KR20080082688A

KR20080082688A - 공여자의 섬 세포 채취 과정 동안에 섬 세포를아폽토시스로부터 보호하는 신규 방법

Info

Publication number: KR20080082688A
Application number: KR1020087019337A
Authority: KR
Inventors: 죤 이 톰슨; 챨스 에이 디나렐로
Original assignee: 세네스코 테크놀로지스 인코포레이티드
Priority date: 2006-03-20
Filing date: 2007-03-20
Publication date: 2008-09-11
Also published as: US20130274318A1; US20080076728A1; CN101605893A; NZ596310A

Abstract

본 발명은 공여자 장기에서 이후의 이식을 위해 분리한 섬의 생존력과 회수를 개선시키는 방법에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 섬의 생존력을 증진시키는데 있어서 eIF5A siRNA의 용도에 관한 것이다.

eIF5A siRNA, 랑게르한스섬, 공여자 장기, 이식, 생존력, 회수

Description

공여자의 섬 세포 채취 과정 동안에 섬 세포를 아폽토시스로부터 보호하는 신규 방법{A NOVEL METHOD OF PROTECTING ISLET CELLS FROM APOPTOSIS DURING THE DONOR HARVESTING PROCESS}

관련 출원

본 출원은 2007년 3월 20일자로 출원한 미국 출원 제60/783,414호를 우선권 주장하며, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 포함된다.

본 발명은 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하여 섬 세포에서의 아폽토시스를 억제하는 eIF5A siRNA를 섬 분리 이전에 섬 세포 공여자의 섬 세포에 투여하는 것을 포함하는, 공여자의 섬 세포 채취 과정 동안 섬 세포에서 아폽토시스가 진행되는 것을 억제하는 방법을 제공한다.

랑게르한스섬은 췌장 내에서 인슐린을 생성하는 세포를 함유하는 다세포체이다. 평균의 인간은 약 100만 개의 섬을 가지며, 이것들은 췌장 내 세포 총수의 대략 2 내지 3％를 차지한다. 췌장은 인슐린을 생성하는 베타 세포를 갖고 있는 랑 게르한스섬을 함유한다. 베타 세포는 혈액 중의 글루코스 수준을 모니터링하고, 정밀하게 계산된 양의 인슐린을 방출하여 글루코스 상승을 상쇄시킨다. 제I형 및 제II형 당뇨병은 이들 베타 세포의 90％ 초과가 손상될 때 발생한다.

결합 매트릭스 및 나머지 외분비 조직으로부터 상기 섬을 분리 또는 분리하는 것은 연구용 실험 및 이식 목적에 유리하고 유익하다. 섬 이식은 제I형 진성 당뇨병의 치료에 가장 유망하면서 생리적 침윤이 최소인 절차이다. 완전한 췌장 조직이 아니라 섬을 이식하는 것은 이식이 용이하고, 소화 효소의 분비를 비롯한 공여자 조직의 췌장 외분비 기능을 없앤다는 명백한 이점이 있다. 췌장 외분비 조직으로부터 섬을 떼어내는 것은, 섬 이식을 수행하는 첫 단계이자 중요한 단계이다. 섬 분리에 있어서의 중요 목적은 살아있고 기능적이며 효능이 있는 이식할 섬을 충분한 수로 제공하는 것이다.

"에드몬톤 프로토콜(Edmonton Protocol)"은 건강한 섬을 당뇨 환자에게 이식한다. 에드몬톤 프로토콜을 이용한 섬 이식은 문헌 ([Shapiro, Ryan, and Lakey, Clinical Islet Transplantation-State of the Art, Transplantation Proceedings, 33, pp. 3502-3503 (2001)], [Ryan et al., Clinical Outcomes and Insulin Secretion After Islet Transplantation With the Edmonton Protocol, Diabetes, Vol. 50, April 2001, pp. 710-719] 및 [Ryan et al., Continued Insulin Reserve Provides Long-Term Glycemic Control, Diabetes, Vol. 51, July 2002, pp. 2148- 2157])에 기재되어 있다. 간에서, 일단 상기 세포는 혈액 공급을 수행하고 인슐린을 생성하기 시작한다. 에드몬톤 프로토콜은 이용되는 방법에 따라 7 단계 내지 10 단계를 포함할 수 있다. 제1 단계는 공여자 췌장에 췌장 조직은 소화시키지만 섬은 소화시키지 않는 특정 효소 (리버라제)를 전달하는 것을 수반한다. 이러한 소화 단계 후에는, 상기 섬을 췌장 내의 다른 세포로부터 분리하기 위한 여러 개의 연속 단계가 있다. 분리된 섬을 문맥이라고 알려진 간의 주요 혈관에 이식한다. 간은 손상시에 새로운 혈관을 만들고 조직을 유지시키면서 스스로 재생할 수 있다. 따라서, 섬이 간에 이식되면, 새로운 혈관들이 그 섬을 유지시킬 것이라고 판단된다. 상기 세포가 생성한 인슐린은 이러한 주변 혈관을 통해 혈류로 흡수되고 신체에 분포되어 혈액 중의 글루코스 수준을 제어한다.

전반적으로, 에드몬톤 프로토콜의 단계들은 섬세한 3차원 구조를 가지며 성장과 생존을 위해서 다량의 산소를 필요로 하는 섬의 생존력을 위태롭게 하는 격렬한 과정들을 수반한다. 상기 과정 동안, 섬은 비-임의적인 산소 전달 상태로 인해 손상되거나 파괴되어, 주어진 공여자 췌장에서 회수되는 건강한 섬의 수율에 영향을 미칠 수 있다. 추가로, 섬 이식은 공여자 입수가능성에 따라 크게 제한적이며, 단지 1명의 환자에서 인슐린 독립성을 획득하기 위해서는 2개의 최장이 필요한 경우가 빈번하다.

제I형 당뇨병의 환자를 치료하는데에는 스테로이드를 사용하지 않는 비-당뇨 유발 면역억제 요법을 병행하는 섬 이식이 이용되어 왔다. 그러나, 이러한 치료법은 고지혈증 및 고혈압의 위험을 증가시킬 수 있고, 장기간의 연구는 섬의 생존력이 손상된다는 것을 입증하였다.

결과적으로, 섬 세포의 채취 과정 동안에 상기 섬 세포가 아폽토시스(apoptosis)되지 않도록 보호하는 방법이 요구된다. 본 발명은 이러한 요구를 충족시킨다.

발명의 요약

본 발명은 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하여 섬 세포에서의 아폽토시스를 억제하는 eIF5A siRNA를 섬 분리 이전에 섬 세포 공여자의 섬 세포에 투여하는 것을 포함하는, 공여자의 섬 세포 채취 과정 동안 섬 세포에서 아폽토시스가 진행되는 것을 억제하는 방법을 제공한다. 임의의 siRNA 또는 안티센스 구축물이 eIF5A의 발현을 억제하는 한은 이러한 임의의 구축물이 사용될 수 있다. 바람직한 siRNA는 뉴클레오티드 서열 AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT를 포함한다.

siRNA의 투여는 임의의 적합한 경로에 의할 수 있다. 투여 방법의 예로는 섬 세포 공여자의 문맥을 통한 관류 및 섬 세포 공여자의 문맥을 통한 유체역학적 관류 등이 있다.

본 발명은 또한 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하는 eIF5A siRNA를 섬 세포에 투여하는 것을 포함하는, 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명의 또다른 실시양태는 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하는 eIF5A siRNA를 섬 세포에 투여하는 것을 포함하며, eIF5A의 발현 억제가 아폽토시스를 억제하는 것인, 채취된 섬 세포에서 아폽토시스를 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 eIF5A의 발현을 억제하여 섬 세포에서의 아폽토시스를 억제하는 eIF5A siRNA를 포함하는, 섬 세포에서의 아폽토시스 억제용 조성물을 제공한다. 바람직한 조성물은 뉴클레오티드 서열 AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT를 포함하는 eIF5A siRNA를 포함한다.

섬으로의 siRNA 혼입이 역행성 문맥 접종을 통한 췌장 관류에 의해 달성될 수 있다는 것은 이미 밝혀진 바 있다. 문헌 [Bradley, et al., Transplantation Proceedings, 37, 233-236, 2005]을 참조한다. 간략하게 설명하면, 리포펙트아민(Lipofectamine) 2000으로 패키지되거나 패키지되지 않은 Cy-3 표지된 루시퍼라제 (Luc) siRNA GL2 이중나선을 사용하였고, 꼬리 정맥 (생체내, 마우스 1 마리 당 50 ㎍씩)을 통해 주사하거나 역행성 문맥 접종 (계내(in situ), 마우스 1 마리 당 2 ㎍씩)을 통해 췌장에 직접 주사하였다. 췌장을 꺼내어 계내 전달 후 24시간 동안 또는 생체내 전달 후 4시간 동안 4℃에서 저장하였고, 섬을 분리하여 16시간 더 배양한 후에 조사하였다. siRNA 분포를 가시화하기 위해서, 췌장을 인슐린에 대하여 염색하고 형광 현미경하에 조사하였다. 분리된 섬을 형광 현미경하에서 직접 조사하였다. 패키지되지 않은 siRNA는 리포좀-패키지된 siRNA를 사용하여 관찰한 경우와 유사한 정도로 섬에 도달하였고, 이는 소위 생체내 "네이키드(naked)"-siRNA 전달에 대한 보고와 일치한다 ([Lewis et al., Nat. Genet. 32:107-108, Epub 2002 Jul 2029, 2002] 및 [McCaffrey AP, et al., Nature 418:38-39, 2002]).

본 발명은 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하는 eIF5A siRNA를 섬 세포에 투여하는 것을 포함하는, 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 도 1은 섬 세포로의 관류가 섬 세포로의 적합한 전달 메카니즘을 제공함을 보여주며, 도 3은 eIF5A siRNA를 처치한 섬 세포가 실제로 eIF5A siRNA를 덜 발현함을 보여준다. eIF5A의 발현을 억제하면 아폽토시스도 억제된다. 도 4 및 도 5는 섬 세포를 분리하기 전에 eIF5A siRNA로 처치하면 이들 세포의 아폽토시스가 억제된다는 것을 나타낸다 (sub-G1기의 세포 수 감소로 입증됨). 따라서, 본 발명은 또한 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하는 eIF5A siRNA를 섬 세포에 투여하는 것을 포함하며, eIF5A의 발현 억제가 아폽토시스를 억제하는 것인, 채취된 섬 세포에서 아폽토시스를 억제하는 방법을 제공한다.

eIF5A의 발현을 억제하는 임의의 eIF5A siRNA가 사용될 수 있다. 용어 "억제하다" 역시 감소를 의미한다. 한 예시적인 eIF5A siRNA는 서열 AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT를 포함한다. 2005년 11월 28일자로 출원한 동시 계류 중인 출원 제11/293,391호 (상기 문헌은 본원에 그 전문이 참고로 포함됨)는 다른 세포 유형에서 eIF5A의 발현을 억제하는데 사용되어 왔고 또한 아폽토시스를 억제하는 것으로 나타난 추가의 예시적인 eIF5A siRNA 및 다른 안티센스 구축물을 제공한다. 당업자는 주어진 eIF5A 서열에 대해 다른 eIF5A siRNA들을 디자인할 수 있고, 상기 siRNA가 발현을 억제하는 능력에 대하여 과도한 실험 없이 쉽게 시험할 수 있다. 도 6 내지 도 11은 eIF5A, 예시적인 eIF5A siRNA 및 안티센스 구축물의 서열을 제공한다. 본 발명의 또다른 실시양태에서, eIF5A의 안티센스 구축물은 eIF5A의 발현을 억제하여 섬 세포의 아폽토시스를 억제하는데 사용될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, eIF5A siRNA는 뉴클레오티드 서열 AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT를 포함한다.

또한 본 발명은 공여자의 섬 세포 채취 과정 동안 섬 세포에서 아폽토시스가 진행되는 것을 억제하는 방법을 제공한다. 상기 논의한 바와 같이, 많은 섬 세포에서는 이들의 채취시에 아폽토시스가 진행된다. 본 발명의 발명자들은 섬 세포를 채취하기 전에 해당 섬 세포에 eIF5A siRNA를 제공하면 아폽토시스에 대한 보호 이점이 제공된다는 것을 알아냈다. eIF5A siRNA는 섬 분리 이전에 섬 세포 공여자의 섬 세포에 투여된다. 공여자 (및 따라서 섬 세포)는 인간 섬 세포를 포함하는 임의의 동물일 수 있다. 임의의 투여 방법이 이용될 수 있다. 예를 들어, siRNA는 섬 세포 공여자의 문맥을 통한 관류 또는 섬 세포 공여자의 문맥을 통한 유체역학적 관류를 통해 투여될 수 있다.

문맥을 통한 관류는 담관의 캐뉼라 삽입과 유사하지만, 바늘은 반대 방식으로 찌른다. 간을 수축시키고 내장 기관을 마우스 왼쪽으로 옮겨서 문맥을 노출시킨다. 그 주위에 담관을 포함하는 예비 결절을 만든다. 혈관을 천공시킨 후에 뭉툭한 바늘을 췌장 방향으로 밀어 넣고 그 주위에서 결절을 조인다. 마우스 모델에서는 1 mL의 염수 또는 siRNA (5 ㎍)를 서서히 방출시키고, 바늘을 빼내고 바늘 뒤에서 결절을 밀봉하여 유체가 다른 데로 새는 것을 방지한다. 이 시점에서, 마우스를 뒤집고 담관에 접근하여 췌장을 소화시킨다. 췌장은 siRNA와 함께 더 오래 유지시킬 수 있다. 별법으로, 이것을 꺼내고 콜라게나제와 함께 더 오래 차게 유지할 수도 있다. 이어서, 규칙적인 섬 분리 방법을 수행하고, 섬 (50개)을 16시간 동안 인큐베이션시킬 수 있다.

본 발명은 또한 eIF5A의 발현을 억제하여 섬 세포에서의 아폽토시스를 억제하는 eIF5A siRNA를 포함하는, 섬 세포에서의 아폽토시스 억제용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 상기 논의한 바와 같은 다른 또는 추가의 eIF5A siRNA를 포함할 수 있다. 바람직한 siRNA는 뉴클레오티드 서열 AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT를 포함한다.

도 1은 eIF-5A siRNA를 문맥을 통해 관류시킨 후에 β-액틴, mAAT 및 eIF5A에 대해 수행한 RT-PCR의 결과를 제공한다. 본 도면은 eIF5A 발현이 측정가능하며 따라서 섬에 혼입되었음을 보여준다.

도 2는 역행성 문맥 관류를 보여준다. 예비 결절(preparatory knot) (어두운 봉합선)을 위해 준비된 담관 (투명) 및 문맥 (적색). 바늘은 결절 아래쪽으로 들어가서 (화살표로 표시한 방향) 결절 아래를 관통하여, 췌장, 비장, 장 및 원위 결장의 1/3에 이르는 혈관으로 siRNA를 방출한다.

도 3은 eIF5A siRNA를 섬으로 관류시키면 eIF5A의 발현이 감소됨을 나타낸다 (eIF5A의 mRNA 수준이 감소되는 것을 나타냄).

도 4는 대조군 및 염수를 처치한 섬과 비교할 때 eIF5 siRNA를 처치한 섬 세포에서 아폽토시스가 감소됨을 나타낸다 (여기서, 그룹 당 n = 2).

도 5는 대조군 및 염수를 처치한 섬과 비교할 때 eIF5 siRNA를 처치한 섬 세포에서 아폽토시스가 감소한 것을 보여준다 (여기서, 그룹 당 n = 3).

도 6은 eIF5A2에 대하여 정렬한 인간 eIF5A1의 뉴클레오티드 서열을 제공한다.

도 7은 eIF5A2에 대하여 정렬한 인간 eIF5A1의 아미노산 서열을 제공한다.

도 8은 예시적인 안티센스 올리고뉴클레오티드와 인간 eIF5A의 뉴클레오티드 서열을 제공한다.

도 9는 예시적인 안티센스 올리고뉴클레오티드와 인간 eIF5A의 뉴클레오티드 서열을 제공한다.

도 10A 및 도 10B는 예시적인 siRNA와 인간 eIF5A의 뉴클레오티드 서열을 제공한다.

도 11은 예시적인 siRNA와 인간 eIF5A의 뉴클레오티드 서열을 제공한다.

마우스 섬은 eIF5A 를 발현함

분리된 마우스 섬에서 전체 RNA를 추출하고, β-액틴 및 eIF5A에 대하여 RT-PCR을 수행하였다 (도 1). 휴지기의 자극되지 않은 섬은 양성 수준의 eIF5A-mRNA 를 나타냈다.

eIF5A - mRNA 수준은 eIF5A - siRNA 전달 후에 감소됨 : 문맥 저속 관류

마우스에게 1 mL의 siRNA (CT (대조군) 서열 또는 eIF5A, 5 ㎍) 또는 염수를 저속의 역행성 문맥 관류로 도입 (그룹 당 n = 2 마리)하였다 (도 2). 췌관에 콜라게나제를 관주시켜 췌장을 소화시키고, 문헌 [Lewis et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102:12153-12158 Epub 12005 Aug. 12110, 2005]에 기재된 바와 같이 하여 섬을 분리하였다. 섬 (마우스 1 마리 당 50개)을 16시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 전체 RNA를 추출하고, β-액틴 및 eIF5A에 대한 RT-PCR을 수행하였다 (도 3). eIF5A/β-액틴에 대한 mRNA의 비율은 5.24 (CT-siRNA) 및 3.01 (eIF5A-siRNA)이었다. 도 3은 siRNA를 처치한 이들 세포에서 eIF5A의 mRNA 수준이 감소되었음을 보여준다. 본 실험을 n = 3 마리 마우스로 반복하였고, 섬은 3벌로 인큐베이션하여 RNA 추출을 행하였다. 결과는 처음의 관찰 결과와 일치하였다.

eIF5A - siRNA 의 전달 후에는 eIF5A - mRNA 수준이 감소하고 섬 아폽토시스률이 감소함: 문맥 유체역학적 관류

마우스에게 1 mL의 siRNA (CT 또는 eIF5A, 5 ㎍) 또는 염수를 유체역학적 역행성 문맥 관류로 도입 (그룹 당 n = 2 마리)하였고, 이 과정은 5초 이내에 완료하였다. 췌관을 콜라게나제 관주시켜 췌장을 소화시키고 섬을 분리하였다. 섬을 16시간 동안 인큐베이션시킨 후에, 요오드화프로피듐으로 염색하여 아폽토시스를 평 가하는 한 군 (마우스 1 마리 당 50개 섬) 및 RT-PCR을 진행하는 또다른 그룹 (마우스 1 마리 당 25개 섬)으로 나누었다. eIF5A/β-액틴에 대한 mRNA 수준은 역시 eIF5A-siRNA군보다 CT-siRNA군에서 더 높았다. 아폽토시스 비율은 28.1％ 감소하였다 (도 4). 본 실험을 n = 3으로 반복하였고, 아폽토시스 비율은 다시 감소하였다 (도 5).

바이오티닐화된 siRNA 를 사용한 섬 관류

바이오티닐화된 siRNA (50 ㎍)를 상기한 바와 같이 하여 (저속 관류, n = 1) 섬에 관류시켰다. 췌장을 염색하기 위해 포르말린 중에 고정시켰다.

siRNA

siRNA 분자는 미국 콜로라도주 라파예트 소재의 다르마콘(Dharmacon)이 합성한 것이었다. eIF5A 및 대조군 siRNA의 서열은 각각 하기와 같았다: 5' CGGAAUGACUUCCAGCUGAdTdT 3' 및 5' AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT 3'.

RT - PCR

퀴아젠(Qiagen) RNeasy 키트를 사용하여 세포로부터 전체 RNA를 추출하였다. eIF5A 프라이머: 전방향 5'-GAC AGT GGG GAG GTA CGA GA-3', 역방향 5'-GGG GTG AGG AAA ACC AAA AT- 3'.

요오드화프로피듐 ( PI ) 아폽토시스 염색

섬의 단일 세포 현탁액은 온건한 트립신처리로 달성하였다. 세포를 PBS로 세척하고, PBS 중 0.3％ 사포닌, 1 mM EDTA, Rnase, 1％ 아지드, 1％ FCS 및 50 ㎍/mL PI를 함유하는 사포닌-PI 혼합물을 첨가하였다. 세포를 철저하게 볼텍싱하고 암실에서 6시간 동안 4℃에서 인큐베이션한 후에 sub-G1 집단에 대하여 FACS로 분석하였다.

SEQUENCE LISTING <110> SENESCO TECHNOLOGIES <120> A NOVEL METHOD OF PROTECTING ISLET CELLS FROM APOPTOSIS DURING THE DONOR HARVESTING PROCESS <130> S291 1030PCT <140> PCT/US07/64424 <141> 2007-03-20 <150> 60/783,414 <151> 2006-03-20 <160> 39 <170> PatentIn Ver. 3.3 <210> 1 <211> 465 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggcagatg acttggactt cgagacagga gatgcagggg cctcagccac cttcccaatg 60 cagtgctcag cattacgtaa gaatggcttt gtggtgctca aaggccggcc atgtaagatc 120 gtcgagatgt ctacttcgaa gactggcaag cacggccacg ccaaggtcca tctggttggt 180 attgacatct ttactgggaa gaaatatgaa gatatctgcc cgtcaactca taatatggat 240 gtccccaaca tcaaaaggaa tgacttccag ctgattggca tccaggatgg gtacctatca 300 ctgctccagg acagcgggga ggtacgagag gaccttcgtc tccctgaggg agaccttggc 360 aaggagattg agcagaagta cgactgtgga gaagagatcc tgatcacggt gctgtctgcc 420 atgacagagg aggcagctgt tgcaatcaag gccatggcaa aataa 465 <210> 2 <211> 462 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 atggcagacg aaattgattt cactactgga gatgccgggg cttccagcac ttaccctatg 60 cagtgctcgg 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Val Pro Glu Asp Leu 100 105 110 Arg Leu Pro Glu Gly Asp Leu Gly Lys Glu Ile Glu Gln Lys Tyr Asp 115 120 125 Cys Gly Glu Glu Ile Leu Ile Thr Val Leu Ser Ala Met Thr Glu Glu 130 135 140 Ala Ala Val Ala Ile Lys Ala Met Ala Lys 145 150 <210> 4 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ala Asp Glu Ile Asp Phe Thr Thr Gly Asp Ala Gly Ala Ser Ser 1 5 10 15 Thr Tyr Pro Met Gln Cys Ser Ala Leu Arg Lys Asn Gly Phe Val Val 20 25 30 Leu Lys Gly Arg Pro Cys Lys Ile Val Glu Met Ser Thr Ser Lys Thr 35 40 45 Gly Lys His Gly His Ala Lys Val His Leu Val Gly Ile Asp Ile Phe 50 55 60 Thr Gly Lys Lys Tyr Glu Asp Ile Cys Pro Ser Thr His Asn Met Asp 65 70 75 80 Val Pro Asn Ile Lys Arg Asn Asp Tyr Gln Leu Ile Cys Ile Gln Asp 85 90 95 Gly Tyr Leu Ser Leu Leu Thr Glu Thr Gly Glu Val Arg Glu Asp Leu 100 105 110 Lys Leu Pro Glu Gly Glu Leu Gly Lys Glu Ile Glu Gly Lys Tyr Asn 115 120 125 Ala Gly Glu Asp Val Gln Val Ser Val Met Cys Ala Met Ser Glu Glu 130 135 140 Tyr Ala Val Ala Ile Lys Pro Cys Lys 145 150 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 5 cctgtctcga agtccaagtc 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 gacttggact tcgagacagg 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 7 ggaccttggc gtggccgtgc 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 gcacggccac gccaaggtcc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 9 ctcgtacctc cccgctctcc 20 <210> 10 <211> 19 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 ggacagcggg gaggtacga 19 <210> 11 <211> 1309 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 ggcacgaggg tagaggcggc ggcggcggcg gcagcgggct cggaggcagc ggttgggctc 60 gcggcgagcg gacggggtcg agtcagtgcg ttcgcgcgag ttggaatcga agcctcttaa 120 aatggcagat gacttggact tcgagacagg agatgcaggg gcctcagcca ccttcccaat 180 gcagtgctca gcattacgta agaatggctt tgtggtgctc aaaggccggc catgtaagat 240 cgtcgagatg tctacttcga agactggcaa gcacggccac gccaaggtcc atctggttgg 300 tattgacatc tttactggga agaaatatga agatatctgc ccgtcaactc ataatatgga 360 tgtccccaac atcaaaagga atgacttcca gctgattggc atccaggatg ggtacctatc 420 actgctccag gacagcgggg aggtacgaga ggaccttcgt ctccctgagg gagaccttgg 480 caaggagatt gagcagaagt acgactgtgg agaagagatc ctgatcacgg tgctgtctgc 540 catgacagag gaggcagctg ttgcaatcaa ggccatggca aaataactgg ctcccaggat 600 ggcggtggtg gcagcagtga tcctctgaac ctgcagaggc cccctccccg agcctggcct 660 ggctctggcc cggtcctaag ctggactcct cctacacaat ttatttgacg ttttattttg 720 gttttcccca ccccctcaat ctgtcgggga gcccctgccc ttcacctagc tcccttggcc 780 aggagcgagc gaagctgtgg ccttggtgaa gctgccctcc tcttctcccc tcacactaca 840 gccctggtgg gggagaaggg ggtgggtgct gcttgtggtt tagtcttttt tttttttttt 900 tttttttttt aaattcaatc tggaatcaga aagcggtgga ttctggcaaa tggtccttgt 960 gccctcccca ctcatccctg gtctggtccc ctgttgccca tagcccttta ccctgagcac 1020 caccccaaca gactggggac cagccccctc gcctgcctgt gtctctcccc aaaccccttt 1080 agatggggag ggaagaggag gagaggggag gggacctgcc ccctcctcag gcatctggga 1140 gggccctgcc cccatgggct ttacccttcc ctgcgggctc tctccccgac acatttgtta 1200 aaatcaaacc tgaataaaac tacaagttta atatgaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1260 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 1309 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 12 gacttggact tcgagacagg 20 <210> 13 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 13 gcacggccac gccaaggtc 19 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 14 ggacagcggg gaggtacgag 20 <210> 15 <211> 1299 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 ggcacgaggg cggcggcggc ggtagaggcg gcggcggcgg cggcagcggg ctcggaggca 60 gcggttgggc tcgcggcgag cggacggggt cgagtcagtg cgttcgcgcg agttggaatc 120 gaagcctctt aaaatggcag atgacttgga cttcgagaca ggagatgcag gggcctcagc 180 caccttccca atgcagtgct cagcattacg taagaatggc tttgtggtgc tcaaaggccg 240 gccatgtaag atcgtcgaga tgtctacttc gaagactggc aagcacggcc acgccaaggt 300 ccatctggtt ggtattgaca tctttactgg gaagaaatat gaagatatct gcccgtcaac 360 tcataatatg gatgtcccca acatcaaaag gaatgacttc cagctgattg gcatccagga 420 tgggtaccta tcactgctcc aggacagcgg ggaggtacga gaggaccttc gtctccctga 480 gggagacctt ggcaaggaga ttgagcagaa gtacgactgt ggagaagaga tcctgatcac 540 ggtgctgtct gccatgacag aggaggcagc tgttgcaatc aaggccatgg caaaataact 600 ggctcccagg atggcggtgg tggcagcagt gatcctctga acctgcagag gccccctccc 660 cgagcctggc ctggctctgg cccggtccta agctggactc ctcctacaca atttatttga 720 cgttttattt tggttttccc caccccctca atctgtcggg gagcccctgc ccttcaccta 780 gctcccttgg ccaggagcga gcgaagctgt ggccttggtg aagctgccct cctcttctcc 840 cctcacacta cagccctggt gggggagaag ggggtgggtg ctgcttgtgg tttagtcttt 900 tttttttttt tttttttttt tttaaattca atctggaatc agaaagcggt ggattctggc 960 aaatggtcct tgtgccctcc ccactcatcc ctggtctggt cccctgttgc ccatagccct 1020 ttaccctgag caccacccca acagactggg gaccagcccc ctcgcctgcc tgtgtctctc 1080 cccaaacccc tttagatggg gagggaagag gaggagaggg gaggggacct gccccctcct 1140 caggcatctg ggagggccct gcccccatgg gctttaccct tccctgcggg ctctctcccc 1200 gacacatttg ttaaaatcaa acctgaataa aactacaagt ttaatatgaa aaaaaaaaaa 1260 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 1299 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 aaaggaatga cttccagctg a 21 <210> 17 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 17 aaaggaauga cuuccagcug att 23 <210> 18 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 18 ucagcuggaa gucauuccuu utt 23 <210> 19 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 aagatcgtcg agatgtctac t 21 <210> 20 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 20 aagaucgucg agaugucuac utt 23 <210> 21 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 21 aguagacauc ucgacgaucu utt 23 <210> 22 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 22 aaggtccatc tggttggtat t 21 <210> 23 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 23 aagguccauc ugguugguau utt 23 <210> 24 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 24 aauaccaacc agauggaccu utt 23 <210> 25 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 25 aagctggact cctcctacac a 21 <210> 26 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 26 aagcuggacu ccuccuacac att 23 <210> 27 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 27 uguguaggag gaguccagcu utt 23 <210> 28 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 28 aaagtcgacc ttcagtaagg a 21 <210> 29 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 29 aaagucgacc uucaguaagg att 23 <210> 30 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 30 uccuuacuga aggucgacuu utt 23 <210> 31 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 31 aaaggaatga cttccagctg att 23 <210> 32 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 32 aagatcgtcg agatgtctac ttc 23 <210> 33 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 33 aaggtccatc tggttggtat tga 23 <210> 34 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 34 aagctggact cctcctacac aat 23 <210> 35 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 35 aaagtcgacc ttcagtaagg att 23 <210> 36 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 36 agucgaccuu caguaaggct t 21 <210> 37 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic siRNA <400> 37 cggaaugacu uccagcugat t 21 <210> 38 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic Primer <400> 38 gacagtgggg aggtacgaga 20 <210> 39 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic Primer <400> 39 ggggtgagga aaaccaaaat 20

Claims

섬 세포(islet cell)에서 eIF5A의 발현을 억제하여 섬 세포 내 아폽토시스(apoptosis)를 억제하는 eIF5A siRNA를 섬 분리 전 섬 세포 공여자의 섬 세포에 투여하는 것을 포함한 공여자의 섬 세포 채취 과정 동안 섬 세포에서 아폽토시스가 진행되는 것을 억제하는 방법
제1항에 있어서, 상기 eIF5A siRNA는 뉴클레오티드 서열 AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT를 포함함을 특징으로 하는 방법
제1항에 있어서, 상기 siRNA는 섬 세포 공여자의 문맥을 통한 관류로 투여됨을 특징으로 하는 방법
제1항에 있어서, 상기 siRNA는 섬 세포 공여자의 문맥을 통한 유체역학적 관류로 투여됨을 특징으로 하는 방법
섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하는 eIF5A siRNA를 섬 세포에 투여하는 것을 포함한 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하는 방법
eIF5A siRNA를 섬 세포에 투여하는 것을 포함하고, 상기 eIF5A siRNA는 섬 세포에서 eIF5A의 발현을 억제하고 eIF5A의 발현 억제가 아폽토시스를 억제함을 특징으로 하는 채취된 섬 세포에서 아폽토시스를 억제하는 방법
eIF5A의 발현을 억제하여 섬 세포에서의 아폽토시스를 억제하는 eIF5A siRNA를 포함한 섬 세포 내 아폽토시스 억제용 조성물
제7항에 있어서, 상기 siRNA는 뉴클레오티드 서열 AGUCGACCUUCAGUAAGGCdTdT를 포함함을 특징으로 하는 조성물