KR20070118450A

KR20070118450A - 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20070118450A
Application number: KR1020060052615A
Authority: KR
Inventors: 류종훈; 김선여; 오혜림; 현성예; 이승주; 김동현; 김현수; 박호재; 정재성
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2006-06-12
Filing date: 2006-06-12
Publication date: 2007-12-17

Abstract

본 발명은 지모(Anemarrhenae rhizoma) 추출물을 유효성분으로 하고 통상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하여 이루어진 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 뇌신경계의 손상으로 인한 허혈성 뇌졸중에 대한 예방 또는 치료 작용 효과를 나타낸다.

지모, 뇌졸중, 뇌세포 보호, 뇌손상

Description

허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 조성물{Composition for prevention or protecting brain cells and treating ischemic brain stroke}

도 1은 실시예1에서 얻은 지모 추출물과 실시예 2에서 획득한 지모 추출물의 물: MeOH(1:5) 분획물을 이용한 허혈성 뇌졸중 보호효과를 관찰한 결과이며 MCI-186은 양성대조군으로 사용한 약물을 의미한다.

도 2는 실시예 3에서 얻은 n-BuOH 분획물을 이용한 허혈성 뇌졸중 보호효과를 관찰한 결과이며 MCI-186은 양성대조군으로 사용한 약물을 의미한다.

도 3은 실시예 4에서 얻은 anemarsaponin B(Compound AA)를 이용한 허혈성 뇌졸중 보호효과를 관찰한 결과이다.

도 4는 Anemarrhena asphodeloides으로부터 anemarrsaponin B를 단리하는 과정의 모식도이다.

도 5는 anemarrsaponin B의 구조이다.

본 발명은 지모 추출물을 유효성분으로 하는 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

최근 신경계는 비면역성 기관 (immune privileged organ)이라는 기존의 학설과는 달리 다발성 경화증(multiple sclerosis), 외상, 알쯔하이머 질환(Alzheimer's disease), 뇌허혈 및 각종 뇌손상 등의 신경 질환시에 중추신경계 내에서도 염증반응이 나타나며 이는 신경퇴행을 야기하는 주요 원인 중의 하나임이 보고되고 있다.

뇌졸중으로 발생하는 뇌신경 세포 손상의 원인이 과도한 흥분성 신경 전달 물질의 유리, 자유 라디칼(free radical)의 생성, 단백질 합성의 저해, 유전자 발현 이상 및 면역반응의 활성화 등으로 설명될 수 있으나, 아직까지 뇌신경세포 손상기전의 복잡성 등으로 뇌졸중으로 발생하는 뇌신경세포의 손상을 보호해 줄 수 있는 치료제가 개발되어 있지 못한 실정이다. 따라서 뇌허혈로 인한 신경계의 손상을 보호할 수 있는 물질의 개발은 작용 목표가 다양할 수밖에 없고, 그 평가 방법 또한 시험관내 시험(in vitro test)에서 생체내 시험(in vivo test)까지 다양하게 연구되고 있으나, 생약이 가지는 특수성 등으로 인하여 시험관내 시험에서는 효과가 있으나 생체내 시험에서 효과가 없는 경우가 매우 많은 실정이다.

이러한 이유로 인해, 천연물을 이용한 뇌허혈과 같은 뇌손상 보호 작용을 가 지는 물질의 개발은 반드시 시험관내 시험 및 생체내 시험이 동시에 진행되어야 할 것이다.

뇌허혈에서 시클로옥시게나아제-2 (COX-2)의 억제는 PGE₂(Prostaglandin E₂)의 생성 억제 및 이로 인한 글루타메이트의 유리억제로 뇌신경세포 보호작용을 가진다고 보고하면서, 관절염이나 통증을 호소하는 많은 사람들이 이미 COX-2 억제제들을 복용하고 있기 때문에 이러한 환자들에 있어서 뇌졸중 발병률 등에 대한 역학적 조사가 이루어진다면 향후 뇌졸중의 예방 및 치료제의 개발에 새로운 목표가 될 수 있을 것으로 보고하고 있어 관심을 유도하고 있다. [이아데콜라 등, Iadecola, C. et al., PNAS ., 30, p1294-1299, 2001 참조]

한편, 중추신경계 내에서도 염증반응이 나타나며 이는 신경퇴행을 야기하는 주요 원인중의 하나임이 보고되고 있어, 뇌허혈 후의 염증 반응은 새로운 뇌허혈 치료제의 목표가 될 것으로 보이며, 이러한 치료제는 세포 독성 물질들의 유리에 관여하는 효소들을 억제하거나, 호중구(neutrophil)의 침착을 억제하는 약물들로 구성될 것으로 사료된다 (디르나글 등, Dirnagl, U., Iadecola, C., and Moskowitz, M.A., TINS., 22, 391-397, 1999).

아울러 뇌조직으로 침투된 호중구에서 NO(nitric oxide)를 유리할 수 있는 iNOS(inducible nitric oxide synthase)가 유도되며, 유도된 iNOS로부터 NO가 유리되어 뇌세포 손상을 초래한다고 알려져 있으며, 글루타메이트에 의한 NMDA(N-methyl-D-aspartate) 수용체의 활성화에 의한 신경독성 또한 NO를 경유한 것이라고 보고되어 있어 iNOS 발현 억제 등과 관련된 뇌신경 보호제의 개발이 기대되고 있다(Vaughan CJ, Delanty N., Stroke 30:1969-73, 1999).

한편, 뇌졸중은 크게 두가지로 나뉘는데, 뇌조직으로 가는 혈액 공급의 감소 혹은 차단으로 뇌조직의 허혈상태로 발생하는 허혈성 뇌졸중 (ischemic stroke)과 혈관이 터져 뇌조직으로 출혈을 일으키는 출혈성 뇌졸중 (hemorrhagic stroke)으로 구분하고 있다. 허혈성 뇌졸중은 전체뇌졸중 환자의 약 80% 정도를 차지하며, 동맥경화에 의해 뇌혈관이 좁아져 뇌혈관 폐색으로 뇌에 혈액 공급이 중단되어 발생하는 경우, 심장 등에서 혈전 등이 생성되어 뇌혈관을 차단함으로써 발생되는 경우 등이 있다.

한편, 지모는 백합과 (Liliaceae)에 속한 다년생 초본인 지모 Anemarrhena asphodeloides Bunge의 근경을 건조한 것을 지칭하며, 그 형태는 대피한 건조 근경으로 약간 편평하고 장조상을 이루며, 길이 3~15 cm, 지름 5~15 mm 로 약간 만곡되어 있고 때로는 분지로 되어 있다. 근두부에는 천황색의 엽흔과 경흔이 잔류되어 있는데 이를 금포두라고 한다. 상면에는 함몰된 한 개의 종구가 있는데 환상절이 밀접하여 배렬되어 있고 마디 위에는 금황색의 편평한 섬모가 이 밀생하여 있다. 아랫면에는 요함 혹은 돌기된 점상의 근흔이 있다. 질은 단단하고 쉽게 절단되며, 단면은 황백색으로 평탄하다. 엑스 수준으로는 항당뇨 작용, 혈소판 응집 억제 효과, 위암 세포 억제 효과 등이 알려져 있으며, 한의약학에서는 자음강화, 윤조활장. 치번열소갈, 골증노열 등에 응용된다고 알려져 있으며 (본초학, 영림사, 서울, 2000. 지모 참조), 그 성분으로 주로 saponin이 함유되어 있다. 근경에는 총 saponin 약 6%가 함유되어 있는데 여기에서 6종류의 saponin 즉 timosaponin A-I, timosaponin A-II, timosaponin A-III, timosaponin A- IV, timosaponin B-I, timosaponin B-II가 검출된다. 그 중에서 timosaponin A-III는 sarasasaponin과 timoniose 즉 β-glucose(1→2), β-galactos가 결합하여 된 saponin이다. timosaponin A-I는 sarasapogenin의 β-d-galactopyranoside이다. 근경 중에 함유된 sapogenin은 주로 sarasapogenin 인데 건조된 근의 함유량은 약 0.5%이다. 이 외에 markogenin, neogitogenin 등이 함유되어 있다. 근경에는 또 다량의 환원당, 점액질, tannin 산, 지방유 등이 함유되어 있다. 또 1g당 nicotine 산 188μg, nicotin amide 12μg이 함유되어 있는 것으로 보고되고 있으나 본 생약이 허혈성 뇌졸중에 사용된다는 보고는 없다.

카나메 (Kaname) 등 (Kaname et al., Clin . Chim . Acta, 295, 129-140, 2000)은 timosaponin E1과 E2가 혈소판 응집 억제 효과를 가진다고 보고한 바 있고 anemarsaponin B는 시험관내 실험에서 혈소판 활성인자로 유도된 혈소판 응집을 억제한다고 보고되고 있다 (Dong, et al., Planta Med. 57, 460-462, 1991). 그러나 상기 연구에 단순한 혈소판 응집을 억제한다는 보고이지 지모의 추출물이 뇌허혈에 효과가 있을 것이라는 것은 전혀 시사되어 있지 않다.

대한민국특허 출원번호 제 1996-0030941호 (1998.04.30 공개)에는 지모 추출물이 면역억제 효과가 있다고 보고되어 있으며, 또한 대한민국 출원번호 제 2000-7003288호(1999. 04. 08 국제공개)에는 지모의 성분인 anemarsaponin을 이용한 치 매 치료제 등이 예시되어 있는데, 상기 특허문헌의 어디에도 지모 추출물 및 그 성분의 뇌허혈 보호 효과는 전혀 예시되어 있지 않다.

이에 본 발명자는 지모가 뇌허혈에도 효과가 있을 것이라는 가정 하에 연구한 결과, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 뇌세포 보호효과 및 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료효과를 나타내는 약학조성물 및 건강보조식품을 제공한다.

상기 목적에 따라, 지모(Anemarrhenae rhizoma) 추출물을 유효성분으로 하고 통상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하여 이루어진 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 지모 추출물은 물 추출물, 저급알코올 추출물 또는 이를 분획한 분획물 또는 단리된 anemarsaponin B인 것이 바람직하다.

본 발명의 뇌세포 보호 및 기억력 증진용 조성물은, 조성물 총중량에 대하여 지모 추출물 및 그 성분을 0.5～50 중량%로 포함한다.

본 발명의 지모 추출물은, 건조된 지모 부피의 약 1 내지 15배, 바람직하게는 약 5 내지 10배의 물, 저급알콜 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10, 바람직하게는 1:1 내지 1:5의 혼합비를 갖는 혼합용매로 20 내지 100℃, 바람직하게는 70 내지 100℃ 추출온도에서 약 1시간 내지 2일, 바람직하게는 약 2시간 내지 1일 정도에서 냉침, 초음파 추출, 환류추출 등의 추출방법에 의하여 수득할 수 있다. 또한 수득된 추출물을 감압 농축시킨 후, 동결건조시켜 건조분말로 수득할 수도 있다. 본 발명에서 사용되는 저급알코올은 C1-10의 알코올을 의미하며, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올이 바람직하다.

본 발명에서 허혈성 뇌졸중은 뇌의 혈액이 공급되지 않아 뇌가 부분적으로 죽어버리는 것으로 뇌혈관이 동맥경화에 의해 좁아지거나 아예 막혀 버려서 발생하는 경우(혈전성 뇌경색) 및 심장과 같은 다른 부위에서 혈전이라고 하는 핏덩어리가 만들어져서 뇌혈관을 막을 때 발생하는 경우(색전성 뇌경색)를 모두 포함한다. 본 발명의 조성물은 특히 색전성 뇌경색에 효과가 있다.

본 발명의 지모 추출물 및 그 성분을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 지모 추출물 및 그 성분을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명에 따른 지모 추출물 및 그 성분을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

지모 추출물 및 그 성분의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 하루에 0.1 내지 500 mg/㎏체중의 양을 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 지모 추출물 및 그 성분의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 지모(Anemarrhenae rhizoma)의 물 추출물, 저급알코올 추출물 또는 이를 분획한 분획물 또는 단리된 anemarsaponin B를 유효성분으로 하고 식품학적으로 허용가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강보조식품을 제공한다. 본 발명의 지모 추출물 및 그 성분을 포함하는 조성물은 상기와 같은 제형으로 뇌세포 보호 및 기억력 증진을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 지모 추출물 및 그 성분을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.

본 발명의 지모 추출물 및 그 성분 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 지모 추출물 및 그 성분은 뇌세포 보호 및 뇌졸중 예방을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 지모 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강 식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.1 내지 15 중량%, 바람직하게는 1 내지 10 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물 은 100㎖를 기준으로 1 ～ 30g, 바람직하게는 3 ～10g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 지모 추출물 및 그 성분을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등), 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 ～ 20g, 바람직하게는 약 5 ～ 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 조성물의 뇌졸중 예방 및 치료에 대한 효과는 이미 시험법이 확립되어 있는 중뇌대동맥 폐색 모델을 이용하여 생체내 시험법에서 지모 추출물 및 그 성분의 허혈성 뇌졸중을 억제하는 효과를 확인하는 것으로, 그 방법으로는 나일론 필라멘트를 내경동맥 (internal carotid artery)으로 삽입하여 중뇌대동맥을 폐색시킨 후 120분 후에 다시 필라멘트를 제거함으로써 재관류시키는 방법이다. 이 때 지모 추출물 및 그 성분을 경구로 투여하여 허혈성 뇌졸중에 대한 효과를 확인하는 것이다.

본 발명은 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명되나, 본 발명이 이에 의해 제한되지는 않는다.

실시예 1. 지모의 물 추출물 제조

경동시장에서 구입한 건조 상태의 지모 1 kg을 분말로 하여 10 배 용량의 물을 가하고 80-100 ℃의 온도에서 2시간 동안 환류 가열하여 얻어진 추출액을 동결건조기(Elela, model FD-5N)에서 동결 건조하여 표제의 추출물을 수득하였다(수득율 : 40%).

실시예 2. 지모의 물 추출물에서 물: 메탄올=1:5 분획물 제조.

실시예 1에서 제조된 물 추출물 (20 g)을 HP20 (Mitsubishi Diaion, Japan)으로 충진된 75M Flash system (Biotage, USA)에 삽입하고 이동상으로 물, 물: 메탄올(MeOH)(1:1), 물: MeOH(1:5) 과 100% MeOH을 사용하였다. 이들 사이에서 활성 분획물 (물: MeOH(1:5), 수득량: 10g)을 얻었다.

실시예 3. 지모의 물 추출물에서 부탄올 분획물 제조.

실시예 1에서 제조된 물 추출물 (20 g)을 HP20 (Mitsubishi Diaion, Japan)으로 충진된 75M Flash system (Biotage, USA)에 삽입하고 이동상으로 물, 물: 메탄올(MeOH)(1:1), 물: MeOH(1:5) 과 100% MeOH을 사용하였다. 이들 사이에서 활성 분획물(물: MeOH(1:5), 수득량: 10g)을 증류물에 현탁시킨 후 부탄올(n-BuOH)을 이용하여 분리를 실시하였다. 그렇게 하여 부탄올 분획물 (7.8g)을 얻었다.

실시예 4. 지모의 분획물에서 anemarsaponin B 제조.

실시예 3에서 얻은 n-BuOH 분획물을 silica gel 40S Flash system (Biotage, USA)의 크래마토그래피를 이용하여 3g의 분획물을 수득하였다. 이후 C18 40M Flash system (Biotage, USA)으로 분리하여 크루드 물질을 1.1 g 얻었고, 재결정을 통하여 anemarsaponin B를 단리하였다.

실험예 1. 실시예 1에서 얻은 지모 물 추출물과 실시에 2에서 얻은 물:메탄올=1:5 분획물을 이용한 허혈성 뇌졸중 치료효과 확인

실시예 1에서 얻은 지모의 물 추출물(water extract), 실시예 2에서 얻은 그 분획물을 마우스 (오리엔트, 서울, 한국)를 이용하여 뇌허혈 동물 모델에 재관류를 시작하기 약 5 분전에 실시예1의 추출물 및 실시예 2의 분획물 모두 200 mg/kg의 용량으로 경구로 투여하고 재관류시킨 후, 약 2시간 후에 다시 투여한 후 최초 수술 후 약 24시간 후에 동물을 치사시켜 뇌를 적출하였다. 양성 대조군의 경우 5 mg/kg의 용량으로 정맥주사하였다. 이 후 뇌 매트릭스(brain matrix)를 이용하여 2 mm 두께로 뇌절편(brain slice)을 만든 다음, 2, 3, 5-트리페닐테트라졸리눔 클로리드 (TTC) 염색법을 이용하여 염색한 다음, 뇌경색 부위를 영상분석 시스템을 이용하여 분석하였다.

그 결과는 도 1과 같으며, 실시예1에서 얻은 물 추출물은 21%의 뇌손상 보호 효과를 나타내며, 실시예2에서 얻은 물: 메탄올=1:5 분획물은 31% 의 뇌손상 보호 효과를 나타내었다(도1 에서 세로축은 손상된 뇌조직의 부피를 의미하며, 그 단위는 mm³이고 대조군(control)은 생리식염수로 처리한 상태의 것을 의미하며, MCI-186은 양성대조군으로서, 뇌졸중에 효과적으로 알려진 시그마알드리치 CA(미국)사에서 구입한 것이다).

실험예 2. 실시예 3에서 얻은 부탄올 분획물을 이용한 허혈성 뇌졸중 치료효과 확인

실시예 3에서 얻은 그 분획물을 마우스(오리엔트, 서울, 한국)를 이용하여, 뇌허혈 동물 모델에 재관류를 시작하기 약 5 분전에 100 mg/kg의 양을 투여하고 재관류시킨 후, 약 2시간 후에 다시 투여한 후 최초 수술 후 약 24시간 후에 동물을 치사시켜 뇌를 적출하였다. 이 후 뇌 매트릭스(brain matrix)를 이용하여 2 mm 두 께로 뇌절편(brain slice)을 만든 다음, 2, 3, 5-트리페닐테트라졸리눔 클로리드 (TTC) 염색법을 이용하여 염색한 다음, 뇌경색 부위를 영상분석 시스템을 이용하여 분석하였다.

도 2에서 나타난 바와 같이, 실시예 3에서 얻은 부탄올 추출물은 31% 만큼의 뇌손상 보호 효과를 나타내었다(도2에서 세로축은 손상된 뇌조직의 부피를 의미하며, 그 단위는 mm³이고 대조군(control)은 생리식염수로 처리한 상태의 것을 의미하며, MCI-186은 양성대조군으로서, 뇌졸중에 효과적으로 알려진 시그마알드리치 CA(미국)사에서 구입한 것이다).

실험예 3. 실시예 4에서 얻은 anemarsaponin B 이용한 허혈성 뇌졸중 치료효과 확인

실시예 4에서 얻은 그 분획물을 마우스(오리엔트, 서울, 한국)를 이용하여, 뇌허혈 동물 모델에 재관류를 시작하기 약 5 분전에 anemarsaponin B를 Tween 80 (시그마알드리치 CA(미국)사)에 현탁시켜 10 mg/kg의 용량으로 투여하고 재관류시킨 후, 약 2시간 후에 다시 투여한 후 최초 수술 후 약 24시간 후에 동물을 치사시켜 뇌를 적출하였다. 각 분획 (Fr.4-2, Fr.4-3 및 Fr.4-2)의 경우는 20 mg/kg의 용량으로 Tween 80 (시그마알드리치 CA(미국)사)에 현탁시켜 경구 투여하였다. 이 후 뇌 매트릭스(brain matrix)를 이용하여 2 mm 두께로 뇌절편(brain slice)을 만든 다음, 2, 3, 5-트리페닐테트라졸리눔 클로리드 (TTC) 염색법을 이용하여 염색한 다 음, 뇌경색 부위를 영상분석 시스템을 이용하여 분석하였다.

도 3에서 나타난 바와 같이, 실시예 4에서 얻은 Anemarsaponin B( compound AA)은 31.1%의 뇌신경 보호 효과를 나타내어, MCI-186 (39%)과 동등정도의 뇌신경 보호 효과를 나타냄을 확인하였다. (도3에서 세로축은 손상된 뇌조직의 부피를 의미하며, 그 단위는 mm³이고 대조군(control)은 생리식염수로 처리한 상태의 것을 의미하며, MCI-186은 양성대조군으로서, 뇌졸중에 효과적으로 알려진 시그마알드리치 CA(미국)사에서 구입한 것이다. 또한 도 3에서, Fr.4-2, Fr.4-3 및 Fr.4-4는 실시예 2에서 얻은 부탄올 분획에서 한 단계 더 분획한 분획물인 Fr.4에서 더 분획한 분획물을 나타낸다(도 4 참조).

실험예 4. 실시예1에서 얻은 지모의 물 추출물을 이용한 허혈성 뇌졸중 치료 효과의 용량 의존성 실험

실시예 1에서 얻은 지모의 물 추출물(water extract)을 랫트 (오리엔트, 서울, 한국)를 이용한 뇌허혈 동물 모델에 재관류를 시작하기 약 5 분전에 50, 100, 200 및 400 mg/kg을 투여하고 재관류시킨 후, 약 2시간 후에 다시 투여한 후 최초 수술 후 약 24시간 후에 동물을 치사시켜 뇌를 적출하였다. 이 후 뇌 매트릭스(brain matrix)를 이용하여 2 mm 두께로 뇌절편(brain slice)을 만든 다음, 2, 3, 5-트리페닐테트라졸리눔 클로리드 (TTC) 염색법을 이용하여 염색한 다음, 뇌경색 부위를 영상분석 시스템을 이용하여 분석하였다.

상기 방법으로 2회 투여하여 용량 의존성 실험을 실시하였으며 그 결과는 하기 표 1에 나타낸 바와 같다. 특히, 지모 물 추출물 200 및 400 mg/kg은 뇌졸증에 효과적이었으며, 양성 대조군으로 사용한 MCI-186 (시그마알드리치 CA, 미국) 와 비교 시 그 효과가 유사함을 확인할 수 있었다.

[표 1] 지모 물 추출물의 농도별 뇌허혈 보호 효과

처리 군	보호 효과 (%)*
MCI-186 (10 mg/kg × 2 회)	47.0%
지모 물추출물 (50 mg/kg × 2 회)	7.6%
지모 물추출물 (100 mg/kg × 2 회)	29.9%
지모 물추출물 (200 mg/kg × 2 회)	48.4%
지모 물추출물 (400 mg/kg × 2 회)	49.6%

*: 보호효과는 비히클 (생리식염수 또는 5% 카르복시메틸셀룰로오스) 투여군에 대한 보호정도를 %로 환산한 것이다.

실험예 5. 마우스를 이용한 지모 추출물의 급성독성시험

마우스를 사용하여 각종 지모 추출물의 급성독성 시험을 OECD 가이드라인에 따라 실시하였다. 급성독성 시험 결과, 실시예 1에서 수득한 지모 물추출물은 그 투여 가능 용량인 2000 mg/kg에서도 사망예를 전혀 관찰할 수 없었으며, 체중 증가, 사료 섭취량 등에서 전혀 유의한 이상을 발견할 수 없었다. 따라서 지모 추출물의 경우 안전한 약물임을 알 수 있었다.

하기에 상기 약학조성물의 제제예를 설명하나 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

약전 제제총칙중 산제의 제조방법에 따라 1 포당 하기의 성분 함량으로 제조한다.

지모 추출물 (건조분말) ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ300 mg

유당 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ100 mg

탈크 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 10 mg

제제예 2. 정제의 제조

약전 제제총칙중 정제의 제조방법에 따라 1정 당 하기의 성분 함량으로 제조한다.

지모 물추출물 (건조분말) ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ300 mg

옥수수전분 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 100 mg

유당 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ100 mg

스테아린산 마그네슘 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 2 mg

제제예 3. 캅셀제의 제조

약전 제제총칙중 캅셀제의 제조방법에 따라 1 캅셀당 하기의 성분 함량으로 제조한다.

지모 물 추출물 (건조분말)ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 300 mg

옥수수전분ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 100 mg

유당 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 100 mg

스테아린산 마그네슘ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 2 mg

제제예 4. 주사제의 제조

약전 제제총칙중 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 하기의 성분 함량으로 제조한다.

지모 추출물 (건조분말) ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 300 mg

주사용 멸균 증류수 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 적량

pH 조절제 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 적량

제제예 5. 액제의 제조

약전 제제총칙중 액제제의 제조방법에 따라 액제 100㎖당 하기의 성분 함량으로 제조한다.

지모 추출물 (건조분말) ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ1 g

이성화당ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 10 g

만니톨 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 5 g

정제수 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 적량

또한 하기와 같은 방법으로 건강음료를 제조한다. (하기 단위는 중량%임)

설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1 : 4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82%를 주입하여서 되는 천초근 건조 물추출물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.

액상과당 (0.5%), 올리고당 (2%), 설탕 (2%), 식염 (0.5%), 물 (75%)과 같은 부재료와 무미 건조추출물을 균질하게 배합하여 순간살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

지모 추출물 또는 그 분획물, 또는 anemarsaponin B을 포함하는 조성물은, 뇌신경세포의 손상으로 인한 허혈성 뇌졸중에 대한 예방 및 치료 효과를 나타내므로 뇌손상을 치료하는 뇌보호제로서 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

지모(Anemarrhenae rhizoma) 추출물을 유효성분으로 하고 통상의 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하여 이루어진 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 지모(Anemarrhenae rhizoma) 추출물이 지모의 물 추출물, 저급알코올 추출물, 이를 분획한 분획물 또는 단리된 anemarsaponin B인 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 조성물 총중량에 대하여 유효성분이 0.5 내지 50 중량%인 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제2항에 있어서,

물 추출물은 냉침, 초음파, 환류 중 어느 하나의 방법으로 하여 얻어진 추출물을 감압 농축시킨 다음 동결건조시켜 얻어진 건조분말인 것을 특징으로 하는 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제2항에 있어서, 저급알코올은 메탄올, 에틸알코올, 프로판올, 부탄올을 특징으로 하는 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 허혈성 뇌졸중이 색전성 뇌경색인 약학적 조성물.
제1항의 허혈성 뇌졸중 예방 또는 치료용 조성물을 함유하는 제제.
제7항에 있어서, 제제가 산제, 과립제, 정제, 캅셀제, 액제 또는 주사제인 제제.
지모(Anemarrhenae rhizoma)의 물 추출물, 저급알코올 추출물 또는 이를 분획한 분획물 또는 단리된 anemarsaponin B를 유효성분으로 하고 식품학적으로 허용가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강보조식품.