐ１６０応答。パネルＢ：抗■３応答。グループＡ（０）、Ｂ　（［１）及びＣ（△）における幾何学的平均抗体力価を、表１及び２のデータから計算し、免疫の時間の関数としてプロットした。

図１６は、動物５７．５９（グループＢ）、６１及び６４（グループＣ）における中和抗体応答の時間的経過である。力価は、シンシチウム形成の５０％減少を与える血清の希釈度の逆数として表わされている。

図１７及び図１８は、抗ＰＮＤ　ＥＬＩＳＡ力価とＨＩＶ−１中和抗体力価との間の相関関係である。パネルＡ：５カ月での力価：バネルＢ：７カ月での力価。

ＯニゲループＡ；［］ニゲループＢ；△ニゲループＣ０日　の　の　、予防接種によりＨＩＶ感染に対してチンパンジーを防御しようとするこれまでの試みは、いくつかの異なるタイプのワクチン、すなわち合成ペプチド、ＨＩＶ抗原を発現する生きた組換え型ワクシニアウィルス（ＶＶ）、未変性又は組換え型ｇｐ１２０又はｇｐ１６０エンベロープ抗原、及び不活性化された完全ウィルスなどを使用したにもかかわらず、失敗に終わった。組換え型■ｖを用い、続いてホルマリン不活性化及びベータプロピオラクトン不活性化全ＨＩＶを用いて予め予防接種することによって、感染性ＨＩＶの抗原投与に対してチンパンジーを防御することの失敗が、これまでに報告されていた。

この失敗は、次の２つの考慮事項を導き出し、本アプローチはこれらの事項を基礎とするものである： ■、無細胞ＨＩＶでの感染に対する防御には、高レベルの中和抗体（Ａｂ）がおそらく必要とされる。中和ＡＢ又は抗体依存性細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）による根絶をウィルスが逃れた場合、ウィルスは、組込まれたプロウィルスとして及び／又は骨髄もしくは中枢神経系の細胞の感染により、容易に免疫系から隠された状態にとどまることができる。たとえ制限されたものであれ、ウィルスの複製は、中和を逸れる突然変異体（ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｅｓｃａｐｅｍｕｔａｎｔｓ）の早期出現を導く可能性がある。従って、抗原投与ウィルスの迅速な中和が、予防接種の成功にとっての鍵でありうる。

２．１９９０年までは、チンパンジーにおいてテストされた全てのワクチンによる中和Ａｂの誘発は、せいぜい並みのものであった。このことが、感染に対する動物の防御についてのそれらの失敗を説明しつる。従って、ワクチンは、効能あるものであるためには、これまで得られてきたものよりも高い中和Ａｂ力価を誘発しなければならない。

従って、さまざまな免疫原を用いた連続的免疫プロトコールを通して、チンパンジーにおいて可能なかぎり高い中和Ａｂ力価を惹起することがめられた。

Ｃ−３３９という１匹のチンパンジーを、最初、１ｍｇ）レオニルＭＤＰの濃度を用いて、５ＡＦ−１と混合したホルマリン及びベータープロピオラクトンで不活性化された全ＨＩＶ２５０μｇを４回（０力月目、１力月目、２力月目及び６力月目）注射して、免疫した。この動物は高いＨＩＶ　ＥＬＩＳＡ力価を示すようになり（カットオフが０．１のＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ　Ｐａ５ｔｅｕｒからのＥＬＡＶ　Ｉ　Ａキットを用いて１　：　２００．０００）、ウェスタンプロットにより、ｇｐｌ　６０、ｇｐ１２０及びｇｐ４１立旦ヱ、並びにｐ５５、ｐ４０、ｐ２５及びｐ１８１且１に対する強い反応性を示した。

その中和Ａｂ力価は、２つの異なる中和検定を用いてそれぞれ１：４００及びｌ：６４に達しな；第１の検定は、ＭＴ４細胞での免疫蛍光フォーカス形成の５０％阻害を記録し、第２の検定は、ＣＥＭ−３Ｓ細胞でのシンシチウム形成の９０％阻害を記録した。

よりストリンジェントな検定（新鮮なヒトＰＢＬにおける逆転写酵素の産生の１００％阻害）を用いると、中和Ａｂの最大力価は１：１６０で、これは追加免疫注射の直後に得られた。しかしながら、これらの力価は持続せず、急速により低いレベルへと低下した。

チンパンジーＣ−３３９の中和Ａｂ力価を増大させようとする試みにおいて、切断を防ぐためのｇｐ１２０／ｇｐ４１切断部位の部位特異的突然変異誘発による変更及び膜貫通ドメインの欠失を含むｇｐ１６０分子を発現するＶＶ−ｅｎｖ組換え体であるＶＶ−１１６３に感染したＢＨＫ−２１細胞培養の上清から精製された組換え型可溶性ｇｐ１６０ｅ旦ヱを用いて、この動物を反復的に追加免疫した。ワクシニアウィルスＶＶ−１１６３は、Ｋｉｅｎｙ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｇ：　２１９−２２６　（１９８ｇ）により記載されている手順を用いて作ることができる。抗原を、逐次的にレクチン及び陽イオン交換クロマトグラフィにより精製し、次に、ヒト用量のＢＣＧを用いて胸部の複数の部位に１．Ｄ、（皮内）注射を行なった（注射１回につき１２５〜１５０ｕｇ）。この後、ＳＡＦを用いて処方された抗原を連続的に３回１．Ｍ、（筋向）注射した。

ＥＬＩ　ＳＡ及び中和Ａｂ力価は、ルーチンに追跡調査した。しかしながら、両方共、この免疫の期間中及びこの期間の後、変化がないままであった。

ｇｐ１６０ｅ旦ヱが抗体応答を増強することができなかったのは、以前にＨＩＶ抗原にさらされていない、特定の投薬を受けたことのないチンパンジーＣ−５１９を平行して免疫したことによってわかるように、免疫原性の欠如のためではなかった。Ｃ−３３９についてのものと同じ免疫プロトコールを用いて、Ｃ−５１９は直ちに強い抗ｇｐ１６０Ａｂ応答を示すようになり、そのＥＬ　Ｉ　ＳＡ力価は２回の注射後２０，０００に達した。従って、ｇｐ１６０１旦ヱの注射に対してＣ−３３９が応答できなかったのは、免疫原の潜在能の欠如のせいではなく、この動物における何らかのまだ識別されていない免疫学的遮断（ブロック）によるものである可能性が最も高かった。このような欠陥は、中和Ａｂの誘発のために必要とされるｇｐ１２０分子のエピトープのみを動物に注射することによって回避される可能性があると推論された。

ＨＩＶ中和Ａｂは、ｇｐ１２０のｖ３領域がらの型特異的な高度可変ループに対して主に向けられていることが示されてきた。

従って、ビス−ジアゾベンジジンを用いて、　ＨＩＶ−Ｉ　Ｂ　ＲＵ（ＩＩＩｂ）株からのそのループ、４−　（ＹＮＴＲＫＳＩ　ＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮ）の配列をもつ２５−ｍｅｒオリゴペプチドを、ＫＬＨに架橋結合させた。Ｃ−３３９には、０週目、３週目及び１９週目にＳＡＦの存在下でこのペプチド−担体コンジュゲート（３００μｇのペプチド）を注射した。ＥＬＩＳＡ力価にはいかなる増加もみられなかったが、２回目の注射後、中和Ａｂ力価の持続が得られた。この動物を、全く異なる免疫の経過を平行してたどったもう１匹のチンパンジー、ＲＯＢＥＲＴ、Ｃ−４３３と共に、２６週目に抗原投与した（以下参照）。

チンパンジーＣ−４３３は、ＶＶ−１１６３と同じｇｐ１６０ｅｎｖの未切断バージョンであるが、しかし膜貫通ドメインを含むものを発現する７７組換え体である、ＶＶ−１１３９で初回抗原投与した。ワクシニアウィルスＶＶ−１１３９は、Ｋｉｅｎｙ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｇ：　２１９−２２６　（１９８８）により記載されている手順を用いて作ることができる。２Ｘ１０”ＰＦＵの７７組換え体を用いて乱切を行ない、４週目と２２週目にくり返し行なった。次に、上述のように精製した組換え型可溶性ｇｐｔｓｏ、及びＳＡＦと混合した組換え型ｐ１８１Ｌ［、ｐ２７ユ旦ヱ及びｐ２３二エヱ（Ｅ、　ｃｏｌｉから精製されたもの）を各々１２５〜１５０ｕｇ用いて、動物を免疫した。注射は、０力月目、１力月目、２力月目及び６力月目に行ない、１　：４００，０００のＥＬＩＳＡ　Ａｂ力価という結果をもたらした。しかしながら、ここでも、中和Ａｂ力価は低いままであった（免疫蛍光フォーカス検定及びシンシチウム形成検定によりそれぞれ１：４００及び１：１２８）。従って、Ｃ−４３３には、Ｃ−３３９と同じ免疫プロトコールに従って、同じ■３ペプチドーＫＬＨコンジュゲートを用いて注射を行なった。

Ｃ−４３３の中和Ａｂ力価は直ちに数倍に急上昇し、この動物にはＣ−３３９と平行して抗原投与した。

２匹のチンパンジーは、国立ガン研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ　）からの滴定されたウィルス保存株（ストック＞　（ＩＩＩＢ保存株、ロット番号４０）を用いて抗原投与した（メリーランド州Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　（７）　Ｎ　ＣＩのＬａｒｒｙ　Ａｒｔｈｕｒ氏からの寄付）、ｉｏ’ 丁ＣＩＤ！１．／−を含んでいたこの保存株を、１　：　１００に希釈し、１− の希釈溶液を、免疫した両方の動物に１．Ｖ、（静脈内）注射した。動物を不必要に使用しないように、又、ウィルス保存株がチンパンジーにおいて２回滴定され、チンパンジーに対するその感染力が定期的に評価されてきたことを考慮して、この実験では、特定の投薬を受けたことのない対照チンパンジーは全く使用しなかった。このウィルス保存株のチンパンジーＩＤ５０は、４ＴＣＩＤｓ。に等しく、２つの実験において４０ＴＣＩＤｓ。をチンパンジーに注射したところ、注射後早くも２週目にはＰＢＬに検出可能なウィルスが現われるという結果がもたらされ、続いて４週目には血清転換（セロコンバージョン）が起こった。

これとは対照的に、１００ＴＣＩＤ、。によるチンパンジーＣ−３３９及びＣ− ４３３の抗原投与の後には、抗原投与時点以降２４週の間、抗体力価の検出可能な増加は見られなかった。さらに、Ｃ−４３３は抗ｐ２５［且４Ａｂを生じず、Ｃ−３３９は抗ｐ２７１旦ユＡｂを生じず、２匹共、抗ｐ６６ｊＬ立ユＡｂを生じなかった。

両方のチンパンジーからのＰＢＬでの抗原投与から６週目、１２週目及び２４週目に行なったＰＣＲ試験は陰性であったが、一方、−年前に抗原投与を受け、感染状態となった免疫不充分のチンパンジー（Ｃ−４８７）は、ＰＣＨにより陽性であった。最後に、ウィルスは、６週間の培養後のＲＴ活性の欠如により判断されるように、ヒトＰＢＬとのＣ−３３９又はＣ−４３３のいずれかからのＰＢＬの同時培養によって回収されなかった。

「中和エピトープ」という表現は、ＨＩＶ−１の場合、なかでもＰｕｔｎｅｙらが１９８６年に（Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３４：　１３９２−１３９５）　、又、Ｒｕ５ｃｈｅらが１９８８年に（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５：　３１９ｇ−３２０２）記載しているように、Ｍｙｅｒｓらの著作〔ヒトレトロウィルスとＡ　Ｉ　Ｄ　Ｓ　（Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ａｎｄ　ＡＩＤＳ）　、　１９８９．　Ｌｏｓ　Ａｌａｍｏｓ。

Ｎａｔｌ、　Ｌａｂ、］に記されているとおりの、ＨＩ　Ｖ　−１エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸２９６〜３３１にほぼ配列が一致する、主要（メジャー）ウィルス中和エピトープを意味するものとして考えられている。同様に本発明が網羅しているのは、考慮中のウィルスの中和エピトープに相当し、人間ではＨＩ　Ｖ−１又はその他のレトロウィルス、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−Ｉ又はＨＴＬＶ−Ｉｌ、動物ではＦＩＶ、ＦｅＬＶ又はその他のレンチウィルスのさまざまな変異体の同等の領域に対応するペプチドである。

同様に本発明の範囲に含まれるのは、エンベロープ糖タンパク質の保存された領域に属すること、及び考慮中のウィルスのいくつかの異なる単離株、例えばＨＩ　Ｖ−１のいくつかの異なる単離株、さらにはＨＩ　Ｖ−１やＨＩＶ−２の異なる分離株を、比較的低い力価で中和できる抗体を誘発することを特徴とする、副（マイナー）中和エピトープとして知られているものに相当するペプチドである。マイナーエピトープの例は、Ｃｈａｎｈらの１９８６年の著作（Ｔｈｅ　ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ、　’４：　３０６５−３０７１）及びＥｖａｎｓらの１９８９年の著作（Ｎａｔｕｒｅ　３３９：　３８５−３８８）、又は［ヒトＡＩＤＳ及び関連する動物の疾病のレトロウィルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　ＡＩＤＳ　ａｎｄＲｅｌａｔｅｄ　Ａｎｉｍａｌ　Ｄｉｓｅａｓｅ）　Ｊ　、（Ｍ、　Ｇｉｒａｒｄ及びり、　Ｖａｌｅｔｔｅ。

Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　Ｍａｒｃｅｌ　Ｍｅｒｉｅｕｘ、　Ｌｙｏｎ、　１９９０．印刷中）の中のＡｌｍｏｎｄらの著作に見い出すことができる。

メジャー及びマイナー中和エピトープの免疫原付ペプチドは、好ましくは、可能なかぎり最大の防御を確保するため、互いに混合される。これらは、担体分子にカップリングされていない遊離の状態で投与することができる。同様に、これらは、同じレトロウィルス、又は特に１９８９年８月１８日付けのＧｉｒａｒｄ− Ｇｌｕｃｋｍａｎ−Ｂａｈｒａｏｕｉのフランス特許出願明細書第８９．１１０４４号に記載されているような、これと免疫学的に交叉反応するレトロウィルスの、単数又は複数の構造又は非構造タンパク質からの、１つ又は好ましくはいくつかのＴエピトープを有するアミノ酸配列と組合わせることもできる。

本発明の特に好ましいある実施態様においては、中和エピトープに相当する免疫原性ペプチドは、Ｔエピトープに相当するアミノ酸配列に化学的にカップリングされる。別のケースでは、ペプチドは、例えば二官能性試薬又はその他の望ましいあらゆるカップリング剤と反応させることによって、望ましいＴエピトープを担持する担体分子にカップリングされる。

担体分子としては、ウィルスゲノムによってコードされる全てのタンパク質（ＨＩ　Ｖの場合、１旦１、Ｌ旦ヱ、二土ヱ、２立１、二■工、ヱ■五、且■旦、ｌ且１、立旦ヱ、又ハユ旦ｔ　遺伝子ニＪ：り産生されるタンパク質）、又はＨＢｓ抗原、ＨＢｃ抗原、テタヌストキソイド、ヘモシアニン、ヒトアルブミン又はポリペプチド（例えばポリリジン）もしくは適切なりボペプチドのような、その他の（タンパク質タイプの）分子を使用することができる。

エンベロープ糖タンパク質分子及びメジャー及びマイナー中和ペプチド（遊離状態又は担体分子に結合された状態のもの）が同じ　□ワクチン調製物の形に組合わせられる本発明の特定の一実施態様においては、エンベロープ糖タンパク質の初回抗原投与効果は、ワクチンの最初の１回又は数回の注射の後に現われ、ペプチドによる増幅効果はすぐその後に現われる。

か（して、本発明の目的は、免疫系の応答を開始させる効果をもつ第１の抗原、すなわちこの場合、考慮中のレトロウィルス血清型の各々のいくつかのエンベロープ糖タンパク質；及び、特に長く持続する高力価の中和抗体の誘発を通して初期応答を増幅し強化する目的をもつ予防接種（好ましくは連続してのものであるが、必要とあらば混合物の形での）のための第２の抗原、すなわちこの場合、考慮中のウィルスの異なる血清型のメジャー中和エピトープと、おそらくはマイナー中和エピトープに相当する合成ペプチドを１．特に長（持続する高力価の中和抗体の誘発を通して、初期の応答を増幅および強化する目的の（好ましくは連続的な、しかし必要であれば混合物による）予防接種のために使用することにある。本発明は、約６カ月、さらには１年以上もの長い間持続する免疫を誘発することを可能にする。

免疫系の応答を開始させるのに用いられる糖タンパク質は、好ましくは、考えられる切断の前に得られるような全分子である。従って、ＨＩ　Ｖ−１（７）場合、ｇｐ１２０よりもｇｐ１６０の方が好ましく、その他のレトロウィルスについても同様のことが言える。こうして、特に抗ｇｐ４１抗体が誘発されうることになり、このことは、ウィルスキャリアにおいて有利な兆候である〔に１ａｓｓｅ　ｅｔ　ａｌ、　。

Ｐｒａｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　８５：　５２２５ −５２２９　］。

［増幅剤（ａｍｐｌｉｆｉｅｒ）　Ｊを構成するペプチドは、遊離していてもよいし、あるいは物理的に（特に疎水性結合により）又は化学的に（特に共締結合により）、担体分子に結合されていてもよい。これらは又、Ｔエピトープ、さらには免疫系を刺激すること及び／又は「増幅剤」ペプチドを抗原提示細胞に特異的にターゲティングすることができるペプチド、リボペプチド、グリコペプチド、脂肪族鎖、脂肪酸又はこれらの組合せに相当する、その他のペプチドと関連づけることもできる。

この観点から見ると、ＨＩＶ中和エピトープに相当するペプチドの特に有利な体裁は、特にＤｅｒｅｓらにより１９８９年に記載されているように（Ｎａｔｕｒｅ　３４２：　５６１−５６４）、好ましくは化学的共有結合によってこれらを脂肪族配列に結合させることである。このような形で与えられる増幅ペプチドは、Ｂ細胞応答を誘発するのみならず、１９８８年にＴａｋａｈａｓｈｉら（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５：３１０５−３１０９）により記載されているように、ＣＴＬ　ＣＤ８”応答、制限されたＨＬＡクラスＩをも誘発することができる。

ＨＩ　Ｖ−１及びＨＩＶ−２の場合のようにウィルスが高度の抗原的な可変性を有する場合、ブライミング抗原としては、ただ１つのエンベロープ糖タンパク質ではなく、各々が単一の単離株又は単離面群に特異的であるので、望まれるだけの数のブライミング現象を得るべく、考慮中のウィルスの１つの単離株又は単離面群に各々が相当している異なる配列をもつ、いくつかのエンベロープ糖タンパク質を使用することが必要である。この場合、増幅ペプチドは、以下に記すように、考慮中の単離株の各々の中和ペプチドの混合物で構成されることになる。

本発明に従ったＨ　Ｉ　Ｖ−１増幅ペプチドの調製物は、それが、１文字のアミノ酸コードで以下に記した配列の少なくとも１つ又はその一部分を含んでいるということを特徴とする：Ｃ−ＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳ　ＸＹＸ−−ＧＰＧＲＡ　ＦＨＴＴＧＲＩｒＧＤ　−ＩＲＫＡＨ−ＣＣ−ＴＲＰＹ’ＮＭＶＲＲ５ＬＳＩ−− ＧＰＧＲＡ　ＦＲＴＦｔＢ−ＸＸＧＩ　−ＩＲＱＡＨ−ＣＣ−ＴＲＰＧＮＮＴＲＲＧ　ＩＨＦ−−ＧＰＧＱＡ　ＬＹ？ｒＧＩＶ−ＧＤ　−ＩＲＲＡＹ−ＣＣ−ＡＲＰＹＱＮＴＲＱＲＴＰＩ−−ＧＬＧＱＳ　Ｉ、ＴｒＴＲ５Ｒ−５ｌ　−ＩＧＱＡＨ−ＣＣ−ＴＲＰＮＮＮＴＲＫＳ　工ＴＫ−−ＧＰＧＲＶ　ＩＹＡＴＧＱ）ＩＧＤ　−ＩＲＫＡＨ−ＣＣ−ＴＲＰＮＮｆｒＲＪＣＲＩＴＭ−−ＧＰＧＲＶ　Ｙ ’ＹＴＴＧＱＩＩＧＤ　−ＸＲＲＭ−ＣＣ−ＴＲＰＧＳＤＫＲＱＳ　ＴＭ−−ＧＬＧＱＡ　Ｉ、Ｙ’ｆｆ１ＧＲＴＫＩ　−ＩＧＱＡＨ−ＣＣ−ＴＲＰＧＳＤＫＸＸＲＱＳＩＲＩＧＰＧＫＶ　ＦＹＡＫＧＧ−−−Ｉ　−ＴＧＱＡ）ｆ−ＣＣ−ＴＲＰＮＮＮＴＫＫＧ　ＩＡＩ−−ＧＰＧＲＴ　ＬＹＡＲＥＫＩ工ＧＤ　−工ＲＱＡＨ−ＣＣ−ＴＲＰＮＮＩ（ＴＲＫＲ■５−−ＧＰＧＲＶＷＹＴＴＧＥＸＴＡＮ　−４ＲＱＡＨ−ＣＣ−ＴＲＰＹＦＪＩＴＲＱＳ−ＴＰＩ−−ＧＬＧＱＡ　ＬＹＴＴＲＴＫＳＩ　−ＧＱＡ）Ｉ−ＣＣ−ＴＲＰＮＮ）ｒｆｆＲ８−ＩＨＩ−−ＧＰＧＲＡ　ＦＹＡ’Ｉ’ＧＤＩＩＧＴＩＲＱＡＨ−ＣＣ−ＴＲＰＮＹＮｌｌＪＩＸｊｌ−ＩＨＩ−−ＧＰＧＲＡ　ＦＴｒＴＫＮＩＩＧＤＩＲＱＡＭ−Ｃ少なくとも１つの中和エピトープ、特に上のリストの中からのものを含む配列と、少なくとも１つのＴエピトープを含む１つの担体配列とを用いることによる本発明の増幅分子の産生け、これらの配列を結合させることによって又は同一化合物の形での物理的組合せによって達成してもよい。

充分な効果を上げるためには、ブライミング及び増幅用抗原は、例えば、好ましくは、脂質エマルジョン中のムラミルジペプチドの誘導体の脂質アジュバント、又はフロイント不完全アジュバントにより、増強しな（ではならない。

ブライミング及び増幅用抗原は、好ましくは、霊長類、特にヒトのような宿主に対して部内投与する。以下に、ＨＩＶのペプチド及びｇｐ１６０について利用できる典型的な免疫スケジュールを示す。

ｇｐ１６０（月数）　ペプチド（月数）０、ｌ、（２）、６　１２．１３０．１．２．１２　１３．１４０、ｌ、２．１２　１：２、（１２）これらの免疫スケジュールが単に代表的なものにすぎず、宿主において最適な応答を得るためにスケジュールを変えることも可能であるということは、わかるだろう。同様に、ブライミング及び増幅用抗原の量も変えることができる。例えば、５ｙｎｔｅｘ　Ｓ　Ａ　Ｆ　−１アジユバント中の約１５０μＣのｇｐ１６０を指示通りに投与し、その後、典型的には各々１００μｇの量でペプチドを投与することができる。

最後に、関与するペプチドの相対的割合は、最終的調製物における各ペプチドの望まれる最終割合に応じて変化させつる。特に、これらの割合は、少なくともこれらのペプチドを担体分子にカップリングさせる場合、相補的官能基とのコンジュゲート化反応に入ることができる各ペプチドが担持する官能基の数及び各ペプチドの免疫原性の関数として調整される。

本発明の特定の一応用分野では、増幅ペプチドの注射は、自らの表面上に及び／又はその増幅中に、考慮中のウィルスの中和エピトープを発現し、このようにして前記レトロウィルスに対する中和抗体を誘発することができる組換え体である粒子、ウィルス又は細菌の投与によって置換され、これらには、ＨＢｃ抗原粒子；ＨＢｓ抗原粒子；表面に中和エピトープを発現している細菌、又は細胞質タンパク質、例えば１ａｍＢレセプクー；ピコルナウィルスのキメラ、例えばポリオウィルス−ＨＩＶキメラ；ポックスウィルス組換え体；アデノウィルス組換え体又はアデノウィルスキメラなどがある。中和エピトープの提示のために選択される生きたベクターに応じて、この投与は、経口投与される生ワクチンの形態（例えば、セービンポリオウイルス株又はヒトアデノウィルスから、又はＳａｌｍｏｎｅｌｌａ、　距江虹劫又はその他の腸内細菌の弱毒化菌株から、又は経口投与後に免疫応答を誘発することができるあらゆる生物、ウィルス、酵母、細菌から構成されたキメラ）、あるいは非経口ルートにより投与される生ワクチンの形態（例えば、組換え型ポックスウィルス）で、さらには非経口ルートによる不活性化ワクチンの形態（例えば、ポリオウィルスのＭａｈｏｎｅｙ株から構築されたキメラ、又はＨＢｓＡｇもしくはＨＢｃＡｇの不活性粒子）でも、行なうことができる。

本発明の別の特定の実施態様では、予防接種の初回抗原投与のために注射する抗原（エンベロープ糖タンパク質）、すなわちウィルスのエンベロープ糖タンパク質は、ＩＳＣＯＭ（グリコシドＱｕｉｌＡと抗原タンパク質の結合を含む、免疫刺激複合体）又はリポソームなどの粒子の形態で提示される。

ブライミング抗原及び／又はペプチドは、同様に、ウィルス又は細菌（例えば、ポックスウィルス又はＢ　ＣＧ　：　Ｂａｃｉｌｅ　ｄｅＣａｌｍｅｔｔｅ　Ｇｅｒｉｎ）のような生きた組換え型微生物、又はエンベロープ糖タンパク質もしくはそれから誘導されるペプチドを発現するよう変更されたあらゆる生ワクチンと関連させることができる。

エンベロープ糖タンパク質及び／又はそれから誘導されるペプチドは、不活性化された粒子、例えば、ＨＩＶウィルスもしくはこのウィルスの一部分のようなウィルス粒子又はゲノムを含まない粒子の形で提示することもできる。このようなゲノムを含まないウィルスは、Ｈａｆｆａｒ　０１ｅｔ　ａｌ、、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、　６４：　２６５３−２６５９（１９９０）により、ワクチンを産生ずるとして記載されている。これらの粒子は、ＨＩＶウィルスの場合、ＨＩＶ様粒子と呼ぶことができる。本発明においては、これらは、完全なＨＩＶゲノムを含んでいないが、その表面に本発明の組成物のウィルス成分を露出させつる。

本発明の別の実施態様においては、エンベロープ糖タンパク質抗原は、その他の抗原と混合物の形に組合わされる。例えば、ブライミング抗原がＨＩＶエンベロープ糖タンパク質である場合、ｇａｇ、ｎｅｔ％ｖｉｆ、ｐｏｌ、ＧＰＧ又はＧＬＧ抗原のような単数又は複数の抗原を、組成物のペプチドと組合わせることができるのと同様に、このタンパク質とも組合わせることができる。

本発明は、同様に、ｅｎｖ糖タンパク質がそのフラグメントで置換されているか又はそのフラグメントと関連づけられている、上述の組成物をも含んでいる。このフラグメントは、有利には５ｏを越えるアミノ酸を有し、本発明との関係において糖タンパク質の免疫原性特性をもっことを特徴とする。

本発明は、同様に、組成物の糖タンパク質及び／又はペプチドを認識する、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体にも関する。これらの抗体は、混合物の形に連合させることができ、例えば、血清療法のために用いることができる。

凱１：ＨＩＶ−Ｉ　ＢＲＵ及びこの単離株の糖タンパク質を用いたチンパンジーの免疫、ＫＬＨにカップリングされたＢＲＵｅｎｖオリゴペプチドを用いた応答の増幅チンパンジー３３９　（ＦＵＮＦＡＣＥ）　を、まず最初に、５％スクアラン及び２．５％プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）重合体のエマルジョン中、１ｍｇ／Ｗｄｌのトレオニル−ＭＤＰを含む５ｙｎｔｅｘアジユバントと組合わされた状態の、３０℃で４８時間の０．０２５％ホルマリンでの処理及び３７℃ で３０分間の０．０２５％ベータープロピオラクトンでの処理により不活性化した２５０μｇの精製ＨＩＶ−Ｉ　ＢＲＵウィルスを用いて、１力月間隔の３回の注射で免疫した。これらの注射の後、７力月目に第１回の追加免疫を、そして１年後に２回目の追加免疫を行なった。

次に、１９８８年のＫｉｅｎｙ　ｅｔ　ａｌ、（Ｐｒｏｔ、　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｇ：２１９−２２６　）において記載されているように、遺伝子組換え技術を用いてｇｐ１２０／ｇｐ４１の分割に関与する配列を除去するようにオリゴヌクレオチド部位特異的突然変異誘発を通して変更されたｇｐ１６０ｅｎｖをコードするＨＩＶ−Ｉ　ＢＲＵの配列を挿入し、かつ膜貫通疎水性ゾーンを削除したゲノムをもつワタシニアウイルス組換え体（ＶＶｅｎｖｌ１６３株）に感染させたＢＨＫ−２１細胞培養の上清から精製されたＢＲＵウィルスのエンベロープ糖タンパク質（ｇｐ１６０）を、この動物に５回注射した。精製されたタンパク質は、５ｙｎｔｅｘアジユバントの存在下で、部内注射１回当り１２５〜１５０μｇの量で使用した。この糖タンパク質を調製するために、ＶＶ−１１６３に感染したＢＨＫ細胞の培地を、硫酸アンモニウムでの沈降法により濃縮し、その後、トリクロロ酢酸を用いて濃縮した後、レンチルのレクチン上でのアフィニティクロマトグラフィ、陽イオン交換樹脂上でのイオン交換、及び高速液体クロマトグラフィ　（ＨＰＬＣ）の３回の連続的実施により、糖タンパク質を精製した。このようにして得た組換え型ｇｐ１６０は、９５％純粋である。これは、ＨＩＶ−１のｇｐ１６０に特異的なモノクローナル抗体によって、特にＢＲＵ単離単離中ジャー中和エピトープに特異的な中和抗体１１０−４によって認識される。

その上、これは、Ｔ４リンパ球のＣＤ４レセプターに対して強い親和性を示す。

不活性化されたウィルスの注射に応答して誘発された抗体のレベル（ＥＬＩＳＡ測定：　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　Ｐａ５ｔｅｕｒ　ＥＬＡＶＩＡキットを用いて１／２００，０００；免疫蛍光フォーカス形成の５０％阻害の測定によれば、中和力価１／４００　；　ＣＥＭ−５Ｓ細胞におけるシンシチウム形成の９０％阻害の測定によれば、１／６４）は、ｇｐｔ６ｏの注射によって著しく変化しなかった。

ビス（ジアゾベンチジン）を用いてヘモシアニン（ＫＬＨ）にチロシン残基（Ｙ）をカップリングさせ、５ｙｎｔｅｘアジユバントと組合わさせた状態で、ＢＲＵ単離単離中和エピトープに相当する配列ＹＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮをもつ合成ペプチドの調製物３００μｇを、動物に与えた。この注射を、３週間後に１回くり返し、次いで１９９回目もう一度くり返した。

これらの注射の結果として、ＥＬＩＳＡにより測定された抗体力価の増大は全く見られなかった（図１）が、これらは、３つの異なる抗体滴定方法により測定された場合、表１及び図２かられかるように、中和抗体の著しい増加をもたらした。

炙１ｇ　１．６００　１２８−２５６　８００Ａ：ＭＴ４細胞におけるシンシチウムの９０％阻害。

Ｂ　：　ＣＥＭ−３Ｓ細胞におけるシンシチウムの９０％阻害。

Ｃ：Ｈ９細胞における免疫蛍光の７５％阻害。

次に、２６週目に、ＦＵＮＦＡＣＥに、Ｌａｒｒｙ　Ａｒｔｈｕｒ　（ＮＣＩ。

Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ）から提供して頂いたｌ　Ｏ’　ＴＣＩＤ、、／−と滴定されたＨ　ＩＶ−１保存株（１）ｌ　００　Ｔ（ＪＤ、、、すなわち１：１００（７）希釈溶液１ｍｔ’を静脈内注射にて投与することにより、抗原投与した。この保存株０４０は、チンパンジーにおいて２回にわたり滴定されており、このためＡｒｔｈｕｒらは、チンパンジーに対するそのＩＤ５０が４　ＴＣＩＤｓ。であると決定することができた。免疫されていないチンパンジーにこの保存株を４０ＴＣＩＤＢ。注射すると、注射から２週間後以降、動物のリンパ球内に検出可能なウィルスが出現する結果となり、続いて、２つの試料に見られるとおり、そしてＡｒｔｈｕｒらが１９８９年に発表しているように（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、）、４週間以内に抗ＨＩＶセロコンバージョンが見られた。

チンパンジーＦＵＮＦＡＣＥは、抗原投与注射の後、６力月目までは、そのリンパ球内にはいかなるウィルスも検出されず（ｐｏｌ及びｇａｇプローブでの遺伝子増幅、又はヒトリンパ球との同時培養及び培養上清から得られた１００．０００Ｘｇベレット中の逆転写酵素の検定のいずれかによって測定）、６力月目に、ＥＬＩＳＡ又はウェスタンプロットにより測定した抗ＨＩＶ既往反応（表２）もウェスタンプロットにより検出可能な抗ユ旦工抗体も全（存在しなかったことから、ｌ　Ｏ０ＴＣＩＤ、。の保存株０４０ウイルスを用いた感染に対して見かけ上完全な防御を示した。

艮旦記載の日付におけるＥＬＩＳＡ力価抗原　抗原投与口　１力月目　２力月目　３力月目　４力月目ＢＲＵ　ペプチド　６，０００　３，０００　２，５００　１，０００　１，０００　’ガ１．ＨＩＶ−１の組換え型抗原ｅｎｖ％ｇａｇ、ｎｅｔ及びｖｉｆを用いたチンパンジーの免疫：　ＫＬＨにカップリングされたＢＲＵ　ｅｎｖオリゴペプチドによる応答の増幅チンパンジー４３３　（ＲＯＢＥＲＴ）を、まず最初に、ＨＩＶ−Ｉ　ＢＲＵのｇｐ１６０ｅ旦１を発現する組換え型ワクシニアウィルス（ＶＶｅｎｖｌ　１３９）２ＸｌＯ’　ＰＦＵの３回の連続的乱切でブライミングし、次に、予め組換え型ウィルスＶＶｅｎｖ１１３９にインビトロ感染させてホルムアルデヒドで固定しておいたこの動物自身のリンパ球の静脈内投与によってプライミングした。その後、この動物に、１力月間隔で３回の連続的な部内注射を、次に３３週、３８週及び４０週目に３回の追加免疫を、そして６６週目に最後の追加免疫を、５ｙｎｔｅｘアジユバントと組合わせた次の抗原の各々１２５〜１５０ νｇの混合物で構成して施した二上記例１に記載した通りに精製したｇｐｌ　６０ｅ旦ヱ、及びＥ、　ｃｏｌｔで発現させ、１９８９年８月１８日付のフランス特許出願明細書第８９．１１０４４号に記載されている通りに精製した、タンパク質ｐ１８ＬＬｉ、ｐ２７ｎｅユ及びｐ２３ｖｉｆ、最後に、ＲＯＢＥＲＴは、前の例でＦＵＮＦＡＣＥに行なったのと同じ接種スケジュールに基づいて、ＫＬＨにカップリングさせ、５ｙｎｔｅｘアジユバントと組合わせられた、同じＢＲＵペプチドを受けた。

ペプチド−ＫＬＨコンジュゲートの注射は、ＥＬＩＳＡにより測定した場合、抗体レベルのいかなる増加も結果としてもたらさなかったが（図３）、図２及び表３かられかるように、中和抗体の著しい増大をもたらした。中和抗体は、同様に３つの異なる方法を用いて測定した：衷ユｇ　＞８００　２５６−５１２　＞１，６００Ａ：ＭＴ４細胞におけるシンシチウムの９０％阻害。

Ｂ　：　ＣＥＭ−ＳＳ細胞におけるシンシチウムの９０％阻害。

Ｃ：Ｈ９細胞内における免疫蛍光の７５％阻害。

次に、ＲＯＢＥＲＴには、前の例の場合と同様に、ＮＣＩからのＨＩＶ−１ウイルスの同じ０４０株を１０　ｏＴｃＩｏｓ。静脈内接種することにより、ＦＵＮＦＡＣＥと平行して抗原投与した。ここでも又、動物のリンパ球内にウィルスが存在しないこと及び抗原投与から６力月後にＰＣＲが陰性であること、そして抗原投与後６力月目にＥＬＩ　ＳＡ又はウェスタンプロットにより測定した既往抗ＨＩＶ応答の欠如ならびに抗ｐ２５ＬＬＩＬ及び抗ｐ２７ユ旦ユ抗体の欠如から判断して、感染に対する完全な防御が得られたように思われる。表４は、抗ｇｐ１６０及び抗ＢＲＵ中和抗体に対する既往効果が同様に存在しないことを示している。

炙ＡＲＯＢＥＲＴの抗原投与注射後の抗ｇｐ１６０及びメジ　−ＢＲＵ　エピトープ　の　。

記載の日付におけるＥＬＩＳＡ力価ｇｐ１６０　５４５，０００　４２１，０００　２００，０００　９５，０００　３２，０００ＢＲＵペプチド　９，０００　６，０００　３，００σ　３，０００　４，０００医３．ＨＩＶ−１のｇｐ１６０立旦ヱ及びＩ）１８１Ｌｆ抗原を用いたチンパンジーの免疫；担体分子にカップリングされていなし）ＨＩＶ− １ｅｎｖペプチドを用いた増幅この実験では３匹のチンパンジー、すなわちチンパンジーＪＯＪＯＴＯＯ（４９９）　、ＩＲＡ　（１５１）及びＨＥＮＲＹＩＩ（５３１）を用いた。

最初のＪＯＪＯＴＯＯには、上述のとおり精製し、５ｙｎｔｅｘアジユバントと混合した１２０〜１５０μｇのｇｐ１６０ｅ旦ヱ及ヒｐｌ　８１Ｌ［を、１力月間隔で３回注射した。この最初の一連の注射の後、同じ抗原を３回、３３週目、３８週目及び４０週目に追加の結果として、以下に記すように中和抗体のレベルは比較的低し１ものの、最初の３回の注射の直後からウェスタンプロット及びＥＬＩ　ＳＡにより検出可能な高い抗体レベルが出現した。

第２のチンパンジー、ＩＲＡには、それぞれＨＩＶ−Ｉ　ＢＲＵのｇｐ１６０立立ヱ、ｐ５５ＪＬ且１、ｐ２７１旦ユ及びｐ２３二を発現する４つの組換え型ワクシニアウィルス保存株を、各々１０”ＰＦＵ用いて免疫した。皮肉経路で与えたこれらの接種は、いかなる中和抗体の出現も導かなかったが、ウェスタンプロット又はＥＬＩＳＡにより、かろうじて有意なレベル（≦１：２００）の抗体を検出することができた。チンパンジーＩＲＡは、次に２年間休息させた。

４番目のチンパンジー、ＨＥＮＲＹＩＩは、実験の日量前、ＨＩＶ又はＳＩＶ抗原との接触に関しては、全く実験の対象となったことがないものであった。

その日、上述の３匹のチンパンジーに対して、５ｙｎｔｅｘアジユバントの存在下で、Ｍｙｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ、　（１９８９）に発表されたＨＩＶ−１のメジャー中和エピトープ（ループＶ３）の２１の配列に相当する２１の合成ペプチドからなるカクテルを、ペプチド１種当り５０Ｉ４の量で部内注射した。各々のペプチドは、システィンをＮ末端位置に１つ有し、Ｃ末端にもう１つ有し、かくして与えられた単離株のＶ−３ル一プ全体を表していたＥＢＲＵ単離株のアミノ酸２９６〜３３１、及びＭｙｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ、（１９８９）のアラインメントに従った対応するアミノ酸Ｊ、最初の注射から１力月及び２力月目に、動物にそれぞれ同じ混合物を再度注射した。ペプチド混合物を用いたこの免疫（１回の注射につき１．０５＋ｎｇ）の後には、ＪＯＪＯＴＯＯにおいては、抗原として精製ｇｐ１６０ＢＲＵ又はＢＲＵペプチドを用い、ＥＬＩＳＡにより測定したとおり、ＢＲＵ単離株のｇｐ１６０に対して、及びそのメジャー中和エピトープに対して向けられた有意な既往反応が続いた（表５及び６）。

艮１時間ＪＯＪＯＴＯ（１（４９９）　３００，０００　４５０，０００　２，５００，０００　７００，０００ＩＲＡ　（１５１）陰性　ＮＤ　１３，０００　７，００ＯＮＤ：測定せず艮五時間ＪＯＪＯＴＯＯ（４９９）　６，０００　１０，０００　３８０，０００　２− ００，０００ＩＲＡ　（１５１）陰性　ＮＤ　４，０００　２，００ＯＮＤ：測定せずＩＲＡにおいて得られた力価は、非常に低いものにとどまっており、ＨＥＮＲＹＨにおいては完全に陰性であった。これらの結果は、明らかに、ｇｐ１６０での予備免疫の結果もたらされる免疫応答に対する初回抗原投与効果を表している。

しかしながら、ＪＯＪＯＴＯＯにおける抗ペプチド及び抗ｇｐ１６０力価の増大は、市販の診断キット（ＥＬＡＶＩＡ　ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓＰａｓｔｅｕｒ　）を用いることによりわかるように（表７）、抗ＨＩＶＥＬＩＳＡ力価の極立った増大を伴っていなかった。

衣ユＥＬＡＶＩＡによ　１　した　ＨＩＶ　レベル８４寸ＪＯＪＯＴＯＯ（４９９）　１，０００，０００　１，６００，０００　４００，０００ＥＲＡ　（１５１）　陰性　８００　１００ＨＥＮＲＹ　ＩＩ　（５３１）　陰性　２００　陰性これとは対照的に、ＨＩ　Ｖ−１の２１の単離株の中和エピトープに相当する合成ペプチドの混合物の注射の後には、表８及び図４に示されているように、ＢＲＵ単離株を中和する抗体のレベルの非常に明確な増大が続いた。この増大がＪＯＪＯＴＯＯのみに見られ、ＩＲＡにもＨＥＮＲＹＩｒにも見られなかった点は注目すべきであり、このことは、ｇｐ１６０を用いる予備免疫の初回抗原投与効果の特異性を立証している。

その上、ＪＯＪＯＴＯＯの中和抗体反応は、図５かられかるように、ＢＲＵ単離株に対して特異的である。つまり、その血清は、ＳＦ２単離株（ＡＲＶ−２）を中和せず、ＢＲＵ単離株（ＨＴＬＶ−３＝ＬＡＶｌ）　のみを中和する。

表呈ＨＩＶ−１のメジャー中和エピトープの２１個の既知の配列に相当するペプチド混合物の３回の注射によって誘発された中和抗体のレベル：　ＣＥＭ−Ｔ４細胞について測定された７５％中和力価ｌの　′Ｃ時間最初の注射より１力月前　３回目の注射の１力月後２５０　２、５００庭踵大塘積呈ヒト免疫不全症ウィルス１型（ＨＩＶ−１）に対する実験的ワクチンの効力についての最も厳密な（ストリンジェントな）試験は、生きたウィルスの抗原投与の後に続く感染からのチンパンジーの防御である。ここで報告する研究においては、中和抗体の高い力価の維持は、不活性化された全ウィルス又は精製された組換え型タンパク質、続いてメジャーＨＩＶ−１中和エピトープ■３と同一の合成ペプチドを含んでいた、異なるＨ　Ｉ　Ｖ−１□８抗原調整物の逐次的注射の後、３匹のチンパンジーにおいて惹起された。これらの動物には、４０チンパンジー感染用量（５０％組織培養感染用量ｒＴｃＩＤＪの１００量に等しい）のＨＩＶ −１ＨＴＬｖ−＋１，８の保存株を用いて静脈内に抗原投与を施した。６力月の追跡の後、３匹の動物は全て、ＰＲＣ分析、及び末梢血リンパ球、骨髄及びリンパ節組織からのウィルスの単離不能などの基準を含む血清学的及びウィルス学的基準により、感染していないように思われた。

１年間監視した２匹のチンパンジーのうち、１匹のチンパンジーから３２週目に最初にウィルスが単離されたが、２匹目と３匹目のチンパンジーは、１２力月を通して全ての検定によりウィルス陰性であった。３匹目の動物は、７力月の追跡期間中ウィルス陰性であり続けた。これらの結果は、免疫することによりＨＩＶ −１に対する防御を惹起するか又はその感染を著しく遅延させることが可能であるということを意味しており、かくしてＨＩＶ−１ワクチンの開発のための基礎となるものである。

杯社旦方伝被験動物。本研究で使用した動物は、以前にＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、非Ａ非Ｂ型肝炎の実験で使用されたことがある成熟した雄のチンパンジーであった。チンパンジーは、ニューヨーク大学医療センター、ＬＥＭＳ　Ｉ　Ｐで、生物学的安全性レベル３の施設内で維持されていた。全ての実験手順は、感染病の封じ込め及び霊長類の人間的配慮及び取扱いについての内部指針に従って行なった（Ｍｏｏｒ −Ｊａｎｋｏｗｓｋｉ、　Ｊ、　＆　Ｍａｈｏｎｅｙ、　Ｃ，Ｊ、（１９８９）　Ｊ、　Ｍｅｄ。

Ｐｒｉｍａｔｏｌ、　１８．１−２６３゜免疫原。ショ糖勾配で精製した全ＨＩＶは、０．０２５％ベーター−プロピオラクトンとの、それに続いて０．０２５％ホルマリンとのインキュベーションによって、不活性化し、免疫されたチンパンジーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からウィルスを単離できなかったことによって感染性ウィルスを含んでいないことを示した（Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ、、　Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、、　Ｇｌｕｃｋｍａｎ、　Ｊ、Ｃ，、Ｂａｒｒｅ−３ｉｎｏｕｓｓｉ。

Ｆ、、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、　＆　Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、（１９９０）、　ｒ性感染病に対するワクチン（Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｆｏｒ　５ｅｘｕａｌｌｙ　Ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ　ＤｉｓｅａｓｅｓＪ　Ｊ中。

Ｍｅｈｅｕｓ、　Ａ、　＆　５ｐｉｅｒ、　Ｒ，編（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ　Ｃｏ、、　Ｌｔｄ、、ロンドン）。

ｐｐ　２２７−２３７］。ｇｐ１２０／４１切断部位を破壊し、ｇｌ）’４１のアンカー（固定）ドメインを除去するよう部位特異的突然変異誘発によって変更されたｇｐ１６０ｅｎｖ遺伝子を発現する組換え型ワクシニアウィルスである、ＶＶ−１１６３に感染したＢＨＫ２１細胞の培地から、組換え型ｇｐ１６０ｅｎｖを精製した。［Ｋｉｅｎｙ。

Ｍ、Ｐ、、　Ｌａｔｈｅ、　Ｒ，、Ｒｉｖｉｅｒｅ、　Ｙ、、　Ｄｏｌｔ、　Ｋ、、　Ｓｃｈｍｉｔｔ、　Ｄ、。

Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ、、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、　＆　Ｌｅｃｏｃｑ、　Ｊ、Ｐ、（１９８８）　Ｐｒｏｔ。

Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　２．２１９−２２６；及びＳｃｈｍｉｄｔ、　Ｄ、、　Ｄｅｚｕｔｔｅｒ−Ｄａｍｂｕｙａｎｔ。

Ｃ，、Ｈａｎａｕ、　Ｄ、、　Ｓｃｈｍｉｔｔ、　Ｄ、Ａ、、　Ｋｏｌｂｅ、　Ｈ，ＶＪ、、　Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、。

Ｃａｚｅｎａｖｅ、　Ｊ、Ｐ、　＆　Ｔｈ１ｖｏｌｅｔ、　Ｊ、（１９８９）　Ｃｏｍｐｔｅｓ　Ｒｅｎｄｕｓ　Ａｃａｄ。

Ｓｅｔ、　Ｐａｒｉｓ、　３０ｇ　（Ｉ’ｌ＋）、　２６９−２７５）　、指示がある場合、記載されているとおり、それぞれＥ、　ｃｏｌｉ　ｐＴＧ２１５３、ｐＴＧ１１６６及びｐＴＧ１１４９から精製された組換え型ｐ１８ｇａｇ、ｐ２７ｎｅｆ及びｐ２３ｖｉｆ抗原と、この抗原を混合した［Ｇｕｙ、　Ｂ、　。

Ｒｉｖｉｅｒｅ、　Ｙ、、　Ｄｏｔｔ、　Ｋ、　Ｒｅｇｎａｕｌｔ、　Ａ、　＆　Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　１７６、４１３−４２５；及びＫｏｌｂｅ、　Ｈ，Ｖ、、　Ｊａｅｇｅｒ、　Ｆ、、　Ｌｅｐａｇｅ。

Ｐ、、　Ｒｏｉｔｓｃｈ、　Ｃ，、Ｌａｃａｕｄ、　Ｇ、、　Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、、　５ａｂａｔｉｅ、　Ｊ、。

Ｂｒｏｗｎ、　Ｓ、Ｗ、　＆　Ｌｅｃｏｃｑ、　Ｊ、Ｐ、（１９８９）　Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　４７６゜９９−１１２］。各々、免疫の前に、不活性化した全ＨＩＶ　（２５０量ｇのウィルスタンパク質）又は精製された組換え型タンパク質（各々１用量につき１２５〜１５０νｇ）をアジュバント５ＡＦ−１と混合し［Ａ１１ｉｓｏｎ、　Ａ、Ｃ，、＆　Ｂｙａｒｓ、　Ｎ、Ｅ、（１９８６）　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ９５、１５７−１６８　］　、　２−の混合物を筋向（ＩＭ）注射した。

配列Ｙ−ＮＴＲＫＳ　Ｉ　ＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮを有する２５アミノ酸のペプチドのアリコート（１９，８ｍｇ）［Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、Ｄ、、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｔ、Ｊ、、　Ｒｏｂｅｙ、　Ｗ、Ｇ、、　Ｌｙｎｎ、　Ｄ、Ｌ、。

Ｒｏｂｅｒｔ−Ｇｕｒｏｆｆ、　Ｍ、、　Ｍｕｅｌｌｅｒ、　Ｗ、Ｔ、、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｌ、、　Ｇｈｒａｙｅｂ。

Ｊ、、　Ｐｅｔｔｅｗａｙ、　Ｓ、Ｒ，、Ｗｅｉｎｈｏｌｄ、　Ｋ、Ｊ、、　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、　Ｐｊ、、　Ｗｏｎｇ−３ｔａａｌ、　Ｆ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，＆　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄ、Ｐ、（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ２３４、１３９２−１３９５；　Ｒｕ５ｃｈｅ、　Ｊ、Ｒ，、Ｋａｖａｈｅｒｉａｎ、　Ｋ、、　ＭｃＤａｎａｌ、　Ｃ，。

Ｐｅｔｒｏ、　Ｊ、、　Ｌｙｎｎ、　Ｄ、Ｌ、、　Ｇｒｉｍａｉｌａ、　Ｒ，、Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、、　Ｇａ１ｌｏ。

Ｒ，Ｃ，、Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、０．、　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、　Ｐ、Ｊ、、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄ、Ｐ、。

Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、Ｄ、　＆　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｔ、Ｊ、　（１９８８）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

Ｕ、Ｓ、Ａ、　８５．３１９８−３２０２；及びＬａＲｏｓａ、　Ｇ、Ｊ、、　Ｄａｖｉｄｅ、　Ｊ、Ｐ、。

Ｗｅｉｎｈｏｌｄ、　Ｋ、、　Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ、　Ｊ、Ａ、、　Ｐｒｏｆｙ、　Ａ、Ｔ、、　Ｌｅｗｉｓ、　Ｊ、Ａ、。

Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｊ、、　Ｄｒｅｓｓｍａｎ、　Ｇ、Ｒ，Ｂｏｓｗｅｌｌ、　Ｒ，Ｎ、、　５ｈａｄｄｕｃｋ、　Ｐ、。

Ｈｏ１ｌｅｙ、　Ｌ、Ｈ，、Ｋａｒｐｌｕｓ、　Ｍ、、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄ、Ｐ、、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　ＴＪ。

Ｅｍｉｎｉ、　Ｅ、Ａ、　＆　Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、Ｄ、　（１９９０）　５ｃｉｅｎｃｅ　２４９：　９３２−９３５］を、まずシトラコン酸で処理し、次にビス−ジアゾベンチジンを用いたＮ末端チロシル連結（リンケージ）により、１９．３ｍｇのキーホールリンペット（カサガイ）ヘモシアニン（ＫＬＨ）とカップリングさせた。アミノ基上のブロックを除去した後、ペプチド−ＫＬＨコンジュゲートを、２４時間ＰＢＳに対して透析して、過剰の遊離ペプチドを除去した。５ＡＦ−１を用いて処方した後、ＩＭ（筋向）経路で■３ペプチドーＫＬＨコンジュゲート（１用量にっき３００量１ｇのペプチド）を用いて免疫した。

抗原投与ウィルス。抗原投与接種物は、ＨＩＶ−１のＨＴＬＶ−ＩＩＩＢ株（Ｌ、　Ａｒｔｈｕｒより入手）の−保存株からのものであり、これは、チンパンジーにおいて滴定され、その他のＨＩＶワクチン抗原投与研究で用いられていた［Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、０．、　Ｂｅ５ｓ、　Ｊ、Ｗ、、　Ｗａｔｅｒｓ。

Ｄ、Ｊ、、　Ｐｙｌｅ、　Ｓ、Ｗ、、　Ｋｅｌｌｉｈｅｒ、　Ｊ、Ｃ，、Ｎａｒａ、　Ｐ、Ｌ、、　Ｋｒｏｈｎ、　Ｋ、。

Ｒｏｂｅｙ、　Ｗ、Ｇ、、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｊ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，＆　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、　Ｐ、Ｊ。

（１９８９）　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　６３．５０４６−５０５３；及びＢｅｒｍａｎ、　Ｐ、Ｗ、、　Ｇｒｅｇｏｒｙ。

Ｔ、Ｊ、、　Ｒｉｄｄｌｅ、　Ｌ、、　Ｎａｋａｍｕｒａ、　Ｇ、Ｒ，、Ｃｈａｍｐｅ、　Ｍ、Ａ、、　Ｐｏｒｔｅｒ。

Ｊ、Ｐ、、　Ｗｕｒｍ、　Ｆ、Ｍ、、　Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇ、　Ｒ，Ｄ、、　Ｃｏｂｂ、　Ｅ、に、　＆　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ。

Ｊ、Ｗ、（１９９０）　Ｎａｔｕｒｅ　（ロンドン’）　３４５．６２２−６２５］　、このＨＩ　Ｖ−１保存株の感染性力価は、チンパンジーについて１−当り４ＸＩＯ”感染性単位及び１０　’　ＴＣＩＤ、、であると考えられている。

チンパンジーは、■−の１：１００希釈溶液を用いてＩＶ（静脈内）で抗原投与した。これらの同じ１：１００の希釈溶液のアリコートを、２倍ずつの連続希釈と、９６ウエルのマイクロタイタープレート内でのｌ　Ｘ　１０’のＨ９細胞の感染により、４組ずつで滴定した。

６日間のインキュベーションの後、免疫蛍光検定により感染を記録した。この方法により、抗原投与接種物は、第１のアリコートについては６４を超える免疫蛍光フォーカス形成単位（終点に到達せず）の力価を、又、第２のアリコートについては１７０単位の力価を有していた。

中和検定。免疫されたチンパンジーからの血清試料の中和活性を、記載されているとおりに［Ｎａｒａ、　Ｐ、Ｌ、、　Ｈａｔｃｈ、　Ｗ、Ｃ，、Ｄｕｎｌｏｐ。

Ｎ、Ｍ、、　Ｒｏｂｅｙ、　Ｗ、Ｇ、、　Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、０．、　Ｇｏｎｄａ、　Ｍ、Ａ、　＆　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ。

Ｐ、Ｊ、（１９８７）　ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ、Ｈｕｍａｎ　ＲｅｔｒｏｖＬｒｕｓｅｓ　３．　２８３−３０２　］　、ＣＥＭ−３Ｓ細胞におけるシンシチウム形成の阻害により、又はＨ９細胞における免疫蛍光フォーカスの阻害によって測定した。

ウィルス単離。記載されたとおりに、免疫され、抗原投与されたチンパンジーからの（吸引液として得られた）ＰＢＭＣ又は骨髄細胞を、正常なヒトＰＢＭＣと共に培養した［Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、Ｎ、。

ＭｃＣｌｕｒｅ、　Ｈ，Ｍ、、　Ｓｗｅｎｓｏｎ、　Ｒ，Ｂ、、　ＭｃＧｒａｔｈ、　Ｃ，Ｒ，、Ｂｒｏｄｉｅ、　Ａ、。

Ｇｅｔｃｈｅｌ、１．　Ｊ、Ｐ、、　Ｊｅｎｓｅｎ、　Ｆ、Ｃ，、Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、Ｃ，、Ｂｒｏｄｅｒｓｏｎ。

Ｊ、Ｒ，＆Ｆｒａｎｃｉｓ、　Ｄ、Ｐ、　（１９８６）　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　５８．１１６−１２４　］　、いくつかの実験においては、ＣＤ８細胞表面抗原に特異的なモノクローナル抗体を付着させた磁気ビーズを用いた分離により（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ。

Ｒｏｂｂｉｎｓ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）　、チンパンジーのＰＢＭＣから、ＣＤ”　４が富化されたリンパ球を得た。ＣＤ’　４が富化された細胞は、１０％ウシ胎児血清、グルタミン、ゲンタマイシン及び組換え型インターロイキン−２（８単位／ｄ　；　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を含むＲＰＭＩ −１６４０培地中で、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）で刺激された正常なヒトＰＢＭＣと同時培養するか又は単独で培養する前に、２日間コンカナバリンＡ（１０μｇ　／　ｍｌ　）で刺激した。

生検によって得られたリンパ節組織をハサミで切り刻み、ヒトＰＢＭＣと共に培養した。全ての培養を、６週間維持し、逆転写酵素活性について監視してから、廃棄した。

ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）。単一（シングル）及び複数（ダブル）ラウンド（重複；　ｎｅｓｔｅｄ）　Ｐ　ＣＲは、両方共、抗原投与を受けたチンパンジーからのＰＢＭＣ又はリンパ節細胞を用いて定期的に行なった。単一ラウンドＰＣＲは、記載どおりであった［Ｌａｕｒｅ、　Ｆ、、　Ｒｏｕｚｉｏｕｘ、　Ｃ，、Ｖｅｂｅｒ、　Ｆ、、　Ｊａｃｏｍｅｔ　Ｃ，、Ｃｏｕｒｇｎａｕｄ。

Ｖ、、　Ｂｌａｎｃｈｅ、　Ｓ、、　Ｂｕｒｇａｒｄ、　Ｍ、、　Ｇｒｉｓｃｅｌｌｉ、　Ｃ，＆　Ｂｒｅｃｈｏｔ、　Ｃ。

（１９８８）　Ｌａｎｃｅｔ　２．５３８−５４１）　、簡単に言うと、２単位のＴａｑ−Ｉ　ＤＮＡポリメラーゼと共に２μｇのＤＮＡを用いて、９４℃、５５℃及び７２℃（各１分間）での４０サイクルを行なった。２つのプライマー対を使用した。すなわち、一方は、ｐｏｌ遺伝子によりコードされるヌクレオチド２３９３〜２４１７及び２６７５〜２７００に相当し、もう一方は、ｔａｔ遺伝子によりコードされるヌクレオチド５３６７〜５３８５及び５６９４〜５７１１に相当する。ＰＣＨの特異性を示すため、増幅されたＤＮＡフラグメントを、［ ”Ｐ］で標識された内部ｐｏｌ及びｔａｔ遺伝子プローブを用いてハイブリダイズさせた。陽性対照は、連続的にＬＡＶ−１に感染した８Ｅ５セルラインからのＤＮＡで構成されていた。重複ＰＣＨについては、記載どおり［Ｍｕｌｌｉｓ、　Ｋ、Ｂ、　＆　Ｆａｌｏｏｎａ、　Ｆ、Ａ。

（１９８７）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　１５５．３３５−３５０）に行なった、ＰＣＨの第１ラウンドのためのプライマーは、以下のとおりであった：ＨＸＢ２ゲノムの３塩基クランプ配列、ＸｂａＩ制限部位及びヌクレオチド１０２５〜１Ｏ４８に相当す６５′−ＧＣＴＴＣＴＡＧＡＴＡＡＴＡＣＡＧＴＡＧＣＡＡＣＣＣＴＣＴＡＴＴＧ−３’　、及び：ＨＸＢ２ゲノムの３塩基クランプ配列、ＮｏｔＩ制限部位及びヌクレオチド５５７３〜５５５３に相当す６５′ −ＧＴＣＧＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＧＧｃＴＴＧＴＴｃｃＡＴｃＴＡＴＣ−３′。第１ラウンドからの、２．５ｐＪ！の産物を、ＨＸＢ２ゲノム上のヌクレオチド１３６６〜１５ｏ７がらの領域にわたり、プライマー５Ｋ１４５及び５Ｋ１５０で再増幅さセタ［Ｋｗｏｋ、　Ｓ、　＆Ｋｅｌｌｏｇｇ、　Ｄ、　Ｅ、　（１９９０）　、ｒ　Ｐ　ＣＲプロトコール二方法及び応用の指針（Ｐ（：ＲＰｒｏｔｏｃｏｌｓ：　Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）　Ｊ　。

Ｉｎｎ１ｓ、　Ｍ、Ａ、、　Ｇｅ１ｆａｎｄ、　Ｄ、Ｈ，、５ｎｉｎｓｋｙ、　Ｊｊ、　＆　Ｗｈｉｔｅ　ＴＪ、編（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、　ＧＡ）　ｐｐ、　３３７−３４７　］。

免疫養生法（表９）Ｃ−４３３及びＣ−３３９については、免疫及びウィルス抗原投与の回数は、Ｃ −４３３がＶＶ−１１３９での最初の免疫を受けた、０週目とみなされる時点から計算した。チンパンジーＣ−４３３は、まず最初に、ＨＩＶ　１ａ＋＋ｕ　ｇｐ１６０．ｎｖ抗原の切断不可能なバージョンを発現する組換え型ワタシニアウィルスであるＶＶ−１１３９を用いて免疫した〔に１ｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、、　Ｌａｔｈｅ　Ｒ，。

Ｒｉｖｉｅｒｅ、　Ｙ、、　Ｄｏｔｔ、　Ｋ、、　Ｓｃｈｍｉｔｔ、　Ｄ、、　Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ、、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ。

Ｌ、　＆　Ｌｅｃｏｃｑ、　Ｊ、Ｐ、（１９８８）　Ｐｒｏｔ、　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　２．２１９−２２６　］。

二又針で上部背面を乱切することによって、０週目、８週目及び２１週目にＶＶ −１１３９を投与した（１接種物当’）２Ｘ１０’ＰＦＵ）、２７週目に、Ｃ− ４３３がら（７）ＰＢＭＣをＰＨＡで刺激し、ＩＬ−２を含む培地で培養し、次にｍ、ｏ、ｉ、（感染多重度）７でＶＶ−１１３９に感染させた。さらに１６時間培養した後、ＰＢＭＣを０．８％パラホルムアルデヒドで固定し、ＩＶ（静脈内）経路でＣ−４３３に再注射した（Ｚａｇｕｒｙ、　Ｄ、、　Ｂｅｒｎａｒｄ。

Ｊ、、　Ｃｈｅｙｎｉｅｒ、　Ｒ，、Ｄｅｓｐｏｒｔｅｓ、　１．、　Ｌｅｏｎａｒｄ、　Ｒ，、Ｆｏｕｃｈａｒｄ、　Ｍ、。

Ｒｅｖｅｉｌ、　Ｂ、、　Ｉｔｔｅｌｅ、　Ｆ、Ｄ、、　Ｌｕｒｈａｍａ、　Ｚ、、　Ｍｂａｙｏ、　Ｋ、、　Ｗａｎｓ、　Ｊ、。

５ａｌａｕｎ、　ｊ、Ｊ、、　Ｇｏｕｓｓａｒｄ、　Ｂ、、　Ｄｅｃｈａｚａｌ、　Ｌ、、　Ｂｕｒｎｙ、　Ａ、、　Ｎａｒａ。

Ｐ、　ｇＩＧａｌｌｏ、　Ｒ，Ｃ，（１９８ｇ）　Ｎａｔｕｒｅ　（ロンドン）　３２２．７２８−７３１１　。

４８週、５４週、５８週、８１週、８６週、８８週、１１４週及び１２４週目に、Ｃ−４３３に、５ＡＦ−１を用いて処方した精製されたｇｐ１６０ｅｎｖ％ｐ１８ｇａｇ、ｐ２７ｎｅｆ及びｐ２３ｖｉｆ　（１用量当り各々１２５〜２５０ μｇ）の混合物をＩＭ（筋向）接種した。

チンパンジーＣ−３３９は、５ＡＦ−１（１ｍｇのトレオニルムラミルジペプチド）と混合した不活性化ＨＩＶ（１２５μｇのウィルスタンパク質）のＩＭ（筋向）注射により、３３週目に最初に免疫し、その後、３７週目、４１週目、６２週目及び１２４週目に追加免疫接種を行なった。次に、Ｃ−３３９は、６６週、７４週、８１週、８５週及び８７週目に、精製されたｇｐ１６０ｅｎｖのみ（１用量につき１２５νｇ）の接種を受けた。１０５週、１０８週及び１２６週目にＩＭ（筋向）に■３ペプチド（１用量当り３００μｇのペプチド）を投与した。

１３１週目に、１００ＴＣＩＤＳ。のＨＩ　Ｖ　Ｉ　ＨＴＬＶ−１１１８を用いて、Ｃ−３３９及びＣ−４３３に抗原投与した。０週、６週、１０週、３３週、３８週、６６週及び７６週目に、ｇｐ１６０ｅｎｖ、ｐ１８ｇａｇ及び５ＡＦ− １の混合物をＣ−４４９にＩＭ（筋向）接種した。（注：Ｃ−４９９についてのＯ透口は、Ｃ−４３３及びＣ−３３９についての４８週目に相当する）。２１種の遊離ｖ３ペプチド（１用量当り各々１０１００Ｕの混合物を、７９週目、８３週目、８７週目及び１０２週目に、５ＡＦ−１と共にＩＭ（筋向）投与した。特定の投薬を受けたことのない対照であるＣ−４９９及びＣ−０８７は、１００　ＴＣＩＤ８゜のＨＩ　Ｖ）ＩＴＬＶ−１１１１１で１０６週目に抗原投与した。

■ アジュバントＳＡＦ　１と混合した、ホルマリン及びベーター−プロピオラクトンで不活性化した全ＨＩＶを用いてのチンパンジーＣ−３３９の免疫は、結果として、酵素免疫測定法（Ｅ　Ｉ　Ａ）で測定した場合のｇａｇ及びｅｎｖにコードされたタンパク質に対する高い力価の抗体、低い中和抗体応答、及び検出可能な細胞媒介免疫応答の欠如をもたらした。免疫応答を増強させることを目的として、Ｃ−３３９を、精製された組換え型ｇｐ１６０ｅｎｖで免疫した。胸部の複数の部位へのＢＣＧを用いたｇｐ１６０ｅｎｖの１回の皮内接種の後、５ＡＦ− １を用いて処方した同じ抗原の４回の連続したＩＭ（筋向）注射を、Ｃ−３３９に行なった。総ＥＲＡ抗体及び中和抗体の力価は、定期的に決定した。しかしながら、免疫の期間中、両方とも変化のない状態にとどまり、注射が中止された後、急速に減少した（図６Ａ）。

ＨＩＶ感染者においては、ＨＩＶ中和抗体の大部分は、■３ループと呼ばれる外部エンベロープ糖タンパク質の第３の高度可変領域に対して向けられている。［Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、Ｄ、、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｔ、Ｊ、。

Ｒｏｂｅｙ、　Ｗ、Ｇ、、　Ｌｙｎｎ、　Ｄ、Ｌ、、　Ｒｏｂｅｒｔ−Ｇｕｒｏｆｆ、　Ｍ、、　Ｍｕｅｌｌｅｒ、　Ｗ、Ｔ、。

Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｌ、、　Ｇｈｒａｙｅｂ、　Ｊ、、　Ｐｅｔｔｅｗａｙ、　Ｓ、Ｒ，、Ｗｅｉｎｈｏｌｄ、　Ｋ。

Ｊ、、Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、Ｐ、Ｊｌ、Ｗｏｎｇ−３ｔａａ１．　Ｆ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，＆Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄ、Ｐ、　（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３４．１３９２−１３９５；　Ｒｕ５ｃｈｅ、　Ｊ、Ｒ，。

Ｋａｖａｈｅｒｉａｎ、Ｋ、、　ＭｃＤａｎａｌ、　Ｃ，、Ｐｅｔｒｏ、Ｊ、、Ｌｙｎｎ、　Ｄ、Ｌ、。

Ｇｒｉｍａｉｌａ、　Ｒ，、Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，、Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、０．。

Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、　Ｐ、Ｊ、、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄ、Ｐ、、　Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、Ｄ、　＆　Ｍａｔｔｈｅｗｓ。

Ｔ１．　（１９１！８）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、υ、Ｓ、Ａ、　３５．３１９８−３２０２；及びＬａＲｏｓａ、　ＧＪ、、　Ｄａｖｉｄｅ、　Ｊ、Ｐ、、　Ｗｅｉｎｈｏｌｄ、　Ｋ、、　Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ。

Ｊ、Ａ、、　Ｐｒｏｆｙ、　Ａ、Ｔ、、　Ｌｅｗｉｓ、　Ｊ、Ａ、、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｊ、、　Ｄｒｅｓｓｍａｎ。

Ｇ、Ｒ，、ＢｏｓｗｅＬｌ、　Ｒ，Ｎ、、　５ｈａｄｄｕｃｋ、　Ｐ、、　Ｈｏ１ｌｅｙ、　Ｌ、Ｈ，、Ｋａｒｐｌｕｓ。

Ｍ、、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄ、Ｐ、、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｔ、Ｊ、、　Ｅｍｉｎｉ、　Ｅ、Ａ、　＆　Ｐｕｔｎｅｙ。

Ｓ、Ｄ、　（１９９０）　５ｃｉｅｎｃｅ　２４９．９３２−９３５］　、　コのループ内のエピトープに対する抗体は、おそらくは標的細胞膜に対するウィルスエンベロープの融合を妨げることにより、ウィルス感染力を失わせる。

実際、Ｖ３エピトープに対する中和抗体は、ウィルスが細胞に結合した４０〜６０分も後に添加され、なお感染を防ぐことができる（Ｎａｒａ、　Ｐ、　Ｌ、　、　（１９８９）　ｒワクチン８９　（Ｖａｃｃｉｎｅｓ　８９）　Ｊ中、　Ｌｅｒｎｅｒ。

Ｒ，Ａ、、　Ｇｉｎｓｂｅｒｇ、　Ｈ，、Ｃｈａｎｏｃｋ、　Ｒ，Ｍ、　＆　Ｂｒｏｗｎ、　Ｆ、編（Ｃｏｌｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、　ＮＹ）　ｐｐ、　１３７− １４４］。

従って、ｖ３ループを用いての免疫が中和抗体力価を急上昇させるか否かを決定するために、Ｃ−３３９に、５ＡＦ−１を用いて処方された、ＨＩ　Ｖ　−１＠＊ｕ　ｔ＋　＋　＋ａ＋のｖ３配列をもち、ＫＬＨに架橋結合された２５アミノ酸のオリゴペプチドを注射した。ＥＩＡ力価には、いかなる変化も見られなかった（図６Ａ）が、１０８週目における２回目の免疫の後、数カ月間維持された中和抗体力価の著しい増加が見られた（図７Ａ）。

ＶＶ−１１３９での予防接種によりブライミングされたもう１匹のチンパンジー、Ｃ−４３３［Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、、　Ｌａｔｈｅ、　Ｒ，、Ｒｉｖｉｅｒｅ。

Ｙ、、　Ｄｏｔｔ、　Ｋ、、　Ｓｃｈｍｉｔｔ、　Ｄ、、　Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ、、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ　＆Ｌｅｃｏｃｑ、　Ｊ、Ｐ、　（１９８８）　Ｐｒｏｔ、　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　２．２１９−２２６］を、各々１２５〜２５０ｕｇの組換え型可溶性ｇｐ１６０ｅｎｖ、ｐ１８ｇａｇ、ｐ２７ｎｅｆ及びｐ２３ｖｉ　ｆで反復的に免疫した（表１）。この養生法により誘発された抗ＨＩＶ抗体応答は、明らかに一時的であり、力価は各々の追加免疫注射の後に急激に上昇し、次いで迅速に減少していた（図６Ｂ）。Ｃ−４３３の中和抗体及びＥＩＡ力価は、平行して変動した。最後に、Ｃ−４３３に、同じ免疫プロトコールに従って、Ｃ−３３９と同じｖ３ペプチド−ＫＬＨコンジュゲートを注射した。中和抗体力価は、ｖ３−ペプチドコンジュゲートの２回目の注射の後に著しく増加し、その後高し）状態にとどまつな（図７Ａ）。４力月後（１２６週目）の３回目の免疫は、力価の変化を全く惹起しなかった。

Ｃ−４３３が精製された組換え型タンパク質を最初に受けた時点（４８週目）に、３匹目のチンパンジー、Ｃ−４９９は、５ＡＦ−１を用いて処方した精製されたｇｐ１６０ｅｎｖ及びｐ１８ｇａｇのＩＭ（筋向）注射を受けた。Ｃ−４９９は、同じ抗原の６回の追加免疫接種を受け、その後、５ＡＦ−１中の２１種の遊離（コンジュゲート化していない）Ｖ３ペプチドの混合物（Ｍｙｅｒｓ、　Ｇ。

（１９９０）　ｒヒトレトロウィルスとＡ　Ｉ　Ｄ　Ｓ　（Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ａｎｄＡＩＤＳ）　Ｊ中、　１Ａｙｅｒｓ、　Ｇ、、　Ｊｏｓｅｐｂｓ、　Ｓ、Ｆ、、　Ｗｏｎｇ−３ｔａａｌ、　Ｆ、。

Ｒａｂｓｏｎ、　Ａ、Ｂ、、　Ｓ＋＋＋４ｔｈ、　Ｔ、Ｆ、　＆　Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ、　Ｊ、Ａ、編（Ｌｏｓ　ＡｌａｍｏｓＮａｔｉｏｎａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｌｏｓ　Ａｌａｍｏｓ、　ＮＭ　］の一連の４回の注射を受けた。

Ｃ−３３９及びＣ−４３３の場合と同様に、Ｃ−４９９のＥＩＡ力価は、精製されたＨＩＶ抗原での免疫の後に急激に減少し、ＥＩＡ力価に対するｖ３ペプチドの検出可能な影響は全くなかった。しかしながら、■３ペプチドの接種後、中和抗体力価は著しく増加した（＞２，０００まで）（図７Ｂ）。

感染性ＨＩＶでの抗原投与。持続的な中和抗体力価が達成されたため、チンパンジー、Ｃ−４３３、Ｃ−３３９及びＣ−４９９に対して、１００ＴＣＩＤｓｏ　（４０チンパンジー感染用量）のＨＩＶ−１のＩＶ（静脈内）接種による抗原投与を行なった。抗原投与の時点で、チンパンジーＣ−４３３、Ｃ−３９９及びＣ −４９９について、免疫蛍光阻害検定による５０％中和力価は、それぞれ１：２，０００、ｌ　：　２８０〜３５０及び１：２，０００であり、シンシチウム阻害検定［Ｎａｒａ、　Ｐ、Ｌ、、　Ｈａｔｃｈ、　Ｗ、Ｃ，、Ｄｕｎｌｏｐ。

ＰＪ、　（１９８７）　ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ、　）ｌｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　３．２８３−３０２　］による９９０％中和力は、それぞれｌ　：　５　］、　２〜ｌ、０２４．１：１２８及び１　：　１．０２４であった。Ｃ− ４９９の免疫はその他の２匹のチンパンジーと異なる時点で開始したため、Ｃ− ３９９及びＣ−４３３の抗原投与から６力月後にＣ−４９９の抗原投与を行なったが、これは、特定の投薬を受けたことのない対照動物Ｃ−０８７の抗原投与と同時に行なった。接種後（ＰＩ）２週目ならびにその後のあらゆる時点で、Ｃ− ０８７のＰＢＭＣからウィルスが単離され、我々の条件下でＨＩ　Ｖ−１保存株の１：１００希釈溶液が容易にチンパンジーに感染したことがわかった。

免疫され、抗原投与されたチンパンジーから、ＨＩＶを単離する試み。ＨＩＶ− １での抗原投与後のさまざまな時点で、免疫された動物の感染状態を評価するために３つの方法を使用した。まず最初に、リンパ系細胞内のＨＩＶ配列をＰＣＲにより検出しようとする試みを定期的に行なった（Ｌａｕｒｅ、　Ｆ、、　Ｒｏｕｚｉｏｕｘ、　Ｃ，、Ｖｅｂｅｒ。

Ｆ、、　Ｊａｃｏｍｅｔ、　Ｃ，、Ｃｏｕｒｇｎａｕｄ、　Ｖ、、　Ｂｌａｎｃｈｅ、　Ｓ、、　Ｂｕｒｇａｒｄ、　Ｍ、。

Ｇｒｉｓｃｅｌｌｉ、　Ｃ，＆Ｂｒｅｃｈｏｔ、　（：、、（１９８８）　Ｌａｎｃｅｔ　２．５３８−５４１；Ｍｕｌｌｉｓ、　Ｋ、Ｂ、　＆　Ｆａｌｏｏｎａ、　Ｆ、Ａ、（１９８７）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　１５５゜３３５−３５０．及びＫｗｏｋ、　Ｓ、　＆　Ｋｅｌｌｏｇｇ、　Ｄ、Ｅ、　（１９９０）、ｒＰＣＲプロトコール：方法及び応用の指針（ＰＣＲＰｒｏｔｏｃｏｌｓ：　Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｍｅｔｈｏｄｓａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｌ　Ｊ中、　Ｉｎｒ＋ｔｓ、　Ｍ、Ａ、、　Ｇｅ１ｆａｎｄ、　Ｄ、Ｈ，、５ｎｉｎｓｋｙ。

Ｊ、Ｊ、　＆　Ｗｈｉｔｅ、　Ｔ、Ｊ、編（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、　ＣＡ）りｆ１．３３７−３４７　］。抗原投与後、３週目、３力月目及び６力月目に、３匹のチンパンジーのＰＢＭＣから得たＤＮＡ試料をテストした。

対照ＨＩＶ感染チンパンジーからのＤＮＡには予想された電気泳動移動度のバンドが検出されたが、予防接種及び抗原投与を受けた動物からの、又は特定の投薬を受けていない対照の動物からのＰＢＭＣには、検出されなかった（データ示さず）。抗原投与から６力月目に、重複したプライマーセットを用いて、抗原投与を受けたチノパンツー及び対照のチンパンジーのＰＢＭＣ及びリンパ節組織の両方からのＤＮＡについてＰＣＲ分析を行なった［Ｍｕｌｌｉｓ、　Ｋ。

Ｂ、　＆　Ｆａｌｏｏｎａ、　Ｆ、Ａ、（１９＋＋７）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、１５５．　３３５−３５０］。この技術は、標準的ＰＣＲよりもさらに感度が高く、これらの実験（全ての試料について少なくとも７回反復した）では、ウィルスＤＮＡのおよそ１つの分子が、１．５ＸＩＯ’細胞に等価のＤＮＡ中に存在すれば、強いシグナルを生成することがわかった。全てのＰＢＭＣ及びリンパ節試料は、常に陽性であった事前に感染したチンパンジーからのものを除いて、−貫して陰性であった（図８）。従って、抗原投与から６力月後に、ウィルスＤＮＡは、１０６細胞につき１コピーよりも大きい頻度でＰ　ＢＭＣ及びリンパ節組織に存在しなかった。

第２に、２週目、４週目、６週目及び８週目、そしてその後は１力月間隔で、正常なヒトから得たリンパ球とのチンノ（ンジーのＰＢＭＣの同時培養によってＰＢＭＣからウィルスを単離する試みを行なった［Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、Ｎ、、　ＭｃＣｌｕｒｅ、　Ｈ，Ｍ、、　Ｓｗｅｎｓｏｎ、　Ｒ，Ｂ、。

ＭｃＧｒａｔｈ、　Ｃ，Ｒ，、ＢｒｏｄＬｅ、　Ａ、、　Ｇｅｔｃｈｅｌｌ、　Ｊ、Ｐ、、　Ｊｅｎｓｅｎ、　Ｆ、Ｃ，。

Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、Ｃ，、Ｂｒｏｄｅｒｓｏｎ、　Ｊ、Ｒ，＆　Ｆｒａｎｃｉｓ、　Ｄ、Ｐ、　（１９８６）　Ｊ。

Ｖｉｒｏｌ、、　５８．１１６−１２４　］　、　ＣＤ８’細胞は、ＨＩＶに感染したヒト［Ｗａｌｋｅｒ、　Ｃ，Ｍ、、　Ｍｏｏｄｙ、　Ｄ、Ｊ、、　５ｔｉｔｅｓ、　Ｄ、Ｐ、　＆　Ｌｅｖｙ、　Ｊ、Ａ。

（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３４．１５６３−１５６６；及びＴｓｕｂｏｔａ、　Ｈ，、Ｌｏｒｄ、　Ｃ，１，。

Ｗａｔｋｉｎｓ、　Ｄ、１．、　Ｍｏｒｉｍｏｔｏ、　Ｃ，＆　Ｌｅｔｖｉｎ、　Ｎ、Ｌ、　（１９８９）　Ｊ、　Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、１６９．１４２１−１４３４１及びチンパンジー［Ｐ、Ｎ、Ｆ、、未公開データ］においてのみならず、ＳＩＶに感染したマカク［Ｔｓｕｂｏｔａ、　Ｈ，。

Ｌｏｒｄ、　Ｃ：、１．、　Ｗａｔｋｉｎｓ、　Ｄ、１．、　Ｍｏｒｉｍｏｔｏ、　Ｃ，＆　Ｌｅｔｖｉｎ、　Ｎ、Ｌ。

（１９８９）　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１６９．１４２１−１４３４］においてもウィルス複製を抑制することが示されてぎたため、いくつかの実験においては、培養が確立する前にチンパンジーのＰＢＭＣからＣＤ８°リンパ球が枯渇していた。対照動物Ｃ−０８７からのウィルス回収とは対照的に、ウィルスは、追跡の最初の６力月の間のどの時点においても、Ｃ−３３９、Ｃ−４３３又はＣ −４９９からの総ＰＢＭＣ又はＣＤ４”富化細胞のいずれからも回収されなかった。ＰＩ（接種後）６力月目で、全ての動物ならびに未感染及びＨＩＶ感染対照チンパンジーについて、鼠径リンパ節生検を行なった。正常なヒトＰＢＭＣと同時培養すると、ウィルスは、感染した対照のリンパ節からは回収されたが、免疫及び抗原投与を受けたチンパンジーのリンパ節からは回収されなかった（データ示さず）。抗原投与後最初の６力月間にウィルスを検出しようとする全ての試みが失敗したという事実にも拘わらず、Ｃ−４３３の、３２週目に得たＰＢＭＣｌ及びその後は抗原投与後３７週目に得た骨髄の同時培養から、ウィルスが単離された。

最後に、免疫養生法の中に含まれていなかったＨＩＶ抗原に対するセロコンバージジンの可能性について、抗原投与を受けたチンパンジーを監視した。イムノプロット分析（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　Ｐａ５ｔｅｕｒ）によると、他の抗原の中でもｐ２５ｇａｇではなくｐ１８ｇａｇを用いて免疫されたＣ−４３３及びＣ− ４９９が、７力月の追跡期間中、ｐ２５についてセロコンバージョンを示さなかったことが示された。しかしながら、ＰＩ（接種後）３２週目（７，５力月目）で、Ｃ−４３３についてイムノプロット上でかすがなｐ２５バンドが観察され、その強度は、それに続く血清試料で増加していった（図９）。不活性化全ＨＩＶで免疫されたＣ−３３９については、いかなるＨＩＶ特異的タンパク質に対する抗体の見かけのレベルにおいても、ＥＩＡ抗体力価においても、検出可能な増大は全く存在しなかった（図９）。同様に、イムノプロット検定において精製抗原を用いた場合、１２力月の追跡期間中、Ｃ−３３９からの血清中には、ｖｉｆ又はｎｅｆタンパク質に対するいかなる抗体も検出されなかった。

ここで示されている結果、ならびにＢｅｒｍａｎ及びその同僚達によって報告されている結果［Ｂｅｒｍａｎ、　Ｐ、Ｗ、、　Ｇｒｅｇｏｒｙ、　Ｔ、Ｊ、、　Ｒｉｄｄｌｅ。

Ｌ、、　Ｎａｋａｍｕｒａ、　Ｇ、Ｒ，、（：ｈａｍｐｅ、　Ｍ、Ａ、、　Ｐｏｒｔｅｒ、　Ｊ、Ｐ、、　Ｗｕｒｍ、　Ｆ、Ｍ、。

Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇ、　Ｒ，Ｄ、、　Ｃｏｂｂ、　Ｅ、に、　＆　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、　Ｊ、Ｗ、（１９９０）　Ｎａｔｕｒｅ（ｏ　：／　ト：／）　３４５．６２２−６２５１は、明らかに、サマざまなＨＩ　Ｖ−１抗原を用いてチンパンジーにおける防御免疫応答を惹起することが可能であることを示している。Ｃ− ４９９は少なくとも７力月の追跡を通してＨＩＶ感染の確立に対して防御されたこと、Ｃ−３３９は１年間防御されたこと、そしてＣ−４３３はウィルスの出現の７力月の遅延によって立証されているように部分的に防御されたこと、が示された。しかしながら、抗原投与用量が、ここで使用した用量よりも４倍低い、他の者が利用したのと同じものであったならば、Ｃ−４３３も同様に完全に防御されていたであろうということも考えられる［Ｂｅｒｍａｎ、　Ｐ、Ｗ、、　Ｇｒｅｇｏｒｙ、　Ｔ、Ｊ、、　Ｒｉｄｄｌｅ、　Ｌ、。

Ｎａｋａｍｕｒａ、Ｇ、Ｒ，、Ｃｈａｍｐｅ、Ｍ、Ａ、、Ｐｏｒｔｅｒ、Ｊ、Ｐ、、Ｗｕｒｍ、Ｆ、Ｍ、。

Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇ、Ｒ，Ｄ、、Ｃｏｂｂ、Ｅ、に、＆　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、Ｊ、Ｗ、（１９９０）　Ｎａｔｕｒｅ（ロンドン）　３４５．６２２−６２５］。

防御は、以下のことによって立証された二　口）月１回試みたＰＢＭＣからも、及びＰＩ（接種ｆｆ１）６力月目のリンパ節組織からも、ウィルスを回収できなかったこと；（ｉｉ）さまざまな間隔でのＰＢＭＣからの、及びＰＩ（接種後）６力月目のリンパ節からの、ＤＮＡのＰＣＲ分析において、ハイブリダイゼーションシグナルが陰性であったこと；及び（ｉ）通常は一次ＨＩＶ感染に続いて起こり、事前に予防接種及び抗原投与を受けた動物における既往反応の特徴である、抗体応答がなかったこと［Ｂｅｒｍａｎ、　Ｐ、Ｗ、、　Ｇｒｏｏｐｍａｎ、　Ｊ、Ｅ、、　Ｇｒｅｇｏｒｙ、　Ｔ、、　Ｃｌａｐｈａｍ、　Ｐ。

Ｒ，、Ｗｅｉｓｓ、　Ｒ，Ａ、、　Ｆｅｒｒｉａｎｉ、　Ｒ，Ｒｉｄｄｌｅ、　Ｌ、、　Ｓｈｉｍａｓａｋｉ、　Ｃ，。

Ｌｕｃａｓ、　Ｃ，、Ｌａ５ｋｙ、　Ｌ、Ａ、　＆　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、　Ｊ、Ｗ、（１９８８）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８５．５２００−５２０４；　Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、０．、　Ｂｅ５ｓ、　Ｊ、Ｗ、。

Ｗａｔｅｒｓ、　Ｄ、Ｊ、、　Ｐｙｌｅ、　Ｓ、Ｗ、、　Ｋｅｌｌｉｈｅｒ、　Ｊ、Ｃ，、Ｎａｒａ、　Ｐ、Ｌ、、　Ｋｒｏｈｎ。

Ｋ、、　Ｒｏｂｅｙ、　Ｗ、Ｇ、、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｊ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，＆　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ。

Ｐ、Ｊ、（１９８９）　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　６３．５０４６−５０５３；　Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ、、　Ｋｉｅｎｙ。

Ｍ、Ｐ、、　Ｇｌｕｃｋｍａｎ、　Ｊ、Ｃ，、Ｂａｒｒｅ−３ｉｎｏｕｓｓｉ、　Ｆ、、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、　＆Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、　（１９９０）、ｒ性感染柄のためのワクチン（Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｆｏｒＳｅｘｕａｌｌｙ　Ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ　Ｄｉｓｅａｓｅｓｌ　Ｊ中、　Ｍｅｈｅｕｓ、　Ａ、　＆　５ｐｉｅｒ、　Ｒ。

編（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ　Ｃｏ、、　Ｌｔｄ、、　Ｌｏｎｄｏｎ）、　ｐｐ、　２２７−２３７　］。

Ｃ−４３３が、見かけ上は７力月間防御されていたのに、実際にはＰＣＨによる検出及びウィルス単離について繰返し陰性の結果であったにもかかわらず、抗原投与の時点から感染していたということは、懸念すべきことであり、ウィルス学的及び血清学的基準の両方による検出を無視するようにＨＩＶが隠とんしつるという事実が強調されることになる。類似のできごとは、不活性化された全ウィルスで免疫され、その後感染付ｓＩＶで抗原投与されたマヵクについても報告された［Ｄｅｓｒｏｓｉｅｒｓ、　Ｒ，Ｃ，、Ｗｙａｎｄ、　Ｍ、Ｓ、、　Ｋｏｄａｍａ、　Ｔ、。

Ｒｉｎｇｌｅｒ、　Ｄ、Ｊ、、　Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、Ｏ，、Ｓｅｈｇａｌ、　Ｐ、に、、　Ｌｅｔｖｉｎ、　Ｎ、Ｌ、。

Ｋｉｎｇ、　Ｎ、Ｗ、　＆　Ｄａｎｉｅｌ、　Ｍ、Ｄ、、（１９８９）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

Ｕ、Ｓ、Ａ、　８６８６．６３５３−６３５７　］。この研究においては、ウィルスは当初３２週目まで回収されず、抗原投与後３９週目までは既往応答は観察されなかった。長期にわたり従来の試験により血清陰性であり続けたものの、ＰＣＲ又はウィルス単離によるとＨＩＶが検出されたという、自然のＨＩＶ感染における観察［Ｒａｎｋｉ、　Ａ、、　Ｖａｌｌｅ。

Ｓ、Ｌ、、　Ｋｒｏｈｎ、　Ｍ、、　Ａｎｔｏｎｅｎ、　Ｊ、、　Ａ１１ａｉｎ、　Ｊ、Ｐ、、　Ｌｅｕｔｈｅｒ、　Ｍ、。

Ｆｒａｎｃｈｉｎｉ、　Ｇ、　＆　Ｋｒｏｈｎ、　Ｋ、　（１９８７）　Ｌａｎｃｅｔ　２．５８９−５９３；及びＪｅｈｕｄａ−Ｃｏｈｅｎ、　Ｔ、、　５ｌａｄｅ、　Ｂ、Ａ、、　Ｐｏｗｅｌｌ、　Ｊ、Ｄ、、　Ｖｉｌｌｉｎｇｅｒ、　Ｆ、。

Ｊｅ、Ｂ、、Ｆｏｌｋｓ、丁、Ｍ、、Ｍｃ（：１ｕｒｅ、Ｈ，Ｍ、、５ｅｌｌ、Ｋ、Ｗ、＆　Ａｈｍｅｄ−Ａｎｓａｒｉ、　Ａ、（１９９０）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８７．３９７２−３９７６）は、ＨＩＶ感染者のセックスパートナーといったハイリスクの者が、血清学的、ウィルス学的又はＰＣＲ分析が陰性であるにもかかわらず、感染している可能性があるということを示唆している。

３匹のチンパンジーが受けた複雑な免疫養生法から見て、数多くの抗原及び／又は抗原処方のどれが、部分的防御を惹起するきっかけとなったのかを決定することは困難である。Ｃ−３３９は、不活性化されたＨＩＶ、精製されたｇｐ１６０及びｖ３ペプチド−ＫＬＨコンジュゲートを用いて、連続的に免疫された。Ｃ− ４３３は、まず最初にワクシニアウィルス−ｇｐ１６０ｅｎｖ組換え体で、次に精製されたｅｎｖ、ｐ１８ｇａｇ％ｎｅｆ及びｖｉｆ抗原の混合物で、そして最終的にはＶ３ペプチド−ＫＬＨコンジュゲートで免疫された。最も単純な免疫養生法は、Ｃ−４９９のものであった；これは、精製されたｇｐ１６０ｅｎｖ及びｐ１８ｇａｇと、それに続（コンジュゲート化していないＶ３ペプチドで構成されていた。３匹の動物に共通の抗原は、ｇｐ１６０ｅｎｖ、ｐ１８ｇａｇ及びｖ３ペプチドであったが、その相対的な重要性は、今後決定していかなくてはならない。適切な防御には、複数のタンパク質上に見出される多数の抗原決定基及び／又は同じ抗原決定基の複数の提示が必要である可能性がある。

チンパンジーにおいて中和抗体の有意な力価を惹起しなかった、以前にテストされたプロトタイプワクチン［Ｂｅｒｍａｎ、　Ｐ、Ｗ、。

Ｇｒａａｐｍａｎ、　Ｊ、Ｅ、、　Ｇｒｅｇｏｒｙ、　Ｔ、、　Ｃｌａｐｈａｍ、　Ｐ、Ｒ，、Ｗｅｉｓｓ、　Ｒ，Ａ、。

Ｆｅｒｒｉａｎｉ、　Ｒ，、Ｒｉｄｄｌｅ、　Ｌ、、　Ｓｈｉｍａｓａｋｉ、　Ｃ，、Ｌｕｃａｓ、　Ｃ，、Ｌａ５ｋ３１゜Ｌ、Ａ、　＆　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、　Ｊ、Ｗ、　（１９８８）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｔＪ、ｓ、Ａ。

８５：　５２００−５２０４；　Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、Ｏ，、Ｂｅ５ｓ、　ＪＪ、、　Ｗａｔｅｒｓ、　Ｄ、Ｊ、。

Ｐｙｌｅ、　Ｓ、Ｗ、、　Ｋｅｌｌｉｈｅｒ、　Ｊ、Ｃ，、Ｎａｒａ、　Ｐ、Ｌ、、　Ｋｒｏｈｎ、　Ｋ、、　Ｒｏｂｅｙ。

Ｗ、Ｇ、、Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｊ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，＆　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、　Ｐ、Ｊ、　（１９８９）Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　６３．５０４６−５０５３；　Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ、、　Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、、　Ｇｌｕｃｋｍａｎ。

Ｊ、Ｃ，、Ｂａｒｒｅ−３ｉｎｏｕｓｓｉ、　Ｆ、、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、　＆　Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、　（１９９０）「性感染柄のためのワクチン（Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｆｏｒ　５ｅｘｕａｌｌｙ　ＴｒａｎｓｍｉｔｔｅｄＤｉｓｅａｓｅｓ）　Ｊ中、　Ｍｅｈｅｕｓ、　Ａ、　＆　５ｐｉｅｒ、　Ｒ，編（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ　Ｃｏ、。

Ｌｔｄ、、　Ｌｏｎｄｏｎ）、　ｐｐ、　２２７−２３７；及び）ｌｕ、　Ｓ、Ｌ、、　Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、Ｎ、。

ＭｃＣｌｕｒｅ、　Ｈ，Ｍ、、Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、ＪＪ、、ＴｈｏＩＩｌａｓ、Ｅ、に、、Ｚａｒｌｉｎｇ、Ｊ、。

Ｓｉｎｇｈａｌ、　Ｍ、Ｃ，、にｏｓｏｗｓｋｉ、　Ｓ、Ｇ、、Ｓｗｅｎｓｏｎ、　Ｒ，Ｂ、、　Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ。

Ｃ，、＆　Ｔｏｄａｒｏ、　Ｇ、　（１９８７）　Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）　３２８．７２１−７２３）が、動物の実験的感染を予防する上で有効でなかったということは、興味深いことである。中和抗体力価の維持が、Ｃ−３３９及びＣ−４３３においてはＶ３ペプチド−ＫＬＨコンジュゲートの２回の注射の後に達成され、Ｃ−４９９ではＶ３ペプチドの３回の注射の後に達成されたという観察（図７）は、ｇｐ１６０／１２０ｅｎｖ分子の一部として提示される場合とペプチドとして提示される場合とでは、ｖ３がチンパンジーの免疫系によって異なる見方をされる可能性があるということを示唆している。我々は、イムノアフイニティクロマトグラフィにより、防御されたチンパンジーの血清中のほぼ全てのＨＩＶ中和活性がｖ３ペプチドによって吸収されつるということを発見した（Ａ、Ｐ、の未公開データ）。ｖ３ペプチドの追加免疫接種は、ｇｐ１６０での免疫が、何故、本実験においてはチンパンジーの防御という結果をもたらしたのにＢｅｒｍａｎらにより報告されている実験ではこのような結果をもたらさなかったのかを説明しつる可能性がある［Ｂｅｒｍａｎ、　Ｐ、Ｗ、、　Ｇｒｅｇｏｒｙ、　Ｔ、Ｊ、、　Ｒｉｄｄｌｅ。

Ｌ、、　Ｎａｋａｍｕｒａ、　Ｇ、Ｒ，、Ｃｈａｍｐｅ、　Ｍ、Ａ、、　Ｐｏｒｔｅｒ、　Ｊ、Ｐ、、　Ｗｕｒｍ、　Ｆ、Ｍ、。

Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇ、　Ｒ，Ｄ、、　Ｃｏｂｂ、　Ｅ、に、　＆　ＥＬｃｈｂｅｒｇ、　Ｊ、Ｌ　（１９９Ｑ）　Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）　３４５．６２２−６２５　）　、この後者の研究においては、２匹のチンパンジーがｇｐ１２０で免疫された後に防ｉ卸され、これらの動物は、感染から防御されていない２匹の動物に比べて、■３ループ内に見られる主要な中和抗原決定基（ＰＮＤ）に対して３〜４倍高い力価を有していた。

本実験において観察された防御が、中和抗体のみによるものであったか、又はその他の免疫メカニズムが関与していたかという問題に対する答えは、まだ出ていないままである。抗原投与の時点で、Ｃ−３３９の血清中には、抗体依存性細胞性細胞傷害活性が検出されたが、その他の２匹のチンパンジーの血清中には検出されなかった。可溶性タンパク質ｐ１８ｇａｇ％ｇｐ１６０ｅｎｖ及びｐ２７ｎｅｆに対するＨＩＶ特異的増殖性応答［Ｂａｈｒａｏｕｉ、　Ｅ、。

Ｙａｇｅｌｌｏ、　Ｍ、、　Ｂ１１１ａｕｄ、　Ｊ、Ｎ、、　５ａｂａｔｉｅｒ、　Ｊ、Ｍ、、　Ｇｕｙ、　Ｂ、。

Ｍｕｃｈｍｏｒｅ、　Ｅ、、　Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ、　＆　Ｇｌｕｃｋｍａｎ、　Ｊ、Ｃ，（１９９０）　ＡＩＤＳＲｅｓ、　Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　６．１０８７−１０８８；及びＶａｎ　Ｅｅｎｄｅｎｂｕｒｇ。

Ｊ、Ｐ、、　Ｙａｇｅｌｌｏ、　Ｍ、、　Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ、、　Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、、　Ｌｅｃｏｃｑ、　Ｊ、Ｐ、。

Ｍｕｃｈｍｏｒｅ、　Ｅ、、　Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、Ｎ、、　Ｒｉｖｉｅｒｅ、　Ｙ、、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、　＆Ｇ１ｕｃｋ＋＋＋ａｎ、　Ｊ、Ｃ，（１９８９）　ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ、　Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　５．４１−５０〕は、Ｃ−４４３からのＰＢＭＣにおいてはウィルス抗原投与の前及び後の両方に検出されたが、Ｃ−３３９からのＰＢＭＣにおいては検出されなかった。興味深いことに、Ｖ３−ＫＬＨコンジュゲートで免疫した後、Ｃ−４３３は、ｖ３ペプチドに対する強いＴヘルパー細胞の反応性の維持を示したが、一方Ｃ−３３９は、弱い応答しか有していなかった。Ｃ−４４９の応答は、現在研究されつつある。抗原投与の前、当日及び後の、予防接種を受けたチンパンジーのＰＢＭＣ中の細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を検出しようとする試みが繰返されたが、失敗に終わった。従って、観察された防御はＴヘルパー細胞又はＣＴＬ活性と相関関係をもたなかったと思われる。

ここで示す結果は、ＨＩＶワクチンがウィルス感染に対する防御を誘発しつるということを表わしている。Ｖ３ペプチドにより誘発された高い中和抗体応答は、型特異的であった；予防接種を受けた動物からの抗原投与の時点の血清は、より多様なＨＩ　Ｖ−１単離株ＲＦ及びＭＮを、わずかにしか中和しなかった（未公開データ）。

従って、数多（のＨＩＶ変異体に対する中和抗体の高い力価を誘発するようなワクチンを設計することが必要となるが、）（ＩＶ感染者からの血清の大部分と反応するＰＮＤ配列の最近の同定［ＬａＲｏｓａ。

Ｇ、Ｊ、、　Ｄａｖｉｄｅ、　Ｊ、Ｐ、、　Ｗｅｉｎｈｏｌｄ、　Ｋ、、　Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ、　Ｊ、Ａ、、　Ｐｒｏｆｙ、　Ａ。

Ｔ、、　Ｌｅｗｉｓ、　Ｊ、Ａ、、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｊ、、　Ｄｒｅｓｓｍａｎ、　Ｇ、Ｒ，、Ｂｏｓｗｅｌｌ、　Ｒ。

Ｎ、、　５ｈａｄｄｕｃｋ、　Ｐ、、　Ｈａｌｌｅｙ、　Ｌ、Ｈ，、Ｋａｒｐｌｕｓ、　Ｍ、、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ。

Ｄ、Ｐ、、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｔ、Ｊ、、　Ｅｍｉｎｉ、　Ｅ、Ａ、　＆　Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、Ｄ、（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４９９３２−９３５　］によると、このことは以前に考えられたものほど優れたものとはならない可能性もある。２匹のチンパンジーを防御する上での見かけの成功及び３匹目の動物における長期にわたるウィルスの抑制は、ヒトにおいてそれが長期間持続する防御免疫を提供するという期待をもって、ＨＩＶワクチンを開発するべくさらに努力するための根拠を与えるものである。

☆☆☆ 二重免疫手順（ｇｐ１６０での初回抗原投与と、それに続くｇｐ１２０のＶ３ループの配列を有する合成ペプチドでの追加免疫）の有効性を確認するため；Ａｌ（ＯＨ）ｓ、５ｙｎｔｅｘアジュバン１−．５ＡＦ−１及びフロイント不完全アジュバント（Ｉ　ＦＡ）という３つのアジュバントを比較するため；及び、０力月目及び１力月目にｇｐ１６０．３力月目及び４力月目にＶ３ペプチド、そして６力月目の最後の追加免疫としてｇｐ１６０と■３の両方、という加速した免疫スケジュールをテストするため、さらなる研究を行なった。

初回抗原投与のために１１００ｕのｇｐ１６０　ＢＲＵ、そして追加免疫のためにＶ３−ＢＲＵ　（ｇｐ１２０アミノ酸残基３０２〜３３５）とＶ３−ＭＮ　（同じ残基）各々２００ｕｇの混合物を用いて、アカゲザル（１０ット当り４匹）において実験を行なった。動物は、１力月の間隔で採血し、ＥＬＩＳＡにより、抗ｖ３及び抗ｇｐ抗体（Ａｂ）力価を測定した。中和Ａｂ力価は、免疫蛍光フォーカス形成阻害検定によって測定した。

精製されたｇｐ１６０　ＢＲＵでコーティングしたプレートを用いて、ＥＬＩＳＡにより抗ｇｐ１６０Ａｂを測定した。３グループの動物において迅速な抗ｇｐ１６０Ａｂ応答が観察された（図１０）が、ＩＦＡ及び５ＡＦ−１を用いたグループにおける抗原に対する応答は、ミョウバンを用いたグループのものに比べて５〜１０倍高いものであった。■３ペプチドの注射は、抗ｇｐ　１６０力価に対していかなる効果ももたなかった。力価は、６力月目のｇｐ１６０の再生注射の時点で数倍急上昇したが、ここでも又、ミョウバンを用いたグループは他の２つのグループに比べて２〜８倍低い応答を示した。

抗Ｖ３Ａｂは、ＢＲＵペプチドでコーティングしたプレートを用いてＥＬＩ　ＳＡにより測定した。ｖ３に対する応答は、全てのグループにおいて明らかに二相性であり、３力月目の■３ペプチドの注射の時点で強い追加免疫効果が見られた（図１１）。かくして、抗■３力価は３力月目と４力月目の間で１０倍増大し、次に安定状態に入り、ｇｐ１６０でブライミングされた動物における■３ペプチドの注射の顕著な追加免疫効果が確認された。これは、実験に用いたアジュバントとは無関係に観察された。

しかしながら、３力月目に測定したｖ３に対する初期応答は、５ＡＦ−１及びＩＦＡのグループでは、ミョウバンを用いたグループに比べ、５〜６倍高いものであった。最終的な抗ｖ３力価は、全部で、後者に比べて、前者の２つのグループにおいては約１０倍高かった。二段階免疫スケジュールは、以下のように定義できる：初回抗原投与二〇カ月及び１力月目に、ｇｐ　ｌ　６０゜追加免疫＝３３力目に、■３ペプチド第２回追加免疫二６カ月目に、ｇｐ１６０＋Ｖ３ペプチド。

第２回追加免疫は、さらに既往応答を増大させるため、１２力月目のようなさらに後の時点に置（こともできる。

全ての免疫前血清は、中和Ａｂに関して陰性であった。第２回追加免疫（７力月目）から１力月後に測定した中和Ａｂの力価は、以下のとおりであったニアジュバントサル　ＡＩ（ＯＨ）ｓ　５ＡＦ−Ｉ　ＩＦＡ４　陰性　＞４５０　４４０ここでも又、さまざまなグループ間での力価の相対的な差異は幾分か弱まっていたものの、ミョウバンを使った場合に比べて、５ＡＦ−１又は不完全フロインドアジュバントを使用した場合には決定的な利点が見られた。

結論としては、霊長類に対する迅速な二段階抗ＨＩＶ免疫スケジュールは、高い抗ｖ３、高い抗ｇｐ１６０及び高い中和Ａｂ応答を誘発することができる。このスケジュールには、以下のものが含この計画の代替案は、以下のようなものであり得る：最終的Ａｂ力価が、５ｙｎｔｅｘアジュバント５ＡＦ−１又はフロイント不完全アジュバントの場合、ミョウバン［Ａ　（ＯＨ，）］と比べて５〜１５倍高いことから、後者よりもむしろ前者の２つのアジュバントを用いる方が有利である。

☆☆☆ サルに関するさらなる研究を、以下の表に報告する。

ＨＩＶ−１に感染した末梢血単核細胞を用いた抗原投与に対するチンパンジーのワクチン防御最近の研究により、感染又は疾病の段階の如何に関わらず、ヒト免疫不全症ウィルス（ＨＩ　Ｖ）感染者の血液には、ウィルス感染細胞（細胞関連ウィルスとも呼ばれる）及び無細胞ウィルス０の両方が含まれていることが立証された。これらの発見は、ＨＩＶの伝播が、いずれかの又は両方のウィルス形態で起こりつるということを意味している。膣液及び精液中のＨＩＶの量及び−次形態に関するデータは限られたものであるが０、無細胞ウィルスも細胞関連ウィルスも両方共、性的接触を通しても伝播されると仮定することがおそら（可能であろう。従って、ＨＩＶに対する効果的なワクチンは、全て、両方の形態のウィルスに対して、ならびに粘膜表面を介した（性的）及び静脈内経路で（血液交換を通して）の伝播から防御しなくてはならない。

チンパンジーのＨＩＶ−１感染又はさまざまなマカク種のＨＩＶ−２もしくはサル免疫不全症ウィルス（Ｓ　Ｉ　Ｖ）での感染のいずれかを利用した動物モデル系を用いて、予防接種がこれらのウィルスでの感染に対して防御することができる免疫応答を惹起しつるということが立証されてきた０゜しかしながら、全てのケースにおいて、防御は、比較的低い用量の感染性無細胞ウィルスを用いた抗原投与に対してのみ実証された。本研究において、我々は、（１）ＨＩＶで免疫されたチンパンジーからの血清及び／又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が、インビトロで細胞関連ＨＩＶ−１の伝播を防御できるか否か、そして（ＩＩ）予めさまざまなＨＩＶ−１抗原調製物で免疫されたチンパンジーが、ＨＩＶ感染チンパンジーからのＰＢＭＣによる静脈内抗原投与に対して防御されることになるか否かを決定した。

以前に報告されているように０、チンパンジーＣ−３３９はさまざまなＨＩ　Ｖ −１抗原で免疫され、その後、１０　ｏＴｃｒｏ＋ｔ。の無細胞ＨＩ　Ｖ−１の静脈内注射での抗原投与を受けた。この動物は、数多くの基準によるとウィルス陰性状態にとどまっていたが、抗原投与後４０週間にわたり、ウィルスに対する既往抗体反応を生じなかった。無関係のインビボ研究では、免疫刺激が長期間感染しているチンパンジーにおけるＨＩＶ−１発現の増大を誘発することが示されたので０、Ｃ−３３９が実際に感染から防御されていたことを確認するため、我々は、動物の免疫系を刺激することによって、推定されている潜在ウィルスの検出可能な発現の再活性化又は誘発を試みた。抗原投与後４０週目に、Ｃ−３３９に５ｙｎｔｅｘアジユバント製剤５ＡＦ−１を接種し、４４週目と４８週目に、ＨＩ　Ｖ−１抗原の混合物（不活性化ＨＩ　Ｖ−Ｉ　ＬＡ、、、組換え型抗原ｇｐ１６０ｅｎｖ、ｐ２５−及びｐ１８−ｇａｇ；及び■３免疫優性ループを表すペプチド：これらは全て５ＡＦ−１を用いて処方されている）を動物に注射した。これらの接種のいずれも、正常なヒトＰＢＭＣとのＣ−３３９のＰＢＭＣの同時培養によるウィルスの検出という結果をもたらさなかったが、ＨＩ　Ｖ−１抗原の最後の２回の注射は、追加免疫としてまさに役立った；合計の抗ＨＩＶ−１（図１）及び中和（データ示さず）抗体力価の増加が観察された。

Ｃ−３３９のＨＩＶ特異的免疫レベルがＨＩＶ感染細胞による感染を防ぐのに充分なものでありうるか否かについての指標を得るため、伝播の液性及び細胞媒介性阻害の両方についてのインビトロ検定を行なった。我々は、まず第１に、チンパンジーＣ−３３９からの血清が、ＨＩ　Ｖ−１感染チンパンジーからのＰＢＭＣからＰＨＡ刺激を受けた正常なヒトＰＢＭＣへの感染性ウィルスの伝播を防ぐことができるか否かをテストした。陽性対照として、細胞間の伝播を完全に阻害した（ＨＩ　Ｖ−１感染チンパンジーからの）血清（Ｐ、Ｎ、Ｆ、、原稿準備中）が、各検定に含まれていた。いかなる阻害活性ももたなかった、免疫に先立ってＣ−３３９から得た血清に比較して、０透口（無細胞ウィルスでの抗原投与時点）及び５２週目の血清は、ウィルスの伝播及び産生をそれぞれ６８％及び７５％阻害し、一方、２４週目の血清はウィルス産生をわずか３３％だけ阻害した（図２Ａ）。２４週目の値は、おそらく初期ウィルス抗原投与後の阻害活性の漸進的喪失を反映しており、５２週目の値は、４４週目及び４８週目にＣ−３３９に対して与えられた２回のＨＩＶ−１追加免疫注射による阻害活性の増大を反映している。

第２に、我々は、指示細胞として用いた場合に、Ｃ−３３９からのＰＢＭＣが、ＨＩＶ−１感染チンパンジー（Ｃ−０８７）からのＰＢＭＣと同時培養された場合にウィルスの伝播及び複製を防止することになるか否かをテストした。Ｃ−３３９からのＰＢＭＣを、一定の濃度で（２〜３Ｘ１０’細胞／ウエル）、１２ウエルの組織培養プレートのウェルに添加した。Ｃ−０８７のＰＢＭＣを１：４に段階的に希釈し、各希釈溶液からの細胞を、１：１の比率から始めてＣ−３３９からのＰＢＭＣ（又は対照としての、正常なヒト又はチンパンジーのＰＢＭＣ）を含むウェル２個ずつに添加した。逆転写酵素検定により、ウィルス産生について、培養上清を定期的に監視した。阻害活性は、い）６週間の観察期間内にウィルス陽性培養を生み出すためにより多くの数のＣ−０８７のＰＢＭＣが必要とされた場合、及び（ｉｉ）ＨＩＶ−１の投与を受けていない個体からのＰＢＭＣで確立された同時培養に比べて、培養がウィルス陽性となる時間に遅延が見られた場合に、免疫された動物からの細胞に存在するものとみなされた。これらの検定は、Ｃ−３３９が、ＨＩ　Ｖ−１抗原の２回の追加免疫注射の前であった４０週目に、実質的な阻害活性を有していたことを示していた（図２Ｂ）。この阻害活性は７３週目までに下降していたが、磁気ビーズでのＣＤ４゜細胞の枯渇によるＣＤ８’細胞の富化け、ウィルス回収の完全な阻害という結果をもたらした（図２Ｃ）。Ｃ−３３９のＰＢＭＣのＣＤ４＋富化集団での感染の見かけの増強は、おそら＜ＨＩＶ−１の複製を支持することができる細胞の数の著しい増大の関数であると思われる。

インビトロ検定では、Ｃ−３３９からの血清及びＰＢＭＣの両方がＨＩ　Ｖ−１の細胞間伝播を防ぐ少なくとも幾分かの能力をもつことが示されたことから、Ｃ −３３９及び陰性対照チンパンジーＣ−４３５に対して、ＨＩ　Ｖ−１感染ＰＢＭＣを用いて静脈内に抗原投与した。抗原投与接種物は、（別のワクチン研究［］における陽性対照として）１４週間前にＨＩ　Ｖ　Ｉ　ＨＴＬＶ−１゜８に感染させたチンパンジーＣ−０８７のヘパリン処理した血液から得られた低温保存ＰＢＭＣからなっていた。ＨＩ　Ｖ−１感染チンパンジーからのＰＢＭＣからなる抗原投与接種物は、例えば静脈内薬物使用者の間で起こる伝播に最も近いものであると考えられた。チンパンジーの感染に必要とされるＨＩＶ感染細胞の最低感染用量は決定されておらず、又、利用可能なチンパンジーの数が限られていたことから、抗原投与接種物の用量は経験的に選択された。この選択は、ヒト及びチンパンジーの両方からのＰＨＡ刺激を受けた正常なＰＢＭＣを指示細胞として用いた、チンパンジーＣ−０８７からの低温保存されたＰＢＭＣのアリコートのインビトロ滴定の結果に基づいていた０゜これらの検定から、この低温保存されたストック中の１０７の総ＰＢＭＣ当り平均３８２の感染性細胞が存在することが決定された。２匹のチンパンジー、Ｃ−３３９及びＣ−４３５，５，８×１０５のＰＢＭＣ，つまり２２の感染性ＰＢＭＣを含んだ１−の体積の静脈内接種を受けた。この数字は最小の見積りであり、培養がウィルス陽性になるのには１つの感染細胞で充分であるという仮定に基づいている。

接種の後、動物を毎日観察し、８週間の間は２週間に１回ずつ、その後は１力月間隔で、血液試料を得た。ウィルス単離の試みは、２５ｃｍ２の組織培養フラスコ内でＰＨＡ刺激を受けた正常なヒトＰＢＭＣと各々の動物からのＰＢＭＣを同時培養することにより行なった。我々は又、感染ＰＢＭＣの接種後、３力月目及び９力月目に得た骨髄の生検試料、及び６力月目及び１１．５力月目におけるリンパ節の生検からも、ウィルスを単離しようと試みた。抗原投与の４週間後に、そしてその後は毎回、対照動物Ｃ−４３５からのＰＢＭＣならびに骨髄及びリンパ節試料から、ウィルスが単離された。これとは対照的に、免疫されたチンパンジーＣ−３３９からは、ＰＢＭＣからも、骨髄又はリンパ節生検からも、どの時点でもウィルスは単離されなかった。抗原投与から８週目に最初にＣ−４３５からの血清中にＨＩＶ特異的抗体が検出され、力価は２４週目まで上昇し続けた（図１）。しかしながら、Ｃ−３３９からの血清にはいかなる既往反応も検出されず、ＨｒＶ−１に対する抗体力価はわずかに減少し、その後安定状態にとどまった。

従って、これらの結果は、前もって免疫することにより、ＨＩＶ感染細胞による感染の伝播を予防することが可能であるということを示していた。確認として、チンパンジーＣ−０８７からの同じ低温保存されたＰＢＭＣのアリコートを用いて、同等の数の感染性細胞で、さらにもう２匹の免疫されたチンパンジーに抗原投与した（表１）。これらのチンパンジーのうちの一方、すなわちＣ−４９９は、Ｃ−３３９のように、予め無細胞ＨＩＶ−１を用いた免疫及び抗原投与を受け、１年間ウィルス陰性であり続けた０゜第２のチンパンジー、Ｃ−４４７は、まず最初に５ＡＦ−１中の精製された組換え型ｇｐ１６０ｅｎｖ、ｐ１８ｇａｇ、ｖｉｆ及びｎｅｆタンパク質で免疫され、次に、精製されたｇｐｌ　６０ｅｎｖ及びｐ１８ｇａｇによる追加免疫、及びそれに続＜　５ＡＦ−１中の精製されたｎｅｆタンパク質及びＨＩ　Ｖ　−Ｉ　ＨＴＬＶ−１□３の主要な中和抗原決定基（Ｖ３ループ）を表わすペプチドによる追加免疫を受けた。チンパンジーＣ− ４４７は、いかなる形態の感染性ＨＩＶ−１に対しても以前さらされたことがなかった。

約２２の感染性ＰＢＭＣを同用量用いた抗原投与の後、これらの後者の２匹のチンパンジーを、２週に１回、次に１力月に１回、ＨＩＶ特異的抗体力価の変化について、及びＰＢＭＣ１骨髄及びリンパ節内のウィルスの存在について監視した。両方の動物におけるＨ　Ｉ　Ｖ−１に対する抗体力価は安定した状態にとどまり、ウィルスは、血液又は組織の試料のいずれからも単離されなかった。抗原投与後７力月目に、Ｃ−４９９は、うっ血性心不全のため安楽死させた。８つの異なる組織（脳、牌臓、さまざまなリンパ節、腎臓、肝臓及び唾液腺を含む）の断片をハサミで切り刻んだ；これらの組織断片ならびにＰＢＭＣ及び骨髄を、次に、ＰＨＡで刺激した正常なヒトＰＢＭＣと同時培養した。全ての培養は、逆転写酵素検定によって監視したところ、６週間の培養を通してウィルス陰性であった。２匹目の動物Ｃ−４４７からのＰＢＭＣ１骨髄及びリンパ節試料は全て、９力月の追跡期間を通して、全ての試みにおいてウィルスに関して陰性であった。か（して、免疫された３匹のチンパンジーのうち３匹共が、ＨＩＶ−１感染細胞による感染から見かけ上防御されていた。末梢血細胞は単球／マクロファージならびにリンパ球を含んでいることから、感染した細胞集団は、おそらく、細胞型に関してのみならず、個々の細胞によるウィルス発現のレベルについても、不均一であったと思われる。接種物は、ｌ−の培地中に懸濁されたＰＢＭＣとして調製されたものの、Ｃ−０８７のＰＢＭＣのい（つかはＨＩＶを活発に産生じていた可能性がきわめて高い。従って、チンパンジーの接種物は、実際には無細胞及び細胞関連ＨＩＶ−１の両方の混合物で構成されていた可能性がある。

これらの考慮事項は、我々の結果の重要性をさらに高めるものである。

ＨＩＶ感染ＰＢＭＣでの抗原投与の時点で、Ｃ−４４７及びＣ−４９９は、Ｃ− ３３９（７）ものと比ヘテ、４倍低いＨＩＶ−ＩＥＩＡ抗体力価（１：　６，４００対１　：　２５，６００）　、Ｌかし４〜８倍高い中和抗体力価（１：２５６及び１　：５１２対ｌ：６４）を有していた。細胞関連ウィルスの抗原投与に対するワクチンで誘発された防御の可能性を予測するためのインビトロ血清及びＰＢＭＣ阻害検定の潜在能をさらに評価するため、Ｃ−４４７及びＣ−４９９からの血清試料をテストした。抗原投与の日にＣ−４４７及びＣ−４９９から得た血清は、ＨＩ　Ｖ−１の細胞間伝播を、それぞれ２５％及び５２％阻害した。これらの阻害レベルは、抗原投与当日のＣ−３３９からの血清で観察された細胞間伝播の７５％阻害よりも低いものであったため、この検定は、細胞関連の抗原投与に対する防御を高い信頼性で予言するものではない可能性がある。これら２匹のチンパンジーからの細胞関連の抗原投与当日のＰＢＭＣを、Ｃ−３３９からのＰＢＭＣと平行してテストした（図２Ｂ、７５週目参照）。結果は、７５週目のＣ−３３９のＰＢＭＣで得られたものと同等であった：すなわち、両方の動物からのＰＢＭＣは、Ｃ−０８７の感染した細胞からのウィルスの伝播に対して、見かけ上いかなる阻害活性も示さなかった。

Ｃ−３３９が、細胞関連ＨＩ　Ｖ−１の抗原投与から１年間防御された時点で（Ｃ−３３９の最初の無細胞ウィルスの抗原投与に関して１０４０４週目我々は、この動物に対して、２年前の第１回の抗原投与実験に使用したものと同等の無細胞ＨＩ　Ｖ　Ｉ　ＭＩＬＶ−１１１１１の接種物を用いて再び抗原投与した。同じウィルス保存株の別の低温保存アリコートを用いて（Ｌａｒｒｙ　Ａｒｔｈｕｒ、　ＮＣＩ−ＦＣＲＦから入手）、１−の総体積で１００　Ｔｃｒｏｓ。を静脈内注射した。ＨＩＶ−１は、最初、この３回目のＨＩ　Ｖ−１抗原投与の４週間後に得られたＣ−３３９からのＰＢＭＣに（正常なヒトＰＢＭＣとの同時培養により）検出され、抗原投与の６週間後にＨＩＶ−Ｉ　ＥＩＡ抗体力価の増大が観察された（図１．１１０週目透口Ｃ−３３９は、追加免疫を受けていないか、又はこの２回目の無細胞ＨＩＶによる抗原投与に先立ち１年間ＨＩＶ−１にさらされていたことから、予防接種により惹起された免疫応答は、ウィルスに対するこの最後の曝露各こ対して防御するのに充分なレベルで持続しなかった。Ｃ−３３９は、安定したＨＩＶ−１の免疫応答の存在にもかかわらず、感染した状態となり、ウィルスに対する３回目の曝露後、比較的まもな（感染が検出された。この発見は、Ｃ−３３９がＨＩＶ−１感染に対して本来耐性をもたなかったことを示し、さらには細胞関連ＨＩＶ−１抗原投与に対する観察された防御の重要性を強調してし入る。もう１匹の生存しているチンパンジー、Ｃ−４４７は、１年間ウィルス陰性状態にとどまった時点で、同様に抗原投与を受けることになる。

ＨＩＶ感染細胞での抗原投与に対する３匹のチン／＜ンジーの防御のメカニズムはわかっていないが、それが液性免疫及び細胞媒介性免疫の両方の組合せによるものである可能性が高い。抗原投与当日に得られたＰＢＭＣを用いたインビトロ検定においては、Ｃ−４９９及びＣ−４４７ではなくＣ−３３９からの細胞のみが、Ｃ−０８７のＰＢＭＣからのＨＩＶ−１の回収に対する有意な阻害活性を示していた。これは、Ｃ−３３９が、細胞抗原投与より４週間及び８週間前に複数のＨＩ　Ｖ−１抗原を用いて追加免疫を受けていたのに対して、Ｃ−４４９が１年を越える期間ＨＩＶ−１抗原にさらされていなかったという事実の結果であった可能性がある。同様に、Ｃ−４４７は、２〜５力月前の一定期間中、Ｖ３ペプチド及びＮｅｆタンパク質のみでの３回の追加免疫を受けていた；これらの接種の結果、中和抗体力価は１０倍を越えて増大したが、ＨＩＶ特異的ＥＩＡ抗体力価には検出可能な増加は全くなかった。Ｃ−３３９からのＰＢＭＣがインビトロでの細胞間伝播を防止する能力を続いて喪失したことは、この可能性を支持する。このこととは無関係に、血清又はＰＢＭＣで行なわれるようなインビトロ検定のいずれも、防御免疫を予言するものではないと思われる。

Ｃ−０８７、及びＣ−０８７からのＨＩＶ感染ＰＢＭＣでの抗原投与を受けた３匹のチンパンジーは、同胞ではなかったことから、４匹の動物が同一の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ハブロタイブを共有していた可能性はきわめて低い。かくして、先験的に、その表面にＨＩ　Ｖ抗原を有していたものをいくつか含むＣ−０８７のＰＢＭＣに対する初期防御が、たとえ存在していても古典的なＭＨＣに制限された細胞傷害性Ｔ細胞活性によって媒介されたものではない、との仮定がなされることになろう。今日までのところ、我々は、免疫されたチンパンジーからの末梢血リンパ球で直接ＣＴＬ活性を検出することができなかった０゜最も可能性が高い細胞媒介の防御メカニズムは、以前にＣ−３３９からの血清中に検出された活性である、抗体依存性細胞性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）であると思われる０゜上述のように、ＨＩＶ特異的抗体と細胞媒介性活性の両方が相乗作用して、防御を実現する可能性が高い。

理想的には、いかなる病原体に対するワクチンであっても、最小限の免疫回数の後に長く持続する免疫を惹起するものでなくてはならない。我々の免疫されたチンパンジーにおいては、長く持続する安定したＥＩＡ及び中和抗体力価が観察されたが、これらは、最低２年間にわたり多数の免疫を行なって（１２回以上）達成された。

これらの養生法は、控え目に言っても、西欧諸国では、まして開発途上国ではなおさら、使用上実用的ではない。ヒト以外の霊長類モデルでの今日までの研究に基づくと、ＨＩＶ−１に対する免疫は、少なくとも最初の３回の接種と、特定されていない間隔での追加免疫接種とを必要とするかのように思われる。複数の接種が必要とされる場合、これらは容易に投与されなくてはならず（例えば経口的に）、ワクチン調製物は通常の保存条件下で安定でなくてはならない。これら後者の２つの条件は、開発途上国へのＨＩＶ〜１ワクチンの送達に関して特に重要である。従って、無細胞及び細胞関連ＨＩＶ−１の両方の静脈内感染に対する防御を惹起しうることを実証する上で進歩がなし遂げられてきたものの、主要な問題点４なお未解決のままである。

参考文献及び注釈細胞間伝播の血清中和チンパンジー　血清の日付　阻害％Ｃ−４３３８／８９　３５ＰＩ（接種後）４力月目のＣ−５２７からの６Ｘ１０’個のＰＢＭＣ２平均３回の実験ＨＩＶ−１ｇｐ１６０及びｅｎｖペプチドに対するアヵゲザルの中和抗体応答に対するアジュバントの影響子ヒト免疫不全症ウィルス１型（ＨＩＶ−１）のエンベロープ糖タンパク質は、大きい前駆体ｇ　ｐ　１．６０のタンパク分解的切断により生じる２つの部分から作られている。外部表面の糖タンパク質ｇｐ１２０は、ｇｐ１６０のアミノ末端領域に相当し、一方、膜貫通糖タンパク質ｇｒ）’１１は、そのカルボキシル末端領域（１，２）から誘導される。ウィルスのための主要な中和抗原決定基（ＰＮＤ）４；ｔ：、ＩＩＩ　Ｂ株（３〜５）にツイテ残基３ｏ３〜３３８に位置づけされた保存されたシスティンループである、ｇｐ１２０の第３の高度可変ドメイン（■３）にマツピングされてきた（番号付けは参考文献６に従う）。さらに、ｇｐ１２０及びｇｐ４１は、共にマイナー中和エピトープを担持している（総説については、参考文献７参照）。Ｖ３ループの中和エピトープは連続的な性格のものである（８．９）が、ループの３次元コンホメーションは反応性にとって重要であると思われる（１０．１１）。異なるＨ　Ｉ　Ｖ−１単離株からのＰＮＤは広範な配列の相違を示しく４．１２．１３）、このことは、何故ＰＮＤに対する抗体が型特異的な形でウィルス感染性を中和するのかを説明している。これらの抗体は、同様にシンシチウム形成及び細胞間のウィルスの広がりをも阻害する。ＰＮＤにターゲティングされた抗体は、ウィルスエンベロープと標的細胞の膜との間、又は感染した標的細胞の膜と感染していない標的細胞の膜との間の融合レベルに作用する（４．１４）。

ＨＩ　Ｖ−１チンパンジーモデルでの実験は、実験的ＨＩＶ感染に対する防御において、中和抗体が主要な役割を果たすということを立証した（１５．１６）。

抗原投与感染に対して防御されていなかった動物の大部分は、抗原投与時点で中和抗体を全くもっていなかったか又はきわめて低いレベルの中和抗体しか有していなかった（１７）。ウィルス抗原投与に対するチンパンジーの受動的防御は、抗Ｖ３ドメイン特異的つィルス中和モノクローナル抗体の投与を通して達成することができた（Ｅｍｉｎｉ　、私信）。同様に、ＨＩ　Ｖ−２又はＳＩＶに対するカニクイザルの受動的防御は、それぞれ高用量の中和抗ＨＩＶ又は抗ＳＩＶ血清を投与することによって達成できた（１８）。従って、高い中和抗体力価の誘発は、ＨＩＶワクチンの効力にとって明白な１つの必須条件であり、これは、おそらくは抗ＨＩ　Ｖ−１不稔化（滅菌）免疫（Ｓｔｅｒｉｌｉｚｉｎｇ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ）の確立及び維持に、これらの抗体が必要とされるためである（１９）。

我々は、以前に、ｇｒ）１６０を含むさまざまなＨＩＶ−１抗原での高度免疫処置によりブライミングされ、次に遊離の又はＫＬＨにカップリングされたＰＮＤペプチドで追加免疫されたチンパンジーが、高い力価のＰＮＤ特異的中和抗体を生じ、その後のＨＩＶ抗原投与に対して防御されたことを観察した（１６）。防御免疫を誘発することができる最も単純な免疫養生法は、ｇｐ１６０ｅ旦ヱ及ヒｐ１８■且工、及びそれに続くコンジュゲート化していないＰ　Ｎ、Ｄペプチドで構成されていた。ｐｌ　８ＪＬ且１が防御に関与しつると考える理由はほとんどない。従って、最小限の防御免疫養生法は、ｇｐ１６０とそれに続く対応するＰＮＤペプチドでの追加免疫からなるはずである。このような初回抗原投与−追加免疫スケジュールの効力は、ｇｐ１６０抗原の用量及び物理的状態、ＰＮＤペプチドの量及び配列、注射の回数と間隔などのような複数のパラメーターに、また、アジュバントの性質にも依存する可能性が高い。この研究では、ミョウバン、フロイント不完全アジュバント（Ｉ　ＦＡ）及び５ｙｎｔｅｘアジユバント製剤１　（ＳＡＦ−１）（２０）の効力を、アカゲザルにおける簡略化された初回抗原投与−追加免疫養生法において比較した。

以下で示すように、ＩＦＡ及び５ＡＦ−１の効力は匹敵するものであるのに対して、ミョウバンははるかに弱いアジュバントであった。これらの結果は、将来のＨＩＶワクチンの設計上、重要な意味をもち得るものである。

杯社監方伝 ■ ＨＩＶ−１（２１）のＬＡＶ−１（ＬＡＩ）単離株からのｇｐ１６０の産生のために用いる組換え型ワクシニアウィルスであるＶＶ１１６３の構築については、以前に記載されている（２２）。ＶＶ１１６３に担持されるｇｐ１６０遺伝子を、ｇｐ１２０−ｇｐ４１の切断部位で突然変異誘発し、膜貫通ドメインを欠失させた。抗原は、上述のようにＶＶ１１６３に感染したＢＨＫ−２１細胞の細胞培養培地から精製した（２２〜２４）。ＰＮＤペプチド（ＬＡ　Ｉ　）は、配列Ｃ −ＲＰＮＮＮＴＲＫＳ　Ｉ　ＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴ　Ｉ　ＧＫ　Ｉ　ＧＮＭＲＱＡを有する３４アミノ酸残基のペプチド（ＢＨ１０単離株からの残基３０３〜３３６）として固相合成法により調製し、リン酸緩衝生理食塩水（Ｎｅｏｓｙｓｔｅｍ。

Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ）中に再懸濁させた。

ｉ±Ω免及サルは、１００μｇの組換え型ｇｐ１６０を１力月間隔で２回注射し、これに続いて３力月目及び４力月目に２００μｇのＰＮＤペプチドを２回注射することによって、ＩＭ（筋向）経路で免疫した（図１参照）。全ての抗原は、最終体積１ −であった。４匹のサル（グループＡ）は０．２％水酸化アルミニウムに吸着させた抗原（３ｕｐｅｒｆｏｓ）で免疫し、別の４匹のサル（グループＢ）は１− のＩ　ＦＡ　（Ｄｉｒｃｏ）中で乳化させた抗原で免疫し、最後の４匹（グループＣ）はｌ用量につき１ｍｇのトレオニル−ＭＤＰを含むｌ−の５ＡＦ−１（２０）中で乳化させた抗原で免疫した。全てのサルに対して、６力月目に、同じそれぞれのアジュバント中の１００μｇのｇｐ１６０と１００μｇのＰＮＤペプチドの両方のＩＭ（筋向）注射により、追加免疫を行なった。規則的な間隔で、動物を採血した（１０〜１５−）。血清は、以下に記す実験に用いるまで、凍結状態で保管した。

比±ｙ血遣芋抗ＰＮＤ及び抗ｇｐ１６０抗体力価は、それぞれｌウェルにっき０．１００ｇのＰＮＤペプチド又はＯ，１５ｕｇのｇｐｔ６ｏでコーティングしたマイクロウェルプレート（Ｎｕｎｃ）を用いたＥＬＩＳＡにより測定した。血清の適切な希釈溶液を用いたインキュベーションは、３７℃で１．５時間行ない、その後、血清をホースラディツシュ（西洋ワサビ）ペルオキシダーゼで標識したウサギ抗サル免疫グロブリン（Ｎｏｒｄｉｃ）と交換し、インキュベーションをさらに３７℃ で１．５時間続けた。結合した酵素の活性は、基質として０．０３％過酸化水素を用い、オルトフェニレンジアミン（Ｍｅｒｃｋ）を用いて測定した。３０分後に反応を硫酸で停止し、自動プレート読取り装置で（Ｖｍａｘ：　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）　４９０ｎｎ＋での吸光度を読み取った。内部標準として用いた陽性マヵク血清の選択されたプールを用いて得られた線形化した標準曲線から終点力価を計算した。得られた力価は、少なくとも０．１の光学密度の結果をもたらした最高の血清希釈度の逆数にほぼ相当する。

見かけの親和性定数（ＫＡ）を測定するため、ペプチドでコーティングしたプレート上にＬＡＩ　ＰＮＤペプチドの段階的希釈を作り、上述の滴定ＥＩＡにおいて１〜１．５の吸光度（ＡＯ）を生じた各々のマカクの血清の希釈溶液を添加した。次に、すでに記載したようにＥＩＡを行なった。Ｆｒｉｇｕｅｔら（２５）が記載しているとおりに、解離定数（Ｋｏ）を計算した。ＫＡ（親和性定数）は、ＫＡ＝１／ＫＯとして計算した。

ＩＩＩＢウィルス保存株を用いて、Ｈ９細胞での免疫蛍光フォーカス形成の阻害又はＣＥＭ−３Ｓ細胞でのシンシチウム形成の阻害（２６）により、中和抗体を測定した。相反する記載がないかぎり、中和力価は、対照と比較してフォーカス形成を５０％減少させたか又はシンシチウム形成を９０％減少させた血清希釈の逆数として定義した。

績釆アカゲザルの免疫のために考案し、従ってきた戦略を、図１に概略的に示す。簡単に言うと、ミョウバン（グループＡ）、ＩＦＡ（グループＢ）又は５ＡＦ−１（グループＣ）のいずれかと混合した同じ抗原調製物を用いて、４匹のサルからなる３つのグループを免疫した。１力月の間隔をおいて組換え型ＨＩＶ−１ｇｐ１６０を２回注射することにより、動物をブライミングし、次に３力月目と４力月目にＰＮＤペプチドの２回の注射で追加免疫を施し、それに続いて６力月目にｇｐ１６０及びＰＮＤペプチドの両方を最後に追加免疫注射した。６力月の免疫期間及びさらに６力月の追跡の間、免疫に用いたものと同じＨＩ　Ｖ−１単離株（ＬＡＩ）のＰＮＤ及び全ｇｐ１６０に対する抗体応答ならびにＨＩ　Ｖ　−Ｉ　ＩＩＩ　Ｂに対する中和抗体応答を、規則的に監視した。

ｇｐ１６０の２回の初期注射によって誘発された抗ｇｐ１６０抗体力価は、ＩＦＡ及び５ＡＦ−１グループにおいての方が、ミョウバングループにおいてよりも約１０倍高いものであった（それぞれＢ、Ｃ及びＡ、表１及び図２）。これらの力価は、ＰＮＤペプチドの注射に応答してわずかにしか増大せず、その後下降し始めた。

ｇｐ１６０とペプチドでの６力月の追加免疫注射は、３つのグループ全てに４〜１０倍の既往抗体反応を導いたが、ここでも又、ミョウバングループにおけるｇｐ１６０抗体力価は、ＩＦＡ又は５ＡＦ−１グループよりもおよそ１桁分低くとどまっていた（図２Ａ）。

７力月でのピークの後、力価は漸進的に下降したが、それでもなお、ミョウバングループを除いて１２力月目の採血時点で有為に高いものであった（表１）。

ｇｐ１６０の１回の注射後、抗ＰＮＤ抗体力価は低いままであり、２回の注射後、中程度に高くなった（表２）。これらの力価は、ＰＮＤペプチドの最初の注射により著しく増強され（３〜２０倍以上）、チンパンジーにおける我々の以前の観察が確認された（１６）６Ｌかしながら、ＰＮＤペプチドの２回目の注射の後、力価のさらなる増加は全（観察されなかった（図２Ｂ）。何匹かの動物においては、実際、この注射の後、抗ＰＮＤ力価の下降が起こった（表２）。同様に、抗ＰＮＤ力価に対する６力月目の追加免疫注射の効果は、その大きさが非常に制限されたものであり、その後、力価は定常的に下降した。かくして、７力月での抗ＰＮＤ力価は、逆説的に４力月目のものよりも低かった。この差異は１％のレベルで有為であった。このことは、すなわち、ＰＮＤペプチドの多すぎる注射が、実際に、ある種の免疫麻痺を導きうることを示唆している。ミョウバングループにおける抗ＰＮＤ力価は、いつでもＩＦＡ及び５ＡＦ−１グループにおけるものよりも約１桁９低（とどまっており、１２力月目に低いレベルの値に達した。

５力月目（ＰＮＤペプチドの２回目の注射から１力月後）、そして再び７力月目（６力月目の追加免疫から１力月後）に、中和抗体力価を測定した。表３に示したように、最高の中和力価は、ＩＦＡグループ（Ｂ）と５ＡＦ−１グループ（Ｃ）において生成された。

ミョウバングループ（Ａ）における中和力価は、確かにより低いものにとどまっており、何匹かの動物は、シンシチウム阻害検定により７力月目に測定した時、このグループにおいて陰性とさえ記録されていた。大部分の中和抗体力価は、ＰＮＤペプチドの２回の注射の直後（５力月目）には、ｇｐ１６０とペプチドを組合せた追加免疫注射の後（７力月目）と比べて、同じか又はより高いものであった。このことは、ここでも又、ＰＮＤペプチドの注射の反復が、ある程度の免疫麻痺を誘発する可能性があるということを示唆していた。

中和抗体応答の完全な時間的推移（タイムコース）を、グループＢの２匹の動物及びグループＣの２匹の動物について追跡した（図３）。ｇｐ１６０の２回の注射により誘発された中和力価は、ＰＮＤペプチドの注射の後、約５０倍に急上昇した。このことは、ｇｐ１６０でのブライミングとその後に続＜ＰＮＤペプチドでの追加免疫を通して、チンパンジーにおいて高いＨＩＶ中和抗体力価を誘発することができたという我々の以前の観察と一致している（１６）。中和抗体応答のその後の減衰は、６週間毎に約５０％の速度であった（図３）。

免疫された動物における抗ＨＩＶ抗体応答と中和抗体応答との間の考えられる相関関係を研究するため、シンシチウム阻害検定によって測定した中和力価を、抗ＰＮＤペプチド力価の関数としてプロットした（図４）。全ての動物について、両方の力価の間に明らかな相関関係が見られた。５力月目の時点について、１２匹の動物全体について計算した相関係数はｒ＝０．８５（Ｐ＜０．００１）であり、７力月目の時点については、ｒ＝０．８９　（Ｐ＜０．００１）であった。

動物の数が限られているにもかかわらず相関関係がきわめて有意であるという事実から、両方のパラメーターの間の関係が非常に強いものであったということが示唆されるに至る。

最後に、ＥＬＩＳＡにより、ＰＮＤペプチドについて、さまざまなサルの血清の溶液中での見かけの親和性定数を測定した（２５）。免疫された動物の３つのグループの間には、大きな相違は全く見られなかった（データ示さず）。

亙察本研究の目的は、６力月の免疫期間全体にわたり５回の注射に制限したｇｐ１６０ブライミング−ＰＮＤペプチド追加免疫という免疫スケジェールにおいてアカゲザルにＨＩＶ−１中和抗体を誘発する能力について、３つの異なるアジュバント製剤の効力を比較することにあった。ここで紹介したデータは、アジュバントを好適に選択すれば、このような短い免疫養生法に応答して高い抗ｇｐ１６０、抗ＰＮＤ及び中和抗体力価を生じさせることができたということを示している。

その他の研究者からの報告書（２７〜３１）と一致して、水酸化アルミニウムは、強い抗ＨＩ　Ｖ−１抗体応答を補助することができなかった。これとは対照的に、ＩＦＡ及びトレオニルＭＤＰベースの５ＡＦ−１は、両方共、高力価の抗ＨＩＶ抗体応答を誘発するのに好適であることがわかった。５ＡＦ−１及びＩＦＡに比較してミョウバンの類似の低い格付けが、ｇｐ１２０からのｅｎｖＴＩ　Ｔｈ細胞エピトープ及びＨＩＶ−１のＰＮＤペプチドからなる合成ペプチドであるＴｌ−３ＰＩＯに対するアヵゲザルの応答を研究した場合に、Ｈａｒｔら（３２）によって観察された。

ミョウバンは、ウサギにおけるＨＩＶ−Ｉ　ＰＮＤに対する抗体の誘発に関しても、３つのアジュバントのうちで最も貧弱なものであった（３３）。我々の研究では、免疫蛍光フォーカス又はシンシチウム阻害検定のいずれかにより測定した最高のＨＩＶ中和力価は、ＩＦＡを受けたサルにおいて観察された。５ＡＦ−１を受けたサルにおける中和力価はわずかに低いものであったが、それでもなお非常に有意であった。水酸化アルミニウムをアジュバントとした抗原を受けた動物における力価は、失望を感じるほど低いものであった。３つの動物グループ全てにおいて、中和抗体力価のピークは、ＰＮＤペプチドの注射の後に達成され、このことは、以前に記載された二重ｇｐ１６０−ＰＮＤペプチド免疫養生法（１６，１９）の利点を確認している。免疫された動物の３つのグループの間に、ｇｐ１６０及びＰＮＤ特異的抗体の平均の見かけの半減期にも、ＰＮＤ特異的抗体の見かけの親和性定数にも、有意な差異が全く見られなかったということを強調しておくべきであろう。

従って、ミョウバンとその他２つのアジュバントとの間の差は、惹起された抗体の実際のレベルにおいてだけであった。

我々は以前の実験において、抗原投与の時点で１＝３２を超えるＨＩＶ−１中和抗体力価をもつ免疫されたチンパンジーが、静脈内抗原投与に対して防御されていたということを観察した（１６、及び未公開の観察）。この力価を指標閾値レベルとして考慮すると、興味深いことに、ＳＡＦ’ｌグループの４匹のアカゲザルのうちの３匹、及びＩＦＡグループの４匹のうちの４匹が、免疫の４力月目という早い時点でこのレベルより上の力価を有していたものの、ミョウバングループの４匹の動物のいずれもが、そうではなかった。全体として、この研究において従った６力月の免疫スケジュールは、グループＢ及びＣを合わせた８匹の動物のうちの７匹において高い中和抗体力価を惹起することができた。我々は、将来の実験においては、その免疫麻痺の誘発の可能性から見て、４力月目のＰＮＤペプチド注射を除外して、合計注射回数を４回だけにするべきであると提案する。

免疫のために使用するｇｐ１６０及びＰＮＤペプチドの用量及び／又は注射回数のさらなる減少の可能性については、さらなる実験を待つばかりである。

アジュバントとして水酸化アルミニウムを用いたＨＩＶ−１に対するチンパンジーの免疫は、通常がっかりするような結果を生み出した。従って、ミョウバンをアジュバントとしたｇＰ１２０によりチンパンジーにおいて惹起された中和抗体の力価は、低い状態にとどまる場合が最も多（（２７，２９，３１）、おそらくこれが、何故動物のその後のウィルス抗原投与の時点でいかなる防御も観察されなかったのかを説明している（２８．２９）。我々は、最近、ミョウバン中のｇｐ１６０で３匹のチンパンジーを免疫し、次にこれらを同じくミョウバン中のＰＮＤペプチドで追加免疫したが、この免疫養生法によって誘発された低い中和抗体力価から見て、いずれの動物にも抗原投与を行なわなかった（未公開の観察）。これとは対照的に、Ｂｅｒｍａｎら（１５）による研究は、ｇｐ１６０ではなくミョウバン中のｇｐ１２０で免疫されたチンパンジーが、ＨＩ　Ｖ−１中和抗体を生じ、中程度の用量の無細胞ウィルスでの抗原投与に対して防御されたことを示した。この観察と前者との間の差異が本性と関り合いをもつものであるか否かに関わらず、免疫原の用量及び／又は物理的状態（完全に未変性であるもの、又はおそらくは部分的に変性されたもの）は今後決定すべきことである。

この研究及びその他の研究において、ミョウバンがＩＦＡ又は５ＡＦ−１はど強い免疫応答を惹起できなかった理由は、ＩＦＡ及び５ＡＦ−１の両方が油を含んでいるのに対して水酸化アルミニウムが無機担体であるという事実に関係がある可能性がある。抗原の提示にとっての脂質の重要性は、以前に認められている（２０．３１．３４．３５）。免疫系に対す６ＨＩＶ−Ｉ　ＰＮＤ（７）提示が、油の存在又は不在によって非常に異なるものになりつるということは、もっともなことである。ヒトにおけるＩＦＡの使用についてはすでに記載されており、不利な反応はほとんど報告されていない（３４，３６）。従って、ＩＦＡは、ヒトにおける将来のＨＩＶワクチンにとって有用なアジュバントであり得る。

顕著なことに、この研究において使用された１２匹の動物は、５力月及び７力月目の時点で抗ＰＮＤと中和抗体との力価の間の強い有意な相関関係を示した。このことは、中和抗体の大部分が、ワクチンに用いられるアジュバントとは無関係に、ＰＮＤにターゲティングされたということを示唆している（図４）。ここで観察されたものほど強くはないが、類似の相関関係がチンパンジーにおいても見られた（未公開の観察）。

これらの結果は、ＨＩＶ−１ワクチンについての多くの含蓄を有している。第一に、これらの結果は、ＩＦＡ又は５ＡＦ−１のようなアジュバントが、そのより大きい潜在能からみて、ミョウバンよりも好まれるべきであるということを示している。第二に、最近になって、ＰＮＤに加えてｇｐ１２０も又、広く交叉反応性をもつ中和抗体を惹起する保存されたコンホメーショナル中和エピトープを含んでいることが示されてきた（３７〜４１）。これらのコンホメーショナルエピトープに対する抗体は、ＣＤ４レセプターに対するウィルスの結合に干渉することによって、ウィルスの感染性を中和するものと思われる（３８．３９．４２）。ｇｐ１２０単独（１５）、又はｇｐ１６０とそれに続＜ＰＮＤペプチド（１６、及び本研究）により惹起された中和抗体の大部分が、実質的にＰＮＤだけに向けられているという事実は、ｇｐ１２０の保存されたコンホメーショナル中和エピトープが、これらの条件下で霊長類の免疫系には見えるものでないということを示唆している。このような広（中和する抗体応答を惹起するべく、抗原の送達モードを改善又は変更し、及び／又は宿主の免疫応答を操作する方法を見い出すことは、ＨＩＶワクチンの将来の開発にとって主要な重要性をもつことになるだろう。つまり、そのことなしでは、ＨＩＶ−１ワクチンは、単離株特異的で、野外のウィルスの広い抗原的多様性に対処できないものにとどまってしまう危険性があるだろう（６）。

慰避絶えず勇気づけ、支援して下さったＪ、−Ｐ、　Ｌｅｖｙ及びＪ、−Ｐ、　Ｌｅｃａｃｑ両氏、又、有効な提案をして下さったＪ、−Ｍ、　Ｄｕｐｕｙ及びＭ、　−Ｐ。

Ｋｉｅｎｙ両氏、ウィルス中和について御援助頂いたＡ、　Ｐｉｎｔｅｒ氏、ｇｐ１６０を御提供下さったｌ５ａｂｅｌｌｅ　Ｄｉａｚ氏、そして技術的に有効な援助を頂いたＪ、−Ｐ、　５ａｕｚｅｔ氏に対し、感謝の意を表したい。

本研究は、Ｐａ５ｔｅｕｒ　Ｍｅｒｉｅｕｘ　Ｓｅｒｕｍｓ　＆　Ｖａｃｃｉｎｓ及びフランス国立エイズ研究機関（Ｆｒｅｎｃｈ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｇｅｎｃｙ　ｆｏｒ　ＡＩＤＳ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ；ＡＮＲ３）の後援を受けて行なわれた。

参考文献１、Ａ１１ａｎ　ＪＳ、　Ｌｏｌｉｇａｎ　ＪＥ、　Ｂａｒｉｎ　Ｆ、　ＭｃＣａｎｅ　ＭＦ、　５ｏｄｒｏｓｋｉ　ＪＧ。

Ｒｏｓｅｎ　ＣＡ、　Ｈａｓｅｌｔｉｎｅ　ＷＡ、　Ｌｅｅ　ＴＨ及びＥｓ５ｅｘ　Ｍ　：　Ａ　Ｉ　ＤＳ患者において抗体を誘発する主要な糖タンパク質抗原は、ＨＴＬＶ−ｍによりコードされる。５ｃｉｅｎｃｅ　１９８５；　２２８：　１０９１−１０９４゜２、Ｖｅｒｏｎｅｓｅ　ＦＤ、　Ｄｅｖｉｃｏ　ＡＬ、　Ｃｏｐｅｌａｎｄ　ＴＤ、　０ｒｏｚｌａｎ　Ｓ、　Ｇａ１ｌ。

ＲＣ，及びＳａｒｎｇａｄｈａｒａｎ　ＭＧ　：　ＨＴ　ＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶエンベロープ遺伝子によりコードされる膜貫通タンパク質としてのｇｐ４１の特徴づけ。５ｃｉｅｎｃｅ　１９８５；　２２９：　１４０２−１４０５゜３、Ｐａ１ｋｅｒ　ＴＪ、Ｃ１ａｒｋ　ＭＥ、Ｌａｎｇｌｏｉｓ　ＡＪ、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ　ＴＪ。

Ｗｅｉｎｈｏｌｄ　ＫＪ、　Ｒａｎｄａｌｌ　ＲＲ，Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ　ＤＰ、及びＨａｙｎｅｓ　ＢＦ　：１ユヱにコードされた合成ペプチドに対する抗体を用いるヒト免疫不全症ウィルスの型特異的中和。Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　（ＩＪＳＡ）　１９８８；８５：　１９３２−１９３６゜４、Ｒｕ５ｃｈｅ　ＪＲ，Ｊａｖｈｅｒｉａｎに、　ＭｃＤａｎａｌ　Ｃ，Ｐｅｔｒｏ　Ｊ、　Ｌｙｎｎ　ＤＬ。

Ｇｒｉｍａｉｌａ　Ｒ，Ｌａｎｇｌｏｉｓ　Ａ、　Ｇａ１ｌｏ　ＲＣ，Ａｒｔｈｕｒ　ＬＯ，ＦｉｓｃｈｉｎｇｅｒＰＪ、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ　ＤＰ、　Ｐｕｔｎｅｙ　ＳＤ、及びＭａｔｔｈｅｗｓ　ＴＪ：抗体が、ヒト免疫不全症ウィルスに感染した細胞の融合を阻害し、ウィルスエンベロープｇｐ１２０の２４アミノ酸の配列を結合する。Ｐｒｏｃ　ＮａｔｌＡｃａｄ　５ｃｉ（ＵＳＡ）　１９８８；　８５：　３１９ｇ−３２０３゜５、Ｊａｖａｈｅｒｉａｎ　Ｋ、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ　ＡＪ、　ＭｃＤａｎａｌ　Ｃ，Ｒｏｓｓ　ＫＬ、　ＥｃｋｌｅｒＬＩ、　Ｊｅｌｌｉｓ　ＣＬ、　Ｐｒｏｆｙ　ＡＴ、　Ｒｕ５ｃｈｅ　ＪＲ，Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ　ＤＰ、　Ｐｕｔｎｅｙ　ＳＤ。

及びＭａｔｔｈｅｗｓ　ＦＪ　：ヒト免疫不全症ウィルスｌ型エンベロープタンパク質の主要な中和ドメイン。Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　（ＵＳＡ）　１９８９；８６：　６７６ｇ−６７７２。

６．　Ｍｙｅｒｓ　Ｇ、　Ｋｏｒｂｅｒ　Ｂ、　Ｂｅｒｚｏｆｓｋｉ　ＪＡ、　Ｓｍ１ｔｈ　ＲＦ、及びＰａｖｌａｋｉｓＧＮ：　ｒヒトレトロウィルスとＡＩＤＳ、核酸及びアミノ酸配列の編集と分析（Ｈｕｍａｎ　ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ａｎｄ　ＡＩＤＳ、　ａ　ｃｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ　ａｎｄａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅＬｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ａｎ＋ｉｎｏ　ａｃｉｄ　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ）Ｊ　ｏ　ＬｏｓＡｌａｍｏｓ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｌｏｓ　Ａｌａｍｏｓ、　Ｎｅｗ　Ｍｅｘｉｃｏ　１９９１　。

７、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　ＮＥ　Ｊｒ、及びＭｉｔｃｈｅｌ　ＷＭ：インビトロ及びインビボでのＨＩＶ及びサル免疫不全症ウィルス感染の中和と増強。ＡＩＤＳ１９９０；　４　（ｓｕｐｐｌ　１）：　５１５１−８１６２゜８、Ｐｕｔｎｅｙ　ＪＲ，Ｍａｔｔｈｅｗｓ　ＴＪ、　Ｒｏｂｅｙ　ＷＧ、　Ｌｙｎｎ　ＤＬ、　Ｒｏｂｅｒｔ−Ｇｕｒｏｆｆ　Ｍ、　Ｍｅｕｌｌｅｒ　ＷＴ、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ　ＡＪ、　Ｇｈｒａｙｅｂ　Ｊ、　Ｐｅｔｔｅｗａｙ　ＳＲ：ウィルスエンベローブのＥ、　ｃｏｌｉ産生フラグメントに対するＨ　Ｔ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩＩ　／　Ｌ　Ａ　Ｖ中和抗体。５ｃｉｅｎｃｅ　１９８６；　２３４：　１３９２ −１３９５゜９、Ｌａ　Ｒｏｓａ　Ｇ、　Ｄａｖｉｄ　ＪＰ、　Ｗｅｉｎｈｏｌｄ　Ｋ、　Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ　ＪＡ、　ＰｒｏｆｙＡＴ、　Ｌｅｗｉｓ　ＪＡ、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ　ＡＪ、　Ｄｒｅｓｓｍａｎ　ＧＲ，Ｂｏｓｗｅｌｌ　ＲＮ、　５ｈａｄｄｕｃｋＰ、　）ｌｏｌｌｅｙ　ＬＨ，Ｋａｒｐｌｕｓ　Ｍ、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ　ＤＰ、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ　ＴＪ、　ＥｍｉｎｉＥＡ、及びＰｕｔｎｅｙ　５ＡＳＨＩ　Ｖ主要中和抗原決定基における保存された配列及び構造的要素。５ｃｉｅｎｃｅ　１９９０；　２４９：　９３２−９３５゜１０、Ｐｕｔｎｅｙ　ＳＤ、及びＭｃＫｅａｔｉｎｇ　ＪＡ；　ＨＩ　Ｖにおける抗原的変動。

ＡＩＤＳ　１９９０；　４　（ｓｕｐｐｌ　１）：　５１２９−３１３６゜１１、Ｎａｒａ　ＰＬ、　Ｇａｒｒｆｔｙ　ＲＲ及びＧｏｕｄｓｍｉｔ　Ｊ：　ＨＩ　Ｖ　−１の中和、液性割合の逆説。ＦＡＳＥＢ　Ｊ　１９９１．５：　２４３７−２４５５゜１２、Ｍａｔｔｈｅｗｓ　ＴＪ、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ　ＡＪ、　Ｒｏｂｅｙ　ＷＧ、　Ｃｈａｎｇ　ＮＴ、　Ｇａ１ｌ。

ＲＣ，Ｆｉｓｈｃｉｎｇｅｒ　ＰＪ、及びＢｏｌｏｇｎｅｓｉ　ＤＰ：主要なエンベロープ糖タンパク質に対する抗体による多様なヒトＴ−リンパ栄養的ウィルス■型単離株の制限された中和。Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　（ＵＳＡ）　１９８６；　８３：９７０９−９７１３　。

１３、Ｎａｒａ　ＰＣ，Ｒｏｂｅｙ　ＷＧ、　Ｐｙｌｅ　ＳＷ、　Ｈａｔｃｈ　ＷＣ，Ｄｕｎｌｏｐ　ＮＭ、　Ｂｅ５ｓＪＷ　Ｊｒ、　Ｋｅｌｌｉｈｅｒ　ＪＣ，Ａｒｔｈｕｒ　１０．及びＦｉｓｃｈｉｎｇｅｒ　ＰＪ：ヒト免疫不全症ウィルス１型変異体からの精製されたエンベロープ糖タンパク質は、個々の型特異的中和抗体を誘発する。Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ　１９８８；　６２：２６２２−２６銘。

１４、Ｎａｒａ　ＰＬ：ＨＩ　Ｖ　−１の中和：ｇｐ１２０免疫優性エピトープを通して媒介される結合／結合後事象。「ヒト及び関連動物の疾病のレトロウィルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ａｎｉｍａｌｄｉｓｅａｓｅｓ）　Ｊ中。Ｍ、　Ｇｉｒａｒｄ及びり、　Ｖａｌｅｔｔｅ編、ＦｏｎｄａｔｉｏｎＭａｒｃｅｌ　Ｍｅｒｉｅｕｘ、　Ｌｙｏｎ　１９８ｇ、　ｐｐ　１３８−１５０゜１５、Ｂｅｒｍａｎ　ＰＷ、　Ｇｒｅｇｏｒｙ　ＦＪ、　Ｒｉｄｄｌｅ　Ｌ、　Ｎａｋａｍｕｒａ　ＧＲ，ＣｈａｍｐｅＭＡ、　Ｐｏｒｔｅｒ　ＪＰ、　Ｗｕｒｍ　ＦＭ、　ｌ（ｅｒｓｃｈｂｅｒｇ　ＲＤ、　Ｃｏｂｂ　ＥＫ、及びＥｉｃｈｂｅｒｇ　ＪＷ：　ｇ　ｐ　１６０ではなく組換え型ｇｐ１２０での予防接種後のＨＩＶ−１による感染からのチンパンジーの防御。Ｎａｔｕｒｅ１９９０．３４５：　６２２−６３５゜１６、Ｇｉｒａｒｄ　Ｍ、　Ｋｉｅｎｙ　ＭＰ、　Ｐｉｎｔｅｒ　Ａ、　Ｂａｒｒｅ−５ｉｎｏｕｓｓｉ　Ｆ、　ＮａｒａＰ、　Ｋｏｌｂｅ　Ｈ，Ｋｕｓｕｍｉ　Ｋ、　Ｃｈａｐｕｔ　Ａ、　Ｒｅ１ｎｈａｒｔ　Ｔ、　Ｍｕｃｈｍｏｒｅ　Ｅ。

Ｒｏｎｃｏ　Ｊ、　Ｋａｃｚｅｒｋ　Ｍ、　Ｇｏｍａｒｄ　Ｅ、　Ｇｌｕｃｋｍａｎ　ＪＣ，及びＦｕｌｔｚ　Ｐ：チンパンジーの免疫はヒト免疫不全症ウィルスでの抗原投与に対する防御を付与する。Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　（ＵＳＡ）　１９９１；　８８：　５４２−５４６　。

１７、Ｇｆｒａｒｄ　Ｍ、及びＥｉｃｈｂｅｒｇ　ＪＷ：ＨＩ　Ｖワクチンの開発における進歩：　ＡＩＤＳ　１９９０；　４　（ｓｕｐｐｌ　１）：　５１４３−３１５０　。

１８、Ｐｕｔｋｏｎｅｎ　Ｐ、　Ｔｈｏｒｓｔｅｎｓｓｏｎ　Ｒ，Ｇｈａｖａｍｚａｄｅｈ　Ｌ、　Ａｌｂｅｒｔ　Ｊ。

Ｈｉｌｄ　Ｋ、　Ｂｉｂｅｒｆｅｌｄ　Ｇ、及びＮｏｒｒｂｙ　Ｅ：カニクイザルにおける受動免疫によるＨＩＶ−２及びＳＩＶｓｍ感染の予防。Ｎａｔｕｒｅ　１９９１；３５２：　４３６−４３８゜１９、Ｇｉｒａｒｄ　Ｍ：　ＨＩ　Ｖワクチンの挑戦６　Ｖａｃｃｉｎｅ　１９９１；印刷中。

２０、Ａ１１ｉｓｏｎ　ＡＣ，及びＢｙａｒｓ　ＮＥ：防御イソタイプの抗体及び細胞媒介性免疫の形成を選択的に惹起するアジュバント製剤。Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　１９８６；　９５：　１５７−１６８゜２１、Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ　Ｓ、　Ｖａｒｔａｎｉａｎ　ＪＰ、　Ｈｅｎｒｙ　Ｍ、　Ｃｈｅｎｃｉｎｅｒ　Ｎ。

Ｃｈｅｙｎｉｅｒ　Ｒ，Ｄｅｌａｓｓｕｓ　Ｓ、　Ｐｅｄｒｏｚａ　Ｍａｒｔｉｎｓ　Ｌ、　５ａｌａ　Ｍ、　ＮｕｇｅｙｒｅＭＴ、　Ｇｕｅｔａｒｄ　Ｄ、　Ｂａｒｒｅ−３ｉｎｏｕｓｓｉ　Ｆ、及びＭｏｎｔａｇｎｉｅｒ　Ｌ：　Ｌ　Ａ　Ｖの再来：パスツール研究所からの早期のウィルスＨＩ　Ｖ−１単離株の起源。５ｃｉｅｎｃｅ　１９９１；　２５２：　９６１−９６４゜２２、Ｋｉｅｎｙ　ＭＰ、　Ｌａｔｈｅ　Ｒ，Ｒｉｖｉｅｒｅ　Ｙ、　Ｄｏｔｔ　Ｋ、　Ｓｃｈｍｉｔｔ　Ｄ。

Ｇｉｒａｒｄ　Ｍ、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ　Ｌ、及びＬｅｃｏｃｑ　ＪＰ：切断部位の除去にょるＨ　Ｉ　Ｖｅｎｖタンパク質の改良された免疫原性。ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　１９８８；　２：　２１９−２２５゜２３、Ｓｃｈｍｉｔｔ　Ｄ、　Ｄｅｚｕｔｔｅｒ−Ｄａｍｂｕｙａｎｔ　Ｃ，Ｈａｎａｕ　Ｄ、　Ｓｃｈｍｉｔｔ　ＤＡ。

Ｋｏｌｂｅ　）ＩＶ、　Ｋｉｅｎｙ　ＭＰ、　Ｃａｚｅｎａｖｅ　ＪＰ、及びＴｈ１ｖｏｌｅｔ　Ｊ：　ＨＩ　Ｖのエンベロープタンパク質は、ＣＤ４分子が担持する部位とは異なる固定部位上でヒト表皮ランゲルハンス細胞によって固定され、「レセプターによるエンドサイト−シスｊにより内在化される。ＣＲＡｃａｄＳｃｉ　（Ｐａｒｉｓ）　１９８９；　３０９　（ｍ）　：　２６９−２７５゜２４、Ｔｈｏｍａｓ　ＤＪ、　Ｗａｌｌ　ＪＳ、　Ｈａｉｎｆｉｅｌｄ　ＪＦ、　Ｋａｃｚｏｒｅｋ　Ｍ、　Ｂｕｄｙ　ＦＰ。

Ｔｒｕｓ　ＢＬ、　Ｅｉｓｅｒｌｉｎｇ　ＦＡ、及び５ｔｅｖｅｎ　ＡＣ：ヒト免疫不全症ウィルス１型のエンベロープ糖タンパク質は、そのｇｐ４１ドメイン間の相互作用を通して安定化された１２５キロダルトンのサブユニットの二量体である。Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ　１９９１；　６５：　３７９７−３８０３゜２５、Ｆｒｉｇｕｅｔ　Ｂ、　Ｃｈａｆｆｏｔｔｅ　ＡＦ、　Ｄｊａｖａｄｉ−Ｏｈａｎｉａｎｃｅ　Ｌ、及びＧｏｌｄｂｅｒｇ　ＭＥ：＃素結合免疫吸着検定法による抗原−抗体複合体の溶液中の真の親和性定数の測定。Ｊ、　Ｉｍｍｕｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　１９８５；　７７：３０５−３１９　。

２６、Ｎａｒａ　ＰＬ、　Ｈａｔｃｈ　ＷＣ，Ｄｕｎｌｏｐ　ＮＭ、　Ｒｏｂｅｙ　ＷＧ、　Ａｒｔｈｕｒ　ＬＯ。

Ｇｏｎｄａ　ＭＡ、及びＦｉｓｈｉｎｇｅｒ　ＰＪ：　ヒト免疫不全症ウィルス中和抗体の検出のための簡便で迅速な定量的シンシチウム形成マイクロアッセイ。ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ　Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　１９ｇ７；　３：　２８３−３０２゜２７、Ａｒｔｈｕｒ　ＬＯ，Ｐｙｌｅｓ　ＳＷ、　Ｎａｒａ　ＰＬ、　Ｂｅ５ｓ　ＪＷ　Ｊｒ、　Ｇｏｎｄａ　ＭＡ。

Ｋｅｌｌｉｈｅｒ　ＪＣ，Ｇ１１ｄｅｎ　ＲＶ、　Ｒｏｂｅｙ　ＷＧ、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ　ＤＰ、　Ｇａ１ｌｏ　ＲＣ及びＦｉｓｃｈｉｎｇｅｒ　ＰＪ：ヒト免疫不全症ウィルス糖タンパク質（ｇｐ１２０）サブユニットワクチンの接種を受けたチンパンジーにおける血清学的応答。Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　（ＵＳＡ）　１９８７；　８４：８５８３゜２ｇ、、Ａｒｔｈｕｒ　ＬＯ，、Ｂｅ５ｓ　ＪＷ　Ｊｒ、　Ｗａｔｅｒｓ　ＤＪ、　Ｐｙｌｅ　ＳＷ、　ＫｅｌｌｉｈｅｒＪＣ，Ｎａｒａ　ＰＬ、　Ｋｒｏｈｎ　Ｋ、　Ｒｏｂｅｙ　ＷＧ、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ　ＡＪ、　Ｇａ１ｌｏ　ＲＣ及びＦｉｓｃｈｉｎｇｅｒ　ＰＪ：ヒト免疫不全症ウィルスエンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０で免疫されたチンパンジー（（１）ｋ邦お瓜注目）の抗原投与。

Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ　１９８９；　６３：　５０４６−５０５３゜２９．　Ｂｅｒｍａｎ　ＰＷ、Ｇｒｏｏｐｍａｎ　ＪＥ、Ｇｒｅｇｏｒｙ　Ｔ、Ｃｌａｐｈａｍ　ＰＲ，ＷｅｉｓｓＲＡ、Ｆｅｒｒｉａｎｉ　Ｒ，Ｒｉｄｄｌｅ　Ｌ、　Ｓｈｉｍａｓａｋｉ　Ｃ，Ｌｕｃａｓ　Ｃ，Ｌａ５ｋｙ　ＬＡ。

及びＥｉｃｈｂｅｒｇ、　ＪＷ：組換え型エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０で免疫されたチンパンジーのヒト免疫不全症ウィルス１型での抗原投与。Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｅｔ　（ＵＳＡ）　１９８８；　８５：　５２００ −５２０４゜３０、Ａｎｄｅｒｓｏｎ　ＫＰ、　Ｌｕｃａｓ　Ｃ，Ｈａｎｓｏｎ　ＣＶ、　Ｌｏｎｄｅ　ＨＦ、　Ｉｚｕ　Ａ。

Ｇｒｅｇｏｒｙ　Ｔ、　Ａｍｍａｎｎ　Ａ、　Ｂｅｒｍａｎ　ＰＷ、及びＥｉｃｈｂｅｒｇ　ＪＷ：ＨＩ　Ｖ　−１の組換え型糖タンパク質１２０に対するヒヒの免疫応答に関する用量及び免疫スケジュールの影響。Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ　１９８９；　１６０二９６０−９６９　。

３１、Ｍａｎｎ−）ｆａｌｔｅｒ　ＪＷ、　Ｐｕｍ　Ｍ、　Ｗｏｌｆ　ＨＭ、　Ｋｕｐｃｕ　Ｚ、　Ｂａｒｒｅｔｔ　Ｎ。

Ｄｏｒｎｅｒ　Ｆ、　Ｅｄｅｒ　Ｇ、及びＥｉｂｌ　ＭＭ：ＨＩ　Ｖ　−１糖タンパク質ｇｐ１６０でのチンパンジーの免疫は、長く持続するＴ細胞メモリーを誘発する。ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ　Ｈｕｍ　ＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅＳ１９９１；　７：　４８５−４９３゜３２、Ｈａｒｔ　ＭＫ、　Ｐａ１ｋｅｒ　ＴＪ、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ　ＴＪ、　Ｌａｎｇｌｏｉｓ　ＡＪ、　ＬｅｒｃｈｅＮＷ、　Ｍａｒｔｉｎ　ＭＥ、　５ｃｅａｒｃｅ　ＲＭ、　ＭｃＤａｎａｌ　Ｃ，Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ　ＤＰ、及びＨａｙｎｅｓ　ＢＦ：ヒト免疫不全症ウィルスエンベロープｇｐ１２０からのＴ及びＢ細胞エピトープを含む合成ペプチドは、アカゲザルにおいて高い力価の中和抗体及び抗ＨＩＶ増殖性応答を誘発する。

Ｊ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　１９９０；　１４５：　２６７７−２６８５゜３３、Ｒｏｎｃｏ　Ｊ、　Ｃ：ｈｅｖａｌｉｅｒ　Ｍ、　Ｋａｃｚｏｒｅｋ　Ｍ、　Ｄｅｓｌａｎｄｒｅｓ　Ａ、　Ｂａｒｒｅ−３ｉｎｏｕｓｓｉ　Ｆ、及びＧｉｒａｒｄ　Ｍ：合成ペプチドによるＨ　Ｉ　Ｖ−１中和抗体の誘発。「ワクチン９１　（Ｖａｃｃｉｎｅｓ　９１）　Ｊ中、　Ｅ、　Ｌｅｒｎｅｒ、　Ｃ。

Ｃｈａｎｏｃｋ、　Ｆ、　Ｂｒｏｗｎ、及びＨ，Ｇｉｎｓｂｅｒｇ編、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　ＮＹ１９９１、ｐｐ　２９−３５゜３４、Ｒｏｏｆ　ＲＷ、　Ｌｕｅｓｃｈｅｒ　ＩＦ、及びＵｎａｎｕｅ　Ｅ：　リン脂質は、クラス■主要組織適合性分子に対するペプチドの結合を増強する。

Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　（ＵＳＡ）　１９９０；　８７：　１７３５−１７３９゜３５、　５ａｌｋ　Ｊ：血清陽性者を免疫することによるＡＩＤＳの制御に関する展望。Ｎａｔｕｒｅ　１９８７；　３２７：　４７３−４７６゜３６、Ｌｅｖｉｎｅ　Ａ、　Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ　Ｂ、　Ｇｒｏｓｈｅｎ　Ｓ、　Ｍｕｎｓｏｎ　Ｋ、　Ａ１１ｅｎＪ、　Ｃａｒｌｏ　Ｄ、　Ｂｕｒｎｅｔｔ　Ｋ、　Ｊｅｎｓｅｎ　Ｆ、　Ｆｅｒｒｅ　Ｆ、　Ｔｒａｕｇｅｒ　Ｒ。

Ａｂｒａｈａｍｓｏｎ　Ｊ、　Ｇｅｒｓｔｅｎ　Ｍ、及び５ａｌｋ　Ｊ：不活性化されたＨＩＶ免疫　′原を用いたＨＩＶ感染者の免疫、［ヒトＡＩＤＳ及び関連疾病のレトロウィルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ＡＩＤＳ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ）　Ｊ中。Ｍ　Ｇｉｒａｒｄ及びＬ　Ｖａｌｅｔｔｅ編、　Ｆｏｎｄａｔｉｏｎ　ＭａｒｃｅｌＭｅｒｉｅｕｘ、　Ｌｙｏｎ　１９９０．　ｐｐ　２４７−２５０゜３７、Ｓｔｅｉｍｅｒ　ＫＳ、及びＨａｉｇｗｏｏｄ　ＮＬ：　ＨＩ　Ｖ　−１のｇｐ１２０に対する中和抗体応答のコンフォメーションの重要性。ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＴｈｅｒａｐ　１９９１；　２：　６３−８９゜３８、　０１ｓｈｅｖｓｋｙ　Ｕ、　Ｈｅ１ｓｅｔｈ　Ｅ、　Ｆｕｒｍａｎ　Ｃ，Ｌｉ　Ｊ、　Ｈａｓｅｌｔｉｎｅ　Ｗ、及びＳｏｄｒｏｗｓｋｉ　Ｊ：ＣＤ　４レセプター結合にとって重要な個々のヒト免疫不全症ウィルス１型ｇｐ１２０アミノ酸の同定。Ｊ　Ｖｉｒｏｌ　１９９０；６４：　５７０１−５７０７゜３９、Ｈｏ　Ｄ、　ＭｃＫｅａｔｉｎｇ　ＪＡ、　Ｌｉ　ＸＬ、　Ｍｏｕｄｇｉｌ　Ｔ、　Ｄａａｒ　ＥＳ、　Ｓｕｎ　Ｎ。

及びＲｏｂｉｎｓｏｎ　ＪＥ：ヒトモノクローナル抗体により同定された、ＣＤ４結合及びヒト免疫不全症ウィルス１型の中和において重要なｇｐ１２０のコンホメーショナルエビトープ。Ｊ　Ｖｉｒｏｌ　１９９１；　６５：４８９−４９３゜４０、Ｐｏ５ｎｅｒ　ＭＲ，ｌ（ｉｄｅｓｈｉｍａ　Ｔ、　Ｃａｎｎｏｎ　Ｔ、　Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ　Ｍ、　ＭａｙｅｒＫＨ，及びＢｙｒｎＲＡ：ＨＩＶ−１ｇｐ１２０と反応するＩｇＧヒトモノクローナル抗体は、細胞に対するウィルスの結合を阻害し、感染を中和する。Ｊ　Ｖｉｒｏｌ　１９９１；　６５：　４８９−４９３゜４１、Ｋａｎｇ　ＣＹ、　Ｎａｒａ　Ｐ、　Ｃ：ｈａｍａｔ　Ｓ、　（：ａｒａｌｌｉ　Ｖ、　Ｒｙｓｋａｍｐ　Ｔ。

Ｈａｉｇｗｏｏｄ　Ｎ、　Ｎｅｗｍａｎ　Ｒ，及びＫｏｈｌｅｒ　Ｈ：ヒト免疫不全症ウィルス１に感染したヒトにおいてｇｐ１２０／ＣＤ４結合と干渉する非ｖ３特異的中和抗体についての証拠。Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　（ＵＳＡ）　１９９１；８８：　６１７１−６１７５゜４２、Ｔｉ１ｌｅｙ、　ＳＡ、　Ｈｏｎｎｅｎ　ＪＷ、　Ｒａｃｈｏ　Ｍ、　Ｈｉｌｇａｒｔｎｅｒ　Ｍ、及びＰｉｎｔｅｒ　Ａ：　ＨＩ　Ｖ　−１ｇｐ　１２０のＣＤ４結合部位に対するヒトモノクローナル抗体は、強（広範な中和活性を示す。Ｒｅｓ　Ｖｉｒｏ１１９９１　、印刷中。

参考文献１．　Ｋｏｆｆ、　Ｗ、Ｃ，＆　Ｆａｕｃｉ、　Ａ、Ｓ、　（１９８９）　ＡＩＤＳ　３（ＳＬ）、　５１２５−３１２９゜２、Ａｄａ、　Ｇ、Ｌ、　（１９８９）　Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）　３３９．３３１−３３２゜３゜　Ｂｅｒｍａｎ、　Ｐ、Ｗ、、　Ｇｒｏｏｐｍａｎ、　Ｊ、Ｅ、、　Ｇｒｅｇｏｒｙ、　Ｔ、、　Ｃｌａｐｈａｍ。

Ｐ、Ｒ，、Ｗｅｉｓｓ、　Ｒ，Ａ、、　Ｆｅｒｒｉａｎｉ、　Ｒ，、Ｒｉｄｄｌｅ、　Ｌ、、　Ｓｈｉｍａｓａｋｉ、　Ｃ，。

Ｌｕｃａｓ、　Ｃ，、Ｌａ５ｋｙ、　Ｌ、Ａ、　ｔｔ　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、　Ｊ、Ｗ、　（１９８９）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８５５２００−５２０４゜４、Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、０．、　Ｂｅ５ｓ、　Ｊ、Ｗ、、　Ｗａｔｅｒｓ、　Ｄ、Ｊ、、　Ｐｙｌｅ、　Ｓ、Ｗ、。

にｅｌｌｉｈｅｒ、Ｊ、Ｃ，、Ｎａｒａ、Ｐ、Ｌ、、Ｋｒｏｈｎ、Ｋ、、Ｒｏｂｅｙ、Ｗ、Ｇ、。

Ｌａｎｇｌｏｉｓ、　Ａ、Ｊ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，＆　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、　Ｐ、Ｊ、（１９８９）　Ｊ。

Ｖｉｒｏｌ、　６３．５０４６−５０５３゜５、Ｇｉｒａｒｄ、　Ｍ６．　Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、、　Ｇｌｕｃｋｍａｎ、Ｊ、Ｃ，、Ｂａｒｒｅ−３ｉｎｏｕｓｓｉ、　Ｆ、、　Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、　Ｌ、　＆　Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、　（１９９０）、ｒ性感染柄のためのワクチン（Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｆｏｒ　５ｅｘｕａｌｌｙ　ＴｒａｎｓｍｉｔｔｅｄＤｉｓｅａｓｅｓ）　Ｊ　、　Ｍｅｈｅｕｓ、　Ａ、　＆　５ｐｉｅｒ、　Ｒ，編（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ　Ｃｏ、。

Ｌｔｄ、、　Ｌｏｎｄｏｎｌ中、　ｐｐ、　２２７−２３ｙ。

６、Ｈｕ、　Ｓ、Ｌ、、　Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、Ｎ、、　ＭｃＣｌｕｒｅ、　Ｈ，Ｍ、、　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、　Ｊ、Ｗ、。

Ｔｈｏｍａｓ、　Ｅ、に、、　Ｚａｒｌｉｎｇ、　Ｊ、、　Ｓｉｎｇｈａｌ、　Ｍ、Ｃ，、Ｋｏｓｏｗｓｋｉ、　Ｓ、Ｇ、。

Ｓｗｅｎｓｏｎ、　Ｒ，Ｂ、、　Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、、　Ｃ，＆　Ｔｏｄａｒｏ、　Ｇ、（１９８７）　Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）　３２８．７２１ −７２３゜７、Ｂｅｒｍａｎ、　Ｐ、Ｗ、、　Ｇｒｅｇｏｒｙ、　Ｔ、Ｊ、、　Ｒｉｄｄｌｅ、　Ｌ、、　Ｎａｋａｍｕｒａ。

Ｇ、Ｒ，、Ｃｈａｍｐｅ、　Ｍ、Ａ、、　Ｐｏｒｔｅｒ、　Ｊ、Ｐ、、　Ｗｕｒｍ、　Ｆ、Ｍ、、　Ｈｅｒｓｈｂｅｒｇ。

Ｒ，Ｄ、、　Ｃｏｂｂ、　Ｅ、に、　＆　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、　Ｊ、Ｗ、（１９９０）　Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）３４５、６２２−６２５゜８、Ｄｅｓｒｏｓｉｅｒｓ、　Ｒ，Ｃ，、Ｗｙａｎｄ、　Ｍ、Ｓ、、　Ｋｏｄａｍａ、　Ｔ、、　Ｒｉｎｇｌｅｒ。

Ｄ、Ｊ、、　Ａｒｔｈｕｒ、　Ｌ、０１．　Ｓｅｈｇａｌ、　Ｐ、に、、　Ｌｅｔｖｉｎ、　Ｎ、Ｌ、、　Ｋｉｎｇ、　Ｎ、Ｗ、　＆Ｄａｎｉｅｌ、　Ｍ、Ｄ、（１９８９）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８６８６゜６３５３−６３５７゜９、Ｍｕｒｐｈｅｙ−Ｃｏｒｂ、　Ｍ、、　Ｍａｒｔｉｎ、　Ｌ、Ｍ、、　Ｄａｖｉｓｏｎ−Ｆａｉｒｂｕｒｎ、　Ｂ、。

Ｍｏｎｔｅｌａｒｏ、　Ｒ，Ｃ，、Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｍ、、　Ｗｅｓｔ、　Ｍ、、　Ｏｈｋａｗａ、　Ｓ、、　Ｂａ５ｋｉｎ。

Ｇ、Ｂ、、　Ｚｈａｎｇ、　Ｊ、Ｙ、、　Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、、　Ｄ、　Ａ１１ｉｓｏｎ、　Ａ、Ｃ，＆　Ｅｐｐｓｔｅｉｎ。

Ｄ、Ａ、（１９８９）　５ｃｉｅｎｃｅ　２４６．　１２９３−１２９７゜１０、Ｅｍｉｎｉ、　Ｅ、Ａ、、　Ｎａｒａ、　Ｐ、Ｌ、、　５ｃｈｌｅｉｆ、　Ｗ、Ａ、、　Ｌｅｗｉｓ、　Ｊ、Ａ、。

Ｄａｖｉｄｅ、Ｊ、Ｐ、、Ｌｅｅ、Ｄ、Ｒ，、Ｋｅｓｓｌｅｒ、Ｊ、、Ｃｏｎ１ｅｙ、Ｓ、。

Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ、　Ｓ、、　Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、Ｄ、、　Ｇｅｒｅｔｙ、　Ｒｊ、　＆　Ｅｉｃｈｂｅｒｇ、　Ｊ、Ｗ。

（１９９０）　Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、６４．　３６７４−３６７８゜１１、Ｍｏｏｒ −Ｊａｎｋｏｗｓｋｉ、Ｊ、＆　Ｍａｈｏｎｅｙ、Ｃ，Ｊ、（１９８９）　Ｊ、Ｍｅｄ。

Ｐｒｉｍａｔｏｌ、１８．１−２６゜１２、Ｋｉｅｎｙ、Ｍ、Ｐ、、Ｌａｔｈｅ、Ｒ，、Ｒｉｖｉｅｒｅ、Ｙ、、Ｄｏｔｔ、Ｋ、。

Ｓｃｈｍｉｔｔ、Ｄ、、Ｇｉｒａｒｄ、Ｍ、、Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、Ｌ、＆　Ｌｅｃｏｃｑ、、Ｊ、Ｐ、（１９８ｇ）　Ｐｒｏｔ、Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　２．　２１９−２２６゜１３、Ｓｃｈｍｉｄｔ、Ｄ、、Ｄｅｚｕｔｔｅｒ−Ｄａｍｂｕｙａｎｔ、Ｃ，、Ｈａｎａｕ、Ｄ、。

Ｓｃｈｍｉｔｔ、Ｄ、Ａ、、Ｋｏｌｂｅ、　Ｈ，Ｖ、Ｊ、、Ｋｉｅｎｙ、　Ｍ、Ｐ、、Ｃａｚｅｎａｖｅ、　Ｊ、Ｐ。

＆　Ｔｈ１ｖｏｌｅｔ、　Ｊ、（１９８９）　（：ｏｍｐｔｅｓ　Ｒｅｎｄｕｓ　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　Ｐａｒｉｓ、　３０８（ＩＩＩ）、２６９−２７５゜１４、Ｇｕｙ、　Ｂ、、　Ｒｉｖｉｅｒｅ、　Ｙ、、　Ｄｏｔｔ、　Ｋ、、　Ｒｅｇｎａｕｌｔ、　Ａ、　＆　Ｋｉｅｎｙ。

Ｍ、Ｐ、（１９９０）　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　１７６、　４１３−４２５゜１５、Ｋｏｌｂｅ、Ｈ，Ｖ、、Ｊａｅｇｅｒ、Ｆ、、Ｌｅｐａｇｅ、Ｐ、、Ｒｏｉｔｓｃｈ、Ｃ，。

Ｌａｃａｕｄ、Ｇ、、　Ｋｉｅｎｙ、Ｍ、Ｐ、、５ａｂａｔｉｅ、Ｊ、、　Ｂｒｏｗｎ、　Ｓ、Ｗ、＆　Ｌｅｃｏｃｑ。

Ｊ、Ｐ、（１９８９）　Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　４７６、　９９− １１２゜１６、Ａ１１ｉｓｏｎ、　Ａ、（：、＆　Ｂｙａｒｓ、　Ｎ、Ｅ、（１９８６）　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ９５．１５７−１６８゜１７、Ｐｕｔｎｅｙ、　Ｓ、Ｄ、、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｔ、Ｊ、、　Ｒｏｂｅｙ、　Ｗ、Ｇ、、　Ｌｙｎｎ、　Ｄ、Ｌ、。

Ｒｏｂｅｒｔ−Ｇｕｒｏｆｆ、Ｍ、、Ｍｕｅｌｌｅｒ、Ｗ、Ｔ、、Ｌａｎｇｌｏｉｓ、Ａ、Ｌ、、Ｇｈｒａｙｅｂ。

Ｊ、、Ｐｅｔｔｅｗａｙ、Ｓ、Ｒ，、Ｗｅｉｎｈｏｌｄ、　Ｋ、Ｊ、、Ｆｉｓｈｉｎｇｅｒ、Ｐ、Ｊ、、　Ｗｏｎｇ−３ｔａａｌ、　Ｆ、、　Ｇａ１ｌｏ、　Ｒ，Ｃ，＆　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄ、Ｐ、（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３４゜１３９２−１３９５゜１８、Ｒｕ５ｃｈｅ、Ｊ、Ｒ，、Ｋａｖａｈｅｒｉａｎ、Ｋ、、ＭｃＤａｎａｌ、Ｃ，、Ｐｅｔｒｏ。

Ｊ、、Ｌｙｎｎ、Ｄ、Ｌ、、Ｇｒｉｍａｉｌａ、Ｒ，、Ｌａｎｇｌｏｉｓ、Ａ、、Ｇａ１ｌｏ、Ｒ，Ｃ，。

Ａｒｔｈｕｒ、Ｌ、Ｏ，、Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、Ｐ、Ｊ、、Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、Ｄ、Ｐ、、Ｐｕｔｎｅｙ。

Ｓ、Ｄ、＆　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｔ１．　（１９８８）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８５．３１９８−３２０２゜１９、ＬａＲｏｓａ、Ｇ、Ｊ、、Ｄａｖｉｄｅ、Ｊ、Ｐ、、Ｗｅｉｎｈｏｌｄ、Ｋ、、Ｗａｔｅｒｂｕｒｙ。

Ｊ、Ａ、、Ｐｒｏｆｙ、Ａ、Ｔ、、Ｌｅｗｉｓ、Ｊ、Ａ、、Ｌａｎｇｌｏｉｓ、Ａ、Ｊ、、Ａ、Ｊ、。

Ｄｒｅｓｓｍａｎ、　Ｇ、Ｒ，、Ｂｏｓｗｅｌｌ、　Ｒ，Ｎ、、　５ｈａｄｄｕｃｋ、　Ｐ、、　Ｈｏ１ｌｅｙ、　Ｌ、Ｈ，。

Ｋａｒｐｌｕｓ、　Ｍ、、　Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ、　Ｄ、Ｐ、、　Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｔ、Ｊ、Ｅｍｉｎｉ、　Ｅ、Ａ、　＆Ｐｕｔｎｅｙ、Ｓ、Ｄ、（１９９０）　５ｃｉｎｅｃｅ　２４９９３２−９３５゜２０、Ｎａｒａ、Ｐ、Ｌ、、Ｈａｔｃｈ、Ｗ、Ｃ，、Ｄｕｎｌｏｐ、Ｎ、Ｍ、、Ｒｏｂｅｙ、Ｗ、Ｇ、。

Ａｒｔｈｕｒ、Ｌ、０．、　Ｇｏｎｄａ、　Ｍ、Ａ、　＆　Ｆｉｓｃｈｉｎｇｅｒ、Ｐ、Ｊ、（１９８７）　ＡＩＤＳＲｅｓ、Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　３．２８３−３０２゜２１、Ｆｕｌｔｚ、Ｐ、Ｎ、、ＭｃＣｌｕｒｅ、Ｈ，Ｍ、、Ｓｗｅｎｓｏｎ、Ｒ，Ｂ、、ＭｃＧｒａｔｈ。

Ｃ，Ｒ，、Ｂｒｏｄｉｅ、Ａ、、Ｇｅｔｃｈｅｌｌ、Ｊ、Ｐ、、Ｊｅｎｓｅｎ、Ｆ、Ｃ，、Ａｎｄｅｒｓｏｎ。

Ｄ、Ｃ，、Ｂｒｏｄｅｒｓｏｎ、　Ｊ、Ｒ，＆　Ｆｒａｎｃｉｓ、　Ｄ、Ｐ、（１９８６）　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、、　５８゜１１６−１２４゜２２、Ｌａｕｒｅ、Ｆ、、Ｒｏｕｚｉｏｕｘ、Ｃ，、Ｖｅｂｅｒ、Ｆ、、Ｊａｃｏｍｅｔ、Ｃ，。

Ｃｏｕｒｇｎａｕｄ、Ｖ、、Ｂｌａｎｃｈｅ、Ｓ、、Ｂｕｒｇａｒｄ、　Ｍ、、Ｇｒｉｓｃｅｌｌｉ、　Ｃ，＆Ｂｒｅｃｈｏｔ、Ｃ，（１９８ｇ）　Ｌａｎｃｅｔ　２．　５３ｇ−５４１゜２３、Ｍｕｌｌｉｓ、Ｋ、Ｂ、＆　Ｆａｌｏｏｎａ、　Ｆ、Ａ、（１９ｇ？）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ。

１５５．３３５−３５０゜２４、Ｋｗｏｋ、　Ｓ、　＆　Ｋｅｌｌｏｇｇ、　Ｄ、Ｅ、（１９９０）　ｒＰＣＲプロトコール：方法及び応用の指針（ＰＣＲＰｒｏｔｏｃｏｌｓ：　Ａ　Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）　Ｊ　、　Ｉｎｎ１ｓ、　Ｍ、Ａ、、　Ｇｅ１ｆａｎｄ、　Ｄ、Ｆｌ、、　５ｎｉｎｓｋｙ、　Ｊ、Ｊ。

＆　Ｗｈｉｔｅ　Ｔ、Ｊ、＆ｌＷ　（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、、　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、　ＣＡ）中、ｐｐ。

３３７−３４７゜２５、Ｚａｇｕｒｙ、　Ｄ、、　Ｂｅｒｎａｒｄ、　Ｊ、、　Ｃｈｅｙｎｉｅｒ、　Ｒ，、Ｄｅｓｐｏｒｔｅｓ、１．。

Ｌｅｏｎａｒｄ、Ｒ，、Ｆｏｕｃｈａｒｄ、Ｍ、、Ｒｅｖｅｉｌ、Ｂ、、Ｉｔｔｅｌｅ、Ｆ、Ｄ、。

Ｌｕｒｈａｍａ、Ｚ、、Ｍｂａｙｏ、Ｋ、、Ｗａｎｅ、Ｊ、、５ａｌａｕｎ、Ｊ、Ｊ、、Ｇｏｕｓｓａｒｄ。

Ｂ、、Ｄｅｃｈａｚａｌ、Ｌ、、Ｂｕｒｎｙ、Ａ、、Ｎａｒａ、Ｐ、＆　Ｇａ１ｌｏ、Ｒ，Ｃ，（１’１１８）Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）　３２２．　７２８−７３１゜２６、Ｎａｒａ、　Ｐ、　Ｌ、　、　（１９８９）　ｒワクチン８９　（Ｖａｃｃｉｎｅｓ　８９）　Ｊ、　Ｌｅｒｎｅｒ。

Ｒ，Ａ、、　Ｇｉｎｓｂｅｒｇ、　Ｈ，、Ｃｈａｎｏｃｋ、　Ｒ，Ｍ、　＆　Ｂｒｏｗｎ、　Ｆ、編（Ｃｏｌｄ　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、　ＮＹ　）中、　ｐｐ、　１３７−１４４゜２７、Ｍｙｅｒｓ、　Ｇ、（１９９０）　ｒヒトレトロライスル及びＡ　Ｉ　Ｄ　Ｓ　（ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ａｎｄ　ＡＩＤＳ）Ｊ、　Ｍｙｅｒｓ、　Ｇ、、Ｊｏｓｅｐｈｓ、Ｓ、Ｆ、、　Ｗｏｎｇ−３ｔａａ１．、　Ｆ、、　Ｒａｂｓｏｎ、　Ａ、Ｂ、、Ｓｍ１ｔｈ、　Ｔ、Ｆ、　＆　Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ、　Ｊ、Ａ、編（Ｌｏｓ　Ａｌａｍｏｓ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｌｏｓ　Ａｌａｍｏｓ、　ＮＭｌ中。

２８、　５ｃｈａｒｆ、Ｓ、Ｊｌ、　Ｈｏｒｎ、Ｇ、Ｔ、＆　Ｅｒ１ｉｃｈ、　）１．Ａ、（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ２３３．１０７６−１０７８゜２９、Ｗａｌｋｅｒ、Ｃ，Ｍ、、Ｍｏｏｄｙ、Ｄ、Ｊ、、５ｔｉｔｅｓ、Ｄ、Ｐ、＆　Ｌｅｖｙ、Ｊ、Ａ。

（１９８６）　５ｃｉｅｎｃｅ　２３４．　１５６３−１５６６゜３０、Ｔｓｕｂｏｔａ、Ｈ，、Ｌｏｒｄ、Ｃ，１，、Ｗａｔｋｉｎｓ、Ｄ、１．、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ、Ｃ，＆Ｌｅｔｖｉｎ、Ｎ、Ｌ、（１９８９）　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１６９．　１４２１−１４３４゜３１、　Ｒａｎｋｉ、Ａ、、Ｖａｌｌｅ、Ｓ、Ｌ、、にｒｏｈｎ、Ｍ、、Ａｎｔｏｎｅｎ、Ｊ、。

Ａ１１ａｉｎ、　Ｊ、Ｐ、、　Ｌｅｕｔｈｅｒ、　Ｍ、、　Ｆｒａｎｃｈｉｎｉ、　Ｇ、　＆　Ｋｒｏｈｎ、　Ｋ、（１９ｇ？）Ｌａｎｃｅｔ　２．５８９−５９３゜３２、　Ｊｅｈｕｄａ（：ｏｈｅｎ、Ｔ、、５ｌａｄｅ、Ｂ、Ａ、、Ｐｏｗｅｌｌ、Ｊ、Ｄ、。

Ｖｉｌｌｉｎｇｅｒ、Ｆ、、Ｄｅ、Ｂ、、Ｆｏｌｋｓ、Ｔ、Ｍ、、ＭｃＣｌｕｒｅ、Ｈ，Ｍ、、５ｅｌｌ。

Ｋ、Ｗ、＆　Ａｈｍｅｄ−Ａｎｓａｒｉ、Ａ、（１９９０）　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ。

８７、　３９７２−３９７６゜３３、Ｂａｈｒａｏｕｉ、Ｅ、、Ｙａｇｅｌｌｏ、Ｍ、、Ｂ１１１ａｕｄ、Ｊ、Ｎ、、５ａｂａｔｉｅｒ。

Ｊ、Ｍ、、Ｇｕｙ、Ｂ、、Ｍｕｃｈｍｏｒｅ、Ｅ、、Ｇｉｒａｒｄ、Ｍ、＆　Ｇｌｕｃｋｍａｎ、Ｊ、Ｃ。

（１９９０）　ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ、　Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　６．　１０８７−１０８８゜３４、Ｖａｎ　Ｅｅｎｄｅｎｂｕｒｇ、Ｊ、Ｐ、、Ｙａｇｅｌｌｏ、Ｍ、、Ｇｉｒａｒｄ、Ｍ、、Ｋｉｅｎｙ。

Ｍ、Ｐ、、Ｌｅｃｏｃｑ、Ｊ、Ｐ、、　Ｍｕｃｈｍｏｒｅ、　Ｅ、、　Ｆｕｌｔｚ、　Ｐ、Ｎ、、　Ｒｉｖｉｅｒｅ、　Ｙ、。

Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ、Ｌ、＆　Ｇｌｕｃｋｍａｎ、Ｊ、Ｃ，（１９８９）　ＡＩＤＳ　Ｒｅｓ、ＨｕｍａｎＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　５，４１−５０゜ＬＩＳＡ中和抗体レベル（力価：９５％）匡ＬＩＳＡチンパンジー４９９の血清によるＨＴＬＶ−３の中和ＦＩＧ、　５時間（週）ＦＩＧ、６Ａ時間（週）ＦＩＧ、６ＢＦＩＧ・７　時間（週）ＦＩＧ、　１０時間（月）時間（月）Ｆ工Ｇ　１２刷α喝■ＶＩコＦ工Ｇ　１４ｇＩ！）ｌ−ＩＶ？ｄ　−ｚｘ’ｙａ　Ｎ　ｄ　−’！Ｆ工Ｇ１６中和抗体力価中和抗体力価（ＬＯＧ２）／　Ｉ中和抗体力価（ＬＯＧ２）

Claims

【特許請求の範囲】

１．宿主におけるウイルスのエンベロープ糖タンパク質の免疫原性を増強する方法において、少なくとも１つのウイルスエンベロープ糖タンパク質とエンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少なくとも１つのペプチドとを宿主に投与する段階を含み、該ペプチドが少なくとも１つのウイルス中和エピトープを含み、該エンベロープ糖タンパク質及びペプチドが宿主において中和抗体を誘発するのに充分な量で投与される方法。
２．ウイルスが、ＨＩＶ、ＳＩＶ、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２、ＦＩＶ及びＦｅＬＶよりなる群から選択される、請求の範囲第１項記載の方法。
３．ウイルスのエンベロープ糖タンパク質の免疫原性を増強する方法において、予防接種のプライミングに充分な量の少なくとも１つのウイルスエンベロープ糖タンパク質と、該エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少なくとも１つのペプチドとを宿主に投与する段階を含み、該ペプチドが前記ウイルス糖タンパク質の少なくとも１つのウイルス中和エピトープを含み、該ペプチドが、該ウイルスに対する持続的な免疫を宿主に付与するペく宿主において中和抗体の誘発を増強するのに充分な量で宿主に投与される方法。
４．前記エンベロープ糖タンパク質及び前記ペプチドが、前記宿主に対して同時に投与される、請求の範囲第３項記載の方法。
５．前記エンベロープ糖タンパク質が前記宿主に投与され、次に前記ペプチドが前記宿主に投与される、請求の範囲第３項記載の方法。
６．前記エンベロープ糖タンパク質が、ＨＩＶのｇｐ１２０又はｇｐ１６０である、請求の範囲第３項記載の方法。
７．前記少なくとも１つのペプチドが前記ペプチドの混合物を含み、担体分子にカップリングされていない遊離の状態で宿主に投与される、請求の範囲第３項記載の方法。
８．ペプチドが担体分子にカップリングされている、請求の範囲第７項記載の方法。
９．担体がリポペプチドである、請求の範囲第７項記載の方法。
１０．エンベロープ糖タンパク質がＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２のエンベロープ糖タンパク質の混合物を含み、前記ペプチドが、ＨＩＶ−１中和エピトープを有する少なくとも１つのペプチド及びＨＩＶ−２中和エピトープを有する少なくとも１つのペプチドを含む混合物を含んでいる、請求の範囲第３項記載の方法。
１１．エンベロープ糖タンパク質が宿主に経口投与される、請求の範囲第３項記載の方法。
１２．エンベロープ糖タンパク質が宿主に非経口投与される、請求の範囲第３項記載の方法。
１３．ペプチドが宿主に経口投与される、請求の範囲第３項記載の方法。
１４．ペプチドが宿主に皮内投与される、請求の範囲第３項記載の方法。
１５．前記エンベロープ糖タンパク質が、異なるＨＩＶ単離株（血清型）からのｇｐ１６０糖タンパク質の混合物であり、前記少なくとも１つのペプチドが、対応する中和エピトープの混合物である、請求の範囲第３項記載の方法。
１６．前記エンベロープ糖タンパク質が、異なるＨＩＶ単離株（血清型）からの糖タンパク質ｇｐ１２０の混合物であり、前記少なくとも１つのペプチドが、対応する中和エピトープの混合物である、請求の範囲第３項記載の方法。
１７．前記エンベロープ糖タンパク質がＨＩＶのｇｐ１２０である、請求の範囲第３項記載の方法。
１８．エンベロープ糖タンパク質及びペプチドが、アジュバントと組合わせた形で宿主に投与される、請求の範囲第３項記載の方法。
１９．アジュバントが脂質媒質中のムラミルジペプチド又はフロイント不完全アジュバントである、請求の範囲第１８項記載の方法。
２０．ペプチドが、ｅｎｖ、ｐｏｌ、ｇａｇ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、抗原、及びこれらの抗原の混合物よりなる群から選択される、請求の範囲第１９項記載の方法。
２１．前記抗原の前記混合物が、ｐ２７ｎｅｆ及びｐ２３ｖｉｆを含む、請求の範囲第１９項記載の方法。
２２．ペプチドが、【配列があります】よりなる群から選択される少なくとも１つのペプチドである、請求の範囲第１９項記載の方法。
２３．ペプチドが、以下のアミノ酸配列：ＹＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮを含む、請求の範囲第１９項記載の方法。
２４．前記少なくとも１つのペプチドが、少なくとも１つのＨＩＶ−１単離株のメジャー中和エピトープ（ループＶ３）で構成される、請求の範囲第１９項記載の方法。
２５．前記エンベロープ糖タンパク質が前記宿主に投与され、前記少なくとも１つのペプチドが前記エンベロープ糖タンパク質の後に前記宿主に投与され、その後に、前記ウイルスの少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質及び前記エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少なくとも１つのペプチドを含む混合物が、前記宿主に投与される、請求の範囲第１９項記載の方法。
２６．前記エンベロープ糖タンパク質がＨＩＶのｇｐ１６０である、請求の範囲第２５項記載の方法。
２７．前記少なくとも１つのペプチドが、少なくとも１つのＨＩＶ−１単離株のメジャー中和エピトープ（ループＶ３）で構成される、請求の範囲第２６項記載の方法。
２８．ウイルスによる感染に対して宿主に予防接種するための組成物において、該組成物が、（Ａ）エンベロープ糖タンパク質が投与される宿主における予防接種のプライミングに充分な量の、ウイルスの少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質；及び（Ｂ）前記エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少なくとも１つのペプチドを含み、該ペプチドが前記糖タンパク質の少なくとも１つのウイルス中和エピトープを含み、該組成物が宿主における持続的な中和抗体の誘発を増強するのに充分な量で前記ペプチドを含むことを特徴とする組成物。
２９．前記少なくとも１つのペプチドが、ＨＩＶの糖タンパク質のペプチドの混合物を含む、請求の範囲第２８項記載の組成物。
３０．ペプチドが、それに対する担体に結合されている、請求の範囲第２８項記載の組成物。
３１．宿主の予防接種を増強するのに充分な量でアジュバントを含む、請求の範囲第２８項記載の組成物。
３２．アジュバントがムラミルジペプチド又はフロイント不完全アジュバントである、請求の範囲第３１項記載の組成物。
３３．ペプチドが、ｅｎｖ、ｐｏｌ、ｇａｇ、ｎｅｆ、ｖｉｆ抗原、及びこれらの抗原の混合物よりなる群から選択される、請求の範囲第３２項記載の組成物。
３４．前記抗原の前記混合物が、ｐ２７ｎｅｆ及びｐ２３ｖｉｆを含む、請求の範囲第３３項記載の組成物。
３５．ペプチドが、【配列があります】よりなる群から選択される少なくとも１つのペプチドである、請求の範囲第３３項記載の組成物。
３６．ペプチドが、以下のアミノ酸配列：ＹＮＴＲＫＳＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮを含む、請求の範囲第３３項記載の組成物。
３７．前記少なくとも１つのペプチドが、少なくとも１つのＨＩＶ−１単離株のメジャー中和エピトープ（ループＶ３）で構成される、請求の範囲第３３項記載の組成物。
３８．ウイルスのエンベロープ糖タンパク質又はフラグメントの免疫原性を増強するための組成物において、同時、個別又は逐次的に使用するための組合せた調製物として、該組成物が、（Ａ）ウイルスの少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質、又は糖タンパク質の少なくとも５０アミノ酸のフラグメント；及び（Ｂ）エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少なくとも１つのペプチドを含み、ペプチドが少なくとも１つのウイルス中和エピトープを含み；エンベロープ糖タンパク質及びペプチドが、宿主において中和抗体を誘発するのに充分な量で投与されることを特徴とする組成物。
３９．ウイルスのエンベロープ糖タンパク質の免疫原性を増強するための組成物において、同時、個別又は逐次的に使用するための組合わせた調製物として、該組成物が、（Ａ）エンベロープ糖タンパク質が投与される宿主において中和抗体の誘発を開始させるのに充分な量の、ウイルスの少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質又はその免疫原性特性を有する糖タンパク質のフラグメント；及び（Ｂ）前記エンベロープ糖タンパク質のアミノ酸配列から誘導された少なくとも１つのペプチドを含み、ペプチドが前記糖タンパク質の少なくとも１つのウイルス中和エピトープを含み、該組成物が宿主における持続的な中和抗体の誘発を増強するのに充分な量で前記ペプチドを含むことを特徴とする組成物。
４０．エンベロープ糖タンパク質又はフラグメントが、ＨＩＶのｇｐｌ６０又はＨＩＶのｇｐ１２０である、請求の範囲第３９項記載の組成物。
４１．前記少なくとも１つのペプチドが、ＨＩＶの糖タンパク質のペプチドの混合物を含む、請求の範囲第４０項記載の組成物。
４２．前記少なくとも１つのペプチドが、脂肪族配列を含む担体分子に結合している、請求の範囲第４１項記載の組成物。
４３．ペプチドが、ｅｎｖ、ｇａｇ、特にｐ１８ｇａｇ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｐｏｌ、又はＧＰＧ又はＧＬＧ抗原、及びこれらの抗原の混合物、特にｐ２７ｎｅｆ及びｐ２３ｖｉｆよりなる群から選ばれる、請求の範囲第４２項記載の組成物。
４４．ウイルスのエンベロープ糖タンパク質が、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｎｅｆ、ｖｉｆよりなる群から選ばれる抗原のうちの少なくとも１つ、特にｐ２７ｎｅｆ及びｐ２３ｖｉｆの混合物と組合わされている、請求の範囲第４２項記載の組成物。
４５．経口投与、非経口投与又は皮内投与に好適である、請求の範囲第３９項記載の組成物。
４６．エンベロープ糖タンパク質又はそのフラグメント及びそれから誘導されたペプチドが、宿主に対して同時に、個別に又は間隔をおいて適用されるペく並んだ体裁をとっている、請求の範囲第３９項記載の組成物。
４７．エンベロープ糖タンパク質が、経口又は非経口投与のための薬学的賦形剤と組合わされている、請求の範囲第３９項記載の組成物。
４８．ペプチドが、経口投与のための薬学的賦形剤と組合わされている、請求の範囲第３９項記載の組成物。
４９．ウイルスの前記少なくとも１つのエンベロープ糖タンパク質、及び／又はエンベロープ糖タンパク質から誘導された前記少なくとも１つのペプチドが、ＩＳＣＯＭｓもしくはリポソームのような粒子の形態で又は生きた組換え型微生物により提供される、請求の範囲第３９項記載の組成物。
５０．微生物が、例えばポックスウイルス又はＢＣＧなどのウイルス又は細菌のような生きた組換え型微生物、あるいはエンベロープ糖タンパク質又は該エンベロープ糖タンパク質から誘導されたペプチドを発現するよう変更されたあらゆる生ワクチンである、請求の範囲第４９項記載の組成物。
５１．微生物が、例えばＨＩＶウイルスなどのウイルス粒子又は、特にＨＩＶゲノムのない、ウイルスゲノムを有さない粒子のような、不活性化された粒子から誘導される、請求の範囲第５０項記載の組成物。