KR20080017094A - 간 섬유증을 치료하기 위한 항-ＭＡｄＣＡＭ 항체 및항섬유성 캐스파아제 억제제의 신규한 조합물 - Google Patents

간 섬유증을 치료하기 위한 항-ＭＡｄＣＡＭ 항체 및항섬유성 캐스파아제 억제제의 신규한 조합물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 항-MAdCAM 항체와 항섬유성 제제, 예컨대, 프로테아제 억제제, 바람직하게는 캐스파아제 억제제의 신규한 조합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 본 발명의 조합물을 포함하는 제약 조성물, 및 상기 조합물의 간 섬유증의 치료를 위한 용도에 관한 것이다.
MAdCAM, 항섬유성 제제, 캐스파아제 억제제, 간 섬유증, 간염

Description

간 섬유증을 치료하기 위한 항-ＭＡｄＣＡＭ 항체 및 항섬유성 캐스파아제 억제제의 신규한 조합물{NEW COMBINATION OF ANTI-MADCAM ANTIBODY AND ANTIFIBROTIC CASPASE INHIBITOR TO TREAT LIVER FIBROSIS}
본 발명은 항-MAdCAM 항체와 항섬유성 제제, 예컨대, 프로테아제 억제제, 바람직하게는 캐스파아제 억제제의 신규한 조합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 본 발명의 조합물을 포함하는 제약 조성물, 및 상기 조합물의 간 섬유증의 치료를 위한 용도에 관한 것이다.
만성 간 질환은 연간 140만명의 사망의 원인이고 (WHO, 세계 보건 보고서 2004), 미국에서는 질환 관련 사망의 상위 요인 10위 안에 포함된다 (CDC, 국립 보건 통계 센터, 2004). 지속적인 간 염증의 결과인 간 섬유증은 관리하지 않고 방치하면 환자의 이환률 및 사망률에 심각한 장기적 결과를 나타낸다.
간 섬유증은 간이 손상되었을 때 일어나는 과정 중 하나이다. 이러한 손상은 예를 들어, 바이러스 활동 (예를 들어, 만성 B 또는 C형 간염) 또는 다른 간 감염 (예를 들어, 기생충, 박테리아); 화학물질 (예를 들어, 약제, 유흥성 약물, 과다한 알콜, 오염물질에 대한 노출); 면역 과정 (예를 들어, 자가면역성 간염); 대사 장애 (예를 들어, 지질, 글리코겐 또는 금속 저장 장애); 또는 암 성장 (1차 또 는 2차 간암)의 결과일 수 있다. 섬유증은 간 손상의 신호이며, 간의 진행성 경과를 통해 간 부전에 잠재적으로 기여한다.
심각하게 충족되지 않은 의학적 요구가 존재한다. 본 발명은 항-점막성 어드레신 세포 부착 분자 (MAdCAM) 항체와 항섬유성 제제, 바람직하게는 프로테아제 억제제, 더욱 바람직하게는 캐스파아제 억제제의 조합물에 관한 것이며, 이는 간 섬유증의 치료에 유익하다.
점막성 어드레신 세포 부착 분자 (MAdCAM)는 면역글로불린 수퍼패밀리의 세포 부착 수용체의 구성원이다. 이는 림프구 표면 위의 인테그린 분자와 상호작용함으로써, 필요할 때 림프구를 조직으로 동원하는 데에 관여하는 부착 분자의 하나이다.
MAdCAM의 인테그린 결합 파트너인 α4β7에 대한 MAdCAM의 결합을 억제하는 항체, 예를 들어, 항-MAdCAM 항체 (예를 들어, MECA-367; US 5,403,919, US 5,538,724) 또는 항-α4β7 항체 (예를 들어, Act-1; US 6,551,593)는 염증이 있는 장 내로의 백혈구 유출을 억제할 수 있고, 따라서, 염증성 장 질환 (IBD)의 치료에 유익할 수 있다는 것이 제시되었다.
<발명의 요약>
본 발명의 한 국면은 항-MAdCAM 항체 또는 그의 항원 결합 부분과 항섬유성 제제의 조합물이다. 바람직하게는, 항섬유성 제제는 프로테아제 억제제이고, 더욱 바람직하게는 캐스파아제 억제제이며, 더욱더 바람직하게는, 캐스파아제 억제제는 하기 화학식 I의 화합물이다.
Figure 112008002233619-PCT00001
A, B, R1 및 R2는 하기 정의되는 바와 같다.
바람직하게는, 화학식 I의 화합물은
(3S)-3-[N-(N'-(2-플루오로-4-요오도페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-클로로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-브로모페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-플루오로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-안트릴)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테 트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-{2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,6-디플루오로페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(4-메톡시페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-벤질페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산; 및
(3S)-3-[N-(N'-(2-페닐페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산
으로부터 선택된다.
더욱더 바람직하게는, 상기 화합물은 (3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산이다.
본 발명의 한 국면에서, 조합물 중 항-MAdCAM 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 MAdCAM에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분이다. 바람직하게는, 상기 항체 또는 부분은 인간 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 다. 바람직하게는, 상기 항체 또는 부분은
(a) 인간 세포에 결합하는 특성;
(b) VCAM 또는 피브로넥틴에 비하여 MAdCAM에 대한 선택성이 100배 이상인 특성;
(c) 인간 MAdCAM에 3 × 10-10 M 이하의 Kd로 결합하는 특성;
(d) 인간 MAdCAM에 대한 α4β7 발현 세포의 결합을 억제하는 특성; 및
(e) 림프구의 위장관 림프 조직으로의 동원을 억제하는 특성
중 하나 이상을 갖는다.
바람직하게는, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 α4β7에 대한 인간 MAdCAM의 결합을 억제하고,
(a) MAdCAM에 대한 결합에 대하여 기준 항체와 교차 경쟁하는 특성;
(b) MAdCAM에 대한 결합에 대하여 기준 항체와 경쟁하는 특성;
(c) 기준 항체와 동일한 MAdCAM 에피토프에 결합하는 특성;
(d) 기준 항체와 실질적으로 동일한 Kd로 MAdCAM에 결합하는 특성; 또는
(e) 기준 항체와 실질적으로 동일한 해리 속도(off rate)로 MAdCAM에 결합하는 특성
중 하나 이상의 특성을 보유하며, 여기서, 상기 기준 항체는 모노클로날 항체 1.7.2, 모노클로날 항체 1.8.2, 모노클로날 항체 6.14.2, 모노클로날 항체 6.22.2, 모노클로날 항체 6.34.2, 모노클로날 항체 6.67.1, 모노클로날 항체 6.73.2, 모노클로날 항체 6.77.1, 모노클로날 항체 7.16.6, 모노클로날 항체 7.20.5, 모노클로날 항체 7.26.4, 모노클로날 항체 9.8.2, 모노클로날 항체 6.22.2-mod, 모노클로날 항체 6.34.2-mod, 모노클로날 항체 6.67.1-mod, 모노클로날 항체 6.77.1-mod 및 모노클로날 항체 7.26.4-mod로 이루어진 군에서 선택된다.
본 발명의 다른 국면에서, 항-MAdCAM 항체의 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 또는 양자 모두는 아미노산 서열에 있어서, 모노클로날 항체 1.7.2, 모노클로날 항체 1.8.2, 모노클로날 항체 6.14.2, 모노클로날 항체 6.22.2, 모노클로날 항체 6.34.2, 모노클로날 항체 6.67.1, 모노클로날 항체 6.73.2, 모노클로날 항체 6.77.1, 모노클로날 항체 7.16.6, 모노클로날 항체 7.20.5, 모노클로날 항체 7.26.4, 모노클로날 항체 9.8.2, 모노클로날 항체 6.22.2-mod, 모노클로날 항체 6.34.2-mod, 모노클로날 항체 6.67.1-mod, 모노클로날 항체 6.77.1-mod 및 모노클로날 항체 7.26.4-mod로 이루어진 군에서 선택되는 모노클로날 항체의 상응하는 영역(들)에 대하여 90% 이상 동일하다.
바람직하게는, 상기 항체는
(a) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 2 및 서열 번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(b) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 6 및 서열 번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(c) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 10 및 서열 번호 12에 제시된 아 미노산 서열을 포함하는 항체;
(d) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 14 및 서열 번호 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(e) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 18 및 서열 번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(f) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 22 및 서열 번호 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(g) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 26 및 서열 번호 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(h) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 30 및 서열 번호 32에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(i) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 34 및 서열 번호 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(j) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 38 및 서열 번호 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(k) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 42 및 서열 번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(l) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 46 및 서열 번호 48에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(m) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 52 및 서열 번호 54에 제시된 아 미노산 서열을 포함하는 항체;
(n) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 56 및 서열 번호 58에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(o) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 60 및 서열 번호 62에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(p) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 64 및 서열 번호 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및
(q) 신호 서열을 포함하지 않고, 서열 번호 42 및 서열 번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체
로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 한 국면에서, 중쇄 C-말단 리신은 조합물의 항-MAdCAM 항체로부터 절단될 수 있다.
본 발명의 다른 국면에서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 부분은
(a) 중쇄가 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 및 7.26.4-mod로 이루어진 군에서 선택되는 기준 항체의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(b) 경쇄가 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 및 7.26.4-mod로 이루어진 군에서 선택되는 기준 항체의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 항체;
(c) (a)의 중쇄 및 (b)의 경쇄를 포함하는 항체; 및
(d) 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열이 상기 기준 항체로부터 선택되는 (c)의 항체
로부터 선택된다.
본 발명의 다른 국면에서, 모노클로날 항체 또는 항원 결합 부분은
(a) 1.7.2(서열 번호 2); 1.8.2(서열 번호 6); 6.14.2(서열 번호 10); 6.22.2(서열 번호 14); 6.34.2(서열 번호 18); 6.67.1 (서열 번호 22); 6.73.2(서열 번호 26); 6.77.1(서열 번호 30); 7.16.6(서열 번호 34); 7.20.5(서열 번호 38); 7.26.4(서열 번호 42); 9.8.2(서열 번호 46); 6.22.2-mod(서열 번호 52); 6.34.2-mod(서열 번호 56); 6.67.1-mod(서열 번호 60); 6.77.1-mod(서열 번호 64); 및 7.26.4-mod(서열 번호 42)로 이루어진 군에서 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 중쇄;
(b) 1.7.2(서열 번호 4); 1.8.2(서열 번호 8); 6.14.2(서열 번호 12); 6.22.2(서열 번호 16); 6.34.2(서열 번호 20); 6.67.1 (서열 번호 24); 6.73.2(서열 번호 28); 6.77.1(서열 번호 32); 7.16.6(서열 번호 36); 7.20.5(서열 번호 40); 7.26.4(서열 번호 44); 9.8.2(서열 번호 48); 6.22.2-mod(서열 번호 54); 6.34.2-mod(서열 번호 58); 6.67.1-mod(서열 번호 62); 6.77.1-mod(서열 번호 66); 및 7.26.4-mod(서열 번호 68)로 이루어진 군에서 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(c) (a)의 중쇄 및 (b)의 경쇄
를 포함한다.
본 발명의 또다른 국면은 본 명세서에 정의된 바와 같은 항-α4β7 인테그린 항체 또는 그의 항원 결합 부분과 캐스파아제 억제제의 조합물이다. 바람직하게는, 상기 항체는 MAdCAM과 α4β7 인테그린의 상호작용을 억제한다. 더욱 바람직하게는, 상기 항체는 MLN02로도 불리우는 인간화된 Act-1이다 (WO 01/078779).
본 발명의 다른 국면은 본 명세서에 기술된 임의의 조합물의 의학적 용도, 바람직하게는, C형 간염-유도된 간 손상, 알콜성 간 질환 및 비-알콜성 지방간염 (non-alcoholic steatohepatitis, NASH)의 치료를 포함하나 이에 한정되지 않는, 간 섬유증의 치료를 위한 용도이다.
본 발명의 다른 국면은 본 명세서에 기술된 항-MAdCAM 항체 및 본 명세서에 기술된 항섬유성 제제를 이용한, C형 간염-유도된 간 손상, 알콜성 간 질환 및 비-알콜성 지방간염의 치료를 포함하나 이에 한정되지 않는 간 섬유증의 치료 방법이다.
본 발명의 다른 국면은 본 명세서에 기술된 임의의 조합물과 제약적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물이다.
본 발명의 다른 국면은 본 명세서에 기술된 항-MAdCAM 항체 및 본 명세서에 기술된 항섬유성 제제를 포함하는, 동시적, 개별적 또는 순차적 사용을 위한 제약학적 제품이다.
본 발명의 추가의 국면은 본 명세서에 기술된 항-MAdCAM 항체 및 본 명세서에 기술된 항섬유성 제제를 포함하는 키트이다.
본 발명의 조합물 중 항섬유성 제제는 바람직하게는 프로테아제 억제제이고, 더욱 바람직하게는 캐스파아제 억제제이며, 더욱더 바람직하게는 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약적으로 허용가능한 염이다.
<화학식 I>
Figure 112008002233619-PCT00002
상기 식에서,
A는 하기 화학식 IIa 내지 IIi의 천연 또는 비천연 아미노산이고;
Figure 112008002233619-PCT00003
Figure 112008002233619-PCT00004
Figure 112008002233619-PCT00005
Figure 112008002233619-PCT00006
Figure 112008002233619-PCT00007
Figure 112008002233619-PCT00008
Figure 112008002233619-PCT00009
Figure 112008002233619-PCT00010
Figure 112008002233619-PCT00011
B는 수소 원자, 중수소 원자, 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, 치환된 나프틸, 2-벤즈옥사졸릴, 치환된 2-옥사졸릴, (CH2)n-시클로알킬, (CH2)n-페닐, (CH2)n-(치환된 페닐), (CH2)n-(1 또는 2-나프틸), (CH2)n-(치환된 1 또는 2-나프틸), (CH2)n-(헤테로아릴), (CH2)n-(치환된 헤테로아릴), 할로메틸, CO2R12, CONR13R14, CH2ZR15 (여기서, Z는 산소 또는 황 원자임), CH2OCO(아릴), CH2OCO(헤테로 아릴) 또는 CH2OPO(R16)R17이거나, B는 하기 화학식 IIIa 내지 IIIc의 군으로부터 선택되고;
Figure 112008002233619-PCT00012
Figure 112008002233619-PCT00013
Figure 112008002233619-PCT00014
R1은 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬, 나프틸, 치환된 나프틸, (1 또는 2-나프틸)알킬, 치환된 (1 또는 2-나프틸)알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, (헤테로아릴)알킬, 치환된 (헤테 로아릴)알킬, R1a(R1b)N 또는 R1cO이고;
R2는 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬, 나프틸, 치환된 나프틸, (1 또는 2-나프틸)알킬 또는 치환된 (1 또는 2-나프틸)알킬이며;
여기서, R1a 및 R1b는 독립적으로 수소, 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬, 나프틸, 치환된 나프틸, (1 또는 2-나프틸)알킬, 치환된 (1 또는 2-나프틸)알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, (헤테로아릴)알킬 또는 치환된 (헤테로아릴)알킬이고, 단, R1a 및 R1b 양자 모두가 수소일 수는 없으며;
R1c는 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬, 나프틸, 치환된 나프틸, (1 또는 2-나프틸)알킬, 치환된 (1 또는 2-나프틸)알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, (헤테로아릴)알킬 또는 치환된 (헤테로아릴)알킬이고;
R3는 C1 -6 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, (CH2)nNH2, (CH2)NHCOR9, (CH2)nN(C=NH)NH2, (CH2)mCO2R2, (CH2)mOR10, (CH2)mSR11, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸) 또는 (CH2)n(헤테로아릴) (여기서, 헤 테로아릴은 피리딜, 티에닐, 푸릴, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 이속사졸릴, 피라지닐, 피리미딜, 트리아지닐, 테트라졸릴 및 인돌릴을 포함함)이고;
R3a는 수소 또는 메틸이거나, R3 및 R3a는 함께 -(CH2)d- (여기서, d는 2 내지 6의 정수)이고;
R4는 페닐, 치환된 페닐, (CH2)m페닐, (CH2)m(치환된 페닐), 시클로알킬 또는 벤조융합된 시클로알킬이고;
R5는 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
R6은 수소, 불소, 옥소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸), OR10, SR11 또는 NHCOR9이고;
R7은 수소, 옥소 (즉, =O), 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
R8은 저급 알킬, 시클로알킬, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸) 또는 COR9이고;
R9는 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸), OR12 또는 NR13R14이고;
R10은 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
R11은 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
R12은 저급 알킬, 시클로알킬, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
R13은 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, 치환된 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
R14는 수소 또는 저급 알킬이거나; 또는
R13 및 R14는 함께 5 내지 7원 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리, 예컨대, 모르폴린 또는 N-치환된 피페라진을 형성하고;
R15는 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, 치환된 나프틸, 헤테로아릴, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸) 또는 (CH2)n(헤테로아릴)이고;
R16 또는 R17은 독립적으로 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬 또는 (시클로알킬)알킬이고;
R18 및 R19는 독립적으로 수소, 알킬, 페닐, 치환된 페닐, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐)이거나, 또는 R18 및 R19는 함께 -(CH=CH)2-이고;
R20은 수소, 알킬, 페닐, 치환된 페닐, (CH2)n페닐 또는 (CH2)n(치환된 페닐)이고;
R21, R22 및 R23은 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
X는 CH2, (CH2)2, (CH2)3 또는 S이고;
Y1은 O 또는 NR23이고;
Y2는 CH2, O 또는 NR23이고;
a는 0 또는 1이고, b는 1 또는 2이며, 단, a가 1이면 b는 1이고;
c는 1 또는 2이고, 단, c가 1이면 a는 0이고 b는 1이며;
m은 1 또는 2이고;
n은 1, 2, 3 또는 4이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "알킬"은 메틸, 에틸, tert-부틸, 이소-프로필, n-옥틸 등과 같은 직쇄 또는 분지쇄 C1 내지 C10 탄소 쇄를 의미한다. 용어 "저급 알킬"은 메틸, 에틸, 이소-프로필 등과 같은 직쇄 또는 분지쇄 C1 내지 C6 탄소 쇄를의미한다.
용어 "시클로알킬"은 완전히 포화되거나 부분적으로 불포화된 모노-, 비- 또는 트리-시클릭 고리를 의미한다. 이러한 고리의 예로는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 아다만틸, 시클로옥틸, 시스- 또는 트랜스-데칼린, 비시클로[2.2.1]헵트-2-엔, 시클로헥스-1-에닐, 시클로펜트-1-에닐, 1,4-시클로옥타디에닐 등이 포함된다.
용어 "(시클로알킬)알킬"은 상기 시클로알킬 고리 중 하나로 치환된 상기 정의된 알킬 기를 의미한다. 이러한 기의 예로는 (시클로헥실)메틸, 3-(시클로프로필)-n-프로필, 5-(시클로펜틸)헥실, 6-(아다만틸)헥실 등이 포함된다.
용어 "치환된 페닐"은 할로겐, 히드록시, 보호된 히드록시, 시아노, 니트로, 트리플루오로메틸, 알킬, 알콕시, 아실, 아실옥시, 카르복시, 보호된 카르복시, 카르복시메틸, 보호된 카르복시메틸, 히드록시메틸, 보호된 히드록시메틸, 아미노, 보호된 아미노, (일치환된)아미노, 보호된 (일치환된)아미노, (이치환된)아미노, 카르복스아미드, 보호된 카르복스아미드, N-(저급 알킬)카르복스아미드, N-((저급 알킬)술포닐)아미노 및 N-(페닐술포닐)아미노로부터 선택된 하나 이상의 치환기, 또는 치환되거나 치환되지 않은 페닐기에 의해 치환된 페닐기를 의미하며, 페닐기로 치환되는 경우 비페닐 또는 나프틸기가 형성되거나, 치환된 페닐 고리 상의 두 개의 인접한 알킬 치환기가 함께 연결되어 시클로알킬을 형성하여, 예를 들면 테트라히드로나프틸 또는 인다닐이 형성된다.
용어 "치환된 페닐"의 예로는 모노-, 디-, 트리-, 테트라- 또는 펜타(할로)페닐기 (예를 들어, 2-, 3- 또는 4-클로로페닐, 2,6-디클로로페닐, 2,5-디클로로페닐, 3,4-디클로로페닐, 2-, 3- 또는 4-브로모페닐, 3,4-디브로모페닐, 3-클로로-4-플루오로페닐, 2-, 3- 또는 4-플루오로페닐, 2,4,6-트리플루오로페닐, 2,3,5,6-테트라플루오로페닐, 2,3,4,5-테트라플루오로페닐, 2,3,4,5,6-펜타플루오로페닐 등), 모노 또는 디(히드록시)페닐기 (예를 들어, 2-, 3- 또는 4-히드록시페닐, 2,4-디히드록시페닐, 그의 보호된-히드록시 유도체 등), 니트로페닐기 (예를 들어, 2-, 3- 또는 4-니트로페닐), 시아노페닐기 (예를 들어, 2-, 3- 또는 4-시아노페닐), 모노- 또는 디(알킬)페닐기 (예를 들어, 2-, 3- 또는 4-에틸페닐, 2-, 3- 또는 4-(n-프로필)페닐 등), 모노 또는 디(알콕시)페닐기 (예를 들어, 2,6-디메톡시페닐, 2-, 3- 또는 4-(이소-프로폭시)페닐, 2-, 3- 또는 4-(tert-부톡시)페닐, 3-에톡시-4-메톡시페닐 등), 2-, 3- 또는 4-(보호된 히드록시메틸)페닐 또는 3,4-디(히드록시메틸)페닐, 모노- 또는 디(아미노메틸)페닐 또는 (보호된 아미노메틸)페닐 (예를 들어, 2-, 3- 또는 4-(아미노메틸)페닐 또는 2,4-(보호된 아미노메틸)페닐) 또는 모노- 또는 디(N-(메틸술포닐아미노))페닐 (예를 들어, 2, 3 또는 4-(N-메틸술포닐아미노)페닐)이 포함된다. 또한, 용어 "치환된 페닐"은 치환기가 상이한 이치환된 페닐기, 예를 들면 3-메틸-4-히드록시페닐, 3-히드록시-4-니트로페닐, 2-히드록시-4-클로로페닐 등을 나타낸다.
용어 "페닐알킬"은 상술된 알킬 기 중 하나에 결합된 상기 페닐기 중 하나를 의미하고, 용어 "치환된 페닐알킬"은 페닐 또는 알킬 중의 하나 또는 둘 다가 상기 정의된 치환기 중의 하나 이상으로 치환됨을 의미한다. 이러한 기의 예로는 2-페닐-1-클로로에틸, 2-(4'-메톡시페닐)에틸, 4-(2',6'-디히드록시 페닐)n-헥실, 2-(5'-시아노-3'-메톡시페닐)n-펜틸, 3-(2',6'-디메틸페닐)n-프로필, 4-클로로-3-아미노벤질, 6-(4'-메톡시페닐)-3-카르복시(n-헥실), 5-(4'-아미노메틸페닐)-3-(아미노메틸)n-펜틸, 5-페닐-3-옥소-n-펜트-1-일, (4-히드록시나프트-2-일)메틸 등이 포함된다.
용어 "치환된 나프틸"은 상기 치환기 중의 하나 이상으로 치환된 나프틸 기를 의미하고 용어 "(1 또는 2-나프틸)알킬"은 상기 알킬 기 중의 하나에 결합된 나프틸(1 또는 2)를 의미한다.
용어 "할로" 및 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도 기를 의미한다. 이들 용어는 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐을 기술하는 데 사용할 수 있다. 본 발명에서 바람직한 할로겐은 클로로 및 플루오로이다.
용어 "아릴"은 방향족 5 및 6원 카보시클릭 고리를 의미한다. 6원 고리가 바람직하다.
용어 "헤테로아릴"은 산소, 황 및/또는 질소 원자와 같은 1 내지 4개의 헤테로원자, 특히 질소 원자를 단독으로 또는 황 또는 산소 고리 원자와 함께 지닌, 임의로 치환된 방향족 5 또는 6원 헤테로시클릭 고리를 의미한다.
하기 고리계는 용어 "헤테로아릴" (치환되거나 치환되지 않은 여부에 상관 없이)로 정의된 헤테로시클릭 라디칼의 대표적인 예이다: 티에닐, 푸릴, 피롤릴, 피롤리디닐, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 트리아졸릴, 티아디아졸릴, 옥사디아졸릴, 테트라졸릴, 티아트리아졸릴, 옥사트리아졸릴, 피리딜, 피리미딜, 피라지닐, 피리다지닐, 옥사지닐, 트리아지닐, 티아디아지닐, 테트라졸로, 1,5-[b]피리다지닐, 푸리닐 및 벤조 융합 유도체 (예를 들어, 벤즈옥사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈이미다졸릴 및 인돌릴).
상기 임의로 치환된 헤테로아릴 고리에 대한 치환기는 1 내지 3개의 할로, 트리할로메틸, 아미노, 보호된 아미노, 아미노 염, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 카르복시, 보호된 카르복시, 카르복실레이트 염, 히드록시, 보호된 히드록시, 히드록시 기의 염, 저급 알콕시, 저급 알킬티오, 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 치환된 (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬 및 치환된 페닐알킬 기이다.
헤테로아릴기에 대한 치환기는 상기 정의된 바와 같거나 하기 제시하는 바와 같다. 헤테로아릴 고리에 대한 상기 치환기와 관련하여 사용된 "트리할로메틸"은 트리플루오로메틸, 트리클로로메틸, 트리브로모메틸 또는 트리요오도메틸일 수 있 고, "저급 알콕시"는 C1 내지 C4 알콕시 기를 의미하며, 유사하게 "저급 알킬티오"는 C1 내지 C4 알킬티오 기를 의미한다. 용어 "치환된 저급 알킬"은 히드록시, 보호된 히드록시, 아미노, 보호된 아미노, 시아노, 할로, 트리플루오로메틸, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 저급 알콕시, 저급 알킬티오, 카르복시, 보호된 카르복시, 또는 카르복시 염, 아미노 염 및/또는 히드록시 염에 의해 1 내지 3회 치환된 상기 정의된 저급 알킬 기를 의미한다.
헤테로아릴 고리에 대한 치환기와 관련하여 사용된 용어 "치환된(시클로알킬)알킬" 및 "치환된 시클로알킬"은 상기 정의된 바와 같이 "치환된 알킬" 기에 대해 열거된 바와 동일한 기로 치환된다. 용어 "(일치환된)아미노"는 페닐, 치환된 페닐, 알킬, 치환된 알킬, C1 내지 C7 아실, C2 내지 C7 알케닐, C2 내지 C7 치환된 알케닐, C2 내지 C7 알키닐, C7 내지 C16 알킬아릴, C7 내지 C16 치환된 알킬아릴 및 헤테로아릴기로 이루어진 군으로부터 선택된 한 개의 치환기를 갖는 아미노 기를 의미한다. (일치환된)아미노는 추가로 용어 "보호된(일치환된)아미노"에 포함되는 아미노 보호기를 가질 수 있다. 용어 "(이치환된)아미노"는 페닐, 치환된 페닐, 알킬, 치환된 알킬, C1 내지 C7 아실, C2 내지 C7 알케닐, C2 내지 C7 알키닐, C7 내지 C16 알킬아릴, C7 내지 C16 치환된 알킬아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된 두 개의 치환기를 갖는 아미노 기를 의미한다. 두 개의 치환기는 동일하거나 상이할 수 있다. 용어 "헤테로아릴(알킬)"은 상기 정의된 헤테로아릴기에 의해 임의의 위치에서 치환된 상기 정의된 알킬 기를 의미한다.
또한, 상기 임의로 치환된 5원 또는 6원 헤테로시클릭 고리 및 상기 시클로알킬 고리는 임의로 방향족 5 또는 고리 계, 예를 들면, 피리딘 또는 트리아졸 계, 바람직하게는 벤젠 고리에 융합될 수 있다.
본 명세서에 사용된 용어 "카르복시 보호기"는 화합물에서 다른 관능기와 반응을 수행하는 동안 카르복실산 기를 차단 또는 보호하기 위해 흔히 사용되는 카르복실산 기의 에스테르 유도체 중의 하나를 의미한다. 이러한 카르복실산 보호기의 예로는 t-부틸, 4-니트로벤질, 4-메톡시벤질, 3,4-디메톡시벤질, 2,4-디메톡시벤질, 2,4,6-트리메톡시벤질, 2,4,6-트리메틸벤질, 펜타메틸벤질, 3,4-메틸렌디옥시벤질, 벤즈히드릴, 4,4'-디메톡시트리틸, 4,4',4"-트리메톡시트리틸, 2-페닐프로필, 트리메틸실릴, t-부틸디메틸실릴, 펜아실, 2,2,2-트리클로로에틸, β-(트리메틸실릴)에틸, β-(디(n-부틸)메틸실릴)에틸, p-톨루엔술포닐에틸, 4-니트로벤질술포닐에틸 알릴, 신나밀, 1-(트리메틸실릴메틸)-프로페닐 등의 잔기가 포함된다. 사용된 카르복시 보호기의 종류는 유도체화된 카르복실산이 후속 반응의 조건에 안정하고 분자의 나머지 부분에 영향을 미치지 않고 적합한 시점에서 제거될 수 있는 한 중요하지 않다.
용어 "히드록시 보호기"는 테트라히드로피라닐, 2-메톡시프로프-2-일, 1-에톡시에트-1-일, 메톡시메틸, β-메톡시에톡시메틸, 메틸티오메틸, t-부틸, t-아밀, 트리틸, 4-메톡시트리틸, 4,4'-디메톡시트리틸, 4,4',4"-트리메톡시트리틸, 벤질, 알릴, 트리메틸실릴, (t-부틸)디메틸실릴, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐 등과 같은, 히드록시 기에 결합된 쉽게 분해가능한 기를 의미한다.
본 명세서에 사용된 용어 "아미노 보호기"는 해당 분자의 다른 관능기와 반응하는 동안 아미노 관능기를 차단 또는 보호하기 위해 흔히 사용되는 아미노 기의 치환기를 가리킨다. 용어 "보호된(일치환된)아미노"는 일치환된 아미노 질소 원자상에 아미노 보호기가 존재함을 의미한다. 이러한 아미노 보호기의 예는 국제 공개 공보 WO 00/01666에 열거되어 있다.
용어 "천연 및 비천연 아미노산"은 천연 아미노산과, 천연 펩티드의 합성 동족체를 제조할 때 펩티드 화학분야의 전문가에 의해 흔히 사용되는, D 및 L 형태를 포함하는 비-단백질생성성 α-아미노산 둘 다를 가리킨다. 천연 아미노산은 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 세린, 메티오닌, 트레오닌, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 시스테인, 프롤린, 히스티딘, 아스파르트산, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, γ-카르복시글루탐산, 아르기닌, 오르니틴 및 리신이다. 비천연 α-아미노산의 예로는 히드록시리신, 시트룰린, 키누레닌, (4-아미노페닐)알라닌, 3-(2'-나프틸)알라닌, 3-(1'-나프틸)알라닌, 메티오닌 술폰, (t-부틸)알라닌, (t-부틸)글리신, 4-히드록시페닐-글리신, 아미노알라닌, 페닐글리신, 비닐알라닌, 프로파르길-글리신, 1,2,4-트리아졸-3-알라닌, 티로닌, 6-히드록시트립토판, 5-히드록시트립토판, 3-히드록시키누레닌, 3-아미노티로신, 트리플루오로메틸알라닌, 2-티에닐알라닌, (2-(4-피리딜)에틸)시스테인, 3,4-디메톡시-페닐알라닌, 3-(2'-티아졸릴)알라닌, 이보텐산, 1-아미노-1-시클로펜탄-카르복실산, 1-아미노-1-시클로헥산카르복실산, 퀴스쿠알산, 3-(트리플루오로메틸페닐)알라닌, (시클로헥실)글리신, 티오히스티딘, 3-메톡시티로신, 노르류신, 노르발린, 알로이소류신, 호모아르기닌, 티오프롤린, 데히드로프롤린, 히드록시프롤린, 호모프롤린, 인돌린-2-카르복실산, 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-3-카르복실산, 1,2,3,4-테트라히드로퀴놀린-2-카르복실산, α-아미노-n-부틸산, 시클로헥실알라닌, 2-아미노-3-페닐부티르산; 페닐 잔기의 오르쏘, 메타 또는 파라 위치에서 (C1 내지 C4)알킬, (C1 내지 C4)알콕시, 할로겐 또는 니트로 기 중의 하나 또는 두 개로 치환되거나 메틸렌디옥시 기로 일치환된 페닐알라닌; β-2- 및 3-티에닐알라닌, β-2- 및 3-푸라닐알라닌, β-2-, 3- 및 4-피리딜알라닌, β-(벤조티에닐-2- 및 3-일)알라닌, β-(1- 및 2-나프틸)알라닌; 세린, 트레오닌 또는 티로신의 O-알킬화된 유도체; S-알킬화된 시스테인, S-알킬화된 호모시스테인; 티로신의 O-술페이트, O-포스페이트 및 O-카르복실레이트 에스테르; 3-(술포)티로신, 3-(카르복시)티로신, 3-(포스포)티로신; 티로신의 4-메탄-술폰산 에스테르; 티로신의 4-메탄포스폰산 에스테르, 3,5-디요오도티로신, 3-니트로티로신, ε-알킬리신 및 δ-알킬 오르니틴이 포함된다. 이들 각 α-아미노산은 알파 위치에서 메틸 기로, α-아미노 측쇄 상의 방향족 잔기의 임의의 위치에서 할로겐으로, 또는 측쇄 잔기의 O, N 또는 S 원자에서 적절한 보호기로 치환될 수 있다. 적절한 보호기는 상기 논의된 바 있다.
당해 기술분야의 숙련가에 공지된 용매 및 기타 조건의 선택에 따라 본 발명의 화합물은 케탈 또는 아세탈 형태를 취할 수 있으며, 본 발명의 조합물 중 이들 형태의 사용은 본 발명에 포함된다.
이들 화합물은, 인용에 의해 전문이 본 명세서에 포함되는 국제 공개 공보 WO 00/01666 또는 미국 특허 제6,544,951호에 기술된 바와 같이 제조할 수 있다.
바람직한 하위군은 미국 특허 제6,544,951호에 열거되어 있다.
바람직한 화학식 I의 화합물은
(3S)-3-[N-(N'-(2-벤질페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(벤질)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-페녹시페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸메틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(4-클로로-1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-안트릴)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(펜에틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-페닐페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(4-n-헵틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(5,6,7,8-테트라히드로-1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-아다만틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(4-플루오로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-메톡시페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(N"-N'"-디페닐아미노)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(4-피리디닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-피라지닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1,2,3,4-테트라히드로-1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(3,4,5-트리메톡시벤질)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(벤즈히드릴)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(3-페녹실페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-피리디닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,3,5,6-테트라플루오로-4-피리디닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-요오도페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,6-디플루오로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,5-디-tert-부틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(5-인다닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(메틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(n-헵틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(tert-옥틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(시클로헥실)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(5-페닐-3-피라졸릴)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,3,4,5-테트라플루오로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,3,4,6-테트라플루오로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,3,5,6-테트라클로로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,3,4,5,6-펜타플루오로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-tN-(N'-(2-벤즈이미다졸릴)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',6'-디플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',4',6'-트리플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(디페닐포스피닐옥시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-(메틸페닐포스피닐옥시)-4-옥소펜탄산;
(3RS)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-5-플루오로-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(5,6,7,8-테트라히드로-1-나프틸)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-페닐페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-벤질페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라 플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸메틸)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-페녹시페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(3-페녹실페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(4-페닐페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(벤즈히드릴)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-페닐페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2'-플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2'-플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-페닐페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(디페닐포스피닐옥시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(디페닐포스피닐옥시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)류시닐]아미노-5-(2',4',6'-트리플루오로페 녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)(tert-부틸)글리시닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)(tert-부틸)노르류시닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)(tert-부틸)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)류시닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)류시닐]아미노-5-(메틸페닐포스피닐옥시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)류시닐]아미노-5-플루오로-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)류시닐]아미노-5-(디페닐포스피닐옥시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-(1H-테트라졸-5-일)페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-아다만틸)페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(벤질)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(펜에틸)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-페녹시페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(4-클로로-1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(5,6,7,8-테트라히드로-1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1,2,3,4-테트라히드로-1-나프틸)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸메틸)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산; 및
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)류시닐]아미노-4-옥소부탄산
로부터 선택된다.
특히 바람직한 것은
(3S)-3-[N-(N'-(2-플루오로-4-요오도페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-클로로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-브로모페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-플루오로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-안트릴)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-{2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2,6-디플루오로페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(4-메톡시페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
(3S)-3-[N-(N'-(2-벤질페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산; 및
(3S)-3-[N-(N'-(2-페닐페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산
로부터 선택된 화합물들이다.
가장 바람직하게는, 본 화합물은 (3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'- 테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산이다.
항-MAdCAM 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 바람직하게는, 인용에 의해 그의 전문이 본 명세서에 포함되는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 개시된 항체이다. 특히, 본 명세서에 인용된 모든 서열 번호는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 명시된 서열들에 관한 것이다.
바람직하게는, 본 발명에서 사용되는 항-MAdCAM 항체는 MAdCAM에 특이적으로 결합한다. 더욱더 바람직하게는, 상기 항체의 적어도 CDR 서열은 인간 CDR 서열, 또는 인간 항체의 항원 결합 부분이다. 바람직하게는, 상기 항체는 인간 항체이고, 더욱 바람직하게는 MAdCAM 길항제로 작용하는 항체이다.
본 발명의 다른 국면은 상기 항-MAdCAM 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 또는 그의 가변 영역 또는 기타 항원 결합 부분 또는 전술한 것 중 임의의 것을 코딩하는 핵산 분자와, 제약적으로 허용가능한 담체를 본 발명의 조합물에 사용하는 것이다. 본 발명의 상기 국면은 Fab 단편, F(ab')2 단편, 단일쇄 Fv (scFv) 단편을 포함하나 이에 한정되지 않는 전술한 임의의 항체의 단편을 사용하는 것을 포함한다.
바람직하게는, 항-MAdCAM 항체는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 개시된 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod로부터 선택되는 억제성 인간 항-MAdCAM 항체이다. 바람직하게는, 항-MAdCAM 항체 는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 개시된 서열 번호 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 또는 68로부터 선택되는 아미노산 서열 (신호 서열을 포함하거나 포함하지 않음) 또는 상기 아미노산 서열 중 임의의 하나의 서열의 가변 영역, 또는 이러한 아미노산 서열 유래의 하나 이상의 CDR을 포함하는 경쇄를 포함한다. 항-MAdCAM 항체는 바람직하게는, 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 개시된 서열 번호 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 및 64의 서열(신호 서열을 포함하거나 포함하지 않음)로부터 선택되는 아미노산 서열 또는 상기 아미노산 서열 유래의 하나 이상의 CDR 또는 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 항-MAdCAM 항체는 바람직하게는, 전술한 서열 중 임의의 하나의 서열의, CDR1의 시작에서부터 CDR3의 말단까지의 아미노산 서열을 포함하는 인간 항-MAdCAM 항체이다. 본 발명에서 사용되는 항-MAdCAM 항체는 또한 전술한 서열 중 임의의 서열의 하나 이상의 FR 영역을 포함하는 항-MAdCAM 항체일 수 있다.
본 발명의 조합물에 사용되는 항-MAdCAM 항체는 또한, 하나 이상의 변형이 행해진 전술한 아미노산 서열 중 하나의 서열을 포함하는 항-MAdCAM 항체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 화학적으로 반응성을 가질 수 있는 항체 중의 시스테인은 한정됨이 없이, 알라닌 또는 세린과 같은 다른 잔기로 치환된다. 치환은 비표준적(non-canonical) 시스테인 또는 표준적 시스테인에서 일어날 수 있다. 치환은 항체의 불변 도메인에서 또는 가변 도메인의 골격 영역 또는 CDR에서 행해질 수 있다.
항체에서 잠재적인 단백질 분해 부위를 제거하기 위해 아미노산 치환을 행할 수도 있다. 그러한 부위는 항체의 불변 도메인에서 또는 가변 도메인의 골격 영역 또는 CDR에서 나타날 수 있다. 시스테인 잔기의 치환 및 단백질 분해 부위의 제거에 의해 항체 생성물에서의 이종성이 감소될 수 있다. 잠재적인 탈아미드화 부위를 형성하는 아스파라긴-글리신 쌍은 이 잔기들 중 하나 또는 양자 모두를 변경시킴으로써 제거될 수 있다. 아미노산 치환을 행하여 본 발명에 사용되는 항체의 가변 영역의 잠재적인 글리코실화 부위를 부가 또는 제거할 수 있다.
본 발명에 사용되는 항-MAdCAM 항체의 중쇄의 C-말단 리신은 절단될 수 있다. 항-MAdCAM 항체의 중쇄 및 경쇄는 임의로는 신호 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 조합물에 사용되기 위한 12종의 바람직한 억제성 인간 항-MAdCAM 모노클로날 항체, 즉, 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 및 9.8.2는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 상세하게 기술되어 있다.
항- MAdCAM 항체 부류 및 아류
항체는 IgG, IgM, IgE, IgA 또는 IgD 분자일 수 있다. 바람직하게는, 항체는 IgG 부류이며 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아류이다. 더욱 바람직하게는, 항-MAdCAM 항체는 IgG2 또는 IgG4 아류이다. 더욱 바람직하게는, 항-MAdCAM 항체는 WO2005/067620에 기재된 바와 같이, IgG2인 항체 1.7.2, 1.8.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod, 또는 IgG4인 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1 또는 9.8.2 항체와 동일한 부류 또는 아류이다.
항-MAdCAM 항체 부류 및 아류는 당업계에 공지된 임의의 방법으로 결정할 수 있다. 일반적으로 항체 부류 및 아류는 특정 항체 부류 및 아류에 특이적인 항체를 사용하여 결정할 수 있다. 그러한 항체는 상업적으로 입수가능하다. ELISA, 웨스턴 블롯과, 기타 기술로 부류 및 아류를 결정할 수 있다. 대안적으로, 부류 및 아류는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 불변 영역 전부 또는 일부를 서열 결정하는 단계, 그의 아미노산 서열을 다양한 면역글로불린 부류 및 아류의 공지된 아미노산 서열과 비교하는 단계, 및 항체 부류 및 아류를 가장 높은 서열 동일성을 나타내는 부류로서 결정하는 단계에 의해 결정할 수 있다.
종 및 분자 선택성
본 발명의 조합물에 사용되는 항-MAdCAM 항체는 종 및 분자 선택성 양자 모두를 나타낸다. 항-MAdCAM 항체는 인간, 사이노몰거스(cynomolgus) 또는 개의 MAdCAM에 결합할 수 있다. 본 발명의 조합물에 사용되는 기타 항-MAdCAM 항체는 신세계 원숭이(New World monkey) 종, 예를 들어, 마모셋(marmoset)에는 결합하지 않는다. 당업계에 잘 알려진 방법을 이용하여 항-MAdCAM 항체에 대한 종 선택성을 결정할 수 있다. 예를 들어, 웨스턴 블롯, FACS, ELISA 또는 면역 조직 화학법을 이용하여 종 선택성을 결정할 수 있다. 바람직한 실시태양에서는, 면역 조직 화학법을 이용하여 종 선택성을 결정할 수 있다.
본 발명의 조합물에 사용되는, MAdCAM에 특이적으로 결합하는 항-MAdCAM 항체는 VCAM, 피브로넥틴 또는 임의의 기타 항원에 비하여 MAdCAM에 대하여 10배 이상, 바람직하게는 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90배 이상, 가장 바람직하게는 100배 이상의 선택성을 갖는다. 바람직하게는, 항-MAdCAM 항체는 VCAM, 피브로넥틴 또는 MAdCAM 이외의 임의의 다른 항원에 상당한 결합을 나타내지 않는다. 본 명세서의 교시에 따라 당업계에 잘 알려진 방법을 이용하여 MAdCAM에 대한 항-MAdCAM 항체의 선택성을 측정할 수 있다. 예를 들어, 웨스턴 블롯, FACS, ELISA 또는 면역 조직 화학법을 이용하여 선택성을 측정할 수 있다.
항- MAdCAM 항체의 MAdCAM 에의 결합 친화도
본 발명의 조합물에 사용되는 항-MAdCAM 항체는 바람직하게는, 높은 친화도로 MAdCAM에 특이적으로 결합한다. 표면 플라즈몬 공명, 예를 들어, BIAcore로 측정할 때, 본 발명의 조합물에 사용되는 한 항-MAdCAM 항체는 3 x 10-8 M 이하의 Kd로 MAdCAM에 특이적으로 결합한다. 바람직하게는, 항체는 1 x 10-8 M 이하 또는 1 x 10-9 M 이하의 Kd로 MAdCAM에 특이적으로 결합한다. 더욱 바람직하게는, 항체는 1 x 10-10 M 이하의 Kd로 MAdCAM에 특이적으로 결합한다. 조합물에 사용되는 항체는 2.66 x 10-10 M 이하, 2.35 x 10-11 M 이하 또는 9 x 10-12 M 이하의 Kd로 MAdCAM에 특 이적으로 결합한다. 바람직하게는, 항체는 1 x 10-11 M 이하의 Kd로 MAdCAM에 특이적으로 결합한다. 바람직하게는, 항체는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod로부터 선택되는 항체와 실질적으로 동일한 Kd로 MAdCAM에 특이적으로 결합한다. 기준 항체와 "실질적으로 동일한 Kd"를 갖는 항체의 Kd는, 동일한 실험에서 기준 항체의 Kd와 비교하여 ± 100 pM, 바람직하게는 ± 50 pM, 더욱 바람직하게는 ± 20 pM, 더욱더 바람직하게는 ± 10 pM, ± 5 pM 또는 ± 2 pM이다. 바람직하게는, 항체는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 개시된 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod로부터 선택되는 항체 유래의 하나 이상의 가변 도메인 또는 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체와 실질적으로 동일한 Kd로 MAdCAM에 결합한다. 바람직하게는, 항체는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 개시된 서열 번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 또는 68의 서열(신호 서열을 포함하거나 포함하지 않음)로부터 선택되는 아미노산 서열 중 하나의 서열을 포함하는 항체, 또는 그의 가변 도메인과 실질적으로 동일한 Kd로 MAdCAM에 결합한다. 바람직하게는, 항체는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 개시된 서열 번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 또는 68의 서열로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 항체 유래의 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체와 실질적으로 동일한 Kd로 MAdCAM에 결합한다.
항-MAdCAM 항체의 MAdCAM에의 결합 친화도는 당업계에 공지된 임의의 방법으로 측정할 수 있다. 한 실시태양에서, 결합 친화도는 경쟁적 ELISA, RIA 또는 표면 플라즈몬 공명, 예를 들어, BIAcore로 측정할 수 있다. 더욱 바람직한 실시태양에서, 결합 친화도는 표면 플라즈몬 공명으로 측정한다. 더욱더 바람직한 실시태양에서, 결합 친화도 및 해리 속도는 BIAcore를 이용하여 측정한다. 결합 친화도의 측정 예는 국제 공개 공보 WO 2005/067620에 기술되어 있다.
항- MAdCAM 항체의 반감기
본 발명의 조합물에 사용되는 항-MAdCAM 항체의 반감기는 시험관내 또는 생체내에서 1일 이상이다. 바람직하게는, 항체 또는 그의 부분의 반감기는 3일 이상이다. 더욱 바람직하게는, 항체 또는 그의 부분의 반감기는 8일 이상이다. 본 발명에 사용되는 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 반감기가 보다 길어지도록 유도체화되거나 변형될 수도 있다. 다른 바람직한 실시태양에서, 항체는 국제 공개 공보 WO 00/09560에 기술된 바와 같이, 혈청 중 반감기의 증가를 위하여 점 돌연변이를 포함할 수 있다.
항체의 반감기는 당업계의 숙련자에게 공지된 임의의 수단으로 측정될 수 있 다. 예를 들어, 항체의 반감기는 웨스턴 블롯, ELISA 또는 RIA로 적절한 기간에 걸쳐 측정될 수 있다. 항체의 반감기는 임의의 적절한 동물, 예를 들어, 영장류, 예를 들어, 사이노몰거스 원숭이 또는 인간에서 측정될 수 있다.
항- MAdCAM 항체에 의해 인식되는 MAdCAM 에피토프의 동정
본 발명은 본 명세서에 제공된 인간 항-MAdCAM 항체와 동일한 항원 또는 에피토프에 결합하는 인간 항-MAdCAM 항체와 항섬유성 제제의 조합물도 제공한다. 또한, 본 발명은 인간 항-MAdCAM 항체와 경쟁하거나 교차 경쟁하는 인간 항-MAdCAM 항체와 항섬유성 제제의 조합물을 제공한다. 바람직하게는, 인간 항-MAdCAM 항체는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod이다. 바람직하게는, 인간 항-MAdCAM 항체는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod로부터 선택되는 항체 유래의 하나 이상의 가변 도메인 또는 하나 이상의 CDR을 포함한다. 바람직하게는, 인간 항-MAdCAM 항체는 국제 공개 공보 WO2005/067620에 개시된 서열 번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 또는 68의 서열(신호 서열을 포함하거나 포함하지 않음)로부터 선택되는 아미노산 서열 중 하나의 서열, 또는 그의 가변 도메인을 포함한다. 바람직하게는, 인간 항-MAdCAM 항체는 국제 공개 공보 WO2005/067620에 개시된 서열 번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 또는 68의 서열로부터 선택되는 아미노산 서열 중 하나의 서열을 포함하는 항체 유래의 하나 이상의 CDR을 포함한다.
당업계에 공지된 다양한 방법을 이용하여 항-MAdCAM 항체가 다른 항-MAdCAM 항체와 동일한 항원에 결합하는지를 측정할 수 있다. 예를 들어, 공지된 항-MAdCAM 항체를 사용하여 항원을 포획하고, 이 항원을 항-MAdCAM 항체로부터 용출시키고, 이어서 시험 항체가 용출된 항원에 결합하는지를 측정할 수 있다. 포화 상태 하에서 항-MAdCAM 항체를 MAdCAM에 결합시키는 단계, 이어서 시험 항체가 MAdCAM에 결합하는 능력을 측정하는 단계에 의해 어느 한 항체가 항-MAdCAM 항체와 경쟁하는지를 측정할 수 있다. 시험 항체가 항-MAdCAM 항체와 동시에 MAdCAM에 결합할 수 있다면, 시험 항체는 항-MAdCAM 항체와는 다른 에피토프에 결합하는 것이다. 그러나, 시험 항체가 동시에 MAdCAM에 결합할 수 없다면, 시험 항체는 인간 항-MAdCAM 항체와 경쟁하는 것이다. 이 실험은 ELISA, 또는 표면 플라즈몬 공명 또는 바람직하게는 BIAcore를 이용하여 수행할 수 있다. 항-MAdCAM 항체가 다른 항-MAdCAM 항체와 교차 경쟁하는지를 시험하기 위하여, 두 방향으로 상기한 경쟁 방법을 이용할 수 있는데, 즉, 공지된 항체가 시험 항체를 차단하는지를 측정하거나 그 역으로 할 수 있다.
경쇄 및 중쇄 유전자의 용도
본 발명은 인간 κ 유전자에 의해 코딩되는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-MAdCAM 항체와 항섬유성 제제의 조합물도 제공한다. 바람직하게는, 경쇄 가변 영 역은 인간 Vκ A2, A3, A26, B3, O12 또는 018 유전자 패밀리에 의해 코딩된다. 바람직하게는, 경쇄는 생식 세포(germline) 인간 Vκ A2, A3, A26, B3, 012 또는 018 서열 유래의 11개 이하, 6개 이하 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 포함한다. 바람직한 실시태양에서, 아미노산 치환은 보존적 치환이다.
바람직하게는, 항-MAdCAM 항체의 VL은 생식 세포의 아미노산 서열과 관련하여, 항체 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod 중 하나 이상의 VL과 동일한 돌연변이를 포함한다. 본 발명은 예시된 항체와 동일한 인간 Vκ 및 인간 Jκ 유전자가 이용되는 항-MAdCAM 항체와 항섬유성 제제의 조합물을 포함한다. 항체는 하나 이상의 예시된 항체와 동일한, 생식 세포 유래의 돌연변이 중 하나 이상을 포함할 수 있거나, 항체는 예시된 하나 이상의 항체와 동일한 위치들 중 하나 이상의 위치에서의 상이한 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항-MAdCAM 항체의 VL은 항체 7.16.6에 존재하는 것과 동일한 하나 이상의 아미노산 치환과, 항체 7.26.4와 동일한 다른 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 이러한 방식으로, 예를 들어, MAdCAM에 대한 항체의 친화도 또는 그의 항원으로부터의 해리 속도를 개선하기 위하여 상이한 항체 결합 특징들을 혼합 및 매치시킬 수 있다. 돌연변이는 항체 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 VL 중 하나 이상의 VL에서 발견되는 것과 동일한 위치에서 행해질 수 있지만, 동일한 아미노산을 사용하기보다는 보 존적 아미노산 치환이 행해진다. 예를 들어, 항체 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod 중 하나에 있어서 생식 세포와 비교하여 아미노산 치환이 글루타메이트일 경우, 아스파르테이트를 보존적 치환할 수 있다. 유사하게, 아미노산 치환이 세린일 경우, 트레오닌을 보존적 치환할 수 있다.
항-MAdCAM 항체의 경쇄는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 VL의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 경쇄는 바람직하게는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 경쇄의 CDR 영역과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 경쇄는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 경쇄의 하나 이상의 CDR 영역을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 경쇄는 동일한 Vκ 및 Jκ 유전자가 이용되는 상이한 경쇄 유래의 CDR을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상이한 경쇄 유래의 CDR은 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod로부터 얻어진다. 바람직하게는, 경 쇄는 신호 서열을 포함하거나 포함하지 않는, 국제 공개 공보 WO2005/067620에 기술된 서열 번호 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 64, 66 또는 68의 서열로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 경쇄는 국제 공개 공보 WO2005/067620에 기술된 서열 번호 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61, 65 또는 67의 서열(신호 서열을 포함하거나 포함하지 않음)로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 1 내지 11개의 아미노산이 삽입, 결실 또는 치환된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 상기 항체 또는 그의 부분은 람다 경쇄를 포함할 수 있다.
본 발명은 인간 VH 유전자 서열 또는 인간 VH 유전자로부터 유래되는 서열을 포함하는 항-MAdCAM 항체 또는 그의 부분과 항섬유성 제제의 조합물도 제공한다. 중쇄 아미노산 서열은 인간 VH 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 또는 4-4 유전자 패밀리로부터 유래될 수 있다. 바람직하게는, 중쇄는 인간 생식 세포의 VH 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 또는 4-4 유전자 서열 유래의, 15개 이하, 6개 이하 또는 3개 이하의 아미노산 변이를 포함한다.
국제 공개 공보 WO2005/067620에 기술된 서열 번호 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42 및 46의 서열은 본 발명의 조합물에 사용될 수 있는 12종의 항-MAdCAM 항체의 전장 중쇄의 아미노산 서열을 제공한다.
바람직하게는, 항-MAdCAM 항체의 VH는 생식 세포의 아미노산 서열과 관련하여, 항체 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 VH 중 하나 이상의 VH와 동일한 돌연변이를 포함한다. 상기에 논의되어 있는 것과 유사하게, 항체는 하나 이상의 예시된 항체와 동일한 생식 세포 유래의 돌연변이를 하나 이상 포함한다. 또한, 항체는 예시된 항체 중 하나 이상의 항체와 동일한 하나 이상의 위치에서의 상이한 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항-MAdCAM 항체의 VH는 항체 7.16.6에 존재하는 것과 동일한 하나 이상의 아미노산 치환과, 항체 7.26.4와 동일한 다른 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 이러한 방식으로, 예를 들어, MAdCAM에 대한 항체의 친화도 또는 그의 항원으로부터의 해리 속도를 개선하기 위하여 상이한 항체 결합 특징들을 혼합 및 매칭시킬 수 있다. 생식 세포와 비교되는 아미노산 치환은 기준 항체 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 VH 중 임의의 하나 이상의 VH에서 발견되는 것과 동일한 위치에서 생식 세포 유래의 치환으로서 행해질 수 있지만, 이 위치는 상이한 잔기로 치환되는데, 이는 기준 항체와 비교하여 보존적 치환이다.
바람직하게는, 본 발명의 조합물에 사용되는 항-MadCAM 항체의 중쇄는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 VH의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 더욱 바람직하게는, 중쇄는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 중쇄의 CDR 영역과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 중쇄는 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.4, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod의 중쇄의 하나 이상의 CDR 영역 유래의 아미노산 서열을 포함하거나, 중쇄는 상이한 중쇄 유래의 CDR을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상이한 중쇄 유래의 CDR은 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod로부터 얻어진다. 바람직하게는, 중쇄는 국제 공개 공보 WO2005/067620에 기술된, 신호 서열을 포함하거나 포함하지 않는 서열 번호 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 또는 64의 서열로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 또한, 중쇄는 국제 공개 공보 WO2005/067620에 기술된 서열 번호 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 또는 63의 서열로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 1 내지 15개의 아미노산이 삽입, 결실 또는 치환된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 치환은 바람직하게는 보존적 아미노산 치환이다.
핵산, 벡터, 숙주 세포 및 항체의 재조합적 제조 방법
핵산, 벡터, 숙주 세포 및 이들 항체의 재조합적 제조 방법은 국제 공개 공보 WO2005/067620에 기술되어 있다.
유도체화 및 표지된 항체
본 발명의 조합물을 위한 항체 또는 항체의 부분은 유도체화되거나 다른 분자(예를 들어, 다른 펩티드 또는 단백질)에 결합될 수 있다. 일반적으로 항체 또는 그의 부분은 MAdCAM 결합이 유도체화 또는 표지에 의해 악영향을 받지 않도록 유도체화된다. 따라서, 본 발명의 조합물을 위한 항체 또는 항체의 부분은 본 명세서에 기술된 인간 항-MAdCAM 항체의 완전한 형태 및 변형된 형태 둘 다를 포함하려는 것이다. 예를 들어, 본 발명에 사용되는 항체 또는 항체의 부분은 하나 이상의 다른 분자적 실체, 예를 들어, 다른 항체(예를 들어, 이중 특이적 항체 또는 다이아바디), 검출제, 세포 독성제, 제약 제제, 및/또는 항체 또는 항체의 부분과 다른 분자(예를 들어, 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그)의 결부를 매개할 수 있는 단백질 또는 펩티드에 (화학적 커플링, 유전자 융합, 비공유 결합에 의한 결부 또는 다른 것에 의해) 기능적으로 결합될 수 있다.
유도체화 항체의 한 가지 유형은(예를 들어, 이중 특이적 항체의 생성을 위하여 동일 유형 또는 상이한 유형의) 2종 이상의 항체를 가교 결합시킴으로써 제조된다. 적합한 가교 결합제는 적절한 스페이서에 의해 분리되는 2개의 특유한 반응성 기를 갖는 헤테로이관능성(예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르) 또는 호모이관능성(예를 들어, 디숙신이미딜 수버레이트)인 것을 포함한다. 이러한 링커는 미국 일리노이주 록포드 소재의 Pierce Chemical Company로부터 입수가능하다.
다른 유형의 유도체화 항체로는 표지된 항체가 있다. 본 발명의 항체 또는 항체의 부분을 유도체화할 수 있는 유용한 검출제는 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 5-디메틸아민-1-나프탈렌술포닐 클로라이드, 피코에리트린, 란탄족 인광체 등을 포함하는 형광 화합물을 포함한다. 항체는 또한 검출에 유용한 효소, 예를 들어, 서양 고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리 포스파타제, 글루코스 옥시다제 등으로 표지될 수 있다. 항체가 검출 가능한 효소로 표지될 경우, 항체는 식별될 수 있는 반응 생성물의 생성을 위하여 효소가 이용하는 추가의 시약을 첨가함으로써 검출된다. 예를 들어, 서양 고추냉이 퍼옥시다제 제제가 존재할 경우, 과산화수소 및 디아미노벤지딘의 첨가에 의해 착색된 반응 생성물이 생성되는데, 이는 검출 가능하다. 항체는 또한 비오틴으로 표지될 수 있고 아비딘 또는 스트렙타비딘 결합의 간접적 측정을 통하여 검출될 수 있다. 항체는 자성 제제, 예를 들어, 가돌리늄으로 표지될 수도 있다. 항체는 또한 이차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프(예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 이차 항체의 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)로 표지될 수도 있다. 몇몇 실시태양에서, 표지는 잠재적인 입체 장애의 감소를 위하여 다양한 길이의 스페이서 암에 의해 부착된다.
항-MAdCAM 항체는 또한 방사성 동위 원소로 표지된 아미노산으로 표지될 수도 있다. 식별용 방사성 동위 원소는 진단 목적 및 치료 목적 둘 다에 사용될 수 있다. 예를 들어, 식별용 방사성 동위 원소는 x선 또는 기타 진단 기술에 의해 MAdCAM-발현 조직을 검출하기 위하여 사용될 수 있다. 또한, 식별용 방사성 동위 원소는 질환에 걸린 조직 또는 MAdCAM 발현 종양에 있어서 독소로서 치료용으로 사 용될 수 있다. 폴리펩티드용 표지의 예는 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I 또는 131I의 방사능 동위 원소 또는 방사성 핵종을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
항-MAdCAM 항체는 또한 화학 기, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 메틸 또는 에틸기, 또는 탄수화물 기로 유도체화될 수 있다. 상기 기들은 항체의 생물학적 특성들을 개선시켜, 예를 들어, 혈청 중 반감기를 증가시키거나 조직 결합을 증가시키는 데에 유용할 수 있다. 이 방법은 항-MAdCAM 항체의 버전 또는 항원-결합 단편에도 적용된다.
제약 조성물 및 키트
추가의 태양에 있어서, 본 발명은 억제성 인간 항-MAdCAM 항체를 포함하는 조성물 및 그러한 조성물로 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 몇몇 실시태양에서, 치료 대상은 인간이다. 다른 실시태양에서, 대상은 수의학적 대상이다. 몇몇 실시태양에서, 수의학적 대상은 개 또는 비인간 영장류이다.
치료는 1종 이상의 억제성 항-MAdCAM 모노클로날 항체, 또는 그의 항원 결합 단편을 단독으로, 또는 제약적으로 허용가능한 담체와 함께 투여하는 것을 포함할 수 있다. 억제성 항-MAdCAM 항체 및 이를 포함하는 조성물은 하나 이상의 다른 치료제, 진단제 또는 예방제와 조합되어 투여될 수 있다.
본 명세서에서, "제약적으로 허용가능한 담체"는 생리학적으로 상용성인 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장성이며 흡수를 증강시 키거나 지연시키는 제제 등을 의미한다. 제약적으로 허용가능한 담체의 몇몇 예로는 염화나트륨, 덱스트로스, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리콜, 에탄올 등을 포함하는 아세트산염 완충제, 인산염 완충 염수, 염수, 물 및 이들의 조합이 있다. 많은 경우에 있어서, 등장제, 예를 들어, 당, 폴리알코올, 예를 들어, 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨이 조성물 중에 함유되는 것이 바람직하다. 제약적으로 허용가능한 물질의 추가의 예로는 계면활성제, 습윤제 또는 소량의 보조 물질, 예를 들어, 습윤 또는 유화제, 방부제 또는 완충제가 있는데, 이들은 항체의 저장 수명 또는 유효성을 증강시킨다.
본 발명에 사용되는 조성물은 다양한 형태, 예를 들어, 액체, 반고체 및 고체 투여 형태, 예를 들어, 액체 용액(예를 들어, 주사 가능한 용액 및 주입 가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 알약, 동결 건조 케이크, 건조 분말, 리포좀 및 좌약의 형태일 수 있다. 바람직한 형태는 의도되는 투여 양식 및 치료 용도에 따라 달라진다. 전형적인 바람직한 조성물은 주사 가능하거나 주입 가능한 용액의 형태, 예를 들어, 인간의 수동 면역에 사용되는 것과 유사한 조성물이다. 바람직한 투여 양식은 비경구 투여(예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내, 피내)이다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 다른 바람직한 실시태양에서, 항체는 근육내, 피내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 원하는 경우, 항체는 펌프, 관장제, 좌약 또는 유치 주머니(indwelling reservoir) 등을 사용하여 투여될 수 있다.
치료 조성물은 전형적으로 제조 및 보관 조건 하에서 안정하고 멸균성이어야 한다. 조성물은 용액, 동결 건조 케이크, 건조 분말, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포좀, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 조직화된 구조로 제형화될 수 있다. 주사가능한 멸균 용액은 항-MAdCAM 항체를 필요량으로 적절한 용매 중에 상기에 열거된 성분들 중 하나의 성분 또는 이들의 조합과 함께 혼입시키고, 필요할 경우, 그 후 멸균함으로써 제조될 수 있다. 주사가능한 멸균 용액 제조용 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 냉동 건조법이 있으며, 이는 이전의 멸균 용액으로부터의 활성 성분 및 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성한다. 일반적으로, 분산액은 상기에 열거된 것으로부터의 필요한 기타 성분 및 기본적인 분산 매질을 포함하는 멸균 비히클 내로 활성 화합물을 혼입시킴으로써 제조된다. 원하는 용액 특징은 예를 들어, 계면활성제의 사용에 의해, 그리고 분산액의 경우 원하는 입자 크기는 계면활성제, 인지질 및 중합체의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사가능한 조성물의 흡수 연장은 조성물 중에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염, 중합체성 물질, 오일 및 젤라틴을 함유시킴으로써 초래할 수 있다.
본 발명의 조합물 중의 항체는, 다수의 치료 용도에 있어서 바람직한 투여 경로/양식이 피하, 근육내, 피내, 또는 정맥내 주입이지만, 당업계에 공지된 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 당업계의 숙련자라면 알 수 있듯이, 투여 경로 및/또는 양식은 원하는 결과에 따라 달라질 것이다.
소정 실시태양에서, 이식체, 경피 패치, 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함하는 방출 조절형 제형과 같이, 항체가 급속하게 방출되지 않도록 하는 담체로 항체 조성물을 제조할 수도 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 다가무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르쏘에스테르 및 폴리악트산과 같이, 생분해성 생체 적합성 중합체가 사용될 수 있다. 그러한 제형의 다수의 제조 방법이 특허되어 있거나 일반적으로 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems (J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1978))]을 참조한다.
소정 실시태양에서, 본 발명의 조합물 중의 항-MAdCAM 항체는 예를 들어, 불활성 희석제 또는 동화가능한 식용 담체와 함께 경구 투여될 수 있다. 화합물 (및 원할 경우 기타 성분)은 또한 경질 또는 연질 쉘(shell) 젤라틴 캡슐에 봉입되거나, 정제로 압축되거나, 대상의 식사(diet) 내로 직접 혼입될 수 있다. 치료적 경구 투여에 있어서, 항-MAdCAM 항체는 부형제와 함께 혼입되고 복약 가능한(ingestible) 정제, 협측용(buccal) 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼(wafer) 등의 형태로 사용될 수 있다. 비경구 투여 이외의 방법으로 본 발명의 화합물을 투여하기 위하여, 화합물을 그의 불활성화 방지를 위한 물질로 코팅하거나 화합물을 상기 물질과 함께 공동 투여하는 것이 필요할 수 있다.
본 발명의 조성물은 "치료적 유효량" 또는 "예방적 유효량"의 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분을 함유할 수 있다. "치료적 유효량"은, 필요한 기간 동안, 필요한 투여량에서, 원하는 치료 결과를 성취하는 데에 유효한 양을 말한다. 항체 또는 항체의 부분의 치료적 유효량은 질환 상태, 개체의 연령, 성별 및 체중과, 항체 또는 항체의 부분이 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 능력과 같은 인 자에 따라 달라질 수 있다. 또한 치료적 유효량은 치료적으로 유익한 효과가 본 항체 또는 항체의 부분의 임의의 유독하거나 해로운 효과보다 커지게 하는 것이다. "예방적 유효량"은 필요한 기간 동안 그리고 투여량에서, 원하는 예방 결과를 성취하는 데에 유효한 양을 말한다. 전형적으로, 예방 용량이 질환 이전에 또는 질환의 초기 단계에 대상에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 수 있다.
투여 섭생을 조정하여 최적의 원하는 반응(예를 들어, 치료 또는 예방 반응)을 제공할 수 있다. 예를 들어, 단일 볼루스(bolus)가 투여될 수 있거나, 나뉘어진 여러 용량이 기간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 용량이 치료 상황의 위급성에 의해 나타나는 바와 같이 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위하여 단위 투여 형태의 비경구용 조성물을 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 명세서에서, 단위 투여 형태는 치료할 포유류 대상용의 단일 투여량으로서 적합화된 물리적으로 별개인 단위를 말하며, 각각의 단위는 원하는 치료 효과의 생성을 위하여 계산된 소정량의 활성 화합물과 필요한 제약학적 담체를 함께 포함한다. 본 발명의 단위 투여 형태에 대한 명세 사항은 (a) 항-MAdCAM 항체 또는 그의 부분의 특유한 특징 및 성취할 특정의 치료 또는 예방 효과와, (b) 개체에 있어서 치료의 민감성에 대한 그러한 항체의 혼합 분야에 내재된 제한 사항에 의해, 그리고 이들에 직접 의존하여 기술된다.
본 발명의 항체 또는 항체의 부분의 치료적 또는 예방적 유효량의 예시적인 비제한적 범위는 0.025 내지 50 mg/kg, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 50 mg/kg, 더 욱 바람직하게는 0.1 내지 25, 0.1 내지 10 또는 0.1 내지 3 mg/kg이다. 몇몇 실시태양에서, 제형은 20 mM 아세트산나트륨, pH 5.5, 140 mM NaCl, 및 0.2 mg/mL의 폴리소르베이트 80의 완충제 중 5 mg/mL의 항체를 함유한다. 다른 실시태양에서, 제형은 예를 들어, 정맥내 사용을 위해, 빙초산과 pH 5.5로 조정된 0.2 mg/mL의 폴리소르베이트 80, 0.02 mg/mL의 디소듐 EDTA 이수화물, 45 mg/mL의 만니톨, 2.73 mg/mL의 아세트산나트륨 삼수화물 중 10 mg/ml의 항체를 함유한다. 다른 실시태양에서, 제형은 예를 들어, 피하 또는 피내 사용을 위해, 빙초산과 pH 5.5로 조정된 0.4 mg/mL의 폴리소르베이트 80, 0.02 mg/mL의 디소듐 EDTA 이수화물, 45 mg/mL의 만니톨, 2.73 mg/ml의 아세트산나트륨 삼수화물, 50 mg/ml의 항체를 함유한다. 투여량 값은 완화시킬 질병의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있다는 것을 알아야 한다. 또한, 특정 대상에 있어서, 특정 투여 섭생은 개체의 필요성 및 조성물의 투여의 관리자 또는 감독자의 전문적 판단에 따라 시간이 지남에 따라 조정하여야 하고, 본 명세서에 제시한 투여량 범위는 단지 예시적인 것일 뿐이며 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 한정하려는 것이 아님을 알아야 한다.
본 발명의 다른 국면은 본 발명의 항-MAdCAM 항체 또는 항체의 부분 또는 그러한 항체를 함유하는 조성물과 항섬유성 제제를 포함하는 키트를 제공한다. 키트는 항체 또는 조성물 및 항섬유성 제제 외에도 진단제 또는 치료제를 포함할 수 있다. 키트는 또한 진단 또는 치료 방법에 있어서의 사용 설명서를 포함할 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 키트는 항체 또는 그를 함유하는 조성물과 하기에 기술된 방법에서 사용될 수 있는 진단제를 포함한다.
유전자 치료 요법
본 발명의 조합물에 사용되는 항체는 유전자 치료 요법을 통하여 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 치료 요법은 생체내 또는 생체외 요법일 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 중쇄 및 경쇄 둘 다를 코딩하는 핵산 분자가 환자에게 투여된다. 더욱 바람직한 실시태양에서, 핵산 분자는 핵산 분자가 B 세포의 염색체 내로 안정하게 통합되도록 투여되는데, 이는 B 세포가 항체 생산용으로 특수화되기 때문이다. 바람직한 실시태양에서, 전구 B 세포는 생체외에서 형질감염되거나 감염되며 이를 필요로 하는 환자 내로 재이식된다. 다른 실시태양에서, 전구 B 세포 또는 기타 세포는 목적 세포 유형을 감염시키는 것으로 공지된 재조합 바이러스를 사용하여 생체내에서 감염된다. 유전자 치료 요법용으로 사용되는 전형적인 벡터는 리포좀, 플라스미드 및 바이러스 벡터를 포함한다. 예시적인 바이러스 벡터로는 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스가 있다. 생체내 또는 생체외 감염 후, 항체의 발현 수준은 처리된 환자로부터 샘플을 취하고 당업계에 공지되거나 본 명세서에 논의되어 있는 임의의 면역 분석법을 사용하여 모니터링할 수 있다.
바람직한 실시태양에서, 유전자 치료 방법은 항-MAdCAM 항체의 중쇄 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자를 투여하는 단계 및 이 핵산 분자를 발현시키는 단계를 포함한다. 다른 실시태양에서, 유전자 치료 방법은 항-MAdCAM 항체의 경쇄 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자를 투여하는 단계 및 이 핵산 분자를 발현시키는 단계를 포함한다. 더욱 바람직한 방법 에서, 유전자 치료 방법은 본 발명의 항-MAdCAM 항체의 경쇄 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자 및 중쇄 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 단리된 핵산 분자를 투여하는 단계와, 이 핵산 분자를 발현시키는 단계를 포함한다. 본 유전자 치료 방법은 다른 소염제 또는 면역 조절제를 투여하는 단계를 또한 포함할 수 있다.
항- MAdCAM 항체에 의한 α 4 β 7 / MAdCAM -의존성 유착의 억제
또한, 본 발명은 MAdCAM에 결합하며 α4β7-인테그린 보유 세포의 MAdCAM에의 결합 및 유착, 또는 다른 친족 리간드, 예를 들어, L-셀렉틴의 MAdCAM에의 결합 및 유착을 억제하는 항-MAdCAM 항체와 항섬유성 제제의 조합물을 제공한다. 바람직한 실시태양에서, MAdCAM은 인간 MAdCAM이며 가용성 형태이거나 세포의 표면상에서 발현된다. 다른 바람직한 실시태양에서, 항-MAdCAM 항체는 인간 항체이다. 다른 실시태양에서, 상기 항체 또는 그의 부분은 α4β7과 MAdCAM 사이의 결합을 50 nM 이하의 IC50 값으로 억제한다. 바람직한 실시태양에서, IC50 값은 5 nM 이하이다. 더욱 바람직한 실시태양에서, IC50 값은 5 nM 미만이다. 더욱 바람직한 실시태양에서, IC50 값은 0.05 ㎍/mL, 0.04 ㎍/mL 또는 0.03 ㎍/mL 미만이다. 다른 바람직한 실시태양에서, IC50 값은 0.5 ㎍/mL, 0.4 ㎍/mL 또는 0.3 ㎍/mL 미만이다. IC50 값은 당업계에 공지된 임의의 방법으로 측정될 수 있다. 전형적으로, IC50 값 은 ELISA 또는 유착 분석으로 측정될 수 있다. 바람직한 실시태양에서, IC50 값은 MAdCAM을 천연적으로 발현하는 세포 또는 조직, 또는 MAdCAM을 발현하도록 조작된 세포 또는 조직을 사용한 유착 분석으로 측정된다.
본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학 및 기술 용어는 당업계의 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가진다. 또한, 정황에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수형 용어는 복수형을 포함하며 복수형 용어는 단수형을 포함한다. 일반적으로, 본 명세서에 기술된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학, 단백질 및 핵산 화학과 혼성화와 관련하여 사용되는 학술 용어 및 기술은 당업계에서 잘 알려져 있으며 통상적으로 사용되는 것들이다. 본 발명의 방법 및 기술은 일반적으로 달리 나타내지 않는 한 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 논의되는 다양한 일반적인 참고 문헌 및 보다 구체적인 참고 문헌에 기술되어 있는 바와 같이, 그리고 당업계에 잘 알려져 있는 통상적인 방법에 따라 일반적으로 수행된다. 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)]과 문헌[Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992)]과, 문헌[Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)]을 참조할 수 있고, 상기 참고 문헌들은 인용에 의해 본 명세서에 포함된다. 효소 반응 및 정제 기술은 당업계에서 통상적으로 이 루어지거나 본 명세서에 기술되어 있는 바와 같이, 제조자의 설명서(specification)에 따라 수행된다. 화학적 합성, 화학적 분석, 제약 제제, 제형 및 전달과, 환자의 치료를 위하여는 표준 기술이 사용된다.
"폴리펩티드"라는 용어는 천연 또는 인공 단백질, 단백질 단편 및 단백질 서열의 폴리펩티드 유사체를 포함한다. 폴리펩티드는 단량체 또는 중합체일 수 있다.
"단리된 단백질" 또는 "단리된 폴리펩티드"라는 용어는 유래된 공급원 또는 기원의 측면에서 (1) 천연 상태에서 수반되는 천연 결부 성분들이 결부되어 있지 않거나, (2) 동일한 종 유래의 다른 단백질을 포함하지 않거나, (3) 상이한 종 유래의 세포에 의해 발현되거나, (4) 자연에서는 나타나지 않는 단백질 또는 폴리펩티드이다. 따라서, 화학적으로 합성되거나 천연적으로 발원하는 세포와는 다른 세포 계에서 합성되는 폴리펩티드는 그의 천연적으로 결부된 성분들로부터 "단리"될 것이다. 단백질은 또한 당업계에 잘 알려진 단백질 정제 기술을 사용하여, 단리에 의해 천연적으로 결부된 성분들을 실질적으로 포함하지 않도록 할 수 있다.
단백질 또는 폴리펩티드는 샘플 중 적어도 약 60 내지 75%가 단일 종의 폴리펩티드를 나타낼 경우 "실질적으로 순수", "실질적으로 균질" 또는 "실질적으로 정제된" 것이다. 폴리펩티드 또는 단백질은 단량체 또는 다량체일 수 있다. 실질적으로 순수한 폴리펩티드 또는 단백질은 전형적으로 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%(W/W)의 단백질 샘플, 더 일반적으로는 약 95%의 단백질 샘플을 포함하며 바람직하게는 99%보다 더 순수하다. 단백질의 순도 또는 균질성은 당업계에 잘 알려진 다수의 수단, 예를 들어, 단백질 샘플의 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 이어서 당업계에 잘 알려진 염색제(stain)를 이용한 겔의 염색 시의 단일 폴리펩티드 밴드의 가시화에 의해 나타낼 수 있다. 소정 목적에 있어서는, HPLC 또는 당업계에 잘 알려진 다른 수단에 의해 보다 높은 분해능이 제공될 수 있다.
본 명세서에서, "폴리펩티드 단편"이라는 용어는 아미노-말단 및/또는 카르복시-말단이 결실되어 있으나, 나머지 아미노산 서열은 천연 서열 중의 상응하는 위치와 동일한 폴리펩티드를 말한다. 몇몇 실시태양에서, 단편의 길이는 5, 6, 8 또는 10개 이상의 아미노산이다. 다른 실시태양에서, 단편의 길이는 14개 이상의 아미노산, 더욱 바람직하게는 20개 이상의 아미노산, 일반적으로는 50개 이상의 아미노산, 더욱더 바람직하게는 70, 80, 90, 100, 150 또는 200개 이상의 아미노산이다.
본 명세서에서, "폴리펩티드 유사체"라는 용어는 아미노산 서열의 일부와 실질적으로 동일하며, (1) 적합한 결합 조건 하에서 MAdCAM에의 특이적 결합, (2) α4β7 인테그린 및/또는 L-셀렉틴이 MAdCAM에 결합하는 것을 억제하는 능력, 또는 (3) 시험관내 또는 생체내에서 MAdCAM의 세포 표면 발현을 감소시키는 능력과 같은 특성 중 한 가지 이상을 갖는 25개 이상의 아미노산의 절편을 포함하는 폴리펩티드를 말한다. 전형적으로, 폴리펩티드 유사체는 천연 서열과 관련하여 보존적 아미노산 치환(또는 삽입 또는 결실)을 포함한다. 유사체는 전형적으로 길이가 20개 이상의 아미노산, 바람직하게는 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 또는 200개의 아미 노산이거나 그보다 길며, 흔히 전장 천연 폴리펩티드만큼 길 수 있다.
"면역글로불린"은 사량체 분자이다. 천연 면역글로불린에 있어서, 각각의 사량체는 2개의 동일한 폴리펩티드 사슬 쌍으로 구성되며 각각의 쌍은 1개의 "경쇄"(약 25 kDa) 및 1개의 "중쇄"(약 50 내지 70 kDa)를 가진다. 각각의 사슬의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각각의 사슬의 카르복시-말단 부분은 주로 이펙터(effector) 기능을 담당하는 불변 영역을 규정한다. 인간 경쇄는 κ 및 λ 경쇄로 분류된다. 중쇄는 μ, δ, γ, α 또는 ε으로 분류되며 항체의 이소형을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로서 규정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서 가변 영역 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 결합되며, 중쇄는 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역도 포함한다. 일반적으로, 문헌[Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N. Y. (1989)) (인용에 의해 그의 전문이 본 명세서에 포함됨)]을 참조한다. 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 온전한 면역글로불린이 2개의 결합 부위를 갖도록 항체 결합 부위를 형성한다.
면역글로불린 사슬은 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 불리우는 3개의 과변이(hypervariable) 영역에 의해 결합된 비교적 보존된 골격 영역(framework region, FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각각의 쌍의 2개의 사슬 유래의 CDR은 골격 영역에 의해 정렬되어 에피토프-특이적 결합 부위를 형성한다. 경쇄 및 중쇄 둘 다는 N-말단에서 C-말단 순으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4 도메인들을 포함한다. 각 도메인에의 아미노산의 할당은 문헌[Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991))], 또는 문헌[Chothia & Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917 (1987)]; 문헌[Chothia et al., Nature, 342: 878-883(1989)]의 정의에 따른 것이고, 상기 문헌들은 인용에 의해 이들의 전문이 본 명세서에 포함된다.
"항체"는 온전한 면역글로불린, 또는 특이적 결합에 대하여 온전한 항체와 경쟁하는 그의 항원 결합 부분을 말한다. 몇몇 실시태양에서, 항체는 그의 항원 결합 부분이다. 항원 결합 부분은 재조합 DNA 기술 또는 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 항원 결합 부분은 특히 폴리펩티드에의 특이적 항원 결합을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드, 다이아바디, 키메라 항체, 단일쇄 항체(scFv), 상보성 결정 영역(CDR) 단편과, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 및 dAb를 포함한다. Fab 단편은 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 일가 단편이며; F(ab)2 단편은 경첩 영역에서 디술파이드 가교로 결합된 2개의 Fab 단편을 포함하는 이가 단편이며; Fd 단편은 VH 및 CH1 도메인으로 이루어지며; Fv 단편은 단일 암(arm)의 항체의 VL 및 VH 도메인으로 이루어지며; dAb 단편(문헌[Ward et al., Nature, 341: 544-546 (1989)])은 VH 도메인으로 이루어진다.
본 명세서에서, 예를 들어, 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.77.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 또는 9.8.2로 칭해지는 항체는 동일한 명칭의 하이브리도 마에 의해 생산되는 모노클로날 항체이다. 예를 들어, 항체 1.7.2는 하이브리도마 1.7.2에 의해 생산된다. 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 또는 7.26.4-mod로 칭해지는 항체는 부위 특이적 돌연변이(site-directed mutagenesis)에 의해 서열이 그의 상응하는 모 항체로부터 변형된 모노클로날 항체이다.
단일쇄 항체(scFv)는 VL 및 VH 영역이 이들을 단일 단백질 사슬이 되도록 할 수 있는 합성 링커를 통하여 일가 분자를 형성하도록 쌍을 이룬 항체이다(문헌[Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988)] 및 문헌[Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988)]). 다이아바디는 이가의 이중 특이적 항체로서, VH 및 VL 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬 상에서 발현되지만, 동일한 사슬 상의 2개의 도메인들 사이에 쌍을 이루게 하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써 이 도메인들이 다른 사슬의 상보성 도메인과 쌍을 이루도록 하고 2개의 항원 결합 부분을 생성한다(예를 들어, 문헌[Holliger, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)] 및 문헌[Poljak, R. J., et al., Structure, 2: 1121-1123 (1994)] 참조). 본 발명의 항체 유래의 하나 이상의 CDR은 공유 결합에 의해 또는 비공유 결합에 의해 분자 내로 혼입되어 이 분자가 MAdCAM에 특이적으로 결합하는 면역어드헤신(immunoadhesin)이 되도록 할 수 있다. 면역어드헤신은 보다 큰 폴리펩티드 사슬의 일부로서 CDR(들)을 포함할 수 있거나, CDR(들)을 다른 폴리펩티드 사슬에 공유 결합에 의해 결합시킬 수 있거나, CDR(들)을 비공유 결합에 의해 포함할 수 있다. CDR은 면역어드헤신이 목적하는 특정 항원에 특이적으로 결합하도록 한다.
항체는 하나 이상의 결합 부위를 가질 수 있다. 하나보다 많은 결합 부위가 존재할 경우, 이 결합 부위는 서로 동일하거나 상이할 수 있다. 예를 들어, 천연 면역글로불린은 2개의 동일한 결합 부위를 가지며, 단일쇄 항체 또는 Fab 단편은 하나의 결합 부위를 가지는 반면, "이중 특이적" 또는 "이중 기능성" 항체(다이아바디)는 2개의 상이한 결합 부위를 가진다.
"단리된 항체"는 (1) 천연 상태에서 수반되는 다른 자연적으로 결부된 항체를 비롯한 천연 결부 성분들이 결부되어 있지 않거나, (2) 동일한 종 유래의 다른 단백질을 포함하지 않거나, (3) 상이한 종 유래의 세포에 의해 발현되거나, (4) 자연에서는 나타나지 않는 항체이다. 단리된 항체의 예에는 MAdCAM을 사용하여 친화도에 의해 정제된 항-MAdCAM 항체, 시험관내에서 하이브리도마 또는 다른 세포주에 의해 생산된 항-MAdCAM 항체 및 트랜스제닉 포유류 또는 식물 유래의 인간 항-MAdCAM 항체가 포함된다.
본 명세서에서, "인간 항체"라는 용어는 가변 영역 및 불변 영역의 서열이 인간 서열인 항체를 의미한다. 이 용어는 인간 유전자로부터 유래되지만 예를 들어, 가능한 면역원성의 감소, 친화도의 증가, 바람직하지 못한 폴딩을 야기할 수 있는 시스테인 또는 글리코실화 부위의 제거 등을 위하여 변경된 서열을 포함하는 항체를 포함한다. 이 용어는 인간 세포에서 전형적이지 않은 글리코실화를 부여할 수 있는 인간 이외의 세포에서, 재조합적 방법으로 생산되는 항체를 포함한다. 이 용어는 인간 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자좌의 일부 또는 전부를 포함하는 트랜스제닉 생쥐에서 생성한 항체도 포함한다.
한 국면에서, 본 발명은 인간화 항체를 제공한다. 몇몇 실시태양에서, 인간화 항체는 인간 이외의 종으로부터 유래되는 항체로서, 중쇄 및 경쇄의 불변 도메인과 골격의 특정 아미노산이 인간에서의 면역 반응이 회피되거나 방해되도록 돌연변이된 것이다. 몇몇 실시태양에서, 인간화 항체는 인간 항체 유래의 불변 도메인을 인간 이외의 종의 가변 도메인에 융합시킴으로써 제조할 수 있다. 인간화 항체의 제조 방법의 예는 미국 특허 제6,054,297호, 동 제5,886,152호 및 동 제5,877,293호에서 발견할 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 본 발명의 인간화 항-MAdCAM 항체는 본 발명의 하나 이상의 인간 항-MAdCAM 항체의 하나 이상의 골격 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 국면에서, 본 발명은 "키메라 항체"의 사용을 포함한다. 몇몇 실시태양에서 키메라 항체는 하나의 항체 유래의 하나 이상의 영역 및 하나 이상의 다른 항체 유래의 하나 이상의 영역을 포함하는 항체를 말한다. 바람직한 실시태양에서, 하나 이상의 CDR은 본 발명의 인간 항-MAdCAM 항체로부터 유래된다. 더욱 바람직한 실시태양에서, 모든 CDR이 본 발명의 인간 항-MAdCAM 항체로부터 유래된다. 다른 바람직한 실시태양에서, 하나보다 많은 본 발명의 인간 항-MAdCAM 항체 유래의 CDR들은 키메라 항체에서 혼합 및 매치된다. 예를 들어, 키메라 항체는 제1 인간 항-MAdCAM 항체의 경쇄 유래의 CDR1을 포함할 수 있으며 이는 제2 인간 항-MAdCAM 항체의 경쇄 유래의 CDR2 및 CDR3와 조합될 수 있고, 중쇄 유래의 CDR은 제3 항-MAdCAM 항체로부터 유래될 수 있다. 또한, 골격 영역은 동일한 항-MAdCAM 항체들 중 하나로부터 유래되거나, 하나 이상의 상이한 항체, 예를 들어, 인간 항체 로부터 유래되거나, 인간화 항체로부터 유래될 수 있다.
"중화 항체", "억제 항체" 또는 길항 항체는 α4β7 또는 α4β7-발현 세포, 또는 임의의 다른 친족 리간드 또는 친족 리간드-발현 세포가 MAdCAM에 결합하는 것을 약 20% 이상 억제하는 항체이다. 바람직한 실시태양에서, 항체는 α4β7 인테그린 또는 α4β7-발현 세포가 MAdCAM에 결합하는 것을 40% 이상, 더욱 바람직하게는 60%, 더욱더 바람직하게는 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 감소시킨다. 결합 감소는 예를 들어, 시험관내 경쟁적 결합 분석에서 측정하는 것처럼, 당업계의 숙련자에게 공지된 임의의 방법으로 측정할 수 있다. α4β7-발현 세포의 MAdCAM에의 결합 감소의 측정예가 실시예 I에 제시되어 있다.
항체의 단편 또는 유사체는 본 명세서의 교시에 따라 당업계의 숙련자에 의해 손쉽게 제조될 수 있다. 단편 또는 유사체의 바람직한 아미노- 및 카르복시-말단은 기능성 도메인의 경계 가까이에서 나타난다. 구조 도메인 및 기능성 도메인은 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열 데이터를 공용 또는 독점적 서열 데이터베이스와 비교함으로써 확인할 수 있다. 바람직하게는, 컴퓨터를 사용한 비교 방법을 이용하여 공지된 구조 및/또는 기능의 다른 단백질에 나타나는 서열 모티프 또는 예측된 단백질 입체형태 도메인을 확인한다. 공지된 3차원 구조로 폴딩되는 단백질 서열의 확인 방법은 공지되어 있다(문헌[Bowie et al., Science, 253: 164 (1991)]).
"koff"라는 용어는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 해리 속도상수(off rate constant)를 말한다.
"Kd"라는 용어는 특정 항체-항원 상호 작용의 해리(dissociation) 상수를 말한다. 해리 상수가 ≤1 μM, 바람직하게는 ≤100 nM, 가장 바람직하게는 ≤10 nM일 때, 항체가 항원과 결합한다고 한다.
"에피토프"라는 용어는 면역글로불린 또는 T 세포 수용체에 특이적으로 결합하거나 그렇지 않을 경우 분자와 상호 작용할 수 있는 임의의 단백질 결정 부위(determinant)를 포함한다. 에피토프 결정 부위는 일반적으로 분자의 화학적 활성 표면 기, 예를 들어, 아미노산 또는 탄수화물 측쇄로 이루어지며, 일반적으로 특이적인 3차원 구조 특성과 특정 전하 특성을 가진다. 에피토프는 "선형"이거나 "입체형"일 수 있다. 선형 에피토프에 있어서, 단백질과 상호 작용 분자(예를 들어, 항체) 사이의 모든 상호 작용 지점은 이 단백질의 일차 아미노산 서열을 따라 선형으로 나타난다. 입체형 에피토프에 있어서, 상호 작용 지점은 서로 분리되어 있는 단백질 상의 아미노산 잔기들 전반에 나타난다.
본 명세서에서, 20종의 통상적인 아미노산 및 이들의 약자는 통상적인 관례를 따른다. 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Immunology - A Synthesis (2nd Edition, E.S. Golub and D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))]을 참고한다. 20종의 통상적인 아미노산의 입체이성질체(예를 들어, D-아미노산), 비천연 아미노산, 예를 들어, α-,α-이치환 아미노산, N-알킬 아미노산, 락트산 및 기타 통상적이지 않은 아미노산도 본 발명의 폴리펩티드에 적합한 성분일 수 있다. 통상적이지 않은 아미노산의 예에는 4-히드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트, ε-N,N,N-트리메틸리신, ε-N-아세틸리신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-히드록시리신, s-N-메틸아르기닌 및 기타 유사 아미노산과 이미노산(예를 들어, 4-히드록시프롤린)이 포함된다. 본 명세서에서 사용되는 폴리펩티드 표기법에 있어서, 표준 관례 및 협약에 따르면 좌측 방향은 아미노 말단 방향이며 우측 방향은 카르복시 말단 방향이다.
본 명세서에서 언급되는 바와 같이 "폴리뉴클레오티드"라는 용어는 리보뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드, 또는 어느 한 유형의 뉴클레오티드의 변형 형태이며, 길이가 염기 10개 이상인 중합체 형태의 뉴클레오티드를 의미한다. 이 용어는 단일 가닥 및 이중 가닥 형태의 DNA를 포함한다.
본 명세서에서, "단리된 폴리뉴클레오티드"라는 용어는 기원의 측면에서, "단리된 폴리뉴클레오티드"는 (1) 폴리뉴클레오티드 전부 또는 일부와 결부되지 않으며 (여기서, "단리된 폴리뉴클레오티드"는 자연에서 발견됨), (2) 자연에서는 결합하지 않는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결되거나, (3) 보다 큰 서열의 일부로서 자연에서는 나타나지 않는 게놈, cDNA, 또는 합성 기원 또는 이들의 몇몇 조합의 폴리뉴클레오티드를 의미한다.
본 명세서에서 언급되는 "올리고뉴클레오티드"라는 용어는 천연 및 자연 비발생 올리고뉴클레오티드 결합에 의해 서로 결합된 변형 뉴클레오티드 및 천연 뉴클레오티드를 포함한다. 올리고뉴클레오티드는 일반적으로 200개 이하의 길이의 염기를 포함하는 폴리뉴클레오티드 서브세트이다. 바람직하게는 올리고뉴클레오티드의 길이는 염기 10 내지 60개이며 가장 바람직하게는 염기 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 내지 40개이다. 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어, 유전자 돌연변이체의 제작에서의 사용에 있어서는 이중 가닥일 수 있지만, 예를 들어, 프로브에 있어서는 일반적으로 단일 가닥이다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 센스 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드일 수 있다.
본 명세서에서 언급되는 "천연 뉴클레오티드"라는 용어는 데옥시리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드를 포함한다. 본 명세서에서 언급되는 "변형 뉴클레오티드"라는 용어는 변형되거나 치환된 당 기 등을 갖는 뉴클레오티드를 포함한다. 본 명세서에서 언급되는 "올리고뉴클레오티드 결합"이라는 용어는 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포라닐라데이트, 포스포로아미데이트 등과 같은 올리고뉴클레오티드 결합을 포함한다. 예를 들어, 인용에 의해 개시 사항이 본 명세서에 포함되는 문헌[Laplanche et al., Nucl. Acids Res. 14: 9081 (1986)]; 문헌[Stec et al., J. Am. Chem. Soc. 106: 6077 (1984); 문헌[Stein et al., Nucl. Acids Res., 16: 3209 (1988)]; 문헌[Zon et al., Anti-Cancer Drug Design 6: 539 (1991)]; 문헌[Zon et al., Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991))]; Stec 등의 미국 특허 제5,151,510호; 문헌[Uhlmann and Peyman, Chemical Reviews, 90: 543 (1990)]을 참조한다. 올리고뉴클레오티드는 원하는 경 우, 검출을 위한 표지를 포함할 수 있다.
"작동가능하게 연결된" 서열은 목적 유전자와 인접한 발현 조절 서열 및 트랜스로(in trans) 또는 좀 떨어져서 목적 유전자를 제어하는 작용을 하는 발현 조절 서열 양자 모두를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이 "발현 조절 서열"이라는 용어는 결찰되어 있는 코딩 서열의 발현 및 프로세싱을 행하는 데에 필요한 폴리뉴클레오티드 서열을 말한다. 발현 조절 서열은 적절한 전사 개시 서열, 종결 서열, 프로모터 서열 및 인핸서 서열; 효율적인 RNA 프로세싱 신호, 예를 들어, 스플라이싱 및 폴리아데닐화 신호; 세포질 mRNA를 안정화하는 서열; 번역 효율을 증강시키는 서열(즉, Kozak 콘센서스 서열); 단백질 안정성을 증강시키는 서열; 및 원하는 경우 단백질 분비를 증강시키는 서열을 포함한다. 이러한 조절 서열의 성질은 숙주 유기체에 따라 다르며; 원핵 생물에서는 그러한 조절 서열은 일반적으로 프로모터, 리보좀 결합 부위 및 전사 종결 서열을 포함하고; 진핵 생물에서는 일반적으로 이러한 조절 서열은 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함한다. "조절 서열"이라는 용어는 최소한, 그의 존재가 발현 및 프로세싱에 필수적인 모든 요소를 포함하려는 것이며, 그의 존재가 유리한 추가적 요소, 예를 들어, 리더 서열 및 융합 파트너 서열도 포함할 수 있다.
본 명세서에서, "벡터"라는 용어는 결합되어 있는 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 의미한다. 벡터의 한 가지 유형은 "플라스미드"이며, 이는 추가의 DNA 절편이 결찰될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 말한다. 다른 유형의 벡터로는 바이러스 벡터가 있는데, 추가의 DNA 절편이 바이러스 게놈 내로 결찰될 수 있다. 특정 벡터는 도입되는 숙주 세포 내에서 자율 복제할 수 있다(예를 들어, 박테리아의 복제 기원을 갖는 박테리아 벡터 및 포유류 에피좀 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 포유류 비-에피좀 벡터)는 숙주 세포 내로의 도입시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있으며, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 또한, 특정 벡터는 작동가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 그러한 벡터는 본 명세서에서 "재조합 발현 벡터"(또는 단순히 "발현 벡터")로 칭해진다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용한 발현 벡터는 흔히 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 상호교환적으로 사용될 수 있는데, 이는 플라스미드가 가장 통상적으로 사용되는 벡터의 형태이기 때문이다. 그러나 본 발명은 동등한 기능을 하는 다른 형태의 발현 벡터, 예컨대, 바이러스 벡터(예를 들어, 복제 결함성 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스)를 포함하려는 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "재조합 숙주 세포" (또는 단순히 "숙주 세포")라는 용어는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 의미한다. 그러한 용어는 특정 대상 세포뿐만 아니라 그러한 세포의 자손도 의미하는 것임을 알아야 한다. 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인하여 소정 변형이 다음 세대에서 일어날 수 있기 때문에 실제 그러한 자손은 모 세포와 동일하지 않을 수도 있지만, 본 명세서에서 사용되는 "숙주 세포"라는 용어의 범주 내에 여전히 포함된다.
본 명세서에서 언급되는 "선택적으로 혼성화하는"이라는 용어는 검출 가능하게, 그리고 특이적으로 결합하는 것을 의미한다. 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티 드, 올리고뉴클레오티드 및 그의 단편은 비특이적 핵산에의 상당한 양의 검출 가능한 결합을 최소화하는 혼성화 및 세척 조건 하에서 핵산 가닥에 선택적으로 혼성화된다. "높은 엄격도" 또는 "고도로 엄격한" 조건을 사용하여, 당업계에 공지되어 있으며 본 명세서에서 논의되는 선택적 혼성화 조건을 달성할 수 있다. "높은 엄격도" 또는 "고도로 엄격한" 조건의 예는 폴리뉴클레오티드를 다른 폴리뉴클레오티드와 함께 인큐베이션하는 방법으로서, 하나의 폴리뉴클레오티드는 6X SSPE 또는 SSC, 50% 포름아미드, 5X 덴하르트 시약(Denhardt's reagent), 0.5% SDS, 100 ㎍/ml의 변성된 단편화 연어 정자 DNA의 혼성화 완충액 중 42℃의 혼성화 온도에서 12-16시간 동안 막과 같은 고체 표면에 부착시킨 뒤, 55℃에서 1X SSC, 0.5% SDS의 세척 완충액을 사용하여 2회 세척할 수 있다. 문헌[Sambrook et al., supra, pp. 9.50-9.55]도 참조한다.
뉴클레오티드 서열과 관련하여 "서열 동일성 퍼센트"라는 용어는 최대 대응에 대하여 정렬될 때 동일한, 2개의 서열에서의 잔기들을 말한다. 서열 동일성 비교 길이는 약 9개 이상의 뉴클레오티드, 일반적으로는 약 18개 이상의 뉴클레오티드, 더욱 일반적으로는 약 24개 이상의 뉴클레오티드, 전형적으로는 약 28개 이상의 뉴클레오티드, 더욱 전형적으로는 약 32개 이상의 뉴클레오티드, 그리고 바람직하게는 약 36개 이상, 48개 이상의 뉴클레오티드의 스트레치에 걸친 것일 수 있다. 뉴클레오티드 서열의 동일성을 측정하기 위하여 사용될 수 있으며 당업계에 공지된 다수의 상이한 알고리즘이 존재한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드 서열은 FASTA, Gap 또는 Bestfit을 사용하여 비교할 수 있으며, 상기 프로그램은 미국 캘리포니아 주 샌디에고 소재의 Accelrys의 위스콘신 패키지 버전(Wisconsin Package Version) 10.3의 프로그램이다. 예를 들어, FASTA2 및 FASTA3 프로그램을 포함하는 FASTA는 쿼리(query) 서열과 검색 서열 사이의 가장 우수한 중복 영역의 정렬 및 서열 동일성 퍼센트를 제공한다(문헌[Pearson, Methods Enzymol., 183: 63-98(1990)]; 문헌[Pearson, Methods Mol. Biol., 132: 185-219 (2000)]; 문헌[Pearson, Methods Enzymol., 266: 227-258 (1996)]; 문헌[Pearson, J. Mol. Biol., 276: 71-84 (1998)]; 본 명세서에 참고로 포함됨). 달리 명시되지 않는 한, 특정 프로그램 또는 알고리즘에 대한 디폴트 파라미터가 사용된다. 예를 들어, 뉴클레오티드 서열들 사이의 서열 동일성 퍼센트는, 본 명세서에 참고로 포함된, 디폴트 파라미터(점수 매트릭스에 있어서 NOPAM 요소 및 6의 단어 크기)를 이용한 FASTA를 사용하거나 위스콘신 패키지 버전 10.3에 제공되어 있는 디폴트 파라미터를 이용한 GAP를 사용하여 결정할 수 있다.
뉴클레오티드 서열에 대한 기준체는 달리 명시되지 않는 한 그의 상보체를 포함한다. 따라서, 특정 서열을 갖는 핵산 분자에 대한 기준체는 상보성 서열을 갖는 그의 상보성 가닥을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
분자 생물학 분야에 있어서, 연구자들은 "서열 동일성 퍼센트", "서열 유사성 퍼센트" 및 "서열 상동성 퍼센트"라는 용어를 상호교환적으로 사용한다. 본 출원에 있어서 이들 용어는 뉴클레오티드 서열에 대해서만 동일한 의미를 갖는다.
"상당한 유사성" 또는 "상당한 서열 유사성"이라는 용어는, 핵산 또는 그의 단편을 언급하는 경우, 상기에 논의되어 있는 바와 같이, 임의의 잘 알려진 서열 동일성 알고리즘, 예를 들어, FASTA, BLAST 또는 Gap으로 측정할 때, 적절한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실체가 다른 핵산(또는 그의 상보성 가닥)과 최적으로 정렬되는 경우, 뉴클레오티드 염기에서 약 85% 이상, 바람직하게는 약 90% 이상, 더욱 바람직하게는 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 뉴클레오티드 서열 동일성이 존재한다.
폴리펩티드에 적용되는 경우 "상당한 동일성"이라는 용어는 디폴트 갭 가중치를 사용하여 GAP 또는 BESTFIT 프로그램과 같은 것에 의해 최적으로 정렬될 때, 2개의 펩티드 서열이 75% 또는 80% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 90% 또는 95% 이상의 서열 동일성, 더욱더 바람직하게는 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 공유한다는 것을 의미한다. 바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치는 보존적 아미노산 치환이 다르다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예를 들어, 전하 또는 소수성)을 갖는 측쇄(R기)를 갖는 다른 아미노산 잔기로 치환된 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않는다. 2개 이상의 아미노산 서열이 보존적 치환에 의해 서로 상이한 경우, 서열 동일성 퍼센트 또는 유사성 정도는 상기 치환의 보존적 특질을 보정하기 위하여 상향조정될 수 있다. 이러한 조정을 행하는 수단은 당업계의 숙련자에게 잘 알려져 있다. 예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Pearson, Methods Mol. Biol., 24: 307-31 (1994)]을 참고한다. 유사한 화학적 특성을 갖는 측쇄를 갖는 아미노산의 군의 예는 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 2) 지방족-히드록실 측쇄; 세린 및 트레오닌; 3) 아 미드 함유 측쇄; 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄; 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄; 리신, 아르기닌 및 히스티딘; 및 6) 황 함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 바람직한 보존적 아미노산 치환 군으로는 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파르테이트 및 아스파라긴-글루타민이 있다.
대안적으로는, 보존적 치환은 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Gonnet et al., Science, 256: 1443-45 (1992)]에 개시되어 있는 PAM250 로그-가능도 매트릭스에서 양의 값을 갖는 변화이다. "중간 정도의 보존적" 치환은 PAM250 로그-가능도 매트릭스에서 음이 아닌 값을 갖는 변화이다.
폴리펩티드의 서열 유사성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정된다. 단백질 분석용 소프트웨어는 보존적 아미노산 치환을 포함하는 다양한 치환, 결실 및 기타 변형에 할당된 유사성 척도를 이용하여 유사한 서열들을 매치시킨다. 예를 들어, GCG는 "Gap" 및 "Bestfit"과 같은 프로그램을 포함하며, 이 프로그램은 디폴트 파라미터로 사용되어, 밀접하게 연관된 폴리펩티드, 예를 들어, 상이한 종의 유기체 유래의 상동성 폴리펩티드들 사이 또는 야생형 단백질과 그 돌연변이 단백질 사이의 서열 상동성 또는 서열 동일성을 결정할 수 있다. 예를 들어, 위스콘신 패키지 버전 10.3을 참조한다. 폴리펩티드 서열은 또한 위스콘신 패키지 버전 10.3 내의 프로그램이며 디폴트 파라미터 또는 권고되는 파라미터를 이용한 FASTA를 사용하여 비교될 수 있다. FASTA(예를 들어, FASTA2 및 FASTA3)는 쿼리 서열과 검색 서열 사이의 가장 우수한 중복 영역의 서열 동일성 퍼센트 및 정 렬을 제공한다(문헌[Pearson (1990); Pearson (2000)]). 본 발명의 서열을 상이한 유기체 유래의 다수의 서열을 포함하는 데이터베이스와 비교할 경우의 다른 바람직한 알고리즘은 디폴트 파라미터를 이용한 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히 blastp 또는 tblastn이다. 예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[AltschuL et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990)]; 문헌[AltschuL et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-402 (1997)]을 참조한다.
상동성에 대하여 비교되는 폴리펩티드 서열의 길이는 일반적으로 약 16개 이상의 아미노산 잔기, 일반적으로는 약 20개 이상의 잔기, 더욱 일반적으로는 약 24개 이상의 잔기, 전형적으로는 약 28개 이상의 잔기, 바람직하게는 약 35개 초과의 잔기이다. 다수의 상이한 유기체 유래의 서열을 포함하는 데이터베이스를 검색할 경우, 아미노산 서열들을 비교하는 것이 바람직하다.
본 명세서에서, "표지" 또는 "표지된"이라는 용어는 항체에 다른 분자를 혼입하는 것을 말한다. 한 실시태양에서, 표지는 검출 가능한 마커, 예를 들어, 표식이 있는 아비딘(예를 들어, 광학적 방법 또는 비색법에 의해 검출될 수 있는 효소 활성 또는 형광성 마커를 포함하는 스트렙타비딘)에 의해 검출될 수 있는 비오틴 잔기의 폴리펩티드에의 부착체 또는 방사능 동위 원소 표지 아미노산의 혼입체이다. 다른 실시태양에서, 표지 또는 마커는 치료용일 수 있는데, 예를 들어, 약물 컨쥬게이트 또는 독소일 수 있다. 폴리펩티드 및 당단백질을 표지하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있으며 사용될 수 있다. 폴리펩티드에 있어서의 표지의 예는 방사성 동위 원소 또는 방사성 핵종(예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광성 표지(예를 들어, FITC, 로다민, 란탄족 인광체), 효소 표지(예를 들어, 서양 고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리 포스파타제), 화학 발광성 마커, 비오틴기, 이차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프(예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 이차 항체의 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그), 자성 물질, 예를 들어, 가돌리늄 킬레이트, 독소, 예를 들어, 백일해 독소, 탁솔, 사이토칼라신(cytochalasin) B, 그라미시딘(gramicidin) D, 브롬화에티듐, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜치신, 독소루비신, 다우노루비신, 디히드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤 및 퓨로마이신과 이들의 유사체 또는 동족체를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 몇몇 실시태양에서, 표지는 잠재적인 입체 장애의 감소를 위하여 다양한 길이의 스페이서 암에 의해 부착된다.

Claims (12)

  1. 항-MAdCAM 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 부분 및 항섬유성 제제(antifibrotic agent)의 조합물.
  2. 제1항에 있어서, 항섬유성 제제가 캐스파아제 억제제인 조합물.
  3. 제2항에 있어서, 캐스파아제 억제제가 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약적으로 허용가능한 염인 조합물.
    <화학식 I>
    Figure 112008002233619-PCT00015
    상기 식에서,
    A는 하기 화학식 IIa 내지 IIi의 천연 또는 비천연 아미노산이고;
    <화학식 IIa>
    Figure 112008002233619-PCT00016
    <화학식 IIb>
    Figure 112008002233619-PCT00017
    <화학식 IIc>
    Figure 112008002233619-PCT00018
    <화학식 IId>
    Figure 112008002233619-PCT00019
    <화학식 IIe>
    Figure 112008002233619-PCT00020
    <화학식 IIf>
    Figure 112008002233619-PCT00021
    <화학식 IIg>
    Figure 112008002233619-PCT00022
    <화학식 IIh>
    Figure 112008002233619-PCT00023
    <화학식 IIi>
    Figure 112008002233619-PCT00024
    B는 수소 원자, 중수소 원자, 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, 치환된 나프틸, 2-벤즈옥사졸릴, 치환된 2-옥사졸릴, (CH2)n-시클로알킬, (CH2)n-페닐, (CH2)n-(치환된 페닐), (CH2)n-(1 또는 2-나프틸), (CH2)n-(치환된 1 또는 2-나프틸), (CH2)n-(헤테로아릴), (CH2)n-(치환된 헤테로아릴), 할로메틸, CO2R12, CONR13R14, CH2ZR15 (여기서, Z는 산소 또는 황 원자임), CH2OCO(아릴), CH2OCO(헤테로 아릴) 또는 CH2OPO(R16)R17이거나, B는 하기 화학식 IIIa 내지 IIIc의 군으로부터 선택되고;
    <화학식 IIIa>
    Figure 112008002233619-PCT00025
    <화학식 IIIb>
    Figure 112008002233619-PCT00026
    <화학식 IIIc>
    Figure 112008002233619-PCT00027
    R1은 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬, 나프틸, 치환된 나프틸, (1 또는 2-나프틸)알킬, 치환된 (1 또는 2-나프틸)알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, (헤테로아릴)알킬, 치환된 (헤테 로아릴)알킬, R1a(R1b)N 또는 R1cO이고;
    R2는 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬, 나프틸, 치환된 나프틸, (1 또는 2-나프틸)알킬 또는 치환된 (1 또는 2-나프틸)알킬이며;
    여기서, R1a 및 R1b는 독립적으로 수소, 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬, 나프틸, 치환된 나프틸, (1 또는 2-나프틸)알킬, 치환된 (1 또는 2-나프틸)알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, (헤테로아릴)알킬 또는 치환된 (헤테로아릴)알킬이고, 단, R1a 및 R1b 양자 모두가 수소일 수는 없으며;
    R1c는 알킬, 시클로알킬, (시클로알킬)알킬, 페닐, 치환된 페닐, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬, 나프틸, 치환된 나프틸, (1 또는 2-나프틸)알킬, 치환된 (1 또는 2-나프틸)알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, (헤테로아릴)알킬 또는 치환된 (헤테로아릴)알킬이고;
    R3는 C1 -6 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, (CH2)nNH2, (CH2)NHCOR9, (CH2)nN(C=NH)NH2, (CH2)mCO2R2, (CH2)mOR10, (CH2)mSR11, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸) 또는 (CH2)n(헤테로아릴) (여기서, 헤 테로아릴은 피리딜, 티에닐, 푸릴, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 이속사졸릴, 피라지닐, 피리미딜, 트리아지닐, 테트라졸릴 및 인돌릴을 포함함)이고;
    R3a는 수소 또는 메틸이거나, R3 및 R3a는 함께 -(CH2)d- (여기서, d는 2 내지 6의 정수)이고;
    R4는 페닐, 치환된 페닐, (CH2)m페닐, (CH2)m(치환된 페닐), 시클로알킬 또는 벤조융합된 시클로알킬이고;
    R5는 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
    R6은 수소, 불소, 옥소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸), OR10, SR11 또는 NHCOR9이고;
    R7은 수소, 옥소 (즉, =O), 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
    R8은 저급 알킬, 시클로알킬, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸) 또는 COR9이고;
    R9는 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸), OR12 또는 NR13R14이고;
    R10은 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
    R11은 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
    R12은 저급 알킬, 시클로알킬, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
    R13은 수소, 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, 치환된 나프틸, (CH2)n시클로알킬, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐) 또는 (CH2)n(1 또는 2-나프틸)이고;
    R14는 수소 또는 저급 알킬이거나; 또는
    R13 및 R14는 함께 5 내지 7원 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리, 예컨대, 모르폴린 또는 N-치환된 피페라진을 형성하고;
    R15는 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, 치환된 나프틸, 헤테로아릴, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐), (CH2)n(1 또는 2-나프틸) 또는 (CH2)n(헤테로아릴)이고;
    R16 또는 R17은 독립적으로 저급 알킬, 시클로알킬, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸, 페닐알킬, 치환된 페닐알킬 또는 (시클로알킬)알킬이고;
    R18 및 R19는 독립적으로 수소, 알킬, 페닐, 치환된 페닐, (CH2)n페닐, (CH2)n(치환된 페닐)이거나, 또는 R18 및 R19는 함께 -(CH=CH)2-이고;
    R20은 수소, 알킬, 페닐, 치환된 페닐, (CH2)n페닐 또는 (CH2)n(치환된 페닐)이고;
    R21, R22 및 R23은 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
    X는 CH2, (CH2)2, (CH2)3 또는 S이고;
    Y1은 O 또는 NR23이고;
    Y2는 CH2, O 또는 NR23이고;
    a는 0 또는 1이고, b는 1 또는 2이며, 단, a가 1이면 b는 1이고;
    c는 1 또는 2이고, 단, c가 1이면 a는 0이고 b는 1이며;
    m은 1 또는 2이고;
    n은 1, 2, 3 또는 4이다.
  4. 제3항에 있어서, 화학식 I의 화합물이
    (3S)-3-[N-(N'-(2-플루오로-4-요오도페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-클로로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-브로모페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-플루오로페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(1-안트릴)옥사밀)발리닐]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-{2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2,6-디플루오로페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(1-나프틸)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(4-메톡시페닐)옥사밀)알라닌일]아미노-5-(2',3',5',6'-테트라플루오로페녹시)-4-옥소펜탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-트리플루오로메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-tert-부틸메틸페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산;
    (3S)-3-[N-(N'-(2-벤질페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산; 및
    (3S)-3-[N-(N'-(2-페닐페닐)옥사밀)발리닐]아미노-4-옥소부탄산
    의 화합물 군으로부터 선택되는 것인 조합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항-MAdCAM 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 인간 모노클로날 항체 또는 항원 결합 부분인 조합물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 항체 또는 부분이
    (a) 인간 세포에 결합하는 특성;
    (b) VCAM 또는 피브로넥틴에 비해 MAdCAM에 대한 선택성이 100배 이상인 특성;
    (c) 인간 MAdCAM에 3 × 10-10 M 이하의 Kd로 결합하는 특성;
    (d) 인간 MAdCAM에 대한 α4β7 발현 세포의 결합을 억제하는 특성; 및
    (e) 림프구의 위장관 림프 조직으로의 동원을 억제하는 특성;
    중 하나 이상의 특성을 가지는 것인 조합물.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 부분이 α4β7에 대한 인간 MAdCAM의 결합을 억제하고, 상기 항체 또는 그의 부분이
    (a) MAdCAM에 대한 결합에 대해 기준 항체와 교차 경쟁하는 특성;
    (b) MAdCAM에 대한 결합에 대해 기준 항체와 경쟁하는 특성;
    (c) 기준 항체와 동일한 MAdCAM의 에피토프에 결합하는 특성;
    (d) 기준 항체와 실질적으로 동일한 Kd로 MAdCAM에 결합하는 특성; 및
    (e) 기준 항체와 실질적으로 동일한 해리 속도(off rate)로 MAdCAM에 결합하는 특성
    중 하나 이상의 특성을 가지며, 여기서, 기준 항체는 모노클로날 항체 1.7.2, 모노클로날 항체 1.8.2, 모노클로날 항체 6.14.2, 모노클로날 항체 6.22.2, 모노클로날 항체 6.34.2, 모노클로날 항체 6.67.1, 모노클로날 항체 6.73.2, 모노클로날 항체 6.77.1, 모노클로날 항체 7.16.6, 모노클로날 항체 7.20.5, 모노클로날 항체 7.26.4, 모노클로날 항체 9.8.2, 모노클로날 항체 6.22.2-mod, 모노클로날 항체 6.34.2-mod, 모노클로날 항체 6.67.1-mod, 모노클로날 항체 6.77.1-mod 및 모노클로날 항체 7.26.4-mod로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조합물.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 부분이
    (a) 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 및 7.26.4-mod로 이루어진 군으로부터 선택된 기준 항체의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
    (b) 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod 및 7.26.4-mod로 이루어진 군으로부터 선택된 기준 항체의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;
    (c) (a)의 중쇄 및 (b)의 경쇄를 포함하는 항체; 및
    (d) 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열이 동일한 기준 항체로부터 선택된 (c)의 항체
    로부터 선택되는 것인 조합물.
  9. 항-α4β7 인테그린 항체 또는 그의 항원 결합 부분 및 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 정의된 캐스파아제 억제제의 조합물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 조합물의, 간 섬유증 치료용 의약의 제조를 위한 용도.
  11. 제10항에 있어서, 간 섬유증이 C형 간염-연관 간 섬유증, 알콜성 간 질환 또는 비-알콜성 지방간염인 용도.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 조합물 및 제약적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
KR1020087000793A 2005-07-11 2006-07-03 간 섬유증을 치료하기 위한 항-ＭＡｄＣＡＭ 항체 및항섬유성 캐스파아제 억제제의 신규한 조합물 KR20080017094A (ko)

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