KR20070122556A - Ｃｃｘ－ｃｋｒ２에 결합하는 시약 - Google Patents

Abstract

CCX-CKR2에 결합하는 항체 및 이를 사용하는 방법이 제공된다.

CCX-CKR2, 시약, 항체

Description

ＣＣＸ－ＣＫＲ２에 결합하는 시약{REAGENT THAT BIND CCX-CKR2}

관련 출원에 대한 상호 참조문헌

본 출원은 모든 목적으로 그 전체로 본원에 참고문헌으로 인용된 2005년 4월 21일에 출원된 미국 가특허 출원 제60/674,140호에 우선권을 주장한다.

케모카인은 특히 염증 발생시 생성되어 백혈구의 보충, 활성 및 증식을 조절하는 작은 시토카인 군을 구성한다(Baggiolini, M. et al., Adv.Immunol. 55: 97-179(1994) ; Springer, T. A., Annu. Rev. Physiol. 57: 827-872 (1995); 및 Schall, T. J. and K. B. Bacon,Curr.Opin. Immunol. 6: 865-873 (1994)). 케모카인은 (적혈구를 제외한) 혈액 형성 요소, 예컨대, 호중구, 단핵구, 대식 세포, 호산구, 호염기구, 비만 세포, 및 T 세포 및 B 세포를 포함하는 림프구의 주화성(chemotaxis)을 선택적으로 유발할 수 있다. 주화성을 자극함과 더불어, 백혈구 활성, 성장, 증식과 관련된 다른 변화, 예컨대, 세포 형태의 변화, 세포내 유리 칼슘 이온(Ca^{2 +}) 농도의 일시적 증가, 과립 엑소사이토시스, 인테그린 상승조절, 생활성 지질(예를 들어, 류코트리엔)의 형성, 시토카인의 발현, 및 호흡기 방출이 반응 세포 내에서 케모카인에 의해 선택적으로 유도될 수 있다. 그러므로, 케모카인은 염증 반응의 조기 유발 인자로, 감염 또는 염증 부위에서 염증 매개체 방출, 주화성 및 일혈(extravasation)을 일으킨다.

CXC 및 CC 케모카인으로 나타내는, 케모카인의 2개의 하위군은 4개의 보존된 시스테인 잔기들중 처음 2개의 배열에 의하여 구별되는데, 이들 잔기는 (CXC 케모카인인 SDF-1, IL-8, IP-10, MIG, PF4, ENA-78, GCP-2, GROα,GROβ, GROγ, NAP-2, NAP-4, I-TAC에서와 같이) 하나의 아미노산에 의하여 분리되거나 또는 (CC 케모카인인 MIP-1α, MIP-1β, RANTES, MCP-1, MCP-2, MCP-3, I-309에서와 같이)잔기들이 서로 인접하여 존재한다. 대부분의 CXC 케모카인은 호중구 백혈구를 끌어당긴다. 예를 들어, 상기 CXC 케모카인 인터루킨 8(IL-8), 혈소판 인자 4(PF4) 및 호중구-활성화 펩티드 2(NAP-2)는 호중구의 강력한 주화인자이자 활성인자이다. 상기 CXC 케모카인의 일원인 MIG(감마 인터페론에 의하여 유도된 모노카인) 및 IP-10(인터페론-γ 유도 10 kDa 단백질)은 활성화된 말초 혈액 림프구의 주화성을 유도하는데 있어 특히 활성이다. CC 케모카인은 일반적으로 선택성이 떨어지고 다양한 유형의 백혈구 세포 예컨대, 단핵구, 호산구, 호염기구, T-림프구 및 자연 살생 세포를 끌어당긴다. CC 케모카인 예컨대, 인간 단핵구 주화성 단백질 1-3(MCP-1, MCP-2 및 MCP-3), RANTES(Regulated on Activation, Normal T Expressed and Secreted), 및 대식 세포 염증성 단백질 1α 및 1β(MIP-1α및 MIP-1β)는 단핵구 또는 림프구의 주화인자 및 활성인자인 것으로 알려져 있으나, 호중구에 대한 주화인자는 아닌 것으로 파악된다.

CC 및 CXC 케모카인은 7개의 경막성 G 단백질-결합 수용체의 상위 군에 속하 는 수용체들을 통하여 작용한다(Murphy, P. M. , Pharmacol Rev . 52: 145-176 (2000)). 이러한 G 단백질-결합 수용체의 군은 7개의 경막성 영역을 포함하는 막관통 단백질의 거대 군을 포함한다. 상기 수용체는 예를 들어, 세포내 매개체의 생성에 의하여, GTP와 결합할 수 있고 결합된 수용체로부터의 신호 전달을 매개할 수 있는 헤테로삼량체 조절 단백질인 G 단백질과 결합될 수 있다. 또한, 케모카인 수용체는 G 단백질 결합과 독립적으로 작용할 수 있다. 예를 들어, 주로 적혈구에 발현되는 더피(Duffy) 수용체는 순환 환경으로부터 케모카인을 제거하는, 케모카인으로 작용하는 것으로 생각되는 뒤섞인(promiscuous) 케모카인 결합 수용체이다.

일반적으로, 케모카인 및 케모카인 수용체의 상호작용은, 하나의 케모카인이 다수의 케모카인 수용체와 결합할 수 있고, 역으로 하나의 케모카인 수용체가 몇몇의 케모카인과 상호작용할 수 있다는 점에서 뒤섞여 있다. 그러나, 이러한 규칙에는 몇가지 예외가 존재하는데; 그 중 하나는 SDF-1과 CXCR4 사이의 상호작용이다(Bleul et al .,J Exp Med , 184(3): 1101-9 (1996); Oberlin et al ., Nature , 382 (6594) :833-5 (1996)). 원래부터 전-B-세포 성장 자극 인자(Nagasawa et al ., Proc Natl Acad Sci USA , 91 (6): 2305-9 (1994))로 확인된, SDF-1은 CXCR4에 대한 인간 리간드라고만 보고되어 있다. 상기 SDF-1 유전자는 대체적 스플라이싱에 의하여 2개의 단백질 즉, SDF-1α 및 SDF-1β를 인코딩한다. 이러한 2개의 단백질은 SDF-1β의 N 말단에는 존재하지만 SDF-1α에는 존재하지 않는 4개의 아미노산 잔기를 제외하고는 동일하다.

예전에는 이해하지 못했던 케모카인 수용체 신호 전달 및 리간드에 대한 선 택성에 대한 다수의 측면이 존재한다. 예를 들어, 수많은 고아 수용체의 기능에 대하여 아직 파악하지 못했다. 예를 들어, 예전에는 혈관작용 장 펩티드(VIP)에 대한 수용체로서 생각하였던 RDC1은, 이의 내인성 리간드가 확인되지 않았으므로 현재 고아 수용체로서 생각된다. 예를 들어 Cook et al ., FEBS Letts , 300(2): 149-152 (1992)을 참조할 것.

최근, CCX-CKR2로 재명명된 RDCl은 케모카인 SDF-I 및 I-TAC 모두에 결합하는 것이 밝혀졌다. 전체가 참조문헌으로서 각각 본 명세서에 결부된 PCT/US04/34807 및 미국 특허출원 제10/698,541호, 제10/912,638호 및 제11/050,345호를 참조하기 바란다.

발명의 간단한 설명

본 발명은 경쟁자 항체(competitor antibody)가 CCX-CKR2에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해하는 항체로서, 상기 경쟁자 항체는

서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

서열번호 16 및 서열번호 18

의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 것인 항체를 제공한다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 검출가능한 표지에 결합된다. 일부 구체예에서는, 상기 항체는 방사선동위원소 또는 세포독성 화학물질에 결합된다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 항체 프레그먼트이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 인간화 항체(humanized antibody)이다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14의 CDR과 실질적으로 동일한 CDR을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14를 포함한다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18의 CDR과 실질적으로 동일한 CDR을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18을 포함한다.

본 발명은 또한 약학적으로 허용 가능한 부형제 및 CCX-CKR2에 경쟁자 항체가 결합하는 것을 경쟁적으로 저해하는 항체를 포함하는 약학적 조성물로서, 상기 경쟁자 항체는

서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

서열번호 16 및 서열번호 18

의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 것인 약학적 조성물을 제공한다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 항체 프레그먼트이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 인간화 항체이다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14의 CDR과 실질적으로 동일한 CDR을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14를 포함한다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18의 CDR과 실질적으로 동일한 CDR을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18을 포함한다.

본 발명은 또한 생물학적 시료에서 CCX-CKR2를 발현하는 세포를 검출하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 생물학적 시료를 항체와 접촉시키는 단계 및 상기 항체의 존재를 검출하는 단계를 포함하며, 상기 항체는 경쟁자 항체가 CCX-CKR2에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해하고, 상기 경쟁자 항체는

서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

서열번호 16 및 서열번호 18

의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 검출가능한 표지에 결합된다.

본 발명은 또한 암 세포의 혈관신생(angiogenesis) 또는 증식을 저해하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 경쟁자 항체가 CCX-CKR2에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해하는 항체와 상기 세포를 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 경쟁자 항체는

서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

서열번호 16 및 서열번호 18

의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하여, 암 세포의 혈관신생 또는 증식을 저해한다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 항체 프레그먼트이다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 인간화 항체이다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14의 CDR과 실질적으로 동일한 CDR을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14를 포함한다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18의 CDR과 실질적으로 동일한 CDR을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18을 포함한다.

일부 구체예에서, 상기 세포는 개체 내에 존재한다. 일부 구체예에서, 상기 개체는 관절염이 있거나, 또는 관절염에 걸린 적이 있다. 일부 구체예에서, 상기 개체는 인간이 아니다.

본 발명은 또한 CCX-CKR2의 조절자(modulator)의 확인 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은

(a) CCX CKR2 폴리펩티드 발현 세포 또는 세포의 추출물을 테스트 시약과 혼합하는 단계; 및

(b) 상기 테스트 시약이 CCX CKR2 폴리펩티드와의 결합에 있어 경쟁자 항체와 경쟁하는지 여부를 검출하는 분석을 수행하는 단계를 포함하고,

상기 경쟁자 항체는

서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

서열번호 16 및 서열번호 18

의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고, CCX-CKR2 폴리펩티드 결합에 있어서 경쟁자 항체와 테스트 시약 간의 경쟁은 테스트 시약이 CCX CKR2 활성의 조절자임을 나타낸다.

일부 구체예에서, 상기 경쟁자 항체는 서열번호 12 및 서열번호 14의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 경쟁자 항체는 서열번호 12 및 서열번호 14를 포함한다.

일부 구체예에서, 상기 경쟁자 항체는 서열번호 16 및 서열번호 18의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 경쟁자 항체는 서열번호 16 및 서열번호 18을 포함한다.

본 발명은 또한 CCX-CKR2 활성을 조절하는 테스트 시약의 효과를 테스트하는 방법을 제공한다. 이는, 예를 들어, CCX-CKR2 소분자 효능제(agonist) 또는 길항제(antagonist)의 분석에서 대조 약물로서 본 발명의 항체를 사용하는 경우에 유용하다. 일부 구체예에서, 상기 방법은

(a) 제1 동물에게 테스트 시약을 투여하는 단계;

(b) CCX CKR2 폴리펩티드와의 결합에 있어서 경쟁자 항체와 경쟁하는 항체를 제2 동물에게 투여하는 단계로서, 상기 경쟁자 항체가

서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

서열번호 16 및 서열번호 18

의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 것인 단계; 및

(c) 제1 동물에서의 테스트 시약의 효과를 제2 동물에서의 항체의 효과와 비교하는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 상기 경쟁자 항체는 서열번호 12 및 서열번호 14의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 경쟁자 항체는 서열번호 12 및 서열번호 14를 포함한다.

일부 구체예에서, 상기 경쟁자 항체는 서열번호 16 및 서열번호 18의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 경쟁자 항체는 서열번호 16 및 서열번호 18을 포함한다.

본 발명은 또한 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18 을 포함하는 폴리펩티드, 또는 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18로부터의 CDR의 하나 이상을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 일부 구체예에서 상기 폴리펩티드는 항체이다.

본 발명은 또한 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 또는 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18로부터의 CDR의 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구체예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 또는 서열번호 17을 포함한다.

본 발명은 또한 키메릭 항체(chimeric antibody)를 제조하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은

서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18로부터의 상보성 결정 영역(CDR)의 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 항체의 중쇄 또는 경쇄의 적어도 프레임워크 영역을 인코딩하는 이종(heterologous) 폴리뉴클레오티드에 작동가능하도록 연결하여, 항체의 키메릭 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하는 융합(fusion) 폴리뉴클레오티드를 형성하는 단계; 및

상기 융합 폴리뉴클레오티드로부터 키메릭 중쇄 또는 경쇄를 발현시키는 단계를 포함한다.

정의

본 명세서에서 "CCX-CKR2"로 표현하는 "RDCl"은 7-막관통 도메인으로 추정되는 G-단백질 결합 수용체(GPCR)을 나타낸다. CCX-CKR2 개 오소로그(dog ortholog)는 1991년에 처음 확인되었다. Libert et al. Science 244:569-572 (1989)를 참조할 것. 개 서열은, Libert et al, Nuc. Acids Res. 18(7):1917 (1990)에 개시된다. 마우스 서열은, 예를 들어, Heesen et al, Immunogenetics 47:364-370 (1998)에 개시된다. 인간 서열은, 예를 들어, 상기 단백질을 혈관작용 장 펩티드의 수용체로 잘못 개시한, Sreedharan et al, Proc. Natl. Acad. Set USA 88:4986- 4990 (1991)에 개시된다. "CCX-CKR2"는 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 또는 서열번호 10의 보존적으로 변형된 변이체의 서열을 포함한다. CCX-CKR2의 프레그먼트는 상기 열거한 서열, 또는 이의 보존적으로 변형된 변이체 중 하나의 5 이상, 그리고 때로는 10, 20, 50, 100, 200, 300 이상 또는 300 미만의 인접 아미노산의 프레그먼트이다.

"환자" 또는 "개체" 는 인간, 인간 이외의 영장류, 마우스, 랫트, 개 또는 다른 포유동물을 포함한 동물을 나타낸다.

"화학요법제"는 개체에 투여시 암 세포의 성장을 저해, 지연 또는 정지시키기에 충분한 물질 또는 암 세포에서 세포독성 효과를 나타내기에 충분한 물질을 나타낸다. 따라서, 어구 "화학요법적 유효량"은 암 세포의 성장을 저해, 지연 또는 정지시키기에 충분한, 또는 암 세포에서 세포독성 효과를 (직접적으로 또는 간접적으로) 나타내기에 충분한 개체에 투여되는 화학요법제의 양을 나타낸다. "치료량 미만의 양"은 암 세포의 성장을 저해, 지연 또는 정지시키기에 충분한 양 미만의 양또는 암 세포에서 세포 독성 나타내기에 충분한 양 미만의 양을 나타낸다.

"항체"는 면역글로불린 유전자의 프레임워크 영역을 포함하는 폴리펩티드, 또는 이의 프레그먼트를 의미하는 것으로서, 이는 항원에 특이적으로 결합하여 인식한다. 인식된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론 및 뮤 불변 영역 유전자뿐만 아니라, 다수의 면역글로불린 가변 영역 유전자들을 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로 분류되며, 이는 차례로 면역글로불린 클래스, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로 각각 정의한다.

자연 발생적 면역글로불린은 2개의 동일한 경쇄(약 24kD) 및 2개의 동일한 중쇄(약 55 또는 70kD)가 4량체를 형성하는 일반적 중심 구조를 갖는다. 각각의 사슬의 아미노 말단 부분은 가변(V) 영역으로 알려져 있고, 각각의 사슬의 나머지 부분인 더욱 보존되는 불변(C) 영역과 구별될 수 있다. 경쇄의 가변 영역 내에, C-말단 부분에 J 영역이 존재한다. 중쇄의 가변 영역 내에, J 영역과 함께 D 영역이 존재한다. 면역 글로불린의 대부분의 아미노산 서열의 다양성은 직접적으로 항체 결합에 관여하는, 고가변 영역(hypervariable regions) 또는 상보성 결정 영역(CDR)으로 알려진, V 영역의 3개의 분리된 위치에 한정된다. 아미노 말단으로부터시작하여, 이러한 영역은 각각 CDRl, CDR2 및 CDR3로 부른다. CDR은 더욱 보존된 프레임워크 영역(FR)에 의해 묶여 있다. 아미노 말단으로부터 시작하여, 이러한 영역은 각각 FRl, FR2, FR3, 및 FR4라고 부른다. CDR 및 FR 영역의 위치 및 넘버링 시스템은 예를 들어, Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Merest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991))에 의해 개시되었다.

대표적인 면역글로불린(항체)의 구조적 단위는 4량체를 포함한다. 각각의 사량체는 폴리펩티드 사슬의 두개의 동일한 쌍으로 이루어져 있으며, 각 쌍은 하나의 "경쇄"(약 25 kD)와 하나의 "중쇄"(약 50∼70 kD)를 갖는다. 각 사슬의 N-말단은 주로 항원 인식에 관여하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 나타낸다. 용어 가변 경쇄(V_L) 및 가변 중쇄(V_H)란, 각각 이러한 경쇄 및 중쇄를 나타낸다.

항체는 예를 들어, 원상태의(intact) 면역글로불린, 또는 다양한 펩티다제로 분해되어 생성된 다수의 널리 규명된 프레그먼트로서 존재한다. 그러므로, 예를 들어, 펩신은 항체의 힌지 영역에 있는 이황화결합 아래 부분을 분해하여, F(ab)'₂,즉, 그 자체가 이황화 결합에 의하여 V_H-C_H1에 결합된 경쇄인 Fab의 이량체를 생산한다. 상기 F(ab)'₂는 온화한 조건하에서 환원되어 힌지 영역 중 이황화 결합을 분해하여, F(ab)'₂ 이량체는 Fab' 단량체로 전환된다. 상기 Fab' 단량체는 본질적으로 힌지 영역의 일부를 보유하는 Fab이다 (FUNDAMENTAl IMMUNOLOGY, (Paul ed., 3d ed. 1993)을 참조할 것). 다양한 항체 프레그먼트가 원상태 항체의 분해의 관점에서 정의되는 반면, 당업자는 그러한 프레그먼트들이 화학적으로, 또는 재조합 DNA방법을 이용하여 새로이 합성될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본원에 있어서, 항체란 용어는 전 항체를 변형시켜 제조된 항체 프레그먼트, 또는 재조합 DNA 방법을 이용하여 새로이 합성된 항체 프레그먼트(예를 들어, 단일쇄 Fv), 또는 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 확인된 항체 프레그먼트(예를 들어, McCafferty et al. , Nature 348:552-554 (1990)를 참조할 것)를 포함한다.

모노클로날 또는 폴리클로날 항체의 제조에서, 당업계에 공지된 임의의 기법이 사용될 수 있다(예를 들어, Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975); Kozbor et al, Immunology Today 4:72 (1983); Cole et al., pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985)를 참조할 것). "모노클로날" 항체는 단일 클론으로부터 유도된 항체를 나타낸다. 단일쇄 항체의 제조 기법(미국특허 제4,946,778호)은 본 발명의 폴리펩티드에 대한 항체를 제조하는데 적용될 수 있다. 또한, 트랜스제닉 마우스, 또는 다른 유기체, 예를 들어, 다른 포유 동물도 인간화 항체를 발현하는데 사용될 수 있다. 대안으로, 파지 디스플레이 기법은 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체 및 헤테로머성(heteromeric) Fab 프레그먼트를 확인하는데 사용될 수 있다(McCafferty et al, Nature 348:552-554 (1990); Marks et al, Biotechnology 10:779-783 (1992)를 참조할 것).

"키메릭 항체"는 (a) 불변 영역, 또는 이의 일부가 변형되거나, 치환되거나 또는 교환되어, 항원 결합 사이트(가변 영역)가 다르거나 변형된 클래스, 효과 기능 및/또는 종의 불변 영역에 결합하거나, 또는 키메릭 항체에 새로운 특성을 부여하는 전체적으로 다른 분자, 예를 들어, 효소, 독소, 호르몬, 성장 인자, 약물 등에 결합한 항체 분자; 또는 (b) 가변 영역, 또는 이의 일부가 변형되거나, 치환되거나 또는 다른 항원 특이성 또는 변형된 항원 특이성을 갖는 가변 영역과 교환된 항체 분자이다.

"인간화" 항체란 인간에서 면역성이 적으면서 비인간 항체의 활성을 보유하는 항체를 의미한다. 이는 예를 들어, 비인간 CDR 영역을 보유함으로써 그리고 항체의 나머지 부분을 인간 상보부위로 치환함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, Morrison et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 81:6851-6855 (1984); Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988); Verhoeyen et al, Science, 239:1534-1536 (1988); Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991); Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)를 참조할 것.

용어 "분리된"이 단백질에 사용되는 경우, 단백질이 자연 상태에서는 결합되어 있는 다른 세포 성분을 본질적으로 포함하지 않음을 나타낸다. 건조 또는 수용액으로 존재할 수 있지만, 균질한 상태인 것이 바람직하다. 순도 및 균질성은 일반적으로 분석적 화학 기법, 예를 들어, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 또는 고압 액체 크로마토그래피를 사용하여 결정된다. 제조물에 존재하는 주종 단백질은 실질적으로 정제된다. 용어 "정제된"은 전기영동 겔에서 본질적으로 한 밴드를 나타내는 단백질을 나타낸다. 특히, 이는 85% 순도 이상, 더욱 바람직하게는 95% 순도 이상, 그리고 가장 바람직하게는 99% 순도 이상의 단백질을 의미한다.

단백질 또는 폴리펩티드를 언급할 때, 항체에 "특이적으로 (또는 선택적으로) 결합한다" 또는 "~와 특이적으로 (또는 선택적으로) 면역반응하는"이란 어구는 단백질 및 다른 생물의 이종 군집의 존재하에 그 단백질의 존재를 확정하는 결합 반응을 말한다. 따라서, 지정된 면역 분석 조건하에, 특이화된 항체는 특정 단백질에 백그라운드의 2배 이상으로 결합하고 시료 내 존재하는 다른 단백질에는 유의적 양으로 실질적으로 결합하지 않는다. 일반적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 백그라운드 시그널 또는 노이즈의 2배 이상, 더 일반적으로는 백그라운드의 10∼100배 이상일 것이다.

용어 "펩티도모의체(peptidomimetic)" 및 "모의체(mimetic)"는 자연 발생 또는 비자연 발생 폴리펩티드(예를 들어, CCX-CKR2에 결합하는 시약)와 실질적으로 동일한 구조 및 기능 특성을 갖는 합성 화학 화합물을 나타낸다. 펩티드 유사체는 일반적으로 제약 산업에서 주형(template) 펩티드의 특성과 유사한 특성을 갖는 비펩티드 약물로 사용된다. 이러한 종류의 비펩티드 화합물을 "펩티드 모의체" 또는 "펩티도모의체"라 부른다(본 명세서에 참조문헌으로 결부된 Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986); Veber and Freidinger TINS p. 392 (1985); 및 Evans et al. J. Med. Chem. 30:1229 (1987)). 치료학상 유용한 펩티드와 구조적으로 유사한 펩티드 미메틱은 동일하거나 증강된 치료 효과 또는 예방 효과를 만드는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 펩티도모의체는 예를 들어, 관심있는 폴리펩티드에서 발견된 것과 같은 패러다임 폴리펩티드(즉, 생물학적 또는 약학적 활성을 갖는 폴리펩티드)와 구조적으로 유사하지만, 예를 들어, -CH₂NH-, -CH₂S-, -CH₂-CH₂-, -CH=CH- (시스 및 트랜스), -COCH₂-, -CH(OH)CH₂-, 및 -CH₂SO-로 구성된 군으로부터 선택된 결합에 의해 선택적으로 치환된 하나 이상의 펩티드 결합을 갖는다. 모의체는 아미노산의 합성, 비천연 유사체로 전체적으로 구성되거나, 부분적으로는 천연 펩티드 아미노산이고 부분적으로는 아미노산의 비천연 유사체인 키메릭 분자일 수 있다. 모의체는 또한 치환이 실질적으로 모의체의 구조 및/또는 활성을 변경하지 않는 한, 일정량의 천연 아미노산 보존적 치환체를 혼입할 수 있다. 예를 들어, 모의체 조성물이 관심있는 폴리펩티드의 결합 또는 효소 활성 중 하나 이상을 수행할 수 있다면 본 발명의 범주 내이다.

"리간드"란, 수용체에 결합할 수 있는 물질, 예를 들어, 폴리펩티드 또는 기타 분자를 의미한다.

"보존적으로 변형된 변이체(conservatively modified variant)"란, 아미노산서열과 핵산 서열 모두에 적용되는 용어이다. 특정 핵산 서열에 있어서, "보존적으로 변형된 변이체"란, 동일하거나 또는 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 의미하거나, 상기 핵산이 아미노산 서열을 인코딩하지 않는 경우에는 본질적으로 동일한 서열을 의미한다. 유전자 코드의 중첩(degeneracy)으로 인하여, 다수의 핵산 서열은 임의의 주어진 단백질을 인코딩할 것이다. 예를 들어, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU는 모두 아미노산 알라닌을 인코딩한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의하여 특정되는 매 위치에서, 상기 코돈은 인코딩되는 폴리펩티드를 변형시키지 않고서도 전술한 상응하는 코돈 중 임의의 것으로 변형될 수 있다. 이러한 핵산 변이를 "침묵 변이"라고 하는데, 이는 보존적으로 변형된 변이의 일종이다. 폴리펩티드를 인코딩하는 본원의 핵산 서열 모두는 또한 핵산의 모든 가능한 침묵 변이를 나타낸다. 당업자는 핵산중 각 코돈(보통 메티오닌에 대한 유일한 코돈인 AUG, 및 보통 트립토판에 대한 유일한 코돈인 TGG 제외)은 변형되어 기능적으로 동일한 분자를 형성할 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산의 각 침묵 변이는 제시된 각 서열에 내포된다.

변형을 통하여 아미노산이 그의 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환될 경우, 아미노산 서열에 대해서 당업자는 인코딩된 서열중 단일 아미노산 또는 적은 비율의 아미노산을 변경, 부가 또는 삭제하는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 서열에 대한 각각의 치환, 결실 또는 부가가 "보존적으로 변형된 변이체"임을 인식할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표(table)는 당업계에 널리 공지되어 있다. 그러한 보존적으로 변형된 변이체는 본 발명의 다형성 변이체, 종간 상동체 및 대립유전자들에 부가되고 제외되지 않는다.

서로 보존적으로 치환되는 아미노산을 포함하는 8개의 군들은 각각 다음과 같다:

1) 알라닌(A), 글리신(G);

2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);

3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);

4) 아르기닌(R), 리신(K);

5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V);

6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W);

7) 세린(S), 트레오닌(T); 및

8) 시스테인(C), 메티오닌(M)

(예를 들어, Creighton, Proteins(1984) 참조).

"서열 동일성 비율"은 2개의 최적으로 정렬된 서열들을 비교 윈도우(comparison window)에 대하여 비교함으로써 측정되는데, 여기서 상기 비교 윈도우중 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 2개의 서열의 최적 정렬에 있어 참고 서열(부가 또는 결실이 일어나지 않은 서열)에 비하여 부가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다. 상기 비율은 양 서열에 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 존재하는 위치의 수를 측정하여 매칭된 위치의 수를 구하고, 매칭된 위치의 수를 비교 윈도우에 존재하는 위치의 총수로 나눈 다음, 그 결과를 100으로 곱하여 서열 동일성의 비율을 구함으로써 계산된다.

본 명세서중 2 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열에 있어서 "동일한" 또는 "동일성" 비율이란 용어는, 수동식 정렬 및 시각적 관찰에 의하거나, 또는 하기 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하여 측정된 지정 영역, 또는 비교 윈도우에 대한 최대 상응성에 있어 비교 및 정렬될 때, 동일한(즉, 예를 들어, 본 발명의 전체 폴리펩티드 서열 또는 본 발명의 폴리펩티드의 세포외 도메인의 특정 영역에 대하여 60% 동일성, 선택적으로는 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 나타내는) 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 특정 비율을 갖거나, 동일한 2 이상의 서열 또는 내부 서열을 의미한다. 이후 이러한 서열들은 "실질적으로 동일하다"라고 한다. 이러한 정의는 또한 테스트 서열의 상보성을 의미한다. 선택적으로, 상기 동일성은 길이 약 50개 이상인 뉴클레오티드로 이루어진 영역이나, 더욱 바람직하게는 길이 100∼500개 또는 1000개 이상의 뉴클레오티드로 이루어진 영역에 걸쳐 존재한다. 본 발명은 도 1에 나타낸 바와 같은, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16 및/또는 서열번호 18 및/또는 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16 및/또는 서열번호 18 내의 CDRl 또는 CDR2와 실질적으로 동일한 폴리펩티드를 포함한다.

서열 비교에 있어서, 통상적으로 하나의 서열이 테스트 서열과 비교되는 참고 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용할 때, 테스트 및 참고 서열을 컴퓨터에 입력하고, 필요하다면 내부 서열 동등물을 지정해주며, 필요하다면, 서열 알고리즘 프로그램의 매개변수를 지정한다. 디폴트 프로그램 매개변수가 사용될 수 있고, 또는 대체 매개변수가 지정될 수 있다. 이후 서열 비교 알고리즘은 이 프로그램 매개변수를 바탕으로 참고 서열에 대한 테스트 서열의 서열 동일성 비율을 계산한다.

본원에 사용된 "비교 윈도우"란, 전장 서열 또는 20∼600 개, 약 50∼약 200 개, 또는 약 100∼약 150개의 아미노산 또는 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택된 다수의 인접 위치중 임의의 것으로 이루어진 분절에 대한 참고 분절을 포함하며, 이때 상기 서열은 두개의 서열들이 임의로 정렬된 후의 동일한 수의 인접 위치의 참고서열과 비교될 수 있다. 비교용 서열의 정렬 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 비교용 서열의 최적 정렬은 예를 들어, Smith and Waterman (1970) Adv . Appl . Math . 2: 482c의 국소적 상동성 알고리즘, Needleman and Wunsch (1970) J Mol . Biol . 48: 443의 상동성 정렬 알고리즘, Pearson and Lipman(1988) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 85:2444의 유사성 검색 방법, 이러한 알고리즘의 컴퓨터화된 기구(GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFAST, Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI), 또는 수동 정렬 및 시각적 관찰에 의하여 수행될 수 있다(예를 들어, Ausubel et al ., Current Protocols in Molecular Biology(1995 supplement) 참조).

서열 동일성 비율 및 서열 유사성 비율을 측정하는데 적당한 알고리즘의 예로서는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이 있는데 이에 관하여는 Altschul et al.,(1977) Nuc . Acids . Res . 25:3389-3402 및 Altschul et al .(1990) J. Mol . Biol. 215:403-410에 각각 기술되어 있다. BLAST 분석법을 실행하기 위한 소프트웨어는 National Center for Biotechnology Information(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)를 통하여 공개적으로 입수 가능하다. 이 알고리즘은, 처음에 데이터베이스 서열중 동일한 길이의 단어와 정렬될 때, 일부 양의 값인 한계치 스코어 T와 매칭되거나 또는 이를 만족시키는, 의문 서열(query sequence)중 길이 W인 짧은 단어를 확인함으로써 고 스코어링 서열쌍(HSP)을 확인하는 것을 포함한다. T는 이웃하는 단어 스코어 한계치를 의미한다(Altschul et al ., supra). 이러한 초기의 이웃하는 단어의 히트는 이를 포함하는 더욱 긴 HSP를 찾는 검색 과정을 개시하기 위한 시드(seed)로서 작용한다. 이러한 단어 히트는 누적 정렬 스코어가 증가할 수 있는 한도까지, 각 서열을 따라서 양쪽 방향으로 연장된다. 누적 스코어는 매개변수 M(매칭 잔기쌍에 대한 보상 스코어; 항상 > 0임) 및 N(미스매칭된 잔기에 대한 페널티 스코어; 항상 < 0임)을 이용하여 뉴클레오티드 서열에 대하여 계산된다. 아미노산 서열에 있어서는, 스코어링 매트릭스를 사용하여 누적 스코어를 계산한다. 각 방향에서의 단어 히트의 연장은, 누적 정렬 스코어가 그의 최대 달성 값으로부터 양 X만큼 떨어질 때; 하나 이상의 음의 스코어링 잔기 정렬이 누적됨으로 인하여, 누적 스코어가 0 이하가 될 때; 또는 서열의 말단부중 어느 하나에 도달할 때 정지된다. 상기 BLAST 알고리즘 매개변수 W, T 및 X는 정렬의 정확도와 속도를 결정한다. (뉴클레오티드 서열에 대한) BLASTN 프로그램은 디폴트값으로서 단어 길이(W)가 11, 기대치(E) 10, M=5, N=-4를 사용하며, 양 사슬의 비교용으로 사용된다. 아미노산 서열에 대하여, BLASTP 프로그램은 디폴트값으로서 단어 길이 3, 기대치(E) 10과, BLOSUM62 스코어링 매트릭스(Henikoff and Henikoff(1989) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 89 : 10915) 정렬(B) 50, 기대치(E) 10, M=5, N=-4를 사용하며, 양 사슬의 비교용으로 사용된다.

BLAST 알고리즘도 두 서열 간의 유사성에 관한 통계적 분석을 수행한다(예를 들어, Karlin and Altschul (1993) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90: 5873-5787를 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 한 측정 방법은 최소합 확률법(P(N))인데, 이것은 두 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 매치가 우연히 일어날 확률을 나타낸다. 예를 들어, 핵산은 참고 핵산에 대한 시험 핵산의 비교에서 최소합 확률이 약 0.2 미만, 더욱 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만일 경우 참고 서열과 유사하다고 본다.

두 핵산 서열 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일하다는 지시는 제1 핵산 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드가 하기하는 바와 같이, 제2 핵산 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드에 대해 증가하는 항체와 면역학적으로 교차 반응하는 것이다. 따라서, 예를 들어, 두 펩티드가 보존적 치환부에 의해 상이할 경우, 폴리펩티드는 일반적으로 제2 폴리펩티드와 실질적으로 동일하다. 두 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 또다른 지시는 하기하는 바와 같이, 엄격한 조건하에 두 분자 또는 이들의 보체가 서로 하이브리드화하는 것이다. 두 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 또다른 지시는 그 서열을 증폭시키는데 동일한 프라이머를 사용할 수 있다는 것이다.

도면의 간단한 설명

도 1은 본 발명의 항체의 일부 상보성 결정 영역(CDR)의 일부 구체예를 나타낸다(서열번호 19-22).

발명의 상세한 설명

I. 본 발명의 항체

본 발명은 CCX-CKR2에 대한 항체를 사용하여 CCX-CKR2와 관련된 질환 및 장애의 치료, 진단 및 예후를 위한 시약 및 방법을 제공한다. CCX-CKR2와 관련된 질환 및 장애를 예로써 더욱 하기하며, 암, 과도한 또는 비정상적 혈관신생과 관련된 질환 및 관절염을 포함하나 이에 한정되지는 않는다.

일부 구체예에서, 상기 항체는 분리된다. 본 발명의 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및 서열번호 14의 CDR에 의해 결합되는 에피토프(epitope)와 같은 동일한 에피토프를 인식한다. 본 발명의 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 16 및 서열번호 18의 CDR에 의해 결합되는 에피토프와 같은 동일한 에피토프를 인식한다. 서열번호 12 및 서열번호 14, 또는 서열번호 16 및 서열번호 18을 포함하는 항체는 CCX-CKR2에 결합하고, CCX-CKR2 결합에 있어 케모카인 SDF-I 및 I-TAC와 경쟁한다. CCX-CKR2 결합에 대한 경쟁 분석은 예를 들어, PCT/US04/34807 및 미국 특허 공개 US2004/0170634 및 2005/0074826에 개시된다.

본 발명의 일부 구체예에서, 상기 항체는 CCX-CKR2와 결합하나, 인간 말초 혈액과는 결합하지 않는다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 본 발명의 항체는 하기의 것들 중 하나 이상에 결합하지 않는다: 호염기구, 단핵구, 플라스마사이토이드 수지상 세포(plasmacytoid dendritic cells); B 세포, 또는 CD4⁺ T 세포.

일부 구체예에서, 본 발명의 상기 항체는 서열번호 12 또는 서열번호 14 또는 서열번호 16 또는 서열번호 18을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 상기 항체는 서열번호 12 및 서열번호 14, 또는 서열번호 16 및 서열번호 18을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 상기 항체는 서열번호 12 또는 서열번호 14 또는 서열번호 16 또는 서열번호 18의 CDR을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 상기 항체는 서열번호 12 및 서열번호 14, 또는 서열번호 16 및 서열번호 18의 CDR을 포함한다.

CDR 및 FR 영역의 위치 및 넘버링 시스템은 예를 들어, Kabat et al. (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office (1991))에 이미 개시되었다. CDR은 일반적으로 NCBI IgBLAST 알고리즘을 사용하여 확인될 수 있다. 다른 서열 알고리즘이 특정 항체 아미노산 서열의 CDR 영역을 조금 다르게 제공할 수 있음을 당업자는 인식할 것이다. 일부 경우, 중쇄 CDR은 아미노산 위치 31-35 (CDRl), 50-65 (CDR2) 및 96-102 (CDR3)에서 나타난다. 일부 경우에, 경쇄 CDR은 아미노산 위치 24-34 (CDRl), 50-56 (CDR2) 및 89-97 (CDR3)에서 나타난다. 일부 구체예에서, CDR은 도 1에서와 같이 나타난다.

다른 항체와 동일한 에피토프를 인식하는 특정 항체의 능력은 일반적으로 하나의 항체가 제2 항체의 항원, 예를 들어, CCX-CKR2 또는 이의 프레그먼트 또는 융합체에의 결합을 경쟁적으로 저해하는 능력에 의해 결정된다. 임의의 많은 경쟁적 결합 분석이 동일한 항원에 대한 두 항체 간의 경쟁을 측정하는데 사용될 수 있다. 대표적인 분석법은 바이아코어(Biacore) 분석이다. 요약하면 이러한 분석에서, 상호작용물질, 예를 들어 서로 다른 항체가 또 다른 항체의 결합을 저해하는 능력을 테스트함으로써, 결합 사이트가 구조적 면에서 맵핑될 수 있다. 충분한 농도로 2의 항체 시료의 연속적 주입은 동일한 결합 에피토프에 대한 경쟁 항체 쌍을 확인할 수 있다. 상기 항체 시료는 각각의 주입으로 유의한 포화에 도달할 수 있는 능력을 가지고 있어야 한다. 제2 항체 주입의 전체 결합은 결합 에피토프 분석의 지표이다. 2개의 반응 수치는 완전 경쟁 대 구별되는 에피토프로 인한 비경쟁적 결합의 경계를 설정하는데 사용될 수 있다. 동일한 결합 에피토프 및 구별되는 결합 에피토프의 결합에 대한 제2 항체 주입의 결합 반응의 상대량은 에피토프 오버랩의 정도를 결정한다. 항체는 선형 또는 입체 에피토프를 인식할 수 있어, 항체는 비유사 및 말단 에피토프를 인식하는 동안 경쟁적일 수 있다.

당업계에 공지된 다른 일반적 면역분석법이 본 발명에 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체는 샌드위치 ELISA 분석법을 사용하여 결합되는 에피토프에 의해 구별될 수 있다. 이는 웰의 표면을 코팅하는 캡쳐 항체를 사용하여 수행된다. 포화 농도 미만의 태그된 항원이 그 후 캡쳐 표면에 가해진다. 이러한 단백질은 특정 항체:에피토프 상호작용을 통해 상기 항체에 결합할 것이다. 세척한 후, 겸출가능한 모이어티(예를 들어, HRP, 검출 항체로 정의되는 표지된 항체를 갖음)에 공유결합된 제2 항체가 ELISA에 가해진다. 이러한 항체가 캡쳐 항체와 같이 동일한 에피토프를 인식하는 경우, 특정 에피토프는 더 이상 결합할 수 없어, 표적 단백질에 결합할 수 없을 것이다. 그러나 이러한 제2 항체가 표적 단백질의 다른 에피토프를 인식하는 경우, 결합할 수 있을 것이고, 이러한 결합은 적절한 기질을 사용하여 활성(그리고 이에 따른 항체 결합) 수치의 정량에 의해 검출될 수 있을 것이다. 백그라운드는 캡쳐 및 검출 항체 모두로서 단일 항체를 사용함으로써 정의되고, 반면 최대 신호는 항원 특이성 항체로의 캡쳐 및 항원에 태그된 항체로의 검출에 의해 설정될 수 있다. 백그라운드 및 최대 신호를 참조로 사용하여, 항체는 에피토프 특이성을 결정하기 위해 페어-와이즈 방식으로 평가될 수 있다.

상기한 임의의 분석법을 사용하여, 제1 항체의 존재하에, 항원에 대한 제2 항체의 결합이 30% 이상, 일반적으로 약 40%, 50%, 60% 또는 75% 이상, 및 흔히 약 90% 이상으로 감소되는 경우, 제1 항체는 제2 항체의 결합을 경쟁적으로 저해하는 것으로 생각된다.

폴리클로날 항체를 제조하는 방법은 당업자에게 공지되었다. 폴리클로날 항체는 포유류에서 예를 들어, 면역 물질 및 필요에 따라 보조제의 1회 이상의 주입에 의해, 증가할 수 있다. 일반적으로, 면역 물질 및/또는 보조제는 다회의 피하 또는 복강내 주입에 의해 포유류에 주입될 것이다. 면역 물질은 핵산에 의해 인코딩된 단백질 또는 이의 프레그먼트 또는 이의 융합 단백질을 포함할 수 있다. 면역화할 포유류에서 면역성으로 알려진 단백질에 면역 물질을 결합시키는 것이 유용할 것이다. 이러한 면역성 단백질의 예는 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin), 혈청 알부민, 소 사이로글로불린, 및 대두 트립신 저해제를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 사용될 수 있는 보조제의 예는 프룬즈 컴플리트 보조제(Freund's complete adjuvant) 및 MPL-TDM 보조제(모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로오스 디코리노마이코레이트)를 포함한다. 면역화 방법은 실험을 거치지 않고 당업자에 의해 선택될 수 있다.

대안적으로, 항체는 모노클로날 항체일 수 있다. 모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 예를 들어, Kohler & Milstein, Nature 256:495 (1975)에 개시된 방법을 사용하여 제조가능하다. 하이브리도마 방법에서, 마우스, 햄스터, 또는 다른 적절한 호스트 동물은 일반적으로 면역 물질로 면역화되어, 림프구가 면역 물질에 특이적으로 결합할 항체를 생성하거나 또는 생성할 수 있도록 한다. 대안으로, 림프구는 시험관 내에서 면역화 될 수 있다. 면역 물질은 일반적으로 CCX-CKR2 폴리펩티드, 또는 이의 프레그먼트 또는 이의 융합체를 포함할 것이다. 일반적으로, 인간 유래의 세포를 원하는 경우, 말초 혈액 림프구("PBL")가 사용되고, 비인간 포유류 기원을 원하는 경우, 신장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 림프구는 그 후 적절한 융합제, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 불멸화 세포 라인과 융합되어, 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (1986)). 불멸화 세포 라인은 일반적으로 형질변환된 포유류 세포, 특히 설치류, 소, 및 인간 유래의 골수 세포이다. 일반적으로, 랫트 또는 마우스 골수 세포 라인이 사용된다. 하이브리도마 세포는 융합되지 않은, 불멸화 세포의 성장 또는 생존을 저해하는 하나 이상의 물질을 포함하는 적절한 배양 배지에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 모세포가 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 부족한 경우, 하이브리도마용 배양 배지는 일반적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방해하는 물질인, 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘("HAT 배지")을 포함할 것이다.

일부 구체예에서, 본 발명의 항체는 CCX-CKR2에의 결합에 있어 서열번호 12 및 서열번호 14, 또는 서열번호 16 및 서열번호 18을 포함하는 항체와 경쟁하는 키메릭 또는 인간화 항체이다. 상기한 바와 같이, 인간화 형태의 항체는 인간 항체의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 결합성, 및 용량을 갖는 비인간 종, 예를 들어, 마우스, 랫트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기로 대체된 키메릭 면역글로불린이다. 예를 들어, 서열번호 12 및 서열번호 14, 또는 서열번호 16 및 서열번호 18의 CDR은 인간 항체의 프레임워트 내로 삽입될 수 있다.

인간 항체는 파지 디스플레이 라이브러리(Hoogenboom & Winter, J MoI. Biol. 227:381 (1991); Marks et al, J. MoI. Biol. 222:581 (1991))를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 기법을 사용하여 제조될 수 있다. Cole et al. 및 Boerner et al.의 기법 또한 인간 모노클로날 항체의 제조에 사용가능하다(Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, p. 77 (1985) 및 Boerner et al., J. Immunol. 147(l):86-95 (1991)). 유사하게, 인간 항체는 인간 면역글로불린의 유전자 자리(loci)를 내인성 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 완전하게 불활성화된 트랜스제닉 동물, 예를 들어, 마우스 내로 도입함으로써 제조될 수 있다. 시도에 있어, 인간 항체 제조는 유전자 재배열, 조립, 및 항체 레퍼토리를 포함한 모든 측면에서 인간에서 나타나는 것과 매우 유사한 것으로 관찰되었다. 이러한 접근은 예를 들어, 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,661,016호 및 하기 과학적 공지문헌에 개시된다: Marks et al, Bio/Technology 10:779- 783 (1992); Lonberg et al, Nature 368:856-859 (1994); Morrison, Nature 368:812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14:845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14:826 (1996); Lonberg & Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995).

일부 구체예에서, 본 발명의 항체는 단일쇄 Fvs(scFvs)이다. scFv 항체의 V_H 및 V_L 영역 (예를 들어, 서열번호 12 및 서열번호14, 또는 서열번호 16 및 서열번호 18)은 2쇄 항체에서 발견되는 것과 유사하게 항원 결합 사이트를 형성하도록 접힌(folded) 단일쇄를 포함한다. 일단 접히면, 비공유결합 상호작용은 단일쇄 항체를 안정화시킨다. 일부 항체 구체예의 V_H 및 V_L 영역이 직접 함께 연결될 수 있는 반면, 당업자는 상기 영역들이 하나 이상의 아미노산으로 구성된 펩티드 링커(peptide linker)에 의해 분리될 수 있음을 이해할 것이다. 펩티드 링커 및 이들의 용도는 당업계에 공지되었다. 예를 들어, Huston et al, Proc. Nat'I Acad. Sci. USA 8:5879 (1988); Bird et al, Science 242:4236 (1988); Glockshuber et al, Biochemistry 29:1362 (1990); 미국 특허 제4,946,778호, 미국 특허 제5,132,405호 및 Stemmer et al, Biotechniques 14:256-265 (1993)를 참조할 것. 일반적으로 펩티드 링커는 영역을 연결하거나 V_H 및 V_L 사이의 특정 최소 거리 또는 다른 공간적 관계를 유지하는 것 외에는 특별한 생물학적 활성을 갖지 않을 것이다. 그러나, 펩티드 링커의 구성 아미노산은 분자의 일부 특성, 예를 들어, 접힘, 전체 전하, 또는 소수성에 영향을 주도록 선택될 수 있다. 단일쇄 Fv (scFv) 항체는 길이에 있어 50 아미노산 이하, 일반적으로 40 아미노산 이하, 바람직하게는 30 아미노산 이하, 그리고 더욱 바람직하게는 20 아미노산 이하의 펩티드 링커를 선택적으로 포함한다. 일부 구체예에서, 펩티드 링커는 서열 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (서열번호 23)의 콘카타머(concatamer), 바람직하게는 이러한 서열의 2, 3, 4, 5, 또는 6머이다. 그러나, 링커 내의 일부 아미노산 치환이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 발린은 글리신으로 치환될 수 있다.

scFv 항체를 제조하는 방법은 개시되었다. Huse et al, Science 246:1275-1281 (1989); Ward et al, Nature 341:544-546 (1989); 및 Vaughan et al, Nature Biotech. 14:309-314 (1996)을 참조할 것. 요약하면, 면역화된 동물의 B-세포로부터 mRNA가 분리되고 cDNA가 제조된다. 상기 cDNA는 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역에 특이성인 프라이머를 사용하여 증폭된다. PCR 생성물은 정제되고 핵산 서열이 결합된다. 링커 펩티드를 원하는 경우, 상기 펩티드를 인코딩하는 핵산 서열이 경쇄 및 중쇄 핵산 서열 사이에 삽입된다. scFv를 인코딩하는 핵산은 벡터 내로 삽입되고, 적절한 호스트 세포에서 발현된다. 목적하는 항원에 특이적으로 결합하는 scFv는 일반적으로 파지 디스플레이 라이브러리의 패닝에 의해 발견된다. 패닝은 임의의 여러 방법에 의해 수행될 수 있다. 패닝은 목적하는 항원을 표면에 발현하는 세포를 사용하여 또는 목적하는 항원으로 코팅된 고체 표면을 사용하여 편의에 따라 수행될 수 있다. 편의에 따라, 표면은 마그네틱 비드일 수 있다. 결합하지 않은 파지는 세척되어 고체 표면에서 제거되고, 결합 파지는 용리된다.

높은 결합성을 갖는 항체를 찾는 것은 선별 과정의 효율성에 영향을 받고, 스크린할 수 있는 클론의 수 및 수행의 엄격성(stringency)에 의존한다. 일반적으로, 더 높은 엄격성은 더욱 선택적인 패닝에 부합한다. 조건이 너무 엄격한 경우, 그러나, 파지는 결합하지 않을 것이다. 패닝의 일순환 후에, CCX-CKR2 코팅된 플레이트에 결합하는 파지 또는 CCX-CKR2를 표면에 발현하는 세포에 결합하는 파지가 E. coli에서 증식되어, 패닝의 다른 순환으로 가게 된다. 이러한 경우, 많은 접힘의 강화(enrichment)가 패닝의 3 순환에서 일어난다. 따라서, 각 순환의 강화가 낮은 경우에도, 다수의 패닝의 순환은 가장 큰 친화성의 드문 파지 및 이에 함유된 scFv를 인코딩하는 유전 물질 또는 파지에서 더 잘 발현되는 것의 분리를 가져올 것이다.

패닝 선택법에도 불구하고, 파지 디스플레이에 의해 제공되는 유전형과 표현형 사이의 물리적 연관은 cDNA 라이브러리의 모든 멤버가 항원과 결합하는지를 시험하는 것을 가능하게 하고, 심지어 클론의 큰 라이브러리와도 그러하다.

일부 구체예에서, 항체는 이중특이(bispecific) 항체이다. 이중특이 항체는 2 이상의 다른 항원에 대한 결합 특이성을 갖거나, 동일한 항원의 2개의 에피토프에 결합 특이성을 갖는 모노클로날 인간 또는 인간화 항체를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 결합 특이성의 하나는 CCK-CKR2 단백질에 대한 것이고, 다른 하나는 또 다른 암 항원에 대한 것이다. 대안으로, 테트라머형 기법은 다가(multivalent) 시약을 형성할 수 있다.

일부 구체예에서, 항체는 효과 모이어티(effector moiety)와 결합된다. 효과 모이어티는 검출가능한 표지 모이어티, 예를 들어, 방사선활성 표지 또는 형광 표지를 포함한 임의의 수의 분자일 수 있고, 또는 치료적 모이어티일 수 있다.

다른 구체예에서, 치료적 모이어티는 세포독성제이다. 이러한 방법에서, 세포독성제를 암 조직 또는 세포에 표적화하는 것은 영향받는 세포(afflicted cell)의 수를 감소시키는 결과를 가져와, 암과 연관된 증상을 감소시킨다. 세포독성제는 이에 한정되는 것은 아니나 세포독성 약물 도는 독소 또는 이러한 독소의 활성 프레그먼트를 포함하여 많고 다양하다. 적절한 독소 및 이에 상응하는 프레그먼트는 디프테리아 A 사슬, 엑소톡신 A 사슬, 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 커신, 크로틴, 페노마이신, 에노마이신, 아우리스타틴 등을 포함한다. 세포독성제는 또한 방사선 동위원소를 본 발명의 항체에 결합하여 제조한 방사선 화학물질을 포함한다.

II . 면역분석법

본 발명의 항체는 임의의 다양한 잘 알려진 면역 결합 분석을 사용하여 CCX-CKR2 또는 CCX-CKR2 발현 세포를 검출하는데 사용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,366,241호; 제4,376,110호; 제4,517,288호; 및 제4,837,168호를 참조). 일반적 면역분석법의 검토를 위해, Methods in Cell Biology, Vol. 37, Asai, ed. Academic Press, Inc. New York (1993); Basic and Clinical Immunology 7th Edition, Stites & Terr, eds. (1991)도 참조할 것.

따라서, 본 발명은 CCX-CKR2를 발현하는 세포를 검출하는 방법을 제공한다. 한 방법에서, 생검법이 환자에서 수행되고, 수집된 조직은 시험관 내에서 시험된다. 상기 조직 또는 조직으로부터의 세포는 그 후 본 발명의 항-CCX-CKR2 항체와 접촉된다. 생성된 임의의 면역 복합체가 생검된 시료 내에 CCX-CKR2 단백질이 존재함을 나타낸다. 이러한 검출을 촉진하기 위해, 항체는 방사선표지되거나 검출가능한 표지, 예를 들어, 형광 표지인 효과 분자와 결합될 수 있다. 다른 방법에서, 세포는 이미지 시스템을 사용하여 생체 내에서 검출될 수 있다. 그 후, 표지의 위치가 측정된다. 진단 이미지를 보기 위한 일반적 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 파라마그네틱 동위원소가 MRI에 사용될 수 있다. 순환 소실과 함께 세포외 효소적 환경에 의해 소실되기 쉬운 세포외 결합에 의해 제공되는 것을 넘어서, 항체의 내재화(internalization)가 유기체의 수명 연장에 중요할 수 있다.

CCX-CKR2 단백질은 또한 표준 면역분석법 및 본 발명의 항체를 사용하여 검출할 수 있다. 표준 방법은 예를 들어, 방사선면역분석, 샌드위치 면역분석(ELISA 포함), 면역형광 분석, 웨스턴 블롯, 친화성 크로마토그래피(고체상에 결합하는 친화성 리간드), 및 표지된 항체로의 제자리(in situ) 검출을 포함한다. 2차 검출제, 예를 들어, 염소항마우스(goat anti-mouse) FITC도 사용될 수 있다. 적용할 수 있는 기법의 일반적 개요는 Harlow & Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1988)에서 찾아볼 수 있다.

본 발명은 암의 진단 또는 예후 제공 방법을 비롯한 암세포의 검출 방법을 제공한다. 본원에서 기재되어 있는 바와 같이, CCX-CKR2는 현재까지 시험된 거의 모든 암세포에서 발현되는 반면, CCX-CKR2의 정상(비-암) 발현은 신장 및 일부 뇌 세포와 태아 간의 특정 발달 단계에만 국한되는 것으로 보인다. PCT/US04/34807 및미국 특허출원 제10/698,541호 및 제10/912,638호를 참조할 것. 따라서, 세포에서, 특히 비-태아 세포 및/또는 신장 세포 또는 뇌 세포 이외의 세포에서 CCX-CKR2의 발현은 암세포의 존재 가능성을 나타내는 것이다. 조직 혈관 내피의 CCX CKR2의 존재는 또한 암의 존재를 나타낼 수 있다. 일부 경우, CCX-CKR2 발현 세포를 함유하는 시료는 선행 기술에서 공지된 기타 방법을 사용하여 암세포의 존재를 재확인한다.

본 발명의 또다른 구체예에 따르면, 암에 걸리거나 걸린 것으로 생각되는 환자의 치료 과정의 선별 방법이 제공된다. 상기 방법은 환자로부터 생물학적 시료를 수득하고, 상기 시료를 CCX-CKR2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 프레그먼트과 접촉시키고, 항체 결합의 유무를 검출하며, 환자의 암에 적절한 치료 과정을 선별하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 치료는 본 발명의 CCX-CKR2 항체를 환자에게 투여하는 것이다.

본 발명은 암종, 신경아교종, 중피종, 흑색종, 림프종, 백혈병, 샘암종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 아교모세포종, 백혈병, 림프종, 전립선암, 및 버킷 림프종, 두경부암, 결장암, 결장직장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 식도암, 위암, 췌장암, 간담계암, 쓸개암, 소장암, 직장암, 신장암, 방광암, 전립선암, 음경암, 요도암, 고환암, 자궁경부암, 질암, 자궁암, 난소암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 이자 내분비암, 카르시노이드암, 뼈암, 피부암, 망막세포종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종(기타 암에 대하여 CANCER:PRINCTPEES AND PRACTICE (DeVita, V.T. et al . eds 1997) 참조); 뿐만 아미라 뇌 및 신경세포 기능장애, 예컨대 알츠하이머병 및 다발경화증; 신장 기능장애; 류마티스 관절염; 심장 동종이식 거부반응; 죽상경맥동화증; 천식; 사구체신염; 접촉 피부염; 염증성 창자병; 대장염; 건선; 재관류 손상; 뿐만 아니라 기타 본원에서 기재된 장애 및 질환을 포함하지만 이에 국한되는 것은 아닌 인간 질환의 진단 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 환자는 카포시 육종, 다발성 캐슬만씨병 또는 AIDS 관련 일차성 삼출 림프종을 갖지 않는다.

III . CCX - CKR2 의 조절자( modulator )

A. 케모카인 수용체의 조절자를 확인하는 방법

많은 상이한 스크리닝 프로토콜을 이용하여 세포에서, 특히 포유류 세포, 그리고 특히 사람 세포에서 CCX-CKR2의 활성 수준 또는 기능을 조절하는 물질을 확인할 수 있다. 일반적인 개념에서, 스크리닝 방법은 예를 들어, CCX-CKR2에 결합시키고, 본 발명 항체가 CCX-CKR2에 결합하거나 CCX-CKR2를 활성화시키는 것을 방지함으로써, CCX-CKR2(또는 이의 세포외 도메인)과 상호작용하는 물질을 확인하는, 다수의 물질을 스크리닝하는 것에 관련된다. 일부 구체예에서, 물질은 다른 단백질에 대한 상기 물질의 친화성의 적어도 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 50, 100, 300, 500 또는 1000 배의 친화성으로 CCX-CKR2에 결합한다.

1. 케모카인 수용체 결합 분석

일부 구체예에서, CCX-CKR2 조절자는 CCX-CKR2 폴리펩타이드에의 결합에 있어 본 발명의 항체와 경쟁하는 분자를 스크리닝함으로써 확인된다. 당업자는 경쟁 분석을 실시하는 방법이 많음을 인식할 것이다. 일부 구체예에서는, CCX-CKR2를 가진 시료를 표지된 본 발명의 항체(예를 들어, 적어도 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16 및/또는 서열번호 18의 CDR을 포함하는 항체)와 함께 예비 배양하고 이어서 잠재적인 경쟁자 분자와 접촉시킨다. 테스트 화합물의 존재 하에서 CCX-CKR2에 결합된 항체의 양의 변화(예, 감소)는 테스트 화합물이 잠재적인 CCX-CKR2 조절자임을 나타낸다.

CCX-CKR2에 결합할 수 있는 물질을 스크리닝함으로써 예비 스크린을 실시할 수 있는데 이는 그렇게 확인된 물질의 적어도 일부는 케모카인 수용체 조절자일 가능성이 있기 때문이다. 결합 분석은 대개 CCX-CKR2를 하나 이상의 테스트 물질과 접촉시키고 단백질과 테스트 물질이 결합 복합체를 형성하도록 충분한 시간을 허용하는 것을 포함한다. 형성된 임의의 결합 복합체는 많은 확립된 분석 기법을 이용하여 검출할 수 있다. 단백질 결합 분석은 면역조직화학 결합 분석, 유동 혈구계산, 방사성리간드 결합, 유로피움 표지된 리간드 결합, 비오틴 표지된 리간드 결합 또는 CCX-CKR2의 입체구조를 유지하는 다른 분석을 포함하며 이에 한정되지 않는다. 그러한 분석에 이용되는 케모카인 수용체는 자연 발현되거나, 클로닝되거나 합성될 수 있다. 결합 분석을 이용하여 효능제 또는 길항제를 확인할 수도 있다. 예를 들어, CCX-CKR2를 잠재적인 효능제와 접촉시키고 CCX-CKR2 활성을 측정함으로써, CCX-CKR2 활성을 자극하는 분자를 확인할 수 있다.

2. 세포와 시약

본 발명의 스크리닝 방법은 시험관내 또는 세포계(cell-based) 분석으로 실시될 수 있다. 시험관내 분석은 예를 들어, CCX-CKR2를 포함하는 막 분획 또는 전체 세포를 이용하여 실시된다. 세포계 분석은 CCX-CKR2가 발현되는 임의 세포에서 실시될 수 있다.

세포계 분석은 물질 결합 또는 물질에 의한 CCX-CKR2의 활성 조절을 스크린하기 위하여 CCX-CKR2를 함유하는 전체 세포 또는 세포 분획에 관련된다. 본 발명의 방법에 이용될 수 있는 예시적인 세포 타입은 예를 들어, 호중구, 단핵구, 대식세포, 호산구, 호염기구, 비만 세포, 및 T 세포와 B 세포와 같은 림프구와 같은 백혈구, 백혈병, 버키트 림프종, 종양 세포, 내피 세포, 혈관주위세포, 섬유모세포, 심장 세포, 근육 세포, 유방 종양 세포, 난소 암 암종, 자궁 암종, 아교모세포종, 간 세포, 신장 세포, 및 신경 세포와 같은 임의의 포유류 세포, 및 효모를 비롯한 진균 세포를 포함한다. 세포는 일차 세포 또는 종양 세포 또는 다른 타입의 불멸 세포주일 수 있다. 물론, CCX-CKR2는 CCX-CKR2의 내인성 버전을 발현하지 않는 세포에서 발현될 수 있다.

일부 경우에, 단백질 융합체뿐만 아니라, CCX-CKR2의 프레그먼트를 스크리닝에 이용할 수 있다. CCX-CKR2 리간드와 결합을 위해 경쟁하는 분자가 바람직한 경우, 이용되는 CCX-CKR2 프레그먼트는 본 발명의 항체와 결합할 수 있는 프레그먼트이다. 대안으로, CCX-CKR2의 임의 프레그먼트는 CCX-CKR2에 결합하는 분자를 확인하기 위하여 표적으로 사용될 수 있다. CCX-CKR2 프레그먼트는 예를 들어 20, 30, 40, 50 아미노산 이상의 임의 프레그먼트 내지 CCX-CKR2의 하나의 아미노산을 제외한 모두를 함유하는 단백질을 포함할 수 있다. 일반적으로, 리간드-결합 프레그먼트는 CCX-CKR2의 경막 영역 및/또는 CCX-CKR2의 세포외 도메인의 대부분 또는 모두를 포함할 것이다.

3. 시그널링 또는 부착 활성

일부 구체예에서, CCX-CKR2 활성화에 의해 야기되는 시그널링은 CCX-CKR2 조절자를 확인하기 위하여 이용된다. 케모카인 수용체의 시그널링 활성은 많은 방식으로 결정할 수 있다. 예를 들어, 시그널링은 케모카인 수용체-매개 세포 부착을 검출함으로써 결정할 수 있다. 케모카인과 케모카인 수용체 사이의 상호작용은 인테그린 친화성과 친화력의 변형을 통해 신속한 부착을 야기할 수 있다. 예를 들어, Laudanna, Immunological Reviews 186: 37-46 (2002)를 참조할 것.

또한 시그널링은 시클릭 AMP 또는 이노시톨 포스페이트와 같은 2차 메신저를 정성적으로 그리고 정량적으로 결정함으로써 측정할 수 있으며, 인산화 또는 탈인산화 사건 또한 모니터할 수 있다. 예를 들어, Premack, et al. Nature Medicine 2: 1174-1178 (1996) 및 Bokoch, Blood 86: 1649-1660 (1995)를 참조할 것.

또한, CCX-CKR2 활성화의 다운스트림의 다른 사건을 또한 모니터하여 시그널링 활성을 결정할 수 있다. 다운스트림 사건은 케모카인 수용체의 자극의 결과로서 발생하는 활성 또는 확대를 포함한다. 예시적인 다운스트림 사건은 예를 들어, 세포의 상태 변화(예, 정상에서 암 세포로 또는 암세포에서 비-암 세포로)를 포함한다. 세포 반응은 세포의 (예를 들어, 내피 세포에의) 부착을 포함한다. 혈관신생에 관련된 확립된 시그널링 캐스캐이드(예, VEGF-매개 시그널링)은 또한 CCX-CKR2 조절자에 의해 야기된 효과에 대해 모니터될 수 있다. 물질이 혈관신생을 촉진하는 능력은 Leung et al. (1989) Science 246: 1306-1309에 개시된 대로, 예를 들어, 병아리 융모요막에서 평가할 수 있다. 다른 방안은 Rastinejad et al. (1989) Cell 56: 345-355에 개시된 대로, 랫트 각막을 이용한 분석을 실시하는 것이다. 다른 분석은 미국 특허 제5,840,693호에 개시된다. 난소 혈관신생 모델을 또한 이용할 수 있다(예를 들어, Zimmerman, R. C., et al. (2003) J. Clin. Invest. 112: 659-669; Zimmerman, R. C., et al. (2001) Microvasc. Res. 62: 15-25; 및 Hixenbaugh, E. A., et al. (1993) Anat. Rec. 235: 487-500를 참조할 것).

다른 스크리닝 방법은 일부 조절 단백질의 발현이 CCX-CKR2의 존재 또는 활성화에 의해 유도되는 관찰에 기초한다. 그러한 단백질의 검출은 CCX-CKR2의 활성을 간접적으로 결정하기 위하여 이용될 수 있다. 일련의 ELISA 조사를 실시하여 CCX-CKR2로 형질감염된 세포와 미감염 세포를 위한 세포 배양 배지에서 다양한 분비된 단백질의 상대 농도를 비교하였다. 이들 연구를 통하여 CCX-CKR2가 성장 인자, 케모카인, 메탈로프로테이나제 및 메탈로프로테이나제의 억제자를 비롯한 다양한 조절 단백질의 생산을 야기함을 확인하였다. 따라서, 제공되는 스크리닝 방법의 일부는 테스트 물질이 CCX-CKR2에 의한 일부 성장 인자, 케모카인, 메탈로프로테이나제 및 메탈로프로테이나제의 억제자의 생산을 조절하는지 여부를 결정하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 분석은 한정된 혈청 조건 하에서 성장된 세포(또는 그 추출물)로 실시되며 이는 CCX-CKR2-유도된 단백질의 생산을 증가시키는 것으로 밝혀졌다.

하기의 단백질은 검출된 각종 종류의 단백질, 뿐만 아니라 각각의 종류에 속하는 특정 단백질의 예이다: (1) 성장 인자(예를 들어, GM-CSF); (2) 케모카인(예를 들어, RANTES, MCP-1); (3) 시토카인(예를 들어, IL-6) (4) 메탈로프로테이나제(예를 들어, MMP3); 및 (5) 메탈로프로테이나제의 억제제(예를 들어, TIMP-1). 이들 각종 종류에 속하는 기타 단백질도 검출할 수 있을 것으로 예측된다.

이들 특정 단백질은 당업자에게 공지된 표준 면역 검출 방법을 사용하여 검출할 수 있다. 고효율 포맷에서 사용하기에 적합한 하나의 방법은, 예를 들어 복수 웰 플레이트에서 수행되는 ELISA이다. TIMP-1을 검출하기 위한 ELISA 키트는 다코시토메이션(제품 번호 제EL513호)로부터 구입가능하다. IL-6 및 MMP3용 ELISA 키트는 R 및 D 시스템으로부터 얻을 수 있다. 상기 제시된 단백질에 특이적으로 결합하는 항체의 공급자의 추가의 예는 하기에 제시되어 있다. 효소인 메탈로프로테이나제와 같은 단백질은 공지된 효소 분석법에 의해 검출할 수도 있다.

기타 구체예에서, CCX-CKR2의 잠재적 조절자에 대하여 세포 부착을 조절하는 능력을 테스트한다. 내피 세포 단층에 대한 종양 세포의 부착은 전이 침윤의 모델로서 연구되어 있다(예를 들어, Blood and Zetter, Biovhem . Biophys . Acta , 1032, 89-119 (1990)를 참조). 이들 내피 세포의 단층은 림프 혈관계를 모의하며 각종 시토카인 및 성장 인자(즉, TNF알파 및 IL-베타)에 의해 자극될 수 있다. CCX-CKR2를 발현하는 세포가 상기 단층에 부착하는 능력은 정적 부착 분석뿐 아니라 세포가 생체내 혈관계의 힘을 모의하는 유동 조건 하에 있는 분석 모두에서 평가할 수 있다. 또한, 유착을 평가하기 위한 테스트는 생체내에서도 수행할 수 있다(예를 들어, von Andrian, U.H. 　Microcirculatiorm . 3(3):287-300 (1996)를 참조할 것).

4. 확인

전술한 스크리닝 방법 중 임의의 방법에 의해 최초로 확인된 물질이 명백한 활성을 보유하는지를 확인하기 위해 추가로 테스트할 수 있다. 바람직하게는 이러한 연구는 적당한 동물 모델을 사용하여 수행한다. 이러한 방법의 기본 포맷은 인간에 대한 모델 역할을 하는 동물에게 최초 스크리닝 중에 동정된 선도 화합물을 투여하는 단계 및 그 후 질환(예를 들어, 암)이 실제로 조절되는지 및/또는 질환 또는 증상이 개선되는지를 판단하는 단계를 포함한다. 유효성 확인 연구에 사용되는 동물 모델은 일반적으로 임의 종류의 포유동물이다. 적합한 동물의 구체적인 예로는 영장류, 마우스, 랫트 및 제브라피시(zebrafish)가 있으나 이에 국한되는 것은 아니다.

일부 구체예에서, 관절염 동물 모델을 이용하여 CCX-CKR2를 조절하는 물질을 스크린하고/하거나 치료 용도를 확인한다. 예시적인 관절염 동물 모델은 예를 들어, 콜라겐-유도된 관절염(CIA) 동물 모델을 포함한다.

B. CCX - CKR2 와 상호작용하는 물질

CCX-CKR2의 조절자(예, 길항제 또는 효능제)는 예를 들어, 항체(선행기술에서 공지된 모노클로날 결합 단백질, 인간화 결합 단백질 또는 공지의 다른 타입의 결합 단백질), 작은 유기 분자, siRNA, CCX-CKR2 폴리펩티드 또는 그 변이체, 케모카인(SDF-1 및/또는 I-TAC를 포함하지만 한정되지 않음), 케모카인 모의체, 케모카인 폴리펩티드 등을 포함할 수 있다.

CCX-CKR2의 조절자로 테스트되는 물질은 폴리펩티드, 당, 핵산 또는 지질과 같은 임의의 작은 화합물 또는 생물학적 실체일 수 있다. 대안으로, 조절자는 케모카인 또는 기타 리간드의 유전자 변형된 버전, 또는 펩티드모의체 버전일 수 있다. 일반적으로, 테스트 화합물은 작은 화학적 분자 및 펩티드일 것이다. 본질적으로 임의의 화합물은 본 발명의 분석에서 잠재적인 조절자 또는 리간드로 이용될 수 있으나, 수용액 또는 유기(특히, DMSO-계) 용액에 용해될 수 있는 화합물이 이용된다. 분석은 분석 단계를 자동화하고 임의의 편리한 공급원으로부터 분석에 화합물을 제공함으로써 큰 화학 라이브러리를 스크린하도록 설계되며, 대개 여러 분석이 평행하게 실시된다(예, 로봇 분석에서 미세적정 플레이트에서 미세적정 포맷으로). 시그마(St. Louis, MO), 알드리치 (St. Louis, MO), 시그마-알드리치 (St. Louis, MO), 플루카 케미카-바이오케미카 어낼리티카(Buchs, Switzerland) 등을 비롯한 많은 화합물 공급사가 있다.

일부 구체예에서, 상기 물질은 1,500 달톤보다 작은 분자량을 가지며, 일부 경우에는 1,000, 800, 600, 500 또는 400 달톤 미만의 분자량을 가진다. 상대적으로 작은 크기의 물질이 바람직할 수 있으며 이는 보다 작은 분자가 분자량이 높은 분자보다 경구 흡수를 비롯한 우수한 약동력학적 특징과 양립할 수 있는 물리화학적 특성을 가질 가능성이 높기 때문이다. 예를 들어, 투과성 및 용해도에 기초할 때 약물로 성공적일 가능성이 적은 물질은 하기와 같이 Lipinski et al.에 의해 개시되었다: 5 개를 초과하는 H-결합 공여체를 가짐(OH와 NH의 합으로 표현됨); 500을 넘는 분자량을 가짐; 5를 넘는 LogP를 가짐(또는 4.15를 넘는 MLogP); 및/또는 10개를 초과하는 H-결합 수용체(N과 O의 합으로 표현됨)를 가짐. 예를 들어, Lipinski et al. Adv Drug Delivery Res 23: 3-25 (1997)를 참조할 것. 생물학적 수송자의 기질인 화합물 클래스는 대개 규칙에 대해 예외이다.

하나의 구체예에서, 고처리량 스크리닝 방법은 많은 잠재적인 치료 화합물(잠재적인 조절자 또는 리간드 화합물)을 함유한 조합 화학 또는 펩티드 라이브러리를 제공하는 것을 포함한다. 그러한 "조합 화학 라이브러리" 또는 "리간드 라이브러리"를 이어서 본원에서 개시된 대로 하나 이상의 분석에서 스크린하여 원하는 특징적인 활성을 나타내는 이들 라이브러리 구성원(구체적인 화학 종 또는 하위부류)을 확인한다. 이렇게 확인된 화합물은 종래의 "선도 화합물"로 작용하거나 그 자체가 잠재적인 또는 실제 치료제로 이용될 수 있다.

조합 화학 라이브러리는 많은 화학 "빌딩 블록"을 배합함으로써, 화학적 합성 또는 생물학적 합성에 의해 생성된 다양한 화학적 화합물의 집합이다. 예를 들어, 폴리펩티드 라이브러리와 같은 선형 조합 화학 라이브러리는 주어진 화합물 길이(즉, 폴리펩티드 화합물 내의 아미노산의 수)에 대해 모든 가능한 방식으로 화학적 빌딩 블록(아미노산) 세트를 배합함으로써 형성된다. 수많은 화학적 화합물을 화학적 빌딩 블록의 그러한 조합 혼합을 통해 합성할 수 있다.

조합 화학 라이브러리의 준비 및 스크리닝은 당업계에 공지되어 있다. 그러한 조합 화학 라이브러리는 펩티드 라이브러리를 포함하며 이에 한정되지 않는다(미국 특허 제5,010,175호, Furka, Vint. J. Pept. Prot. Res. 37: 487-493 (1991) 및 Houghton et al., Nature 354: 84-88 (1991)를 참조). 화학적 다양성 라이브러리를 생산하는 다른 화학을 이용할 수 있다. 그러한 화학은 펩토이드(예, PCT 공개 WO 91/19735호), 암호화된 펩티드(예, PCT 공개 WO 93/20242호), 랜덤 바이오-올리고머(예, PCT 공개 WO 92/00091호), 벤조디아제핀(예, 미국 특허 제5,288,514호), 히단토인, 벤조디아제핀 및 디펩티드와 같은 디버소머(diversomer)(Hobbs et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 90: 6909-6913 (1993)), 비닐성 폴리펩티드 (Hagihara et al., J. Amer. Chem. Soc. 114: 6568 (1992)),글루코스 스캐폴딩을 가지는 비펩티드성 펩티드모의체(Hirschmann et al., J. Amer. Chem. Soc. 114: 9217-9218 (1992)), 작은 화합물 라이브러리의 유사한 유기 합성(Chen et al., J. Amer. Chem. Soc. 116: 2661 (1994)), 올리고카바메이트 (Cho et al, Science 261: 1303 (1993)), 및/또는 펩티딜 포스포네이트(Campbell et al., J Org. Chem. 59: 658 (1994)), 핵산 라이브러리 (상기한 Ausubel, Berger 및 Sambrook 참조), 펩티드 핵산 라이브러리 (예, 미국 특허 제5,539,083호 참조), 항체 라이브러리(예, Vaughn et al., Nature Biotechnology, 14 (3): 309-314 (1996) 및 PCT/US96/10287호 참조), 탄수화물 라이브러리(예, Liang et al, Science, 274: 1520-1522 (1996) 및 미국 특허 제5,593,853호 참조), 작은 유기 분자 라이브러리(예, 벤조디아제핀, Baum C & EN, Jan 18, page 33 (1993); 이소프레노이드, 미국 특허 제5,569,588호; 티아졸리디논 및 메타티아자논, 미국 특허 제5,549,974호; 피롤리딘, 미국 특허 제5,525,735호 및 제5,519,134호; 모르폴리노 화합물, 미국 특허 제5,506,337호; 벤조디아제핀, 미국 특허 제5,288,514호 등)을 포함하며 이에 한정되지 않는다.

조합 라이브러리의 제조를 위한 장치는 시판된다(예, 357 MPS, 390 MPS, Advanced Chem Tech, Louisville KY, Symphony, Rainin, Woburn, MA, 433A Applied Biosystems, Foster City, CA, 9050 Plus, Millipore, Bedford, MA). 또한, 많은 조합 라이브러리 자체가 시판된다(예, ComGenex, Princeton, N. J., Tripos,Inc., St. Louis, MO, 3D Pharmaceuticals, Exton, PA, Martek Biosciences, Columbia, MD 등).

IV . CCX - CKR2 의 암, 혈관신생 및 다른 생물학적 양상

본 발명의 항체는 시험관 내, 생체 내, 또는 생체 외(즉, 생체에서 제거되고, 처리되고, 그리고 생체로 되돌려짐)에서 CCX-CKR2를 발현하는 세포와 접촉할 수 있다. 본 발명의 항체는 생체 내에서 케모카인 수용체 활성을 조절하기 위해 포유류 환자에 직접 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 SDFl 및/또는 I-TAC와 CCX-CKR2에의 결합에 있어 경쟁한다. 본 발명의 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및 서열번호 14, 또는 서열번호 16 및 서열번호 18의 CDR에 의해 결합된 에피토프와 같이 동일한 에피토프를 인식한다. 일부 구체예에서, 상기 항체는 서열번호 12 및/또는 서열번호 14, 또는 서열번호 16 및/또는 서열번호 18을 포함한다.

일부 구체예에서, CCX-CKR2 항체는 암 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, CCX-CKR2 조절자는 암, 예를 들어, 암종, 신경아교종, 중피종, 흑색종, 림프종, 백혈병, 샘암종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 아교모세포종, 백혈병, 림프암, 전립선암, 및 버킷 림프종, 두경부암, 결장암, 결장직장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 식도암, 위암, 췌장암, 간담계암, 쓸개암, 소장암, 직장암, 신장암, 방광암, 전립선암, 음경암, 요도암, 고환암, 자궁경부암, 질암, 자궁암, 난소암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 이자 내분비암, 카르시노이드암, 뼈암, 피부암, 망막세포종, 홉킨스 림프종, 비홉킨스 림프종(기타 암에 대하여 CANCER:PRINCTPEES AND PRACTICE (DeVita, V.T. et al . eds 1997)를 참조); 뿐만 아니라 뇌 및 신경세포 기능장애, 예컨대 알츠하이머병 및 다발경화증; 신장 기능장애; 류마티스 관절염; 심장 동종이식 거부반응; 죽상경맥동화증; 천식; 사구체신염; 접촉 피부염; 염증성 창자병; 대장염; 건선; 재관류 손상; 뿐만 아니라 기타 본원에서 기재된 장애 및 질환을 치료하기 위해 투여된다. 일부 구체예에서, 환자는 카포시 육종, 다발성 캐슬만씨병 또는 AIDS 관련 일차성 삼출 림프종을 갖지 않는다.

본 발명은 또한 본 발명의 항체를 이를 필요로 하는 임의의 환자에게 투여함으로써 혈관신생을 감소시키는 것을 포함한다. 예를 들어, CCX-CKR2를 본 발명의 항체와 접촉시킴으로써 CCX-CKR2 활성을 감소시키고, 이에 따라 혈관신생을 감소시키는 것은 암, 특히 고형암의 형성, 성장 및/또는 전이를 저해하는데 유용하다. 조절된 CCX-CKR2 및 혈관신생과 관련한 구체예의 설명은 예를 들어, 미국 특허 출원 제11/050,345호에 개시된다.

원하지 않거나 문제가 되는 혈관신생과 관련된 기타 장애는 류마티스 관절염; 건선; 눈 혈관신생성 질환, 예를 들어, 당뇨성 망막증, 미숙아망막증, 황반변성, 각막 이식 거부, 신생혈관 녹내장, 수정체후부섬유 증식증, 피부홍조; 오슬러-웨버 증후군(Osler-Webber Syndrome); 심근 혈관신생; 혈전 신생혈관증식; 모세혈관확장증; 출혈성 관절; 혈관섬유종; 장유착을 포함한 내피 세포의 과도한 또는 비정상적 자극 질환, 크론병, 피부 질환, 예를 들어, 건선, 엑세마(excema), 및 공피증, 당뇨, 당뇨성 망막증, 미숙아망막증, 연령관련황반변성, 죽삭동맥경화증, 공피증, 상처 과립화 및 비후성 반흔, 즉, 켈로이드를 포함하고, 고양이 스크래치 및 궤양(헬리코박터 파이로리)과 같은 병리 결과로서 혈관신생을 갖는 질환도 본 발명의 항체로 치료할 수 있다. 혈관신생 저해제는 유착, 특히, 절개 또는 복강경 외과 수술 후의 결과로 나타나는 것과 같은 복강내 또는 골반 유착, 및 항문 수축을 방지하거나 저해하는데 사용될 수 있다. 혈관신생 저해제를 사용하여 효과적으로 치료되기 위한 다른 조건은 이식 후의 흉터, 간경화, 급성 호흡곤란 증후군 후의 폐섬유증 또는 기타 신생아 폐섬유증, 일시적 인공물의 이식, 및 뇌 및 경질막 사이의 외과 수술 후의 유착의 방지를 포함한다. 자궁내막증, 폴립증, 심장 비대 뿐만 아니라, 비만도 혈관신생의 저해로 치료할 수 있다. 이러한 장애는 정상 조직의 다른 형태의 크기 증가 또는 성장, 예를 들어, 자궁 섬유, 전립선 비대증 및 아밀로이드증과 관련될 수 있다. 본 발명의 항체는 본 명세서에 언급한 임의의 장애 또는 질환에 예방적으로 또는 치료적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 항체로 CCX-CKR2 활성을 감소시키는 것은 신생혈관증식을 방지하여 효과적으로 장애가 있는 호스트를 치료하는데 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 혈관신생을 감소시키는 것은 혈관 질환(예를 들어, 혈관종(hemangiomas) 및 동맥경화반 내의 모세혈관 증식), 근육 질환(예를 들어, 심근 혈관신생, 심근 경색증 또는 평활근 내의 혈관 신생), 관절질환(예를 들어, 관절염, 출혈성 관절 등), 및 기타 혈관신생과 연관된 장애의 치료의 일부로 사용될 수 있다. 혈관신생의 증가는 다양한 생리학적 과정을 촉진하는데 도움이 될 수 있고, 혈관신생의 증가를 필요로 하는 질환의 치료, 예를 들어, 상처, 골절, 및 화상, 염증 질환, 허혈성 심장, 및 말초 혈관 질환의 치유에 도움이 될 수 있다.

본 발명의 항체는 상처 치유를 향상시키는데 사용될 수도 있다. 특정 활성 매커니즘으로 본 발명을 한정하려는 의도는 아니나, CCX-CKR2의 길항작용은 내인성 리간드가 낮은 친화성의 수용체에 대신 결합하게 하여, 상처 치유의 향상을 촉진하는 것으로 생각된다. 예를 들어, SDF-I은 CCX-CKR2 및 CXCR4 모두에 결합하나, CXCR4에 더 낮은 친화성으로 결합한다. 유사하게, I-TAC는 I-TAC가 CCX-CKR2에 결합하는 것보다 낮은 친화성으로 CXCR3에 결합한다. 이러한 리간드의 CCX-CKR2에의 결합을 저해함으로써, CCX-CKR2 길항제는 리간드가 다른 수용체에 결합할 수 있게 하여, 상처 치유를 향상시킬 수 있다. 따라서, 상처 치유를 향상시키는 CCX-CKR2의 길항작용은 효능제로 CCX-CKR2 활성을 촉진함으로써 상처 치유를 향상시키는 이외의 다른 메커니즘에 의해 매개될 수 있다.

신생혈관증식과 관련된 장애 및 증상은 별도로 하고, 혈관신생의 저해는 신생혈관증식과 관련된 일반적 생리적 조건의 발생을 조절하거나 방지하는데 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 본 발명의 방법은 출산 조절에 사용될 수 있다. 본 발명에 따라, 난소 또는 자궁 내막 내의 CCX-CKR2 활성의 감소는 배란, 배아 이식, 태반 형성 등과 관련된 신생혈관증식을 약화시킬 수 있다.

혈관신생 저해제는 또 다른 치료적 용도를 갖는다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 하기와 같이 사용될 수 있다:

(a) 지방 조직 제거 및 비만의 치료. 예를 들어, Kolonin et al., Nature Medicine 10(6):625-632 (2004)를 참조;

(b) 프리클람시아(preclampsia)의 치료. 예를 들어, Levine et at, N. Engl. J. Med. 350(7): 672-683 (2004); Maynard, et al., J. Clin. Invest. 111(5): 649-658 (2003)를 참조; 및

(c) 심혈관 질환의 치료. 예를 들어, March, et al., Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 287:H458-H463 (2004); Rehman et al, Circulation 109: 1292-1298 (2004)를 참조.

V. 투여 및 약학적 조성물

본 발명의 약학적 조성물은 예를 들어, 본 발명의 항체 및 약학적 허용 담체를 포함할 수 있다. 약학적 허용 담체는 부분적으로는 투여할 특정 조성물에 의하여 결정할 수 있을 뿐만 아니라 이 조성물의 투여에 사용되는 특정 방법에 의해 결정된다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물의 광범위한 적절한 제제가 존재한다(예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., 1985를 참조).

투여에 적합한 제제로서 수용액 또는 비수용액, 항산화제, 완충제, 정균제, 및 제제에 등장성을 부여하는 용질을 함유할 수 있는 등장성 무균 용액, 및 현탁제, 안정화제, 증점제, 안정화제, 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 무균 현탁액을 들 수 있다. 본 발명의 실시에 있어서, 조성물은, 예를 들어, 경구, 코, 국소, 정맥 내, 복막 내, 피하, 또는 경막 내 투여될 수 있다. 화합물 제제는 단위 투여 또는 다중 투여용 밀봉 용기, 예컨대 앰플 및 바이알로 존재할 수 있다. 용액 및 현탁액은 무균의 분말, 과립, 및 앞서 기술한 종류의 정제로부터 제조할 수 있다.

조성물은 주입 펌프, 예를 들어, 특정 기관 또는 종양에 인슐린 또는 화학요법제를 전달하는데 사용되는 종류를 사용하여 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 주사기 또는 캐시터를 사용하여 종양 내로 또는 절제 전후의 주 종양 위치에 직접 주입되거나; 주 종양의 절제 후 전신적으로 주입될 수 있다. 본 발명의 조성물은 필요에 따라 국지적으로 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 오랜 국소 투여에 있어, 상기 항체는 종양 부위에 제어 방출 이식 주입으로 투여될 수 있다. 대안으로, 개체의 세포가 본 발명의 항체를 발현하도록 생체 외에서 플라스미드로 트랜스펙션되고, 이어서 종양 부위에 주입될 수 있다. 피부 조건의 국지적 치료에 있어서, 효소 항체는 연고 또는 겔로 피부에 투여될 수 있다.

일부 구체예에서, 본 발명의 CCX-CKR2 항체는 다른 적절한 치료제, 예컨대 화학요법제, 방사선 등과 함께 투여할 수 있다. 조합 치료에서 사용하기에 적절한 물질의 선별은 통상의 약학적 원리에 따라 당업자에 의해 이루어진다. 치료제의 조합은 각종 장애, 예컨대 암, 상처, 신장 기능장애, 뇌 기능장애 또는 신경세포 기능장애의 치료 또는 예방에 상승적 효과를 나타낼 것이다. 이러한 접근을 사용하여, 각 물질의 작은 투여량으로 치료 효과를 달성함으로써 부작용의 가능성을 감소시킬 수 있다.

본 발명의 문맥에서, 환자에게 투여하는 양은 일정 시간에 걸쳐 환자에게 유익한 반응을 가져오기에(예를 들어, 종양 크기 또는 종양 하중을 감소시키기에) 충분한 양이어야 한다. 임의의 환자에 대한 최적의 투여 수준은 다양한 인자, 예컨대 사용하는 특정 조절자의 효능, 나이, 체중, 물리 활성, 및 환자의 식이, 기타 약물과의 가능한 조합, 및 특정 질환의 심각성에 따라 다를 것이다. 또한, 투여 크기는 특정 환자에서 특정 화합물 또는 벡터의 투여에 수반되는 해로운 부작용의 유무, 특성, 및 정도에 의해 결정될 것이다.

투여할 항체의 유효량을 결정하는 데 있어서, 의사는 항체의 순환 혈장 수준, 항체의 독성, 및 항-항체 항체의 생성을 평가할 수 있을 것이다. 일반적으로, 항체의 투여 등가량은 통상의 환자에서 약 1 ng/kg ∼ 10 mg/kg이다.

투여를 위하여, 환자의 질량 및 전체 건강을 고려하는 바와 같이, 본 발명의 항체는 항체의 LD-50, 및 각종 농도에서의 항체의 부작용에 따라 결정한 속도로 투여할 수 있다. 수혜자의 면역 시스템에 의한 항체의 소실도 적절한 투여 용량에 영향을 미칠 수 있다. 투여는 단일 투여 또는 분할 투여를 통해 수행할 수 있다.

본 발명의 항체를 함유하는 조성물은 치료용 또는 예방용으로 투여될 수 있다. 치료적 적용에서, 조성물은 치료하기에 충분한 양으로 또는 적어도 부분적으로 질환 및 이의 합병증을 정지시키기에 충분한 양, 예를 들어, 종양의 크기를 감소시키는 등에 충분한 양으로 질환(예를 들어, 암, 관절염 또는 기타 CCX-CKR2-관련 장애 또는 질환)으로 고통받는 환자에게 투여된다. 이를 달성하기에 적절한 양을 "치료적 유효량"으로 정의한다. 이렇게 사용하기에 유효한 양은 질환의 심각도 및 환자 건강의 일반적 상태에 의존할 것이다. 본 조성물의 단일 또는 다수 투여는 환자에 따라 요구되거나 견딜 수 있는 용량 및 빈도에 의존하여 투여될 수 있다. 어떤 경우에도, 조성물은 본 발명의 물질의 충분한 양을 제공하여, 효과적으로 환자를 치료하여야 한다. 포유류에서 암의 발달을 방지하거나 늦출 수 있는 조절자의 양은 "예방적 유효량"으로 나타낸다. 예방적 처치에 필요한 특정량은 의학적 조건 및 포유류의 히스토리, 특히 암이 방지되었는지 여부, 뿐만 아니라 나이, 몸무게, 성, 투여 경로, 효과 등과 같은 기타 요인에 의존할 것이다. 이러한 예방적 처치는 예를 들어, 이전에 암을 가졌던 포유류에서 암의 재발생을 방지하기 위해, 또는 발달하는 암 등을 가질 가능성이 있는 것으로 예상되는 포유류에 사용될 수 있다.

VI . 조합 치료

본 발명의 항체는 단독으로 또는 하나 이상의 다른 약물과 함께 제공될 수 있다. 가능한 조합 상대는 예를 들어, 추가 항-혈관신생 인자 및/또는 화학요법제(예를 들어, 세포독성제) 또는 방사선, 암 백신, 면역조절제, 항-신생혈관증식제, 신호 전달 저해제, 항증식제, 또는 아폽토시스 유도제를 포함할 수 있다.

본 발명의 항체는 인테그린 결합(integrin engagement)을 차단하는 항체 및 펩티드, 메탈로프로테이나제를 저해하는 단백질 및 소분자(예를 들어, 마미스타트(marmistat)), 내피 세포 내의 인산화 캐스캐이드를 차단하는 물질(예를 들어, 헤르바마이신(herbamycin)), 혈관신생 유도제로 알려진 도미넌트 네거티브 수용체, 혈관신생 유도제 또는 이의 활성을 차단하는 기타 화합물에 대한 항체(예를 들어, 수마린), 또는 다른 방법으로 작동하는 기타 화합물(예를 들어, 레티노이드, IL-4, 인터페론 등)과 함께 사용될 수 있다. 실제로, 이러한 요인들이 다른 메커니즘으로 혈관신생을 조절할 수 있는 것과 같이, 다른 항혈관신생제와 조합으로 본 발명의 항체를 사용하는 것은 목적하는 조직 내의 혈관신생의 저해 능력을 (가능하다면 상승적으로) 더욱 높일 수 있다.

항혈관신생제, 예를 들어, MMP-2(매트릭스-메탈로프로테이나제 2) 저해제, MMP-9(매트릭스-메탈로프로테이나제 9) 저해제, 및 COX-II(사이클로옥시게나제 II) 저해제는 본 명세서에 언급된 본 발명의 항체 및 약학적 조성물과 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 항-CCX-CKR2 항체는 또한 신호 전달 저해제, 예를 들어, EGFR(표피 성장 인자 수용체) 반응을 저해할 수 있는 물질, 예를 들어, EGFR 항체, EGF 항체, 및 EGFR 저해제인 분자; VEGF(혈관 내피세포 증식 인자) 저해제, 예를 들어, VEGF 수용체 및 VEGF를 저해할 수 있는 분자; 및 erbB2 수용체 저해제, 예를 들어, erbB2 수용체에 결합하는 유기 분자 또는 항체, 예를 들어, HERCEPTDSf^TM (Genentech, Inc. of South San Francisco, Calif, USA)과 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 항-CCX-CKR2 항체는 또한 혈관신생 및/또는 상처 치유를 촉진하는 약물을 포함한 다른 약물과 혼합될 수 있다. 조성물이 혈관신생이 요구되는 목적하는 부위에 적용되는 경우, 하나 이상의 의학외과수술적으로 유용한 물질 또는 치료제, 예를 들어, 더욱 혈관신생 반응을 강화할 수 있는 것, 및/또는 치유 과정을 촉진하고 및/또는 유리하게 변형시킬 수 있는 것을 혼입할 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 예를 들어, 혈관신생, 회복 및/또는 조직 성장을 더욱 촉진하기 위해, 예를 들어, 섬유아세포 성장 인자, 혈소판 유도 성장 인자, 대식세포 유도 성장 인자 등을 포함한 하나 이상의 다양한 호르몬, 성장 인자 또는 유사분열촉진 단백질이 상기 조성물 내에 포함될 수 있다. 또한, 항미생물제, 예를 들어, 겐타마이신 설페이트, 또는 에리스로마이신과 같은 항생제가 상기 조성물 내에 포함될 수 있다. 기타 의학외과수술적으로 유용한 물질은 항염증제, 진통제, 마취제, 루비파시언트(rubifacient), 효소, 항히스타민제 및 염료를 포함할 수 있다.

본 발명의 항-CCX-CKR2 항체는 또한 관절염 치료 약물을 포함한 다른 약물과 혼합될 수 있다. 이러한 물질의 예는 항염증 치료제를 포함한다. 예를 들어, 글루코코티코스테로이드, 예를 들어, 프레드니솔론 및 메틸프레드니솔론은 종종 항염증 약물로 사용된다. 비스테로이드성 항염증 약물(NSAID) 또한 염증을 낮추는데 사용된다. NSAID는 염증 부위에서 과도하게 생성되는 프로스타글란딘의 생성의 핵심인 사이클로옥시게나제(COX) 효소, COX-I 및 COX-2를 저해한다. 또한, 염증 촉진 사이토카인, 종양 괴사 인자 α(TNFα)는 관절염을 포함한 다수의 염증 반응과 연관되고, 항-TNFα치료가 임상적으로 사용된다.

VII . 진단 및/또는 예방적 적용에 사용되는 키트

상기 제안된 진단, 연구, 및 치료용으로 사용하기 위해, 키트가 또한 본 발명에 의해 제공된다. 진단 및 연구용에서, 이러한 키트는 임의의 또는 모든 하기의 것을 포함할 수 있다: 분석 시약, 버퍼, 및 본 발명의 항-CCX-CKR2 항체. 치료용 생성물은 멸균 식염수 또는 다른 약학적으로 허용 가능한 에멀젼 및 서스펜젼 베이스를 포함할 수 있다.

또한, 상기 키트는 본 발명의 방법의 실시를 위한 설명(즉, 프로토콜)을 포함한 설명 재료를 포함할 수 있다. 설명 재료는 일반적으로 쓰여진 또는 인쇄된 물질이나, 이에 한정되지는 않는다. 이러한 설명을 보관할 수 있고 이를 최종 소비자에게 전달할 수 있는 어떤 매체도 본 발명에 고려된다. 이러한 매체는 전자적 저장 매체(예를 들어, 마그네틱 디스크, 테이프, 카트리지, 칩), 광학 매체(예를 들어, CD 롬) 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 매체는 이러한 설명 재료를 제공하는 인터넷 사이트 주소를 포함할 수 있다.

G-단백질 결합 수용체(GPCR)에 대한 항체의 제조는 어렵다는 것이 알려져 있다. 본 발명자는 캐나다 특허 출원 CA 2 350 078에 개시된 Genovac AG, DE의 방법을 사용하였다. CCX-CKR2와 결합하는 항체는 마우스를 CCX-CKR2(서열번호 1)를 발현하는 cDNA로 접종함으로써 제조하였다. 요약하면, CCX-CKR2는 발현 벡터 내에서 클로닝되고, 마우스는 유전자 총 방법으로 상기 벡터로 접종하였다. 적절한 시간에, B 세포를 분리하고, 골수 세포와 표준 기법으로 융합하고, 융합된 하이브리도마 세포를 시험관 내 배양에서 선택하였다. 클론 배양으로부터의 상등액과 CCX-CKR2로 안정하게 트랜스펙션된 세포와의 결합을 유세포 분석기(flow cytometry)로 분석하였다. 포지티브 클론을 증식시키고 유세포 분석기 스크리닝의 추가적 순환을 행하였다.

모노클로날 항체 6E10 및 11G8가 CCX-CKR2에 결합하는 것이 확인되었다. 항체 6E10 및 11G8는 내인적으로 CCX-CKR2를 발현하는 세포, 예를 들어, HeLa 및 MCF-7(ATCC, VA) 뿐만 아니라 내인적으로 CCX-CKR2를 생성하지 못하는 트랜스펙션된 세포주에서도 CCX-CKR2를 검출하였다. 또한, 상기 항체는 CCX CKR2의 마우스 동 족체(homolog)를 인식할 수 있었다. 예를 들어, 항체 6E10 및 11G8는 마우스 유방 종양 세포주 및 루이스 폐암 세포(ATCC, Va)에서 CCX-CR2를 검출하였다. 아이소타입 대조군이 아닌 항체 6E10 및 11G8가 CCX-CKR2로 트랜스펙션된 HEK 293 세포주에서 검출되었으나, 빈 벡터 또는 다른 케모카인 수용체(예를 들어, CXCR2)를 발현하는 것으로 트랜스펙션된 HEK 293 세포에는 결합하지 않았다.

상기 항체는 또한 방사선리간드 경쟁적 결합 분석으로 검증된 바와 같이 중화된다. 항체 6E10 및 11G8 모두는 마우스 및 인간 CCX-CKR2에 결합하는데 있어 SDF-I 및 I-TAC와 경쟁한다. 항체 11G8는 일반적으로 항체 6E10보다 높은 퍼센트의 케모카인 결합의 저해를 나타냈다.

항체 6El0 및 11G8는 또한 고정 파라핀 삽입 조직 단면 위의 면역조직화학(IHC) 분석법에서 CCX-CKR2를 인식한다. 다양한 조직 타입에서의 실험에서, 항체6E10 및 11G8로의 IHC 염색은 각각의 조직에서 방사선표지된 SDF 또는 I- TAC를 혼입하는 결합 분석으로 측정되는 발현 패턴과 일치한다. 예를 들어, CCX-CKR2 염색은 E13 태아 마우스의 단면에서 발견되나, E17 태아 또는 성인 마우스에서는 발견되지 않는다. CCX CKR2 염색은 또한 인간 CCX-CKR2를 안정하게 발현하는 세포의 사이토스핀(cytospin)에서 볼 수 있다.

중쇄 및 경쇄 가변 영역 코딩 서열, 및 예측된 아미노산 서열을 결정하였다. 6E10의 중쇄 가변 영역은 서열번호 12(서열번호 ll에 의해 인코딩됨)에 포함된다. 6E10의 경쇄 가변 영역은 서열번호 14(서열번호 13에 의해 인코딩됨)에 포함된다. 11G8의 중쇄 가변 영역은 서열번호 16(서열번호 15에 의해 인코딩됨)에 포함된다. 11G8의 경쇄 가변 영역은 서열번호 18(서열번호 17에 의해 인코딩됨)에 포함된다.

본 발명이 이해의 명확성을 위해 설명 및 실시예로써 자세히 기술되었지만, 첨부되는 청구항의 진의 또는 범주를 벗어나지 않는 한, 특정 변화 및 변형이 이루어질 수 있음은 본 발명의 교시에 있어 당업자에게 매우 명백할 것이다.

본 명세서에 언급된 모든 문헌, 데이터베이스, 진뱅크 서열, 특허, 및 특허 출원은 각각 특별하게 그리고 개별적으로 참조로서 결부된 것과 같이 본 명세서에 결부된다.

서열 목록

서열번호 1 CCX-CKR2 코딩 서열

서열번호 2 CCX-CKR2 아미노산 서열

서열번호 3 CCX-CKR2.2 코딩 서열

서열번호 4 CCX-CKR2.2 아미노산 서열

서열번호 5 CCX-CKR2.3 코딩 서열

서열번호 6 CCX-CKR2.3 아미노산 서열

서열번호 7 CCX-CKR2.4 코딩 서열

서열번호 8 CCX-CKR2.4 아미노산 서열

서열번호 9 CCX-CKR2.5 코딩 서열

서열번호 10 CCX-CKR2.5 아미노산 서열

서열번호 11 항체 6E10 중쇄 가변 영역의 DNA 서열

서열번호 12 항체 6E10 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열

서열번호 13 항체 6E10 경쇄 가변 영역의 DNA 서열

서열번호 14 항체 6E10 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열

서열번호 15 항체 11G8 중쇄 가변 영역의 DNA 서열

서열번호 16 항체 11G8 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열

서열번호 17 항체 11G8 경쇄 가변 영역의 DNA 서열

서열번호 18 항체 11G8 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열

SEQUENCE LISTING <110> Howard, Maureen Schall, Thomas ChemoCentryx, Inc. <120> Reagents That Bind CCX-CKR2 <130> 019934-005610PC <140> Not yet assigned <141> Not yet assigned <150> US 60/674,140 <151> 2005-04-21 <160> 23 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 1089 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> G-protein coupled receptor (GPCR) CCX-CKR2 (RDC1) cDNA <400> 1 atggatctgc atctcttcga ctactcagag ccagggaact tctcggacat cagctggcca 60 tgcaacagca gcgactgcat cgtggtggac acggtgatgt gtcccaacat gcccaacaaa 120 agcgtcctgc tctacacgct ctccttcatt tacattttca tcttcgtcat cggcatgatt 180 gccaactccg tggtggtctg ggtgaatatc caggccaaga ccacaggcta tgacacgcac 240 tgctacatct tgaacctggc cattgccgac ctgtgggttg tcctcaccat cccagtctgg 300 gtggtcagtc tcgtgcagca caaccagtgg cccatgggcg agctcacgtg caaagtcaca 360 cacctcatct tctccatcaa cctcttcggc agcattttct tcctcacgtg catgagcgtg 420 gaccgctacc tctccatcac ctacttcacc aacaccccca gcagcaggaa gaagatggta 480 cgccgtgtcg tctgcatcct ggtgtggctg ctggccttct gcgtgtctct gcctgacacc 540 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Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 Val Val Trp Val Asn Ile Gln Ala Lys Thr Thr Gly Tyr Asp Thr His 65 70 75 80 Cys Tyr Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ala Asp Leu Trp Val Val Leu Thr 85 90 95 Ile Pro Val Trp Val Val Ser Leu Val Gln His Asn Gln Trp Pro Met 100 105 110 Gly Glu Leu Thr Cys Lys Val Thr His Leu Ile Phe Ser Ile Asn Leu 115 120 125 Phe Gly Ser Ile Phe Phe Leu Thr Cys Met Ser Val Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 Ser Ile Thr Tyr Phe Thr Asn Thr Pro Ser Ser Arg Lys Lys Met Val 145 150 155 160 Arg Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 Phe Ser Ile Ile Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys 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Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 Phe Ser Ile Val Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys 355 360 <210> 7 <211> 1089 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> G-protein coupled receptor (GPCR) CCX-CKR2.4 coding sequence <400> 7 atggatctgc atctcttcga ctactcagag ccagggaact tctcggacat cagctggcca 60 tgcaacagca gcgactgcat cgtggtggac acggtgatgt gtcccaacat gcccaacaaa 120 agcgtcctgc tctacacgct ctccttcatt tacattttca tcttcgtcat cggcatgatt 180 gccaactccg tggtggtctg ggtgaatatc caggccaaga ccacaggcta tgacacgcac 240 tgctacatct tgaacctggc cattgccgac ctgtgggttg tcctcaccat cccagtctgg 300 gtggtcagtc tcgtgcagca caaccagtgg cccatgggcg agctcacgtg caaagtcaca 360 cacctcatct tctccatcaa cctcttcggc agcattttct tcctcacgtg catgagcgtg 420 gaccgctacc tctccatcac ctacttcacc aacaccccca gcagcaggaa gaagatggta 480 cgccgtgtcg tctgcatcct ggtgtggctg ctggccttct gcgtgtctct gcctgacacc 540 tactacctga agaccgtcac gtctgcgtcc aacaatgaga cctactgccg gtccttctac 600 cccgagcaca gcatcaagga gtggctgatc ggcatggagc tggtctccgt tgtcttgggc 660 tttgccgttc ccttctccat tatcgctgtc ttctacttcc tgctggccag agccatctcg 720 gcgtccagtg accaggagaa gcacagcagc cggaagatca tcttctccta cgtggtggtc 780 ttccttgtct gctggctgcc ctaccacgtg gcggtgctgc tggacatctt ctccatcctg 840 cactacatcc ctttcacctg ccggctggag cacgccctct tcacggccct gcatgtcaca 900 cagtgcctgt cgctggtgca ctgctgcgtc aaccctgtcc tctacagctt catcaatcgc 960 aactacaggt acgagctgat gaaggccttc atcttcaagt actcggccaa aacagggctc 1020 accaagctca tcgatgcctc cagagtctca gagacggagt actctgcctt ggagcagagc 1080 accaaatga 1089 <210> 8 <211> 362 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> G-protein coupled receptor (GPCR) CCX-CKR2.4 <400> 8 Met Asp Leu His Leu Phe Asp Tyr Ser Glu Pro Gly Asn Phe Ser Asp 1 5 10 15 Ile Ser Trp Pro Cys Asn Ser Ser Asp Cys Ile Val Val Asp Thr Val 20 25 30 Met Cys Pro Asn Met Pro Asn Lys Ser Val Leu Leu Tyr Thr Leu Ser 35 40 45 Phe Ile Tyr Ile Phe Ile Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 Val Val Trp Val Asn Ile Gln Ala Lys Thr Thr Gly Tyr Asp Thr His 65 70 75 80 Cys Tyr Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ala Asp Leu Trp Val Val Leu Thr 85 90 95 Ile Pro Val Trp Val Val Ser Leu Val Gln His Asn Gln Trp Pro Met 100 105 110 Gly Glu Leu Thr Cys Lys Val Thr His Leu Ile Phe Ser Ile Asn Leu 115 120 125 Phe Gly Ser Ile Phe Phe Leu Thr Cys Met Ser Val Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 Ser Ile Thr Tyr Phe Thr Asn Thr Pro Ser Ser Arg Lys Lys Met Val 145 150 155 160 Arg Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 Phe Ser Ile Ile Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys 355 360 <210> 9 <211> 1089 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> G-protein coupled receptor (GPCR) CCX-CKR2.5 coding sequence <400> 9 atggatctgc atctcttcga ctactcagag ccagggaact tctcggacat cagctggccg 60 tgcaacagca gcgactgcat cgtggtggac acggtgatgt gtcccaacat gcccaacaaa 120 agcgtcctgc tctacacgct ctccttcatt tacattttca tcttcgtcat cggcatgatt 180 gccaactccg tggtggtctg ggtgaatatc caggccaaga ccacaggcta tgacacgcac 240 tgctacatct tgaacctggc cattgccgac ctgtgggttg tcctcaccat cccagtctgg 300 gtggtcagtc tcgtgcagca caaccagtgg cccatgggcg agctcacgtg caaagtcaca 360 cacctcatct tctccatcaa cctcttcagc agcattttct tcctcacgtg catgagcgtg 420 gaccgctacc tctccatcac ctacttcacc aacaccccca gcagcaggaa gaagatggta 480 cgccgtgtcg tctgcatcct ggtgtggctg ctggccttct gcgtgtctct gcctgacacc 540 tactacctga agaccgtcac gtctgcgtcc aacaatgaga cctactgccg gtccttctac 600 cccgagcaca gcatcaagga gtggctgatc ggcatggagc tggtctccgt tgtcttgggc 660 tttgccgttc ccttctccat tatcgctgtc ttctacttcc tgctggccag agccatctcg 720 gcgtccagtg accaggagaa gcacagcagc cggaagatca tcttctccta cgtggtggtc 780 ttccttgtct gctggttgcc ctaccacgtg gcggtgctgc tggacatctt ctccatcctg 840 cactacatcc ctttcacctg ccggctggag cacgccctct tcacggccct gcatgtcaca 900 cagtgcctgt cgctggtgca ctgctgcgtc aaccctgtcc tctacagctt catcaatcgc 960 aactacaggt acgagctgat gaaggccttc atcttcaagt actcggccaa aacagggctc 1020 accaagctca tcgatgcctc cagagtctca gagacggagt actccgcctt ggagcagagc 1080 accaaatga 1089 <210> 10 <211> 362 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> G-protein coupled receptor (GPCR) CCX-CKR2.5 <400> 10 Met Asp Leu His Leu Phe Asp Tyr Ser Glu Pro Gly Asn Phe Ser Asp 1 5 10 15 Ile Ser Trp Pro Cys Asn Ser Ser Asp Cys Ile Val Val Asp Thr Val 20 25 30 Met Cys Pro Asn Met Pro Asn Lys Ser Val Leu Leu Tyr Thr Leu Ser 35 40 45 Phe Ile Tyr Ile Phe Ile Phe Val Ile Gly Met Ile Ala Asn Ser Val 50 55 60 Val Val Trp Val Asn Ile Gln Ala Lys Thr Thr Gly Tyr Asp Thr His 65 70 75 80 Cys Tyr Ile Leu Asn Leu Ala Ile Ala Asp Leu Trp Val Val Leu Thr 85 90 95 Ile Pro Val Trp Val Val Ser Leu Val Gln His Asn Gln Trp Pro Met 100 105 110 Gly Glu Leu Thr Cys Lys Val Thr His Leu Ile Phe Ser Ile Asn Leu 115 120 125 Phe Ser Ser Ile Phe Phe Leu Thr Cys Met Ser Val Asp Arg Tyr Leu 130 135 140 Ser Ile Thr Tyr Phe Thr Asn Thr Pro Ser Ser Arg Lys Lys Met Val 145 150 155 160 Arg Arg Val Val Cys Ile Leu Val Trp Leu Leu Ala Phe Cys Val Ser 165 170 175 Leu Pro Asp Thr Tyr Tyr Leu Lys Thr Val Thr Ser Ala Ser Asn Asn 180 185 190 Glu Thr Tyr Cys Arg Ser Phe Tyr Pro Glu His Ser Ile Lys Glu Trp 195 200 205 Leu Ile Gly Met Glu Leu Val Ser Val Val Leu Gly Phe Ala Val Pro 210 215 220 Phe Ser Ile Ile Ala Val Phe Tyr Phe Leu Leu Ala Arg Ala Ile Ser 225 230 235 240 Ala Ser Ser Asp Gln Glu Lys His Ser Ser Arg Lys Ile Ile Phe Ser 245 250 255 Tyr Val Val Val Phe Leu Val Cys Trp Leu Pro Tyr His Val Ala Val 260 265 270 Leu Leu Asp Ile Phe Ser Ile Leu His Tyr Ile Pro Phe Thr Cys Arg 275 280 285 Leu Glu His Ala Leu Phe Thr Ala Leu His Val Thr Gln Cys Leu Ser 290 295 300 Leu Val His Cys Cys Val Asn Pro Val Leu Tyr Ser Phe Ile Asn Arg 305 310 315 320 Asn Tyr Arg Tyr Glu Leu Met Lys Ala Phe Ile Phe Lys Tyr Ser Ala 325 330 335 Lys Thr Gly Leu Thr Lys Leu Ile Asp Ala Ser Arg Val Ser Glu Thr 340 345 350 Glu Tyr Ser Ala Leu Glu Gln Ser Thr Lys 355 360 <210> 11 <211> 449 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 6E10 heavy chain variable region <400> 11 atgtacttgg gactgagctg tgtattcatt gtttttctct taaaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgaagctgg atgagactgg aggaggcttg gtgcaacctg ggaggcccat gaaactctcc 120 tgtgttgcct ctggattcac ttttagtgac tactggatga actgggtccg ccagtctcca 180 gaaaaaggac tggagtgggt aggacaaatt agaaacaaac cttataatta tgaaacatat 240 tattcagatt ctgtgaaagg cagattcacc atctcaagag atgattccaa aagtagtgtc 300 tacctgcaaa tgaacaactt aagaactgaa gacacgggta tctactactg tacatcctta 360 cgttactggg gccaaggaac tctggtcact gtctctgcag ccaaaacgac acccccatcc 420 gtgtatcctg tggcccctgg aagcttggg 449 <210> 12 <211> 149 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 6E10 heavy chain variable region <400> 12 Met Tyr Leu Gly Leu Ser Cys Val Phe Ile Val Phe Leu Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asp Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Gly Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr 65 70 75 80 Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser 85 90 95 Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Thr 100 105 110 Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Leu Arg Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 115 120 125 Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Val 130 135 140 Ala Pro Gly Ser Leu 145 <210> 13 <211> 439 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 6E10 light chain variable region <400> 13 atggtcctca tgtccttgct gttctgggta tctggtacct gtggggacat tgtgatgaca 60 cagtctccat cctccctgac tgtgacagca ggagagaagg tcactatgag ctgcaagtcc 120 agtcacagtc tgttaaacag tggaattcaa aagaacttct tgacctggta tcaacagaaa 180 ccagggcagc ctcctaaagt attgatctac tgggcattca ctagggaatc tggggtccct 240 gaacgcttca caggcagtgg atctggaaca gatttcactc tcaccatcag tagtgtgcag 300 gctgaagacc tggcagttta ttactgtcag agtgattata cttatccatt cacgttcggc 360 tcggggacaa agttggaaat aaaacgggct gatgctgcac caactgtatc catcttccca 420 ccatccagta agcttgggg 439 <210> 14 <211> 146 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 6E10 light chain variable region <400> 14 Met Val Leu Met Ser Leu Leu Phe Trp Val Ser Gly Thr Cys Gly Asp 1 5 10 15 Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu 20 25 30 Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser His Ser Leu Leu Asn Ser Gly 35 40 45 Ile Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro 50 55 60 Pro Lys Val Leu Ile Tyr Trp Ala Phe Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro 65 70 75 80 Glu Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 85 90 95 Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Ser Asp 100 105 110 Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 115 120 125 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Lys 130 135 140 Leu Gly 145 <210> 15 <211> 463 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 11G8 heavy chain variable region <400> 15 atggagttgg ggttaaactg ggttttcctt gtccttgttt taaaaggtgt ccagtgtgaa 60 gtgaagctgg tggagtctgg gggagacttg gtccagcctg gagggtccct gaaactctcc 120 tgtgcaacct ctggattcac tttcagtgac tattacatgt tttgggttcg ccagactcca 180 gagaagaggc tggagtgggt cgcatacatt actaatgggg gtgatagaag ttattattca 240 gacactgtaa cgggccgatt catcatctcc agagacaatg ccaagaacac cctgtatctg 300 caaatgagcc gtctgaagtc tgaggacaca gccatgtatt actgtgcaag acaagggaac 360 tgggccgcct ggtttgttta ttggggccaa gggactctgg tcactgtttc tgcagccaaa 420 acgacacccc catccgttta tcccttggcc cctggaagct tgg 463 <210> 16 <211> 154 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 11G8 heavy chain variable region <400> 16 Met Glu Leu Gly Leu Asn Trp Val Phe Leu Val Leu Val Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asp Tyr Tyr Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Tyr Ile Thr Asn Gly Gly Asp Arg Ser Tyr Tyr Ser 65 70 75 80 Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Arg Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Asn Trp Ala Ala Trp Phe Val Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro 130 135 140 Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Leu 145 150 <210> 17 <211> 447 <212> DNA <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 11G8 light chain variable region <400> 17 atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc caccagtgat 60 gttttgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120 tcttgcagat ctagtcacta tattgtacat agtgacggaa acacctattt agagtggtac 180 ctgcagaaac caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240 ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300 agagtggagg ctgaggatct gggaatttat tactgctttc aaggttcaca tgttccgctc 360 acgttcggtg ctgggaccaa gctggagctg aaacgggctg atgctgcacc aactgtatcc 420 atcttcccac catccagtaa gcttggg 447 <210> 18 <211> 149 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 11G8 light chain variable region <400> 18 Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala 1 5 10 15 Ser Thr Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val 20 25 30 Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser His Tyr Ile 35 40 45 Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys 100 105 110 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Ser Lys Leu Gly 145 <210> 19 <211> 99 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 6E10 heavy chain variable region complementarity determining region (CDR) <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(30) <223> framework region 1 (FR1) <220> <221> PEPTIDE <222> (31)..(35) <223> complementarity determining region 1 (CDR1) <220> <221> PEPTIDE <222> (36)..(49) <223> framework region 2 (FR2) <220> <221> PEPTIDE <222> (50)..(68) <223> complementarity determining region 2 (CDR2) <220> <221> PEPTIDE <222> (69)..(99) <223> framework region 3 (FR3) <400> 19 Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Ile Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr <210> 20 <211> 101 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 6E10 light chain variable region complementarity determining region (CDR) <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(23) <223> framework region 1 (FR1) <220> <221> PEPTIDE <222> (24)..(40) <223> complementarity determining region 1 (CDR1) <220> <221> PEPTIDE <222> (41)..(55) <223> framework region 2 (FR2) <220> <221> PEPTIDE <222> (56)..(62) <223> complementarity determining region 2 (CDR2) <220> <221> PEPTIDE <222> (63)..(94) <223> framework region 3 (FR3) <400> 20 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser His Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Ile Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Val Leu Ile Tyr Trp Ala Phe Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Glu Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Ser 85 90 95 Asp Tyr Thr Tyr Pro 100 <210> 21 <211> 98 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 11G8 heavy chain variable region complementarity determining region (CDR) <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(30) <223> framework region 1 (FR1) <220> <221> PEPTIDE <222> (31)..(35) <223> complementarity determining region 1 (CDR1) <220> <221> PEPTIDE <222> (36)..(49) <223> framework region 2 (FR2) <220> <221> PEPTIDE <222> (50)..(66) <223> complementarity determining region 2 (CDR2) <220> <221> PEPTIDE <222> (67)..(98) <223> framework region 3 (FR3) <400> 21 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Thr Asn Gly Gly Asp Arg Ser Tyr Tyr Ser Asp Thr Val 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Arg Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 22 <211> 100 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <223> mouse monoclonal antibody 11G8 light chain variable region complementarity determining region (CDR) <220> <221> PEPTIDE <222> (1)..(23) <223> framework region 1 (FR1) <220> <221> PEPTIDE <222> (24)..(39) <223> complementarity determining region 1 (CDR1) <220> <221> PEPTIDE <222> (40)..(54) <223> framework region 2 (FR2) <220> <221> PEPTIDE <222> (55)..(61) <223> complementarity determining region 2 (CDR2) <220> <221> PEPTIDE <222> (62)..(93) <223> framework region 3 (FR3) <400> 22 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser His Tyr Ile Val His Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro 100 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:peptide linker <400> 23 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5

Claims (26)

1. 경쟁자 항체(competitor antibody)가 CCX-CKR2에 결합하는 것을 경쟁적으로 저해하는 항체로서, 상기 경쟁자 항체는

   서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

   서열번호 16 및 서열번호 18

   의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 것인 항체.
2. 제1항에 있어서, 상기 항체가 검출가능한 표지에 결합된 것인 항체.
3. 제1항에 있어서, 모노클로날 항체인 항체.
4. 제1항에 있어서, 인간화 항체(humanized antibody)인 항체.
5. 제1항에 있어서, 서열번호 12 및 서열번호 14의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 것인 항체.
6. 제1항에 있어서, 서열번호 12 및 서열번호 14를 포함하는 것인 항체.
7. 제1항에 있어서, 서열번호 16 및 서열번호 18의 상보성 결정 영역(CDR)을 포 함하는 것인 항체.
8. 제1항에 있어서, 서열번호 16 및 서열번호 18을 포함하는 것인 항체.
9. 약학적으로 허용 가능한 부형제 및 제1항의 항체를 포함하는 약학적 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체인 약학적 조성물.
11. 제9항에 있어서, 상기 항체가 인간화 항체인 약학적 조성물.
12. 제9항에 있어서, 상기 항체가 서열번호 12 및 서열번호 14의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 것인 약학적 조성물.
13. 제9항에 있어서, 상기 항체가 서열번호 12 및 서열번호 14를 포함하는 것인 약학적 조성물.
14. 제9항에 있어서, 상기 항체가 서열번호 16 및 서열번호 18의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 것인 약학적 조성물.
15. 제9항에 있어서, 상기 항체가 서열번호 16 및 서열번호 18을 포함하는 것인 약학적 조성물.
16. 생물학적 시료에서 CCX-CKR2를 발현하는 세포를 검출하는 방법으로서, 상기 방법은 생물학적 시료를 제1항의 항체와 접촉시키는 단계 및 상기 항체의 존재를 검출하는 단계를 포함하는 것인 방법.
17. 암 세포의 혈관신생 또는 증식을 저해하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제1항의 항체와 접촉시키는 단계를 포함하는 것인 방법.
18. 제17항에 있어서, 상기 세포가 개체 내에 존재하는 것인 방법.
19. 제18항에 있어서, 상기 개체는 관절염이 있거나 또는 관절염에 걸린 적이 있는 것인 방법.
20. 제18항에 있어서, 상기 개체가 인간이 아닌 것인 방법.
21. (a) CCX CKR2 폴리펩티드 발현 세포 또는 상기 세포의 추출물을 테스트 시약과 혼합하는 단계; 및

    (b) 상기 테스트 시약이 CCX CKR2 폴리펩티드와의 결합에 있어 경쟁자 항체와 경쟁하는지 여부를 검출하는 분석을 수행하는 단계

    를 포함하는 CCX CKR2의 조절자를 확인하는 방법으로서,

    상기 경쟁자 항체는

    서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

    서열번호 16 및 서열번호 18

    의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하고,

    CCX-CKR2 폴리펩티드와의 결합에 있어서 경쟁자 항체와 테스트 시약 간의 경쟁은 상기 테스트 시약이 CCX CKR2 활성의 조절자임을 나타내는 것인, CCX CKR2의 조절자를 확인하는 방법.
22. CCX-CKR2 활성을 조절하는 테스트 시약의 효과를 테스트하는 방법으로서, 상기 방법은

    (a) 제1 동물에게 테스트 시약을 투여하는 단계;

    (b) CCX CKR2 폴리펩티드와의 결합에 있어서 경쟁자 항체와 경쟁하는 항체를 제2 동물에게 투여하는 단계로서, 상기 경쟁자 항체가

    서열번호 12 및 서열번호 14; 또는

    서열번호 16 및 서열번호 18

    의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 것인 단계; 및

    (c) 제1 동물에서의 테스트 시약의 효과를 제2 동물에서의 항체의 효과와 비교함으로써 테스트 시약의 효과를 결정하는 단계를 포함하는 것인, CCX-CKR2 활성을 조절하는 테스트 시약의 효과를 테스트하는 방법.
23. 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18을 포함하는 폴리펩티드.
24. 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
25. 제24항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드가 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 또는 서열번호 17을 포함하는 것인 폴리뉴클레오티드.
26. 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 또는 서열번호 18로부터의 상보성 결정 영역(CDR)의 하나 이상을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 항체의 중쇄 또는 경쇄의 적어도 프레임워크 영역을 인코딩하는 이종(heterologous) 폴리뉴클레오티드에 작동가능하도록 연결하여, 항체의 키메릭 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하는 융합(fusion) 폴리뉴클레오티드를 형성하는 단계; 및

    상기 융합 폴리뉴클레오티드로부터 키메릭 중쇄 또는 경쇄를 발현시키는 단계

    를 포함하는 것인 키메릭 항체(chimeric antibody)를 제조하는 방법.

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