KR20080033165A - 변이형 아세토락테이트 합성효소 유전자를 이용한형질전환방법 - Google Patents

변이형 아세토락테이트 합성효소 유전자를 이용한형질전환방법 Download PDF

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Abstract

PC계 제초제에 대한 특이성이 높은 변이 ALS 유전자를 사용하여, 형질전환 세포를 고효율로 선택한다. 목적 유전자와, 벼 유래의 야생형 아세토락테이트 합성효소의 아미노산 서열에서 95번째에 해당하는 글리신이 알라닌으로 변이된 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 사용하여 숙주세포를 형질전환하는 공정; 및, 상기 공정에서 수득한 형질전환 세포를 피리미디닐 카복시계 제초제 존재 하에서 배양하는 공정을 포함하고, 이때 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 선별마커로 사용한다.
아세토락테이트 합성효소, ALS, 피리미디닐 카복시계 제초제

Description

변이형 아세토락테이트 합성효소 유전자를 이용한 형질전환방법{Method for Transformation Using Mutant Acetolactate Synthase Gene}
본 발명은 야생형 아세토락테이트 합성효소의 소정의 위치를 변화시켜 변이형 아세토락테이트 합성효소를 이용하는 형질전환방법(transformation) 및 식물육성방법(cultivation)에 관한 것이다.
아세토락테이트 합성효소(이하, 'ALS'라 함)는 루이신, 발린 및 이소루이신 등의 분지쇄 아미노산 생합성 경로에서 율속효소(rate-limiting enzyme)이며, 식물 성장에 필수효소로 알려져 있다. ALS은 고등식물 전체에 걸쳐 넓게 존재하고 있는 것으로 알려져 있으며, 각종 미생물,, 예를 들어, 효모균(Saccharomyces cerevisiae), 대장균(Escherichia coli), 살모넬라 티피무리움균(Salmonella typhimurium) 등에서도 검출된다.
대장균 및 살모넬라균에는 ALS의 동질효소(isoenzyme)가 3종 존재하고 있는 것으로 알려져 있다. 이들 각각의 동질효소는 분자량이 크고 효소의 촉매활성을 담당하는 촉매 서브유닛(catalytic subunit)과 분자량이 작고, 분지쇄 아미노산이 결합하면 피드백 저해제로서 작용하는 제어 서브유닛(regulatory subunit)으로 구성된 헤테로 올리고머이다(참조: Chipman et al., Biochem., Biophys. Acta., 1385, 401-419, 1998 [비특허문헌 1]). 촉매 서브유닛은 각각 Ilv IH, Ilv GM, Ilv BN 오페론에 위치하고 있다. 한편, 효모균의 ALS는 단일효소지만, 세균과 같이 촉매 서브유닛과 제어 서브유닛으로 구성되고(참조: Panget al., Biochemistry, 38, 5222-5231, 1999 [비특허문헌 2]), 촉매 단백질 서브유닛은 ILV2 좌위에 위치하고 있다.
식물의 ALS도 상술한 미생물과 같이 촉매 서브유닛과 제어 서브유닛으로 구성되어 있는 것으로 알려져 있다(참조: Hershey et al., Plant Molecular Biology, 40, 795-806, 1999 [비특허문헌 3]). 예를 들면, 쌍자엽 식물인 담배의 ALS 촉매 서브유닛은 SuRA 및 SuRB의 2개의 유전자 좌위에 암호화되어 있으며(참조: Lee et al., EMBO J., 7, 1241-1248, 1988 [비특허문헌 4]), 옥수수의 ALS 촉매 서브유닛은 als1 및 als2의 2개의 유전자 좌위에 암호화되어 있다(참조: Burr et al., Trends in Genetics, 7, 55-61, 1991 [비특허문헌 5]; Lawrence et al., Plant Mol., Biol., 18, 1185-1187, 1992 [비특허문헌 6]). 촉매 서브유닛을 암호화하는 유전자는 쌍자엽 식물에서 담배뿐만 아니라, 아라비돕시스(Arabidopsis), 유채(rapeseed), 목화(cotton), 도꼬마리(Xanthium), 아마란서스(Amaranthus) 및 댑싸리(Kochia) 등의 염기서열이 완벽하게 결정되었다(참조: Chipman et al., Biochem., Biophys. Acta., 1385, 401-419, 1998 [비특허문헌 1] 및 국제공개공보 WO97/08327 [특허문헌 1]). 단자엽 식물에서도 옥수수와 벼에서 염기서열이 완전히 결정되었다.
설포닐 유레아계 제초제, 이미다졸리논계 제초제, 트리아조피리미딘계 제초 제 및 피리미디닐 카복시계 제초제(이하, 'PC계 제초제'라 함) 등의 제초제는 이 ALS를 저해하여 식물의 성장을 억제한다고 알려져 있다(참조: Ray, Plant Physiol., 75, 827-831, 1984 [비특허문헌 7]; Shaner et al., Plant Physiol., 76, 545-546, 1984 [비특허문헌 8]; Subramanian et al., Plant Physiol., 96, 310-313, 1991 [비특허문헌 9]; Shimizu et., al., J., Pestic. Sci., 19, 59-67, 1994 [비특허문헌 10]).
이들 제초제에 대한 저항성을 가지는 식물은 ALS를 암호화하는 유전자에 종과 관계없이 보존되는 보존영역 중에 1개 혹은 2개의 아미노산을 치환시키는 1개 또는 2개의 염기가 치환되어 있음이 알려져 있다. 예를 들어, 설포닐 유레아계 제초제에 강력한 저항성을 가지는 ALS를 암호화한 것(참조: Kathleen et al., EMBO J., 7, 1241-1248, 1988 [비특허문헌 11]; Mourad et al., Planta, 188, 491-497, 1992 [비특허문헌 12]; Guttieri et al., Weed Sci., 43, 175-178, 1995 [비특허문헌 13]; Bernasconi et al., J., Biol., Chem., 270, 17381-17385, 1995 [비특허문헌 14] 및 특개 소63-71184호 공보 [특허문헌 2]), 이미다졸리논계 제초제에 강력한 저항성을 가지는 ALS를 암호화한 것(참조: Mourad et al., Planta, 188, 491-497, 1992 [비특허문헌 12]; Lee et al., FEBS Lett., 452, 341-345, 1999 [비특허문헌 15] 및 공개 평5-227964호 공보 [특허문헌 3]), PC계 제초제에 강력한 저항성을 가지는 ALS를 암호화한 것(참조: WO02/44385A1 [특허문헌 4] 및 WO03/083118A1 [특허문헌 5]), 혹은 설포닐 유레아계 제초제, 이미다졸리논계 제초제, PC계 제초제에 대한 저항성을 모두 가지는 ALS를 암호화한 것(참조: Kathleen et al., EMBO J., 7, 1241-1248, 1988 [비특허문헌 11]; Bernasconi et al., J., Biol., Chem., 270, 17381-17385, 1995 [비특허문헌 14]; Hattori et al., Mol., Gen. Genet., 246, 419-425, 1995 [비특허문헌 16]; Alison et al., Plant Sci., 119, 115-124, 1996 [비특허문헌 18]; 공개 소63-71184호 공보 [특허문헌 2]; 공개 평4-311392호 공보 [특허문헌 6]; Bernasconi et al., US Patent 5633437, 1997 [특허문헌 7]; WO02/44385A1 [특허문헌 4] 및 WO03/083118A1 [특허문헌 5])이 알려져 있다.
또한, 설포닐 유레아계 제초제에 특이적으로 저항성을 나타내는 ALS를 가지는 개체와 이미다졸리논계 제초제에 특이적인 저항성을 나타내는 ALS를 가지는 개체를 교배시켜, 양쪽의 저항성을 모두 나타내는 식물체를 만드는 실험도 진행되고 있다(참조: Mourad et al., Mol., Gen. Genet., 243, 178-184, 1994 [비특허문헌 19]). 더욱이, ALS를 암호화하는 유전자를 인위적으로 제초제 저항성 유전자로 변이시키는 실험도 진행되고 있으며(참조: Ott et al., J., Mol., Biol., 263, 359-368, 1996 [비특허문헌 20]; 특개 소63-71184호 공보 [특허문헌 2]; 특개 평5-227964호 공보 [특허문헌 3]; 특표 평11-504213호 공보 [특허문헌 8]), 1개의 아미노산 결실이 설포닐 유레아계 제초제와 이미다졸리논계 제초제에 대한 저항성을 동시에 나타내는 것이 밝혀졌다(참조: 특개 평5-227964호 공보 [특허문헌 3]).
상술한 바와 같이, 제초제에 대한 저항성을 가지는 ALS 및 ALS를 암호화하는 유전자에 관해서 많은 연구가 이루어졌으나, PC계 제초제 저항성을 지표로 하여 PC계 제초제에 대해서만 특이적인 저항성을 가지는 변이 ALS 유전자에 대해서는 현재까지 보고된 바가 없었다. 특정 제초제에 대해 특이적인 저항성을 가지는 변이 ALS 유전자를 얻게 된다면, 당해 변이 ALS 유전자를 여러 용도로 사용할 수 있을 것으로 예상되나, PC계 제초제에 특이적으로 유용한 변이 ALS 유전자에 대해서는 현재까지 보고된 바가 없다.
비특허문헌 1: Chipman et al., Biochem., Biophys. Acta. 1385, 401-419, 1998
비특허문헌 2: Panget al., Biochemistry, 38, 5222-5231, 1999
비특허문헌 3: Hershey et al., Plant Molecular Biology, 40, 795-806, 1999
비특허문헌 4: Lee et al., EMBO J., 7, 1241-1248, 1988
비특허문헌 5: Burr et al., Trendsin Genetics, 7, 55-61, 1991
비특허문헌 6: Lawrence et al., Plant Mol., Biol., 18, 1185-1187, 1992
비특허문헌 7: Ray, Plant Physiol., 75, 827-831, 1984
비특허문헌 8: Shaner et al., Plant Physiol., 76, 545-546, 1984
비특허문헌 9: Subramanian el al., Plant Physiol., 96, 310-313, 1991
비특허문헌 10: Shimizu et al., J., Pestic. Sci., 19, 59-67, 1994
비특허문헌 11: Kathleen et al., EMBO J., 7, 1241-1248, 1988
비특허문헌 12: Mourad et al., Planta, 188, 491-497, 1992
비특허문헌 13: Guttieri et al., Weed Sci., 43, 175-178, 1995
비특허문헌 14: Bernasconi et al., J., Biol., Chem., 270, 17381-17385, 1995
비특허문헌 15: Lee et al., FEBS Lett., 452, 341-345, 1999
비특허문헌 16: Hattori et al., Mol., Gen. Genet., 246, 419-425, 1995
비특허문헌 17: Alison et al., Plant Physiol., 111, 1353, 1996
비특허문헌 18: Rajasekarauet al., Plant Sci., 119, 115-124, 1996
비특허문헌 19: Mourad et al., Mol., Gen. Genet, 243, 178-184, 1994
비특허문헌 20: Ott et al., J., Mol., Biol., 263, 359-368, 1996
특허문헌 1: 국제공개공보 WO97/08327 호
특허문헌 2: 특개 소63-71184 호 공보
특허문헌 3: 특개 평5-227964 호 공보
특허문헌 4: 국제공개공보 WO02/44385 호
특허문헌 5: 국제공개공보 WO03/083118 호
특허문헌 6: 특개 평4-311392 호 공보
특허문헌 7: Bernasconi et al., 미합중국특허번호 제 5,633,437 호
특허문헌 8: 특표 평11-504213 호 공보
발명의 개시
본 발명은 상술한 바와 같은 실정을 감안하여, PC계 제초제에 대한 특이성 높은 변이 ALS 유전자를 사용하여 형질전환 세포를 효율적으로 선별할 수 있는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자는 상술한 목적을 달성하기 위하여 예의 검토하였는바, 특정 변이를 가진 ALS가 PC계 제초제에 대한 극히 높은 저항성을 나타냄을 밝혀내고, 당해 변이를 가진 ALS를 암호화하는 유전자를 선별마커로 사용할 수 있음을 찾아내어, 본 발명을 완성하였다.
즉, 본 발명은 이하를 포함한다.
(1) 목적 유전자와, 벼 유래의 야생형 아세토락테이트 합성효소의 아미노산 서열에서 95번째에 해당하는 글리신이 알라닌으로 변이된 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 사용하여 숙주세포를 형질전환하는 공정; 및, 상기 공정에서 수득한 형질전환 세포를 피리미디닐 카복시계 제초제 존재 하에서 배양하는 공정을 포함하고, 이때 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 선별마커로 사용하는 것을 특징으로 하는 형질전환방법.
(2) 상기 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자는
(a) 서열번호 2로 기재된 아미노산 서열로 구성된 단백질; 또는, (b) 서열번호 2로 기재된 아미노산 서열에서 95번째 알라닌을 제외하고, 적어도 1개 이상의 아미노산이 치환, 결실, 또는 부가된 아미노산 서열로 구성되고, 피리미디닐 카복시계 제초제에 대한 저항성을 가지며, 아세토락테이트 합성효소 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 유전자인 것을 특징으로 하는 형질전환방법.
(3) 상기 숙주세포는 식물세포인 것을 특징으로 하는 형질전환방법.
(4) 목적 유전자와, 벼 유래의 야생형 아세토락테이트 합성효소의 아미노산 서열에서 95번째에 해당하는 글리신이 알라닌으로 치환된 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 사용하여 식물세포를 형질전환하는 공정: 및, 상기 공정에서 수득한 형질전환 식물을 피리미디닐 카복시계 제초제 존재하에서 육성하는 공정을 포함하고, 이때 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 선별마커로 사용하는 것을 특징으로 하는 식물육성방법.
(5) 상기 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자는 (a) 서열번호 2로 기재된 아미노산 서열로 구성된 단백질; 또는, (b) 서열번호 2로 기재된 아미노산 서열에서 95번째 알라닌을 제외하고, 적어도 1개 이상의 아미노산이 치환, 결실, 또는 부가된 아미노산 서열로 구성되고, 피리미디닐 카복시계 제초제에 대한 저항성을 가지며, 아세토락테이트 합성효소 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 유전자인 것을 특징으로 하는 식물육성방법.
본 명세서는 본원의 우선권의 기초인 일본국 특허출원 제 2005-136186호의 명세서 및/또는 도면에 기재된 내용을 포함한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 아세토락테이트 합성효소 단백질(이하, '변이형 ALS 단백질'이라 함)은 야생형 ALS 단백질에 소정의 부위를 변이시켜 수득할 수 있다. 벼 유래의 야생형 ALS 단백질의 N말단 메티오닌으로부터 95번째 아미노산은 글리신이다. 본 발명의 변이형 ALS 단백질은 이 95번째 글리신을 알라닌으로 치환된다. 즉, 벼 유래이며 본 발명에 관련된 변이형 ALS 단백질은 95번째의 글리신이 알라닌으로 치환된("G95A") 아미노산 서열을 가진다. 벼 유래의 변이형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자(이하, '변이형 ALS 유전자'라 함)의 염기서열 및 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열을, 각각 서열번호 1 및 2로 나타내었다.
도 1은 벼 유래의 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열과 벼 유래의 야생형 ALS 단백질의 아미노산 서열을 비교한 결과를 나타낸다. 또한, 도 1에서, 1열의 아미노산 서열은 변이형 ALS 단백질을 나타내며, 2열의 아미노산 서열은 야생형 ALS 단백질을 나타낸다.
벼 유래의 변이형 ALS 유전자(서열번호 1)을 벼 유래의 야생형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자와 비교하면, 야생형 ALS 단백질의 95번째 글리신을 암호화하는 코돈을 알라닌을 암호화하는 코돈으로 치환시킨 것이다. 도 2a ~ 도 2c는 벼 유래의 변이형 ALS 유전자의 염기서열과 벼 유래의 야생형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자의 염기서열을 비교한 결과를 나타낸다. 또한, 도 2a ~ 도 2c에서, 1열의 염기서열은 변이형 ALS 유전자를 나타내고, 2열의 염기서열은 야생형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자를 나타내고 있다.
이 변이형 ALS 유전자는 일본형 벼 품종인 타이중 65호의 게놈 DNA에 존재하는 야생형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자에서 상술한 것과 같은 변이를 일으켜 수득할 수 있다. 변이를 일으키는 방법으로는 공지된 방법을 사용할 수 있으며, 예를 들어, 부위특이적 변이 도입법을 사용할 수 있다. 부위특이적 변이 도입법은 시판의 키트, 예를 들어, Mutan-K(다카라주조주식회사), GeneEditor(Promega사), ExSite(Stratagene사) 등을 사용하여 수행할 수 있다. 또한, 변이 ALS 단백질을 암호화하는 단백질은 PC계 제초제 민감한 야생주 배양세포를 PC계 제초제 존재 하에서 배양한 후, PC계 제초제에 대해 저항성을 나타낸 변이주 배양세포에서 수득할 수 있다.
본 발명에 관련된 변이형 ALS 유전자는 서열번호 1로 나타내는 벼 유래의 유전자에 한정되지 않고, 다양한 식물 유래의 ALS 유전자에서 수득할 수 있다. 예를 들어, 옥수수, 밀, 보리, 대두, 목화, 유채, 사탕무, 쥐보리(Italian grass), 담배 및 아라비돕시스 등에서 유래한 ALS 유전자에 유사변이를 일으켜 본 발명에 관련된 변이형 ALS 유전자를 수득할 수 있다. 여기서, '유사변이(similar mutation)'라는 것은 벼 유래의 야생형 ALS 단백질의 95번째 글리신에 해당하는 글리신(식물에 따라서는 95번째가 아닌 경우도 있다)을 알라닌으로 치환하는 변이를 의미한다.
옥수수 유래의 2종류의 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열을 각각 서열번호 3과 4로 나타낸다. 밀 유래의 2종류의 변이형 ALS 단백질의 부분 아미노산 서열을 각각 서열번호 5와 6으로 나타낸다. 목화 유래의 2종류의 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열을 각각 서열번호 7과 8로 나타낸다. 유채 유래의 2종류의 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열을 각각 서열번호 9와 10으로 나타낸다. 담배 유래의 2종류의 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열을 각각 서열번호 11과 12로 나타낸다. 쥐보리 유래의 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열을 서열번호 13으로 나타낸다. 아라비돕시스 유래의 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열을 서열번호 14로 나타낸다.
변이형 ALS 단백질은 유래에 상관없이 벼 유래의 야생형 ALS 단백질의 95번째 글리신에 해당하는 글리신이 알라닌으로 치환되는 한, PC계 제초제에 대한 특이적 저항성을 나타내게 된다.
변이형 ALS 단백질은 야생형 ALS 단백질과 비교하여, PC계 제초제에 대해 우수한 저항성을 가진다. 이것은 변이형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자를 대장균 등에 발현벡터를 넣어, 당해 발현벡터에 의해 형질전환된 대장균에서 수득한 변이형 ALS의 제초제 감수성을 조사하여 판단할 수 있다.
여기서 PC계 제초제로는 화학식 1로 표시한 것처럼, 비스피리백-소디움(bispyribac-sodium), 피리티오백-소디움(pyrithiobac-sodium), 피리미나백(pyriminobac)을 예시할 수 있다.
Figure 112007088319886-PCT00001
PC계 제초제에 대해 특이적으로 저항성을 나타낸다는 것은 PC계 제초제를 제외한 설포닐 유레아계 제초제나 이미다졸리논계 제초제에 대한 저항성이 PC계 제 초제에 대한 저항성과 비교하였을 때 현저히 낮음을 의미한다. 또한, 설포닐 유레아계 제초제로는 화학식 2로 나타낸 것과 같이, 클로르설퍼론(chlorsulfuron), 벤설퍼론-메틸(bensulfuron-methyl), 피라조설퍼론-에틸(pyrazosulfuron-ethyl), 이마조설퍼론(imazosulfuron)을 예시할 수 있다.
Figure 112007088319886-PCT00002
이미다졸리논계 제초제는 화학식 3으로 나타낸 것과 같이, 이마자퀸(imazaquin), 이마자피르(imazapyr)를 예시할 수 있다.
Figure 112007088319886-PCT00003
본 발명에서는 변이형 ALS 유전자를 이용하여 목적 유전자를 고효율로 형질전환 할 수 있는 형질전환방법을 구축할 수 있다. 즉, 변이형 ALS 유전자는 식물 형질전환 실험에서 선별마커로 사용할 수 있다. 예를 들면, 목적 유전자를 사용하여 식물세포를 형질전환할 경우, 변이형 ALS 유전자와 목적 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 식물세포 내에 도입한 후, 당해 식물세포를 PC계 제초제 존재하에서 배양한다. 그 결과, PC계 제초제 존재하에서 생존하는 식물세포에는 변이형 ALS 유전자와 함께 목적 유전자가 도입됨이 확인되었다. 또한, 목적 유전자 및 변이형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자가 식물세포의 염색체에 끼어 들어갔는지의 여부는 그 식물의 표현형을 관찰한 후, 게놈 서던 혼성화, 혹은 PCR로 이 유전자가 게놈 위에 존재하는지 조사하여 확인할 수 있다.
식물을 형질전환하는 방법으로는 공지된 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 아그로박테리움(Agrobacterium tumefaciens)을 사용하여 외래 유전자를 표적 식물세포에 도입하는 방법을 예시할 수 있다.
구체적으로, 아그로박테리움의 Ti 플라스미드의 T-DNA 서열을 포함하고 있는 바이너리 벡터(binary vector)에 변이형 ALS 유전자 및 목적 유전자를 투입한다. 이 Ti 플라스미드를 대장균 등에 형질전환한 다음, 대장균 등에서 증식된 변이형 ALS 유전자 및 목적유전자를 간직하고 있는 바이너리 벡터를 헬퍼 플라스미드를 포함하는 아그로박테리움균에 형질전환한다. 그리고, 이 아그로박테리움균을 표적 식물에 감염시킨 후, 형질전환되는 식물을 동정한다. 동정되는 형질전환 식물이 배양세포인 경우에는, 공지된 방법에 따라 그 식물세포를 완전한 식물로 재생할 수 있다.
또한, 변이형 ALS 유전자 및 목적 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 표적 식물에 형질전환하는 경우, 공지된 방법을 사용하여 직접적으로 식물체에 도입하여도 상관없다. 더욱이, 변이형 ALS 유전자 및 목적 유전자를 갖는 재조합 벡터를 형질전환하는 방법으로는 폴리에틸렌글리콜법, 전기용출법, 입자총법(particle gun method) 등을 사용할 수 있다.
한편, 변이형 ALS 유전자 및 목적 유전자는 단자엽 식물 및 쌍자엽 식물 등 어떤 종류의 식물에 형질전환하여도 무방하다. 변이형 ALS 단백질을 암호화한 유전자를 형질전환하는 대상 작물로는, 예를 들어, 벼, 옥수수, 밀, 보리, 대두, 목화, 유채, 사탕무 및 담배 등을 사용할 수 있다. 더욱이, 변이형 유전자 및 목적 유전자를 도입하여 잔디(grass)나 나무(tree) 등을 형질전환하여도 무방하다.
어떤 경우라도, 변이형 ALS 유전자를 식물에 형질전환하면 당해 식물에 PC계 제초제에 대한 특이적인 저항성을 부여할 수 있다. 특히, PC계 제초제는 설포닐 유리아계 제초제나 이미다졸리논계 제초제와 달리 수용성이기 때문에 취급이 용이 하고, 유기용매로 인한 숙주세포가 입는 영향을 배제할 수 있어 형질전환의 약제로 사용하기에 좋다. 또한, PC계 제초제는 이미다졸리논계 제초제보다 약 100배 강한 ALS 저해활성을 나타내기 때문에, 미량의 PC계 제초제로 형질전환체를 선택할 수 있다.
도 1은 벼 유래의 변이형 ALS 단백질의 아미노산 서열과 벼 유래의 야생형 ALS 단백질의 아미노산 서열을 비교한 결과를 나타낸다.
도 2a는 벼 유래의 변이형 ALS 유전자의 염기서열과 벼 유래의 야생형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자의 염기서열을 비교한 결과를 나타낸다.
도 2b는 벼 유래의 변이형 ALS 유전자의 염기서열과 벼 유래의 야생형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자의 염기서열을 비교한 결과를 나타낸다.
도 2c는 벼 유래의 변이형 ALS 유전자의 염기서열과 벼 유래의 야생형 ALS 단백질을 암호화하는 유전자의 염기서열을 비교한 결과를 나타낸다.
도 3은 비스피리백-소디움을 포함하는 발근 배지에 G95A-1 계통 및 G95A-2 계통 유래의 클론 개체에서 뿌리 발달을 관찰한 결과를 나타낸 사진이다.
도 4는 G95A 변이형 ALS 발현벡터의 작제방법을 설명하는 모식도이다.
도 5는 저해 50% 농도를 기준으로 한 야생형 ALS에 대한 G95A 변이형 ALS의 약제 저항성 비(RS비)를 표시한 특성도이다.
이하, 본 발명의 실시예를 이용하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 본 발명의 기술범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 꽃밥 배양 유래 캘러스의 유도
벼 품종 "타이중 65호(Taichung 65(japonica rice cultivar))"의 이삭이 부풀어 오르는 시기에 1핵기(mononuclear phase)의 꽃밥을 더 많이 얻을 수 있는 잎귀 사이의 길이(auricle-to-auricle length)가 6~8cm의 어린 이삭(young panicle)을 채취하였다. 이때, 말단으로부터 2번째 잎이 있는 부위 마디 아래쪽에서 잘라, 어린 이삭을 직접 싸고 있는 말단 잎과 그 다음 잎 이외의 잎은 제거하였다.
줄기의 끝 부분을 물에 적신 페이퍼 타올로 싸고, 비닐 주머니로 덮어서 어두운 곳에서 10℃, 5~10일간 저온처리하였다. 그 후, 클린 벤치 내에서 어린 이삭을 꺼내, 70% 에탄올에서 10분간 멸균하고, 멸균한 킴타올(크레시아, 도쿄) 위에서 건조시켰다. 1핵기의 꽃밥이 포함된 반투명의 이삭 꽃을 멸균한 핀셋으로 열고 꽃밥만 꺼내어, 캘러스 유도배지(N6CI 배지, 표 1)에 두었다. 이것을 연속 명기, 30℃에서 배양하여 3주마다 새 배지에 계대하였다.
캘러스 유도배지(N6CI) pH 5.8
N6 무기염 N6 비타민 수크로스 2,4-D L(-)-프롤린 겔라이트 카사미노산 30g/l 2mg/l 2.878g/l 3g/l 0.3g/l
실시예 2: 비스피리백-소디움에 의한 꽃밥 배양 캘러스의 선택
캘러스 유도 후 5주째에 꽃밥으로부터 배양한 캘러스를 0.25uM의 비스피리백-소디움을 포함하는 캘러스 유도배지에서 4주간 배양하였다. 이후, 증식된 캘러스를 0.5uM의 비스피리백-소디움을 포함하는 재분화 배지(redifferentiation medium,표 2)에서 4주간 배양하고, 알비노인 재분화 식물을 얻었다. 계대는 모두 매 2주 간격으로 수행하였다.
재분화 배지(pH 5.8)
MS 무기염 N6 비타민 수크로스 솔비톨 2,4-D NAA BAP 카사미노산 L(-)-프롤린 겔라이트 30g/l 50g/l 2mg/l 1mg/l 2mg/l 2g/l 2.878g/l 4g/l
전체를 1리터로 하여, 고압 멸균하고 비스피리백-소디움을 첨가하였다.
실시예 3: 비스피리백-소디움 저항성 검정
상술한 방법으로 선택된 개체 2 계통을 G95A-1 계통 및 G95A-2 계통으로 명명하고, 알비노 개체이기 때문에 MS배지에 배양하여 분주한 후 증식시켰다. 비스피리백-소디움 저항성을 검정하기 위하여, 0, 1, 5, 10, 20uM의 비스피리백-소디움을 포함하는 발근 배지(rooting media, 표 3)에 G95A-1 계통부터 분주하여 클론 개체를 이식하였다(도 3a: 샬레 좌측, 알비노이므로 흰색). 클론 개체의 양이 적은 G95A-2 계통은 5uM만으로 검정하였다. 대조군은 파종 후 2주째인 야생형 타이중 65호를 사용하고(도 3: 각 샬레 우측), 이식 후 1주째(도 3b), 2주째(도 3c)의 식물체를 관찰하였다. 그 결과, G95A-1 및 G95A-2의 양 계통 모두, 모든 농도의 비스피리백-소디움 함유 배지에서 새로운 뿌리 발달이 관찰되어 저항성을 나타내었으나, 대조군인 야생형은 비스피리백-소디움 함유 배지에서 모두 고사하였다.
발근 검정 배지(pH 5.8)
MS 무기염 N6 비타민 수크로스 아가 30g/l 8g/l
전체를 1리터로 하여, 고압 멸균하여 비스피리백-소디움을 첨가하였다.
실시예 4: 비스피리백-소디움 저항성 알비노 계통의 ALS 유전자 서열 분석
상기의 2 계통의 잎(약 0.5 X 1 cm)을 1.5ml 튜브에 넣고, 50℃에서 2시간 이상 건조시켰다. 튜브 내에서 직경 3mm의 유리 비드 BZ-3(이우치세이에이도)을 4개 넣어 믹서밀 MM300(Retsch)로 잎을 분쇄한 후, 300ul의 추출 완충액(200mM Tris-HCl(pH 7.5), 250mM NaCl, 25mM EDTA, 0.5% SDS)을 첨가하여 현탁하였다. 이 현탁액을 14,000rpm으로 5분간 원심분리하고, 그 상등액 200ul를 새로운 튜브에 옮겨 200ul 이소프로판올을 첨가하였다. 이것을 14,000rpm으로 5분간 원심분리하고 상등액을 제거하고, 수득한 침전을 3분간 진공건조하였다. 이 침전에 50ul의 1/5X TE를 첨가한 후, 14,000rpm으로 1분간 원심분리하여, 이것을 게놈 DNA 용액으로 하였다.
제조한 게놈 DNA를 주형으로 하여, 하기에 나타낸 프라이머를 이용하여 PCR 다이렉트 시퀀싱을 통하여 ALS 유전자의 전 영역의 서열을 분석하였다. PCR에는 ExTaq(다카라 바이오 주식회사)을 사용하였다. 반응은 94℃ 30초, 58℃ 30초, 72℃ 40초의 사이클로 40회 수행하였다. ALSF2와 ALS2R의 프라이머의 조합은 PCRx 인핸서(Invitrogen사)를 첨가하여, 94℃ 1분으로 초기 변형 후, 94℃ 1분, 50℃ 1분, 72℃ 1분의 사이클로 40회 수행하였다. 각각의 PCR 산물을 아가로즈 겔에 전기 영동하고, Mini Elute Gel Extraction Kit(QIAGEN사)을 사용하여 정제하였다.
이 PCR 산물을 주형으로, ABI Sequencing Kit를 사용하여 하기의 프라이머로 시퀀스 반응을 수행하였다. ALSF2, ALS2R의 프라이머를 사용한 경우에는 시퀀스 Rx 인핸서 용액 A(Invitrogen사)를 첨가하였다. 시퀀스 반응 조건은 96℃ 10초, 50℃ 5초, 60℃ 4분을 35회 사이클로 수행하였다. 시퀀스 반응 후, ABI PRISM 310 Genetic Analyzer(Applied Biosystems, U.S.A.)로 염기서열을 결정하였다.
ALSF2 (5'-CCACCACCCACCATGGCTACG-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 12-9번째에 대응; 서열번호 15)
ALS2R (5'-GAAGAGGTGGTTGGTGATGA-3', 안티센스 프라이머, ALS 유전자의 326-345번째에 대응; 서열번호 16)
ALS12 (5'-GCAACCAACCTCGTGTCCGC-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 436-455번째에 대응; 서열번호 17)
ALS22 (5'-GAAGGCTTCCTGTATGACGC-3', 안티센스 프라이머, ALS 유전자의 620-639번째에 대응; 서열번호 18)
ALS13 (5'-GAATTGCGCTGGTTTGTTGA-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 868-887번째에 대응; 서열번호 19)
ALS23 (5'-CTCAATTTTCCCTGTCACACG-3', 안티센스 프라이머, ALS 유전자의 1051-1071번째에 대응; 서열번호 20)
ALS24F (5'-GGTAGCTTCCTCATGAACAT-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 1537-1556번째에 대응; 서열번호 21)
ALS24R (5'-AATGTTCATGAGGAAGCTAC-3', 안티센스 프라이머, ALS 유전자의 1538-1557번째에 대응; 서열번호 22)
ALS25 (5'-CATTCAGGTCAAACATAGGCC-3', 안티센스 프라이머, ALS 유전자의 1919-1989번째에 대응; 서열번호 23)
이러한 상기 2 계통의 ALS 유전자 서열을 조사한 결과, 양쪽 모두 ALS의 95번째 아미노산이 1 염기 치환에 의해 글리신(GGC)이 알라닌(GCC)로 치환되었다.
실시예 5: GST 융합 G95A 변이형 ALS을 발현하는 벡터의 작제
pUC18 벡터에 재조합시킨 벼 유래의 W548L/S627I의 2점 변이형 ALS(WO02/44385A1 참조)를 주형으로 하여, 95번째 글리신 부분의 코돈을 무작위 변형시킨 센스 프라이머 ALS-M5 (5'-TACCCGGGCNNNGCGTCCATGGAGATCCA-3', 아미노산 서열에서 92 내지 101번째에 대응; 서열번호 24)와 191 내지 196번째 아미노산 서열에 대응하는 안티센스 프라이머 ALS-RspA (5'-TGTGCTTGGTGATGGA-3', 서열번호 25)로 증폭시킨 PCR 생성물을 pT7Blue-T 벡터에 클로닝하여, 이 벡터를 공지된 방법에 따라 대장균(HB-101 주)을 형질전환시켰다.
같은 프라이머 세트로 콜로니 PCR을 수행하여 시퀀스 분석하여, 95번째 글리신(GGC)부분이 세린(AGC), 시스테인(TGC), 티로신(TAT), 알라닌(GCA), 발린(GTG), 루이신(CTG), 이소루이신(ATA), 메티오닌(ATG), 트립토판(TGG), 페닐알라닌(TTT), 아스파라긴산(GAT), 글루타민산(GAG), 아르기닌(CGG)로 변이된 콜로니를 얻었다. 알라닌 변이체는 대장균을 액체배양 후, 플라스미드를 추출하여, SmaI으로 절단하였다. 전기영동 후 아가로즈 겔에서 변이형 ALS 유전자 단편을 정제하여, SmaI으로 소화 후에 BAP 처리하여 정제한 벼 유래 W548L/S627I 2점 변이형 ALS 유전자를 재조합한 pUC18 벡터에 연결하였다. 완성된 G95A/W548L/S627I의 3점 변이형 ALS 유전자를 갖는 pUC18 벡터에서 G95A 부분을 포함하는 NcoI 단편을 잘라내어, NcoI 처리 후에 BAP 처리한 야생형 ALS 유전자가 들어간 대장균 단백질 발현벡터(pGEX-2T)와 연결시켜, G95A 1점 변이형 ALS 유전자를 갖는 pGEX-2T 발현벡터를 얻었다(참조: 도 4).
실시예 6: G95A 변이형 ALS 유전자를 결합시킨 pGEX-2T 벡터의 염기서열 확인
본 벡터로 형질전환된 대장균(JM109 주)을 2ml*10개로 37℃에서 12시간 배양하여, 플라스미드 추출장치(TOMY DP-480)으로 플라스미드를 추출(500ul)한 다음, 원심분리하여 200ul정도까지 농축하였다. GFX PCR and Gel Purification Kit(Amersham Bioscience)로 염분을 제거하고, 최종적으로 200ul의 증류수에 용해시켰다. 이 플라스미드를 BigDye Terminator ver. 1.1 cycle sequencing kit(Applied Biosystems)를 이용하여 시퀀스 반응을 수행하였다. [총용량 20ul(주형 DNA 13ul, 프라이머(3.2pmol/ul)1ul, pre-mix 4ul, dilution buffer 2ul), 반응조건: 초기 변성 96℃(5분), 변성 96℃(5초)-풀림 50℃(5초)-신장 60℃(4분)의 사이클로 40회, 최종 사이클의 신장은 60℃(9분)] 시퀀스 반응 후, AutoSeq G-50 column(Amersham Bioscience)를 이용하여 반응액 중 형광염기를 겔 여과를 통해 제거하였다. 반응 샘플을 ABI PRISM 310 Genetic Analyzer로 측정하고, 염기서열을 확인하였다. 시퀀싱용 프라이머로는 하기 서열의 프라이머를 사용하였다.
PGEX-5 (5'-GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 상류측; 서열번호 26)
ALS-RspC (5'-CAGCGACGTGTTCGCCTA-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 258-275번째에 대응; 서열번호 27)
ALS-M1 (5'-CCCCAGCCGCATGATCGGCACCGACGCCTT-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 510-539번째에 대응; 서열번호 28)
ALS-Rsp3 (5'-CTGGGACACCTCGATGAAT-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 720-738번째에 대응; 서열번호 29)
ALS-Rsp7 (5'-AACTGGGATACCAGTCAGCTC-3', 안티센스 프라이머, ALS 유전자의886-906번째에 대응; 서열번호 30)
ALS-Rsp1 (5'-GCTCTGCTACAACAGAGCACA-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 1192a212번째에 대응; 서열번호 31)
3-1-3 (5'-GATTGCCTCACCTTTCG-3', 안티 센스 프라이머, ALS 유전자의 1346-1362번째에 대응; 서열번호 32)
4-83-10 (5'-CAGCCCAAATCCCATTG-3', 안티 센스 프라이머, ALS 유전자의 1457-1473번째에 대응; 서열번호 33)
3-1-4 (5'-AGGTGTCACAGTTGTTG-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 1506-1522번째에 대응; 서열번호 34)
ALS-RspB (5'-TCAAGGACATGATCCTGGATGG-3', 센스 프라이머, ALS 유전자의 1892a913번째에 대응; 서열번호 35)
ALS-Rsp2 (5'-AGTCCTGCCATCACCATCCAG-3', 안티 센스 프라이머, ALS 유전자의 1906-1926번째에 대응; 서열번호 36)
PGEX-3 (5'-CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG-3', 안티 센스 프라이머, ALS 유전자의 하류측; 서열번호 37)
실시예 7: G95A 변이형 ALS의 발현과 ALS의 제조
실시예 6에서 작제한 G95A 변이형 ALS 유전자를 가진 pGEX-2T 및 야생형 ALS 유전자를 가진 pGEX-2T(WO02/44385A1 참조)로 형질전환시킨 대장균을 2ml의 암피실린을 함유한 LB 배지 용액에서 27℃에서 각각 진탕배양(전 배양)하였다. 이 전 배양액 1ml을 암피실린을 함유하는 250ml의 LB 배지 용액에서 각각 본 배양시켰다. 하룻밤 배양 후, 1mM IPTG를 첨가하고 3 내지 4시간 정도 더 배양하여, GST 융합 단백질의 발현을 유도하였다. 또한, 균체는 ALS 추출 완충액(30% 글리세롤과 0.5mM MgCl2를 포함하는 인산칼륨 완충액 pH 7.5)으로 세정 후, -80℃에 보존하였다.
대장균으로부터의 ALS의 제조와 정제는 다음의 방법으로 진행하였다. 우선, -80℃에 보존해 둔 대장균의 침전을 ALS 추출 완충액에 현탁하였다(배양액 50ml에서 얻어낸 침전에 2.5ml의 ALS 추출 완충액을 첨가). 이 현탁액을 초음파 처리(Heat Systems-Ultrasonics사, Sonicator w-225r, 마이크로 튜브, 아웃풋 컨트롤러 8, 약 1초 간격, 40초 2회)한 후, 4℃, 15000 X g로 20분간 원심분리하고, 그 상등액을 조효소 용액으로 하였다. 이에 따라, GST 융합 G95A 변이형 ALS 단백질 및 GST 융합 야생형 ALS 단백질의 조효소 용액을 제조하였다.
실시예 8: 발현 ALS의 활성측정
활성측정에 사용한 반응용액은 20mM 피루브산 나트륨, 0.5mM 티아민 피로포스페이트, 0.5mM MgCl2, 10uM 플라빈 아데닌 디뉴클레오타이드(FAD), 10mM 발린(대장균 유래의 ALS 활성을 저해하기 위해 첨가) 및 20mM 인산칼륨 완충용액(pH 7.5)을 포함하는 용액에, 활성측정 대상인 GST 융합 ALS를 혼합한 것으로, 이 반응용액을 0.5ml 사용하였다. 측정반응은 측정 대상인 GST 융합 ALS를 첨가한 후, 37℃에서 30분 반응시켰다. 또한, 측정반응은 0.05ml 6N 황산을 첨가하여 정지시켰다. 다음으로, 반응이 끝난 반응용액을 37℃에서 60분간 배양시켰다. 이에 따라, 반응용액 중에 함유된 아세토락테이트를 아세토인(acetoin)으로 변화시켰다. 이후, 반응용액 중에 포함된 아세토인을 정량하기 위해, 0.5%(w/v) 크레아틴 0.05ml과 2.5N 수산화 나트륨에 용해시킨 5%(w/v) a-나프톨 0.05ml을 첨가하고, 37℃에서 10분간 배양하였다. 그 후, 반응용액의 흡광도 525nm를 측정하여 아세토인을 정량하고, ALS 활성을 평가하였다. 또한, 반응 0시간을 대조군으로 하였다. 약제의 저해활성을 조사할 때, 비스피리백-소디움과 피리티오백-소디움은 100배 농도의 수용액을 제조하여 반응액 중에 첨가하였다. 수용성이 낮은 피리미노백(pyriminobac), 클로르설퍼론(chlorsulfuron), 벤설퍼론-메틸(bensulfuron-methyl), 이마자퀸(imazaquin) 및 이마자피르(imazapyr)는 100배 농도의 아세톤 용액을 제조하여 반응액 중에 가하였다.
실시예 9: G95A 변이형 ALS의 약제 감수성
발현된 G95A 변이형 ALS에 대한 각종 ALS 저해제의 저해활성을 조사한 결과, 비스피리백-소디움, 피리티오백-소디움 및 피리미노백의 저해활성은 극히 약하였으나(100uM로 50%이하의 저해활성), 클로르설퍼론의 저해활성은 강하였고, 또한, 벤설퍼론-메틸, 이마자퀸 및 이마자피르도 저해활성을 나타냄을 알 수 있었다(참조: 표 4).
G95A 변이형 ALS의 약제 감수성
BS PS PM CS BM IQ IP
1회차 17.9% 12.1% 22.9% 0.0023 0.268 1.653 46.041
2회차 16.8% 12.8% 23.3% 0.0030 0.294 1.886 44.612
3회차 18.4% 18.1% 29.2% 0.0027 0.271 1.848 49.705
4회차 - - - 0.0028 - - -
5회차 - - - 0.0021 - - -
6회차 - - - 0.0019 - - -
평균 17.7% 14.3% 25.1% 0.0025 0.278 1.80 46.8
SE 0.47% 1.9% 2.0% 0.0002 0.008 0.07 1.52
BS, 비스피리백-소디움; PS, 피리티오백-소디움; PM, 피리미노백
CS, 클로르설퍼론; BM, 벤설퍼론-메틸; IQ, 이마자퀸; IP, 이마자피르
표 4에서 단위가 없는 수치는 모두 저해 50% 농도에서 단위가 uM, 단위가 %인 것은 100uM로 저해%를 나타내고, SE는 표준오차이다.
여기서, G95A 변이형 ALS에 대한 각 약제의 저해 50% 농도와 야생형 ALS(GST 융합 야생형 ALS)에 대한 저해 50% 농도를 비교하여, 야생형 ALS에 대한 저해 50% 농도를 기준으로 한 G95A 변이형 ALS의 약제 저항성 비(RS비)를 계산한 결과, 비스피리백-소디움, 피리티오백-소디움 및 피리노백의 RS비는 각각 16,000배 이상, 9,100배 이상, 13,000배 이상이었으나, 클로르설퍼론, 벤설퍼론-메틸, 이마자퀸 및 이마자피르의 RS비는 0.19, 40, 0.82, 4.9였으며, G95A 변이형 ALS은 PC계 제초제에 대해 특이적으로 강한 저항성을 나타내는 것으로 판명되었다(참조: 표 5 및 도 5). 또한, 도 5에서 BS는 비스피리백-소디움이며, PS는 피리티오백-소디움, PM은 피리미노백, CS는 클로르설퍼론, BM은 벤설퍼론-메틸, IQ는 이마자퀸, IP는 이마자피르이다.
G95A 변이형 ALS의 약제 저항성 비
약제 저해 50% 농도 (uM) 저항성 비 (RS 비)
야생형 G95A 변이형
비스피리백-소디움 0.0063 >100 >16000
피리티오백-소디움 0.011 >100 >9100
피리미노백 0.0080 >100 >13000
클로르설퍼론 0.013 0.0025 0.19
벤설퍼론-메틸 0.0070 0.28 40
이마자퀸 2.2 1.8 0.82
이마자피르 9.6 47 4.9
이상에서 상세히 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면, PC계 제초제에 대해 극히 높은 저항성을 나타내는 변이형 아세토락테이트 합성효소를 선별마커로 이용하여, 고효율의 형질전환방법을 제공할 수 있다.
<110> KUMIAI CHEMICAL INDUSTRY CO., LTD TOHOKU UNIVERSITY <120> A gene encoding a novel aceto lactate synthetase <130> FP0715/H&A/JP <150> JP2005-136186 <151> 2005-05-09 <160> 38 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1932 <212> DNA <213> Oryza sativa <220> <221> CDS <222> (1)..(1932) <400> 1 atg gct acg acc gcc gcg gcc gcg gcc gcc gcc ctg tcc gcc gcc gcg 48 Met Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ser Ala Ala Ala 1 5 10 15 acg gcc aag acc ggc cgt aag aac cac cag cga cac cac gtc ctt ccc 96 Thr Ala Lys Thr Gly Arg Lys Asn His Gln Arg His His Val Leu Pro 20 25 30 gct cga ggc cgg gtg ggg gcg gcg gcg gtc agg tgc tcg gcg gtg tcc 144 Ala Arg Gly Arg Val Gly Ala Ala Ala Val Arg Cys Ser Ala Val Ser 35 40 45 ccg gtc acc ccg ccg tcc ccg gcg ccg ccg gcc acg ccg ctc cgg ccg 192 Pro Val Thr Pro Pro Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro 50 55 60 tgg ggg ccg gcc gag ccc cgc aag ggc gcg gac atc ctc gtg gag gcg 240 Trp Gly Pro Ala Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala 65 70 75 80 ctg gag cgg tgc ggc gtc agc gac gtg ttc gcc tac ccg ggc gcc gcg 288 Leu Glu Arg Cys Gly Val Ser Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Ala Ala 85 90 95 tcc atg gag atc cac cag gcg ctg acg cgc tcc ccg gtc atc acc aac 336 Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn 100 105 110 cac ctc ttc cgc cac gag cag ggc gag gcg ttc gcg gcg tcc ggg tac 384 His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr 115 120 125 gcg cgc gcg tcc ggc cgc gtc ggg gtc tgc gtc gcc acc tcc ggc ccc 432 Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro 130 135 140 ggg gca acc aac ctc gtg tcc gcg ctc gcc gac gcg ctg ctc gac tcc 480 Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser 145 150 155 160 gtc ccg atg gtc gcc atc acg ggc cag gtc ccc cgc cgc atg atc ggc 528 Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly 165 170 175 acc gac gcc ttc cag gag acg ccc ata gtc gag gtc acc cgc tcc atc 576 Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile 180 185 190 acc aag cac aat tac ctt gtc ctt gat gtg gag gac atc ccc cgc gtc 624 Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val 195 200 205 ata cag gaa gcc ttc ttc ctc gcg tcc tcg ggc cgt cct ggc ccg gtg 672 Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val 210 215 220 ctg gtc gac atc ccc aag gac atc cag cag cag atg gcc gtg ccg gtc 720 Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val 225 230 235 240 tgg gac acc tcg atg aat cta cca ggg tac atc gca cgc ctg ccc aag 768 Trp Asp Thr Ser Met Asn Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys 245 250 255 cca ccc gcg aca gaa ttg ctt gag cag gtc ttg cgt ctg gtt ggc gag 816 Pro Pro Ala Thr Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu 260 265 270 tca cgg cgc ccg att ctc tat gtc ggt ggt ggc tgc tct gca tct ggt 864 Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Ala Ser Gly 275 280 285 gac gaa ttg cgc tgg ttt gtt gag ctg act ggt atc cca gtt aca acc 912 Asp Glu Leu Arg Trp Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val 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ggc 1920 Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Met Ile Leu Asp Gly Asp Gly 625 630 635 640 agg act gtg tat 1932 Arg Thr Val Tyr <210> 2 <211> 644 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 2 Met Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ser Ala Ala Ala 1 5 10 15 Thr Ala Lys Thr Gly Arg Lys Asn His Gln Arg His His Val Leu Pro 20 25 30 Ala Arg Gly Arg Val Gly Ala Ala Ala Val Arg Cys Ser Ala Val Ser 35 40 45 Pro Val Thr Pro Pro Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr Pro Leu Arg Pro 50 55 60 Trp Gly Pro Ala Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala 65 70 75 80 Leu Glu Arg Cys Gly Val Ser Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Ala Ala 85 90 95 Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Pro Val Ile Thr Asn 100 105 110 His Leu Phe Arg His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr 115 120 125 Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro 130 135 140 Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser 145 150 155 160 Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly 165 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380 Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Leu Leu 385 390 395 400 Gln Gln Ser Thr Thr Lys Thr Ser Ser Asp Phe Ser Ala Trp His Asn 405 410 415 Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe 420 425 430 Gly Glu Glu Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu 435 440 445 Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met 450 455 460 Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser 465 470 475 480 Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly 485 490 495 Ala Ser Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp 500 505 510 Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu 515 520 525 Asn Leu Pro Val Lys Val Met Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met 530 535 540 Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr 545 550 555 560 Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Cys Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val 565 570 575 Thr Ile Ala Lys Gly Phe Asn Ile Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Lys 580 585 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Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser 145 150 155 160 Val Pro Met Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly 165 170 175 Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile 180 185 190 Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val 195 200 205 Ile Gln Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val 210 215 220 Leu Val Asp Ile Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val 225 230 235 240 Trp Asp Thr Ser Met Asn Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys 245 250 255 Pro Pro Ala Thr Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu 260 265 270 Ser Arg Arg Pro Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Ala Ser Gly 275 280 285 Asp Glu Leu Arg Trp Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr 290 295 300 Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu 305 310 315 320 Arg Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp 325 330 335 Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val 340 345 350 Thr Gly Lys Ile Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile 355 360 365 Asp Ile Asp Pro Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser 370 375 380 Ile Cys Ala Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Leu Leu 385 390 395 400 Gln Gln Ser Thr Thr Lys Thr Ser Ser Asp Phe Ser Ala Trp His Asn 405 410 415 Glu Leu Asp Gln Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe 420 425 430 Gly Glu Glu Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu 435 440 445 Thr Lys Gly Glu Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met 450 455 460 Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Trp Leu Ser 465 470 475 480 Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly 485 490 495 Ala Ser Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp 500 505 510 Gly Ser Phe Leu Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu 515 520 525 Asn Leu Pro Val Lys Val Met Val Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met 530 535 540 Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr 545 550 555 560 Tyr Leu Gly Asn Pro Glu 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220 Ile Ser Glu Ser Lys Arg Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Ser Leu 225 230 235 240 Asn Ser Ser Glu Glu Leu Gly Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro 245 250 255 Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ser Tyr Pro Cys Asn Asp Glu 260 265 270 Leu Ser Leu Gln Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr 275 280 285 Ala Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp 290 295 300 Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile 305 310 315 320 Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Thr Pro 325 330 335 His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn 340 345 350 Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu Glu Leu Lys Leu Asp Phe Gly Val 355 360 365 Trp Arg Ser Glu Leu Ser Glu Gln Lys Gln Lys Phe Pro Leu Ser Phe 370 375 380 Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Ile Leu 385 390 395 400 Asp Glu Leu Thr Glu Gly Lys Ala Ile Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln 405 410 415 His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr Lys Tyr Arg Lys Pro Arg Gln 420 425 430 Trp Leu Ser Ser Ser Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala 435 440 445 Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Asp Ala Ile Val Val Asp Ile 450 455 460 Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile 465 470 475 480 Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Leu Leu Leu Asn Asn Gln His 485 490 495 Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg 500 505 510 Ala His Thr Tyr Leu Gly Asp Pro Ala Arg Glu Asn Glu Ile Phe Pro 515 520 525 Asn Met Leu Gln Phe Ala Gly Ala Cys Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val 530 535 540 Thr Lys Lys Glu Glu Leu Arg Glu Ala Ile Gln Thr Met Leu Asp Thr 545 550 555 560 Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Cys Pro His Gln Glu His Val 565 570 575 Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr Phe Lys Asp Val Ile Thr Glu 580 585 590 Gly Asp Gly Arg Thr Lys Tyr 595 <210> 12 <211> 667 <212> PRT <213> Nicotiana tabacum <400> 12 Met Ala Ala Ala Ala Pro Ser Pro Ser Ser Ser Ala Phe Ser Lys Thr 1 5 10 15 Leu Ser Pro Ser Ser Ser Thr Ser Ser Thr Leu Leu Pro Arg Ser Thr 20 25 30 Phe Pro Phe Pro His His Pro His Lys Thr Thr Pro Pro Pro Leu His 35 40 45 Leu Thr His Thr His Ile His Ile His Ser Gln Arg Arg Arg Phe Thr 50 55 60 Ile Ser Asn Val Ile Ser Thr Asn Gln Lys Val Ser Gln Thr Glu Lys 65 70 75 80 Thr Glu Thr Phe Val Ser Arg Phe Ala Pro Asp Glu Pro Arg Lys Gly 85 90 95 Ser Asp Val Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val 100 105 110 Phe Ala Tyr Pro Gly Ala Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr 115 120 125 Arg Ser Ser Ile Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly 130 135 140 Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Thr Gly Phe Pro Gly Val 145 150 155 160 Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu 165 170 175 Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Ile Val Ala Ile Thr Gly Gln 180 185 190 Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile 195 200 205 Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met Asp 210 215 220 Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Val Arg Glu Ala Phe Phe Leu Ala Arg 225 230 235 240 Ser Gly Arg Pro Gly Pro Ile Leu Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln 245 250 255 Gln Gln Leu Val Ile Pro Asp Trp Asp Gln Pro Met Arg Leu Pro Gly 260 265 270 Tyr Met Ser Arg Leu Pro Lys Leu Pro Asn Glu Met Leu Leu Glu Gln 275 280 285 Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly 290 295 300 Gly Gly Cys Ser Gln Ser Ser Glu Asp Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu 305 310 315 320 Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro 325 330 335 Thr Gly Asp Glu Leu Ser Leu Ser Met Leu Gly Met His Gly Thr Val 340 345 350 Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Ser Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly 355 360 365 Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser 370 375 380 Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys 385 390 395 400 Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp Ile Lys Leu Ala Leu 405 410 415 Gln Gly Leu Asn Ser Ile Leu Glu Ser Lys Glu Gly Lys Leu Lys Leu 420 425 430 Asp Phe Ser Ala Trp Arg Gln Glu Leu Thr Glu Gln Lys Val Lys His 435 440 445 Pro Leu Asn Phe Lys Thr Phe Gly Asp Ala Ile Pro Pro Gln Tyr Ala 450 455 460 Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Asn Gly Asn Ala Ile Ile Ser Thr 465 470 475 480 Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Tyr Tyr Lys Tyr Arg 485 490 495 Lys Pro Arg Gln Trp Leu Thr Ser Gly Gly Leu Gly Ala Met Gly Phe 500 505 510 Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ala Val Gly Arg Pro Asp Glu Val 515 520 525 Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn Val Gln Glu 530 535 540 Leu Ala Thr Ile Lys Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Ile Met Leu Leu 545 550 555 560 Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp Glu Asp Arg Phe Tyr 565 570 575 Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Ser Asn Glu Ala 580 585 590 Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Lys Phe Ala Glu Ala Cys Gly Val Pro 595 600 605 Ala Ala Arg Val Thr His Arg Asp Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Lys 610 615 620 Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His 625 630 635 640 Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp 645 650 655 Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Ser Ser Tyr 660 665 <210> 13 <211> 664 <212> PRT <213> Nicotiana tabacum <400> 13 Met Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ser Pro Ser Phe Ser Lys Thr Leu 1 5 10 15 Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ser Ser Thr Leu Leu Pro Arg Ser Thr Phe 20 25 30 Pro Phe Pro His His Pro His Lys Thr Thr Pro Pro Pro Leu His Leu 35 40 45 Thr Pro Thr His Ile His Ser Gln Arg Arg Arg Phe Thr Ile Ser Asn 50 55 60 Val Ile Ser Thr Thr Gln Lys Val Ser Glu Thr Gln Lys Ala Glu Thr 65 70 75 80 Phe Val Ser Arg Phe Ala Pro Asp Glu Pro Arg Lys Gly Ser Asp Val 85 90 95 Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Glu Gly Val Thr Asp Val Phe Ala Tyr 100 105 110 Pro Gly Ala Ala Ser Met Glu Ile His Gln Ala Leu Thr Arg Ser Ser 115 120 125 Ile Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu Gln Gly Gly Val Phe Ala 130 135 140 Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ala Thr Gly Phe Pro Gly Val Cys Ile Ala 145 150 155 160 Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val Ser Gly Leu Ala Asp Ala 165 170 175 Leu Leu Asp Ser Val Pro Ile Val Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg 180 185 190 Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val 195 200 205 Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu Val Met Asp Val Glu Asp 210 215 220 Ile Pro Arg Val Val Arg Glu Ala Phe Phe Leu Ala Arg Ser Gly Arg 225 230 235 240 Pro Gly Pro Val Leu Ile Asp Val Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Leu 245 250 255 Val Ile Pro Asp Trp Asp Gln Pro Met Arg Leu Pro Gly Tyr Met Ser 260 265 270 Arg Leu Pro Lys Leu Pro Asn Glu Met Leu Leu Glu Gln Ile Val Arg 275 280 285 Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys 290 295 300 Ser Gln Ser Ser Glu Glu Leu Arg Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile 305 310 315 320 Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly Ala Phe Pro Thr Gly Asp 325 330 335 Glu Leu Ser Leu Ser Met Leu Gly Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn 340 345 350 Tyr Ala Val Asp Ser Ser Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe 355 360 365 Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ala Lys 370 375 380 Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln 385 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600 605 Val Thr His Arg Asp Asp Leu Arg Ala Ala Ile Gln Lys Met Leu Asp 610 615 620 Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile Val Pro His Gln Glu His 625 630 635 640 Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Ala Phe Lys Asp Val Ile Thr 645 650 655 Glu Gly Asp Gly Arg Ser Ser Tyr 660 <210> 14 <211> 640 <212> PRT <213> Lolium multiflorum <400> 14 Met Ala Thr Ala Thr Ser Thr Ala Val Ala Phe Ser Gly Ala Thr Ala 1 5 10 15 Thr Leu Pro Lys Pro Arg Thr Leu Pro Arg His Leu Leu Pro Ser Ser 20 25 30 Arg Arg Ala Leu Ala Ala Pro Ile Arg Cys Ser Ala Val Ser Pro Ser 35 40 45 Pro Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr Ala Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ser 50 55 60 Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys 65 70 75 80 Gly Ile Ser Asp Val Phe Ala Tyr Pro Gly Ala Ala Ser Met Glu Ile 85 90 95 His Gln Ala Leu Thr Ser Ser Pro Leu Ile Thr Asn His Leu Phe Arg 100 105 110 His Glu Gln Gly Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser 115 120 125 Gly Arg Val Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn 130 135 140 Leu Val Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Ile Pro Met Val 145 150 155 160 Ala Ile Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe 165 170 175 Gln Glu Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn 180 185 190 Tyr Leu Val Leu Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Val Ile Gln Glu Ala 195 200 205 Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Ile 210 215 220 Pro Lys Asp Ile Gln Gln Gln Met Ala Val Pro Val Trp Asp Ala Pro 225 230 235 240 Met Ser Leu Pro Gly Tyr Ile Ala Arg Leu Pro Lys Pro Pro Ala Thr 245 250 255 Glu Leu Leu Glu Gln Val Leu Arg Leu Val Gly Glu Glu Arg Arg Pro 260 265 270 Ile Leu Tyr Val Gly Gly Gly Cys Ser Ala Ser Gly Glu Asp Val Arg 275 280 285 Arg Phe Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly 290 295 300 Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu Gly 305 310 315 320 Met His Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Asp Lys Ala Asp Leu 325 330 335 Leu Leu Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Ile 340 345 350 Glu Ala Phe Ala Ser Arg Ser Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Pro 355 360 365 Ala Glu Ile Gly Lys Asn Lys Gln Pro His Val Ser Ile Cys Ala Asp 370 375 380 Val Lys Leu Ala Leu Gln Gly Leu Asn Ala Val Leu Thr Gly Ser Lys 385 390 395 400 Cys Asp Lys Ser Phe Asp Phe Ala Ser Trp His Asp Glu Leu Glu Gln 405 410 415 Gln Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile 420 425 430 Pro Pro Gln Tyr Ala Ile Gln Val Leu Asp Glu Leu Thr Lys Gly Glu 435 440 445 Ala Ile Ile Ala Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln 450 455 460 Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gln Val Leu Ser Ser Ala Gly Leu 465 470 475 480 Gly Ala Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala Gly Thr Ala Val Ala 485 490 495 Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Leu 500 505 510 Met Asn Ile Gln Glu Leu Ala Leu Ile Arg Ile Glu Asn Leu Pro Val 515 520 525 Lys Val Met Ile Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Val Gln Trp 530 535 540 Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn 545 550 555 560 Pro Glu Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Pro Asp Phe Val Thr Ile Ala Lys 565 570 575 Gly Phe Asn Val Pro Ala Val Arg Val Thr Lys Arg Ser Glu Val Arg 580 585 590 Ala Ala Ile Lys Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp 595 600 605 Ile Ile Val Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly 610 615 620 Gly Ala Phe Lys Asp Ile Ile Met Glu Gly Asp Gly Arg Ile Ser Tyr 625 630 635 640 <210> 15 <211> 670 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 15 Met Ala Ala Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ile Ser Phe 1 5 10 15 Ser Thr Lys Pro Ser Pro Ser Ser Ser Lys Ser Pro Leu Pro Ile Ser 20 25 30 Arg Phe Ser Leu Pro Phe Ser Leu Asn Pro Asn Lys Ser Ser Ser Ser 35 40 45 Ser Arg Arg Arg Gly Ile Lys Ser Ser Ser Pro Ser Ser Ile Ser Ala 50 55 60 Val Leu Asn Thr Thr Thr Asn Val Thr Thr Thr Pro Ser Pro Thr Lys 65 70 75 80 Pro Thr Lys Pro Glu Thr Phe Ile Ser Arg Phe Ala Pro Asp Gln Pro 85 90 95 Arg Lys Gly Ala Asp Ile Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Gln Gly Val 100 105 110 Glu Thr Val Phe Ala Tyr Pro Gly Ala Ala Ser Met Glu Ile His Gln 115 120 125 Ala Leu Thr Arg Ser Ser Ser Ile Arg Asn Val Leu Pro Arg His Glu 130 135 140 Gln Gly Gly Val Phe Ala Ala Glu Gly Tyr Ala Arg Ser Ser Gly Lys 145 150 155 160 Pro Gly Ile Cys Ile Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val 165 170 175 Ser Gly Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Leu Val Ala Ile 180 185 190 Thr Gly Gln Val Pro Arg Arg Met Ile Gly Thr Asp Ala Phe Gln Glu 195 200 205 Thr Pro Ile Val Glu Val Thr Arg Ser Ile Thr Lys His Asn Tyr Leu 210 215 220 Val Met Asp Val Glu Asp Ile Pro Arg Ile Ile Glu Glu Ala Phe Phe 225 230 235 240 Leu Ala Thr Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val Asp Val Pro Lys 245 250 255 Asp Ile Gln Gln Gln Leu Ala Ile Pro Asn Trp Glu Gln Ala Met Arg 260 265 270 Leu Pro Gly Tyr Met Ser Arg Met Pro Lys Pro Pro Glu Asp Ser His 275 280 285 Leu Glu Gln Ile Val Arg Leu Ile Ser Glu Ser Lys Lys Pro Val Leu 290 295 300 Tyr Val Gly Gly Gly Cys Leu Asn Ser Ser Asp Glu Leu Gly Arg Phe 305 310 315 320 Val Glu Leu Thr Gly Ile Pro Val Ala Ser Thr Leu Met Gly Leu Gly 325 330 335 Ser Tyr Pro Cys Asp Asp Glu Leu Ser Leu His Met Leu Gly Met His 340 345 350 Gly Thr Val Tyr Ala Asn Tyr Ala Val Glu His Ser Asp Leu Leu Leu 355 360 365 Ala Phe Gly Val Arg Phe Asp Asp Arg Val Thr Gly Lys Leu Glu Ala 370 375 380 Phe Ala Ser Arg Ala Lys Ile Val His Ile Asp Ile Asp Ser Ala Glu 385 390 395 400 Ile Gly Lys Asn Lys Thr Pro His Val Ser Val Cys Gly Asp Val Lys 405 410 415 Leu Ala Leu Gln Gly Met Asn Lys Val Leu Glu Asn Arg Ala Glu Glu 420 425 430 Leu Lys Leu Asp Phe Gly Val Trp Arg Asn Glu Leu Asn Val Gln Lys 435 440 445 Gln Lys Phe Pro Leu Ser Phe Lys Thr Phe Gly Glu Ala Ile Pro Pro 450 455 460 Gln Tyr Ala Ile Lys Val Leu Asp Glu Leu Thr Asp Gly Lys Ala Ile 465 470 475 480 Ile Ser Thr Gly Val Gly Gln His Gln Met Trp Ala Ala Gln Phe Tyr 485 490 495 Asn Tyr Lys Lys Pro Arg Gln Trp Leu Ser Ser Gly Gly Leu Gly Ala 500 505 510 Met Gly Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ile Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro 515 520 525 Asp Ala Ile Val Val Asp Ile Asp Gly Asp Gly Ser Phe Ile Met Asn 530 535 540 Val Gln Glu Leu Ala Thr Ile Arg Val Glu Asn Leu Pro Val Lys Val 545 550 555 560 Leu Leu Leu Asn Asn Gln His Leu Gly Met Val Met Gln Trp Glu Asp 565 570 575 Arg Phe Tyr Lys Ala Asn Arg Ala His Thr Phe Leu Gly Asp Pro Ala 580 585 590 Gln Glu Asp Glu Ile Phe Pro Asn Met Leu Leu Phe Ala Ala Ala Cys 595 600 605 Gly Ile Pro Ala Ala Arg Val Thr Lys Lys Ala Asp Leu Arg Glu Ala 610 615 620 Ile Gln Thr Met Leu Asp Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Val Ile 625 630 635 640 Cys Pro His Gln Glu His Val Leu Pro Met Ile Pro Ser Gly Gly Thr 645 650 655 Phe Asn Asp Val Ile Thr Glu Gly Asp Gly Arg Ile Lys Tyr 660 665 670 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 16 ccaccaccca ccatggctac g 21 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 17 gaagaggtgg ttggtgatga 20 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 18 gcaaccaacc tcgtgtccgc 20 <210> 19 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 19 gaaggcttcc tgtatgacgc 20 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 20 gaattgcgct ggtttgttga 20 <210> 21 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 21 ctcaattttc cctgtcacac g 21 <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 22 ggtagcttcc tcatgaacat 20 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 23 aatgttcatg aggaagctac 20 <210> 24 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 24 cattcaggtc aaacataggc c 21 <210> 25 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 25 tacccgggcn nngcgtccat ggagatcca 29 <210> 26 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 26 tgtgcttggt gatgga 16 <210> 27 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 27 gggctggcaa gccacgtttg gtg 23 <210> 28 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 28 cagcgacgtg ttcgccta 18 <210> 29 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 29 ccccagccgc atgatcggca ccgacgcctt 30 <210> 30 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 30 ctgggacacc tcgatgaat 19 <210> 31 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 31 aactgggata ccagtcagct c 21 <210> 32 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 32 gctctgctac aacagagcac a 21 <210> 33 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 33 gattgcctca cctttcg 17 <210> 34 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 34 cagcccaaat cccattg 17 <210> 35 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 35 aggtgtcaca gttgttg 17 <210> 36 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 36 tcaaggacat gatcctggat gg 22 <210> 37 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 37 agtcctgcca tcaccatcca g 21 <210> 38 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic DNA <400> 38 ccgggagctg catgtgtcag agg 23

Claims (5)

  1. 목적 유전자와, 벼 유래의 야생형 아세토락테이트 합성효소의 아미노산 서열에서 95번째에 해당하는 글리신이 알라닌으로 변이된 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 사용하여 숙주세포를 형질전환하는 공정; 및,
    상기 공정에서 수득한 형질전환 세포를 피리미디닐 카복시계 제초제 존재 하에서 배양하는 공정을 포함하고,
    이때 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 선별마커로 사용하는 것을 특징으로 하는 형질전환방법.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자는
    (a) 서열번호 2로 기재된 아미노산 서열로 구성된 단백질; 또는,
    (b) 서열번호 2로 기재된 아미노산 서열에서 95번째 알라닌을 제외하고, 적어도 1개 이상의 아미노산이 치환, 결실, 또는 부가된 아미노산 서열로 구성되고, 피리미디닐 카복시계 제초제에 대한 저항성을 가지며, 아세토락테이트 합성효소 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 유전자인 것을 특징으로 하는
    형질전환방법.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 숙주세포는 식물세포인 것을 특징으로 하는
    형질전환방법.
  4. 목적 유전자와, 벼 유래의 야생형 아세토락테이트 합성효소의 아미노산 서열에서 95번째에 해당하는 글리신이 알라닌으로 치환된 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 사용하여 식물세포를 형질전환하는 공정: 및,
    상기 공정에서 수득한 형질전환 식물을 피리미디닐 카복시계 제초제 존재하에서 육성하는 공정을 포함하고,
    이때 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자를 선별마커로 사용하는 것을 특징으로 하는 식물육성방법.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 변이형 아세토락테이트 합성효소를 암호화하는 유전자는
    (a) 서열번호 2로 기재된 아미노산 서열로 구성된 단백질; 또는,
    (b) 서열번호 2로 기재된 아미노산 서열에서 95번째 알라닌을 제외하고, 적어도 1개 이상의 아미노산이 치환, 결실, 또는 부가된 아미노산 서열로 구성되고, 피리미디닐 카복시계 제초제에 대한 저항성을 가지며, 아세토락테이트 합성효소 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 유전자인 것을 특징으로 하는
    식물육성방법.
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Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2010046043A (ja) * 2008-08-25 2010-03-04 Kumiai Chem Ind Co Ltd 形質転換植物及びその製造方法、並びにユビキノン１０の製造方法
HUE033056T2 (hu) 2010-03-08 2017-11-28 Monsanto Technology Llc Polinukleotid molekulák génszabályozáshoz növényekben
US10829828B2 (en) 2011-09-13 2020-11-10 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US10760086B2 (en) 2011-09-13 2020-09-01 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
US10806146B2 (en) 2011-09-13 2020-10-20 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
CA2848689A1 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control targeting pds
UY34822A (es) 2012-05-24 2013-12-31 Seeds Ltd Ab Composiciones y métodos para silenciar la expresión genética
US10683505B2 (en) 2013-01-01 2020-06-16 Monsanto Technology Llc Methods of introducing dsRNA to plant seeds for modulating gene expression
US10609930B2 (en) 2013-03-13 2020-04-07 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
CN105263329B (zh) 2013-03-13 2020-09-18 孟山都技术公司 用于杂草控制的方法和组合物
US10568328B2 (en) 2013-03-15 2020-02-25 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for weed control
EP3608412A3 (en) 2013-07-19 2020-04-08 Monsanto Technology LLC Compositions and methods for controlling leptinotarsa
CA2929533C (en) 2013-11-04 2023-06-06 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling arthropod parasite and pest infestations
UA119253C2 (uk) 2013-12-10 2019-05-27 Біолоджикс, Інк. Спосіб боротьби із вірусом у кліща varroa та у бджіл
CN105979770B (zh) 2014-01-15 2019-07-05 孟山都技术公司 用于使用epsps多核苷酸的杂草控制的方法和组合物
WO2015200223A1 (en) 2014-06-23 2015-12-30 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for regulating gene expression via rna interference
US11807857B2 (en) 2014-06-25 2023-11-07 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for delivering nucleic acids to plant cells and regulating gene expression
RU2754955C2 (ru) 2014-07-29 2021-09-08 Монсанто Текнолоджи Ллс Композиции и способы борьбы с насекомыми-вредителями
MX2017009521A (es) 2015-01-22 2018-11-09 Monsanto Technology Llc Composiciones y métodos para controlar leptinotarsa.
US10883103B2 (en) 2015-06-02 2021-01-05 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for delivery of a polynucleotide into a plant
AU2016270913A1 (en) 2015-06-03 2018-01-04 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for introducing nucleic acids into plants
WO2018144180A1 (en) 2017-01-31 2018-08-09 Ricetec, Inc. Effects of a plurality of mutations to improve herbicide resistance/tolerance in rice
CN110317772B (zh) * 2019-07-24 2021-04-13 上海市农业科学院 一种大麦小孢子的取材方法
US10894812B1 (en) 2020-09-30 2021-01-19 Alpine Roads, Inc. Recombinant milk proteins
CA3191387A1 (en) 2020-09-30 2022-04-07 Nobell Foods, Inc. Recombinant milk proteins and food compositions comprising the same
US10947552B1 (en) 2020-09-30 2021-03-16 Alpine Roads, Inc. Recombinant fusion proteins for producing milk proteins in plants

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5013659A (en) * 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
IL83348A (en) 1986-08-26 1995-12-08 Du Pont Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
TW208716B (ko) 1990-12-27 1993-07-01 American Cyanamid Co
US5731180A (en) 1991-07-31 1998-03-24 American Cyanamid Company Imidazolinone resistant AHAS mutants
US5633437A (en) 1994-10-11 1997-05-27 Sandoz Ltd. Gene exhibiting resistance to acetolactate synthase inhibitor herbicides
EP0821729B1 (en) 1995-04-20 2006-10-18 Basf Aktiengesellschaft Structure-based designed herbicide resistant products
CN1037524C (zh) * 1995-08-29 1998-02-25 中国科学院化工冶金研究所 一种制备、分离与纯化乙酰乳酸合成酶的方法
WO1997008327A1 (fr) 1995-08-30 1997-03-06 Nissan Chemical Industries, Ltd. Gene de l'acetolactate synthase resistant aux herbicides
ES2222745T3 (es) 1998-11-05 2005-02-01 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Arroz resistente a herbicidas.
EP1280928B1 (en) * 2000-05-10 2016-11-30 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Resistance to acetohydroxyacid synthase-inhibiting herbicides
AU2002214303B2 (en) * 2000-11-29 2007-11-01 Kumiai Chemical Industry Co., Ltd. Gene encoding acetolactic acid synthase gene
WO2003083118A1 (fr) 2002-03-29 2003-10-09 Kumiai Chemical Industry Co., Ltd. Genes codant l'acetolactase synthase
ES2379553T3 (es) * 2003-08-29 2012-04-27 Instituto Nacional De Tecnologia Agropecuaria Plantas de arroz que tienen tolerancia aumentada a herbicidas de imidazolinona

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